JP2019170382A - 色調を抑えた茶ペプチド組成物及びその製造方法 - Google Patents
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Abstract
Description
茶葉にはタンパク質が約20重量%〜40重量%含まれていることが報告されているが、そのほとんどは水不溶性の膜タンパク質であることが報告されている。そのため、茶葉から茶やカテキンを熱水抽出した後の残渣にはほとんどのタンパク質が残存している。しかしながら現状では、茶葉の抽出残渣の食品としての有効利用はほとんど行われておらず、主として廃棄されている。一方、茶葉中のタンパク質を酵素分解することによりACE阻害活性を有するペプチドを産生することが可能であることが報告されており、その製造方法も報告されている(例えば、特許文献4参照。)。
一方、特許文献4では茶葉を原料とするペプチドの製造方法が記載されており、その製法は茶葉中のタンパク質を効率的に抽出するためにアルカリ条件化で処理し、中性エンドペプチダーゼ活性を有する酵素製剤及び酸性エキソペプチダーゼ活性を有する酵素製剤で分解し、pH2〜5に調整することで未反応タンパク質を沈殿させ、抽出残渣と未反応タンパク質を除去し、酵素反応液を得る工程を特徴としている。しかしながらこの製法では、茶葉中に存在するカテキンがアルカリと反応し、得られたペプチド組成物が黒く変色する。更にこのペプチド組成物を飲食品、特に茶系飲料に添加すると、飲料が黒く変色する。更にこのペプチド組成物にはアルカリと反応したカテキンが混入しており、添加すると独特のエグ味が付与され、飲食品の本来の風味を損なうという課題を有している。
本発明の目的は、飲食品、特に茶系飲料に添加した際に本来飲食品が有している色調、風味に影響を与えない、ペプチド含量が30重量%以上であり、色調を抑えた茶ペプチド組成物、及びそのペプチド組成物の製造法を提供することにある。さらに非重合体カテキン類を一定量含有し、含量比として非重合体カテキン類/ペプチドが0.02〜0.3を含有することを特徴とする茶ペプチド組成物を提供することにある。これに加え、本茶ペプチド組成物をペプチドとして0.16重量%添加した時に、添加前の飲料との色調差ΔEが15以下である、飲料の製造方法を提供することにある。これにより血圧降下作用、ACE阻害活性作用が期待され、食用として扱い易い、茶ペプチド組成物を提供することにある。
具体的には、色調が0.2以下であり、ペプチド含量が30重量%以上である茶ペプチド組成物は、飲食品が本来有している独特の色調、風味を損なうことなく飲食品に添加可能であることを見出した。更にこのようなペプチド組成物の製造方法を検討した結果、(a)茶葉又は茶葉抽出残渣をpH3.0〜7.0、70℃〜95℃の熱水で30分〜12時間処理することで茶葉熱水処理品又は茶葉抽出残渣熱水処理品を得る工程、かつ(b)茶葉熱水処理品又は茶葉抽出残渣熱水処理品を酵素で分解した酵素反応液を得る工程を行うことで、簡便かつ効率的に製造できることを見出した。さらに非重合体カテキン類を一定量含有し、含量比として非重合体カテキン類/ペプチドが0.02〜0.3を含有することにより、ACE活性阻害が増強されることを見出した。更に本ペプチド組成物をペプチドとして0.16重量%添加した時に、添加前の飲料との色調差ΔEが15以下である、飲料の製造方法を見出し、本発明の完成に至った。
すなわち、本発明は以下のとおりである。
(1)色調が0.2以下であり、ペプチド含量が30重量%以上である茶ペプチド組成物。
(2)茶葉又は茶葉抽出残渣を酵素で分解して酵素反応物を得る工程、又は茶葉熱水処理品又は茶葉抽出残渣熱水処理品を酵素で分解して酵素反応物を得る工程を有する前記(1)記載の茶ペプチド組成物の製造方法。
(3)茶葉又は茶葉抽出残渣をpH3.0〜7.0、70℃〜95℃の熱水で30分〜12時間処理することで茶葉熱水処理品又は茶葉抽出残渣熱水処理品を得る工程を有する前記(1)又は(2)記載の茶ペプチド組成物の製造方法。
(4)茶葉熱水処理品又は茶葉抽出残渣熱水処理品を得る工程の茶葉又は茶葉抽出残渣を処理するpHが3.0〜5.0である前記(3)記載の茶ペプチド組成物の製造方法。
(5)茶葉又は茶葉抽出残渣が、茶葉を溶媒で抽出した後の茶葉抽出残渣である前記(2)〜(4)いずれか記載の茶ペプチド組成物の製造方法。
(6)前記(1)記載の茶ペプチド組成物を含有する飲食品。
(7)飲食品が飲料である前記(6)記載の飲食品。
(8)飲食品が容器詰め飲料である前記(6)記載の飲食品。
(9)非重合体カテキン類を一定量含有し、含量比として非重合体カテキン類/ペプチドが0.02〜0.3である前期(1)記載の茶ペプチド組成物。
(10)前記(1)又は(9)記載の茶ペプチド組成物をペプチドとして0.16重量%添加した時に、添加前の飲料との色調差ΔEが15以下である、容器詰め飲料の製造方法。
(11)前記(1)又は(9)記載の茶ペプチド組成物を、ペプチドとして0.16重量%添加した時に、添加前の飲料との色調差ΔEが10以下である、容器詰め茶系飲料の製造方法。
(12)前記(1)又は(9)記載の茶ペプチド組成物を含有する血圧降下作用を有する飲料。
(13)前記(1)又は(9)記載の茶ペプチド組成物を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する飲料。
(14)前記(1)又は(9)記載の茶ペプチド組成物を含有する血圧降下組成物。
(15)前記(1)又は(9)記載の茶ペプチド組成物を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害組成物。
(16)前記(14)又は(9)記載の血圧降下組成物を含有する飲料。
(17)前記(15)又は(9)記載のアンジオテンシン変換酵素阻害組成物を含有する飲料。
本発明における茶ペプチド組成物は色調が0.2以下であり、ペプチド含量が30重量%以上、より好ましくは30重量%〜65重量%であることを特徴とする。さらに非重合体カテキン類を一定量含有し、含量比として非重合体カテキン類/ペプチドが0.02〜0.3を含有することを特徴とする。色調、ペプチド含量、非重合体カテキン類含量は後述の方法によって算出することができる。
本発明におけるペプチド含量は以下の方法に従って測定した。
茶ペプチド組成物10mgをイオン交換水50mlに溶解させ、ペプチド溶液を調製した。調製したペプチド溶液1mlとニンヒドリン溶液1mlを混合して沸騰水中で15分反応させた後、50%エタノール5mlを加え氷水中で反応を停止させた。
この反応液を測定波長570nmで吸光度(A570)を測定(Agilent社製 Cary60 UV−Vis)し、検量線よりペプチド含量を算出した。
検量線は、ジペプチドであるカルノシンを用いて、ジペプチド換算でのペプチド含量に対する吸光度(A570)より求めた。
上記ニンヒドリン溶液は、ニンヒドリン0.8g、ヒドリンダンチン0.12gにメチルセルソルブ30ml、4N酢酸ナトリウム緩衝液(pH5.5)10mlを加え調製した。
本発明における色調は以下の方法に従って測定した。
茶ペプチド組成物をペプチドとして0.02重量%になるようにイオン交換水で溶解した。本溶液を測定波長500nmで吸光度(A500)を測定(Agilent社製 Cary60 UV−Vis)し、この時の吸光度(A500)を色調とした。
本発明における色調差ΔEは以下の方法に従って測定した。
茶ペプチド組成物をペプチドとして0.02重量%になるように飲料中に溶解した。茶ペプチド組成物添加前の飲料と上述の添加後の飲料の色調を測定(Agilent社製 Cary60 UV−Vis)しL、a、bの値を得た。両者の色調差ΔEは数1の計算式により算出した。
本発明におけるACE阻害活性は以下の方法に従って測定した。
ACE Kit−WST(株式会社 同仁化学研究所社製)を用いて、茶ペプチド組成物のACE阻害活性を測定した。また、茶ペプチド組成物の濃度を段階的に調製し、それぞれの阻害率を導き、反応溶液中の茶ペプチド組成物濃度を横軸、阻害率を縦軸として、各結果をプロットし、得られる曲線が50%の阻害率を通過する時の茶ペプチド組成物濃度をIC50値とした。
本発明における非重合体カテキン類は以下の方法に従って測定した。
茶ペプチド組成物を測定可能な濃度(0.02〜2%)になるよう超純水で適宜溶解し、その溶液をフィルター(0.45μm)でろ過し、島津製作所製、高速液体クロマトグラフ(型式SCL−10AVP)を用い、Cep−pakC18カラム(4.6mm×10mm:資生堂製)を装着し、カラム温度40℃で分析した。移動相はメタノール/水/リン酸=17/83/0.5溶液とし、試料注入量は10μL、UV検出器波長は280nmの条件で行った。
ここで検出された(+)−カテキン、(−)−エピカテキン、(−)−ガロカテキン、(−)−カテキンガレート、(−)−エピカテキンガレート、(−)−ガロカテキンガレート、(−)−エピガロカテキンガレート、(−)−エピガロカテキンなどの、非重合体カテキン類の含量を合計し、非重合体カテキン類含量とした。
以下、実施例及び比較例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定するものではない。
茶ペプチドの製造方法
茶葉100gに対して水を1000g加えて80℃で2時間処理後、ろ過することにより茶葉抽出残渣を回収した。
回収した茶葉抽出残渣に水を1000g加え、実施例1〜4においては、1Nクエン酸水溶液及び/又は1Nクエン酸ナトリウム水溶液によって表1記載のpHに調整し、比較例1及び2においては、1N水酸化ナトリウム水溶液で比較例1及び2の表1記載のpHに調整し、85℃、1時間攪拌し、茶葉抽出残渣熱水処理品を得た。その後、1N水酸化ナトリウム水溶液にてpH7.0に調整し、サモアーゼC160を10g添加し60℃で1時間酵素反応した。反応終了後、塩酸でpH5.0に調整しスミチームACP−Gを10g添加し、60℃で1時間酵素反応し、90℃、10分間加熱処理して酵素を失活することで酵素反応液を得た。
酵素反応液を固液分離により固形分を除去し、凍結乾燥機(以下FDと省略)により粉末化し茶ペプチド組成物を得た。茶ペプチド組成物中のペプチド含量はニンヒドリン反応により定量した。
結果を表1に示す。
茶ペプチドの製造方法
茶葉100gに対して水を1000g加えて80℃で2時間処理後、ろ過することにより茶葉抽出残渣を回収した。
回収した茶葉抽出残渣に水を1000g加え、1Nクエン酸水溶液によってpH4.0に調整し表2記載の温度で1時間攪拌し、茶葉抽出残渣熱水処理品を得た。その後、1N水酸化ナトリウム水溶液にてpH7.0に調整し、サモアーゼC160を10g添加し60℃で1時間酵素反応した。反応終了後、塩酸でpH5.0に調整しスミチームACP−Gを10g添加し、60℃で1時間酵素反応し、90℃、10分間加熱処理して酵素を失活することで酵素反応液を得た。
酵素反応液を固液分離により固形分を除去し、FDにより粉末化し茶ペプチド組成物を得た。茶ペプチド組成物中のペプチド含量はニンヒドリン反応により定量した。
結果を表2に示す。
茶ペプチドの製造方法
茶葉100gに対して水を1000g加えて80℃で2時間処理後、ろ過することにより茶葉抽出残渣を回収した。
回収した茶葉抽出残渣に水を1000gの水を加え、1Nクエン酸水溶液によってpH4.0に調整し、85℃で表3記載の時間攪拌し、茶葉抽出残渣熱水処理品を得た。その後、1N水酸化ナトリウム水溶液にてpH7.0に調整し、サモアーゼC160を10g添加し60℃で1時間酵素反応した。反応終了後、塩酸でpH5.0に調整しスミチームACP−Gを10g添加し、60℃で1時間酵素反応し、90℃、10分間加熱処理して酵素を失活することで酵素反応液を得た。
酵素反応液を固液分離により固形分を除去し、FDにより粉末化し茶ペプチド組成物を得た。茶ペプチド組成物中のペプチド含量はニンヒドリン反応により定量した。
結果を表3に示す。
茶ペプチドの製造方法
茶葉100gに対して水を1000g加えて80℃で2時間処理後、ろ過することにより茶葉抽出残渣を回収した。再度、茶葉抽出残渣に対して水を1000g加えて80℃で2時間処理後、ろ過する操作を表4記載の抽出回数を繰り返し、茶葉抽出残渣を回収した。
回収した茶葉抽出残渣に1000gの水を加え、1Nクエン酸水溶液によってpH4.0に調整し、85℃で1時間攪拌し、茶葉抽出残渣熱水処理品を得た。1N水酸化ナトリウム水溶液にてpH7.0に調整し、サモアーゼC160を10g添加し60℃で1時間酵素反応した。反応終了後、1N塩酸水溶液でpH5.0に調整しスミチームACP−Gを10g添加し、60℃で1時間酵素反応し、90℃、10分間加熱処理して酵素を失活することで酵素反応液を得た。
酵素反応液を固液分離により固形分を除去し、FDにより粉末化し茶ペプチド組成物を得た。茶ペプチド組成物中のペプチド含量はニンヒドリン反応により定量した。
結果を表4に示す。
茶ペプチドの製造方法
茶葉100gに対して50%含水エタノールを1000g加えて80℃で2時間処理後、ろ過することにより茶葉抽出残渣を回収した。
回収した茶葉抽出残渣に1000gの水を加え、1Nクエン酸水溶液によってpH4.0に調整し、85℃で1時間攪拌し、茶葉抽出残渣熱水処理品を得た。1N水酸化ナトリウム水溶液にてpH7.0に調整し、サモアーゼC160を10g添加し60℃で1時間酵素反応した。反応終了後、1N塩酸水溶液でpH5.0に調整しスミチームACP−Gを10g添加し、60℃で1時間酵素反応し、90℃、10分間加熱処理して酵素を失活することで酵素反応液を得た。
酵素反応液を固液分離により固形分を除去し、FDにより粉末化し茶ペプチド組成物を得た。茶ペプチド組成物中のペプチド含量はニンヒドリン反応により定量した。
結果を表5に示す。
実施例1〜12、比較例1〜4にて製造した茶ペプチド組成物の色調を測定した結果、表1〜5の結果となった。
茶ペプチド組成物含有飲料の官能評価
実施例1〜12、比較例1〜4にて製造した茶ペプチド組成物を下記の酸糖液処方にペプチドとして500mgになるように添加し、5名のパネラーにより官能評価(色味、エグ味)を実施した。下記の評価基準に従い、それぞれの平均点を算出した。結果を表6に示す。
(重量%)
1.砂糖 10.0
2.クエン酸(結品) 0.08
3.クエン酸三ナトリウム pHを調整(pH3)
4.水 残部
合計 100
1:無添加品に比べて色味が大きく変化している。
2:無添加品に比べて色味が変化している。
3:無添加品に比べて色味がわずかに変化している。
4:無添加品に比べて変化なし。
1:無添加品に比べてエグ味を強く感じる。
2:無添加品に比べてエグ味を感じる。
3:無添加品に比べてエグ味をわずかに感じる。
4:無添加品に比べて変化なし。
処方例1:グレープフルーツ飲料
下記のグレープフルーツ飲料処方に実施例1〜9、比較例1〜4にて製造した茶ペプチド組成物をペプチドとして500mgとなるように添加した。本品は飲料として好適に利用できる。
(重量%)
1.グレープフルーツ濃縮果汁 2.0
2.ブドウ糖果糖混合液糖 0.9
3.マルチトール 2.0
4.クエン酸 0.3
5.ビタミンC 0.02
6.香料 0.1
7.水 残部
合計 100
下記のインスタント茶処方に実施例1〜12、比較例1〜4にて製造した茶ペプチド組成物をペプチドとして500mgとなるように添加した。本品は飲料として好適に利用できる。
茶抽出物粉末としてはカメリアエキス(太陽化学社製)を使用した。
(重量%)
1.茶抽出物粉末 60.0
2.サイクロデキストリン 15.0
3.ソーマチン 0.0075
4.デキストリン 24.0
5.ビタミンC 1.0
合計 100
下記のゼリー処方に実施例1〜12、比較例1〜4にて製造した茶ペプチド組成物をペプチドとして500mgとなるように添加した。本品は食品として好適に利用できる。
(重量%)
1.砂糖 10.0
2.レモン濃縮果汁 8.5
3.クチナシ黄色製剤 0.04
4.クエン酸 1.0
5.カラギナン 1.5
6.ビタミンC 0.02
7.香料 0.2
8.水 残部
合計 100
下記の錠剤処方に実施例1〜12、比較例1〜4にて製造した茶ペプチド組成物をペプチドとして500mgとなるように添加した。本品は健康食品として好適に利用できる。
(重量%)
1.マルチトール 81.2
2.トレハロース 15.2
3.酒石酸塩 3.0
4.ステアリン酸Ca 0.5
5.ビタミンC 0.02
6.香料 0.08
合計 100
1:無添加品に比べて色味が大きく変化している。
2:無添加品に比べて色味が変化している。
3:無添加品に比べて色味がわずかに変化している。
4:無添加品に比べて変化なし。
1:無添加品に比べてエグ味を強く感じる。
2:無添加品に比べてエグ味を感じる。
3:無添加品に比べてエグ味をわずかに感じる。
4:無添加品に比べて変化なし。
実施例1〜12、比較例1〜4にて製造した茶ペプチド組成物を、ペプチドとして0.16重量%となるように市販のお茶(「おーいお茶」、伊藤園社製)にそれぞれ溶解し、100ml容のガラス管にホットパック充填(93℃)した。
得られた飲料を常温、37℃、55℃で1か月間静置し、沈殿の有無を確認した。
沈殿が観察されなかったものを〇、沈殿が観察されたものを×とした。結果を表8に示す。
なお、ここで示す常温とは、日本工業規格(JIS Z 8703)にて規定される5℃〜35℃の温度である。
実施例1〜12、比較例1〜4にて製造した茶ペプチド組成物をペプチドとして0.16重量%となるように市販のコーヒー飲料(無糖)(「ワンダゴールド ブラック」、アサヒ飲料社製)、緑茶飲料(「おーいお茶」、伊藤園社製)、烏龍茶飲料(「烏龍茶」、サントリー社製)、麦茶飲料(「GREEN DA・KA・RAやさしい麦茶」、サントリー社製)、炭酸飲料(無糖)(「南アルプスの天然水スパークリング」、サントリー社製)、野菜ジュース(「野菜生活100」、カゴメ社製)に添加した際の添加前後での飲料の色調差ΔEを評価した。5名のパネラーにより官能評価(色味)を実施した。下記の評価基準に従い、それぞれの平均点を算出した。結果を表9に示す。
1:無添加品に比べて色味が非常に大きく変化している。
2:無添加品に比べて色味が大きく変化している。
3:無添加品に比べて色味が変化している。
4:無添加品に比べて色味がわずかに変化している。
5:無添加品に比べて変化なし。
実施例1〜12、比較例1〜4にて製造した茶ペプチド組成物のACE阻害活性のIC50を測定した。結果を表10に示す。
実施例2にて製造した茶ペプチド組成物についてラットを用いた試験を行った。ラットはチャールズリバー社から購入した12週齢の雄のSHR(自然発症高血圧ラット)を使用した。1週間予備飼育した後、試験に供した。対照区として蒸留水を用いた。
試験群毎に5匹のラットを体重のバラツキが少なくなるように群分けした。実施例2にて製造した茶ペプチド組成物については蒸留水にて1.2mg/mlに調製し、ラット体重当りの投与量が3.3ml/kg(茶ペプチド組成物として4mg/kgに相当)となるようにゾンデによる経口投与した。蒸留水はラット体重当り3.3ml/kgとなるようにゾンデによる経口投与した。投与後、4時間及び6時間後に収縮期血圧を非観血式血圧測定装置(ソフトロン社製BP−98A−L)で測定した。それぞれ4回測定し、その平均値を測定値とした。
結果を表11に示す。
Claims (8)
- 色調が0.2以下であり、ペプチド含量が30重量%以上である茶ペプチド組成物。
- 茶葉又は茶葉抽出残渣を酵素で分解して酵素反応物を得る工程、又は茶葉熱水処理品又は茶葉抽出残渣熱水処理品を酵素で分解して酵素反応物を得る工程を有する請求項1記載の茶ペプチド組成物の製造方法。
- 茶葉熱水処理品又は茶葉抽出残渣熱水処理品を得る工程が、茶葉又は茶葉抽出残渣をpH3.0〜7.0、70℃〜95℃の熱水で30分〜12時間処理する工程である請求項2記載の茶ペプチド組成物の製造方法。
- 茶葉熱水処理品又は茶葉抽出残渣熱水処理品を得る工程の、茶葉又は茶葉抽出残渣を処理するpHが3.0〜5.0である請求項2又は3記載の茶ペプチド組成物の製造方法。
- 請求項1記載の茶ペプチド組成物を含有する飲食品。
- 非重合体カテキン類を含有し、含量比として非重合体カテキン類/ペプチドが0.02〜0.3である請求項1記載の茶ペプチド組成物。
- 請求項1又は6記載の茶ペプチド組成物をペプチドとして0.16重量%添加した時に、添加前の飲料との色調差ΔEが10以下である容器詰め飲料の製造方法。
- 請求項1又は6記載の茶ペプチド組成物を含有する血圧降下作用及び/又はアンジオテンシン変換酵素阻害作用を有する飲料。
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