JP2019509316A

JP2019509316A - ヒトライノウイルスの阻害剤としてのアルキニルヌクレオシド類似体

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Publication number: JP2019509316A
Application number: JP2018549854A
Authority: JP
Inventors: フェナックス，マーティン; サウンダース，オリバー; 文明横川; チョン，ウェイドン
Original assignee: ノバルティスアーゲー
Priority date: 2016-03-24
Filing date: 2017-03-21
Publication date: 2019-04-04
Anticipated expiration: 2037-03-21
Also published as: JP7005508B2; PL3433257T3; PT3433257T; ES2962269T3; EP4292658A2; WO2017163186A1; US20170275329A1; TW201736391A; EP4292658A3; UY37166A; AR107974A1; US9988416B2; TWI746532B; EP3433257A1; EP3433257B1; CN109311885A; FI3433257T3; DK3433257T3; US10428105B2; US20180258129A1

Abstract

本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその塩、およびこれらの化合物の治療的使用を提供する。本発明は、これらの化合物を含む医薬組成物、およびこれらの化合物を治療的共薬剤とともに含む組成物、ならびに、ウイルス感染症、とりわけＨＲＶの処置のために化合物および組成物を使用する方法をさらに提供する。

Description

本発明は、ヒトライノウイルス（ＨＲＶ）複製を阻害し、ＨＲＶに感染した対象を処置するために有用である、化合物に関する。

ヒトライノウイルス（ＨＲＶ）は、ピコルナウイルス科（picornavirus family）のエンテロウイルス属（enterovirus genus）におけるＲＮＡウイルスであり、配列分析に基づき、３つの群、ＨＲＶ−Ａ、ＨＲＶ−ＢおよびＨＲＶ−Ｃに分けられる。これらのウイルスは、多様な上部および下部気道感染症（ＲＴＩ）を引き起こす。典型的には、上部ＲＴＩは、健常な対象においてはとりわけ重篤ではなく、風邪として現れるが、急性中耳炎および鼻副鼻腔炎等のより重篤な状態が導かれ得る。ＨＲＶによって引き起こされた下部ＲＴＩは、特に感受性集団においてより重篤になり得、例えば、ＣＯＰＤ、喘息または嚢胞性線維症を持つ対象において、重篤な増悪を、ならびに、乳児、高齢者および免疫不全対象において、重篤な、時に致死的な肺炎を引き起こし得る。

ＨＲＶによって引き起こされた疾患を処置するための抗ウイルス治療剤の必要性にもかかわらず、米国には承認されたＨＲＶ抗ウイルス薬がない。Mello, et al., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 58(3), 1546-55 (2014)。異なる作用機序を持つ種々の抗ウイルス剤、例えば、カプシド結合阻害剤（プレコナリル、ピロダビル）、３Ｃプロテアーゼ阻害剤（ルピントリビル）、およびヌクレオシド類似体（ＭＫ−０６０８、３Ｄポリメラーゼの阻害剤）、ならびにＰＩ４Ｋ−ＩＩＩβ阻害剤（ＰＩＫ９３）が、ＨＲＶに対して試験されてきたが、臨床試験に合格したものはない。同文献。

抗ウイルス活性を有するヌクレオシド化合物は、当該技術分野において周知であり、例えば、ＡＺＴは、ＨＩＶ感染症を処置するために使用される。これは、ＤＮＡを合成するためにＨＩＶが必要とする酵素を阻害する逆転写酵素の阻害剤として作用し、したがって、ＨＩＶ複製を阻害する。種々のヌクレオシド類似体がＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に対して活性を有することが示されている−例えば、Smith, et al., J. Med. Chem. 52(1), 219-23 (2009)；国際公開第２０１２／０４０１２４号パンフレット；国際公開第２０１１／１００１３１号パンフレット；および米国特許出願公開第２０１２／００７０４１５号明細書を参照されたい。しかしながら、ヒトライノウイルス感染症を処置するために開発されたものはない。

ＨＲＶを処置することを複雑にしている要因の１つは、多数の異なる株であり、１６０を超える株のＨＲＶが公知であり、ＨＲＶを処置する治療薬が一般的な株のほとんどに対して有効でない場合、患者がいずれの株を有するかを処置前に決定することが必要であろう。それは現在のほとんどの状況において実践的ではないため、種々のＨＲＶ株に対して広域スペクトル活性を持つ抗ウイルス薬がとりわけ有益となるであろう。

したがって、特にＨＲＶ感染症のより重篤な影響に対して感受性の集団において、ＨＲＶ感染症を処置するために有用な抗ウイルス剤が、依然として必要である。本発明は、そのような抗ウイルス化合物およびこれらの化合物を含有する医薬組成物、ならびに、ＨＲＶ感染症を有するまたはそのリスクがある対象の処置のために化合物および組成物を使用する方法を提供する。

本発明は、ヒトライノウイルス（ＨＲＶ）複製を阻害する化合物を提供する。化合物は、非感染細胞へのＨＲＶの広がりを低減させまたは予防し、したがって、ＨＲＶ感染症の持続時間または重症度を低減させるために有用である。ＨＲＶ感染症の程度、重症度または持続時間を低減させることによって、これらの化合物は、乳児および高齢者または免疫不全対象、ならびに喘息、ＣＯＰＤまたは嚢胞性線維症を有する対象等の感受性集団において、他の状態の増悪から保護する。化合物は、単離細胞または細胞培養におけるＨＲＶの複製を阻害するためにも有用である。

一態様において、本発明は、本明細書においてさらに記述されている通りの式（Ｉ）：

の化合物を、これらの化合物を含む医薬組合せおよび組成物、ならびに、ある特定のウイルス感染症を処置するために、化合物、組合せおよび組成物を使用するための方法とともに提供する。

式（Ｉ）の化合物は、本明細書において提供されるデータによって実証される通り、ＨＲＶ複製の阻害剤であり、ＨＲＶによって引き起こされた状態を処置するために有用である。その上、本明細書におけるデータによって実証される通り、式（Ｉ）の化合物は、広範囲のＨＲＶの血清型に対して活性を有し、一般に使用される毒物学モデル試験においてほとんど活性を示さない。

別の態様において、本発明は、少なくとも１つの薬学的に許容される担体または賦形剤と混合し、場合により２つ以上の薬学的に許容される担体または賦形剤と混合した、式（Ｉ）の化合物を含む、医薬組成物を提供する。

別の態様において、本発明は、ヒトライノウイルスによって引き起こされる状態を処置するための方法であって、そのような処置を必要とする対象に、有効量の本明細書において記述されている通りの式（Ｉ）の化合物またはその任意の亜属もしくは種、あるいはそのような化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。対象は、哺乳動物であり得、好ましくはヒトである。典型的には、対象は、ＨＲＶ感染症を有するとして診断されている。本明細書において記述されている化合物および方法によって処置可能な状態は、風邪およびライノウイルス感染症によって誘発される合併症または増悪を含む。

本発明は、本明細書において記述されている式（Ｉ）および式（Ｉ）の亜属の化合物およびそのすべての同位体富化バージョン（重水素置換を含む）、ならびにこれらの化合物の薬学的に許容される塩を含む。本発明の化合物は、式（Ｉ）（またはその下位式）の化合物の多形体ならびに式（Ｉ）の化合物の塩および溶媒和物も含む。

別段の明示的なまたは文脈による指示がない限り、下記の定義が当てはまる。

本明細書において使用される場合、用語「ハロゲン」（またはハロ）は、フッ素、臭素、塩素またはヨウ素、特に、フッ素または塩素を指す。ハロゲンによって置換されているアルキル（ハロアルキル）等のハロゲン置換されている基および部分は、単、多または過ハロゲン化され得る。

本明細書において使用される場合、用語「ヘテロ原子」は、別段の定めがない限り、窒素（Ｎ）、酸素（Ｏ）または硫黄（Ｓ）原子、特に、窒素または酸素を指す。

本明細書において使用される場合、用語「アルキル」は、１〜６個の炭素原子、または１〜４個の炭素原子を有する、完全飽和分枝または非分枝炭化水素部分を指す。典型的には、アルキル基は、別段の特定がなければ、１〜６個の炭素原子を有する。アルキルの代表例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル等を含むがこれらに限定されない。置換アルキルは、非置換アルキル基上に存在する水素の数まで、１、２または３個の置換基等、水素の代わりに１個または複数の置換基を含有する、アルキル基である。アルキル基に好適な置換基は、別段の特定がなければ、ハロゲン、ＣＮ、オキソ（＝Ｏ）、ヒドロキシ、Ｃ_１〜４アルコキシ、置換または非置換Ｃ_３〜６シクロアルキル、アミノ、（Ｃ_１〜４アルキル）アミノ、ジ（Ｃ_１〜４アルキル）アミノ、Ｃ_１〜４アルキルチオ、Ｃ_１〜４アルキルスルホニル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ_１〜４アルキル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ（Ｃ_１〜４アルキル）、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ_１〜４アルキル、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ_１〜４アルキルおよび−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＯＣ_１〜４アルキル基から選択される。

本明細書において使用される場合、用語「アルコキシ」は、アルキル−Ｏ−を指し、ここで、アルキルは、上記で定義した通りである。アルコキシの代表例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、２−プロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ等を含むがこれらに限定されない。典型的には、アルコキシ基は、１〜６個の炭素、より一般的には１〜４個の炭素原子を有する。

「置換アルコキシ」は、アルコキシのアルキル部上に、１、２または３個等、１個または複数の置換基を含有する、アルコキシ基である。別段の特定がない限り、好適な置換基は、ヒドロキシルおよびアミノが、置換「アルキル−Ｏ」基の酸素に直接結合した炭素上には通常存在しないことを除き、アルキル基について上記に記載した置換基から選択される。

下記の列挙される実施形態は、本発明の一部の態様を代表するものである。各実施形態において特定されている特色を、他の特定されている特色と組み合わせて、本発明のさらなる実施形態を提供してよいことが認識されるであろう。

１．式（Ｉ）：

［式中、
Ｒ^１は、Ｈ、Ｍｅ、Ｅｔ、ｉＰｒまたはシクロプロピルであり、
Ｒ^２は、Ｈ、ホスフェート、ジホスフェート、トリホスフェート、−Ｐ（＝Ｘ）（ＯＲ^４）_２、−Ｐ（＝Ｘ）（ＯＲ^４）（ＮＲ^５Ｒ^６）または−Ｐ（＝Ｘ）（ＮＲ^５Ｒ^６）_２であり、Ｒ^３は、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）Ｒであるか、
または、Ｒ^３およびＲ^２は、一緒になって、−Ｐ（＝Ｘ）（ＯＲ^４）−もしくは−Ｐ（＝Ｘ）（ＮＲ^５Ｒ^６）−を形成し、
Ｘは、それぞれの出現において、独立して、ＯまたはＳであり、
Ｒ^４は、Ｈ、リストＡから選択される１または２個の基で場合により置換されているフェニル、ならびに、ハロ、−ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）−ＯＲ、−−ＮＲ_２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、ＣＯＯＲおよび−Ｃ（Ｏ）ＮＲ_２から選択される１または２個の基で場合により置換されているＣ_１〜Ｃ_４アルキルから選択され、
各Ｒ^５は、独立して、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、ＣＯＯＲ、または、ＯＨ、アミノもしくはＣＯＯＲで場合により置換されているＣ_１〜Ｃ_４アルキルであり、
各Ｒ^６は、Ｈ、リストＡから選択される１または２個の基で場合により置換されているフェニル、およびリストＢから選択される１または２個の基で場合により置換されているＣ_１〜Ｃ_４アルキルから独立して選択され、
各Ｒは、独立して、Ｈ、またはハロ、ヒドロキシ、ＣＮ、アミノ、Ｃ_１〜Ｃ_３アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ^７、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ^７、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ^７もしくは−ＯＣ（Ｏ）−ＯＲ^７から選択される１〜３個の基で場合により置換されているＣ_１〜Ｃ_４アルキル基であり、
Ｒ^７は、Ｈ；ハロ、ヒドロキシ、ＣＮ、アミノおよびＣ_１〜Ｃ_３アルコキシから選択される１〜３個の基で場合により置換されているＣ_１〜Ｃ_４アルキル、またはリストＡから選択される１もしくは２個の基で場合により置換されているフェニルから選択され、
リストＡは、ハロ、ヒドロキシ、−ＮＯ_２、ＣＮ、−ＯＲ^８、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ^８、−ＯＣ（Ｏ）−ＯＲ^８、−Ｎ（Ｒ^８）_２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ^８、ＣＯＯＲ^８、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^８）_２、ならびに、ハロ、ヒドロキシ、ＣＮ、アミノおよびＣ_１〜Ｃ_３アルコキシから選択される１〜３個の基で場合により置換されているＣ_１〜Ｃ_３アルキルであり、
リストＢは、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、ＣＮ、−ＯＲ^８、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ^８、−ＯＣ（Ｏ）−ＯＲ^８、−Ｎ（Ｒ^８）_２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ^８、ＣＯＯＲ^８および−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^８）_２であり、
Ｒ^８は、それぞれの出現において、Ｈ、ならびに、ハロ、ヒドロキシ、ＣＮ、アミノおよびＣ_１〜Ｃ_３アルコキシから選択される１〜３個の基で場合により置換されているＣ_１〜Ｃ_４アルキルから独立して選択され、
同じ窒素原子に結合した２個のＲ^８は、場合により環化して、３〜７員ヘテロ環を形成することができ、これは、環員として追加のＮ、ＯまたはＳを場合により含有し、オキソ、ハロ、−ＯＨ、アミノ、Ｃ_１〜Ｃ_３アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_３アルコキシおよびＣ_１〜Ｃ_３ハロアルキルから選択される１または２個の基によって置換され得る］
の化合物、または薬学的に許容されるその塩。

２．Ｒ^１が、メチルである、実施形態１の化合物。

３．Ｒ^２が、Ｈである、実施形態１または実施形態２の化合物。

４．Ｒ^２が、ホスフェート、ジホスフェートもしくはトリホスフェートである、実施形態１もしくは２の化合物、または薬学的に許容されるその塩。

５．Ｒ^２が、−Ｐ（＝Ｘ）（ＯＲ^４）_２である、実施形態１もしくは実施形態２の化合物、または薬学的に許容されるその塩。

６．−ＣＨ_２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒおよび−ＣＨ_２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＯＲから選択され、各Ｒが、独立して、Ｃ_１〜Ｃ_４アルキルである、実施形態５の化合物、または薬学的に許容されるその塩。

７．Ｒ^３およびＲ^２が、一緒になって、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ^４）−または−Ｐ（＝Ｏ）−（ＮＲ^５Ｒ^６）−を形成する、実施形態１もしくは２の化合物、または薬学的に許容されるその塩。

８．Ｒ^３が、Ｈである、実施形態１から７のいずれかの化合物。

９．

［式中、Ｒ^２は、Ｈ、ホスフェート、ジホスフェートまたはトリホスフェートである］
である実施形態１の化合物、または薬学的に許容されるその塩。

１０．式：

のものである実施形態１もしくは２の化合物、または薬学的に許容されるその塩。

１１．式：

のものである実施形態１の化合物、または薬学的に許容されるその塩。

１２．

から選択される、請求項１に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。

１３．実施形態１から１２のいずれかの化合物または薬学的に許容されるその塩と、１つまたは複数の薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。

１４．治療有効量の実施形態１から１２のいずれか１つによる化合物または薬学的に許容されるその塩と、１つまたは複数の治療的に活性な共薬剤（co-agent）とを含む、組合せ物。

１５．ＨＲＶ感染症を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の実施形態１〜１２のいずれかの化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、方法。

１６．医薬として使用するための、実施形態１から１２のいずれか１つによる化合物または薬学的に許容されるその塩。

１７．ヒトライノウイルス感染症の処置において使用するための、実施形態１から１２のいずれか１つによる化合物または薬学的に許容されるその塩。

１８．ヒトライノウイルス感染症の処置用医薬の製造における、実施形態１から１２のいずれか１つによる化合物または薬学的に許容されるその塩の使用。

式（Ｉ）の化合物は、この一般式：

のヌクレオシドのある特定の誘導体およびプロドラッグを含む。

プロドラッグは、ヌクレオシドの活性形態にインビボで容易に変換される化合物、例えば、遊離ヌクレオシド、またはそのホスフェートもしくはトリホスフェートエステルである。好適なプロドラッグ部分およびそれらをヌクレオシド類似体に組み込む方法は、当該技術分野において公知であり、例証的な例が本明細書において提供される。式（Ｉ）の例示的なプロドラッグ化合物は、下記を含む：

理論に縛られることなく、式（Ｉ）の化合物は、Ｃ−５トリホスフェート、例えば：

への変換後に、それらの生物学的活性をインビボで提供すると考えられる。

本明細書において使用される場合、用語「光学異性体」または「立体異性体」は、本発明の所与の化合物について存在してよい種々の立体異性配置のいずれかを指し、幾何異性体を含む。置換基は、炭素原子のキラル中心で結合してよいことが理解される。用語「キラル」は、それらの鏡像パートナーに重ね合わせることができないという特性を有する分子を指し、一方、用語「アキラル」は、それらの鏡像パートナーに重ね合わせることができる分子を指す。本発明は、化合物のエナンチオマー、ジアステレオマーおよびラセミ体を含む。「エナンチオマー」は、互いに重ね合わせることができない鏡像である立体異性体の対である。エナンチオマーの対の１：１混合物は、「ラセミ」混合物である。「ジアステレオ異性体」は、少なくとも２個の不斉原子を有するが互いに鏡像ではない、立体異性体である。本発明の化合物の絶対立体化学は、化合物名におけるカーン・インゴルド・プレローグの「Ｒ−Ｓ」システムに従って特定され、ここで、絶対立体化学を示すための許容されている製図規約を使用して、構造を描き、単一の異性体を典型的に示す。別段の特定がない限り、特定のエナンチオマーとして描かれている化合物は、そのエナンチオマーを表し、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％エナンチオマー的に純粋である化合物を記述する。化合物が純粋なエナンチオマーである場合、各キラル炭素における立体化学は、ＲまたはＳのいずれかによって特定されてよい。その絶対配置が未知である分割された化合物は、ナトリウムＤ線の波長でそれらが平面偏光を回転させる方向（右旋性または旋性）に応じて、（＋）または（−）と指定され得る。本明細書において記述されているある特定の化合物は、１つまたは複数の不斉中心または軸を含有し、したがって、絶対立体化学の観点から（Ｒ）−または（Ｓ）−として定義されてよい、エナンチオマー、ジアステレオマーおよび他の立体異性形態を生み出しうる。

出発材料および合成手順の選択に応じて、化合物は、考えられる異性体の１つの形態で、または、それらの混合物として、例えば、不斉炭素原子の数に応じて、純粋な光学異性体として、もしくはラセミ体およびジアステレオ異性体混合物等の異性体混合物として、存在し得る。本発明は、ラセミ混合物、ジアステレオマー混合物および光学的に純粋な形態を含む、すべてのそのような考えられる異性体を含むことになっている。光学活性（Ｒ）−および（Ｓ）−異性体は、キラルシントンもしくはキラル試薬を使用して調製されてよく、または従来の技術を使用して分割されてよい。化合物が二重結合を含有するならば、置換基は、特定がない限り、ＥまたはＺ配置であってよい。化合物が二置換シクロアルキルを含有するならば、シクロアルキル置換基は、別段の特定がない限り、ｃｉｓ−またはｔｒａｎｓ−配置を有してよい。すべての互変異性形態も含まれるように意図されている。

多くの事例において、本発明の化合物は、アミノおよび／もしくはカルボキシル基またはそれらと同様の基の存在のおかげで、酸および／または塩基塩を形成することができる。本明細書において使用される場合、用語「塩」（１つまたは複数）は、本発明の化合物の酸付加または塩基付加塩を指す。「塩」は、特に「薬学的に許容される塩」を含む。用語「薬学的に許容される塩」は、本発明の化合物の生物学的有効性および特性を保持し、典型的には、生物学的にまたは別様にも望ましくないものでない、塩を指す。

薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸および有機酸と形成することができ、例えば、酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、臭化物／臭化水素酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、樟脳スルホン酸塩、塩化物／塩酸塩、クロロテオフィリン酸塩、クエン酸塩、エタンジスルホン酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グロクロン酸塩、馬尿酸塩、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ナフトエ酸塩、ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オクタデカン酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、ポリガラクツロ酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、スルホサリチル酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩およびトリフルオロ酢酸塩であり得る。追加の好適な塩のリストは、例えば、“Remington's Pharmaceutical Sciences”, 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985)において、および“Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use” by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)において見出すことができる。

塩が由来し得る無機酸は、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等を含む。

塩が由来し得る有機酸は、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルホサリチル酸等を含む。

薬学的に許容される塩基付加塩は、無機または有機塩基と形成することができ、無機または有機対イオンを有することができる。

そのような塩基塩のための無機対イオンは、例えば、周期表のＩからＸＩＩ族からのアンモニウム塩および金属を含む。ある特定の実施形態において、対イオンは、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、１〜４つのＣ１〜Ｃ４アルキル基を有するアルキルアンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、銀、亜鉛および銅から選択され、特に好適な塩は、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウムおよびマグネシウム塩を含む。

塩が由来し得る有機塩基は、例えば、第一級、第二級および第三級アミン、天然の置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、塩基性イオン交換樹脂等を含む。好適な有機アミンは、イソプロピルアミン、ベンザチン、コリネート、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、リシン、メグルミン、ピペラジンおよびトロメタミンを含む。

本発明の薬学的に許容される塩は、塩基性または酸性部分から、従来の化学的方法によって合成することができる。概して、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸形態を、化学量論量の適切な塩基（水酸化、炭酸、重炭酸Ｎａ、Ｃａ、ＭｇまたはＫ等）と反応させることによって、または、これらの化合物の遊離塩基形態を、化学量論量の適切な酸と反応させることによって、調製することができる。そのような反応は、典型的には、水中もしくは有機溶媒中、または２つの混合物中で行われる。概して、実践可能な場合、エーテル、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、トルエン、クロロホルム、ジクロロメタン、メタノール、エタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリルのような非水性媒質の使用が望ましい。

本明細書において記される任意の式は、非標識形態（すなわち、すべての原子が天然同位体存在度で存在し、同位体富化されていない化合物）、および化合物の同位体富化または標識形態を表すように意図されている。同位体富化または標識化合物は、化合物の少なくとも１個の原子が、天然の原子質量または原子質量分布とは異なる原子質量または質量数を有する原子によって置きかえられていることを除き、本明細書において記される式によって描写される構造を有する。本発明の富化または標識化合物に組み込むことができる同位体の例は、^２Ｈ、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^１８Ｆ、^３１Ｐ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^３６Ｃｌ、^１２５Ｉ等、それぞれ、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素および塩素の同位体を含む。本発明は、本明細書において定義されている通りの種々の同位体標識化合物、例えば、^３Ｈおよび^１４Ｃ等の放射性同位体または^２Ｈおよび^１３Ｃ等の非放射性同位体が、これらの同位体についての天然存在度を有意に上回るレベルで存在するものを含む。これらの同位体標識化合物は、薬物または基質組織分布アッセイを含む陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）または単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）等の、代謝研究（^１４Ｃを用いる）、反応速度論研究（例えば、^２Ｈまたは^３Ｈを用いる）、検出または撮像技術において、あるいは患者の放射線処置において有用である。特に、^１８Ｆまたは標識化合物は、ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴ研究に特に望ましい場合がある。式（Ｉ）の同位体標識化合物は、概して、当業者に公知である従来の技術によって、または付随する実施例および調製において記述されているものに類似するプロセスによって、以前用いられていた非標識試薬の代わりに適切な同位体標識試薬を使用して、調製することができる。

さらに、より重い同位体、特に重水素（すなわち、^２ＨまたはＤ）による置換は、より優れた代謝安定性から生じるある特定の治療上の利点、例えば、インビボ半減期の増大または必要投薬量の低減または治療指数の改善を生じさせる場合がある。この文脈における重水素は、式（Ｉ）の化合物の置換基とみなされることが理解される。そのようなより重い同位体、具体的には重水素等の濃度は、同位体濃縮係数によって定義されてよい。用語「同位体濃縮係数」は、本明細書において使用される場合、特定同位体の同位体存在度と天然存在度との比を意味する。本発明の化合物における置換基が重水素と表示されていれば、そのような化合物は、各指定された重水素原子について、少なくとも３５００（各指定された重水素原子において５２．５％重水素組み込み）、少なくとも４０００（６０％重水素組み込み）、少なくとも４５００（６７．５％重水素組み込み）、少なくとも５０００（７５％重水素組み込み）、少なくとも５５００（８２．５％重水素組み込み）、少なくとも６０００（９０％重水素組み込み）、少なくとも６３３３．３（９５％重水素組み込み）、少なくとも６４６６．７（９７％重水素組み込み）、少なくとも６６００（９９％重水素組み込み）、または少なくとも６６３３．３（９９．５％重水素組み込み）の同位体濃縮係数を有する。

本発明に従う薬学的に許容される溶媒和物は、結晶化の溶媒が同位体置換されていてよいもの、例えば、Ｄ_２Ｏ、ｄ^６−アセトン、ｄ^６−ＤＭＳＯ、および富化されていない溶媒との溶媒和物を含む。

水素結合のためのドナーおよび／またはアクセプターとして作用することができる基を含有する本発明の化合物、すなわち、式（Ｉ）の化合物は、好適な共結晶形成体と共結晶を形成することができる場合がある。これらの共結晶は、式（Ｉ）の化合物から、公知の共結晶形成手順によって調製されてよい。そのような手順は、結晶化条件下、溶液中で、式（Ｉ）の化合物を、共結晶形成体と、粉砕する、加熱する、共昇華させる、共融解させるまたは接触させること、およびそれにより形成された共結晶を単離することを含む。好適な共結晶形成体は、国際公開第２００４／０７８１６３号パンフレットにおいて記述されているものを含む。それ故、本発明は、式（Ｉ）の化合物を含む共結晶をさらに提供する。

本明細書において使用される場合、用語「薬学的に許容される担体」は、当業者には公知であろう通り、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング剤、界面活性剤、抗酸化剤、保存剤（例えば、抗菌剤、抗真菌剤）、等張剤、吸収遅延剤、塩、保存剤、薬物安定剤、結合剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤、染料等およびそれらの組合せを含む（例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289-1329を参照）。任意の従来の担体が活性原料と不適合である場合を除いて、治療用または医薬組成物におけるその使用が企図されている。

本発明の化合物の「治療有効量」という用語は、対象における所望の生物学的または医学的応答、例えば、酵素またはタンパク質活性の低減または阻害を引き出すであろう、あるいは、症状を寛解する、状態を緩和する、疾患進行を減速させるもしくは遅延させる、または疾患等を予防するであろう、本発明の化合物の量を指す。１つの非限定的な実施形態において、用語「治療有効量」は、対象に投与された場合に、ＨＲＶによって引き起こされた状態、障害または疾患を、少なくとも部分的に緩和する、阻害する、予防するおよび／もしくは寛解するため、あるいは、ＨＲＶタンパク質の活性を低減させるまたは阻害するため、あるいは、ＨＲＶの複製を低減させるまたは阻害するために有効である、本発明の化合物の量を指す。

別の非限定的な実施形態において、用語「治療有効量」は、細胞、または組織、または非細胞性生物学的材料、または媒質に投与された場合に、ＨＲＶの複製を少なくとも部分的に低減させるまたは阻害するために有効である、本発明の化合物の量を指す。

本明細書において使用される場合、用語「対象」は、動物を指す。典型的には、動物は、哺乳動物である。対象は、例えば、霊長類（例えば、ヒト、男性または女性）、雌ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス、魚類、鳥類等も指す。ある特定の実施形態において、対象は、霊長類である。具体的な実施形態において、対象は、ヒトである。

本明細書において使用される場合、用語「阻害する」、「阻害」または「阻害すること」は、生物学的活性またはプロセスのベースライン活性における、所与の状態、症状、または障害、または疾患、または有意な減少の、低減または抑制を指す。

本明細書において使用される場合、任意の疾患または障害を「治療する」、「治療すること」またはその「治療」という用語は、一実施形態において、疾患または障害を寛解すること（すなわち、疾患またはその臨床症状の少なくとも１つの発生を、減速させる、または阻止する、または低減させること）を指す。別の実施形態において、「治療する」、「治療すること」または「治療」は、患者によって識別可能ではない場合があるものを含む少なくとも１つの身体的パラメーターを緩和するまたは寛解することを指す。さらに別の実施形態において、「治療する」、「治療すること」または「治療」は、疾患または障害を、身体的に（例えば、認識可能な症状の安定化）、生理的に（例えば、身体的パラメーターの安定化）のいずれか、または両方で変調することを指す。さらに別の実施形態において、「治療する」、「治療すること」または「治療」は、疾患または障害の発生または進行を、予防するまたは遅延させることを指す。

本明細書において使用される場合、対象は、そのような対象が、かかる処置から、生物学的に、医学的にまたはクオリティオブライフにおいて利益を得るであろう場合、そのような処置「を必要とする」。

本明細書において使用される場合、用語「１つの（a）」、「１つの（an）」、「その（the）」および本発明の文脈において（とりわけ請求の範囲の文脈において）使用される同様の用語は、本明細書において別段の指示がない限りまたは文脈上明らかに矛盾しない限り、単数形および複数形の両方を包括すると解釈されたい。

本明細書において記述されているすべての方法は、本明細書において別段の指示がない限りまたは文脈上明らかに矛盾しない限り、任意の好適な順序で実施することができる。本明細書において提供されるありとあらゆる例、または例示的な言葉（例えば、「等の」）の使用は、本発明をよりよく解明することが意図されているにすぎず、別様に特許請求されている本発明の範囲に限定を課すものではない。

本発明の化合物の任意の不斉原子（例えば、炭素等）は、名称または描写が１つの配置を特定しているのでない限り、ラセミまたはエナンチオマー的に富化された分量、例えば、（Ｒ）−、（Ｓ）−または（Ｒ，Ｓ）−配置で存在し得る。ある特定の実施形態において、各不斉原子は、（Ｒ）−または（Ｓ）−配置のいずれかの、少なくとも５０％のエナンチオマー過剰率、少なくとも６０％のエナンチオマー過剰率、少なくとも７０％のエナンチオマー過剰率、少なくとも８０％のエナンチオマー過剰率、少なくとも９０％のエナンチオマー過剰率、少なくとも９５％のエナンチオマー過剰率、または少なくとも９９％のエナンチオマー過剰率を有する、すなわち、光学活性化合物については、多くの場合、他のエナンチオマーを実質的に排除して１つのエナンチオマーを使用することが好ましく、したがって、単一のエナンチオマーとして描写、命名または記述されている化合物は、主にそのエナンチオマーからなり、１０％以下、および好ましくは５％以下の逆のエナンチオマーが付随する。不飽和二重結合を持つ原子における置換基は、可能ならば、ｃｉｓ−（Ｚ）−またはｔｒａｎｓ−（Ｅ）−形態で存在してよい。

したがって、本明細書において使用される場合、本発明の化合物は、考えられる異性体、回転異性体、アトロプ異性体、互変異性体またはそれらの混合物の１つ、例えば、実質的に純粋な幾何（ｃｉｓまたはｔｒａｎｓ）異性体、ジアステレオマー、光学異性体（光学対掌体）、ラセミ体またはそれらの混合物としての形態であり得る。「実質的に純粋な」または「他の異性体を実質的に含まない」は、本明細書において使用される場合、生成物が、好ましい異性体の量と比べて、重量で、１０％未満、典型的には５％未満、好ましくは２％未満の他の異性体を含有することを意味する。

異性体の混合物は、構成要素の物理化学的差異に基づいて、例えば、クロマトグラフィーおよび／または分別結晶化によって、純粋なまたは実質的に純粋な幾何または光学異性体、ジアステレオマー、ラセミ体に分離することができる。そのような分離のための方法は、当該技術分野において、十分に確立されている。

必要な場合、最終生成物または中間体のラセミ体は、公知の方法によって、例えば、光学的に活性な酸または塩基を用いて取得されたそのジアステレオマー塩の分離、および光学的に活性な酸性または塩基性化合物を遊離させることによって、光学対掌体に分割することができる。特に、塩基性部分をこのように用いて、例えば、光学的に活性な酸、例えば、酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジ−Ｏ，Ｏ’−ｐ−トルオイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸またはカンファー−１０−スルホン酸と形成された塩の分別結晶化によって、本発明の化合物をそれらの光学対掌体に分割してよい。ラセミ生成物も、キラルクロマトグラフィー、例えばキラル吸着剤を使用する高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって、分割することができる。

さらに、それらの塩を含む本発明の化合物は、それらの水和物の形態で取得することも、またはそれらの結晶化に使用される他の溶媒を含むこともできる。本発明の化合物は、本質的にまたは意図的に、薬学的に許容される溶媒（水を含む）と溶媒和物を形成してよく、したがって、本発明は、溶媒和および非溶媒和形態の両方を内包することが意図されている。用語「溶媒和物」は、本発明の化合物（薬学的に許容されるその塩を含む）と、１つまたは複数の溶媒分子との、分子錯体を指す。そのような溶媒分子は、薬学分野において一般に使用され、レシピエントに無害であることが公知であるもの、例えば、水、エタノール等である。用語「水和物」は、溶媒分子が水である場合の錯体を指す。

その塩、水和物および溶媒和物を含む本発明の化合物は、本質的にまたは意図的に多形体を形成してよい。

別の態様において、本発明は、本発明の化合物、または薬学的に許容されるその塩と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。一部の実施形態において、医薬組成物は、２つの薬学的に許容される担体、または２つを超える薬学的に許容される担体を含む。医薬組成物は、経口投与、非経口投与および経直腸投与等の特定の投与経路のために製剤化され得る。好ましい実施形態において、医薬組成物は、経口送達または吸入のいずれかのために設計される。加えて、本発明の医薬組成物は、固体形態（限定されないが、カプセル剤、錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤または坐剤を含む）で、または液体形態（限定されないが、液剤、懸濁剤または乳剤を含む）で構成され得る。医薬組成物は、滅菌等の従来の製薬工程に供することができ、かつ／または、従来の不活性希釈剤、滑沢剤または緩衝剤、ならびに、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤および緩衝剤等のアジュバントを含有することができる。

ある特定の実施形態において、本発明の医薬組成物は、経口送達のために製剤化される。典型的には、これらの医薬組成物は、活性原料を、これらの：
ａ）希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン；
ｂ）滑沢剤、例えば、シリカ、タルカム、ステアリン酸、そのマグネシウムもしくはカルシウム塩および／またはポリエチレングリコール；錠剤についてはさらに、
ｃ）結合剤、例えば、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプン糊、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドン；所望ならば、
ｄ）崩壊剤、例えば、デンプン、寒天、アルギン酸もしくはそのナトリウム塩、または発泡性混合物；ならびに／または
ｅ）吸収剤、着色剤、香味剤および甘味剤
から選択される１つまたは複数の賦形剤と一緒に含む、錠剤またはゼラチンカプセル剤である。

錠剤は、当該技術分野において公知の方法によって、場合によりフィルムコーティングまたは腸溶コーティングされてよい。

経口投与に好適な組成物は、有効量の本発明の化合物を、錠剤、トローチ剤、水性もしくは油性懸濁剤、分散性の散剤もしくは顆粒剤、乳剤、硬もしくは軟カプセル剤、またはシロップ剤もしくはエリキシル剤の形態で含む。経口使用が意図されている組成物は、医薬組成物の製造のための当該技術分野において公知である任意の方法に従って調製され、そのような組成物は、薬学的に上品で口当たりのよい調製物を提供するために、甘味剤、香味剤、着色剤および保存剤からなる群から選択される１つまたは複数の剤を含有し得る。錠剤は、活性原料を、錠剤の製造に好適な、非毒性の薬学的に許容される賦形剤と混合して含有してよい。これらの賦形剤は、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム等の不活性希釈剤；造粒および崩壊剤、例えば、コーンスターチまたはアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチンまたはアカシア；および滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクである。錠剤は、コーティングされていないか、または消化管における崩壊および吸収を遅延させるための公知の技術によってコーティングされており、それにより、より長期間にわたって持続作用を提供する。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリル等の時間遅延材料を用いることができる。経口使用のための製剤は、硬ゼラチンカプセル剤として提示することができ、ここで、活性原料は、不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンと混合され、または軟ゼラチンカプセル剤として提示することができ、ここで、活性原料は、水または油性媒質、例えば、ピーナッツ油、流動パラフィンもしくはオリーブ油と混合される。

他の実施形態において、式（Ｉ）の化合物の医薬組成物は、注射または注入による等の非経口投与に好適である。これらの組成物のうちある特定のものは、等張水溶液または懸濁液を含む。前記組成物は、滅菌されていてよく、かつ／あるいは保存、安定化、湿潤または乳化剤、溶液プロモーター、浸透圧を調節するための塩および／もしくは緩衝剤等のアジュバントを含有してよい。加えて、それらは他の治療的に価値のある物質を含有していてもよい。前記組成物は、従来の混合、造粒またはコーティング方法に従ってそれぞれ調製され、活性原料の約０．１〜７５％を含有、または約１〜５０％を含有する。

経皮適用に好適な組成物は、有効量の本発明の化合物を好適な担体とともに含む。経皮送達に好適な担体は、宿主の皮膚の通過を補助するために、吸収性の薬理学的に許容される溶媒を含む。例えば、経皮デバイスは、支持部材と、化合物を場合により担体とともに含有するリザーバーと、場合により宿主の皮膚の化合物を制御された所定の速度で長時間にわたって送達するための速度制御障壁と、デバイスを皮膚に固定するための手段とを備える包帯の形態である。

例えば皮膚または目への局所適用に好適な組成物は、水溶液剤、懸濁剤、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、または例えばエアゾール剤等による送達のためのスプレー可能な製剤を含む。そのような局所送達システムは、特に、眼内適用に適切となる。そのようなものは、可溶化剤、安定剤、張性増強剤、緩衝剤および保存剤を含有してよい。

本明細書において使用される場合、局所適用は、吸入または鼻腔内適用にも関係してよい。本発明の化合物は、上部気道内に高頻度で局在している感染症を処置するために有効であり、したがって、吸入または鼻腔内方法を介してそれら自体を送達するのによく適している。本発明の化合物および組成物は、好都合なことに、乾燥粉末吸入器からの乾燥粉末の形態、または、加圧コンテナ、ポンプ、スプレー、噴霧器もしくはネブライザーからのエアゾールスプレー提示物の形態で、好適な噴射剤を使用してもしくは使用せずに、送達されてよい。それらは、単独で、または、混合物、例えばラクトースとの乾式混和物、もしくは例えばリン脂質との混合成分粒子としてのいずれかで、投与されてよい。化合物を調製するおよび吸入を介して送達するための方法は、当該技術分野において公知である。

本発明の無水医薬組成物および剤形は、無水または低水分含有原料および低水分または低湿度条件を使用して調製され得る。無水医薬組成物は、その無水性質が維持されるように調製され、保管されてよい。したがって、無水組成物は、好適な処方キットに含まれ得るような、水への曝露を防止することが公知である材料を使用して包装される。好適な包装の例は、密封ホイル、プラスチック、単位用量コンテナ（例えば、バイアル）、ブリスターパックおよびストリップパックを含むがこれらに限定されない。

本発明は、活性原料としての本発明の化合物が分解する速度を低減させる１つまたは複数の剤を含む、医薬組成物および剤形をさらに提供する。そのような剤は、本明細書において「安定剤」と称され、アスコルビン酸等の抗酸化剤、ｐＨ緩衝液、または塩緩衝液等を含むがこれらに限定されない。

遊離形態または塩形態の式Ｉの化合物は、有益な薬理学的特性を呈し、例えば、それらは、次の節において提供される試験データによって示す通り、ＨＲＶの複製を阻害し、したがって、本明細書において記述されている通りの療法のために、研究用化学物質として、例えば、ライノウイルス感染症の影響を分析するためのツール化合物としての使用にも指示される。化合物およびそれらを含有する組成物は、したがって、そのような処置を必要とする患者において風邪を含むＨＲＶによって引き起こされた感染症を処置するため、ならびに、喘息、ＣＯＰＤ、嚢胞性線維症、およびライノウイルス感染症によって多くの場合増悪される他の状態の合併症の予防または抑制のために使用されてよい。

本明細書において記述されている化合物および組成物ならびに方法は、ＨＲＶ感染症からの重篤な合併症を経験し得る患者においてとりわけ有用である。例えば、喘息、ＣＯＰＤまたは嚢胞性線維症に罹患している対象は、ＨＲＶに感染した場合に、重篤な合併症のリスクがあり得る。ライノウイルス感染症は、喘息増悪の一般的な誘発因子であり、多くの場合、中耳炎、副鼻腔炎、肺炎、ならびにＣＯＰＤおよび嚢胞性線維症の増悪等の他の呼吸器疾患に関与する。Q. J. Med. 94:1-3 (2001)。したがって、他の点では健常者にとって風邪が不都合な場合があり、必ずしも薬学的介入を当然としなくてよいが、喘息、ＣＯＰＤもしくは嚢胞性線維症等の状態を有する対象、または免疫不全もしくは免疫抑制対象、または肺炎のような二次気道感染症に対してとりわけ感受性の対象は、本明細書において記述されている化合物および方法による処置に特に好適であり、そのような処置は、増悪事象の可能性および／または重症度を低減させる。

したがって、さらなる実施形態として、本発明は、療法における、式（Ｉ）の化合物、または本明細書において記述されている通りの式（Ｉ）の範囲内の実施形態のいずれかの使用を提供する。特定の実施形態において、療法は、ＨＲＶの株によって引き起こされた疾患のためのものである。別の実施形態において、本発明の化合物は、喘息、ＣＯＰＤもしくは嚢胞性線維症等の状態を持つ対象、免疫不全もしくは免疫抑制対象、および肺炎のような重篤な二次気道感染症にとりわけ感受性の対象におけるライノウイルス感染症を処置するための、またはこれらの敏感な対象におけるＨＲＶ感染症の発生のリスクを低減させるための療法において有用である。

別の実施形態において、本発明は、ＨＲＶ複製の阻害によって処置される疾患を処置する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、または本明細書において記述されている通りの式（Ｉ）の範囲内の実施形態のいずれかの投与を含む、方法を提供する。さらなる実施形態において、疾患は、前述の状態から選択される。方法は、典型的には、有効量の本明細書において記述されている通りの化合物またはそのような化合物を含む医薬組成物を、そのような処置を必要とする対象に投与することを含む。化合物は、本明細書において記述されているもの等の任意の好適な方法によって投与されてよく、投与は、治療医師によって選択される間隔で繰り返されてよい。一部の実施形態において、本発明の化合物または医薬組成物は、経口的に投与される。他の実施形態において、本発明の化合物または医薬組成物は、鼻内にまたは吸入によって投与される。

本発明のさらなる実施形態は、医薬の製造のための、式（Ｉ）の化合物、または本明細書において記述されているそのような化合物の実施形態のいずれかの使用を提供する。特定の実施形態において、医薬は、ＨＲＶによって引き起こされたまたは増悪された疾患もしくは状態の処置のためのものである。特定の実施形態において、疾患は、特に、喘息、ＣＯＰＤもしくは嚢胞性線維症等の状態を持つ対象、免疫不全もしくは免疫抑制対象、または肺炎のような二次気道感染症にとりわけ感受性の対象における、ライノウイルス感染症である。

本発明の医薬組成物または組合せ物は、約５０〜７０ｋｇの対象について約１〜５０００ｍｇの活性原料、または約１〜２０００ｍｇもしくは約１〜５００ｍｇもしくは約１〜２５０ｍｇもしくは約０．５〜１００ｍｇもしくは約１〜５０ｍｇの活性原料の、単位投薬量であり得る。１〜２５０ｍｇまたは１〜５０ｍｇ等のより低用量を、鼻腔内または吸入投与を含む局所投与方法に、および注射または注入に使用してよく、一方、より高用量、例えば、２５〜２５００ｍｇまたは５０〜５０００ｍｇを、経口投与に使用してよい。化合物、医薬組成物、またはそれらの組合せ物の治療有効投薬量は、対象の種、体重、年齢および個々の状態、ならびに処置されている障害もしくは疾患またはそれらの重症度にも依存する。通常の技量の医師、臨床医または獣医は、障害または疾患を処置するまたはその進行を阻害するために必要な活性原料のそれぞれの有効量を容易に決定することができる。

上記で挙げた投薬特性は、有利なことに、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、イヌ、サル、またはそれらの単離された臓器、組織および標本を使用する、インビトロおよびインビボ試験を介して実証可能である。本発明の化合物は、溶液、例えば、水溶液の形態でインビトロにて、および腸内に、非経口的に、有利なことに静脈内にのうちいずれかで、例えば、懸濁液としてまたは水溶液中でインビボにて、適用することができる。インビトロでの投薬量は、約１０^−３モルから１０^−９モル濃度間の範囲であってよい。

本発明の化合物は、１つまたは複数の治療的共薬剤と同時に、またはその前もしくは後に、投与されてよい。本発明の化合物は、別個に、同じもしくは異なる投与経路によって、または同じ医薬組成物中で一緒に、共薬剤として、投与されてよい。

一実施形態において、本発明は、療法における同時、別個または順次使用のための、式（Ｉ）の化合物および少なくとも１つの他の治療的共薬剤を含む生成物を組合せ調製物として提供する。一実施形態において、療法は、ＨＲＶによって引き起こされたまたは増悪された疾患もしくは状態の処置である。組合せ調製物として提供される生成物は、式（Ｉ）の化合物および他の治療的共薬剤を同じ医薬組成物中に一緒に含む組成物、または、別個の形態、例えばキットの形態の、式（Ｉ）の化合物および他の治療的共薬剤を含む。

一実施形態において、本発明は、式（Ｉ）の化合物と、別の治療的共薬剤とを含む、医薬組成物を提供する。場合により、医薬組成物は、上述した通りの薬学的に許容される担体を含んでよい。

本明細書において記述されている化合物および組成物は、免疫調節薬、例えば、共刺激分子の活性化剤、または免疫阻害性分子の阻害剤、またはワクチンとして作用する１つまたは複数の治療剤と組み合わせて、使用または投与することができる。プログラム死１（ＰＤ−１）タンパク質は、Ｔ細胞調節因子の広範なＣＤ２８／ＣＴＬＡ４ファミリーの阻害性メンバーである（Okazaki et al. (2002) Curr Opin Immunol 14: 391779-82; Bennett et al. (2003) J. Immunol. 170:711-8）。ＰＤ−１は、活性化Ｂ細胞、Ｔ細胞および単球において発現される。ＰＤ−１は、ＴＣＲシグナルを負に調節する免疫阻害タンパク質であり（Ishida, Y. et al. (1992) EMBO J. 11:3887-3895; Blank, C. et al. (Epub 2006 Dec. 29) Immunol. Immunother. 56(5):739-745）、慢性感染症において上方制御される。ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用は、免疫チェックポイントとして作用することができ、これは、例えば、浸潤リンパ球の減少、Ｔ細胞受容体媒介増殖の減少、および／またはがん性もしくは感染細胞による免疫回避が導かれ得る（Dong et al. (2003) J. Mol. Med. 81:281-7; Blank et al. (2005) Cancer Immunol. Immunother. 54:307-314; Konishi et al. (2004) Clin. Cancer Res. 10:5094-100）。免疫抑制は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２との局所的相互作用を阻害することによって逆転させることができ、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ２との相互作用も遮断されている場合、効果は相加的である（Iwai et al. (2002) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 99:12293-7; Brown et al. (2003) J. Immunol. 170:1257-66）。免疫修飾は、免疫阻害タンパク質（例えば、ＰＤ−１）または阻害タンパク質を修飾する結合タンパク質（例えば、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２）のいずれかと結合することによって、実現することができる。

一実施形態において、本発明の併用療法は、免疫チェックポイント分子の阻害性分子の阻害剤またはアンタゴニストである免疫調節薬を含む。別の実施形態において、免疫調節薬は、免疫阻害チェックポイント分子を自然に阻害するタンパク質と結合する。抗菌化合物と組み合わせて使用される場合、これらの免疫調節薬は、抗微生物応答を増強し、したがって、抗菌化合物単独による処置と比べて、効能を増強することができる。

用語「免疫チェックポイント」は、ＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞の細胞表面上の分子群を指す。これらの分子は、下方修飾するための「ブレーキ」として有効に役立つ、または適応免疫応答を阻害することができる。免疫チェックポイント分子は、プログラム死１（ＰＤ−１）、細胞毒性Ｔ−リンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４、ＯＸ−４０、ＣＤ１３７、ＣＤ４０およびＬＡＧ３を含むがこれらに限定されず、これらは、免疫細胞を直接阻害する。本発明の方法において有用な免疫チェックポイント阻害剤として作用することができる免疫治療剤は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４および／またはＴＧＦＲベータの阻害剤を含むがこれらに限定されない。阻害性分子の阻害は、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはタンパク質レベルでの阻害によって実施することができる。一部の実施形態において、阻害性核酸（例えば、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ）を使用して、阻害性分子の発現を阻害することができる。他の実施形態において、阻害シグナルの阻害剤は、ポリペプチド、例えば可溶性リガンド、または、阻害性分子と結合する、抗体もしくはその抗原結合フラグメントである。

「と組み合わせて」は、療法または治療剤が同時に投与および／または一緒に送達するために製剤化されなくてはならないことを暗示するように意図されるものではないが、これらの送達方法は、本明細書において記述されている範囲内である。免疫調節薬は、１つまたは複数の本発明の化合物および場合により１つもしくは複数の追加の療法または治療剤と、同時に、その前に、またはその後に投与することができる。組み合わせた治療剤を、任意の順序で投与することができる。概して、各剤は、その剤について決定された用量でおよび／またはタイムスケジュールで投与されることになる。この組合せ物において利用される治療剤を、単一組成物で一緒に投与しても、または異なる組成物で別個に投与してもよいことがさらに理解されよう。概して、組み合わせて利用される治療剤のそれぞれは、それらが個々に利用されるレベルを超えないレベルで利用されることが予測される。一部の実施形態において、組み合わせて利用されるレベルは、個々に利用されるものよりも低くなる。

ある特定の実施形態において、本明細書において記述されている抗菌化合物は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２の阻害剤である１つまたは複数の免疫調節薬と組み合わせて投与される。各そのような阻害剤は、抗体、その抗原結合フラグメント、イムノアドヘシン、融合タンパク質、またはオリゴペプチドであってよい。そのような免疫調節薬の例は、当該技術分野において公知である。

一部の実施形態において、免疫調節薬は、ＭＤＸ−１１０６、Ｍｅｒｃｋ３４７５またはＣＴ−０１１から選択される抗ＰＤ−１抗体である。

一部の実施形態において、免疫調節薬は、イムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）と融合しているＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ２の細胞外またはＰＤ−１結合部を含むイムノアドヘシン）である。

一部の実施形態において、免疫調節薬は、ＡＭＰ−２２４等のＰＤ−１阻害剤である。

一部の実施形態において、免疫調節薬は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体等のＰＤ−Ｌ１阻害剤である。

一部の実施形態において、免疫調節薬は、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８ＣまたはＭＤＸ−１１０５から選択される抗ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストである。ＢＭＳ−９３６５５９としても公知であるＭＤＸ−１１０５は、国際公開第２００７／００５８７４号パンフレットにおいて記述されている抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。抗体ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０は、国際公開第２０１０／０７７６３４号パンフレットにおいて記述されている抗ＰＤ−Ｌ１である。

一部の実施形態において、免疫調節薬は、ニボルマブ（ＣＡＳ登録番号：９４６４１４−９４−４）である。ニボルマブの代替名は、ＭＤＸ−１１０６、ＭＤＸ−１１０６−０４、ＯＮＯ−４５３８またはＢＭＳ−９３６５５８を含む。ニボルマブは、ＰＤ−１を特異的に遮断する完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ニボルマブ（クローン５Ｃ４）、およびＰＤ−１と特異的に結合する他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第８，００８，４４９号明細書、ＥＰ２１６１３３６および国際公開第２００６／１２１１６８号パンフレットにおいて開示されている。

一部の実施形態において、免疫調節薬は、抗ＰＤ−１抗体ペンブロリズマブである。ペンブロリズマブ（ランブロリズマブ、ＭＫ−３４７５、ＭＫ０３４７５、ＳＣＨ−９００４７５またはＫＥＹＴＲＵＤＡ^(R)とも称される；Ｍｅｒｃｋ）は、ＰＤ−１と結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ペンブロリズマブおよび他のヒト化抗ＰＤ−１抗体は、Hamid, O. et al. (2013) New England Journal of Medicine 369 (2): 134-44、米国特許第８，３５４，５０９号明細書、国際公開第２００９／１１４３３５号パンフレットおよび国際公開第２０１３／０７９１７４号パンフレットにおいて開示されている。

一部の実施形態において、免疫調節薬は、ピディリズマブ（ＣＴ−０１１；ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＰＤ１と結合するヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。ピディリズマブおよび他のヒト化抗ＰＤ−１モノクローナル抗体は、国際公開第２００９／１０１６１１号パンフレットにおいて開示されている。

本明細書で開示されている方法において使用するための免疫調節薬として有用な他の抗ＰＤ１抗体は、ＡＭＰ５１４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）、ならびに、米国特許第８，６０９，０８９号明細書、米国特許第２０１００２８３３０号明細書および／または米国特許出願公開第２０１２０１１４６４９号明細書において開示されている抗ＰＤ１抗体を含む。一部の実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＳＢ００１０７１８Ｃである。ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（Ａ０９−２４６−２とも称される；ＭｅｒｃｋＳｅｒｏｎｏ）は、ＰＤ−Ｌ１と結合するモノクローナル抗体である。

一部の実施形態において、免疫調節薬は、ＭＤＰＬ３２８０Ａ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）、ＰＤ−Ｌ１と結合するヒトＦｃ最適化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。ＭＤＰＬ３２８０Ａ、およびＰＤ−Ｌ１に対する他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第７，９４３，７４３号明細書および米国特許出願公開第２０１２００３９９０６号明細書において開示されている。本発明の方法のための免疫調節薬として有用な他の抗ＰＤ−Ｌ１結合剤は、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０（国際公開第２０１０／０７７６３４号パンフレットを参照）、ＭＤＸ−１１０５（ＢＭＳ−９３６５５９とも称される）、および国際公開第２００７／００５８７４号パンフレットにおいて開示されている抗ＰＤ−Ｌ１結合剤を含む。

一部の実施形態において、免疫調節薬は、ＡＭＰ−２２４（Ｂ７−ＤＣＩｇ；Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ；例えば、国際公開第２０１０／０２７８２７号パンフレットおよび国際公開第２０１１／０６６３４２号パンフレットにおいて開示されている）であり、ＰＤ１とＢ７−Ｈ１との間の相互作用を遮断するＰＤ−Ｌ２Ｆｃ融合可溶性受容体である。

一部の実施形態において、免疫調節薬は、ＢＭＳ−９８６０１６等の抗ＬＡＧ−３抗体である。ＢＭＳ−９８６０１６（ＢＭＳ９８６０１６とも称される）は、ＬＡＧ−３と結合するモノクローナル抗体である。ＢＭＳ−９８６０１６および他のヒト化抗ＬＡＧ−３抗体は、米国特許出願公開第２０１１／０１５０８９２号明細書、国際公開第２０１０／０１９５７０号パンフレットおよび国際公開第２０１４／００８２１８号パンフレットにおいて開示されている。

ある特定の実施形態において、本明細書で開示されている併用療法は、共刺激分子または阻害性分子の調節因子、例えば、共阻害リガンドまたは受容体を含む。

一実施形態において、共刺激分子の共刺激調節因子、例えば、アゴニストは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３またはＣＤ８３リガンドのアゴニスト（例えば、そのアゴニスト性抗体もしくは抗原結合フラグメント、または可溶性融合体）から選択される。

別の実施形態において、本明細書で開示されている併用療法は、共刺激分子である免疫調節薬、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＩＣＯＳおよび／またはＧＩＴＲの共刺激ドメインを含むポジティブシグナルに関連するアゴニストを含む。

例示的なＧＩＴＲアゴニストは、例えば、米国特許第６，１１１，０９０号明細書、欧州特許第０９０５０５号明細書、米国特許第８，５８６，０２３号明細書、ＰＣＴ公開番号国際公開第２０１０／００３１１８号および同第２０１１／０９０７５４号パンフレットにおいて記述されているＧＩＴＲ融合タンパク質、または、例えば、米国特許第７，０２５，９６２号明細書、欧州特許第１９４７１８３号明細書、米国特許第７，８１２，１３５号明細書、米国特許第８，３８８，９６７号明細書、米国特許第８，５９１，８８６号明細書、欧州特許第１８６６３３９号明細書、ＰＣＴ公開番号国際公開第２０１１／０２８６８３号パンフレット、ＰＣＴ公開番号国際公開第２０１３／０３９９５４号パンフレット、ＰＣＴ公開番号国際公開第２００５／００７１９０号パンフレット、ＰＣＴ公開番号国際公開第２００７／１３３８２２号パンフレット、ＰＣＴ公開番号国際公開第２００５／０５５８０８号パンフレット、ＰＣＴ公開番号国際公開第９９／４０１９６号パンフレット、ＰＣＴ公開番号国際公開第２００１／０３７２０号パンフレット、ＰＣＴ公開番号国際公開第９９／２０７５８号パンフレット、ＰＣＴ公開番号国際公開第２００６／０８３２８９号パンフレット、ＰＣＴ公開番号国際公開第２００５／１１５４５１号パンフレット、米国特許第７，６１８，６３２号明細書およびＰＣＴ公開番号国際公開第２０１１／０５１７２６号パンフレットにおいて記述されている抗ＧＩＴＲ抗体等の、ＧＩＴＲ融合タンパク質および抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、二価抗ＧＩＴＲ抗体）を含む。

一実施形態において、使用される免疫調節薬は、可溶性リガンド（例えば、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ）、あるいは、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２もしくはＣＴＬＡ４と結合する抗体または抗体フラグメントである。例えば、抗ＰＤ−１抗体分子は、抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、イピリムマブと組み合わせて投与することができる。例示的な抗ＣＴＬＡ４抗体は、トレメリムマブ（以前はチシリムマブとして公知であった、Ｐｆｉｚｅｒから入手可能なＩｇＧ２モノクローナル抗体、ＣＰ−６７５，２０６）；およびイピリムマブ（ＣＴＬＡ−４抗体、ＭＤＸ−０１０としても公知である、ＣＡＳ番号４７７２０２−００−９）を含む。

一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書において記述されている通りの本発明の化合物による処置後に投与される。

別の実施形態において、抗ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１抗体分子は、抗ＬＡＧ−３抗体またはその抗原結合フラグメントと組み合わせて投与される。別の実施形態において、抗ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１抗体分子は、抗ＴＩＭ−３抗体またはその抗原結合フラグメントと組み合わせて投与される。さらに他の実施形態において、抗ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１抗体分子は、抗ＬＡＧ−３抗体および抗ＴＩＭ−３抗体またはそれらの抗原結合フラグメントと組み合わせて投与される。本明細書において挙げられている抗体の組合せは、別個に、例えば別個の抗体として投与することができ、または、例えば二重特異性もしくは三重特異性抗体分子として連結させることができる。一実施形態において、抗ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１抗体分子および抗ＴＩＭ−３もしくは抗ＬＡＧ−３抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、二重特異性抗体が投与される。ある特定の実施形態において、本明細書において挙げられている抗体の組合せは、がん、例えば、本明細書において記述されている通りのがん（例えば、固形腫瘍）を処置するために使用される。上記の組合せの効能は、当該技術分野において公知の動物モデルで試験することができる。例えば、抗ＰＤ−１および抗ＬＡＧ−３の相乗効果を試験するための動物モデルは、例えば、Woo et al. (2012) Cancer Res. 72(4):917-27において記述されている。

併用療法において使用され得る例示的な免疫調節薬は、例えば、アフツズマブ（Ｒｏｃｈｅ^(R)から入手可能）；ペグフィルグラスチム（Ｎｅｕｌａｓｔａ^(R)）；レナリドマイド（ＣＣ−５０１３、Ｒｅｖｌｉｍｉｄ^(R)）；サリドマイド（Ｔｈａｌｏｍｉｄ^(R)）、アクチミド（ＣＣ４０４７）；およびサイトカイン、例えば、ＩＬ−２１またはＩＲＸ−２（インターロイキン１、インターロイキン２およびインターフェロンγを含むヒトサイトカインの混合物、ＣＡＳ９５１２０９−７１−５、ＩＲＸＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓから入手可能）を含むがこれらに限定されない。

本発明の抗菌化合物と組み合わせて使用され得るそのような免疫調節薬の例示的な用量は、約１〜１０ｍｇ／ｋｇ、例えば、３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１抗体分子の用量、および約３ｍｇ／ｋｇの抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、イピリムマブの用量を含む。

本発明の抗菌化合物を免疫調節薬と組み合わせて使用する方法の実施形態の例は、これらを含む：
ｉ．対象における細菌感染症を処置するための方法であって、対象に、本明細書において記述されている通りの式（Ｉ）の化合物および免疫調節薬を投与することを含む、方法。
ｉｉ．免疫調節薬が、共刺激分子の活性化剤または免疫チェックポイント分子の阻害剤である、実施形態ｉの方法。
ｉｉｉ．共刺激分子の活性化剤が、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３およびＣＤ８３リガンドの１つまたは複数のアゴニストである、実施形態ｉおよびｉｉのいずれかの方法。
ｉｖ．免疫チェックポイント分子の阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４およびＴＧＦＲベータから選択される、上記の実施形態ｉ〜ｉｉｉのいずれかの方法。
ｖ．免疫チェックポイント分子の阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３もしくはＣＴＬＡ４の阻害剤、またはそれらの組合せから選択される、実施形態ｉ〜ｉｉｉのいずれかの方法。
ｖｉ．免疫チェックポイント分子の阻害剤が、可溶性リガンド、または、免疫チェックポイント分子と結合する抗体もしくはその抗原結合フラグメントである、実施形態ｉ〜ｖのいずれかの方法。
ｖｉｉ．抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４（例えば、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４）由来である、実施形態ｉ〜ｖｉのいずれかの方法。
ｖｉｉｉ．抗体またはその抗原結合フラグメントが、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能または補体機能の１つもしくは複数を増大または減少させるために変化する、例えば突然変異する、実施形態ｉ〜ｖｉｉのいずれかの方法。
ｉｘ．抗体分子が、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に対する第１の結合特異性およびＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３またはＰＤ−Ｌ２に対する第２の結合特異性を有する、二重特異性または多重特異性抗体分子である、実施形態ｉ〜ｖｉｉｉのいずれかの方法。
ｘ．免疫調節薬が、ニボルマブ、ペンブロリズマブまたはピディリズマブから選択される抗ＰＤ−１抗体である、実施形態ｉ〜ｉｘのいずれかの方法。
ｘｉ．免疫調節薬が、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８ＣまたはＭＤＸ−１１０５から選択される抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、実施形態ｉ〜ｘのいずれかの方法。
ｘｉｉ．免疫調節薬が、抗ＬＡＧ−３抗体分子である、実施形態ｉ〜ｘのいずれかの方法。
ｘｉｉｉ．抗ＬＡＧ−３抗体分子が、ＢＭＳ−９８６０１６である、実施形態ｘｉｉの方法。
ｘｉｖ．免疫調節薬が、約１〜３０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約５〜２５ｍｇ／ｋｇ、約１０〜２０ｍｇ／ｋｇ、約１〜５ｍｇ／ｋｇ、または約３ｍｇ／ｋｇの用量で、例えば、１週間に１回から２、３または４週間毎に１回、注射によって（例えば、皮下にまたは静脈内に）投与される抗ＰＤ−１抗体分子である、実施形態ｉ〜ｘのいずれかの方法。
ｘｖ．抗ＰＤ−１抗体分子が、約１０〜２０ｍｇ／ｋｇまでの用量で、隔週で投与される、実施形態ｘｉｖの方法。
ｘｖｉ．抗ＰＤ−１抗体分子、例えば、ニボルマブが、約１ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇまで、例えば、約１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇの用量で、２週間毎に、静脈内に投与される、実施形態ｘｖの方法。
ｘｖｉｉ．抗ＰＤ−１抗体分子、例えば、ニボルマブが、約２ｍｇ／ｋｇの用量で、３週間間隔で、静脈内に投与される、実施形態ｘｖの方法。

本発明の併用療法において、本発明の化合物および他の治療的共薬剤は、同じまたは異なる製造業者によって製造および／または製剤化されてよい。その上、本発明の化合物および他の治療薬を、（ｉ）医師への併用製品の販売の前に（例えば、本発明の化合物および他の治療剤を含むキットの事例において）；（ｉｉ）投与直前に医師自身によって（または医師の指導の下）；（ｉｉｉ）患者自身で、例えば、本発明の化合物および他の治療剤の順次投与中に、まとめて併用療法としてよい。

したがって、本発明は、ＨＲＶによって引き起こされたまたは増悪された疾患もしくは状態を処置するための式（Ｉ）の化合物の使用を提供し、ここで、医薬は、別の治療剤との投与のために調製される。本発明は、疾患または状態を処置するための別の治療的共薬剤の使用も提供し、ここで、医薬は、式（Ｉ）の化合物とともに投与される。本発明の化合物と組み合わせて使用するための好適な共薬剤は、３Ａ阻害剤、３Ｃプロテアーゼ阻害剤、ならびに、エンビロキシム、プレコナリルおよびルピントリビルを含むＨＲＶに影響を及ぼすカプシド結合剤を含む。

本発明は、ＨＲＶによって引き起こされたまたは増悪された疾患もしくは状態を処置する方法において使用するための式（Ｉ）の化合物も提供し、ここで、式（Ｉ）の化合物は、別の治療剤との投与のために調製される。本発明は、ＨＲＶによって引き起こされたまたは増悪された疾患もしくは状態を処置する方法において使用するための別の治療的共薬剤も提供し、ここで、他の治療的共薬剤は、式（Ｉ）の化合物との投与のために調製される。本発明は、ＨＲＶによって引き起こされたまたは増悪された疾患もしくは状態を処置する方法において使用するための式（Ｉ）の化合物も提供し、ここで、式（Ｉ）の化合物は、別の治療的共薬剤とともに投与される。本発明は、ＨＲＶによって引き起こされたまたは増悪された疾患もしくは状態を処置する方法において使用するための別の治療的共薬剤も提供し、ここで、他の治療的共薬剤は、式（Ｉ）の化合物とともに投与される。

本発明は、ＨＲＶによって引き起こされたまたは増悪された疾患もしくは状態を処置するための式（Ｉ）の化合物の使用も提供し、ここで、患者は、先に（例えば、２４時間以内に）別の治療剤で処置されている。本発明は、ＨＲＶによって引き起こされたまたは増悪された疾患もしくは状態を処置するための別の治療剤の使用も提供し、ここで、患者は、先に（例えば、２４時間以内に）式（Ｉ）の化合物で処置されている。

一実施形態において、他の治療剤は、３Ａ阻害剤、３Ｃプロテアーゼ阻害剤、ならびに、エンビロキシム、プレコナリルおよびルピントリビルを含むＨＲＶに影響を及ぼすカプシド結合剤から選択される。

下記の実施例は、本発明を例証するように意図されており、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。温度は、セ氏度で記される。別段の言及がなければ、すべての蒸発は、減圧下で、典型的には約１５ｍｍＨｇから１００ｍｍＨｇの間（２０〜１３３ｍｂａｒ）で実施される。最終生成物、中間体および出発材料の構造は、標準的な分析方法、例えば、微量分析および分光学的特徴、例えば、ＭＳ、ＩＲ、ＮＭＲによって確認される。使用される略語は、当該技術分野において慣例的なものである。

本発明の化合物を合成するために利用されるすべての出発材料、ビルディングブロック、試薬、酸、塩基、脱水剤、溶媒および触媒は、市販されているか、または当業者に公知の有機合成方法によって生成され得るかのいずれかである（例えば、Houben-Weyl 4th Ed. 1952, Methods of Organic Synthesis, Thieme, Volume 21を参照）。さらに、本発明の化合物は、下記の実施例を考慮し、当業者に公知の有機合成方法によって生成され得る。

[実施例１]

実施例１は、下記の反応シーケンスによって作製した。

（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４−（（２，４−ジクロロベンジル）オキシ）−５−（（（２，４−ジクロロベンジル）オキシ）メチル）−２−メトキシ−３−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−３−オールの合成。

０．５Ｍプロパ−１−イニルマグネシウムブロミド（１４４ｍＬ、０．０７２ｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中の（４Ｒ，５Ｒ）−４−（２，４−ジクロロベンジルオキシ）−５−（（２，４−ジクロロベンジルオキシ）メチル）−２−メトキシジヒドロフラン−３（２Ｈ）−オン（ＣＡＳ６３６５８１−８２−３、１１．５ｇ、０．０２３ｍｏｌ）の溶液に、−７８℃で３０分間かけて添加した。反応混合物をゆっくりと室温に到達させ、４時間撹拌した。反応の完了後、これを０℃に冷却し、飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液でクエンチした。反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、有機層を、水、続いて、ブライン溶液で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４−（２，４−ジクロロベンジルオキシ）−５−（（２，４−ジクロロベンジルオキシ）メチル）−２−メトキシ−３−（プロパ−１−イニル）テトラヒドロフラン−３−オール（６．１２ｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、収率４８％）を得た。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 1.83 (s, 3H), 3.40 (s, 1H), 3.49 (s, 3H), 3.70 (dd, J = 4.8, 2.0 Hz, 2H), 3.86 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.21 (q, J = 4.8 Hz, 1H), 4.61 (ABq, J = 13.2 Hz, 2H), 4.70 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.88 (s, 1H), 4.89 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 7.18-7.24 (m, 2H), 7.35 (dd, J = 6.8, 2.0 Hz, 2H), 7.40 (dd, J = 8.0, 2.8 Hz, 2H).

（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４−（（２，４−ジクロロベンジル）オキシ）−５−（（（２，４−ジクロロベンジル）オキシ）メチル）−３−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−２，３−ジオールの合成。

水（１１．６ｍＬ）中のトリフルオロ酢酸（１６４．２５ｍＬ）を、（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４−（２，４−ジクロロベンジルオキシ）−５−（（２，４−ジクロロベンジルオキシ）メチル）−２−メトキシ−３−（プロパ−１−イニル）テトラヒドロフラン−３−オール（５０．０ｇ、０．０９６ｍｏｌ）に０℃で添加した。反応混合物を５５℃に４時間加熱した。混合物を減圧下で濃縮し、続いて、トルエンと２回共蒸留した。得られた粗製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４−（２，４−ジクロロベンジルオキシ）−５−（（２，４−ジクロロベンジルオキシ）メチル）−３−（プロパ−１−イニル）テトラヒドロフラン−２，３−ジオール（４０．１０ｇ、０．０７９ｍｏｌ、収率８２％）を得た。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 1.86, 1.92 (s x 2, 3H), 3.44, 3.90 (brs x 2, 1H), 3.58-3.65 (m, 1H), 3.69-3.74 (m, 1H), 4.10-4.15 (m, 2H), 4.59 (ABq, J = 13.2 Hz, 2H), 4.75 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 4.95 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 5.10, 5.31 (s x 2, 1H), 7.22-7.25 (m, 2H), 7.33-7.40 (m, 4H).

（１Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４−（（２，４−ジクロロベンジル）オキシ）−３−（（（２，４−ジクロロベンジル）オキシ）メチル）−５−（プロパ−１−イン−１−イル）−２，６−ジオキサビシクロ［３．１．０］ヘキサンの合成。

ＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬ）中の（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４−（２，４−ジクロロベンジルオキシ）−５−（（２，４−ジクロロベンジルオキシ）メチル）−３−（プロパ−１−イニル）テトラヒドロフラン−２，３−ジオール（１．０ｇ、１．９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ_３Ｎ（０．９ｍＬ、０．００５９ｍｏｌ）、続いて、ＤＭＡＰ（触媒）を室温で添加した。反応混合物を０℃に冷却し、次いで、ｐ−ＴｓＣｌ（０．６１５ｇ、２．９ｍｏｌ）を１ロットで添加した。生じた反応混合物を、室温で３時間撹拌した。反応の完了後、反応混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２で希釈し、有機層を水およびブラインで洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空中で濃縮して、（１Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４−（２，４−ジクロロベンジルオキシ）−３−（（２，４−ジクロロベンジルオキシ）メチル）−５−（プロパ−１−イニル）−２，６−ジオキサビシクロ［３．１．０］ヘキサン（１．２ｇ）を得た。この粗化合物を、次のステップに直接使用した。

（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−４−（（２，４−ジクロロ−ベンジル）オキシ）−５−（（（２，４−ジクロロベンジル）オキシ）メチル）−３−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−３−オールの合成。

ＣＨ_３ＣＮ（１０ｍＬ）中の４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（０．３７４ｇ、２．４ｍｏｌ）の溶液に、ＮａＨ（６０％懸濁液、０．１７６ｇ、４．０ｍｏｌ）を０℃で添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。ＣＨ_３ＣＮ（１０ｍＬ）中の（１Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４−（２，４−ジクロロベンジルオキシ）−３−（（２，４−ジクロロベンジルオキシ）メチル）−５−（プロパ−１−イニル）−２，６−ジオキサビシクロ［３．１．０］ヘキサン（１．２０ｇ、２．４ｍｏｌ）を、反応混合物に添加した。得られた反応混合物を５０℃に１６時間加熱した。反応の完了後、混合物を減圧下で濃縮し、氷冷水に注ぎ入れた。混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、有機層を水およびブラインで洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−４−（２，４−ジクロロベンジルオキシ）−５−（（２，４−ジクロロベンジルオキシ）メチル）−３−（プロパ−１−イニル）テトラヒドロフラン−３−オール（２ステップにわたって０．７２ｇ、１．１２ｍｍｏｌ、収率５７％）を得た。¹H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 1.35 (s, 3H), 3.78 (dd, J = 11.2, 3.6 Hz, 1H), 3.92 (dd, J = 11.2, 2.4 Hz, 1H), 4.20 (dt, J = 8.4, 3.6 Hz, 1H), 4.37 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.60 (ABq, J = 12.8 Hz, 2H), 4.75 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.94 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 6.36 (s, 1H), 6.56 (s, 1H), 6.65 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.42-7.48 (m, 3H), 7.54 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (dd, J = 12.8, 1.6 Hz, 2H), 7.87 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 8.68 (s, 1H);ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ６４０．０５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（４−アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−４−（（２，４−ジクロロ−ベンジル）オキシ）−５−（（（２，４−ジクロロベンジル）オキシ）メチル）−３−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−３−オールの合成。

鋼製ボンベ内、液体ＮＨ_３（２００ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−４−（２，４−ジクロロベンジルオキシ）−５−（（２，４−ジクロロベンジルオキシ）メチル）−３−（プロパ−１−イニル）テトラヒドロフラン−３−オール（１８．０ｇ、０．０２８ｍｏｌ）の撹拌溶液に、生じた反応混合物を６０℃で４８時間撹拌した。反応の完了後、液体ＮＨ_３を減圧下で除去した。得られた粗製物を中性アルミナ上でのカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨ_２Ｃｌ_２中ＭｅＯＨの５％勾配で溶離して、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（４−アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−４−（２，４−ジクロロベンジルオキシ）−５−（（２，４−ジクロロベンジルオキシ）メチル）−３−（プロパ−１−イニル）テトラヒドロフラン−３−オール（１２．１ｇ、０．０１９ｍｏｌ、収率６９％）を得た。¹H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 1.40 (s, 3H), 3.75 (dd, J = 11.2, 4.0 Hz, 1H), 3.87 (dd, J = 13.2, 2.4 Hz, 1H), 4.11-4.13 (m, 1H), 4.35 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.57 (ABq, J = 12.8 Hz, 2H), 4.77 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.96 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 6.25 (s, 1H), 6.36 (s, 1H), 6.50 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 6.96 (s, 2H), 7.27 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.39-7.47 (m, 3H), 7.56 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.61 (dd, J = 5.6, 2.0 Hz, 2H), 8.06 (s, 1H);ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ６２１．１３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（４−アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−５−（ヒドロキシメチル）−３−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオールの合成。

−７８℃のＣＨ_２Ｃｌ_２（１２００ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（４−アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−４−（２，４−ジクロロベンジルオキシ）−５−（（２，４−ジクロロベンジルオキシ）メチル）−３−（プロパ−１−イニル）テトラヒドロフラン−３−オール（１２．０ｇ、１９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＣＨ_２Ｃｌ_２中１．０ＭＢＣｌ_３溶液（１９３ｍＬ、１９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、−７８℃で２時間、続いて、−２０℃で６時間撹拌した。反応の完了後、反応物をＣＨ_２Ｃｌ_２（３００ｍＬ）中のＭｅＯＨ（２００ｍＬ）により−３０℃でクエンチし、混合物を３０分間撹拌した。反応混合物をメタノール性ＮＨ_３により−２０℃で中和し、得られた沈殿物を濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（４−アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−５−（ヒドロキシメチル）−３−（プロパ−１−イニル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオール（４．０ｇ、１３．１ｍｍｏｌ、収率６０％）を得た。¹H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 1.40 (s, 3H), 3.60-3.62 (m, 1H), 3.75-3.82 (m, 2H), 4.23 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.07 (br, 1H), 5.44 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.90 (s, 1H), 6.19 (s, 1H), 6.55 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.95 (s, 2H), 7.39 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H);ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ３０５．２８（Ｍ＋Ｈ）^＋。

（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（４−アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２，２−ジメチル−６ａ−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノールの合成

アセトン中の（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（４−アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−５−（ヒドロキシメチル）−３−（プロパ−１−イニル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオール（０．９５ｇ、３．１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ｐ−ＴｓＯＨ．Ｈ_２Ｏ（０．７１ｇ、３．７ｍｍｏｌ）、続いて、２，２−ジメトキシプロパン（７．６ｍＬ、６２．５ｍｍｏｌ）を室温で添加した。得られた混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、有機層を、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液、水およびブラインで洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）−６−（４−アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２，２−ジメチル−６ａ−（プロパ−１−イニル）テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール（０．７９ｇ、３．０ｍｍｏｌ、収率７３％）を得た。¹H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 1.45 (s, 3H), 1.56 (s, 3H), 1.58 (s, 3H), 3.64-3.69 (m, 2H), 4.05 (dd, J = 8.8, 4.4 Hz, 1H), 4.84 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.21 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 6.40 (s, 1H), 6.59 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.01 (s, 2H), 7.33 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H);ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ３４５．２９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

Ｎ−（７−（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（ヒドロキシメチル）−２，２−ジメチル−３ａ−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ベンズアミドの合成

ピリジン（２．０ｍＬ）中の（（３ａＲ，４Ｒ，６ａＲ）−６−（４−アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２，２−ジメチル−６ａ−（プロパ−１−イニル）テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール（０．２０ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＴＭＳＣｌ（０．２３ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ）を室温で添加し、混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を１０℃に冷却した後、塩化ベンゾイル（０．０８ｍＬ、０．６９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、有機層を、飽和ＫＨＳＯ_４水溶液、水およびブラインで洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。この粗材料をアンモニア水溶液で処理し、混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、有機層を水およびブラインで洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ−（７−（（３ａＲ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（ヒドロキシメチル）−２，２−ジメチル−３ａ−（プロパ−１−イニル）テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ベンズアミド（０．１１ｇ、０．２５ｍｍｏｌ、収率４２％）を得た。¹H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 1.46 (s, 3H), 1.57 (s, 3H), 1.59 (s, 3H), 3.68-3.73 (m, 2H), 4.13 (dd, J = 9.6, 5.2 Hz, 1H), 4.89 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.21 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 6.59 (s, 1H), 6.70 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.55 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.65 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 8.63 (s, 1H), 11.13 (s, 1H);ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ４４９．５２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

Ｎ−（７−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（（（２−ニトロフェニル）セラニル）メチル）−３−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ベンズアミドの合成

ＴＨＦ（２５ｍＬ）中のＮ−（７−（（３ａＲ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（ヒドロキシメチル）−２，２−ジメチル−３ａ−（プロパ−１−イニル）テトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ベンズアミド（１．６０ｇ、３．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、１−ニトロ−２−セレノシアナトベンゼン（１．６２ｇ、７．１ｍｏｌ）、続いて、ｎ−Ｂｕ_３Ｐ（２．８０ｍＬ、１４ｍｏｌ）を室温で添加し、混合物を室温で６時間撹拌した。反応の完了後、反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、有機層を、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液、水およびブラインで洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。得られた生成物をトリフルオロ酢酸（１８ｍＬ）および水（２ｍＬ）に溶解し、混合物を室温で４時間撹拌した。反応の完了後、溶媒を減圧下で蒸発させ、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ−（７−（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（（２−ニトロフェニルセラニル）メチル）−３−（プロパ−１−イニル）テトラヒドロフラン−２−イル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ベンズアミド（２．０ｇ、３．３８ｍｍｏｌ、収率９５％）を得た。¹H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 1.45 (s, 3H), 3.44-3.55 (m, 2H), 4.13-4.17 (m, 1H), 4.26-4.29 (m, 1H), 5.81 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.10 (s, 1H), 6.37 (s, 1H), 6.70 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.42 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.53-7.59 (m, 2H), 7.60-7.66 (m, 3H), 7.81 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 8.24 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.61 (s, 1H), 11.3 (s, 1H);ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ５９４．４５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

Ｎ−（７−（（３Ｒ，４Ｓ）−３，４−ジヒドロキシ−５−メチレン−３−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ベンズアミドの合成。

ＴＨＦ（１５ｍＬ）中のＮ−（７−（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（（（２−ニトロフェニル）セラニル）メチル）−３−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ベンズアミド（１．３１ｇ、２．２１ｍｍｏｌ）の溶液に、３０％Ｈ_２Ｏ_２水溶液（１．４ｍＬ、１３．９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。反応混合物に、Ｅｔ_３Ｎ（１．９ｍＬ、１３．９ｍｍｏｌ）およびピリジン（５ｍＬ）を添加した。反応混合物を５０℃で３５時間撹拌した。溶媒のバルクを濃縮した後、残留物をＥｔＯＡｃで希釈した。混合物を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ−（７−（（３Ｒ，４Ｓ）−３，４−ジヒドロキシ−５−メチレン−３−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ベンズアミド（３４０ｍｇ、０．８７１ｍｍｏｌ、収率３９％）を得た。¹H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 1.75 (s, 3H), 4.25 (s, 1H), 4.42 (s, 1H), 4.92 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.31 (s, 1H), 6.59 (s, 1H), 6.74 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.54-7.57 (m, 3H), 7.65 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 8.65 (s, 1H), 11.16 (s, 1H);ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ３９１．１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

Ｎ−（７−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヨードメチル）−３−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ベンズアミドの合成。

０℃のＣＨ_３ＣＮ（４ｍＬ）中のＮ−（７−（（３Ｒ，４Ｓ）−３，４−ジヒドロキシ−５−メチレン−３−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ベンズアミド（３５９ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）の懸濁液に、トリエチルアミントリヒドロフルオリド（０．１５ｍＬ、０．９２ｍｍｏｌ）、続いて、ＣＨ_３ＣＮ（４ｍＬ）中のＮ−ヨードスクシンイミド（２５９ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくりと添加した。反応混合物を、０℃で４５分間、および室温で４０分間撹拌した。追加のトリエチルアミントリヒドロフルオリド（０．０５ｍＬ、０．３１ｍｍｏｌ）およびＣＨ_３ＣＮ（１ｍＬ）中のＮ−ヨードスクシンイミド（１００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で添加し、混合物を、０℃で２０分間、および室温で３０分間撹拌した。反応混合物をＮａＨＣＯ_３水溶液およびＮａ_２Ｓ_２Ｏ_３の溶液に注ぎ入れた。得られた沈殿物を濾過によって収集し、ＥｔＯＡｃおよび水で洗浄し、乾燥させて、所望生成物を得た。濾液をＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ−シクロヘキサンで粉砕し、固体を濾過によって収集して、追加の生成物を得た。濾液を濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、追加の生成物とした。得られた生成物を合わせて、Ｎ−（７−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヨードメチル）−３−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ベンズアミド（４３４ｍｇ、０．８０９ｍｍｏｌ、収率８８％）を得た。¹H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 1.43 (s, 3H), 3.63 (dd, J = 11.6, 4.0 Hz, 1H), 3.79 (dd, J = 26.8, 11.6 Hz, 1H), 4.72 (dd, J = 18.4, 9.2 Hz, 1H), 6.01 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.25 (s, 1H), 6.61 (s, 1H), 6.73 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.55 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.62-7.67 (m, 2H), 8.07 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 8.65 (s, 1H), 11.16 (s, 1H);ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ５３７．１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−５−（４−（Ｎ−ベンゾイルベンズアミド）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−フルオロ−２−（ヨードメチル）−４−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジイルジベンゾエートの合成。

０℃のピリジン（４ｍＬ）中のＮ−（７−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヨードメチル）−３−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ベンズアミド（４３４ｍｇ、０．８０９ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化ベンゾイル（０．９４ｍＬ、８．０９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、０℃で５分間および室温で１０時間撹拌した。ＥｔＯＡｃで希釈後、混合物を、ＫＨＳＯ_４水溶液（×２）、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（×２）、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−５−（４−（Ｎ−ベンゾイルベンズアミド）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−フルオロ−２−（ヨードメチル）−４−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジイルジベンゾエート（７２５ｍｇ、０．８５４ｍｍｏｌ、収率１００％）を得た。¹H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 1.38 (s, 3H), 3.89-3.94 (m, 2H), 6.62 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.46-7.64 (m, 9H), 7.70-7.75 (m, 2H), 7.82-7.86 (m, 4H), 7.92-7.95 (m, 2H), 8.00-8.04 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 8.69 (s, 1H);ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ８４９．５（Ｍ＋Ｈ）^＋。

（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（４−ベンズアミド−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−（（ベンゾイルオキシ）メチル）−２−フルオロ−４−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジイルジベンゾエートの合成。

ＤＭＳＯ（８ｍＬ）中の（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（４−（Ｎ−ベンゾイルベンズアミド）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−フルオロ−２−（ヨードメチル）−４−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジイルジベンゾエート（７２５ｍｇ、０．８５４ｍｍｏｌ）の溶液に、安息香酸ナトリウム（１．２３ｇ、８．５４ｍｍｏｌ）および１５−クラウン−５（１．７ｍＬ、８．５４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１００℃で２２時間撹拌した。追加の安息香酸ナトリウム（０．６ｇ、４．１６ｍｍｏｌ）および１５−クラウン−５（０．７ｍＬ、３．５３ｍｍｏｌ）を添加した。１００℃で２２時間撹拌した後、追加の安息香酸ナトリウム（０．６ｇ、４．１６ｍｍｏｌ）および１５−クラウン−５（０．７ｍＬ、３．５３ｍｍｏｌ）を添加した。１００℃で７時間撹拌した後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、セライトのパッドに通して濾過した。濾液を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（×２）および水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−５−（４−ベンズアミド−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−（（ベンゾイルオキシ）メチル）−２−フルオロ−４−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジイルジベンゾエート（５４１ｍｇ、０．４９８ｍｍｏｌ、収率５８％）を得た。¹H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 1.46 (s, 3H), 4.90 (t, J = 11.6 Hz, 1H), 5.02 (dd, J = 18.0, 12.0 Hz, 1H), 5.75 (s, 1H), 6.79 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 7.32-7.37 (m, 3H), 7.52-7.78 (m, 10H), 7.89 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 8.00 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.05 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 8.10 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 8.68 (s, 1H), 11.25 (s, 1H);ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ７３９．４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−４−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオール（実施例１）の合成。

（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（４−ベンズアミド−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−（（ベンゾイルオキシ）メチル）−２−フルオロ−４−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジイルジベンゾエート（５４１ｍｇ、０．７３２ｍｍｏｌ）を、エタノール中３３％メチルアミン溶液に溶解した。得られた混合物を室温で１６時間撹拌した後、溶媒のバルクを真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−５−（４−アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−４−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオール（１８３ｍｇ、０．５６８ｍｍｏｌ、収率７８％）を得た。¹H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 1.39 (s, 3H), 3.56-3.62 (m, 2H), 4.51 (dd, J = 19.3, 6.8 Hz, 1H), 5.62 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.10 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.60 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.02 (s, 2H), 7.26 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H); ¹⁹F NMR (DMSO-d₆, 376 MHz) δ-119.96;ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ３２３．３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

[実施例２]
（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−フルオロ−３，４−ジヒドロキシ−４−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−２−イル）メチルビス（（（１−イソプロポキシカルボニル）オキシ）メチル）ホスフェート（実施例２）の合成。

シンチレーションバイアル内、出発ホスホン酸（２００ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ、（（ヒドロキシホスホリル）ビス（オキシ））ビス（メチレン）ジイソプロピルジカーボネート）および実施例１のヌクレオシド（６４ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−４−（プロパ−１−イン−１−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオール）を、ピリジン（２ｍＬ）に懸濁した。１−メチルイミダゾール（２４７ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を３０秒間超音波処理した。次いで、混合物を回転蒸発によって２０分間蒸発させて、残留物とした。次いで、残留物をＣＨ_３ＣＮ（２ｍＬ）に再懸濁し、３０秒間超音波処理した。反応物に撹拌子を装着し、撹拌を開始した。次いで、ＢＯＰ−Ｃｌ（２８０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ、ビス（２−オキソオキサゾリジン−３−イル）ホスフィン酸クロリド）を固体として添加し、反応物を室温で３時間撹拌した。反応をＬＣ／ＭＳによってモニターした。反応が完了したとみなされたら、水（１ｍＬ）を添加して、クエンチした。反応物を１０分間撹拌し、次いで、凍結し、凍結乾燥乾固した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製して、所望生成物（６０ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ、収率３８％）を得た。¹H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 1.28 (d, J = 12 Hz, 12H), 1.47 (s, 3H), 4.34-4.42 (m, 2H), 4.66 (d, J = 16 Hz, 1H), 4.86-4.93 (m, 2H), 5.62-5.69 (m, 4H), 6.63 (s, 1H), 6.95 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 4 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H); ³¹P NMR (CD₃OD, 162 MHz) δ -5.22;ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ６３５．２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

[実施例３]

室温のＰ（＝Ｏ）（ＯＭｅ）_３（０．３ｍＬ）中の実施例１の化合物（９ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）に、ＰＯＣｌ_３（０．０３１ｍＬ、０．３３５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２分間撹拌した。ＰｒｏｔｏｎＳｐｏｎｇｅ^(R)（１，８−ビス（ジメチルアミノ）ナフタレン：２０．９５ｍｇ、０．０９８ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を、室温で３０分間（第１のバッチ）または２時間（第２のバッチ）にわたって撹拌し、次いで、１ｍＬのＤＭＦおよびＢｕ_３Ｎ（０．１０６ｍＬ、０．４４７ｍｍｏｌ）中のピロホスフェート（２５０ｍｇ、０．４５６ｍｍｏｌ）の混合物を添加することによってクエンチした。反応物を１５分間撹拌した。トリホスフェート変換の完了後、粗反応混合物を０．２Ｎ重炭酸トリエチルアンモニウム（ＴＥＡＢ）緩衝液（２０ｍＬ）に添加し、１０分間撹拌し、次いで、凍結乾燥して半固体とし、以下で記述する通りに精製した。反応を同じ規模で繰り返し、精製のために２つのバッチを合わせた。

精製：合わせた粗トリホスフェートを、トリホスフェート精製勾配を使用するＰＲＥＰイオン交換クロマトグラフィーによって精製した（ＰＲＥＰイオン交換クロマトグラフィー、８ｍＬ／分の流量）：１００％水から出発し、３０分で０％〜８０％ＴＥＡ重炭酸塩緩衝液（０．５Ｎ）／水、続いて、５分間８０％ＴＥＡ重炭酸塩緩衝液（０．５Ｎ）／水、次いで５分間１００％水の勾配。所望のトリホスフェートが２７分で広域ピークとして溶離された（３回の注射）。所望生成物画分を凍結乾燥し、次いで、１００％ＴＥＡ重炭酸塩緩衝液（０．２Ｎ）から出発する勾配、続いて、２０分で０％〜３０％までのアセトニトリル／ＴＥＡ重炭酸塩緩衝液（０．２Ｎ）の勾配を使用するＣ１８カラム（ＰＲＥＰＣ１８逆相クロマトグラフィー、２０ｍＬ／分の流量）による第２の精製のために、水に溶解した。所望生成物が１１分前後で溶離した。第２のＣ１８精製により得られた生成物は、ジホスフェートおよび過リン酸化（over-phosphorylated）不純物と思われるものを含有していたため、これを、第３のＰＲＥＰイオン交換クロマトグラフィー、続いて、上記で言及した通りのＣ１８カラムによる第４の精製によって再度精製して、００１（実施例３：８．７ｍｇ、９．８５μｍｏｌ、１５．７９％収率）を得た。
¹H NMR (400 MHz, 重水) ¹H NMR (400 MHz, 重水) δ 8.14 (s, 1H), 7.42 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 6.60 (s, 1H), 4.75 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 4.30 (ddd, J = 11.4, 6.2, 2.7 Hz, 1H), 4.24 - 4.14 (m, 1H), 3.13 (q, J = 7.3 Hz, 18H), 1.29 (s, 3H), 1.21 (t, J = 7.3 Hz,29H). 31P: -9.42,-9.55, -12.07, -12.19, -22.78, -22.90, -23.02
^１ＨＮＭＲに基づき、塩中のヌクレオシドトリホスフェート対Ｅｔ_３Ｎの比は、１／３．０である。式量は、８６５．８０１である。

生物学的アッセイおよびデータ
本発明による化合物の活性は、当該技術分野において公知の方法によって評価することができ、下記の方法を使用して、下記の表中のデータを生成した。

ＨＲＶ細胞変性効果（ＣＰＥ）アッセイ。化合物を、ＤＭＳＯ中、５ｍＭから出発し、半対数ステップで連続希釈した。各希釈物のうち、０．５μＬをアッセイプレートに移した。Ｈ１−ＨｅＬａ細胞を、０．１％ＢＳＡ（Ｇｉｂｃｏ、１５２６０）、１×ペニシリン／ストレプトマイシン溶液（ＣｅｌｌＧｒｏ／Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ；３０−００２−ＣＩ）および１×非必須アミノ酸（ＣｅｌｌＧｒｏ；２５−０２５−ＣＩ）を補充した４５μＬのＤＭＥＭ中、アッセイ準備が整った化合物プレートに５０００細胞／ウェルで三連の３８４ウェルプレートに添加し、３３℃で６時間インキュベートした。対照ウェルは、ＤＭＳＯ単独（１００％阻害）およびＤＭＳＯプラスウイルス（０％阻害）を含んでいた。３３℃で６時間のインキュベーション後、５μＬのヒトライノウイルスストックを、７２時間以内に細胞の９９％を有効に死滅させるＭＯＩで添加した。次いで、プレートを３３℃で７２時間インキュベートした。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ^(R)ルミネッセンス細胞生存アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ７５７３）を製造業者のプロトコールに従って、およびＰＯＬＡＲｓｔａｒオメガルミノメーター（ＢＭＧＬａｂｔｅｃｈ）を使用して、細胞生存を決定した。

ＨＲＶレプリコンアッセイ。このアッセイは、先に記述されたＣ群レプリコン（Mello et al, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 2014）に基づき、Ｐ１領域を、ナノルシフェラーゼをコードするｃＤＮＡ（ＰｒｏｍｅｇａＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍａｄｉｓｏ、ＷＩ）で置きかえるという修正を加えたものであった。化合物を、ＤＭＳＯ中、５ｍＭから出発し、半対数ステップで連続希釈した。各希釈物のうち、０．５μＬをアッセイプレートに移した。Ｈ１−ＨｅＬａ細胞をトリプシン処理し、氷冷ＯｐｔｉＭｅｍ^(R)Ｇｉｂｃｏ、３１９８５）で２回洗浄し、ＯｐｔｉＭｅｍ^(R)に１．５×１０^７細胞／ｍＬで再懸濁し、氷上に保管した。合計６×１０^６細胞を、２５ｎｇのインビトロ転写ＲＮＡで電気穿孔（２７０Ｖ、９５０μＦ、∞抵抗）し、１０分間氷上に静置させた。次いで、電気穿孔した細胞を、０．１％ＢＳＡ（Ｇｉｂｃｏ、１５２６０）、１×ペニシリン／ストレプトマイシン溶液（ＣｅｌｌＧｒｏ／Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ；３０−００２−ＣＩ）を補充したＤＭＥＭで、４×１０^５細胞／ｍＬの最終濃度に希釈した。次いで、５０μＬの細胞を化合物に添加し、次いで、３３℃で７２時間インキュベートした。次いで、４８時間後に、ＮａｎｏＧｌｏ^(R)検出キットアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｎ１１５０）を製造業者のプロトコールに従って、およびＰＯＬＡＲｓｔａｒオメガルミノメーター（ＢＭＧＬａｂｔｅｃｈ）を使用して、ルシフェラーゼシグナルを測定した。

ＭＴ４およびＰＣ３細胞毒性アッセイ。化合物を、ＤＭＳＯ中、１０ｍＭから出発して、半対数ステップで連続希釈した。０．５μＬの連続希釈した化合物を、アッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒカタログ番号７８１０８０）に移した。細胞を、１０％ＦＢＳ（ＮＣＳＬｏｔＯＳ−１６１０７１）、１×ペニシリン／ストレプトマイシン溶液（ＣｅｌｌＧｒｏ／Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ；３０−００２−ＣＩ）を補充した５０μＬのＲＰＭＩ１６４０培地中、アッセイ準備が整った化合物プレートに添加し、３７℃で３または５日間インキュベートした。対照ウェルは、ＤＭＳＯ単独（１００％阻害）を含んでいた。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ^(R)ルミネッセンス細胞生存アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ７５７３）を製造業者のプロトコールに従って、およびＰＯＬＡＲｓｔａｒオメガルミノメーター（ＢＭＧＬａｂｔｅｃｈ）を使用して、細胞生存を決定した。

ヒトＤＮＡポリメラーゼガンマアッセイ。
ヒトＤＮＡポリメラーゼガンマ単一ヌクレオチド組み込みアッセイは、Clark et al. (Discovery of beta-D-20-deoxy-20-a-fluoro-40-a-cyano-5-aza-7,9-dideaza adenosine as a potent nucleoside inhibitor of respiratory syncytial virus with excellent selectivity over mitochondrial RNA and DNA polymerases. BMCL, 25: 2484-2487.)から適応させた。簡潔に述べると、２００ｎＭの組換えヒトＤＮＡポリメラーゼガンマ（大サブユニット；ＰＯＬＧ）および４００ｎＭの組換えヒトＤＮＡポリメラーゼアクセサリーサブユニット（ＰＯＬＧ２）を、氷上で２分間プレインキュベートした。ＲＮＡとの伸長複合体は、アッセイ緩衝液（５０ｍＭのトリス／ＨＣｌ、ｐＨ８、１０ｍＭのＭｇＣｌ_２、５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＤＴＴ）中、室温（ＲＴ）で１．５分間、１５０ｎＭのアニールしたＤＮＡプライマー／鋳型二本鎖ＤＮＡの添加、続いて、１００μＭのヌクレオシドトリホスフェート基質または阻害剤との急速混合によって形成した。組換えＰＯＬＧ（ａａ３０−１２３９）およびＰＯＬＧ２（ａａ２６−４８５）タンパク質を大腸菌（E. coli）から精製し、５ｍＭのトリスｐＨ７．５、２５０ｍＭのＮａＣｌ、１０％グリセロール、０．００５％ＮＰ４０およびＰＯＬＧ２（ａａ２６−４８５）、ならびに５０ｍＭのトリスｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＴＣＥＰ、０．００５％ＮＰ４０、１０％グリセロール中にそれぞれ保管した。任意の反応物に添加されるＰＯＬＲＭＴの体積は、常に全体積の１０分の１以下であった。プライマー鋳型は、適切な３４−ｍｅｒＤＮＡ鋳型にアニールされて、Ａ、Ｃ、ＧまたはＵデオキシ−またはリボヌクレオチドの単一添加を可能にする、５’−ＦＡＭ標識１８−ｍｅｒＤＮＡオリゴヌクレオチドプライマー（５’−ＴＴＴＴＧＴＣＴＴＴＧＴＡＣＴＡＧＧＡＧＧＣ−３’）からなった（Clark et al. 2012）。反応を室温で１分間続行させ、ＥＤＴＡ（５０ｍＭ）の添加によってクエンチした。変性ＰＡＧＥによって、生成物を基質から分割した。等体積のローディング緩衝液（９５％ホルムアミド、１８ｍＭのＥＤＴＡおよび０．０２５％ＳＤＳ、キシレンシアノール、ならびにブロモフェノールブルー；Ａｍｂｉｏｎ、ＵＳＡ）を、クエンチした反応混合物に添加し、６５℃に５分間加熱した後、１×ＴＢＥ（８９ｍＭのトリス塩基、８９ｍＭのホウ酸、２ｍＭのＥＤＴＡ）および７Ｍの尿素を含有する２０％変性ポリアクリルアミドゲルにロードした。電気泳動を、１×ＴＢＥ緩衝液中、６００Ｖで実施した。ゲルを、蛍光検出モード下、タイフーンイメージャーで可視化し、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔ（商標）ＴＬソフトウェア（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）で定量化した。ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ、ＵＳＡから取り寄せた。

ヒトミトコンドリアＲＮＡポリメラーゼアッセイ。ヒトミトコンドリアＲＮＡポリメラーゼ（ＰＯＬＲＭＴ）単一ヌクレオチド組み込みアッセイは、Arnold et al. (Sensitivity of mitochondrial transcription and resistance of RNA polymerase II dependent nuclear transcription to antiviral ribonucleosides. PloS Pathogen 8(11):e1003030.)から適応させた。簡潔に述べると、伸長複合体は、５００ｎＭのＰＯＬＲＭＴを、２５０ｎＭのアニールしたＤＮＡ鋳型／ＲＮＡ二本鎖プライマーとともに、アッセイ緩衝液（２５ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８、５０ｍＭのＫＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ_２、１ｍＭのジチオトレイトール、０．２Ｕ／μＬのＲＮａｓｉｎ）中、室温（ＲＴ）で１．５分間インキュベートすること、続いて、５００μＭのヌクレオシドトリホスフェート基質または阻害剤との急速混合によって形成した。精製完全長ＰＯＬＲＭＴ（Ｅｎｚｙｍａｘ、ＵＳＡ）を、１０ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１ｍＭのＤＴＴ、１００ｍＭのＮａＣｌおよび２０％グリセロール中で保管した。任意の反応物に添加されるＰＯＬＲＭＴの体積は、常に全体積の１０分の１以下であった。プライマー鋳型は、適切な１８−ｍｅｒＤＮＡ鋳型にアニールされて、Ａ、Ｃ、ＧまたはＵリボヌクレオチドの単一添加を可能にする、５’−ＦＡＭ標識８−ｍｅｒＲＮＡオリゴヌクレオチドプライマー（５’−ＵＵＵＵＧＣＣＧＣＧＣＣ−３’）からなった（Arnold et al. 2012）。反応を室温で５分間続行させ、ＥＤＴＡ（５０ｍＭ）の添加によってクエンチした。変性ＰＡＧＥによって、生成物を基質から分割した。等体積のローディング緩衝液（９５％ホルムアミド、１８ｍＭのＥＤＴＡおよび０．０２５％ＳＤＳ、キシレンシアノール、ならびにブロモフェノールブルー；Ａｍｂｉｏｎ、ＵＳＡ）を、クエンチした反応混合物に添加し、６５℃に５分間加熱した後、１×ＴＢＥ（８９ｍＭのトリス塩基、８９ｍＭのホウ酸、２ｍＭのＥＤＴＡ）および７Ｍの尿素を含有する２３％変性ポリアクリルアミドゲルにロードした。電気泳動を、１×ＴＢＥ緩衝液中、６００Ｖで実施した。ゲルを、蛍光検出モード下、タイフーンイメージャーで可視化し、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔＴＬソフトウェア（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）で定量化した。ＤＮＡおよびＲＮＡオリゴヌクレオチドは、ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ、ＵＳＡから取り寄せた。

ＨＴＳについてのＤＥＮＶポリメラーゼデノボ開始および伸長アッセイ：
１）デノボ蛍光ベースのアルカリホスファターゼ結合ポリメラーゼアッセイ（デノボＦＡＰＡ）：簡潔に述べると、アッセイは、２０μＬの最終体積で、次の通りに順次行った：９０％ＤＭＳＯおよび１０％水に溶解した０．２５ｕＬの化合物を、３８４ウェルハイベース中吸着黒色プレート中に押し付け、対照ウェルにはＤＭＳＯ／水混合物のみを受けさせた。酵素アッセイ緩衝液中の５μＬの２００ｎＭＤＥＮＶ４ＲｄＲｐタンパク質ストック溶液を、アッセイプレートに分注し、湿度制御インキュベーター内、２５℃で１５分間プレインキュベートした。酵素反応を開始するために、５μＬの２００ｎＭＤＥＮＶ４ＩＶＴＲＮＡ基質ならびに４０μＭのＧＴＰ、ＡＴＰ、ＵＴＰおよび１０μＭのＡｔｔｏ−ＣＴＰ基質をすべてのウェルに添加し、この時点で、プレートを、湿度制御インキュベーター内、２５℃で２時間インキュベートした。ＲＮＡおよびＮＴＰ基質混合物を、酵素アッセイ緩衝液中で同様に調製した。最終的な反応条件は、１００ｎＭの酵素、１００ｎＭのＲＮＡ、２０μＭのＮＴＰおよび５μＭのＡＴＴＯ−ＣＴＰを含有していた。中立対照（高活性対照）は、１００ｎＭの酵素、１００ｎＭのＲＮＡ、２０μＭのＮＴＰおよび５μＭのＡＴＴＯ−ＣＴＰからなった。活性対照（低活性ベースライン対照）は、１×アッセイ緩衝液、１００ｎＭのＲＮＡ、２０μＭのＮＴＰおよび５μＭのＡＴＴＯ−ＣＴＰからなった。反応を終了させるために、２０ｎＭのＣＩＰ（仔牛小腸ホスファターゼ）を含有する１０μＬの停止溶液をすべてのウェルに分注し、プレートを２５℃で１時間インキュベートした。ＣＩＰを希釈するための停止溶液を、ＡｔｔｏＰｈｏｓ^(R)緩衝液（２．４ＭのＤＥＡｐＨ１０、０．０５７ｍＭのＭｇＣｌ_２および０．８５ｍＭのＮａＮ_３）中、追加の２０ｍＭのＭｇＣｌ_２および１６０ｍＭのＮａＣｌとともに調製し、４℃で保管した。ＴｅｃａｎＩｎｆｉｎｉｔｅ^(R)Ｍ６リーダーを、４２０ｎｍの励起波長および５６０ｎｍの発光波長、ならびに２５５フラッシュのゲイン：５０を使用する、蛍光シグナル読み出しに使用した。

ＨｅｐＧ２およびＫ５６２における細胞毒性（ＣＣ５０アッセイ）
白色ＴＣグレードグライナー３８４ウェルアッセイプレートに、９０％ＤＭＳＯ／１０％水中の０．５μＬの化合物を押し付けた。ＨｅｐＧ２細胞をトリプシン処理し、５０ｍＬのファルコンチューブ中に収集した。Ｋ５６２懸濁細胞を５０ｍＬのファルコンチューブ中に収集した。細胞を含有する両方のチューブを、卓上型遠心分離機内、１２００ｒｐｍで５分間スピンさせた。上清を廃棄し、細胞ペレットを新鮮な培養培地（ＨｅｐＧ２：ＤＭＥＭ：Ｆ１２混合＋１０％ＦＢＳ＋１％ペニシリン／ストレプトマイシンおよびＫ５６２：ＩＭＤＭ＋１０％ＦＢＳ＋１％ペニシリン−ストレプトマイシン）に再懸濁した。血球計算盤を使用して細胞をカウントし、細胞を希釈して、ＨｅｐＧ２については５０，０００細胞／ｍＬ、Ｋ５６２については２０，０００細胞／ｍＬの作業懸濁液とした。５０μＬの細胞懸濁液を、３８４アッセイプレートの各ウェルに添加した。アッセイプレートを、３７℃、５％ＣＯ_２、９０％湿度インキュベーターで７２時間インキュベートした。次いで、アッセイプレートを２５μＬのＰｒｏｍｅｇａのＣｅｌｌ−ＴｉｔｅｒＧｌｏ^(R)試薬で処理し、室温で１０分間インキュベートした。プレートを、ＰｏｌａｒＳｔａｒ−Ｏｍｅｇａで、ルミネッセンス設定および３３００のゲインを使用して読み出した。

上述したアッセイを使用して、本発明の化合物は、下記の表中にまとめられている通りの抗ウイルス効能を呈する。この４’−アジド−シチジンを対照として使用した：

前述のデータは、式（Ｉ）のヌクレオシドが、多様なＨＲＶ血清型および他のウイルスに対する強力な活性を提供し、一方で、一般に使用される細胞毒性モデル（ＭＴ４、ＰＣ−３等）によって測定される通り、哺乳動物細胞に対する毒性について低い可能性、ヒトミトコンドリアポリメラーゼ組み込みアッセイ（ＤＮＡポリメラーゼγおよびＲＮＡポリメラーゼ）によって測定される通り、ミトコンドリア毒性について低い可能性、およびＣｏｘ／ＳＤＨ比アッセイに基づき、低い細胞培養ミトコンドリア毒性を呈することを実証する。

Claims

式（Ｉ）：

［式中、
Ｒ^１は、Ｈ、Ｍｅ、Ｅｔ、ｉＰｒまたはシクロプロピルであり、
Ｒ^２は、Ｈ、ホスフェート、ジホスフェート、トリホスフェート、−Ｐ（＝Ｘ）（ＯＲ^４）_２、−Ｐ（＝Ｘ）（ＯＲ^４）（ＮＲ^５Ｒ^６）または−Ｐ（＝Ｘ）（ＮＲ^５Ｒ^６）_２であり、Ｒ^３は、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）Ｒであるか、
または、Ｒ^３およびＲ^２は、一緒になって、−Ｐ（＝Ｘ）（ＯＲ^４）−もしくは−Ｐ（＝Ｘ）（ＮＲ^５Ｒ^６）−を形成し、
Ｘは、それぞれの出現において、独立して、ＯまたはＳであり、
Ｒ^４は、Ｈ、リストＡから選択される１または２個の基で場合により置換されているフェニル、ならびに、ハロ、−ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）−ＯＲ、−ＮＲ_２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、ＣＯＯＲおよび−Ｃ（Ｏ）ＮＲ_２から選択される１または２個の基で場合により置換されているＣ_１〜Ｃ_４アルキルから選択され、
各Ｒ^５は、独立して、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、ＣＯＯＲ、または、ＯＨ、アミノもしくはＣＯＯＲで場合により置換されているＣ_１〜Ｃ_４アルキルであり、
各Ｒ^６は、Ｈ、リストＡから選択される１または２個の基で場合により置換されているフェニル、およびリストＢから選択される１または２個の基で場合により置換されているＣ_１〜Ｃ_４アルキルから独立して選択され、
各Ｒは、独立して、Ｈ、または、ハロ、ヒドロキシ、ＣＮ、アミノ、Ｃ_１〜Ｃ_３アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ^７、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ^７、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ^７もしくは−ＯＣ（Ｏ）−ＯＲ^７から選択される１〜３個の基で場合により置換されているＣ_１〜Ｃ_４アルキル基であり、
Ｒ^７は、Ｈ、またはハロ、ヒドロキシ、ＣＮ、アミノおよびＣ_１〜Ｃ_３アルコキシから選択される１〜３個の基で場合により置換されているＣ_１〜Ｃ_４アルキル、またはリストＡから選択される１もしくは２個の基で場合により置換されているフェニルから選択され、
リストＡは、ハロ、ヒドロキシ、−ＮＯ_２、ＣＮ、−ＯＲ^８、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ^８、−ＯＣ（Ｏ）−ＯＲ^８、−Ｎ（Ｒ^８）_２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ^８、ＣＯＯＲ^８、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^８）_２、ならびに、ハロ、ヒドロキシ、ＣＮ、アミノおよびＣ_１〜Ｃ_３アルコキシから選択される１〜３個の基で場合により置換されているＣ_１〜Ｃ_３アルキルであり、
リストＢは、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、ＣＮ、−ＯＲ^８、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ^８、−ＯＣ（Ｏ）−ＯＲ^８、−Ｎ（Ｒ^８）_２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ^８、ＣＯＯＲ^８および−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^８）_２であり、
Ｒ^８は、それぞれの出現において、Ｈ、ならびに、ハロ、ヒドロキシ、ＣＮ、アミノおよびＣ_１〜Ｃ_３アルコキシから選択される１〜３個の基で場合により置換されているＣ_１〜Ｃ_４アルキルから独立して選択され、
同じ窒素原子に結合した２個のＲ^８は、場合により環化して、３〜７員ヘテロ環を形成することができ、これは、環員として追加のＮ、ＯまたはＳを場合により含有し、オキソ、ハロ、−ＯＨ、アミノ、Ｃ_１〜Ｃ_３アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_３アルコキシおよびＣ_１〜Ｃ_３ハロアルキルから選択される１または２個の基によって置換され得る］
の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
Ｒ^１が、メチルである、請求項１に記載の化合物。
Ｒ^２が、Ｈである、請求項１または請求項２に記載の化合物。
Ｒ^２が、ホスフェート、ジホスフェートもしくはトリホスフェートである、請求項１もしくは２に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
Ｒ^２が、−Ｐ（＝Ｘ）（ＯＲ^４）_２である、請求項１もしくは請求項２に記載の化合物、
または薬学的に許容されるその塩。
各Ｒ^４が、−ＣＨ_２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒおよび−ＣＨ_２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＯＲから選択され、各Ｒが、独立して、Ｃ_１〜Ｃ_４アルキルである、請求項５に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
Ｒ^３およびＲ^２が、一緒になって、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ^４）−または−Ｐ（＝Ｏ）−（ＮＲ^５Ｒ^６）−を形成する、請求項１もしくは２に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
Ｒ^３が、Ｈである、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物。
［式中、Ｒ^２は、Ｈ、ホスフェート、ジホスフェートまたはトリホスフェートである］
である、請求項１に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
式：

のものである、請求項１もしくは２に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
式：

のものである、請求項１に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
から選択される、請求項１に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩。
請求項１〜１２のいずれかに記載の化合物または薬学的に許容されるその塩と、１つまたは複数の薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
治療有効量の請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩と、１つまたは複数の治療的に活性な共薬剤とを含む、組合せ物。
ＨＲＶ感染症またはチクングニア感染症を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の請求項１〜１２のいずれかに記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、方法。
医薬として使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
ヒトライノウイルス感染症の処置に使用するための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
ヒトライノウイルス感染症の処置のための医薬の製造における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用。