JP2019059700A - Labial hyaluronic acid production promoter - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、口唇用のヒアルロン酸産生促進剤、及びこれを評価又はスクリーニングする方法に関する。 The present invention relates to a hyaluronic acid production promoter for the lip, and a method of evaluating or screening the same.
ハリがあり、ふっくらとした厚み感がある口唇は、若々しい印象を与えるため、これを叶える手法に対する需要は高い。例えば、化粧料としては、塗布することによりぷっくりとした外観を演出するリップグロス等がある。また、口唇に直接的にハリやボリュームを持たせるため、口唇にヒアルロン酸を注入する美容医療も実施されている。しかしながら、非侵襲的でかつ効果の高い、口唇のボリューム向上用の外用剤はないため望まれている。 There is a firm, plump and thick lip that gives a youthful impression, so there is a high demand for methods that can compensate for this. For example, as a cosmetic, there is a lip gloss or the like which produces a pleasing appearance by applying. In addition, cosmetic medicine is also practiced in which hyaluronic acid is injected into the lips in order to make the lips have firmness and volume directly. However, it is desirable because there is no noninvasive and highly effective external preparation for lip volume enhancement.
一般に、肌にハリやボリュームを持たせるための成分としてはヒアルロン酸が知られており、真皮におけるヒアルロン酸量を増加させるための皮膚外用剤の有効成分として種々の植物抽出物が報告されている。（特許文献１、２）。しかしながら、これらの植物抽出物については、一般的な部位の真皮の線維芽細胞や表皮の角化細胞におけるヒアルロン酸量を増加させる作用が確認されるにとどまり、特に口唇に適用した場合の有効性については検討されてこなかった。 In general, hyaluronic acid is known as a component for giving firmness and volume to the skin, and various plant extracts have been reported as active ingredients of skin external preparations for increasing the amount of hyaluronic acid in the dermis. . (Patent documents 1 and 2). However, these plant extracts have only been confirmed to have the effect of increasing the amount of hyaluronic acid in fibroblasts in the dermis and keratinocytes in the epidermis at general sites, and are particularly effective when applied to the lips Was not considered.
本発明者らが検討したところ、特許文献１や２にヒアルロン酸量を増加させる作用を有することが開示されている植物抽出物は、口唇由来の線維芽細胞に対してはヒアルロン酸産生量を増加させる作用を示さなかった（後述の参考例）。
このことから、本発明者らは、口唇の線維芽細胞と口唇以外の部位の線維芽細胞とでは、ヒアルロン酸産生促進に対する応答性が異なることを見出し、口唇に適したヒアルロン酸産生促進剤の探索及びその評価方法の確立の必要性に想到した。
したがって、本発明は、口唇用のヒアルロン酸産生促進剤、及び口唇のボリューム向上用の外用組成物を提供することを目的とする。また、かかる剤を評価又はスクリーニングするための方法を確立することを目的とする。
As examined by the present inventors, plant extracts disclosed in Patent Documents 1 and 2 to have an action to increase the amount of hyaluronic acid produce the amount of hyaluronic acid produced to fibroblasts derived from the lip. It did not show an action to increase (Reference example described later).
From this, the present inventors found that the fibroblasts of the lip and the fibroblasts of sites other than the lip differ in their responsiveness to the promotion of hyaluronan production, and it is a hyaluronic acid production promoter suitable for the lip I thought about the necessity of the search and the establishment of the evaluation method.
Therefore, an object of the present invention is to provide a hyaluronic acid production promoter for the lip and an external composition for enhancing the volume of the lip. Another object is to establish a method for evaluating or screening such an agent.
本発明者らは、鋭意研究の結果、口唇由来の線維芽細胞を用いれば、口唇用のヒアルロン酸産生促進剤を評価又はスクリーニングできることに想到した。そして、該方法によりジユ抽出物及びセイヨウボダイジュ抽出物が、口唇由来の線維芽細胞に対して優れたヒアルロン酸産生促進作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。 As a result of earnest studies, the present inventors have conceived that use of lip-derived fibroblasts enables evaluation or screening of a hyaluronic acid production promoter for the lip. Then, it was found by the method that the extract of Citrus japonicum and the extract of the horse mackerel have excellent hyaluronan production promoting action on fibroblasts derived from the lip, and the present invention has been completed.
すなわち、本発明は以下の通りである。
[１]ジユ抽出物及び／又はセイヨウボダイジュ抽出物からなる、口唇用のヒアルロン酸産生促進剤。
[２][１]に記載の口唇用のヒアルロン酸産生促進剤を含有する、口唇のボリューム向上用の外用組成物。
[３]化粧料（医薬部外品を含む）である、[２]に記載の外用組成物。
[４]口唇由来の線維芽細胞を用いることを特徴とする、口唇用のヒアルロン酸産生促進剤を評価又はスクリーニングする方法。
[５]被験物質を口唇由来の線維芽細胞に添加する工程、及び被験物質を添加した口唇由来の線維芽細胞におけるヒアルロン酸産生量が、被験物質を添加しなかった口唇由来の線維芽細胞における産生量と比較して大きい被験物質を、口唇用のヒアルロン酸産生促進作用を有すると判断する工程、を含む、[４]に記載の方法。
That is, the present invention is as follows.
[1] A hyaluronic acid production promoter for the lip, which comprises a jyu extract and / or a horse mackerel extract.
[2] A composition for improving lip volume comprising the hyaluronic acid production promoter for the lips according to [1].
[3] The externally applied composition according to [2], which is a cosmetic (including quasi drugs).
[4] A method for evaluating or screening a hyaluronic acid production promoter for the lip, characterized by using a fibroblast derived from the lip.
[5] A step of adding a test substance to lip-derived fibroblasts, and a hyaluronic acid production amount in lip-derived fibroblasts to which the test substance is added is in lip-derived fibroblasts to which the test substance has not been added Determining the test substance having a large activity as compared to the production amount as having a hyaluronic acid production promoting effect for the lip, The method according to [4].
本発明により、口唇におけるヒアルロン酸産生を促進させ、該産生量を増加させることができるヒアルロン酸産生促進剤を提供される。また、該ヒアルロン酸産生促進剤を口唇用の外用組成物に含有させることにより、口唇のボリューム向上用途に好適に供することができる。また、口唇用のヒアルロン酸産生促進剤を、適切に評価又は探索することができる方法が提供される。 The present invention provides a hyaluronic acid production promoter capable of promoting hyaluronic acid production in the lips and increasing the production amount. In addition, by containing the hyaluronic acid production promoting agent in the composition for external use for the lips, it can be suitably used for volume improvement of the lips. In addition, there is provided a method capable of appropriately evaluating or searching for a hyaluronic acid production promoter for the lip.
＜１＞口唇用のヒアルロン酸産生促進剤
本発明の口唇用のヒアルロン酸産生促進剤は、ジユ（地楡、ワレモコウ、吾木香、吾亦紅、Sanguisorba officinalis）抽出物及び／又はセイヨウボダイジュ（西洋菩提樹、Tilia platyphyllos）抽出物からなる。
上記植物抽出物は、通常化粧料や医薬品の皮膚外用組成物に用いられるものであればよい。例えば、該植物由来の抽出物自体のみならず、抽出物の画分、精製した画分、抽出物乃至は画分、精製物の溶媒除去物も含でよい。また、該植物抽出物は、自生若しくは生育された植物、漢方生薬原料等として販売されるものを用いた抽出物、市販されている抽出物等であってもよい。
抽出操作は、植物部位の全草を用いるほか、植物体、地上部、根茎部、木幹部、葉部、茎部、花穂、花蕾等の部位を使用することできるが、予めこれらを粉砕あるいは細切して抽出効率を向上させることが好ましい。抽出溶媒としては、水、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノールなどのアルコール類、１，３−ブタンジオール、ポリプロピレングリコールなどの多価アルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル類等の極性溶媒から選択される１種乃至は２種以上が好適なものとして例示することができる。具体的な抽出方法としては、例えば、植物体等の抽出に用いる部位乃至はその乾燥物１質量に対して、溶媒を１〜３０質量部加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬し、室温まで冷却し後、所望により不溶物及び／又は溶媒除去し、カラムクロマトグラフィー等で分画精製する方法が挙げられる。
<1> Hyaluronic Acid Production Promoter for Lips The hyaluronic acid production promoter for the lip according to the present invention is an extract of ziyu (ground rice, wood flour, sage, incense, red wine, Sanguisorba officinalis) and / or B. It consists of platyphyllos) extract.
The said plant extract should just be used for the skin external composition of cosmetics and pharmaceuticals normally. For example, not only the extract derived from the plant itself but also a fraction of the extract, a purified fraction, an extract or a fraction, a solvent-removed product of the purified product may be included. In addition, the plant extract may be an autonomous or grown plant, an extract using one sold as a traditional Chinese medicine raw material or the like, a commercially available extract or the like.
The extraction procedure uses whole grass of plant parts, and can use sites such as plants, above-ground parts, rhizomes, tree trunks, stems, leaves, stems, flower spikes, flower buds, etc. It is preferable to cut and improve the extraction efficiency. Examples of extraction solvents include water, alcohols such as ethanol, isopropyl alcohol and butanol, polyhydric alcohols such as 1,3-butanediol and polypropylene glycol, ketones such as acetone and methyl ethyl ketone, and ethers such as diethyl ether and tetrahydrofuran One or two or more selected from polar solvents such as can be exemplified as suitable. As a specific extraction method, for example, 1 to 30 parts by mass of a solvent is added to 1 part by mass of a portion or a dry matter thereof used for extraction of a plant or the like, and at room temperature for several days at a temperature around boiling point If it is immersed for several hours and cooled to room temperature, insolubles and / or solvents are optionally removed if desired, and a method of fractionated purification by column chromatography etc. may be mentioned.
本発明の口唇用のヒアルロン酸産生促進剤は、口唇における、より具体的には口唇の真皮の線維芽細胞におけるヒアルロン酸産生を促進することができる。かかる産生促進は、ヒアルロン酸量を直接又は間接的に、また定量的又は定性的に測定することにより確認されればよく、例えば後述の評価方法により確認することができる。 The hyaluronic acid production promoter for the lips of the present invention can promote the production of hyaluronic acid in the lips, more specifically in the fibroblasts of the dermis of the lips. Such production promotion may be confirmed by measuring the amount of hyaluronic acid directly or indirectly, and quantitatively or qualitatively, and can be confirmed by, for example, the evaluation method described later.
本発明の口唇用のヒアルロン酸産生促進剤の投与経路は、特に限定されないが、通常は
経皮であり、より具体的には口唇の経皮である。
投与量としては、特に限定されないが、所望の効果と安全性とを考慮して、例えば経皮投与する場合は、固形物換算で０．０００２〜０．０５ｍｇ／日が好ましい。
Although the administration route of the hyaluronic acid production promoter for the lips of the present invention is not particularly limited, it is usually transdermal, more specifically, transdermal of the lip.
The dosage is not particularly limited, but in consideration of the desired effects and safety, for example, in the case of transdermal administration, it is preferably 0.0002 to 0.05 mg / day in terms of solids.
本発明の口唇用のヒアルロン酸産生促進剤は、任意の組成物に含有させることができ、特に経皮吸収による効果が期待できる皮膚外用組成物とすることが好ましい。皮膚外用組成物の態様としては、皮膚に外用で適用されるものであれば特に限定されないが、通常は口唇の皮膚に適用されるものであり、また化粧料（医薬部外品を含む）、医薬品等が好ましく挙げられ、化粧料がより好ましい。また、かかる外用組成物は、口唇のボリューム向上用の外用組成物であることがさらに好ましい。
なお、本明細書において「口唇のボリューム向上」とは、口唇の真皮のヒアルロン酸量が増加することによりハリや弾力が増大し、唇のボリューム感や厚み感がある状態をいう。したがって、本願発明の口唇のボリューム向上用の外用組成物は、これを適用することにより、口唇にボリューム感、厚み感、ふっくらした感じを与え、抗老化（アンチエイジング）効果をもたらすものである。
The hyaluronic acid production promoter for the lips of the present invention can be contained in any composition, and in particular, it is preferable to use a composition for external use which can be expected to have an effect by percutaneous absorption. The form of the composition for external use on the skin is not particularly limited as long as it is externally applied to the skin, but is usually applied to the skin of the lips, and cosmetic (including quasi-drugs), A medicine etc. are mentioned preferably, Cosmetics are more preferred. Further, it is more preferable that the composition for external use be an external composition for improving the volume of the lip.
In the present specification, "volume improvement of the lip" refers to a state in which the amount of hyaluronic acid in the dermis of the lip increases and the firmness and elasticity increase, and there is a voluminous feeling and a thick feeling of the lip. Therefore, the composition for external use for improving lip volume according to the present invention imparts a voluminous feeling, a thick feeling and a plump feeling to the lip by applying this, and brings about an anti-aging effect.
本願発明の口唇のボリューム向上用の外用組成物の剤型としては、例えば、ローション剤型、乳液やクリーム等の乳化剤型、オイル剤型、ジェル剤型、パック、洗浄料等が挙げられ、特に限定されない。 Examples of the external preparation composition for improving lip volume of the present invention include lotion types, emulsifier types such as emulsions and creams, oil types, gel types, packs, cleaning agents, etc. It is not limited.
本発明の口唇用のヒアルロン酸産生促進剤を口唇のボリューム向上用の外用組成物に含有させる場合は、その量を組成物全量に対して総量（固形物換算）で、好ましくは０．００１％〜２０質量％、より好ましくは０．０１〜１０質量％、さらに好ましくは０．０５〜５質量％の含有量とすると、所望の効果を得やすく、また処方設計の自由度を確保できる。 When the hyaluronic acid production promoter for the lips of the present invention is contained in the composition for improving the lip volume, the amount is preferably 0.001% in total (as solid matter) with respect to the total amount of the composition. When the content is from 20% by mass, more preferably from 0.01 to 10% by mass, still more preferably from 0.05 to 5% by mass, it is easy to obtain a desired effect, and it is possible to secure the freedom of formulation design.
本発明の口唇のボリューム向上用の外用組成物は、口唇用のヒアルロン酸産生促進剤以外に通常の化粧料に配合される成分を、本発明の効果を損なわない限りにおいて任意に含有することができる。
かかる成分としては、各種有効成分、油性成分、界面活性剤、多価アルコール、増粘剤、粉体類、紫外線吸収剤等が挙げられる。
The external composition for lip volume improvement of the present invention may optionally contain, in addition to the hyaluronic acid production promoter for the lip, a component to be blended in a conventional cosmetic as long as the effects of the present invention are not impaired. it can.
As such components, various active ingredients, oil components, surfactants, polyhydric alcohols, thickeners, powders, UV absorbers and the like can be mentioned.
有効成分としては、美白成分、シワ改善成分、抗炎症成分、動植物由来の抽出物等が挙げられる。
美白成分としては、一般的に化粧料に用いられているものであれば特に限定はない。例えば、４−ｎ−ブチルレゾルシノール、アスコルビン酸グルコシド、３−О−エチルアスコルビン酸、トラネキサム酸、アルブチン、エラグ酸、コウジ酸、リノール酸、ニコチン酸アミド、５，５'−ジプロピルビフェニル−２，２'−ジオール、５'−アデニル酸二ナトリウム、トラネキサム酸セチル、４−メトキシサリチル酸カリウム塩、ハイドロキノン、パントテン酸等が挙げられる。
As an active ingredient, a whitening ingredient, a wrinkle improvement ingredient, an anti-inflammatory ingredient, extracts derived from animals and plants, and the like can be mentioned.
The whitening component is not particularly limited as long as it is generally used in cosmetics. For example, 4-n-butyl resorcinol, ascorbic acid glucoside, 3-O-ethyl ascorbic acid, tranexamic acid, albutin, ellagic acid, kojic acid, linoleic acid, nicotinic acid amide, 5,5'-dipropylbiphenyl-2, 2'-diol, 5'- adenylate disodium, cetyl tranexamic acid, 4-methoxysalicylic acid potassium salt, hydroquinone, pantothenic acid and the like.
シワ改善成分としては、一般的に化粧料に用いられているものであれば特に限定はない。例えば、三フッ化イソプロピルオキソプロピルアミノカルボニルピロリジンカルボニルメチルプロピルアミノカルボニルベンゾイルアミノ酢酸ナトリウム、ニコチン酸アミド、ビタミンＡ又はその誘導体（レチノール、レチナール、レチノイン酸、トレチノイン、イソトレチノイン、レチノイン酸トコフェロール、パルミチン酸レチノール、酢酸レチノール等）、ウルソール酸ベンジルエステル、ウルソール酸リン酸エステル、ベツリン酸ベンジルエステル、ベンジル酸リン酸エステルが挙げられる。 The wrinkle improving component is not particularly limited as long as it is generally used in cosmetics. For example, sodium trifluoride isopropyl oxo propyl amino carbonyl pyrrolidine carbonyl methyl amino carbonyl benzoyl amino acetate sodium, nicotinic acid amide, vitamin A or a derivative thereof (retinol, retinal, retinoic acid, tretinoin, isotretinoin, tocopherol retinoic acid, retinol palmitate , Retinol acetate, etc., ursolic acid benzyl ester, ursolic acid phosphate ester, betulinic acid benzyl ester, benzylic acid phosphate ester.
動植物由来の抽出物としては、一般的に化粧料に用いられているものであれば特に限定
はない。例えば、アケビエキス、アスナロエキス、アスパラガスエキス、アボカドエキス、アマチャエキス、アーモンドエキス、アルニカエキス、アロエエキス、アロニアエキス、アンズエキス、イチョウエキス、インドキノエキス、ウイキョウエキス、ウドエキス、エイジツエキス、エゾウコギエキス、エンメイソウエキス、オウゴンエキス、オウバクエキス、オウレンエキス、オタネニンジンエキス、オトギリソウエキス、オドリコソウエキス、オレンジエキス、カキョクエキス、カッコンエキス、カモミラエキス、カロットエキス、カワラヨモギエキス、カンゾウエキス、キウイエキス、キューカンバーエキス、グアバエキス、クジンエキス、クチナシエキス、クマザサエキス、クララエキス、クルミエキス、グレープフルーツエキス、黒米エキス、クロレラエキス、クワエキス、ケイケットウエキス、ゲットウヨウエキス、ゲンチアナエキス、ゲンノショウコエキス、紅茶エキス、ゴボウエキス、コメエキス、コメ発酵エキス、コメヌカ発酵エキス、コメ胚芽油、コケモモエキス、サルビアエキス、サボンソウエキス、ササエキス、サンザシエキス、サンシャエキス、サンショウエキス、シイタケエキス、ジオウエキス、シコンエキス、シソエキス、シナノキエキス、シモツケソウエキス、シャクヤクエキス、ショウキョウエキス、ショウブ根エキス、シラカバエキス、スギナエキス、ステビアエキス、ステビア発酵物、セイヨウキズタエキス、セイヨウサンザシエキス、セイヨウニワトコエキス、セイヨウノコギリソウエキス、セイヨウハッカエキス、セージエキス、ゼニアオイエキス、センキュウエキス、センブリエキス、ソウハクヒエキス、ダイオウエキス、ダイズエキス、タイソウエキス、タイムエキス、タンポポエキス、茶エキス、チョウジエキス、チンピエキス、甜茶エキス、トウガラシエキス、トウキエキス、トウキンセンカエキス、トウニンエキス、トウヒエキス、ドクダミエキス、トマトエキス、納豆エキス、ニンジンエキス、ニンニクエキス、ノバラエキス、ハイビスカスエキス、バクモンドウエキス、ハスエキス、パセリエキス、バーチエキス、ハマメリスエキス、ヒキオコシエキス、ヒノキエキス、ビワエキス、フキタンポポエキス、フキノトウエキス、ブクリョウエキス、ブッチャーブルームエキス、ブドウエキス、ブドウ種子エキス、ヘチマエキス、ベニバナエキス、ペパーミントエキス、ボダイジュエキス、ボタンエキス、ホップエキス、マツエキス、マヨナラエキス、マロニエエキス、ミズバショウエキス、ムクロジエキス、メリッサエキス、モズクエキス、モモエキス、ヤグルマギクエキス、ユーカリエキス、ユキノシタエキス、ユズエキス、ユリエキス、ヨクイニンエキス、ヨモギエキス、ラベンダーエキス、緑茶エキス、リンゴエキス、ルイボス茶エキス、レイシエキス、レタスエキス、レモンエキス、レンギョウエキス、レンゲソウエキス、ローズエキス、ローズマリーエキス、ローマカミツレエキス、ローヤルゼリーエキス、ワレモコウエキス等のエキスが好ましいものとして挙げられる。
The extracts derived from animals and plants are not particularly limited as long as they are generally used in cosmetics. For example, akebi extract, asunaro extract, asparagus extract, avocado extract, amacha extract, almond extract, arnica extract, aloe extract, alonia extract, apricot extract, ginkgo extract, indinoquino extract, fennel extract, udo extract, ginseng extract , Amelanchoa extract, aubergine extract, aubergium extract, auula extract, aubergine extract, aubergium extract, aubergium extract, aubergium extract, orange extract, akakoshi extract, a cuckoo extract, a kamomi extract, a carrot extract, a persimmon extract, a licorice extract, a kiwi extract, a cucumber extract, Guava extract, Kujin extract, Gardenia extract, Kumazasa extract, Clara extract, Walnut extract, Grapefruit extract, Black rice extract Sesame, Chlorella extract, Mulberry extract, Keiketsou extract, Gentiana extract, Gentian extract, Genno Shoko extract, black tea extract, burdock extract, rice extract, rice fermented extract, rice bran fermented extract, rice germ oil, rice germ oil, cowberry extract, salvia extract, sapon extract Sasa extract, hawthorn extract, sancha extract, sansho extract, shiitake extract, diorium extract, shikon extract, shiso extract, linden extract, persimmon extract, persimmon extract, persimmon extract, persimmon root extract, persimmon root extract, persimmon extract, stevia extract, stevia fermented , Azalea extract, Azalea extract, Azalea extract, Azalea extract, Azalea extract, Sage extract, Xenia extract Kiss, senkyu extract, seembry extract, souhakuhi extract, soya bean extract, soy bean extract, soya root extract, thyme extract, thyme extract, dandelion extract, tea extract, chopstick extract, chimpanzee extract, persimmon tea extract, red pepper extract, toucan extract, toucan senka extract, tounin extract , Dokudami extract, tomato extract, natto extract, carrot extract, garlic extract, Novara extract, Hibiscus extract, baconedou extract, lotus extract, lotus extract, parsley extract, birch extract, Hamameris extract, Hikiokoshi extract, Hinoki extract, loquat extract, Fukinohida extract, , Buchsia extract, butcherbroom extract, grape extract, grape seed extract, pomace extract, safflower extract, peppermint extract, Daisy extract, Button extract, Hop extract, Pine extract, Mayonara extract, Marubeni extract, Mukuroshi extract, Melissa extract, Mozuku extract, Peach extract, Pomegranate extract, Eucalypt extract, Eucalyptus extract, Yukinoshita extract, Yuzu extract, Licorice extract, Yokuinin extract, Yomogi extract, Lavender Extracts such as green tea extract, apple extract, rooibos tea extract, lice extract, lettuce extract, lemon extract, forsythia extract, rosewood extract, rose extract, rosemary extract, rose chamomile extract, royal jelly extract, waremow extract It can be mentioned.
抗炎症成分としては、クラリノン、グラブリジン、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、パントテニルアルコール等が挙げられ、好ましくは、グリチルリチン酸及びその塩、グリチルレチン酸アルキル及びその塩、並びに、グリチルレチン酸及びその塩である。 Examples of the anti-inflammatory component include clarinone, glabridin, glycyrrhizinic acid, glycyrrhetinic acid, pantothenyl alcohol and the like, preferably glycyrrhizinic acid and its salt, alkyl glycyrrhetinate and its salt, and glycyrrhetinic acid and its salt.
油性成分としては、極性油、揮発性炭化水素油等が挙げられる。
極性油としては、合成エステル油として、ミリスチン酸イソプロピル、オクタン酸セチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸デシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、酢酸ラノリン、イソノナン酸２−エチルヘキシル、ステアリン酸イソセチル、イソステアリン酸イソセチル、１２−ヒドロキシステアリン酸コレステリル、ジ−２−エチルヘキサン酸エチレングリコール、ジペンタエリスリトール脂肪酸エステル、モノイソステアリン酸Ｎ−アルキルグリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、リンゴ酸ジイソステアリル、ジ−２−ヘプチルウンデカン酸グリセリル、トリ−２−エチルヘキサン酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、テトラ−２−エチルヘキサン酸ペンタンエリスリトール、トリ−２−エチルヘキサン酸グリセリル、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパンを挙げることができる。
As the oil component, polar oil, volatile hydrocarbon oil and the like can be mentioned.
As polar oils, as synthetic ester oils, isopropyl myristate, cetyl octanoate, octyldodecyl myristate, isopropyl palmitate, butyl stearate, hexyl laurate, myristyl myristate, decyl oleate, hexyl dimethyl octanoate, lactic acid Cetyl, myristyl lactate, lanolin acetate, 2-ethylhexyl isononanoate, isocetyl stearate, isocetyl isostearate, cholesteryl 12-hydroxystearate, ethylene glycol di-2-ethylhexanoate, dipentaerythritol fatty acid ester, N-monoisostearate Alkyl glycol, neopentyl glycol dicaprate, diisostearyl malate, glyceryl di-2-heptylundecanoate, tri-2-ethyl ester It may be mentioned hexanoic acid trimethylolpropane, trimethylolpropane triisostearate, tetra-2-ethylhexanoate pentane erythritol, tri-2-ethylhexanoate glyceryl, a trimethylolpropane triisostearate.
さらに、セチル２−エチルヘキサノエート、２−エチルヘキシルパルミテート、トリミリスチン酸グリセリル、トリ−２−ヘプチルウンデカン酸グリセライド、ヒマシ油脂肪酸メチルエステル、オレイン酸オイル、セトステアリルアルコール、アセトグリセライド、パルミチン酸２−ヘプチルウンデシル、アジピン酸ジイソブチル、Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸−２−オクチルドデシルエステル、アジピン酸ジ−２−ヘプチルウンデシル、エチルラウレート、セバチン酸ジ−２−エチルヘキシル、ミリスチン酸２−ヘキシルデシル、パルミチン酸２−ヘキシルデシル、アジピン酸２−ヘキシルデシル、セバチン酸ジイソプロピル、コハク酸２−エチルヘキシル、酢酸エチル、酢酸ブチル、酢酸アミル、クエン酸トリエチル、オクチルメトキシシンナメート等も挙げられる。 Furthermore, cetyl 2-ethylhexanoate, 2-ethylhexyl palmitate, glyceryl trimyristate, tri-2-heptylundecanoic acid glyceride, castor oil fatty acid methyl ester, oleic acid oil, cetostearyl alcohol, acetoglyceride, palmitic acid 2 -Heptylundecyl, diisobutyl adipate, N-lauroyl-L-glutamic acid-2-octyldodecyl ester, di-2-heptylundecyl adipate, ethyl laurate, di-2-ethylhexyl sebacate, 2-hexyl myristate Decyl, 2-hexyldecyl palmitate, 2-hexyldecyl adipate, diisopropyl sebacate, 2-ethylhexyl succinate, ethyl acetate, butyl acetate, amyl acetate, triethyl citrate, octyl acetate Kishishin'nameto, etc. may also be mentioned.
また、天然油として、アボガド油、ツバキ油、タートル油、マカデミアナッツ油、トウモロコシ油、ミンク油、オリーブ油、ナタネ油、卵黄油、ゴマ油、パーシック油、小麦胚芽油、サザンカ油、ヒマシ油、アマニ油、サフラワー油、綿実油、エノ油、大豆油、落花生油、茶実油、カヤ油、コメヌカ油、シナギリ油、日本キリ油、ホホバ油、胚芽油、トリグリセリン、トリオクタン酸グリセリル、トリイソパルミチン酸グリセリル等が挙げられる。 In addition, as natural oil, avocado oil, camellia oil, turtle oil, macadamia nut oil, corn oil, mink oil, olive oil, rapeseed oil, egg yolk oil, sesame oil, persic oil, wheat germ oil, sasanqua oil, castor oil, linseed oil, Safflower oil, cottonseed oil, eno oil, soybean oil, peanut oil, tea seed oil, kaya oil, rice bran oil, Japanese oak oil, Japanese tung oil, jojoba oil, germ oil, triglycerin, glyceryl trioctanoate, glyceryl triisopalmitate Etc.
揮発性炭化水素油としては、イソドデカン、イソヘキサデカン等が挙げられる。 Examples of volatile hydrocarbon oils include isododecane and isohexadecane.
界面活性剤としては、脂肪酸セッケン（ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等）、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル等のアニオン界面活性剤類、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド等のカチオン界面活性剤類、ベタイン系界面活性剤（アルキルベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン等）、イミダゾリン系両性界面活性剤（２−ココイル−２−イミダゾリニウムヒドロキサイド−１−カルボキシエチロキシ２ナトリウム塩等）、アシルメチルタウリン等の両性界面活性剤類、
ソルビタン脂肪酸エステル類（ソルビタンモノステアレート、セスキオレイン酸ソルビタン等） 、グリセリン脂肪酸エステル類（モノステアリン酸グリセリル等）、プロピレングリコール脂肪酸エステル類（モノステアリン酸プロピレングリコール等）、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類（ＰＯＥソルビタンモノオレエート、モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン等）、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−ソルビットモノラウレート等）、ＰＯＥグリセリン脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−グリセリンモノイソステアレート等）、ＰＯＥ脂肪酸エステル類（ポリエチレングリコールモノオレート、ＰＯＥジステアレート等）、ＰＯＥアルキルエーテル類（ＰＯＥ２−オクチルドデシルエーテル等）、ＰＯＥアルキルフェニルエーテル類（ＰＯＥノニルフェニルエーテル等）、プルロニック型類、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル類（ＰＯＥ・ＰＯＰ２−デシルテトラデシルエーテル等）、テトロニック類、ＰＯＥヒマシ油・硬化ヒマシ油誘導体（ＰＯＥヒマシ油、ＰＯＥ硬化ヒマシ油等）、ショ糖脂肪酸エステル、アルキルグルコシド等の非イオン界面活性剤類、等が挙げられる。
As surfactants, anionic surfactants such as fatty acid soap (sodium laurate, sodium palmitate etc.), potassium lauryl sulfate, alkylethanolamine triethanolamine ether etc., stearyltrimethylammonium chloride, benzalkonium chloride, laurylamine oxide Cationic surfactants such as, betaine surfactants (alkyl betaines, amido betaines, sulfobetaines etc.), imidazoline amphoteric surfactants (2-cocoyl-2-imidazolinium hydroxide-1-carboxyethyloxy 2) Amphoteric surfactants such as sodium salt, etc., acyl methyl taurine etc.
Sorbitan fatty acid esters (sorbitan monostearate, sorbitan sesquioleate, etc.), glycerin fatty acid esters (glyceryl monostearate etc.), propylene glycol fatty acid esters (propylene glycol monostearate etc), hydrogenated castor oil derivatives, glycerin alkyl Ether, POE sorbitan fatty acid esters (POE sorbitan monooleate, polyoxyethylene sorbitan monostearate etc.), POE sorbite fatty acid esters (POE-sorbit monolaurate etc.), POE glycerin fatty acid esters (POE-glycerin monoiso) Stearate etc.), POE fatty acid esters (polyethylene glycol monooleate, POE distearate etc.), POE alkyl ethers (POE 2-o) Cutyl dodecyl ether etc.), POE alkyl phenyl ethers (POE nonyl phenyl ether etc.), pluronic types, POE · POP alkyl ethers (POE · POP 2-decyl tetradecyl ether etc), tetronics, POE castor oil · hardened Examples thereof include castor oil derivatives (POE castor oil, POE hydrogenated castor oil and the like), sucrose fatty acid esters, nonionic surfactants such as alkyl glucoside, and the like.
多価アルコールとしては、ポリエチレングリコール、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ジグリセリン、イソプレングリコール、１，２−ペンタンジオール、２，４−ヘキシレングリコール、１，２−ヘキサンジオール、１，２−オクタンジオール等が挙げられる。 As polyhydric alcohols, polyethylene glycol, glycerin, 1,3-butylene glycol, erythritol, sorbitol, xylitol, maltitol, propylene glycol, dipropylene glycol, diglycerin, isoprene glycol, 1,2-pentanediol, 2,4 -Hexylene glycol, 1,2-hexanediol, 1,2-octanediol and the like can be mentioned.
増粘剤としては、グアーガム、クインスシード、カラギーナン、ガラクタン、アラビアガム、ペクチン、マンナン、デンプン、キサンタンガム、カードラン、メチルセルロース
、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、グリコーゲン、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸ナトリウム、トラガントガム、ケラタン硫酸、コンドロイチン、ムコイチン硫酸、ヒドロキシエチルグアガム、カルボキシメチルグアガム、デキストラン、ケラト硫酸、ローカストビーンガム、サクシノグルカン、カロニン酸，キチン、キトサン、カルボキシメチルキチン、寒天、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アルキル変性カルボキシビニルポリマー、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、ベントナイト等が挙げられる。
As a thickener, guar gum, quince seed, carrageenan, galactan, gum arabic, pectin, mannan, starch, xanthan gum, curdlan, methyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, carboxymethyl cellulose, methyl hydroxypropyl cellulose, chondroitin sulfate, dermatan sulfate, glycogen, Heparan sulfate, hyaluronic acid, sodium hyaluronate, tragant gum, keratan sulfate, chondroitin sulfate, mucoitin sulfate, hydroxyethyl guar gum, carboxymethyl guar gum, dextran, kerato sulfate, locust bean gum, succinoglucan, caronate, chitin, chitosan, carboxymethyl Chitin, agar, polyvinyl alcohol, polyvinyl pyrrolidone, carboxy vinyl polymer, a Kill modified carboxyvinyl polymers, sodium polyacrylate, polyethylene glycol, and bentonite.
粉体類としては、表面を処理されていてもよい、マイカ、タルク、カオリン、合成雲母、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、無水ケイ酸（シリカ）、酸化アルミニウム、硫酸バリウム等の粉体類、表面を処理されていてもよい、ベンガラ、黄酸化鉄、黒酸化鉄、酸化コバルト、群青、紺青、酸化チタン、酸化亜鉛の無機顔料類、表面を処理されていてもよい、雲母チタン、魚燐箔、オキシ塩化ビスマス等のパール剤類、レーキ化されていてもよい赤色２０２号、赤色２２８号、赤色２２６号、黄色４号、青色４０４号、黄色５号、赤色５０５号、赤色２３０号、赤色２２３号、橙色２０１号、赤色２１３号、黄色２０４号、黄色２０３号、青色１号、緑色２０１号、紫色２０１号、赤色２０４号等の有機色素類、ポリエチレン末、ポリメタクリル酸メチル、ナイロン粉末、オルガノポリシロキサンエラストマー等の有機粉体類、が挙げられる。 As powders, the surface may be treated, powders such as mica, talc, kaolin, synthetic mica, calcium carbonate, magnesium carbonate, anhydrous silicic acid (silica), aluminum oxide, barium sulfate, etc .; Inorganic pigments of bengara, yellow iron oxide, black iron oxide, cobalt oxide, ultramarine blue, bitumen, titanium oxide, zinc oxide, which may be treated, mica titanium, fish phosphorus foil, which may be surface-treated Pearl agents such as bismuth oxychloride, red 202 which may be laked, red 228, red 226, yellow 4, blue 404, blue 5, yellow 505, red 230, red 230, red 223 Organic dyes such as No. Orange 201, Red 213, Yellow 204, Yellow 203, Blue 1, Blue 201, Purple 201, Red 204 etc., Polyethylene powder, Polymeta Methyl acrylic acid, nylon powder, organic powders such as organopolysiloxane elastomers, and the like.
紫外線吸収剤としては、パラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤、アントラニル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、桂皮酸系紫外線吸収剤、ベンゾフェノン系紫外線吸収剤、糖系紫外線吸収剤、２−（２'−ヒドロキシ−５'−ｔ−オクチルフェニル)ベンゾトリアゾール、４−メトキシ−４'−ｔ−ブチルジベンゾイルメタン等の紫外線吸収剤類、等が挙げられる。 Examples of UV absorbers include para-aminobenzoic acid UV absorbers, anthranilic acid UV absorbers, salicylic acid UV absorbers, cinnamic acid UV absorbers, benzophenone UV absorbers, sugar UV absorbers, 2- (2) UV absorbers such as' -hydroxy-5'-t-octylphenyl) benzotriazole, 4-methoxy-4'-t-butyldibenzoylmethane, and the like can be mentioned.
＜２＞口唇用のヒアルロン酸産生促進剤を評価又はスクリーニングする方法
本発明の口唇用のヒアルロン酸産生促進剤を評価又はスクリーニングする方法は、口唇由来の線維芽細胞を用いることを特徴とする。
後述の参考例及び比較例で示すように、口唇の線維芽細胞と口唇以外の部位の線維芽細胞とでは、ヒアルロン酸産生促進に対する応答性が異なり、口唇に適したヒアルロン酸産生促進剤の探索及びその評価をするには、口唇由来の線維芽細胞を用いることが必要である。なお、ここで口唇由来の線維芽細胞は、通常はヒト由来のものであるが、特に限定されない。
<2> Method for Evaluating or Screening Hyaluronic Acid Production Promoter for the Lip The method for evaluating or screening the hyaluronic acid production promoter for the lip of the present invention is characterized by using lip-derived fibroblasts.
As shown in the following reference example and comparative example, the response to the promotion of hyaluronic acid production differs between fibroblasts in the lip and fibroblasts in sites other than the lip, and a search for a hyaluronic acid production promoter suitable for the lip And, in order to evaluate them, it is necessary to use lip-derived fibroblasts. The lip-derived fibroblasts here are usually of human origin but are not particularly limited.
本発明の方法は、通常は、被験物質を口唇由来の線維芽細胞に添加する工程、及び
被験物質を添加した口唇由来の線維芽細胞におけるヒアルロン酸産生量が、被験物質を添加しなかった口唇由来の線維芽細胞における産生量と比較して大きい被験物質を、口唇用のヒアルロン酸産生促進作用を有すると判断する工程を含む。
In the method of the present invention, usually, a test substance is added to fibroblasts derived from the lip, and the amount of hyaluronic acid produced in fibroblasts derived from the lip to which the test substance is added is the lip where the test substance was not added. It includes the step of judging that the test substance which is large in comparison with the production amount in the fibroblast derived from has a hyaluronic acid production promoting effect for the lip.
ヒアルロン酸量の測定は、直接的であっても間接的であってもよく、また定性的であっても定量出来であってもよく、任意の方法で行うことができる。例えば、ＥＬＩＳＡ法、標識ヒアルロン酸結合タンパクを用いて染色したヒアルロン酸を測定する方法、電気泳動法、液体クロマトグラフ法、ヒアルロン酸合成酵素の活性を測定する方法、前記酵素の遺伝子発現量をｍＲＮＡの解析等にて測定する方法等が挙げられる。 The measurement of the amount of hyaluronic acid may be direct or indirect, may be qualitative or quantitative, and may be performed by any method. For example, the ELISA method, a method of measuring hyaluronic acid stained using a labeled hyaluronic acid binding protein, electrophoresis, liquid chromatography, a method of measuring the activity of hyaluronic acid synthetase, the gene expression amount of the enzyme is mRNA And the like.
本発明の方法の判断工程においては、通常は、被験物質を添加した口唇由来の線維芽細胞におけるヒアルロン酸産生量が、被験物質を添加しなかった口唇由来の線維芽細胞における産生量と比較して大きければよく、その程度は特に限定されないが、好ましくは被験物質添加後１２〜４８時間経過後に１２０％以上に増大した場合に変化したとすることが
でき、より好ましくは１３０％以上に増大であり、さらに好ましくは１４０％以上に増大である。
In the determination step of the method of the present invention, generally, the amount of hyaluronic acid production in the lip-derived fibroblasts to which the test substance is added is compared with the production in the lip-derived fibroblasts to which the test substance is not added. The degree is not particularly limited, but it may preferably change when it has increased to 120% or more after 12 to 48 hours after addition of the test substance, and more preferably by 130% or more. More preferably 140% or more.
本発明の方法が対象とする被験物質は、純物質、動植物由来の抽出物、又はそれらの混合物等のいずれであってもよいが、紺増しくは植物抽出物である。
動植物由来の抽出物は、動物又は植物由来の抽出物自体のみならず、抽出物の画分、精製した画分、抽出物乃至は画分、精製物の溶媒除去物の総称を意味するものとし、植物由来の抽出物は、自生若しくは生育された植物、漢方生薬原料等として販売されるものを用いた抽出物、市販されている抽出物等が挙げられる。
抽出操作は、植物部位の全草を用いるほか、植物体、地上部、根茎部、木幹部、葉部、茎部、花穂、花蕾等の部位を使用することできるが、予めこれらを粉砕あるいは細切して抽出効率を向上させることが好ましい。抽出溶媒としては、水、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノールなどのアルコール類、１，３−ブタンジオール、ポリプロピレングリコールなどの多価アルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル類等の極性溶媒から選択される１種乃至は２種以上が好適なものとして例示することができる。具体的な抽出方法としては、例えば、植物体等の抽出に用いる部位乃至はその乾燥物１質量に対して、溶媒を１〜３０質量部加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬し、室温まで冷却し後、所望により不溶物及び／又は溶媒除去し、カラムクロマトグラフィー等で分画精製する方法が挙げられる。
The test substance targeted by the method of the present invention may be any of a pure substance, an extract derived from animals and plants, or a mixture thereof, etc., but is a potato extract or a plant extract.
Extracts derived from animals and plants mean not only extracts derived from animals or plants themselves, but also fractions of extracts, purified fractions, extracts or fractions, solvent-removed products of purified products. Examples of the plant-derived extract include extracts produced using plants grown or grown in nature, materials sold as traditional Chinese medicine raw materials, and the like, and extracts commercially available.
The extraction procedure uses whole grass of plant parts, and can use sites such as plants, above-ground parts, rhizomes, tree trunks, stems, leaves, stems, flower spikes, flower buds, etc. It is preferable to cut and improve the extraction efficiency. Examples of extraction solvents include water, alcohols such as ethanol, isopropyl alcohol and butanol, polyhydric alcohols such as 1,3-butanediol and polypropylene glycol, ketones such as acetone and methyl ethyl ketone, and ethers such as diethyl ether and tetrahydrofuran One or two or more selected from polar solvents such as can be exemplified as suitable. As a specific extraction method, for example, 1 to 30 parts by mass of a solvent is added to 1 part by mass of a portion or a dry matter thereof used for extraction of a plant or the like, and at room temperature for several days at a temperature around boiling point If it is immersed for several hours and cooled to room temperature, insolubles and / or solvents are optionally removed if desired, and a method of fractionated purification by column chromatography etc. may be mentioned.
本発明のスクリーニング方法により選択された口唇用のヒアルロン酸産生促進剤は、口唇の線維芽細胞においてヒアルロン酸の産生を促進し、その産生量を増加させる作用を有するため、口唇にハリや弾力を与え、ボリューム感や厚み感をもたらし、抗老化効果を提供するものである。したがって、本発明の方法によりスクリーニングされた口唇用のヒアルロン酸産生促進剤は、口唇用の化粧料等の外用組成物に好適に配合することができる。 The hyaluronic acid production promoter for the lips selected by the screening method of the present invention has the function of promoting the production of hyaluronic acid in the fibroblasts of the lip and increasing the production amount thereof, so that the firmness and elasticity of the lip can be obtained. Gives a sense of volume and thickness, and provides an anti-aging effect. Therefore, the hyaluronic acid production promoter for the lip screened by the method of the present invention can be suitably blended in an external composition such as a cosmetic for the lip.
また、本発明の評価方法により、口唇用のヒアルロン酸産生促進剤の作用効果を評価することができる。これは、これまで肌一般に対して有効または有効ではないと判断されていたヒアルロン酸産生促進剤の、口唇におけるヒアルロン酸産生促進の有効性を適切に評価することができる点で画期的である。 Moreover, the effect of the hyaluronic acid production promoter for the lip can be evaluated by the evaluation method of the present invention. This is a breakthrough point in that it is possible to appropriately evaluate the efficacy of promoting hyaluronic acid production in the lip of the hyaluronic acid production promoter, which was previously judged to be effective or not effective for general skin. .
以下、本発明を実施例により更に詳細に説明するが、本発明は、その要旨を超えない限り、以下の実施例に限定されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be described in more detail by way of examples, but the present invention is not limited to the following examples as long as the gist thereof is not exceeded.
＜参考例＞
96穴の細胞培養用プレートの各ウェルに、ヒト口唇由来の線維芽細胞（ＪＣＲＢ９１０３ ＫＤ，国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所より入手、以降の実験でも同じ）を１００００個／ウェルずつ播種した。ここに、ヤグルマギク抽出物（丸善製薬株式会社）又はスギナ抽出物（丸善製薬株式会社）を（１０％エタノール／１０％ブチレングリコール）を用いてそれぞれ希釈した被験液を１μＬ／ウェルずつ添加し（終濃度１容量％）、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ、シグマアルドリッチジャパン合同会社、以降の実験でも同じ）培地存在下で48時間培養した。その後、培地に放出されたヒアルロン酸量を、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＡＮＤ ＤＩＡＧＮＯＳＴＩＣ
ＳＹＳＴＥＭＳ，ＩＮＣ．、以降の実験でも同じ）を用いてＥＬＩＳＡ法にて測定した。なお、陰性対照として、（１０％エタノール／１０％ブチレングリコール）を１μＬ／ウェル添加したものを設けた。
<Reference example>
Human lip-derived fibroblasts (JCRB 9103 KD, obtained from National Institute of Biomedical Innovation, Health and Nutrition Research Laboratories, the same in subsequent experiments) in each well of each 96-well cell culture plate (10,000 cells / well) Sowed. To this, add 1 μL / well each of the test solution prepared by diluting cornflower extract (Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.) or Sugina extract (Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.) with (10% ethanol / 10% butylene glycol). The cells were cultured for 48 hours in the presence of Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM, also from Sigma-Aldrich Japan Co., Ltd., the same in the subsequent experiments), at a concentration of 1% by volume. Thereafter, the amount of hyaluronic acid released into the medium is expressed as Quantikine Hyaluronan ELISA Kit (RESEARCH AND DIAGNOSTIC
SYSTEMS, INC. And in the subsequent experiments, it was measured by the ELISA method. As a negative control, 1 μL / well of (10% ethanol / 10% butylene glycol) was added.
結果を図１に示す。ヤグルマギク抽出物又はスギナ抽出物を添加した場合のヒアルロン酸産生量は、陰性対照との有意差がなかった。すなわち、これらの抽出物については、口唇由来の線維芽細胞に対するヒアルロン酸産生促進作用は認められなかった。 The results are shown in FIG. The amount of hyaluronic acid produced when adding the cornflower extract or Japanese horseradish extract was not significantly different from that of the negative control. That is, with these extracts, no hyaluronan production promoting action on lip-derived fibroblasts was observed.
＜実施例１＞
９６穴の細胞培養用プレートの各ウェルに、ヒト口唇由来の線維芽細胞を１００００個／ウェルずつ播種した。ここに、以下に示す評価物質を（１０％エタノール／１０％ブチレングリコール）を用いてそれぞれ希釈した被験液を１μＬ／ウェルずつ添加し（終濃度１容量％）、ＤＭＥＭ培地存在下で48時間培養した。その後、培地に放出されたヒアルロン酸量を、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔを用いてＥＬＩＳＡ法にて測定した。なお、陰性対照として、（１０％エタノール／１０％ブチレングリコール）を１μＬ／ウェル添加したものを設けた。
Example 1
10000 cells / well of human lip-derived fibroblasts were seeded in each well of a 96-well cell culture plate. Add 1 μL / well each of the test solution diluted with (10% ethanol / 10% butylene glycol) the following evaluation substances (final concentration 1% by volume), and culture for 48 hours in the presence of DMEM medium did. Thereafter, the amount of hyaluronic acid released into the medium was measured by ELISA using Quantikine Hyaluronan ELISA Kit. As a negative control, 1 μL / well of (10% ethanol / 10% butylene glycol) was added.
評価物質（入手元）：
セイヨウボダイジュ抽出物（香栄興業株式会社）、ローズマリー抽出物（香栄興業株式会社）、ユーカリ抽出物（丸善製薬株式会社）、紅茶抽出物（一丸ファルコス株式会社）、オウバク抽出物（一丸ファルコス株式会社）、オウゴン抽出物（一丸ファルコス株式会社）、レイシ抽出物（丸善製薬株式会社）、ユキノシタ抽出物（香栄興業株式会社）、キウイ抽出物（一丸ファルコス株式会社）、ローマカミツレ抽出物（香栄興業株式会社）、グレープフルーツ抽出物（一丸ファルコス株式会社）、ベニバナ抽出物（一丸ファルコス株式会社）、ホホバリーフ抽出物（香栄興業株式会社）、シモツケソウ抽出物（一丸ファルコス株式会社）、アルテア抽出物（香栄興業株式会社）、イチョウ葉抽出物（丸善製薬株式会社）、カミツレ抽出物（香栄興業株式会社）、ソウハクヒ抽出物（丸善製薬株式会社）、クチナシ抽出物（香栄興業株式会社）、オトギリソウ抽出物（一丸ファルコス株式会社）、ジユ抽出物（丸善製薬株式会社）、ガイヨウ抽出物（丸善製薬株式会社）
Evaluation substance (source):
Horseradish extract (Koei Kogyo Co., Ltd.), Rosemary extract (Koei Kogyo Co., Ltd.), Eucalyptus extract (Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.), Black tea extract (Ichimaru Falcos Co., Ltd.), Oouka extract (Ichimaru Falcos) Co., Ltd., Ougon extract (Ichimaru Falcos Co., Ltd.), Reishi extract (Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.), Yukinoshita extract (Koei Kogyo Co., Ltd.), kiwi extract (Ichimaru Falcos Co., Ltd.), Roman chamomile extract ( Koei Kogyo Co., Ltd.), grapefruit extract (Ichimaru Falcos Co., Ltd.), safflower extract (Ichimaru Falcos Co., Ltd.), jojoba leaf extract (Koei Kogyo Co., Ltd.), Shimotsukaso extract (Ichimaru Falcos Co., Ltd.), Altea Extract (Koei Kogyo Co., Ltd.), Ginkgo biloba extract (Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.), Chamomile extract ( Eiko Kogyo Co., Ltd.), Souhakuhi extract (Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.), Gardenia extract (Koei Kogyo Co., Ltd.), Hypericum extract (Ichimaru Falcos Co., Ltd.), Diyu extract (Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.), Gaiyo extract (Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.)
結果を図２に示す。セイヨウボダイジュ抽出物、及びジユ抽出物を添加した場合は、陰性対照に対して２０％超の有意なヒアルロン酸産生量の増加が認められた。すなわち、これらの抽出物については、口唇由来の線維芽細胞に対するヒアルロン酸産生促進作用が認められた。 The results are shown in FIG. A significant increase in hyaluronic acid production by more than 20% relative to the negative control was observed when B. napus extract and Jyuyu extract were added. That is, with these extracts, hyaluronic acid production promoting action on fibroblasts derived from the lip was observed.
＜実施例２＞
９６穴の細胞培養用プレートの各ウェルに、ヒト口唇由来の線維芽細胞を１０００個／ウェルずつ播種した。ここに、ジユ抽出物（丸善製薬株式会社）を（１０％エタノール／１０％ブチレングリコール）を用いて希釈した被験液を１μＬ／ウェルずつ添加し（終濃度１容量％）、ＤＭＥＭ培地存在下で48時間培養した。その後、細胞表面に存在するヒアルロン酸を、３．７％ホルムアルデヒド−ＰＢＳ、７０％エタノール、及び５％酢酸で固定し（Ｅｖａｎｋｏ，Ｓ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．５７，１０４１―６０（２００９）．）、ビオチン標識されたヒアルロン酸結合タンパク（株式会社ホクドー）とフルオレセインイソチオシアネート標識されたストレプトアビジン（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．）とで染色した。蛍光顕微鏡で細胞を観察し、ヒアルロン酸の存在を評価した。なお、陰性対照として、（１０％エタノール／１０％ブチレングリコール）を１μＬ／ウェル添加したものを設けた。
Example 2
1000 cells / well of human lip-derived fibroblasts were seeded in each well of a 96-well cell culture plate. Add 1 μL / well of the test solution prepared by diluting Diyu extract (Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.) with (10% ethanol / 10% butylene glycol) (final concentration 1% by volume), and in the presence of DMEM medium Incubated for 48 hours. Thereafter, hyaluronic acid present on the cell surface is fixed with 3.7% formaldehyde-PBS, 70% ethanol and 5% acetic acid (Evanko, SP, et al., J. Histochem. Cytochem. 57, 1041-60 (2009).), Stained with biotin-labeled hyaluronic acid binding protein (Hokudo Co., Ltd.) and fluorescein isothiocyanate-labeled streptavidin (Vector Laboratories Inc.). The cells were observed with a fluorescence microscope to assess the presence of hyaluronic acid. As a negative control, 1 μL / well of (10% ethanol / 10% butylene glycol) was added.
結果を図３に示す。ジユ抽出物を添加した場合は、陰性対照に比べて明らかに大きいヒアルロン酸量（緑色蛍光）が認められた。すなわち、ジユ抽出物については、口唇由来の線維芽細胞に対するヒアルロン酸産生促進作用が認められた。 The results are shown in FIG. When the Jyuyu extract was added, a significantly larger amount of hyaluronic acid (green fluorescence) was observed as compared to the negative control. That is, in the case of Jyuyu extract, hyaluronic acid production promoting action on fibroblasts derived from the lip was observed.
＜比較例＞
９６穴の細胞培養用プレートの各ウェルに、ヒトの腹部皮膚の真皮由来の線維芽細胞（
東洋紡株式会社）を１００００個／ウェルずつ播種した。ここに、ジユ抽出物（丸善製薬株式会社）を（希釈溶媒）を用いて希釈した被験液を１μＬ／ウェルずつ添加し（終濃度１容量％）、DMEM培地存在下で48時間培養した。その後、培地に放出されたヒアルロン酸量を、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔを用いてＥＬＩＳＡ法にて測定した。なお、陰性対照として、（１０％エタノール／１０％ブチレングリコール）を１μＬ／ウェル添加したものを設けた。
Comparative Example
In each well of a 96-well cell culture plate, fibroblasts derived from the dermis of human abdominal skin (
Toyobo Co., Ltd. was seeded at 10000 pieces / well each. A test solution prepared by diluting Diyu extract (Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.) with (diluting solvent) was added thereto in an amount of 1 μl / well (final concentration: 1% by volume) and cultured in the presence of DMEM medium for 48 hours. Thereafter, the amount of hyaluronic acid released into the medium was measured by ELISA using Quantikine Hyaluronan ELISA Kit. As a negative control, 1 μL / well of (10% ethanol / 10% butylene glycol) was added.
結果を図４に示す。口唇以外の部位の真皮由来の線維芽細胞においては、ジユ抽出物を添加した場合のヒアルロン酸産生量は陰性対照と同等で、有意差は認められなかった。
この結果から、口唇におけるヒアルロン酸産生促進作用は、口唇以外におけるヒアルロン酸産生促進作用とは異なることが示唆された。また、口唇におけるヒアルロン酸産生促進作用を有する成分の評価又はスクリーニングを行う際は、口唇由来の線維芽細胞の使用が適することが示唆された。
The results are shown in FIG. In fibroblasts derived from the dermis at sites other than the lip, the amount of hyaluronic acid produced when adding the extract was equivalent to that of the negative control, and no significant difference was observed.
From this result, it has been suggested that the hyaluronic acid production promoting action in the lip is different from the hyaluronic acid production promoting action in other than the lip. In addition, it has been suggested that the use of lip-derived fibroblasts is suitable for evaluating or screening a component having hyaluronic acid production promoting activity in the lips.
＜実施例３＞
表１の処方成分を混合し８０℃に加温し、撹拌・混合しながら冷却し、口唇用の外用組成物を作製した。
Example 3
The ingredients shown in Table 1 were mixed, heated to 80 ° C., and cooled while stirring and mixing to prepare a composition for external use for the lips.
＜実施例４＞
実施例３で作製した口唇用の外用組成物を、比較製造例は６人、製造例１及び２は各５人の被験者に２ヶ月間使用してもらった後、口唇の厚み感に対する満足度を７段階で評価してもらった。
結果を表２に示す。比較製造例に比べて、ジユ抽出物を含有する製造例１及びセイヨウボダイジュ抽出物を含有する製造例２では、満足度を高く評価した被験者が多かった。
Example 4
The external preparation composition for the lips prepared in Example 3 was used for 2 months for 6 persons in Comparative Production Example and 5 subjects for each of Production Examples 1 and 2 and then the satisfaction with respect to lip thickness feeling Was rated on a scale of seven.
The results are shown in Table 2. As compared with the comparative production example, in the production example 1 containing the jyu extract and the production example 2 containing the Asiatic horseradish extract, there were a large number of subjects who highly evaluated the degree of satisfaction.
本発明により、口唇におけるヒアルロン酸産生を促進させ、該産生量を増加させることができるヒアルロン酸産生促進剤を提供される。また、該ヒアルロン酸産生促進剤を口唇用の外用組成物に含有させることにより、口唇のボリューム向上用途に好適に供することができる。また、口唇用のヒアルロン酸産生促進剤を、適切に評価又は探索することができる方法が提供される。そのため、口唇用の化粧料等の設計・製造に有用となり得るので、産業上有用である。 The present invention provides a hyaluronic acid production promoter capable of promoting hyaluronic acid production in the lips and increasing the production amount. In addition, by containing the hyaluronic acid production promoting agent in the composition for external use for the lips, it can be suitably used for volume improvement of the lips. In addition, there is provided a method capable of appropriately evaluating or searching for a hyaluronic acid production promoter for the lip. Therefore, since it may be useful for design and manufacture of cosmetics for lips, etc., it is industrially useful.
Claims (5)
被験物質を添加した口唇由来の線維芽細胞におけるヒアルロン酸産生量が、被験物質を添加しなかった口唇由来の線維芽細胞における産生量と比較して大きい被験物質を、口唇用のヒアルロン酸産生促進作用を有すると判断する工程、
を含む、請求項４に記載の方法。 A step of adding a test substance to the lip-derived fibroblasts, and a hyaluronic acid production amount in the lip-derived fibroblast to which the test substance is added is a production amount in the lip-derived fibroblast without the test substance added Judging that a relatively large test substance has a hyaluronic acid production promoting action for the lip;
5. The method of claim 4, comprising
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