JP2019504619A - Ｐｃｒの試薬およびアッセイの安定化 - Google Patents

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Abstract

本発明は、周囲温度におけるＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の安定化に関する。特に、周囲温度におけるＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤、組成物、製品、キット、および方法が提供される。【選択図】図１

Description

＜相互参照＞
本出願は、２０１５年１２月８日に出願された米国仮特許出願第６２／２６４，７５８号の利益を主張し、該仮出願は、その全体において引用により本明細書に組み込まれる。
研究、診断および治療の目的のためのＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分を保存および運送するために十分な時間、周囲温度でＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分を安定化させる改善された製剤および方法の必要性が存在する。
いくつかの実施形態では、周囲温度における、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物中の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤が本明細書において記載されており、その製剤は：（ｉ）ヒドロキシ酸と；（ｉｉ）ホウ酸塩組成物と；を含み、ここで、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、少なくとも３ヶ月の間、周囲温度で保存した後に安定し続ける。いくつかの実施形態では、ヒドロキシ酸は式（Ｉ）の化合物から成る群から選択され：
式中、Ｒ１は、Ｈ、非置換のまたは置換されたアルキル、および非置換のまたは置換されたアリールから選択される。いくつかの実施形態では、ヒドロキシ酸は、乳酸、リンゴ酸、マロン酸、酒石酸、クエン酸、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される。いくつかの実施形態では、ヒドロキシ酸は乳酸である。いくつかの実施形態において、ヒドロキシ酸は、リンゴ酸、マロン酸、酒石酸、またはクエン酸以外である。いくつかの実施形態では、ヒドロキシ酸はリンゴ酸ではない。いくつかの実施形態では、ヒドロキシ酸はマロン酸ではない。いくつかの実施形態では、ヒドロキシ酸は酒石酸ではない。いくつかの実施形態では、ヒドロキシ酸はクエン酸ではない。いくつかの実施形態では、ホウ酸塩組成物は、ホウ酸、ホウ酸塩、四ホウ酸ナトリウム、ホウ砂、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される。いくつかの実施形態では、ホウ酸塩組成物は、ホウ酸、四ホウ酸ナトリウム、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、製剤は乳酸およびホウ酸を含む。いくつかの実施形態では、製剤は乳酸、ホウ酸、および四ホウ酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、製剤は表２の製剤から選択される。
いくつかの実施形態では、周囲温度における、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物中の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤が本明細書において記載されており、その製剤は：（ｉ）非還元糖と；（ｉｉ）緩衝液と；を含み、ここで、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、少なくとも３ヶ月間、周囲温度で保存した後に安定し続ける。いくつかの実施形態では、非還元糖はスクロースおよびトレハロースから成る群から選択される。いくつかの実施形態では、非還元糖はスクロースである。いくつかの実施形態では、緩衝液は、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、スルホサリチル酸、スルホイソフタル酸、シュウ酸、ホウ酸塩、ＣＡＰＳ（３−（シクロヘキシルアミノ）−１−プロパンスルホン酸）、ＣＡＰＳＯ（３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸）、ＥＰＰＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンプロパンスルホン酸）、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、ＭＥＳ（２−（Ｎ−モルフォリノ）エタンスルホン酸）、ＭＯＰＳ（３−（Ｎ−モルフォリノ）プロパンスルホン酸）、ＭＯＰＳＯ（３−モルフォリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＰＩＰＥＳ（１，４−ピペラジンジエタンスルホン酸）、ＴＡＰＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミノプロパンスルホン酸）、ＴＡＰＳＯ（２−ヒドロキシ−３−［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−１−プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、ビシン（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン）、トリシン（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン）、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、およびビス−トリス（２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール）、から成る群から選択される。いくつかの実施形態では、製剤はＴｒｉｓ−ＨＣｌを含む。いくつかの実施形態では、製剤はスクロースおよびＴｒｉｓ−ＨＣｌを含む。いくつかの実施形態では、製剤は表３の製剤１２または１３から選択される。
いくつかの実施形態では、周囲温度における、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物中の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤が本明細書において記載されており、その製剤は：（ｉ）アミノスルホン酸または硫酸アンモニウムと；（ｉｉ）非還元糖、アミド、またはポリエチレングリコールの少なくとも１つと；を含み、ここで、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、少なくとも３ヶ月の間、周囲温度で保存した後に安定し続ける。いくつかの実施形態では、製剤は式（ＩＩ）のアミノスルホン酸を含み：
式中、Ｒ１およびＲ２は、Ｈ、非置換のまたは置換されたアルキル、および非置換のまたは置換されたアリールから独立して選択される。いくつかの実施形態では、アミノスルホン酸はタウリンである。いくつかの実施形態では、製剤は硫酸アンモニウムを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、スクロースおよびトレハロースから成る群から選択される非還元糖を含む。いくつかの実施形態では、非還元糖はスクロースである。いくつかの実施形態では、製剤は、式（ＩＩＩ）のアミドを含み：
式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、非置換のまたは置換されたアルキル、および非置換のまたは置換されたアリールから独立して選択される。いくつかの実施形態では、製剤は、Ｎ，Ｎ−ジメチルプロピオンアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ブチルアミド、およびジメチルホルムアミドから成る群から選択されるアミドを含む。いくつかの実施形態では、アミドはＮ，Ｎ−ジメチルプロピオンアミドである。いくつかの実施形態では、アミドはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドである。いくつかの実施形態では、アミドはジメチルイソブチルアミドである。いくつかの実施形態では、アミドはメチルプロピオンアミドである。いくつかの実施形態では、製剤はポリエチレングリコールを含む。いくつかの実施形態では、ポリエチレングリコールはＰＥＧ ８０００である。いくつかの実施形態では、ポリエチレングリコールはＰＥＧ ４００である。いくつかの実施形態では、製剤は表３の製剤１４−２１から選択される。
いくつかの実施形態では、（ａ）周囲温度における、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤であって、その製剤はヒドロキシ酸、およびホウ酸塩組成物を含む、製剤と；（ｂ）ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分と；を含む混合物が本明細書において記載されており、ここで、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、少なくとも３ヶ月の期間の間、周囲温度で保存した後に安定し続ける。いくつかの実施形態では、ヒドロキシ酸は式（Ｉ）の化合物であって：
式中、Ｒ１は、Ｈ、非置換のもしくは置換されたアルキル、または非置換のもしくは置換されたアリールから選択される。いくつかの実施形態では、ヒドロキシ酸は、乳酸、リンゴ酸、マロン酸、酒石酸、クエン酸、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される。いくつかの実施形態では、ヒドロキシ酸は乳酸である。いくつかの実施形態では、ホウ酸塩組成物は、ホウ酸、ホウ酸塩、四ホウ酸ナトリウム、ホウ砂、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される。いくつかの実施形態では、ホウ酸塩組成物は、ホウ酸、四ホウ酸ナトリウム、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、製剤は乳酸およびホウ酸を含む。いくつかの実施形態では、製剤は乳酸、ホウ酸、および四ホウ酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、対照核酸を含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、Ａｒｍｏｒｅｄ ＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、ＡＲＭＯＲＥＤ ＲＮＡは、ＭＳ２バクテリオファージのコートタンパク質で覆われたＨＩＶ ＲＮＡの一本鎖であり、これによりＲＮＡ鎖を保護することができる。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、内在性コントロール鋳型（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｅｍｐｌａｔｅ）を含む。いくつかの実施形態では、ポリエチレングリコールはＰＥＧ ４００である。いくつかの実施形態では、製剤は表２の製剤から選択される。
いくつかの実施形態では、（ａ）周囲温度における、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物中の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤であって、その製剤は非還元糖、および緩衝液を含む、製剤と；（ｂ）ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分と；を含む混合物が本明細書において記載されており、ここで、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、少なくとも３ヶ月間、周囲温度で保存した後に安定し続ける。いくつかの実施形態では、非還元糖はスクロースおよびトレハロースから成る群から選択される。いくつかの実施形態では、非還元糖はスクロースである。いくつかの実施形態では、緩衝液は、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、スルホサリチル酸、スルホイソフタル酸、シュウ酸、ホウ酸塩、ＣＡＰＳ（３−（シクロヘキシルアミノ）−１−プロパンスルホン酸）、ＣＡＰＳＯ（３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸）、ＥＰＰＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンプロパンスルホン酸）、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、ＭＥＳ（２−（Ｎ−モルフォリノ）エタンスルホン酸）、ＭＯＰＳ（３−（Ｎ−モルフォリノ）プロパンスルホン酸）、ＭＯＰＳＯ（３−モルフォリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＰＩＰＥＳ（１，４−ピペラジンジエタンスルホン酸）、ＴＡＰＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミノプロパンスルホン酸）、ＴＡＰＳＯ（２−ヒドロキシ−３−［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−１−プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、ビシン（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン）、トリシン（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン）、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、およびビス−トリス（２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール）、から成る群から選択される。いくつかの実施形態では、製剤はスクロースおよびＴｒｉｓ−ＨＣｌを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、ポリメラーゼを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、Ｔａｑポリメラーゼを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲのマスターミックスを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲのマスターミックスは、酵素、デオキシヌクレオシド三リン酸（ｄＮＴＰｓ）、緩衝液、塩、アプタマー、プライマー、プローブ、および他の添加剤を含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲのマスターミックスはポリメラーゼ、ｄＮＴＰｓ、プライマー、およびプローブを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲのマスターミックスは、逆転写酵素、Ｔａｑポリメラーゼ、デオキシヌクレオシド三リン酸（ｄＮＴＰｓ）、プライマー、プローブ、緩衝液、塩、界面活性剤、グリセロール、ＤＭＳＯ、および１つ以上のさらなる酵素を含む。いくつかの実施形態では、Ｔａｑポリメラーゼは逆転写酵素の活性を有する。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲのマスターミックスはＵＮＧを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、内在性コントロール鋳型核酸（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｅｍｐｌａｔｅ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）を含む。いくつかの実施形態では、ポリエチレングリコールはＰＥＧ ４００である。いくつかの実施形態では、製剤は表３の製剤１２または１３から選択される。
いくつかの実施形態では、（ａ）周囲温度における、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤であって、その製剤は、ｉ）アミノスルホン酸、または硫酸アンモニウム；およびｉｉ）非還元糖、アミド、またはポリエチレングリコールの少なくとも１つ；を含む、製剤と；（ｂ）ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分と；を含む混合物が本明細書において記載されており、ここで、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、少なくとも３ヶ月の期間の間、周囲温度で保存した後に安定し続ける。いくつかの実施形態では、製剤は式（ＩＩ）のアミノスルホン酸を含み：
式中、Ｒ１およびＲ２は、Ｈ、非置換のまたは置換されたアルキル、および非置換のまたは置換されたアリールから独立して選択される。いくつかの実施形態では、アミノスルホン酸はタウリンである。いくつかの実施形態では、製剤は硫酸アンモニウムを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、スクロースおよびトレハロースから成る群から選択される非還元糖を含む。いくつかの実施形態では、非還元糖はスクロースである。いくつかの実施形態では、製剤は、式（ＩＩＩ）のアミドを含み：
式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、非置換のまたは置換されたアルキル、および非置換のまたは置換されたアリールから独立して選択される。いくつかの実施形態では、製剤は、Ｎ，Ｎ−ジメチルプロピオンアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ブチルアミド、およびジメチルホルムアミドから成る群から選択されるアミドを含む。いくつかの実施形態では、アミドはＮ，Ｎ−ジメチルプロピオンアミドである。いくつかの実施形態では、アミドはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドである。いくつかの実施形態では、製剤はジメチルイソブチルアミドを含む。いくつかの実施形態では、製剤はメチルプロピオンアミドを含む。いくつかの実施形態では、製剤はポリエチレングリコールを含む。いくつかの実施形態では、ポリエチレングリコールはＰＥＧ ８０００またはＰＥＧ ４００である。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、ポリメラーゼを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、Ｔａｑポリメラーゼを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲのマスターミックスを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲのマスターミックスは、酵素、デオキシヌクレオシド三リン酸（ｄＮＴＰｓ）、緩衝液、塩、アプタマー、プライマー、プローブ、および他の添加剤を含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲのマスターミックスはポリメラーゼ、ｄＮＴＰｓ、プライマー、およびプローブを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲのマスターミックスは、逆転写酵素、Ｔａｑポリメラーゼ、デオキシヌクレオシド三リン酸（ｄＮＴＰｓ）、プライマー、プローブ、緩衝液、塩、界面活性剤、グリセロール、ＤＭＳＯ、および１つ以上のさらなる酵素を含む。いくつかの実施形態では、Ｔａｑポリメラーゼは逆転写酵素の活性を有する。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲのマスターミックスはＵＮＧを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、内在性コントロール鋳型核酸を含む。いくつかの実施形態では、ポリエチレングリコールはＰＥＧ ４００である。いくつかの実施形態では、製剤は表３の製剤１４−２１から選択される。
いくつかの実施形態では、（ａ）周囲温度における、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物中の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤であって、その製剤は、乳酸；を含む製剤と；（ｂ）ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分と；を含む混合物が本明細書において記載されており、ここで、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、少なくとも３ヶ月の期間の間、周囲温度で保存した後に安定し続ける。いくつかの実施形態では、乳酸は５％から２０％の濃度で製剤中に存在する。いくつかの実施形態では、乳酸は７％から１５％の濃度で製剤中に存在する。いくつかの実施形態では、製剤はさらに、ホウ酸、四ホウ酸ナトリウム、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、対照核酸を含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、Ａｒｍｏｒｅｄ ＲＮＡを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書において提供されるＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤と混合された、実質的に安定して保存されたＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分を含む組成物が、本明細書において記載される。
いくつかの実施形態では、本明細書において提供されるＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物中の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤を含む製品が、本明細書において記載される。
いくつかの実施形態では、本明細書において提供されている製品、および添付文書を含むキットが本明細書において記載される。
いくつかの実施形態では、周囲温度における、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物中の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための方法が本明細書において記載されており、その方法は：ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分のサンプルと、本明細書において提供されるＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤と、を混合する工程を含み、ここで、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、少なくとも３ヶ月の期間の間、周囲温度で保存した後に安定し続ける。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の少なくとも８０％は、少なくとも３ヶ月の期間の間、周囲温度で安定し続ける。いくつかの実施形態では、ＰＣＲもしくはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、ＲＴ−ＰＣＲのマスターミックス、ＲＴ−ＰＣＲの内在性コントロール鋳型核酸、またはそれらの組み合わせである。
いくつかの実施形態では、周囲温度における、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための方法が本明細書において記載されており、その方法は：ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分と、（ａ）ヒドロキシ酸およびホウ酸塩組成物を含む製剤と；（ｂ）非還元糖および緩衝液を含む製剤と；（ｃ）ｉ）アミノスルホン酸、または硫酸アンモニウム；およびｉｉ）非還元糖、アミド、またはポリエチレングリコールの少なくとも１つを含む製剤と；から成る群から選択される製剤と、を混合する工程を含み、ここで、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、少なくとも３ヶ月の期間の間、周囲温度で保存した後に安定し続ける。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の少なくとも８０％は、少なくとも３ヶ月の期間の間、周囲温度で安定し続ける。いくつかの実施形態では、ＰＣＲもしくはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、ＲＴ−ＰＣＲのマスターミックス、ＲＴ−ＰＣＲの内在性コントロール鋳型核酸、またはそれらの組み合わせである。
＜引用による組み込み＞
本明細書で言及されるすべての公報、特許、および特許出願は、個々の公報、特許、特許出願が引用によって組み込まれるように具体的且つ個別に示される程度まで、引用によって本明細書に組み込まれる。
本発明の新規な特徴は、とりわけ添付の特許請求の範囲において記載される。本発明の特徴および利点のより良い理解は、本発明の原理が用いられる実施形態を説明する以下の詳細な説明と、以下の添付図面とを引用することによって得られるであろう。
ＡＲＭＯＲＥＤ ＲＮＡ（ａＲＮＡ；Ｒｏｃｈｅ）の安定化を例示する。ａＲＮＡを希釈し、水（４Ｃ Ｃｔｒｌおよび製剤がない対照（ＮＦＣ））、または実験プロトコルに記載されているような製剤０１のいずれかと混合した（実施例１）。「４Ｃ Ｃｔｒｌ」のサンプルを４℃で保存した。サンプル「ＮＦＣ」、すなわち製剤がない対照、および製剤０１を含むサンプルを両方とも、４５℃（図１のＡおよび図１のＣ）または３７℃（図１のＢおよび図１のＤ）のいずれかで、示された時間保存した。明記された時間において、実験プロトコルに記載されているように、１０μｌのサンプルを取り除き処理した（実施例１）。処理したＲＮＡ鋳型を、ＨＩＶリアルタイムＲＴ−ＰＣＲアッセイにおいて使用した。図１のＡおよび図１のＢは、各サンプルのための平均サイクル閾値（Ｃｔ）を示す。図１のＣおよび図１のＤは、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲから収集された同じサンプルに対する平均相対蛍光単位（ＲＦＵ）を示す。データは、製剤０１を含むサンプルがＮＦＣと比較して低いＣｔ値および向上した蛍光を有することを示し、それらのサンプルからのＲＮＡ産出量が増大したことを示す。 ＡＲＭＯＲＥＤ ＲＮＡ（ａＲＮＡ；Ｒｏｃｈｅ）の安定化を例示する。ａＲＮＡを希釈し、水（４Ｃ ＣｔｒｌおよびＮＦＣ）、または実験プロトコルに記載されているような製剤０２のいずれかと混合した（実施例１）。「４Ｃ Ｃｔｒｌ」のサンプルを４℃で保存した。サンプル「ＮＦＣ」、すなわち製剤がない対照、および製剤０２を含むサンプルを両方とも、４５℃（図２のＡ）または３７℃（図２のＢ）のいずれかで、示された時間保存した。明記された時間において、実験プロトコルに記載されているように、１０μｌのサンプルを取り除き処理した（実施例１）。処理したＲＮＡ鋳型を、ＨＩＶリアルタイムＲＴ−ＰＣＲアッセイにおいて使用した。図２のＡおよび図２のＢは、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲから収集された各サンプルに対する平均サイクル閾値（Ｃｔ）を示す。データは、製剤０２を含むサンプルが、ＮＦＣと比較して低いＣｔ値を有することを示し、それらのサンプルからのＲＮＡ産出量が増大したことを示す。 ＡＲＭＯＲＥＤ ＲＮＡ（ａＲＮＡ；Ｒｏｃｈｅ）の安定化を例示する。ａＲＮＡを希釈し、水（４Ｃ ＣｔｒｌおよびＮＦＣ）、または実験プロトコルに記載されているような列挙された製剤のいずれかと混合した（実施例１）。「４Ｃ Ｃｔｒｌ」のサンプルを４℃で保存した。サンプル「ＮＦＣ」、すなわち製剤がない対照、および製剤を含むサンプルをすべて、４５℃で示された時間保存した。明記された時間において、実験プロトコルに記載されているように、１０μｌのサンプルを取り除き処理した（実施例１）。処理したＲＮＡ鋳型を、ＨＩＶリアルタイムＲＴ−ＰＣＲアッセイにおいて使用した。パネルは、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲから収集された各サンプルに対する平均サイクル閾値（Ｃｔ）を示す。データは、製剤０１，０２、および０４を含むサンプルが、ＮＦＣと比較して低いＣｔ値を有することを示し、それらのサンプルからのＲＮＡ産出量が増大したことを示す。これらの実験で試験された全ての他の製剤は、ＮＦＣのＣｔ値以上の値を示し、ＲＮＡ産出または安定化の改善を示さない。図３のＡは、４５℃で行う１９日間の保存を例示する。図３のＢは、４５℃で行う２６日間の保存を例示する。 完全なＲＴ−ＰＣＲマスターミックス（Ｒｏｃｈｅ）の安定化を例示する。１．５倍の濃度のＲＴ−ＰＣＲマスターミックスを、水（４Ｃ ＣｔｒｌもしくはＮＦＣ）、または実験プロトコルに記載されているような示された製剤のいずれかと混合した（実施例２）。「４Ｃ Ｃｔｒｌ」のサンプルを４℃で保存した。サンプル「ＮＦＣ」、すなわち製剤がない対照、および製剤を含むサンプルを、５０℃で１４日間保存した。その際、サンプルを取り除き、実験プロトコルに記載されているように、ＨＩＶリアルタイムＲＴ−ＰＣＲアッセイを実行するために、存続する必要な成分と組み合わせた（実施例２）。パネルは、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲから収集された各サンプルに対する平均サイクル閾値（Ｃｔ）を示す。図４のＡは、製剤１２および１３に対して得られた結果を示す。図４のＢは、製剤１４−１７に対して得られた結果を示す。図４のＣは、製剤１８−２１に対して得られた結果を示す。データは、示された製剤を含むサンプルがＮＦＣと比較して、ＲＴ−ＰＣＲ標的の両方（ＨＩＶおよびＱＳ ＲＮＡ）のより低いＣｔ値を有することを示す。
本発明は、周囲温度での、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤、組成物、製品、キット、および方法に関する。
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）アッセイ用の１つ以上の試薬の安定化のための製剤、方法、および組成物が本明細書において提供される。ＰＣＲ試薬は、核酸の増幅および配列決定などの方法において使用するために、別々にまたは組み合わせて保存されてもよい。製剤、方法および組成物は、室温におけるＰＣＲ試薬の長期保存を提供する。加えて、いくつかの実施形態では、製剤、方法、および組成物は、液状でのＰＣＲ試薬の安定した保存を提供する。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される製剤はＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の長期保存を提供する。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、ポリメラーゼを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、Ｔａｑポリメラーゼを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲのマスターミックスを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲのマスターミックスは、酵素、デオキシヌクレオシド三リン酸（ｄＮＴＰｓ）、緩衝液、塩、アプタマー、プライマー、プローブ、および他の添加剤を含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲのマスターミックスはポリメラーゼ、ｄＮＴＰｓ、プライマー、およびプローブを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、内在性コントロール鋳型核酸を含む。
内在性コントロール鋳型核酸はＲＮＡまたはＤＮＡであってもよい。いくつかの実施形態では、内在性コントロール鋳型は、ＰＣＲおよびＲＴ−ＰＣＲのアッセイのための定量化の基準として役立つ。いくつかの実施形態では、内在性コントロール鋳型はＡＲＭＯＲＥＤ ＲＮＡである（Ｐａｓｌｏｓｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９９８； ３６（１２）：３５９０−３５９４；米国特許第５，６７７，１２４号；Ｒｏｃｈｅ）。いくつかの実施形態では、ＡＲＭＯＲＥＤ ＲＮＡは、主としてＭＳ２バクテリオファージのコートタンパク質で覆われたＨＩＶ ＲＮＡの一本鎖で作られ、これによりＲＮＡ鎖を保護することができる。
いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲのアッセイは、感染因子の検出および定量化のためのアッセイである。いくつかの実施形態では、感染因子はウイルスである。いくつかの実施形態では、感染因子はＨＩＶである。
＜定義＞
本明細書および添付の請求項で使用されるように、単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上明確に指示されない限り、複数の言及も含む。したがって、例えば「方法」への言及は、本開示等を読んだ当業者に明らかになるであろう本明細書において記載されたタイプの１つ以上の方法および／または工程などを含む。
量や一時的な継続期間などの測定可能な値について指すときの本明細書において使用される「約」は、指定された値から±２０％、または±１０％、または±５％、または±１％の変動を包含するように意味し、そのような変動は開示された組成物に適しているか、または開示された方法を実行するために適している。
別途定義されていない限り、本明細書に使用される全ての技術的用語および科学的用語は、この発明が属する当業者によって普通に理解されるような、同様な意味を有する。
本明細書において使用されるような用語「周囲温度」は、一般的な室内温度を指す。いくつかの実施形態では、周囲温度は１５℃から３２℃である。いくつかの実施形態では、周囲温度は２０℃から２７℃である。
「アルキル」基は、脂肪族炭化水素の基を指す。アルキル部分は「飽和アルキル」の群を含み、これはアルケン部分またはアルキン部分を含まないことを意味する。アルキル部分は同様に「不飽和アルキル」の部分を含み、これは少なくとも１つのアルケン部分またはアルキン部分を含むことを意味する。「アルケン」部分は少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する群を指し、「アルキン」部分は少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する群を指す。アルキル部分は、飽和または不飽和のいずれの場合でも、分枝部分、直鎖部分、または環状部分を含む。構造によって、アルキル基はモノラジカルまたはジラジカル（すなわちアルキレン基）を含み、「低級アルキル」である場合は１から６の炭素原子を有する。本明細書で使用されるように、Ｃ１−ＣｘはＣ１−Ｃ２、Ｃ１−Ｃ３．．．Ｃ１−Ｃｘを含む。「アルキル」部分は、随意に１から１０の炭素原子を有する（本明細書で見られる場合は常に、「１から１０」など数的な範囲は一定の範囲内の各整数を指す；例えば、「１から１０の炭素原子」は、アルキル基が１つの炭素原子、２つの炭素原子、３つの炭素原子など、最大１０の炭素原子を有する部分から選択されることを意味するが、本定義は数的な範囲が指定されていない用語「アルキル」の発生も包含する）。本明細書に記載される化合物のアルキル基は、「Ｃ１−Ｃ４アルキル」または同様の名称として命名してもよい。例としてのみ、「Ｃ１−Ｃ４アルキル」は、１から４つの炭素原子がアルキル鎖に存在する、すなわち、アルキル鎖は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔ−ブチルの中から選択されることを示す。したがって、Ｃ１−Ｃ４アルキルはＣ１−Ｃ２アルキルおよびＣ１−Ｃ３アルキルを含む。アルキル基は随意に置換、または非置換であってもよい。典型的なアルキル基は、限定されないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ターシャリーブチル、ペンチル、ヘキシル、エテニル、プロペニル、ブテニル、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどを含む。
「アミド」は、式−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲまたは−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒを含む化学部分であり、Ｒはアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール（環炭素により結合した）、およびヘテロ脂環式（環炭素により結合した）の中から選択される。そのようなアミドを作る手順および特定の基は当業者に知られており、全体として引用することで本明細書に組み込まれる文献「Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｕｔｓ， Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， ３ｒｄ Ｅｄ．， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹ， １９９９」等の参考文献中で容易に見つけることができる。
単独で、あるいは「アリールアルキル」、「アリールオキシ」、または「アリールオキシアルキル」のようにより大きな部分の一部として使用される用語「アリール」は、縮合環を含む単環式、二環式、または三環式の炭素環系を指し、系中の少なくとも１つの環は芳香族である。用語「アリール」は、用語「アリール環」と交換可能に使用されてもよい。１つの実施形態では、アリールは、６−１２の炭素原子を有する基を含む。別の実施形態では、アリールは、６−１０の炭素原子を有する基を含む。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、アントラシル（ａｎｔｈｒａｃｙｌ）、フェナントレニル（ｐｈｅｎａｎｔｈｒｅｎｙｌ）、ナフタセニル（ｎａｐｈｔｈａｃｅｎｙｌ）、１，２，３，４−テトラヒドロナフタレニル、１Ｈ−インデニル、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデニルなどが挙げられる。特定のアリールはフェニルである。別の実施形態において、アリールは、インダニル、ナフチル、およびテトラヒドロナフチルなどを含み、ラジカルまたは結合の点は芳香族環上にある。
用語「随意に置換された」または「置換された」は、言及された基が、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリサイクリック、水酸基、アルコキシル基、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、アルキルスルホキシド、アリールスルホキシド、アルキルスルホン、アリールスルホン、シアン基、ハロ、アシル、ニトロ、ハロアルキル、フルオロアルキル、一置換または二置換のアミノ基を含むアミノ、およびそれらの保護された誘導体から、個々に、かつ独立して選択された１つ以上の追加の基と置換されてもてもよいことを意味する。例として、随意の置換基はＬｓＲｓであってもよく、各Ｌは独立して、結合、−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ−、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ、−（置換されたまたは非置換のＣ１−Ｃ６アルキル）、または−（置換されたまたは非置換のＣ２−Ｃ６アルケニル）であり；そして、各Ｒは、Ｈ、（置換されたまたは非置換のＣ１−Ｃ４アルキル）、（置換されたまたは非置換の、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル）、ヘテロアリール、またはヘテロアルキルから独立して選択される。
標準的な化学用語の定義は、Ｃａｒｅｙ ａｎｄ Ｓｕｎｄｂｅｒｇ ”ＡＤＶＡＮＣＥＤ ＯＲＧＡＮＩＣ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ ４ＴＨ ＥＤ．” Ｖｏｌｓ． Ａ （２０００） ａｎｄ Ｂ （２００１）， Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを含む参考文献で見られることもある。特に指示がない限り、当業者の考えうる範囲内で、質量分析、ＮＭＲ、ＨＰＣＬ、タンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ技術、および薬理学の従来の方法が使用される。特定の定義が与えられなければ、本明細書に記載されている、分析化学、有機合成化学、医薬、薬化学、について用いた命名法と、それらの検査の方法、技術と、は当業者に既知のものである。標準的な技術は、化学合成、化学分析、薬剤の調整、処方、および送達、ならびに、患者の処置に用いられうる。標準的な技術は、組み換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、および組織の培養と形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）に使用されうる。反応および精製の技術は、例えば、メーカーの仕様書のキットを用いて、または当該技術分野において一般に遂行されるように、または本明細書に記載されるように、実施することができる。前述の技術および手順は、一般に、当該技術分野において公知の従来の方法で、および本明細書にわたって引用および議論される様々な一般的でより具体的な参考文献で記載されるように実施することができる。
本明細書で使用されるように、単独で、かつ数の指定を伴わずに現れる置換基「Ｒ」は、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール（環炭素により結合した）、および非芳香族複素環（環炭素により結合した）の中から選択される置換基を指す。
本明細書で使用されるように：用語「安定化」、「安定化させる」、および「安定化された」は、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分に関して使用されたとき、しばしば経時的に測定されるように、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の活性を維持する、増強する、またはそうでなければその低下もしくは欠損を阻害する（すなわち、安定化剤の存在下において、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、安定化剤の非存在下よりも長い時間その活性を保つ）材料の能力を指す。ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の活性は、当技術分野において既知の方法に従って、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲのアッセイを実行することにより測定される。「ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の安定化」は、材料が、最適以下の温度条件またはｐＨ条件下で活性を維持する能力も指す。別の例として、「安定化させる」化合物または材料のない状態における活性と比較して、「ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分を安定化させる」ことは、材料が最適以下の条件下で活性を増強する能力を指す。
用語「ポリメラーゼ」は、リボヌクレオシド三リン酸またはデオキシヌクレオシド三リン酸から核酸鎖（例えばＲＮＡまたはＤＮＡ）を合成する酵素を指す。
本明細書で使用されるように、「核酸」は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）およびリボ核酸（ＲＮＡ）の両方、ならびに修飾されたおよび／または官能化されたそれらの変種を指す。同様に、用語「ヌクレオチド」は、明細書において使用されるように、リボ核酸およびデオキシリボ核酸の両方、ヌクレオシドおよびヌクレオチドアナログ、ならびに標識されたヌクレオチドなどの修飾されたヌクレオチドの個体単位を含む。加えて「ヌクレオチド」は、糖、リン酸塩、および／または基本単位が、存在しないか、または他の化学構造と置き換えられているアナログ構造などの非天然型のアナログ構造を含む。したがって、用語「ヌクレオチド」は、個々のペプチド核酸（ＰＮＡ）（Ｎｉｅｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ． Ｃｈｅｍ． １９９４； ５（１）：３−７） ａｎｄ ｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ （ＬＮＡ） （Ｂｒａａｓｃｈ ａｎｄ Ｃｏｒｅｙ， Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ． ２００１； ８（１）：１−７）単位、および他の類似のユニットを包含する。
明細書において使用されるように、用語「ＱＳ」は、ＲＴ−ＰＣＲ反応において定量化の基準として使用されるＲＮＡを指す。
明細書において使用されるように、用語「ａＲＮＡ」、および「ＱＳ ａＲＮＡ」は、ＲＴ−ＰＣＲ反応において定量化の基準として使用されるＡＲＭＯＲＥＤ ＲＮＡ（Ｒｏｃｈｅ）を指す。
本明細書に記載されているように、用語「ポリペプチド」は、アミノ酸の任意のポリマー鎖を指す。用語「ペプチド」、および「タンパク質」は、用語ポリペプチドと交換可能に使用され、またアミノ酸のポリマー鎖を指す。用語「ポリペプチド」は、天然または人工のタンパク質、タンパク質フラグメント、およびタンパク質配列のポリペプチドアナログを包含する。ポリペプチドは単量体または重合体でありうる。もし文脈で特段矛盾しないならば、用語「ポリペプチド」はそのフラグメントおよびその変異体（変異体のフラグメントを含む）を包含する。
＜製剤試薬＞
＜ｐＨ緩衝液＞
特定の実施形態によると、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための、本明細書において記載される製剤および組成物は、１以上のｐＨ緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、ｐＨ緩衝液は、ｐＨ緩衝液が存在する水溶液のような溶液におけるｐＨの変化に抵抗する能力が当該技術分野で知られている、多くの化合物のいずれかである。安定した保存のための組成物に含まれる１以上の特定のｐＨ緩衝液の選択は、本開示に基づいて、および当該技術分野における日常的な業務によって行なわれてもよく、望ましいように維持されるｐＨ、安定化されたサンプルの性質、利用された溶媒条件、使用された製剤の他の成分、および他の基準を含む様々な因子によって影響を与えられることもある。例えば典型的には、ｐＨ緩衝液は、緩衝液の特徴であるプロトン解離定数（ｐＫａ）の約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、または１．０のｐＨ単位の範囲内のｐＨで利用される。
ｐＨ緩衝液の非制限的な例は、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、スルホサリチル酸、スルホイソフタル酸、シュウ酸、ホウ酸塩、ＣＡＰＳ（３−（シクロヘキシルアミノ）−１−プロパンスルホン酸）、ＣＡＰＳＯ（３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸）、ＥＰＰＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンプロパンスルホン酸）、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、ＭＥＳ（２−（Ｎ−モルフォリノ）エタンスルホン酸）、ＭＯＰＳ（３−（Ｎ−モルフォリノ）プロパンスルホン酸）、ＭＯＰＳＯ（３−モルフォリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＰＩＰＥＳ（１，４−ピペラジンジエタンスルホン酸）、ＴＡＰＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミノプロパンスルホン酸）、ＴＡＰＳＯ（２−ヒドロキシ−３−［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−１−プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、ビシン（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン）、トリシン（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン）、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、およびビス−トリス（２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール）、を含む。表１中に記載されるものを含む本明細書において意図される特定の実施形態は、約４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、または９．０のｐＨを有する製剤を特色とする。いくつかの実施形態では、製剤は約７から９のｐＨを有する。
＜有機酸＞
いくつかの実施形態では、有機酸は、実質的に安定した保存用のＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１以上の成分のための、本明細書に記載された製剤および組成物に含まれている。有機酸は例えば、ヒドロキシ酸、カルボン酸、およびアミノスルホン酸を含む。
いくつかの実施形態では、有機酸はヒドロキシ酸である。いくつかの実施形態では、ヒドロキシ酸は式（Ｉ）の化合物であって：
式中、Ｒ１は、Ｈ、非置換のもしくは置換されたアルキル、または非置換のもしくは置換されたアリールから選択される。いくつかの実施形態では、ヒドロキシ酸は、乳酸、リンゴ酸、マロン酸、酒石酸、クエン酸、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される。いくつかの実施形態では、ヒドロキシ酸は乳酸である。いくつかの実施形態では、ヒドロキシ酸は５％から２０％の濃度で製剤中に存在する。いくつかの実施形態では、ヒドロキシ酸は７％から１５％の濃度で製剤中に存在する。
いくつかの実施形態では、有機酸はアミノスルホン酸である。いくつかの実施形態では、アミノスルホン酸は式（ＩＩ）の化合物であって：
式中、Ｒ１およびＲ２は、Ｈ、非置換のまたは置換されたアルキル、および非置換のまたは置換されたアリールから独立して選択される。いくつかの実施形態では、アミノスルホン酸はタウリンである。タウリンはタンパク質へと取り込まれないアミノ酸である。いくつかの実施形態では、有機酸は、乳酸、タウリン、またはその両方である。
いくつかの実施形態では、有機酸はカルボン酸である。いくつかの実施形態では、カルボン酸はヒドロキシエクトインである。
いくつかの実施形態では、有機酸はアミノ酸である。アミノ酸は、天然アミノ酸、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、およびそれらの誘導体である。アミノ酸誘導体の一例はベタインである。いくつかの実施形態では、有機酸はベタインである。
＜アミド＞
特定の実施形態において、周囲温度におけるＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１以上の成分の実質的な安定した保存のための本明細書において記載される製剤は、アミドを含むこともある。いくつかの実施形態では、アミドは式（ＩＩＩ）の化合物であって：
式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、非置換のまたは置換されたアルキル、および非置換のまたは置換されたアリールから独立して選択される。いくつかの実施形態では、アミドは、Ｎ，Ｎ−ジメチルプロピオンアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ブチルアミド、およびジメチルホルムアミドから成る群から選択される。いくつかの実施形態では、アミドはＮ，Ｎ−ジメチルプロピオンアミドである。いくつかの実施形態では、アミドはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドである。
＜ポリエーテル＞
特定の実施形態において、周囲温度におけるＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１以上の成分の実質的な安定した保存のための本明細書において記載される製剤は、ポリエーテルを含むこともある。ポリエーテルは２つ以上のエーテル官能基を含む高分子である。ポリエーテルは例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリオキシエチレン（ＰＯＥ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリテトラメチレングリコール（ＰＴＭＧ）、ポリテトラメチレンエーテルグリコール（ＰＴＭＥＧ）およびパラホルムアルデヒドを含む。芳香族ポリエーテルは例えば、ポリフェニルエーテル（ＰＰＥ）、およびポリ（ｐ−フェニレンオキシド）（ＰＰＯ）を含む。いくつかの実施形態では、ポリエーテルは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）、またはポリオキシエチレン（ＰＯＥ）である。いくつかの実施形態では、ポリエーテルはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の分子量は、３００ｇ／ｍｏｌから１０，０００，０００ｇ／ｍｏｌまでわたってもよい。いくつかの実施形態では、ポリエーテルはＰＥＧ ８０００である。いくつかの実施形態では、ポリエーテルはＰＥＧ ４００である。
＜キレート剤＞
キレート剤またはキレーターは、特定の実施形態によると、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１以上の成分の実質的に安定した保存のための本明細書に記載される製剤および組成物に含まれる。そのようなキレート剤は、金属カチオンと複合し、その反応を妨げるというそれらの能力に関して当業者に既知である。典型的なキレート剤は、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））、エチレングリコール四酢酸（ＥＧＴＡ）、ｔｒａｎｓ−１，２−ジアミノシクロヘキサン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸、１，２−ビス（２−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−三酢酸、グルコン酸ナトリウム、およびニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）を含む。いくつかの実施形態では、キレート化剤はＥＤＴＡである。いくつかの実施形態では、キレート剤は、約０．０１−０．１ｍＭ、約０．１−１．０ｍＭ、約１．０−５０ｍＭ、もしくは約１０−４０ｍＭ、または約２５ｍＭの濃度で存在する。
＜非還元糖＞
いくつかの実施形態では、周囲温度におけるＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤および組成物は、少なくとも１つの非還元糖を含む。本明細書において使用されるように、「非還元糖」は機能的なアルデヒド基を欠く炭水化物分子を指す。典型的な非還元糖はスクロースおよびトレハロースを含む。いくつかの実施形態では、非還元糖はスクロースである。いくつかの実施形態では、非還元糖はトレハロースである。いくつかの実施形態では、非還元糖は約１．０−５０ｍＭの濃度で存在する。いくつかの実施形態では、非還元糖は約１０．０−３０ｍＭの濃度で存在する。いくつかの実施形態では、非還元糖は約２５ｍＭの濃度で存在する。いくつかの実施形態では、非還元糖は、約２５−１００ｍＭ、約１００−５００ｍＭ、約２００−７００ｍＭ、約３００−８００ｍＭ、約４００−９００ｍＭ、または約５００−１０００ｍＭの濃度で存在する。いくつかの実施形態では、非還元糖は約４００−６００ｍＭの濃度で存在する。いくつかの実施形態では、非還元糖は約１％から約５０％（重量／体積）までの濃度で存在する。
界面活性剤または界面活性物質特定の実施形態において、周囲温度におけるＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤は、界面活性剤または界面活性物質を含む。特定の実施形態において、界面活性剤または界面活性物質は、ＴＲＩＴＯＮ Ｘ−１００ ４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェニル−ポリエチレングリコール、ＮＯＮＩＤＥＴ Ｐ−４０ ポリエチレングリコールモノ（オクチルフェニル）エーテル、ＢＲＩＪファミリーの界面活性剤のうちのいずれか、ＴＷＥＥＮファミリーの界面活性物質のうちのいずれか、ドデシル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、デオキシコール酸塩、オクチル−グルコピラノシド、ベタインなどから選択される。また、キレート剤が存在するとき、生体サンプルの特殊型式に関するものを含む、特定の考えられた実施形態は、明確に変性する界面活性剤の存在を除外する。また、特に、型の、およびタンパク質、ポリペプチドまたは核酸分子を変性するのに十分な濃度で界面活性剤の、それが注目されることになっている場合、特定の他の考えられた実施形態がそのように限定しない一方、その多くの界面活性剤および界面活性物質が全てでないにしても多くの型の生体サンプルに対して変性していない。
他の実施形態において、界面活性剤または界面活性物質はＴＯＭＡＭＩＮＥの界面活性剤であってもよい。ＴＯＭＡＭＩＮＥの界面活性剤の例は、ビス−（２−ヒドロキシエチル）イソデシルオキシプロピルアミン、ポリ（５）オキシエチレンイソデシルオキシプロピルアミン、ビス−（２−ヒドロキシエチル）イソトリデシルオキシプロピルアミン、ポリ（５）オキシエチレンイソトリデシルオキシプロピルアミン、ビス−（２−ヒドロキシエチル）直鎖アルキルオキシプロピルアミン、ビス（２−ヒドロキシエチル）大豆アミン、ポリ（１５）オキシエチレン大豆アミン、ビス（２−ヒドロキシエチル）オクタデシルアミン、ポリ（５）オキシエチレンオクタデシルアミン、ポリ（８）オキシエチレンオクタデシルアミン、ポリ（１０）オキシエチレンオクタデシルアミン、ポリ（１５）オキシエチレンオクタデシルアミン、ビス（２−ヒドロキシエチル）オクタデシルオキシプロピルアミン、ビス−（２−ヒドロキシエチル）牛脂アミン、ポリ（５）オキシエチレン牛脂アミン、ポリ（１５）オキシエチレン牛脂アミン、ポリ（３）オキシエチレン１，３ジアミノプロパン、ビス（２−ヒドロキシエチル）ココアミン、ビス−（２−ヒドロキシエチル）イソデシルオキシプロピルアミン、ポリ（５）オキシエチレンイソデシルオキシプロピルアミン、ビス−（２−ヒドロキシエチル）イソトリデシルオキシプロピルアミン、ポリ（５）オキシエチレンイソトリデシルオキシプロピルアミン、ビス−（２−ヒドロキシエチル）直鎖アルキルオキシプロピルアミン、ビス（２−ヒドロキシエチル）大豆アミン、ポリ（１５）オキシエチレン大豆アミン、ビス（２−ヒドロキシエチル）オクタデシルアミン、ポリ（５）オキシエチレンオクタデシルアミン、ポリ（８）オキシエチレンオクタデシルアミン、ポリ（１０）オキシエチレンオクタデシルアミン、ポリ（１５）オキシエチレンオクタデシルアミン、ビス（２−ヒドロキシエチル）オクタデシルオキシプロピルアミン、ビス−（２−ヒドロキシエチル）牛脂アミン、ポリ（５）オキシエチレン牛脂アミン、ポリ（１５）オキシエチレン牛脂アミン、ポリ（３）オキシエチレン１，３ジアミノプロパン、およびビス（２−ヒドロキシエチル）ココアミンを含む。
＜ホウ酸塩組成物＞
いくつかの実施形態では、ホウ酸塩組成物は、ホウ酸、ホウ酸塩、四ホウ酸ナトリウム、ホウ砂、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される化合物を含む。いくつかの実施形態では、ホウ酸塩組成物は、ホウ酸、四ホウ酸ナトリウム、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される化合物を含む。いくつかの実施形態では、ホウ酸塩組成物はホウ酸を含む。いくつかの実施形態では、ホウ酸塩組成物はホウ酸、および四ホウ酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、ホウ酸塩組成物は２ｍＭから３００ｍＭの濃度で存在する。いくつかの実施形態では、ホウ酸塩組成物は５ｍＭから５０ｍＭの濃度で存在する。
＜周囲温度におけるＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１以上の成分の安定化のための典型的な製剤＞
いくつかの実施形態では、周囲温度における、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物中の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤が本明細書において記載されており、その製剤は：（ｉ）ヒドロキシ酸と；（ｉｉ）ホウ酸塩組成物と；を含み、ここで、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、少なくとも３ヶ月の期間の間、周囲温度で保存した後に安定し続ける。いくつかの実施形態では、ヒドロキシ酸は式（Ｉ）の化合物から成る群から選択され：
式中、Ｒ１は、Ｈ、非置換のまたは置換されたアルキル、および非置換のまたは置換されたアリールから選択される。いくつかの実施形態では、ヒドロキシ酸は、乳酸、リンゴ酸、マロン酸、酒石酸、クエン酸、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される。いくつかの実施形態では、ヒドロキシ酸は乳酸である。いくつかの実施形態では、ホウ酸塩組成物は、ホウ酸、ホウ酸塩、四ホウ酸ナトリウム、ホウ砂、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される。いくつかの実施形態では、ホウ酸塩組成物は、ホウ酸、四ホウ酸ナトリウム、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、製剤は乳酸およびホウ酸を含む。いくつかの実施形態では、製剤は乳酸、ホウ酸、および四ホウ酸ナトリウムを含む。
いくつかの実施形態では、周囲温度における、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物中の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤が本明細書において記載されており、その製剤は：（ｉ）非還元糖と；（ｉｉ）緩衝液と；を含み、ここで、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、少なくとも３ヶ月間、周囲温度で保存した後に安定し続ける。いくつかの実施形態では、非還元糖はスクロースおよびトレハロースから成る群から選択される。いくつかの実施形態では、非還元糖はスクロースである。いくつかの実施形態では、緩衝液は、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、スルホサリチル酸、スルホイソフタル酸、シュウ酸、ホウ酸塩、ＣＡＰＳ（３−（シクロヘキシルアミノ）−１−プロパンスルホン酸）、ＣＡＰＳＯ（３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸）、ＥＰＰＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンプロパンスルホン酸）、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、ＭＥＳ（２−（Ｎ−モルフォリノ）エタンスルホン酸）、ＭＯＰＳ（３−（Ｎ−モルフォリノ）プロパンスルホン酸）、ＭＯＰＳＯ（３−モルフォリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＰＩＰＥＳ（１，４−ピペラジンジエタンスルホン酸）、ＴＡＰＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミノプロパンスルホン酸）、ＴＡＰＳＯ（２−ヒドロキシ−３−［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−１−プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、ビシン（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン）、トリシン（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン）、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、およびビス−トリス（２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール）、から成る群から選択される。いくつかの実施形態では、製剤はＴｒｉｓ−ＨＣｌを含む。いくつかの実施形態では、製剤はスクロースおよびＴｒｉｓ−ＨＣｌを含む。
いくつかの実施形態では、周囲温度における、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物中の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤が本明細書において記載されており、その製剤は：（ｉ）アミノスルホン酸または硫酸アンモニウムと；（ｉｉ）非還元糖、アミド、またはポリエチレングリコールの少なくとも１つと；を含み、ここで、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、少なくとも３ヶ月の期間の間、周囲温度で保存した後に安定し続ける。いくつかの実施形態では、製剤は、式（ＩＩ）の化合物から成る群から選択されるアミノスルホン酸を含み：
式中、Ｒ１およびＲ２は、Ｈ、非置換のまたは置換されたアルキル、および非置換のまたは置換されたアリールから独立して選択される。いくつかの実施形態では、アミノスルホン酸はタウリンである。いくつかの実施形態では、ｎは１から６までの数であってもよい。いくつかの実施形態では、ｎは他のいかなる数であってもよい。いくつかの実施形態では、製剤は硫酸アンモニウムを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、スクロースおよびトレハロースから成る群から選択される非還元糖を含む。いくつかの実施形態では、非還元糖はスクロースである。いくつかの実施形態では、製剤は式（ＩＩＩ）の化合物から成る群から選択されるアミドを含み：
式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、非置換のまたは置換されたアルキル、および非置換のまたは置換されたアリールから独立して選択される。いくつかの実施形態では、製剤は、Ｎ，Ｎ−ジメチルプロピオンアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ブチルアミド、およびジメチルホルムアミドから成る群から選択されるアミドを含む。いくつかの実施形態では、アミドはＮ，Ｎ−ジメチルプロピオンアミドである。いくつかの実施形態では、アミドはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドである。いくつかの実施形態では、アミドはジメチルイソブチルアミドである。いくつかの実施形態では、アミドはメチルプロピオンアミドである。いくつかの実施形態では、製剤はポリエチレングリコールを含む。いくつかの実施形態では、ポリエチレングリコールはＰＥＧ ８０００である。いくつかの実施形態では、ポリエチレングリコールはＰＥＧ ４００である。
いくつかの実施形態では、周囲温度における、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物中の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤が本明細書において記載されており、その製剤は：（ｉ）アミノスルホン酸と；（ｉｉ）アミノ酸と；を含み、ここで、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、少なくとも３ヶ月の期間の間、周囲温度で保存した後に安定し続ける。いくつかの実施形態では、製剤は式（ＩＩ）の化合物から成る群から選択されるアミノスルホン酸を含み：
式中、Ｒ１およびＲ２は、Ｈ、非置換のまたは置換されたアルキル、および非置換のまたは置換されたアリールから独立して選択される。いくつかの実施形態では、アミノスルホン酸はタウリンである。いくつかの実施形態では、製剤は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、およびベタインである。から成る群から選択されるアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸はベタインである。いくつかの実施形態では、その製剤はタウリンおよびベタインを含む。
いくつかの実施形態では、周囲温度における、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物中の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤が本明細書において記載されており、その製剤は：（ｉ）カルボン酸と；（ｉｉ）緩衝液と；を含み、ここで、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、少なくとも３ヶ月の期間の間、周囲温度で保存した後に安定し続ける。いくつかの実施形態では、カルボン酸はヒドロキシエクトインである。いくつかの実施形態では、緩衝液は、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、スルホサリチル酸、スルホイソフタル酸、シュウ酸、ホウ酸塩、ＣＡＰＳ（３−（シクロヘキシルアミノ）−１−プロパンスルホン酸）、ＣＡＰＳＯ（３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸）、ＥＰＰＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンプロパンスルホン酸）、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、ＭＥＳ（２−（Ｎ−モルフォリノ）エタンスルホン酸）、ＭＯＰＳ（３−（Ｎ−モルフォリノ）プロパンスルホン酸）、ＭＯＰＳＯ（３−モルフォリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＰＩＰＥＳ（１，４−ピペラジンジエタンスルホン酸）、ＴＡＰＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミノプロパンスルホン酸）、ＴＡＰＳＯ（２−ヒドロキシ−３−［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−１−プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、ビシン（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン）、トリシン（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン）、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、およびビス−トリス（２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール）、から成る群から選択される。いくつかの実施形態では、製剤はＴｒｉｓ−ＨＣｌを含む。いくつかの実施形態では、製剤はヒドロキシエクトインおよびＴｒｉｓ−ＨＣｌを含む。
いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤は、イオンを含む。いくつかの実施形態では、イオンは、ナトリウムイオンまたは塩素イオン、またはそれらの組み合わせである。
いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤は、キレート剤を含む。いくつかの実施形態では、キレート化剤はＥＤＴＡである。
いくつかの実施形態では、製剤は、タウリンの変異体を含む。いくつかの実施形態では、タウリン変異体はＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸である。
いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤は、界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、界面活性剤はＴｗｅｅｎ ２０またはＴｗｅｅｎ ８０である。
周囲温度におけるＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための典型的な製剤は、表１に示される。
＜周囲温度におけるＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１以上の成分を安定化させるための製剤を調製する方法＞
周囲温度におけるＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための本明細書において記載される製剤を調製する方法は、当業者に公知であり、一般的には市販されている試薬を使用する。いくつかの実施形態では、その製剤は、所望の濃度を形成する適切な比率のＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分と混合されるように、例えば２×、５×、１０×、２０×などの製剤試薬の濃縮貯蔵液として調製される。
＜周囲温度における、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の、安定して保存された成分の組成物＞
いくつかの実施形態では、周囲温度における、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の安定して保存された成分の組成物が提供される。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の安定して保存された成分は、本明細書において提供される製剤と混合される。
＜製品＞
特定の実施形態では、適切な入れ物または容器に入れられる、本明細書で提供される製剤を含む製品が提供される。これらの製品は、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のために使用されてもよい。いくつかの実施形態では、製剤は表１に明記されるものから選択される。いくつかの実施形態では、これらの製品は、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の成分の１つ以上のの実質的に安定した保存のために使用される。いくつかの実施形態では、これらの製品は本明細書に記載されるキットおよび方法において使用される。
＜キット＞
本発明の特定の態様では、本発明および添付文書の製剤を含む製品のいずれか１つを含むキットが提供される。いくつかの実施形態では、キットの成分は、仕切られたプラスチック包囲体などの容器内に提供される。いくつかの実施形態では、容器は、キットの内容物を使用前に保存するために滅菌し密閉することができるように、密閉して封ができるカバーを有する。
＜周囲温度でＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分を実質的に安定させて保存するための方法＞
本発明の他の態様では、方法は、周囲温度でＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分を実質的に安定させて保存するために提供される。
特定の実施形態では、方法は、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上混合物と、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための本明細書において記載される製剤と、を混合する工程を含み、ここで、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、少なくとも３ヶ月の期間の間保存した後に安定し続ける。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも６０％、少なくとも５５％、少なくとも５０％は、少なくとも３ヶ月の期間の間、周囲温度で安定し続ける。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の少なくとも８０％は、少なくとも３ヶ月の期間の間、周囲温度で安定し続ける。
いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも６０％、少なくとも５５％、少なくとも５０％は、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１１ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１５ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２１ヶ月、少なくとも２４ヶ月の期間の間、周囲温度で安定し続ける。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の少なくとも８０％は、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１１ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１５ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２１ヶ月、少なくとも２４ヶ月の期間の間、周囲温度で安定し続ける。
いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、ＰＣＲマスターミックスまたはＲＴ−ＰＣＲマスターミックスを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応の１つ以上の成分は、ＲＴ−ＰＣＲの内在性コントロール鋳型核酸を含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、Ａｒｍｏｒｅｄ ＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、ポリメラーゼを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、ＤＮＡポリメラーゼを含む。いくつかの実施形態では、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、Ａｒｍｏｒｅｄ ＲＮＡおよびポリメラーゼを含む。
特定の実施形態では、製剤は表１に記載される製剤の１つである。
本明細書に記載されるような方法では、本明細書に開示される製品およびキットが使用されることもある。
以下の実施例は、限定するためではなく例示するために提示される。
＜実施例１＞
＜周囲温度以上での少なくとも１ヶ月間のａＲＮＡの安定化＞
この実施例では、定量化の基準（ＱＳ）であるＡｒｍｏｒｅｄ ＲＮＡ（ａＲＮＡ）を安定化させるのための本発明の製剤および組成物が記載される。
７５μｌの量のａＲＮＡ貯蔵液（Ｒｏｃｈｅ；Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ＥＤＴＡ、ａｒｍｏｒｅｄ ＨＩＶ−１ ＲＮＡ、およびアジ化ナトリウムを含むキット＃０３５４２９９８ １９０の一部としての、ＨＩＶ−１ ＱＳに類似の組成物）を７５μｌの安定化剤と組み合わせて、明記された温度でインキュベートした。
注記した時点において、ａＲＮＡサンプルを熱破裂によって、またはＭａｇＮＡ Ｐｕｒｅ ｃｏｍｐａｃｔ ｔｏｔａｌ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｋｉｔを使用して処理した。
熱破裂のために、２μｌのａＲＮＡサンプルを１８μｌの溶出緩衝液（Ｒｏｃｈｅ；Ｔｒｉｓおよびメチルパラベンを含むキット＃０３５４２９９８ １９０の一部としての、ＥＢに類似の組成物）に添加した。その後、これを５分間かけて７０℃まで加熱し、直ちに氷の上に置いた。４μｌの量のこのサンプルを、以下の他の成分との、最終量が３５μｌのＲＴ−ＰＣＲ反応における鋳型として使用した：およそ１５００コピーのＨＩＶ標的ＲＮＡを含む１２．５μｌの溶出緩衝液、７μｌのＭｎ２＋溶液（Ｒｏｃｈｅ；酢酸マンガン、アジ化ナトリウム、酢酸を含むキット＃０３５４２９９８ １９０の一部としての、ＣＡＰ／ＣＭＴ Ｍｎ２＋に類似の組成物）、１μｌのＢＳＡ溶液（溶出緩衝液において５０ｍｇ／ｍｌ）、および１０．５μｌのＲＴ−ＰＣＲマスターミックス溶液（Ｒｏｃｈｅ；キット＃０３５４２９９８ １９０の一部としてのＨＩＶ−１ ＭＭＸに類似の組成物であるが、修飾されたポリメラーゼを使用し、かつトリシン、酢酸カリウム、水酸化カリウム、グリセロール、ジメチルスルホキシド、アジ化ナトリウム、ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＵＴＰ、ウラシルＮ−グリコシラーゼ、アプタマー、プライマー混合物、プローブ混合物を含み、ｐＨ８．１である）。
ＭａｇＮＡ Ｐｕｒｅ処理のために、ａＲＮＡサンプルの１０μｌを、およそ５０００コピーのＨＩＶ ＲＮＡを含む１９０μｌのヒト血漿に添加し、製造者の説明書に従い完全な核酸単離キットを使用して処理した。溶出容量は１００μｌであった。１６．５μｌの量の溶出液を、以下の他の成分との、最終量が３５μｌのＲＴ−ＰＣＲ反応における鋳型として使用した：７μｌのＭｎ２＋溶液１μｌのＢＳＡ溶液、および１０．５μｌのＲＴ−ＰＣＲマスターミックス溶液。
ＲＴ−ＰＣＲ反応を、以下のサイクル条件を用いて、ＢｉｏＲａｄ ＣＦＸ９６上で実行した：５５℃で３０秒間、６０℃で３０秒間、６５℃で３０秒間、９５℃で３秒間および５５℃で１５秒間を５サイクルした後にプレート読み取り、および９１℃で５秒間および５８℃で１５秒間を３８サイクルした後にプレート読み取り。
典型的な製剤を、以下の表２に示す。図１のＡ−Ｄにおけるデータは、製剤０１を含むサンプルがＮＦＣと比較して低いＣｔ値および向上した蛍光を有していたことを示し、それらのサンプルからのＲＮＡ産出量が増大したことを示す。図２のＡ−Ｂは、製剤０２を含むサンプルが、ＮＦＣと比較して低いＣｔ値を有していたことを示し、それらのサンプルからのＲＮＡ産出量が増大したことを示す。図３のＡ−Ｂは、製剤０１，０２、および０４を含むサンプルが、ＮＦＣと比較して低いＣｔ値を有していたことを示し、それらのサンプルからのＲＮＡ産出量が増大したことを示す。これらの実験で試験された全ての他の製剤は、ＮＦＣのＣｔ値以上の値を示したが、ＲＮＡ産出または安定化の改善は示さなかった。
＜実施例２＞
＜ＲＴ−ＰＣＲマスターミックスの安定化＞
この実施例では、ＲＴ−ＰＣＲマスターミックス（Ｒｏｃｈｅ；キット＃０３５４２９９８ １９０の一部としてのＨＩＶ−１ ＭＭＸに類似の組成物）を、高温において少なくとも１４日の期間の間安定化させるための本発明の製剤および組成物が記載される。
８４μｌの量の安定化剤を、８４μｌの１．５ｘ ＲＴ−ＰＣＲマスターミックスと組み合わせて、示された温度で保存した。各時点において、１４μｌのＲＴ−ＰＣＲマスターミックス−安定化剤混合物を、以下の他の成分との、３５μｌの最終量のＲＴ−ＰＣＲ反応に添加した：３．５μｌのＭｎ２＋溶液、１μｌのＢＳＡ溶液、およびおよそ１×１０４コピーの精製ＱＳ ＲＮＡ標的および１００コピーの精製ＨＩＶ ＲＮＡ標的を含む１６．５μｌの溶出緩衝液。 ＲＴ−ＰＣＲ反応を、以下のサイクル条件を用いて、ＢｉｏＲａｄ ＣＦＸ９６上で実行した：５５℃で３０秒間、６０℃で３０秒間、６５℃で３０秒間、９５℃で３秒間および５５℃で１５秒間を５サイクルした後にプレート読み取り、および９１℃で５秒間および５８℃で１５秒間を３８サイクルした後にプレート読み取り。
典型的な製剤を、以下の表３に示す。図４のＡ−Ｃのデータは、示された製剤を含むサンプルが、ＮＦＣと比較して、ＲＴ−ＰＣＲ標的の両方（ＨＩＶおよびＱＳ ＲＮＡ）のより低いＣｔ値を有していたことを示す。
文脈上特段の定めのない限り、本明細書と請求項を通して、単語「含む」およびその変異形態、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」や「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などは、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含むこと（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、または「〜を特徴とする（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ）」と交換可能に用いられ、包括的なもしくは制約のない言葉であり、追加の列挙されていない要素もしくは方法の工程を除外することはない。成句「〜から成る」は、請求項で特定されていない任意の要素、工程、または成分を除外する。成句「〜から本質的に成る」は、指定された材料もしくは工程、および請求された発明の基本的かつ新規な特徴に実質的に影響を与えないものへ、請求項の範囲を限定する。本開示は、こうした成句の各々の範囲に対応する本発明の組成物や方法の実施形態を企図するものである。したがって、詳述された要素もしくは工程を含む組成物または方法は、組成物または方法が、そうした要素もしくは工程から本質的に成るか、そうした要素または工程から成る特定の実施形態を企図する。
本明細書を通じて「１つの実施形態」もしくは「実施形態」、または「態様」の言及は、実施形態に関連して記載された特別な特徴、構造、または特性が、本発明の少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。したがって、本明細書の至る所で出てくる（「１つの実施形態では」）または（「実施形態では」）というフレーズは、必ずしもすべて同じ実施形態を指しているわけではない。さらに、特定の特色、構造、または特徴は、１つ以上の実施形態における任意の適切な方法で組み合わされてもよい。
上に記載された様々な実施形態は、さらなる実施形態を提供するために組み合わせることができる。こうした変更やそれ以外の変更は、上記の詳細な記載を考慮した上で実施形態へと行うことができる。一般的に、以下の請求項で使用される用語は、明細書および特許請求の範囲において開示される特定の実施形態へと主張を限定するものとして解釈されてはならず、こうした特許請求の範囲内にある等価物の十分な範囲と併せてすべての可能な実施形態を含むように解釈されなければならない。よって、請求項は本開示によって限定されることはない。
本発明の好ましい実施形態が本明細書中に示され記述された一方、そのような実施形態が一例としてしか提供されていないことは当業者にとって明白だろう。多くの変更、変化、および置換が、本発明から逸脱することなく当業者に想到されるであろう。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代案が、本発明の実施において利用されることもあることを理解されたい。以下の特許請求の範囲が本発明の範囲を定義するものであり、この特許請求の範囲内の方法および構造およびそれらの同等物がそれによって包含されることが意図されている。

Claims (28)

  1. 混合物であって、該混合物が：
    （ａ）周囲温度における、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤であって、その製剤は、
    （ｉ）ヒドロキシ酸と、
    （ｉｉ）ホウ酸塩組成物と、を含む製剤と；
    （ｂ）ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分と；を含み、
    ここで、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、少なくとも３ヶ月の期間の間、周囲温度で保存した後に安定し続ける、
    ことを特徴とする混合物。
  2. ヒドロキシ酸は、式（Ｉ）の化合物であって：
    式中、Ｒ１は、Ｈ、非置換のもしくは置換されたアルキル、または非置換のもしくは置換されたアリールから選択される、請求項１に記載の混合物。
  3. ヒドロキシ酸は、乳酸、リンゴ酸、マロン酸、酒石酸、クエン酸、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項１または２に記載の混合物。
  4. ヒドロキシ酸は乳酸である、請求項１から３のいずれか１つに記載の混合物。
  5. ホウ酸塩組成物は、ホウ酸、ホウ酸塩、四ホウ酸ナトリウム、ホウ砂、およびそれらの組み合わせから成る群から選択される化合物を含む、請求項１から４のいずれか１つに記載の混合物。
  6. 製剤は、（ｉ）乳酸およびホウ酸；または（ｉｉ）乳酸、ホウ酸、および四ホウ酸ナトリウムを含む、請求項１から５のいずれか１つに記載の混合物。
  7. ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、対照核酸を含む、請求項１から６のいずれか１つに記載の混合物。
  8. ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、Ａｒｍｏｒｅｄ ＲＮＡを含む、請求項１から６のいずれか１つに記載の混合物。
  9. 混合物であって、該混合物が：
    （ａ）周囲温度における、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤であって、その製剤は、
    （ｉ）非還元糖と、
    （ｉｉ）緩衝液と、を含む製剤と；
    （ｂ）ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分と；を含み、
    ここで、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、少なくとも３ヶ月間、周囲温度で保存した後に安定し続ける、
    ことを特徴とする混合物。
  10. 非還元糖はスクロースおよびトレハロースから成る群から選択される、請求項９に記載の混合物。
  11. 緩衝液は、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、スルホサリチル酸、スルホイソフタル酸、シュウ酸、ホウ酸塩、ＣＡＰＳ（３−（シクロヘキシルアミノ）−１−プロパンスルホン酸）、ＣＡＰＳＯ（３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸）、ＥＰＰＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンプロパンスルホン酸）、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、ＭＥＳ（２−（Ｎ−モルフォリノ）エタンスルホン酸）、ＭＯＰＳ（３−（Ｎ−モルフォリノ）プロパンスルホン酸）、ＭＯＰＳＯ（３−モルフォリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＰＩＰＥＳ（１，４−ピペラジンジエタンスルホン酸）、ＴＡＰＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミノプロパンスルホン酸）、ＴＡＰＳＯ（２−ヒドロキシ−３−［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−１−プロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、ビシン（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン）、トリシン（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン）、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、およびビス−トリス（２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール）から成る群から選択される、請求項９または１０に記載の混合物。
  12. 製剤はスクロースおよびＴｒｉｓ−ＨＣｌを含む、請求項９から１１のいずれか１つに記載の混合物。
  13. 混合物であって、該混合物が：
    （ａ）周囲温度における、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の実質的に安定した保存のための製剤であって、その製剤は、
    （ｉ）アミノスルホン酸または硫酸アンモニウムと、
    （ｉｉ）非還元糖、アミド、またはポリエチレングリコールの少なくとも１つと、を含む製剤と；
    （ｂ）ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分と；を含み、
    ここで、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、少なくとも３ヶ月の期間の間、周囲温度で保存した後に安定し続ける、
    ことを特徴とする混合物。
  14. 製剤は式（ＩＩ）のアミノスルホン酸を含み：
    式中、Ｒ１およびＲ２は、Ｈ、非置換のまたは置換されたアルキル、および非置換のまたは置換されたアリールから独立して選択される、請求項１３に記載の混合物。
  15. アミノスルホン酸はタウリンである、請求項１３または１４に記載の混合物。
  16. 製剤は硫酸アンモニウムを含む、請求項１３に記載の混合物。
  17. 製剤は、スクロースおよびトレハロースから成る群から選択される非還元糖を含む、請求項１３から１６のいずれか１つに記載の混合物。
  18. 非還元糖はスクロースである、請求項１３から１７のいずれか１つに記載の混合物。
  19. 製剤は、式（ＩＩＩ）の化合物から成る群から選択されるアミドを含み：
    式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、非置換のまたは置換されたアルキル、および非置換のまたは置換されたアリールから独立して選択される、請求項１３から１８のいずれか１つに記載の混合物。
  20. 製剤は、Ｎ，Ｎ−ジメチルプロピオンアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ブチルアミド、およびジメチルホルムアミドから成る群から選択されるアミドを含む、請求項１３から１８のいずれか１つに記載の混合物。
  21. 製剤はジメチルイソブチルアミドを含む、請求項１３から１８のいずれか１つに記載の混合物。
  22. 製剤はメチルプロピオンアミドを含む、請求項１３から１８のいずれか１つに記載の混合物。
  23. 製剤はポリエチレングリコールを含む、請求項１３から１８のいずれか１つに記載の混合物。
  24. ポリエチレングリコールはＰＥＧ ８０００またはＰＥＧ ４００である、請求項２３の混合物。
  25. ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、ポリメラーゼを含む、請求項１から２４のいずれか１つに記載の混合物。
  26. 周囲温度においてＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分を実質的に安定させて保存するための方法であって、該方法は：
    ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分と、
    ａ）ヒドロキシ酸およびホウ酸塩組成物を含む製剤；
    ｂ）非還元糖および緩衝液を含む製剤；ならびに
    ｃ）ｉ）アミノスルホン酸、または硫酸アンモニウム；およびｉｉ）非還元糖、アミド、またはポリエチレングリコールの少なくとも１つ；を含む製剤；から成る群から選択される製剤と、
    を混合する工程を含み、
    ここで、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、少なくとも３ヶ月の期間の間、周囲温度で保存した後に安定し続ける、ことを特徴とする方法。
  27. ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分の少なくとも８０％は、少なくとも３ヶ月の期間の間、周囲温度で安定し続ける、請求項２６に記載の方法。
  28. ＰＣＲもしくはＲＴ−ＰＣＲの反応混合物の１つ以上の成分は、ＲＴ−ＰＣＲマスターミックス、ＲＴ−ＰＣＲ内在性コントロール鋳型核酸、またはそれらの組み合わせである、請求項２６または２７に記載の方法。
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