JP2019508037A5 - - Google Patents

Description

一部の実施形態では、シトシンのうちの１つまたは複数はクランプ−Ｇ（９−（２−グアニジノエトキシ）フェノキサジン）で置き換えられている。好ましい実施形態では、フーグスティーン結合セグメントは、シュードシトシン、シュードイソシトシン、および５−メチルシトシンからなる群から選択される１つまたは複数の化学修飾されたシトシンを含む。ワトソンクリック結合セグメントは、好ましくは、三重鎖の外側でワトソンクリック結合により標的二重鎖に結合する最長１５個の核酸塩基のテール配列を含む。好ましい実施形態では、２つのセグメントは、例えば、１から１０ユニットの間の８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸のリンカーにより連結されている。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
フーグスティーン結合ペプチド核酸（ＰＮＡ）セグメントおよびワトソンクリック結合ＰＮＡセグメントを合わせて合計５０核酸塩基以下の長さで含む三重鎖形成組成物であって、該２つのセグメントは、細胞のゲノム中のポリプリンストレッチを含む標的領域に結合またはハイブリダイズして、鎖侵入、置換、および該２つのＰＮＡセグメントと該細胞のゲノムの該ポリプリンストレッチの間での三本鎖分子の形成を誘導することが可能であり、
該フーグスティーン結合セグメントが、最小の５核酸塩基の長さのフーグスティーン結合により標的二重鎖に結合し、
該ワトソンクリック結合セグメントが、最小の５核酸塩基の長さのワトソンクリック結合により標的二重鎖に結合し、
ＰＮＡモノマーのうちの１つまたは複数がγＰＮＡモノマーである、
三重鎖形成組成物。
（項目２）
前記フーグスティーン結合セグメントが、シュードシトシン、シュードイソシトシン、および５−メチルシトシンからなる群から選択される１つまたは複数の化学修飾されたシトシンを含む、項目１に記載の三重鎖形成組成物。
（項目３）
前記ワトソンクリック結合セグメントが、前記三重鎖の外側でワトソンクリック結合により前記標的二重鎖に結合する最長１５核酸塩基のテール配列を含む、項目１または２に記載の三重鎖形成組成物。
（項目４）
前記２つのセグメントがリンカーにより連結されている、項目１から３のうちのいずれか一項に記載の三重鎖形成組成物。
（項目５）
前記リンカーが、１から１０ユニットの間の８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸である、項目４に記載の三重鎖形成組成物。
（項目６）
前記セグメントが、配列ＧＡＡＡＧＡＡＡＧＡＧＡ（配列番号１５）またはＴＧＣＣＣＴＧＡＡＡＧＡＡＡＧＡＧＡ（配列番号１６）またはＧＧＡＧＡＡＡ（配列番号１７）またはＡＧＡＡＴＧＧＴＧＣＡＡＡＧＡＧＧ（配列番号１８）またはＡＡＡＡＧＧＧ（配列番号１９）またはＡＣＡＴＧＡＴＴＡＧＣＡＡＡＡＧＧＧ（配列番号２０）を含むベータグロビン遺伝子の領域と三本鎖分子を形成することが可能である、項目１から５のうちのいずれか一項に記載の三重鎖形成組成物。
（項目７）
（ｉ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＪＴＴＴＪＴＴＴＪＴＪＴ（配列番号３０）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＴＣＴＣＴＴＴＣＴＴＴＣ（配列番号２２）またはＴＣＴＣＴＴＴＣＴＴＴＣＡＧＧＧＣＡ（配列番号２３）を含み、
（ｉｉ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＴＴＴＴＪＪＪ（配列番号３１）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＣＣＣＴＴＴＴ（配列番号２５）またはＣＣＣＴＴＴＴＧＣＴＡＡＴＣＡＴＧＴ（配列番号２６）を含み、
（ｉｉｉ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＴＴＴＪＴＪＪ（配列番号３２）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＣＣＴＣＴＴＴ（配列番号２８）またはＣＣＴＣＴＴＴＧＣＡＣＣＡＴＴＣＴ（配列番号２９）を含み、
（ｉｖ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＴＪＴＴＴＴＪＴＴＪ（配列番号３６）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＣＴＴＣＴＴＴＴＣＴ（配列番号３７）を含み、
（ｖ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＴＴＪＴＴＪＴＴＴＪ（配列番号３
８）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＣＴＴＴＣＴＴＣＴＴ（配列番号３９）を含み、
（ｖｉ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＪＪＪＴＪＪＴＴＪＴ（配列番号４０）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＴＣＴＴＣＣＴＣＣＣ（配列番号４１）を含み、
（ｖｉｉ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＪＪＴＪＴＴＪ（配列番号５６）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＣＴＴＣＴＣＣ（配列番号４６）またはＣＴＴＣＴＣＣＡＡＡＧＧＡＧＴ（配列番号４７）またはＣＴＴＣＴＣＣＡＣＡＧＧＡＧＴＣＡＧ（配列番号４８）またはＣＴＴＣＴＣＣＡＣＡＧＧＡＧＴＣＡＧＧＴＧＣ（配列番号２０５）を含み、
（ｖｉｉｉ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＴＴＪＪＴＪＴ（配列番号４９）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＴＣＴＣＣＴＴ（配列番号５０）またはＴＣＴＣＣＴＴＡＡＡＣＣＴＧＴ（配列番号５１）またはＴＣＴＣＣＴＴＡＡＡＣＣＴＧＴＣＴＴ（配列番号２１２）を含み、または
（ｉｘ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＴＪＴＪＴＴＪＴ（配列番号５２）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＴＣＴＴＣＴＣＴ（配列番号５３）またはＴＣＴＴＣＴＣＴＧＴＣＴＣＣＡＣ（配列番号５４）またはＴＣＴＴＣＴＣＴＧＴＣＴＣＣＡＣＡＴ（配列番号５５）を含み、
「Ｊ」がシュードイソシトシンである、
項目１から５のうちのいずれか一項に記載の三重鎖形成組成物。
（項目８）
前記セグメントが連結されて配列：

を有する分子を形成し、
「Ｊ」がシュードイソシトシンであり、Ｏ＝柔軟な８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸、６−アミノヘキサン酸モノマーである、
項目７に記載の三重鎖形成組成物。
（項目９）
（ｉ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＴＪＴＪＪＴＴＴ（配列番号９１）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＴＴＴＣＣＴＣＴ（配列番号８３）またはＴＴＴＣＣＴＣＴＡＴＧＧＧＴＡＡＧ（配列番号８４）を含み、
（ｉｉ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＴＪＴＴＪＴＪＪ（配列番号９１）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＣＣＴＣＴＴＣＴ（配列番号８６）、またはＣＣＴＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＧＣＡＴ（配列番号８７）を含み、
（ｉｉｉ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＴＴＪＪＪＴＴＴＪ（配列番号９２）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＣＴＴＴＣＣＣＴＴ（配列番号８９）、またはＣＴＴＴＣＣＣＴＴＧＴＡＴＣＴＴＴＴ（配列番号９０）を含み、
（ｉｖ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＪＴＴＪＪＴＪＴＴＴ（配列番号１０６）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＴＴＴＣＴＣＣＴＴＣ（配列番号９８）またはＴＴＴＣＴＣＣＴＴＣＡＧＴＧＴＴＣＡ（配列番号９９）を含み、
（ｖ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＴＴＴＴＪＪＴ（配列番号１０７）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＴＣＣＴＴＴＴ（配列番号１０１）またはＴＣＣＴＴＴＴＧＣＴＣＡＣＣＴＧＴＧＧＴ（配列番号１０２）を含み、
（ｖｉ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＴＪＴＴＴＴＴＴＪＪ（配列番号１０８）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＣＣＴＴＴＴＴＴＣＴ（配列番号１０４）またはＣＣＴＴＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＡＡＧＴ（配列番号１０５）を含み、
（ｖｉｉ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＴＪＴＴＴＴＴ（配列番号１１８）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＴＴＴＴＴＣＴ（配列番号１１１）またはＴＴＴＴＴＣＴＧＴＡＡＴＴＴＴＴＡＡ（配列番号１１２）を含み、
（ｖｉｉｉ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＴＪＴＪＴＴＴＪＴ（配列番号１１９）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＴＣＴＴＴＣＴＣＴ（配列番号１１４）またはＴＣＴＴＴＣＴＣＴＧＣＡＡＡＣＴＴ（配列番号１１５）を含み、または
（ｉｘ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＴＴＴＪＴＴＴ（配列番号１２０
）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＴＴＴＣＴＴＴ（配列番号１１６）またはＴＴＴＣＴＴＴＡＡＧＡＡＣＧＡＧＣＡ（配列番号１１７）を含み、
「Ｊ」がシュードイソシトシンである、
項目１から５のうちのいずれか一項に記載の三重鎖形成組成物。
（項目１０）
前記セグメントが連結されて配列：

を有する分子を形成し、
「Ｊ」がシュードイソシトシンであり、Ｏ＝柔軟な８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸、６−アミノヘキサン酸モノマーである、
項目９に記載の三重鎖形成組成物。
（項目１１）
（ｉ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＪＴＪＴＴＪＴＴＪＴ（配列番号１３２）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＴＣＴＴＣＴＴＣＴＣ（配列番号１２６）またはＴＣＴＴＣＴＴＣＴＣＡＴＴＴＣ（配列番号１２７）を含み、
（ｉｉ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＪＴＴＪＴ（配列番号１３３）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＴＣＴＴＣ（配列番号１２９）、ＴＣＴＴＣＴＴＣＴＣ（配列番号１３０）、またはＴＣＴＴＣＴＴＣＴＣＡＴＴＴＣ（配列番号１３１）を含み、
「Ｊ」がシュードイソシトシンである、
項目１から５のうちのいずれか一項に記載の三重鎖形成組成物。
（項目１２）
前記セグメントが連結されて配列：

を有する分子を形成し、
「Ｊ」がシュードイソシトシンであり、Ｏ＝柔軟な８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸、６−アミノヘキサン酸モノマーである、
項目５に記載の三重鎖形成組成物。
（項目１３）
（ｉ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＴＴＪＪＪＪＴ（配列番号１４８）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＴＣＣＣＣＴＴ（配列番号１４６）またはＴＣＣＣＣＴＴＧＧＴＧＡＡＧＧ（配列番号１４７）を含み、
（ｉｉ）前記フーグスティーン結合セグメントが配列ＪＪＴＴＪＴ（配列番号１５３）を含み、前記ワトソンクリック結合セグメントが配列ＴＣＴＴＣＣ（配列番号１５１）またはＴＣＴＴＣＣＧＡＧＣＡＧ（配列番号１５２）を含み、
「Ｊ」がシュードイソシトシンである、
項目１から５のうちのいずれか一項に記載の三重鎖形成組成物。
（項目１４）
前記セグメントが連結されて配列：

を有する分子を形成し、
「Ｊ」がシュードイソシトシンであり、Ｏ＝柔軟な８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸、６−アミノヘキサン酸モノマーである、
項目５に記載の三重鎖形成組成物。
（項目１５）
前記フーグスティーン結合セグメントのみの、前記ワトソンクリック結合セグメントのみの、またはＰＮＡオリゴマー全体にわたる前記ペプチド核酸モノマーのすべてがγＰＮＡモノマーである、項目１から１４のうちのいずれか一項に記載の三重鎖形成組成物。
（項目１６）
前記ＰＮＡオリゴマーのうちの前記フーグスティーン結合セグメントのみの、または前記ワトソンクリック結合セグメントのみの、前記ペプチド核酸モノマーのうちの１つまたは複数がＰＮＡおよびγＰＮＡである、項目１５に記載の三重鎖形成組成物。
（項目１７）
前記フーグスティーン結合部分のみの、前記ワトソンクリック結合部分のみの、または前記ＰＮＡオリゴマー全体にわたる交互残基がＰＮＡおよびγＰＮＡである、項目１か
ら１４のうちのいずれか一項に記載の三重鎖形成組成物。
（項目１８）
太字で下線を付した残基がγＰＮＡモノマーである、項目８、１０、１２、または１４のうちのいずれか一項に記載の三重鎖形成組成物。
（項目１９）
前記γＰＮＡモノマー（複数可）のγの側鎖が、アラニン、セリン、スレオニン、システイン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、およびその誘導体からなる群から選択されるアミノ酸の側鎖を含む、項目１から１８のうちのいずれか一項に記載の三重鎖形成組成物。
（項目２０）
前記γＰＮＡモノマー（複数可）のγの側鎖が、ジエチレングリコール（「ミニＰＥＧ」）である、項目１から１８のうちのいずれか一項に記載の三重鎖形成組成物。
（項目２１）
前記シトシンのうちの１つまたは複数が、クランプ−Ｇ（９−（２−グアニジノエトキシ）フェノキサジン）で置き換えられている、項目１から１９のうちのいずれか一項に記載の三重鎖形成組成物。
（項目２２）
三重鎖形成分子によって誘導または増強される組換えにより前記細胞のゲノムにおいて変異（複数可）を修正することが可能な配列を含むドナーオリゴヌクレオチドをさらに含む、項目１から２１のうちのいずれか一項に記載の三重鎖形成組成物。
（項目２３）
ナノ粒子をさらに含み、前記ＰＮＡセグメント、ドナーオリゴヌクレオチド、またはその組合せが同じまたは別々のナノ粒子にパッケージされている、項目１から２２のうちのいずれか一項に記載の三重鎖形成組成物。
（項目２４）
前記ナノ粒子がポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）を含む、項目２３に記載の三重鎖形成組成物。
（項目２５）
前記ナノ粒子がポリ（ベータアミノ）エステル（ＰＢＡＥ）を含む、項目２４に記載の三重鎖形成組成物。
（項目２６）
前記ナノ粒子が、約５から約２５パーセントの間のＰＢＡＥ（ｗｔ％）を含む、ＰＬＧＡとＰＢＡＥのブレンドを含む、項目２５に記載の三重鎖形成組成物。
（項目２７）
前記ナノ粒子が二重エマルジョンまたはナノ沈殿により調製される、項目２３から２６のうちのいずれか一項に記載の三重鎖形成組成物。
（項目２８）
前記ＰＮＡセグメントまたは前記ナノ粒子に直接的または間接的に会合する、連結する、コンジュゲートする、またはその他の方法で結合する、標的化部分、細胞浸透性ペプチド、またはその組合せをさらに含む、項目１から２７のうちのいずれか一項に記載の三重鎖形成組成物。
（項目２９）
前記細胞浸透性ペプチドが、配列ＧＡＬＦＬＧＦＬＧＡＡＧＳＴＭＧＡＷＳ ＱＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号１２）（ＭＰＧ（合成キメラ：ＳＶ４０ＬｇＴ．Ａｎｔ．＋ＨＩＶ ｇｂ４１コート）を含む、項目２８に記載の三重鎖形成組成物。
（項目３０）
受容体チロシンキナーゼＣ−ｋｉｔリガンド、ＡＴＲ−Ｃｈｋ１細胞周期チェックポイント経路阻害剤、ＤＮＡポリメラーゼアルファ阻害剤、および熱ショックタンパク質９０阻害剤（ＨＳＰ９０ｉ）からなる群から選択される遺伝子編集増強剤をさらに含む、請求
項１から２９のうちのいずれか一項に記載の三重鎖形成組成物。
（項目３１）
前記Ｃ−ｋｉｔリガンドが、Ｃ−ｋｉｔの二量体化を引き起こしそのチロシンキナーゼ活性を活性化するのに十分な幹細胞因子タンパク質（stem factor protein）またはそ
の断片である、項目３０に記載の三重鎖形成組成物。
（項目３２）
前記Ｃ−ｋｉｔリガンドが、Ｃ−ｋｉｔの二量体化を引き起こしそのチロシンキナーゼ活性を活性化するのに十分な幹細胞因子タンパク質またはその断片をコードする核酸である、項目３１に記載の三重鎖形成組成物。
（項目３３）
前記核酸がｍＲＮＡまたは発現ベクターである、項目３２に記載の三重鎖形成組成物。
（項目３４）
前記ＡＴＲ−Ｃｈｋ１細胞周期チェックポイント経路阻害剤が、ＡＺＤ７７６２、ＳＣＨ９００７７６／ＭＫ−８７７６、ＩＣ８３／ＬＹ２６０３６１８、ＬＹ２６０６３６８、ＧＤＣ−０４２５、ＰＦ−００４７７７３６、ＸＬ８４４、ＣＥＰ−３８９１、ＳＡＲ−０２０１０６、ＣＣＴ−２４４７４７、Ａｒｒｙ−５７５、ＳＢ２１８０７５、シサンドリンＢ、ＮＵ６０２７、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５、ＶＥ−８２１、ＶＥ−８２２（ＶＸ−９７０）、ＡＺ２０、ＡＺＤ６７３８、ＭＩＲＩＮ、ＫＵ５５９３、ＶＥ−８２１、ＮＵ７４４１、ＬＣＡ、およびＬ１８９からなる群から選択される、項目３０に記載の三重鎖形成組成物。
（項目３５）
前記ＤＮＡポリメラーゼアルファ阻害剤がアフィディコリンである、項目３０に記載の三重鎖形成組成物。
（項目３６）
前記熱ショックタンパク質９０阻害剤が、（ＨＳＰ９０ｉ）ＳＴＡ−９０９０（ガネテスピブ）、ゲルダナマイシン（ＧＡ）、１７−ＡＡＧ（１７−アリルアミノ−１７−デメトキシ−ゲルダナマイシン）、１７−ＤＭＡＧ（１７−ジメチルアミノエチルアミノ−１７−デメトキシ−ゲルダナマイシン）、（アルベスピマイシン）ＩＰＩ−５０４（レタスピマイシン）、およびＡＵＹ９２２からなる群から選択される、項目３０に記載の三重鎖形成組成物。
（項目３７）
細胞のゲノムを改変する方法であって、有効量の、
（ｉ）受容体チロシンキナーゼＣ−ｋｉｔリガンド、ＡＴＲ−Ｃｈｋ１細胞周期チェックポイント経路阻害剤、ＤＮＡポリメラーゼアルファ阻害剤、および熱ショックタンパク質９０阻害剤（ＨＳＰ９０ｉ）からなる群から選択される遺伝子編集増強剤、ならびに
（ｉｉ）三重鎖形成分子、偽相補的オリゴヌクレオチド、ＣＲＩＳＰＲ系、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、小断片相同置換、およびイントロンにコードされたメガヌクレアーゼからなる群から選択される該細胞のゲノム改変を誘導することが可能な遺伝子編集技術
に該細胞を接触させることを含み、
ゲノム改変が（ｉ）の非存在下で（ｉｉ）に接触させた同等の集団においてよりも（ｉ）と（ｉｉ）の両方に接触させた細胞の集団においてより高い頻度で起こる方法。
（項目３８）
前記遺伝子編集技術によって誘導または増強される挿入または組換えにより前記細胞のゲノムにおいて変異（複数可）を修正する配列を含むドナーオリゴヌクレオチドに該細胞を接触させることをさらに含む、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記細胞のゲノムが、血友病、グロビン異常症、嚢胞性線維症、色素性乾皮症、およびリソソーム蓄積症からなる群から選択される疾患または障害の根底にある変異を有する、
項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記グロビン異常症が鎌状赤血球貧血またはベータサラセミアである、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記リソソーム蓄積症はゴーシェ病、ファブリー病、ハーラー症候群である、項目３９に記載の方法。
（項目４２）
前記遺伝子編集技術によって誘導または増強される挿入または組換えにより前記細胞のゲノムにおいて変異（複数可）を誘導する配列を含むドナーオリゴヌクレオチドに該細胞を接触させることをさらに含む、項目３７に記載の方法。
（項目４３）
前記変異が、前記細胞へのＨＩＶの侵入を促進する細胞表面受容体の活性を低減することによりＨＩＶ感染を低減する、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記接触させることがｅｘ ｖｉｖｏで起こる、項目３７から４３のうちのいずれか一項に記載の方法。
（項目４５）
前記細胞が造血幹細胞である、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
前記細胞を、それを投与すること必要とする被験体に投与することをさらに含む、項目４３から４５のうちのいずれか一項に記載の方法。
（項目４７）
前記細胞が、疾患または障害の１つまたは複数の症状を処置するのに有効な量で前記被験体に投与される、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
前記接触させることが、（ｉ）、（ｉｉ）、および任意選択で前記ドナーオリゴヌクレオチドの投与であって、それを必要とする被験体への投与に続いてｉｎ ｖｉｖｏで起こる、項目３７から４３のうちのいずれか一項に記載の方法。
（項目４９）
前記被験体が、血友病、グロビン異常症、嚢胞性線維症、色素性乾皮症、およびリソソーム蓄積症からなる群から選択される疾患または障害を有する、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
遺伝子改変が、前記被験体において前記疾患または障害の１つまたは複数の症状を低減するのに有効な量で起こる、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
（ｉ）、（ｉｉ）、前記ドナーオリゴヌクレオチドまたはその組合せがナノ粒子に一緒にまたは別々にパッケージされる、項目３７から５０のうちのいずれか一項に記載の方法。
（項目５２）
前記ナノ粒子がポリヒドロキシ酸を含む、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
前記ナノ粒子がポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）を含む、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記ナノ粒子が、約５から約２５パーセントの間のポリ（ベータアミノ）エステル（ＰＢＡＥ）（ｗｔ％）を含む、ＰＬＧＡとＰＢＡＥのブレンドを含む、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記ナノ粒子が二重エマルジョンまたはナノ沈殿により調製される、項目４３から４６のうちのいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
前記増強剤、前記遺伝子編集技術、または前記ナノ粒子に直接的にまたは間接的に会合する、連結する、コンジュゲートする、またはその他の方法で結合する、標的化部分、細胞浸透性ペプチド、またはその組合せをさらに含む、項目３７から５５のうちのいずれか一項に記載の方法。
（項目５７）
前記細胞浸透性ペプチドが、配列ＧＡＬＦＬＧＦＬＧＡＡＧＳＴＭＧＡＷＳ ＱＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号１２）（ＭＰＧ（合成キメラ：ＳＶ４０ＬｇＴ．Ａｎｔ．＋ＨＩＶ ｇｂ４１コート）を含む、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
（ｉ）を（ｉｉ）に先立って前記細胞に接触させる、項目３７から５７のうちのいずれか一項に記載の方法。
（項目５９）
（ｉｉ）を（ｉ）に先立ってまたは（ｉ）と同時に前記細胞に接触させる、項目３７から５７のうちのいずれか一項に記載の方法。
（項目６０）
前記Ｃ−ｋｉｔリガンドが、Ｃ−ｋｉｔの二量体化を引き起こしそのチロシンキナーゼ活性を活性化するのに十分な幹細胞因子タンパク質またはその断片である、項目３７から５９のうちのいずれか一項に記載の方法。
（項目６１）
前記Ｃ−ｋｉｔリガンドが、Ｃ−ｋｉｔの二量体化を引き起こしそのチロシンキナーゼ活性を活性化するのに十分な幹細胞因子タンパク質またはその断片をコードする核酸である、項目３７から５９のうちのいずれか一項に記載の方法。
（項目６２）
前記核酸がｍＲＮＡまたは発現ベクターである、項目６１に記載の方法。
（項目６３）
前記ＡＴＲ−Ｃｈｋ１細胞周期チェックポイント経路阻害剤が、ＡＺＤ７７６２、ＳＣＨ９００７７６／ＭＫ−８７７６、ＩＣ８３／ＬＹ２６０３６１８、ＬＹ２６０６３６８、ＧＤＣ−０４２５、ＰＦ−００４７７７３６、ＸＬ８４４、ＣＥＰ−３８９１、ＳＡＲ−０２０１０６、ＣＣＴ−２４４７４７、Ａｒｒｙ−５７５、ＳＢ２１８０７５、シサンドリンＢ、ＮＵ６０２７、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５、ＶＥ−８２１、ＶＥ−８２２（ＶＸ−９７０）、ＡＺ２０、ＡＺＤ６７３８、ＭＩＲＩＮ、ＫＵ５５９３、ＶＥ−８２１、ＮＵ７４４１、ＬＣＡ、およびＬ１８９からなる群から選択される、項目３７から５１のうちのいずれか一項に記載の方法。
（項目６４）
前記ＤＮＡポリメラーゼアルファ阻害剤がアフィディコリンである、項目３７から５１のうちのいずれか一項に記載の方法。
（項目６５）
前記熱ショックタンパク質９０阻害剤が、（ＨＳＰ９０ｉ）ＳＴＡ−９０９０（ガネテスピブ）、ゲルダナマイシン（ＧＡ）、１７−ＡＡＧ（１７−アリルアミノ−１７−デメトキシ−ゲルダナマイシン）、１７−ＤＭＡＧ（１７−ジメチルアミノエチルアミノ−１７−デメトキシ−ゲルダナマイシン）、（アルベスピマイシン）ＩＰＩ−５０４（レタスピマイシン）、およびＡＵＹ９２２からなる群から選択される、項目３７から５１のうちのいずれか一項に記載の方法。
（項目６６）
細胞のゲノムを改変する方法であって、有効量の、
（ｉ）受容体チロシンキナーゼＣ−ｋｉｔリガンドおよびＡＴＲ−Ｃｈｋ１細胞周期チェックポイント経路阻害剤からなる群から選択される遺伝子編集増強剤、ならびに
（ｉｉ）項目１から３６のうちのいずれか一項に記載の三重鎖形成組成物
に該細胞を接触させることを含み、
ゲノム改変が（ｉ）の非存在下で（ｉｉ）に接触させた同等の集団においてよりも（ｉ）と（ｉｉ）の両方に接触させた細胞の集団においてより高い頻度で起こる方法。
（項目６７）
項目３７から６６のうちのいずれかに記載の方法に従って遺伝的に改変される単離された細胞。

Claims (1)

1. 本願明細書に記載の発明。