JP2019201611A

JP2019201611A - 細胞シートの剥離方法

Info

Publication number: JP2019201611A
Application number: JP2018100700A
Authority: JP
Inventors: 昭二西田; Shoji Nishida; 守西谷; Mamoru Nishitani; 憲志杉山; Kenji Sugiyama
Original assignee: Fujifilm Corp
Current assignee: Fujifilm Corp
Priority date: 2018-05-25
Filing date: 2018-05-25
Publication date: 2019-11-28

Abstract

【課題】培養基板から剥離した細胞シートを、シート状態を維持したまま回収することができる細胞シートの剥離方法を提供する。【解決手段】培養基板の表面で培養された細胞シートの一端側から培養基板と細胞シートとの間にローラを挿入し、培養基板と、培養基板に対向して配置された回収基板との間にローラ及び細胞シートを挟み、培養基板と細胞シートとの間で、細胞シートの一端側から他端側にローラを移動させつつローラの移動方向に対して逆方向にローラを回転させることで、細胞シートを培養基板から剥離しつつ細胞シートの培養基板から剥離した部分を回収基板の表面に付着させる。【選択図】図１Ｄ

Description

開示の技術は、細胞シートの剥離方法に関する。

接着培養方式によって培養基板上に細胞を培養することにより形成される細胞シートを、培養基板から剥離する技術として、以下の技術が知られている。

例えば、特許文献１には、培養容器を構成するフィルムの、細胞の付着面に対向する面を細胞に接触させて細胞に圧力を加えることにより、細胞を培養容器から剥離する細胞剥離方法が記載されている。

特開２０１５−８６６７号公報

接着培養方式によって培養基板上に細胞を培養することにより形成される細胞シートは、例えば、再生医療製品に用いられている。

細胞シートを、培養基板から剥離する前処理として、酵素剤等の薬液による処理または培養基板の温度調整を行うことにより、培養基板と細胞との接着性をコントロールする手法が知られている。しかしながら、細胞シートは、非常に薄く、柔軟で、伸縮性を有するため、培養基板から剥離した細胞を、シート状態を維持したまま回収することは容易ではない。上記の特許文献１に記載の技術は、細胞を培養容器から選択的に剥離するものであり、剥離した細胞シートを、シート状態を維持したまま回収することを想定していない。

開示の技術は、培養基板から剥離した細胞シートを、シート状態を維持したまま回収することを目的とする。

開示の技術の係る細胞シートの剥離方法の第１の態様は、培養基板の表面で培養された細胞シートの一端側から培養基板と細胞シートとの間にローラを挿入し、培養基板と、培養基板に対向して配置された回収基板との間にローラ及び細胞シートを挟み、培養基板と細胞シートとの間で、細胞シートの一端側から他端側にローラを移動させつつローラの移動方向に対して逆方向にローラを回転させることで、細胞シートを培養基板から剥離しつつ細胞シートの培養基板から剥離した部分を回収基板の表面に付着させる、というものである。

この態様によれば、細胞シートの培養基板からの剥離と、細胞シートの培養基板から剥離した部分の回収基板への回収とが並列的且つ連続的に行われる。従って、培養基板から剥離した細胞シートを、シート状態を維持したまま回収することが可能となる。

開示の技術に係る細胞シートの剥離方法の第２の態様は、培養基板の表面で培養された細胞シートの表面にキャリアシートを貼り付け、細胞シートの一端側から培養基板と細胞シートとの間にローラを挿入し、培養基板と、培養基板に対向して配置された回収基板との間に、ローラ、細胞シート及びキャリアシートを挟み、培養基板と細胞シートとの間で、細胞シートの一端側から他端側にローラを移動させつつローラの移動方向に対して逆方向にローラを回転させることで、細胞シートを培養基板から剥離しつつ細胞シートの培養基板から剥離した部分を、キャリアシートを介して回収基板の表面に付着させる、というものである。

この態様によれば、上記第１の態様と同様の効果を得ることができる。更に、培養基板から剥離した細胞シートを、回収基板との間にキャリアシートを介在させた状態で回収基板に回収することができる。

開示の技術に係る細胞シートの剥離方法の第３の態様は、回収基板の表面にキャリアシートを貼り付け、培養基板の表面で培養された細胞シートの一端側から培養基板と細胞シートとの間にローラを挿入し、培養基板と回収基板との間に、ローラ、細胞シート及びキャリアシートを挟み、培養基板と細胞シートとの間で、細胞シートの一端側から他端側にローラを移動させつつローラの移動方向に対して逆方向にローラを回転させることで、細胞シートを培養基板から剥離しつつ細胞シートの培養基板から剥離した部分をキャリアシートの表面に付着させる、というものである。

開示の技術に係る剥離方法の第１の態様において、回収基板の表面に設けられた吸引孔から細胞シートを吸引してもよい。これにより、細胞シートと回収基板との密着力を大きくすることができ、回収基板に回収された細胞シートの、回収基板からの剥離を抑制することができる。

開示の技術に係る剥離方法の第２及び第３の態様において、回収基板の表面に設けられた吸引孔からキャリアシートを吸引してもよい。これにより、キャリアシートと回収基板との密着力を大きくすることができる。

開示の技術に係る剥離方法の第１の態様において、細胞シートと回収基板間の密着力が、細胞シートとローラとの密着力よりも大きいことが好ましい。これにより、培養基板から剥離した細胞シートの回収基板への回収を、円滑に行うことが可能となる。

開示の技術に係る剥離方法の第２及び第３の態様において、細胞シートとキャリアシートとの密着力及びキャリアシートと回収基板との密着力が、細胞シートとローラとの密着力よりも大きいことが好ましい。これにより、培養基板から剥離した細胞シートの回収基板への回収を、円滑に行うことが可能となる。

開示の技術に係る剥離方法の第１乃至第３の態様において、ローラの周速度は、ローラの移動速度と同じであることが好ましい。これにより、細胞シートの培養基板からの剥離と、細胞シートの培養基板から剥離した部分の回収基板への回収とを、並列的且つ連続的に行う動作を更に安定させることができる。また、ローラの移動に伴う、細胞シートとローラとの摩擦を最小とすることができ、細胞シートの損傷を抑制する効果を促進することができる。

開示の技術に係る剥離方法の第１乃至第３の態様において、ローラの移動及び回転を、細胞シートの外側から開始させることが好ましい。これにより、培養基板と細胞シートとの間へのローラの挿入が容易となる。

開示の技術に係る剥離方法の第１乃至第３の態様において、ローラの表面は撥水性を有することが好ましい。これにより、ローラと細胞シートとの密着力を小さくすることができ、培養基板から剥離した細胞シートの回収基板への回収を、円滑に行うことが可能となる。

開示の技術によれば、培養基板から剥離した細胞シートを、シート状態を維持したまま回収することが可能となる。

培養基板の表面で培養された細胞シートを示す図である。細胞シートの一端側から培養基板と細胞シートとの間にローラを挿入した状態を示す図である。培養基板と回収基板との間にローラ及び細胞シートを挟んだ状態を示す図である。培養基板と細胞シートとの間でローラを移動させつつローラを回転させることで、細胞シートを培養基板から剥離している途中の状態を示す図である。細胞シートの培養基板からの剥離が完了する直前の状態を示す図である。回収基板に回収された細胞シートを示す図である。ローラの移動及び回転を細胞シートの外側から開始させる場合を示す図である。培養基板と回収基板の上下を反転させて細胞シートの剥離を行う場合を示す図である。吸引孔を有する回収基板に細胞シートを付着させる場合を示す図である。培養基板の表面で培養された細胞シートの表面にキャリアシートを貼り付けた状態を示す図である。細胞シートの一端側から培養基板と細胞シートとの間にローラを挿入した状態を示す図である。培養基板と回収基板との間にローラ及び細胞シートを挟んだ状態を示す図である。培養基板と細胞シートとの間でローラを移動させつつローラを回転させることで、細胞シートを培養基板から剥離している途中の状態を示す図である。細胞シートの培養基板からの剥離が完了する直前の状態を示す図である。培養基板から剥離された細胞シートが、回収基板との間にキャリアシートを介在させた状態で回収基板に回収された状態を示す図である。吸引孔を有する回収基板にキャリアシートを付着させる場合を示す図である。回収基板の表面にキャリアシートを貼り付けた状態を示す図である。細胞シートの一端側から培養基板と細胞シートとの間にローラを挿入した状態を示す図である。培養基板と回収基板との間にローラ、細胞シート及びキャリアシートを挟んだ状態を示す図である。培養基板と細胞シートとの間でローラを移動させつつローラを回転させることで、細胞シートを培養基板から剥離している途中の状態を示す図である。細胞シートの培養基板からの剥離が完了する直前の状態を示す図である。培養基板から剥離された細胞シートが、回収基板との間にキャリアシートを介在させた状態で回収基板に回収された状態を示す図である。吸引孔を有する回収基板にキャリアシートを付着させる場合を示す図である。

以下、本発明の実施形態の一例を、図面を参照しつつ説明する。なお、各図面において同一または等価な構成要素および部分には同一の参照符号を付与し、重複する説明は適宜省略する。

［第１の実施形態］
図１Ａ〜図１Ｆは、開示の技術の第１の実施形態に係る細胞シート２０の剥離方法の一例を示す図である。

図１Ａに示すように、細胞シート２０は、接着培養方式により培養基板１０上に細胞を培養することにより形成される。培養基板１０の材質、形状及び大きさは、特に限定されるものではなく、その表面に細胞を接着させた状態で培養することが可能なものであればよい。本実施形態に係る剥離方法によって細胞シート２０を培養基板１０から剥離する場合、培養基板１０を平坦面上に固定しておくことが好ましい。また、本実施形態に係る剥離方法を実施する前に、酵素剤等を用いた薬液処理等の前処理を行って、細胞シート２０と培養基板１０との接着力を弱めておくことが好ましい。

本実施形態に係る剥離方法では、図１Ｂ〜図１Ｅに示すように、ローラ３０が用いられる。ローラ３０は、回転軸３１の周りに回転可能であり、回転軸３１の軸方向と直交する方向に移動可能である。ローラ３０の形状の典型例は、円柱形とされるが、これに限定されるものではない。なお、回転軸３１は、機械部品として実在する回転軸に限らず、仮想的な回転軸を含む概念である。ローラ３０の材料として、例えば金属または樹脂を用いることが可能である。

第１の実施形態に係る剥離方法は、図１Ｂに示すように、培養基板１０の表面で培養された細胞シート２０の一端側から、培養基板１０と細胞シート２０との間にローラ３０を挿入する第１のステップを含む。細胞シート２０は、ローラ３０が挿入される一端部を剥離開始部として培養基板１０から剥離する。細胞シート２０の培養基板１０から剥離した部分が、ローラ３０の表面を覆う。

第１の実施形態に係る剥離方法は、図１Ｃに示すように、培養基板１０と、培養基板１０に対向して配置された回収基板４０との間に、ローラ３０及び細胞シート２０を挟む第２のステップを含む。これにより、細胞シート２０の、ローラ３０を覆う一端部が、回収基板４０に接触する。回収基板４０は、培養基板１０から剥離した細胞シート２０を回収するための基板である。

第１の実施形態に係る剥離方法は、図１Ｄ及び図１Ｅに示すように、培養基板１０と細胞シート２０との間で、細胞シート２０の一端側から他端側にローラ３０を移動させつつローラ３０の移動方向に対して逆方向にローラ３０を回転させることで、細胞シート２０を、培養基板１０から剥離しつつ、細胞シート２０の培養基板１０から剥離した部分を回収基板４０の表面に付着させる第３のステップを含む。すなわち、ローラ３０は、培養基板１０と細胞シート２０との間に挟まれた状態で、培養基板１０の表面に沿って、細胞シート２０の一端側から他端側に移動する。ローラ３０の回転方向が、ローラ３０の移動方向に対して逆方向であるとは、ローラ３０の回転によってローラ３０が培養基板１０上を転がるとした場合、その転がりによるローラ３０の運動方向が、ローラ３０の移動方向と逆方向であることを意味する。

ローラ３０を細胞シート２０の一端側から他端側に移動させることで、細胞シート２０の剥離位置が、剥離開始部となる一端部から他端部に向けて移動する。また、培養基板１０と回収基板４０との間にローラ３０及び細胞シート２０を挟み、且つ培養基板１０と細胞シート２０との間にローラ３０を挟んだ状態で、ローラ３０を培養基板１０の表面に沿って移動させることで、細胞シート２０の、培養基板１０から剥離した部分は、ローラ３０によって持ち上げられ、ローラ３０と回収基板４０との間に挟まれる。これにより、細胞シート２０の、培養基板１０から剥離した部分には、当該部分を回収基板４０に押し付ける押圧力が作用する。これにより、細胞シート２０の、培養基板１０から剥離した部分が回収基板４０に付着し、回収基板４０に回収される。この第３のステップによれば、細胞シート２０の培養基板１０からの剥離と、細胞シート２０の培養基板１０から剥離した部分の回収基板４０への回収とが、並列的且つ連続的に行われる。

ローラ３０の移動方向に対して逆方向にローラ３０を回転させることで、細胞シート２０を培養基板１０から離間させる方向の力が細胞シート２０に作用する。これにより、細胞シート２０の培養基板１０からの剥離が促進される。また、ローラ３０の回転方向をローラ３０の移動方向に対して逆方向とすることにより、細胞シート２０の培養基板１０から剥離した部分を、回収基板４０に送ることができる。更に、ローラ３０の回転方向をローラ３０の移動方向に対して逆方向とすることにより、ローラ３０の移動に伴う、細胞シート２０とローラ３０との摩擦を抑制することができる。仮に、ローラ３０を回転させない場合又はローラ３０の回転方向をローラ３０の移動方向に対して順方向とした場合には、ローラ３０は、細胞シート２０の培養基板１０から剥離した部分を擦りながら移動することとなる。これにより、細胞シート２０が損傷するおそれがある。一方、ローラ３０の回転方向をローラ３０の移動方向に対して逆方向とした場合には、ローラ３０は、細胞シート２０の培養基板１０から剥離した部分を転がるように移動するので、細胞シート２０の培養基板１０から剥離した部分とローラ３０との摩擦を抑制することができる。これにより、細胞シート２０が損傷するリスクを抑制することができる。

ローラ３０の周速度は、ローラ３０の移動速度と同じであることが好ましい。ローラ３０の周速度とは、回転軸３１の周りに回転するローラ表面の、ローラ表面に沿った移動速度である。ローラ３０の周速度とローラ３０の移動速度とを一致させることで、細胞シート２０を培養基板１０から剥離する剥離速度と、細胞シート２０の培養基板１０から剥離した部分を回収基板４０に送る送り速度とを一致させることができる。これにより、細胞シート２０の培養基板１０からの剥離と、細胞シート２０の培養基板１０から剥離した部分の回収基板４０への回収とを、並列的且つ連続的に行う動作を更に安定させることができる。

また、ローラ３０の周速度とローラ３０の移動速度とを一致させることで、ローラ３０の移動に伴う、細胞シート２０とローラ３０との摩擦を最小とすることができ、細胞シート２０が損傷するリスクを抑制する効果を促進することができる。ローラ３０の移動速度及び周速度は、適宜設定することが可能であるが、例えば、３０ｍｍ／ｓｅｃ以下とすることで、細胞シート２０の剥離及び回収動作の安定性を高めることができる。

ローラ３０の移動が完了すると、図１Ｆに示すように、細胞シート２０の全体が、回収基板４０に付着する。すなわち、培養基板１０から剥離された細胞シート２０が、回収基板４０に回収される。

開示の技術の第１の実施形態に係る剥離方法によれば、細胞シート２０の培養基板１０からの剥離と、細胞シート２０の培養基板１０から剥離した部分の回収基板４０への回収とが並列的且つ連続的に行われる。従って、培養基板１０から剥離した細胞シート２０を、シート状態を維持したまま（すなわち、細胞シート２０を収縮させることなく）回収基板４０上に回収することが可能となる。また、シート状態を維持したままでの細胞シート２０の回収を安定的に行うことができる。

本実施形態に係る剥離方法においては、図２に示すように、ローラ３０の移動及び回転を、細胞シート２０の外側から開始させることが好ましい。これにより、培養基板１０と細胞シート２０との間へのローラ３０の挿入が容易となる。

細胞シート２０と回収基板４０との密着力が、細胞シート２０とローラ３０との密着力よりも大きいことが好ましい。これにより、培養基板１０から剥離した細胞シート２０の回収基板４０への回収を円滑に行うことが可能となる。上記の密着力は、例えば、ＩＳＯ２９８６２：２００７（ＪＩＳＺ０２３７：２００９）に準拠した９０°剥離試験によって測定される剥離力［Ｎ／ｃｍ］を適用してもよい。

また、ローラ３０の表面は、撥水性を有していることが好ましい。これにより、ローラ３０と細胞シート２０との密着力を小さくすることができ、培養基板１０から剥離した細胞シート２０の回収基板４０への回収を円滑に行うことが可能となる。ローラ３０の表面の撥水性は、例えば、純水の接触角によって評価することが可能である。ローラ３０の表面における純水の接触角は、８０°以上であることが好ましく、１００°以上１２０°以下が更に好ましい。ローラ３０の表面における純水の接触角を８０°以上とすることで、細胞シート２０の培養基板１０からの剥離を良好に行うことができる。ローラ３０の表面における純水の接触角を１２０°以下とすることで、撥水性が高すぎることに起因して、細胞シート２０の培養基板１０からの剥離が困難となる状況を回避できる。ローラ３０の表面への撥水性の付与は、例えばローラ３０の表面材質にテフロン（登録商標）等のフッ素系樹脂を使用すること、及びローラ３０の表面にフッ素系材料をコーティングすること等により実現できる。

また、上記の実施形態では、培養基板１０の上方に回収基板４０を配置する場合を例示したが、図３に示すように、培養基板１０の下方に回収基板４０を配置してもよい。

また、図４に示すように、回収基板４０は、細胞シート２０が付着する表面に複数の吸引孔４１を備えていてもよい。この場合、培養基板１０から剥離した細胞シート２０は、ローラ３０から加えられる押圧と吸引孔４１からの吸引とにより回収基板４０に付着する。細胞シート２０の吸引方法は、例えば真空吸引であってもよい。このように、細胞シート２０を吸引孔４１から吸引することで、細胞シート２０と回収基板４０との密着力を大きくすることができ、回収基板４０に回収された細胞シート２０の、回収基板４０からの剥離を抑制することができる。

［第２の実施形態］
図５Ａ〜図５Ｆは、開示の技術の第２の実施形態に係る細胞シート２０の剥離方法の一例を示す図である。

第２の実施形態に係る剥離方法は、図５Ａに示すように、培養基板１０の表面で培養された細胞シート２０の表面にキャリアシート５０を貼り付ける第１のステップを含む。キャリアシート５０は、細胞シート２０のハンドリングに用いられるシートである。キャリアシート５０の材質は、特に限定されるものではないが、細胞シート２０との密着性を高めるために、吸水性を有していることが好ましく、水分を含んだ状態で細胞シート２０に貼り付けられることが好ましい。キャリアシート５０の面積は、細胞シート２０の面積と同じか、細胞シート２０の面積よりも大きいことが好ましい。

第２の実施形態に係る剥離方法は、図５Ｂに示すように、細胞シート２０の一端側から培養基板１０と細胞シート２０との間にローラ３０を挿入する第２のステップを含む。細胞シート２０は、ローラ３０が挿入される一端部を剥離開始部として培養基板１０から剥離する。細胞シート２０の剥離した部分が、キャリアシート５０に覆われた状態でローラ３０の表面を覆う。

第２の実施形態に係る剥離方法は、図５Ｃに示すように、培養基板１０と、培養基板１０に対向して配置された回収基板４０との間にローラ３０、細胞シート２０及びキャリアシート５０を挟む第３のステップを含む。キャリアシート５０の、ローラ３０の挿入位置に対応する一端部が、回収基板４０に接触する。

第２の実施形態に係る剥離方法は、図５Ｄ及び図５Ｅに示すように、培養基板１０と細胞シート２０との間で、細胞シート２０の一端側から他端側にローラ３０を移動させつつローラ３０の移動方向に対して逆方向にローラ３０を回転させることで、細胞シート２０を培養基板１０から剥離しつつ細胞シート２０の培養基板１０から剥離した部分を、キャリアシート５０を介して回収基板４０の表面に付着させる第４のステップを含む。すなわち、ローラ３０は、培養基板１０と細胞シート２０との間に挟まれた状態で、培養基板１０の表面に沿って、細胞シート２０の一端側から他端側に移動する。

ローラ３０を細胞シート２０の一端側から他端側に移動させることで、細胞シート２０の剥離位置が、剥離開始部となる一端部から他端部に向けて移動する。また、培養基板１０と回収基板４０との間にローラ３０、細胞シート２０及びキャリアシート５０を挟み、且つ培養基板１０と細胞シート２０との間にローラ３０を挟んだ状態で、ローラ３０を培養基板１０の表面に沿って移動させることで、細胞シート２０の、培養基板１０から剥離した部分は、キャリアシート５０と共にローラ３０によって持ち上げられ、キャリアシート５０と共にローラ３０と回収基板４０との間に挟まれる。これにより、細胞シート２０の、培養基板１０から剥離した部分、及びキャリアシート５０の、細胞シート２０の剥離部分を覆う部分には、これらの部分を回収基板４０に押し付ける押圧力が作用する。これにより、細胞シート２０の、培養基板１０から剥離した部分が、キャリアシート５０を介して回収基板４０に付着し、回収基板４０に回収される。この第４のステップによれば、細胞シート２０の培養基板１０からの剥離と、細胞シート２０の培養基板１０から剥離した部分の回収基板４０への回収とが、並列的且つ連続的に行われる。

ローラ３０の移動方向に対して逆方向にローラ３０を回転させることにより、細胞シート２０の培養基板１０からの剥離が促進される。また、ローラ３０の回転方向をローラ３０の移動方向に対して逆方向とすることにより、細胞シート２０の培養基板１０から剥離した部分を、回収基板４０に送ることができる。また、ローラ３０の回転方向をローラ３０の移動方向に対して逆方向とすることにより、ローラ３０の移動に伴う、細胞シート２０とローラ３０との摩擦を抑制することができる。

ローラ３０の移動が完了すると、図５Ｆに示すように、細胞シート２０の全体が、キャリアシート５０を介して回収基板４０に付着する。すなわち、培養基板１０から剥離された細胞シート２０が、回収基板４０との間にキャリアシート５０を介在させた状態で回収基板４０に回収される。

第２の実施形態に係る剥離方法によれば、第１の実施形態に係る剥離方法と同様、培養基板１０から剥離した細胞シート２０を、シート状態を維持したまま（すなわち、細胞シート２０を収縮させることなく）回収することが可能となる。また、シート状態を維持したままでの細胞シート２０の回収を安定的に行うことができる。

また、第２の実施形態に係る剥離方法によれば、細胞シート２０は、回収基板４０との間にキャリアシート５０を介在させた状態で回収基板４０上に回収される。従って、例えば、回収基板４０上に回収された細胞シート２０を次工程に送る場合に、キャリアシート５０を用いて細胞シート２０をハンドリングすることができる。具体的には、キャリアシート５０を把持して、回収基板４０から細胞シート２０を剥離することが可能である。キャリアシート５０を用いて細胞シート２０をハンドリングすることで、細胞シート２０が損傷するリスクを抑制することが可能となる。

本実施形態に係る剥離方法においても、図２に示す例に倣って、ローラ３０の移動及び回転を、細胞シート２０の外側から開始させることが好ましい。これにより、培養基板１０と細胞シート２０との間へのローラ３０の挿入が容易となる。また、細胞シート２０とキャリアシート５０との密着力及びキャリアシート５０と回収基板４０との密着力が、細胞シート２０とローラ３０との密着力よりも大きいことが好ましい。これにより、培養基板１０から剥離した細胞シート２０の回収基板４０への回収を、円滑に行うことが可能となる。また、上記の実施形態では、培養基板１０の上方に回収基板４０を配置する場合を例示したが、図３に示す例に倣って、培養基板１０の下方に回収基板４０を配置してもよい。

また、図６に示すように、回収基板４０は、キャリアシート５０が付着する表面に複数の吸引孔４１を備えていてもよい。この場合、キャリアシート５０は、ローラ３０から加えられる押圧と吸引孔４１からの吸引とにより回収基板４０に付着する。キャリアシート５０を吸引孔４１から吸引することで、キャリアシート５０と回収基板４０との密着力を大きくすることができる。

［第３の実施形態］
図７Ａ〜図７Ｅは、開示の技術の第３の実施形態に係る細胞シート２０の剥離方法の一例を示す図である。

第３の実施形態に係る剥離方法は、図７Ａに示すように、回収基板４０の表面にキャリアシート５０を貼り付ける第１のステップを含む。

第３の実施形態に係る剥離方法は、図７Ｂに示すように、培養基板１０の表面で培養された細胞シート２０の一端側から培養基板１０と細胞シート２０との間にローラ３０を挿入する第２のステップを含む。細胞シート２０は、ローラ３０が挿入される一端部を剥離開始部として培養基板１０から剥離する。細胞シート２０の剥離した部分が、ローラ３０の表面を覆う。

第３の実施形態に係る剥離方法は、図７Ｃに示すように、培養基板１０と回収基板４０との間にローラ３０、細胞シート２０及びキャリアシート５０を挟む第３のステップを含む。すなわち、細胞シート２０の、ローラ３０を覆う一端部が、回収基板４０に貼り付けられたキャリアシート５０に接触する。

第３の実施形態に係る剥離方法は、図７Ｄ及び図７Ｅに示すように、培養基板１０と細胞シート２０との間で、細胞シート２０の一端側から他端側にローラ３０を移動させつつローラ３０の移動方向に対して逆方向にローラ３０を回転させることで、細胞シート２０を培養基板１０から剥離しつつ細胞シート２０の培養基板１０から剥離した部分をキャリアシート５０の表面に付着させる第４のステップを含む。すなわち、ローラ３０は、培養基板１０と細胞シート２０との間に挟まれた状態で、培養基板１０の表面に沿って、細胞シート２０の一端側から他端側に移動する。

ローラ３０を細胞シート２０の一端側から他端側に移動させることで、細胞シート２０の剥離位置が、剥離開始部となる一端部から他端部に向けて移動する。また、培養基板１０と回収基板４０との間にローラ３０、細胞シート２０及びキャリアシート５０を挟み、且つ培養基板１０と細胞シート２０との間にローラ３０を挟んだ状態で、ローラ３０を培養基板１０の表面に沿って移動させることで、細胞シート２０の、培養基板１０から剥離した部分は、ローラ３０によって持ち上げられ、ローラ３０とキャリアシート５０との間に挟まれる。これにより、細胞シート２０の、培養基板１０から剥離した部分には、当該部分をキャリアシート５０に押し付ける押圧力が作用する。これにより、細胞シート２０の培養基板１０から剥離した部分がキャリアシート５０に付着し、回収基板４０に回収される。この第４のステップによれば、細胞シート２０の培養基板１０からの剥離と、細胞シート２０の培養基板１０から剥離した部分の回収基板４０への回収とが、並列的且つ連続的に行われる。

ローラ３０の移動が完了すると、図７Ｆに示すように、細胞シート２０の全体が、回収基板４０に貼り付けられたキャリアシート５０に付着する。すなわち、培養基板１０から剥離された細胞シート２０が、回収基板４０との間にキャリアシート５０を介在させた状態で回収基板４０に回収される。

第３の実施形態に係る剥離方法によれば、第１の実施形態に係る剥離方法と同様、培養基板１０から剥離した細胞シート２０を、シート状態を維持したまま（すなわち、細胞シート２０を収縮させることなく）回収することが可能となる。また、シート状態を維持したままでの細胞シート２０の回収を安定的に行うことができる。

また、第３の実施形態に係る剥離方法によれば、細胞シート２０は、回収基板４０との間にキャリアシート５０を介在させた状態で回収基板４０上に回収される。従って、例えば、回収基板４０上に回収された細胞シート２０を次工程に送る場合に、キャリアシート５０を用いて細胞シート２０をハンドリングすることができる。具体的には、キャリアシート５０を把持して、回収基板４０から細胞シート２０を剥離することが可能である。キャリアシート５０を用いて細胞シート２０をハンドリングすることで、細胞シート２０が損傷するリスクを抑制することが可能となる。

また、図８に示すように、回収基板４０は、キャリアシート５０が付着する表面に複数の吸引孔４１を備えていてもよい。キャリアシート５０を吸引孔４１から吸引することで、キャリアシート５０と回収基板４０との密着力を大きくすることができる。

１０培養基板
２０細胞シート
３０ローラ
３１回転軸
４０回収基板
４１吸引孔
５０キャリアシート

Claims

培養基板の表面で培養された細胞シートの一端側から前記培養基板と前記細胞シートとの間にローラを挿入し、
前記培養基板と、前記培養基板に対向して配置された回収基板との間に前記ローラ及び前記細胞シートを挟み、
前記培養基板と前記細胞シートとの間で、前記細胞シートの前記一端側から他端側に前記ローラを移動させつつ前記ローラの移動方向に対して逆方向に前記ローラを回転させることで、前記細胞シートを前記培養基板から剥離しつつ前記細胞シートの前記培養基板から剥離した部分を前記回収基板の表面に付着させる
細胞シートの剥離方法。
培養基板の表面で培養された細胞シートの表面にキャリアシートを貼り付け、
前記細胞シートの一端側から前記培養基板と前記細胞シートとの間にローラを挿入し、
前記培養基板と、前記培養基板に対向して配置された回収基板との間に、前記ローラ、前記細胞シート及び前記キャリアシートを挟み、
前記培養基板と前記細胞シートとの間で、前記細胞シートの前記一端側から他端側に前記ローラを移動させつつ前記ローラの移動方向に対して逆方向に前記ローラを回転させることで、前記細胞シートを前記培養基板から剥離しつつ前記細胞シートの前記培養基板から剥離した部分を、前記キャリアシートを介して前記回収基板の表面に付着させる
細胞シートの剥離方法。
回収基板の表面にキャリアシートを貼り付け、
培養基板の表面で培養された細胞シートの一端側から前記培養基板と前記細胞シートとの間にローラを挿入し、
前記培養基板と前記回収基板との間に、前記ローラ、前記細胞シート及び前記キャリアシートを挟み、
前記培養基板と前記細胞シートとの間で、前記細胞シートの前記一端側から他端側に前記ローラを移動させつつ前記ローラの移動方向に対して逆方向に前記ローラを回転させることで、前記細胞シートを前記培養基板から剥離しつつ前記細胞シートの前記培養基板から剥離した部分を前記キャリアシートの表面に付着させる
細胞シートの剥離方法。
前記回収基板の表面に設けられた吸引孔から前記細胞シートを吸引する
請求項１に記載の剥離方法。
前記回収基板の表面に設けられた吸引孔から前記キャリアシートを吸引する
請求項２または請求項３に記載の剥離方法。
前記細胞シートと前記回収基板との密着力が、前記細胞シートと前記ローラとの密着力よりも大きい
請求項１に記載の剥離方法。
前記細胞シートと前記キャリアシートとの密着力及び前記キャリアシートと前記回収基板との密着力が、前記細胞シートと前記ローラとの密着力よりも大きい
請求項２または請求項３に記載の剥離方法。
前記ローラの周速度は、前記ローラの移動速度と同じである
請求項１から請求項７のいずれか１項に記載の剥離方法。
前記ローラの移動及び回転を、前記細胞シートの外側から開始させる
請求項１から請求項８のいずれか１項に記載の剥離方法。
前記ローラの表面は撥水性を有する
請求項１から請求項９のいずれか１項に記載の剥離方法。