JP2019507890A - ビタミンd代謝産物の検出のためのデバイス - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2016年1月22日に出願された米国仮出願番号第62/286,297号(代理人書類番号49821−701.101)の利益を主張しており、この仮出願は、その全体が参考として援用される。
ビタミンDは、カルシウムの腸管吸収の増大およびそのホメオスタシスの制御に関与するステロイドホルモン群のことをいう。ビタミンDの一般的な2つの形態は、ビタミンD2およびビタミンD3である。ビタミンD3は、紫外線への曝露を通じてヒトの皮膚において天然に産生されるのに対して、ビタミンD2は、主に食物および栄養補助食品から得られる。ビタミンD2およびビタミンD3は、生物学的に不活性である;活性化には、ビタミンD2およびビタミンD3が肝臓に運搬される必要があり、肝臓においてヒドロキシル化によって、本明細書中で25−ヒドロキシビタミンD(「25−(OH)D」)と称される活性型に代謝され得る。ビタミンD結合タンパク質DBPは、すべてのビタミンD代謝産物に対する主要な血清運搬タンパク質である。DBPは、全25−OHDの95〜99%を運搬し、1〜5%だけが、アルブミンおよびリポタンパク質によって運ばれる。ビタミンD欠乏は、骨粗鬆症、骨減少症、くる病、がん、自己免疫疾患、循環器疾患および感染症をはじめとした多くの疾患に関連付けられており、高い死亡リスクにも関連している。
1種またはそれを超えるビタミンD分子を検出および計測するための代替のデバイス、方法およびキットが、大いに必要とされている。本発明は、このニーズに応え、さらなる利点を提供する。1つの態様において、本発明は、1種またはそれを超えるビタミンD分子を検出するための検査デバイスであって、(a)(i)生物学的サンプルを吸収し、生物学的サンプルをコンジュゲートパッドに運搬するように構成された、サンプル適用パッド;(ii)1種またはそれを超えるビタミンD分子に特異的に結合するビタミンD結合剤を含むコンジュゲートパッド;および(iii)ビタミンD結合剤を1種またはそれを超えるビタミンD分子と複合体化することによって生成されるエピトープに特異的に結合する検出抗体が固定化された第1の領域を含む検出ゾーンを含むハウジングを備える、検査デバイスを提供する。
参照による援用
本明細書中に記載されるような本開示のシステムおよび方法は、別段示されない限り、当業者の技術の範囲内である、分子生物学(組換え手法を含む)、細胞生物学、生化学、マイクロアレイおよび配列決定技術の従来の手法および説明を使用し得る。そのような従来の手法としては、オリゴヌクレオチドのポリマーアレイ合成、オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションおよびライゲーション、オリゴヌクレオチドの配列決定、ならびに標識を用いたハイブリダイゼーションの検出が挙げられる。好適な手法の具体的な説明は、本明細書中の実施例を参照することにより、得ることができる。しかしながら、等価な従来の手順も当然のことながら使用できる。そのような従来の技術および説明は、Greenら編、Genome Analysis:A Laboratory Manual Series(Vols.I−IV)(1999);Weinerら編、Genetic Variation:A Laboratory Manual(2007);Dieffenbach, Dveksler編、PCR Primer:A Laboratory Manual(2003);BowtellおよびSambrook, DNA Microarrays:A Molecular Cloning Manual(2003);Mount, Bioinformatics:SequenceおよびGenome Analysis(2004);SambrookおよびRussell, Condensed Protocols from Molecular Cloning:A Laboratory Manual(2006)などの標準的な研究所マニュアル;およびSambrookおよびRussell, Molecular Cloning:A Laboratory Manual(2002)(全てCold Spring Harbor Laboratory Pressから);Stryer, L., Biochemistry(第4版) W.H. Freeman, N.Y.(1995);Gait, “Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach” IRL Press, London(1984);NelsonおよびCox, Lehninger, Principles of Biochemistry、第3版、W.H. Freeman Pub., New York(2000);およびBergら、Biochemistry、第5版、W.H. Freeman Pub., New York(2002)に見出すことができ、これらの全ては、その全体が全ての目的のために本明細書に参考として援用される。
検査デバイス
方法
キット
Claims (39)
- 1種またはそれを超えるビタミンD分子を検出するための検査デバイスであって、
(a)
(i)生物学的サンプルを吸収し、前記生物学的サンプルをコンジュゲートパッドに運搬するように構成された、サンプル適用パッド;
(ii)1種またはそれを超えるビタミンD分子に特異的に結合するビタミンD結合剤を含む前記コンジュゲートパッド;および
(iii)前記ビタミンD結合剤を前記1種またはそれを超えるビタミンD分子と複合体化することによって生成されるエピトープに特異的に結合する検出抗体が固定化された第1の領域を含む検出ゾーン
を含むハウジングを備える、検査デバイス。 - 前記1種またはそれを超えるビタミンD分子が、25−ヒドロキシビタミンD2、25−ヒドロキシビタミンD3、25−ヒドロキシビタミンD4、25−ヒドロキシビタミンD5および1,25−ヒドロキシビタミンD3からなる群より選択される、請求項1に記載の検査デバイス。
- 前記1種またはそれを超えるビタミンD分子が、25−ヒドロキシビタミンD2および25−ヒドロキシビタミンD3からなる群より選択される、請求項2に記載の検査デバイス。
- 前記1種またはそれを超えるビタミンD分子が、25−ヒドロキシビタミンD2および25−ヒドロキシビタミンD3である、請求項2に記載の検査デバイス。
- 前記1種またはそれを超えるビタミンD分子が、25−ヒドロキシビタミンD2からなる、請求項2に記載の検査デバイス。
- 前記1種またはそれを超えるビタミンD分子が、25−ヒドロキシビタミンD3からなる、請求項2に記載の検査デバイス。
- 前記検出ゾーンが、前記ビタミンD結合剤が前記1種またはそれを超えるビタミンD分子に結合されているか否かを問わず前記ビタミンD結合剤に結合することができる第3の抗体が固定化された第2の領域をさらに含む、請求項1に記載の検査デバイス。
- 前記ビタミンD結合剤が、検出試薬にコンジュゲートされている、請求項1に記載の検査デバイス。
- 前記検出試薬が、金粒子、ラテックス粒子、炭素ナノ粒子、セレンナノ粒子、銀ナノ粒子、量子ドット、蛍光化合物、色素、酵素およびリポソームからなる群より選択される、請求項8に記載の検査デバイス。
- 前記検出試薬が、前記金粒子である、請求項9に記載の検査デバイス。
- 前記検出試薬が、前記ラテックス粒子である、請求項9に記載の検査デバイス。
- 前記サンプル適用パッド、前記コンジュゲートパッドおよび前記検出ゾーンが、前記生物学的サンプルが通る流路に沿って上流から下流に並んでいる、請求項1に記載の検査デバイス。
- 前記生物学的サンプルの粒子性の部分を前記生物学的サンプルの水性の部分と分離するように構成された濾過構成要素を前記サンプル適用パッドと前記コンジュゲートパッドとの間にさらに備える、請求項1に記載の検査デバイス。
- 前記検出抗体が、軽鎖および重鎖を含み、前記軽鎖が、配列番号1〜5および16〜20からなる群より選択される配列を含み;前記重鎖が、配列番号6〜15からなる群より選択される配列を含む、前述の請求項のいずれかに記載の検査デバイス。
- 前記検出抗体が、前記ビタミンD結合剤よりも前記エピトープに対して高い結合親和性を示す、前述の請求項のいずれかに記載の検査デバイス。
- 前記検出抗体が、scFv、VH、Fabまたは(Fab)2結合単位を含む、前述の請求項のいずれかに記載の検査デバイス。
- 前記検出抗体が、軽鎖および重鎖を含み、前記軽鎖が、配列番号1〜5および16〜20からなる群より選択される配列に対して少なくとも80%の配列相同性を共有する配列を含み、前記重鎖が、配列番号6〜15からなる群より選択される配列に対して少なくとも80%の配列相同性を有する配列を含む、前述の請求項のいずれかに記載の検査デバイス。
- (a)前述の請求項のいずれか1項に記載の前記検査デバイスの前記サンプル適用パッドに生物学的サンプルを適用する工程;
(b)前記サンプル適用パッドに追跡緩衝液を適用する工程;および
(c)前記1種またはそれを超えるビタミンD分子を検出する工程
を含む、方法。 - 前記サンプル中の前記1種またはそれを超えるビタミンD分子を定量する工程をさらに含む、請求項18に記載の方法。
- 前記定量する工程が、前記血液サンプルを、十分レベル、不足レベルまたは欠乏レベルの前記1種またはそれを超えるビタミンD分子を有すると分類する、サンプル19に記載の方法。
- 前記十分レベルが、少なくとも30ng/mLである、請求項18に記載の方法。
- 前記不足レベルが、少なくとも10ng/mLかつ30ng/mL未満である、請求項18に記載の方法。
- 前記欠乏レベルが、10ng/mL未満である、請求項18に記載の方法。
- 前記定量する工程が、前記検出膜のイメージを提供するイメージングデバイス、および前記検出膜の前記イメージに基づいて前記サンプル中の前記1種またはそれを超えるビタミンD分子を定量するように構成されたプログラムされたコンピュータ上のソフトウェアを使用する工程をさらに含む、請求項18に記載の方法。
- 前記イメージングデバイスおよび前記プログラムされたコンピュータが、単一のデバイスである、請求項24に記載の方法。
- 前記追跡緩衝液が、ビタミンD結合タンパク質から前記1種またはそれを超えるビタミンD分子を解離する試薬を含む、請求項18に記載の方法。
- 前記生物学的サンプルが、全血、血清、血漿、尿、唾液、眼内液、髄液および汗からなる群より選択される、請求項14に記載の方法。
- 結合アッセイを行うように構成された検査デバイスを用いて、生物学的サンプル中の1つまたはそれを超えるビタミンDレベルを検出するための方法であって、
(a)前記生物学的サンプルを前記検査デバイスに接触させる工程;
(b)前記生物学的サンプルを、(1)ビタミンD結合剤と(2)1種またはそれを超えるビタミンD分子とによって形成された複合体を含む反応混合物を利用する前記結合アッセイに供する工程;
(c)前記ビタミンD結合剤を前記1種またはそれを超えるビタミンD結合分子と複合体化することによって形成されるエピトープに結合する検出剤に前記複合体をさらに曝露する工程
を含み、前記結合アッセイは、前記生物学的サンプルにおいて、液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析の検出感度に匹敵する検出感度を有する、方法。 - 前記検出剤が、軽鎖および重鎖を含み、前記軽鎖が、配列番号1〜5および16〜20からなる群より選択される配列を含み、前記重鎖が、配列番号6〜15からなる群より選択される配列を含む、請求項28に記載の方法。
- 前記検出剤が、前記ビタミンD結合剤よりも前記複合体に対して高い結合親和性を示す、請求項28に記載の方法。
- 前記検出剤が、scFv、VH、Fabまたは(Fab)2結合単位を含む、請求項28に記載の方法。
- 前記検出剤が、軽鎖および重鎖を含み、前記軽鎖が、配列番号1〜5および16〜20からなる群より選択される配列に対して少なくとも80%の配列相同性を共有する配列を含み、前記重鎖が、配列番号6〜15からなる群より選択される配列に対して少なくとも80%の配列相同性を有する配列を含む、請求項28に記載の方法。
- 前記生物学的サンプルが、全血、血清、血漿、尿、唾液、眼内液、髄液および汗からなる群より選択される、請求項28に記載の方法。
- (a)請求項1〜17のいずれか1項に記載の前記検査デバイス、および
(b)前記キットを使用するための書面の指示書
を含む、キット。 - 滅菌剤;皮膚を穿刺するデバイス;ガーゼ;追跡緩衝液;およびマイクロピペットからなる群より選択される1つまたはそれを超える構成要素をさらに含む、請求項34に記載のキット。
- 前記滅菌剤が、アルコールワイプである、請求項34に記載のキット。
- 前記皮膚を穿刺するデバイスが、ランセット、針およびシリンジからなる群より選択される、請求項34に記載のキット。
- 前記追跡緩衝液が、血液サンプル中のビタミンD結合タンパク質から1種またはそれを超えるビタミンD分子を解離するように構成された、請求項34に記載のキット。
- シグナル強度を前記サンプル中の前記1種またはそれを超えるビタミンD分子の量に関係づけるカラーチャートをさらに含む、請求項34に記載のキット。
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