JP2022001872A - Screening method - Google Patents
Screening method Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022001872A JP2022001872A JP2021148287A JP2021148287A JP2022001872A JP 2022001872 A JP2022001872 A JP 2022001872A JP 2021148287 A JP2021148287 A JP 2021148287A JP 2021148287 A JP2021148287 A JP 2021148287A JP 2022001872 A JP2022001872 A JP 2022001872A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- extract
- lips
- hyaluronic acid
- acid production
- oil
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02T—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES RELATED TO TRANSPORTATION
- Y02T10/00—Road transport of goods or passengers
- Y02T10/10—Internal combustion engine [ICE] based vehicles
- Y02T10/12—Improving ICE efficiencies
Landscapes
- Cosmetics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
本発明は、口唇用のヒアルロン酸産生促進剤、及びこれを評価又はスクリーニングする方法に関する。 The present invention relates to a hyaluronic acid production promoter for the lips and a method for evaluating or screening the hyaluronic acid production promoter.
ハリがあり、ふっくらとした厚み感がある口唇は、若々しい印象を与えるため、これを叶える手法に対する需要は高い。例えば、化粧料としては、塗布することによりぷっくりとした外観を演出するリップグロス等がある。また、口唇に直接的にハリやボリュームを持たせるため、口唇にヒアルロン酸を注入する美容医療も実施されている。しかしながら、非侵襲的でかつ効果の高い、口唇のボリューム向上用の外用剤はないため望まれている。 Lips that are firm and plump and thick give a youthful impression, so there is a high demand for methods that can achieve this. For example, as a cosmetic, there is a lip gloss or the like that produces a plump appearance by being applied. In addition, aesthetic medicine in which hyaluronic acid is injected into the lips is also carried out in order to give the lips a firmness and volume directly. However, there is no non-invasive and highly effective external preparation for improving the volume of the lips, which is desired.
一般に、肌にハリやボリュームを持たせるための成分としてはヒアルロン酸が知られており、真皮におけるヒアルロン酸量を増加させるための皮膚外用剤の有効成分として種々の植物抽出物が報告されている。（特許文献１、２）。しかしながら、これらの植物抽出物については、一般的な部位の真皮の線維芽細胞や表皮の角化細胞におけるヒアルロン酸量を増加させる作用が確認されるにとどまり、特に口唇に適用した場合の有効性については検討されてこなかった。 Generally, hyaluronic acid is known as an ingredient for giving firmness and volume to the skin, and various plant extracts have been reported as an active ingredient of an external skin preparation for increasing the amount of hyaluronic acid in the dermis. .. (Patent Documents 1 and 2). However, these plant extracts have only been confirmed to have an effect of increasing the amount of hyaluronic acid in dermal fibroblasts and epidermal keratinocytes in general sites, and are particularly effective when applied to the lips. Has not been considered.
本発明者らが検討したところ、特許文献１や２にヒアルロン酸量を増加させる作用を有することが開示されている植物抽出物は、口唇由来の線維芽細胞に対してはヒアルロン酸産生量を増加させる作用を示さなかった（後述の参考例）。
このことから、本発明者らは、口唇の線維芽細胞と口唇以外の部位の線維芽細胞とでは、ヒアルロン酸産生促進に対する応答性が異なることを見出し、口唇に適したヒアルロン酸産生促進剤の探索及びその評価方法の確立の必要性に想到した。
したがって、本発明は、口唇用のヒアルロン酸産生促進剤、及び口唇のボリューム向上用の外用組成物を提供することを目的とする。また、かかる剤を評価又はスクリーニングするための方法を確立することを目的とする。
As a result of studies by the present inventors, the plant extracts disclosed in Patent Documents 1 and 2 have an action of increasing the amount of hyaluronic acid have a hyaluronic acid production amount for lip-derived fibroblasts. It did not show an increasing effect (reference example described later).
From this, the present inventors have found that the responsiveness to the promotion of hyaluronic acid production differs between the fibroblasts of the lips and the fibroblasts of the site other than the lips, and the hyaluronic acid production promoter suitable for the lips is used. I came up with the need to search and establish an evaluation method for it.
Therefore, it is an object of the present invention to provide a hyaluronic acid production promoter for lips and an external composition for improving volume of lips. It also aims to establish a method for evaluating or screening such agents.
本発明者らは、鋭意研究の結果、口唇由来の線維芽細胞を用いれば、口唇用のヒアルロン酸産生促進剤を評価又はスクリーニングできることに想到した。そして、該方法によりジユ抽出物及びセイヨウボダイジュ抽出物が、口唇由来の線維芽細胞に対して優れたヒアルロン酸産生促進作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。 As a result of diligent research, the present inventors have come up with the idea that lip-derived fibroblasts can be used to evaluate or screen hyaluronic acid production promoters for lips. Then, by this method, it was found that the diu extract and the linden extract have an excellent hyaluronic acid production promoting action on the fibroblasts derived from the lips, and the present invention has been completed.
すなわち、本発明は以下の通りである。
[１]ジユ抽出物及び／又はセイヨウボダイジュ抽出物からなる、口唇用のヒアルロン酸産生促進剤。
[２][１]に記載の口唇用のヒアルロン酸産生促進剤を含有する、口唇のボリューム向上用の外用組成物。
[３]化粧料（医薬部外品を含む）である、[２]に記載の外用組成物。
[４]口唇由来の線維芽細胞を用いることを特徴とする、口唇用のヒアルロン酸産生促進剤を評価又はスクリーニングする方法。
[５]被験物質を口唇由来の線維芽細胞に添加する工程、及び被験物質を添加した口唇由来の線維芽細胞におけるヒアルロン酸産生量が、被験物質を添加しなかった口唇由来の線維芽細胞における産生量と比較して大きい被験物質を、口唇用のヒアルロン酸産生促進作用を有すると判断する工程、を含む、[４]に記載の方法。
That is, the present invention is as follows.
[1] A hyaluronic acid production promoter for lips, which comprises a diure extract and / or a iliacea extract.
[2] An external composition for improving the volume of lips, which comprises the hyaluronic acid production promoter for lips according to [1].
[3] The external composition according to [2], which is a cosmetic (including quasi-drugs).
[4] A method for evaluating or screening a hyaluronic acid production promoter for lips, which comprises using fibroblasts derived from lips.
[5] The step of adding the test substance to the lip-derived fibroblasts and the amount of hyaluronic acid produced in the lip-derived fibroblasts to which the test substance was added were found in the lip-derived fibroblasts to which the test substance was not added. The method according to [4], comprising a step of determining that a test substance having a large production amount has a hyaluronic acid production promoting action for lips.
本発明により、口唇におけるヒアルロン酸産生を促進させ、該産生量を増加させることができるヒアルロン酸産生促進剤を提供される。また、該ヒアルロン酸産生促進剤を口唇用の外用組成物に含有させることにより、口唇のボリューム向上用途に好適に供することができる。また、口唇用のヒアルロン酸産生促進剤を、適切に評価又は探索することができる方法が提供される。 INDUSTRIAL APPLICABILITY The present invention provides a hyaluronic acid production promoter capable of promoting hyaluronic acid production in the lips and increasing the production amount. In addition, by incorporating the hyaluronic acid production promoter in an external composition for lips, it can be suitably used for improving the volume of lips. In addition, a method capable of appropriately evaluating or searching for a hyaluronic acid production promoter for lips is provided.
＜１＞口唇用のヒアルロン酸産生促進剤
本発明の口唇用のヒアルロン酸産生促進剤は、ジユ（地楡、ワレモコウ、吾木香、吾亦紅、Sanguisorba officinalis）抽出物及び／又はセイヨウボダイジュ（西洋菩提樹、Tilia platyphyllos）抽出物からなる。
上記植物抽出物は、通常化粧料や医薬品の皮膚外用組成物に用いられるものであればよい。例えば、該植物由来の抽出物自体のみならず、抽出物の画分、精製した画分、抽出物乃至は画分、精製物の溶媒除去物も含んでよい。また、該植物抽出物は、自生若しくは生育された植物、漢方生薬原料等として販売されるものを用いた抽出物、市販されている抽出物等であってもよい。
抽出操作は、植物部位の全草を用いるほか、植物体、地上部、根茎部、木幹部、葉部、茎部、花穂、花蕾等の部位を使用することできるが、予めこれらを粉砕あるいは細切して抽出効率を向上させることが好ましい。抽出溶媒としては、水、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノールなどのアルコール類、１，３−ブタンジオール、ポリプロピレングリコールなどの多価アルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル類等の極性溶媒から選択される１種乃至は２種以上が好適なものとして例示することができる。具体的な抽出方法としては、例えば、植物体等の抽出に用いる部位乃至はその乾燥物１質量に対して、溶媒を１〜３０質量部加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬し、室温まで冷却した後、所望により不溶物及び／又は溶媒除去し、カラムクロマトグラフィー等で分画精製する方法が挙げられる。
<1> Hyaluronic acid production promoter for lips The hyaluronic acid production promoter for lips of the present invention is a linden (Sanguisorba officinalis) extract and / or Tilia platyphylla (Western linden tree, Tilia). platyphyllos) consists of an extract.
The above-mentioned plant extract may be any one usually used for external skin compositions of cosmetics and pharmaceuticals. For example, not only the plant-derived extract itself, but also a fraction of the extract, a purified fraction, an extract or a fraction, and a solvent-removed product of the purified product may be included. Further, the plant extract may be a native or grown plant, an extract using a product sold as a raw material for Chinese herbal medicine, an extract on the market, or the like.
In the extraction operation, in addition to using the whole plant part, parts such as the plant body, the above-ground part, the rhizome part, the tree trunk, the leaf part, the stem part, the spikes, and the flower buds can be used, but these are crushed or finely divided in advance. It is preferable to cut it to improve the extraction efficiency. Extraction solvents include water, alcohols such as ethanol, isopropyl alcohol and butanol, polyhydric alcohols such as 1,3-butanediol and polypropylene glycol, ketones such as acetone and methyl ethyl ketone, and ethers such as diethyl ether and tetrahydrofuran. One or more selected from polar solvents such as the above can be exemplified as suitable ones. As a specific extraction method, for example, 1 to 30 parts by mass of a solvent is added to a part used for extraction of a plant or the like or 1 mass of a dried product thereof, and at room temperature for several days at a temperature near the boiling point. If there is, a method of immersing for several hours, cooling to room temperature, removing insoluble matter and / or solvent if desired, and fractionally purifying by column chromatography or the like can be mentioned.
本発明の口唇用のヒアルロン酸産生促進剤は、口唇における、より具体的には口唇の真皮の線維芽細胞におけるヒアルロン酸産生を促進することができる。かかる産生促進は、ヒアルロン酸量を直接又は間接的に、また定量的又は定性的に測定することにより確認されればよく、例えば後述の評価方法により確認することができる。 The hyaluronic acid production promoter for lips of the present invention can promote hyaluronic acid production in the lips, more specifically, in the fibroblasts of the dermis of the lips. Such production promotion may be confirmed by directly or indirectly measuring the amount of hyaluronic acid, quantitatively or qualitatively, and can be confirmed, for example, by the evaluation method described later.
本発明の口唇用のヒアルロン酸産生促進剤の投与経路は、特に限定されないが、通常は
経皮であり、より具体的には口唇の経皮である。
投与量としては、特に限定されないが、所望の効果と安全性とを考慮して、例えば経皮投与する場合は、固形物換算で０．０００２〜０．０５ｍｇ／日が好ましい。
The route of administration of the hyaluronic acid production promoter for lips of the present invention is not particularly limited, but is usually transdermal, and more specifically, percutaneous of the lips.
The dose is not particularly limited, but in consideration of desired effects and safety, for example, in the case of transdermal administration, 0.0002 to 0.05 mg / day in terms of solid matter is preferable.
本発明の口唇用のヒアルロン酸産生促進剤は、任意の組成物に含有させることができ、特に経皮吸収による効果が期待できる皮膚外用組成物とすることが好ましい。皮膚外用組成物の態様としては、皮膚に外用で適用されるものであれば特に限定されないが、通常は口唇の皮膚に適用されるものであり、また化粧料（医薬部外品を含む）、医薬品等が好ましく挙げられ、化粧料がより好ましい。また、かかる外用組成物は、口唇のボリューム向上用の外用組成物であることがさらに好ましい。
なお、本明細書において「口唇のボリューム向上」とは、口唇の真皮のヒアルロン酸量が増加することによりハリや弾力が増大し、唇のボリューム感や厚み感がある状態をいう。したがって、本願発明の口唇のボリューム向上用の外用組成物は、これを適用することにより、口唇にボリューム感、厚み感、ふっくらした感じを与え、抗老化（アンチエイジング）効果をもたらすものである。
The hyaluronic acid production promoter for lips of the present invention can be contained in any composition, and it is particularly preferable to use a composition for external use on the skin, which is expected to have an effect of percutaneous absorption. The embodiment of the composition for external use on the skin is not particularly limited as long as it is applied externally to the skin, but is usually applied to the skin of the lips, and cosmetics (including quasi-drugs). Pharmaceuticals and the like are preferably mentioned, and cosmetics are more preferable. Further, it is more preferable that the external composition is an external composition for improving the volume of the lips.
In addition, in this specification, "improvement of volume of lips" means a state in which elasticity and elasticity are increased by increasing the amount of hyaluronic acid in the dermis of the lips, and there is a feeling of volume and thickness of the lips. Therefore, the external composition for improving the volume of the lips of the present invention gives the lips a voluminous feeling, a thick feeling, and a fluffy feeling by applying the composition, and brings about an anti-aging effect.
本願発明の口唇のボリューム向上用の外用組成物の剤型としては、例えば、ローション剤型、乳液やクリーム等の乳化剤型、オイル剤型、ジェル剤型、パック、洗浄料等が挙げられ、特に限定されない。 Examples of the dosage form of the external composition for improving the volume of the lips of the present invention include lotion type, emulsifier type such as milky lotion and cream, oil type, gel type, pack, cleaning agent and the like. Not limited.
本発明の口唇用のヒアルロン酸産生促進剤を口唇のボリューム向上用の外用組成物に含有させる場合は、その量を組成物全量に対して総量（固形物換算）で、好ましくは０．００１％〜２０質量％、より好ましくは０．０１〜１０質量％、さらに好ましくは０．０５〜５質量％の含有量とすると、所望の効果を得やすく、また処方設計の自由度を確保できる。 When the hyaluronic acid production promoter for lips of the present invention is contained in the external composition for improving the volume of lips, the amount thereof is the total amount (in terms of solid matter), preferably 0.001%, based on the total amount of the composition. When the content is set to ~ 20% by mass, more preferably 0.01 to 10% by mass, still more preferably 0.05 to 5% by mass, the desired effect can be easily obtained and the degree of freedom in formulation design can be ensured.
本発明の口唇のボリューム向上用の外用組成物は、口唇用のヒアルロン酸産生促進剤以外に通常の化粧料に配合される成分を、本発明の効果を損なわない限りにおいて任意に含有することができる。
かかる成分としては、各種有効成分、油性成分、界面活性剤、多価アルコール、増粘剤、粉体類、紫外線吸収剤等が挙げられる。
The external composition for improving the volume of the lips of the present invention may optionally contain ingredients contained in ordinary cosmetics other than the hyaluronic acid production promoter for the lips as long as the effects of the present invention are not impaired. can.
Examples of such components include various active ingredients, oily components, surfactants, polyhydric alcohols, thickeners, powders, ultraviolet absorbers and the like.
有効成分としては、美白成分、シワ改善成分、抗炎症成分、動植物由来の抽出物等が挙げられる。
美白成分としては、一般的に化粧料に用いられているものであれば特に限定はない。例えば、４−ｎ−ブチルレゾルシノール、アスコルビン酸グルコシド、３−О−エチルアスコルビン酸、トラネキサム酸、アルブチン、エラグ酸、コウジ酸、リノール酸、ニコチン酸アミド、５，５'−ジプロピルビフェニル−２，２'−ジオール、５'−アデニル酸二ナトリウム、トラネキサム酸セチル、４−メトキシサリチル酸カリウム塩、ハイドロキノン、パントテン酸等が挙げられる。
Examples of the active ingredient include a whitening ingredient, a wrinkle improving ingredient, an anti-inflammatory ingredient, an animal and plant-derived extract, and the like.
The whitening ingredient is not particularly limited as long as it is generally used in cosmetics. For example, 4-n-butylresorcinol, ascorbic acid glucoside, 3-О-ethylascorbic acid, tranexamic acid, arbutin, ellagic acid, kodi acid, linoleic acid, nicotinic acid amide, 5,5'-dipropylbiphenyl-2, Examples thereof include 2'-diol, 5'-disodium adenylate, cetyl tranexamic acid, potassium 4-methoxysalicylic acid salt, hydroquinone, pantothenic acid and the like.
シワ改善成分としては、一般的に化粧料に用いられているものであれば特に限定はない。例えば、三フッ化イソプロピルオキソプロピルアミノカルボニルピロリジンカルボニルメチルプロピルアミノカルボニルベンゾイルアミノ酢酸ナトリウム、ニコチン酸アミド、ビタミンＡ又はその誘導体（レチノール、レチナール、レチノイン酸、トレチノイン、イソトレチノイン、レチノイン酸トコフェロール、パルミチン酸レチノール、酢酸レチノール等）、ウルソール酸ベンジルエステル、ウルソール酸リン酸エステル、ベツリン酸ベンジルエステル、ベンジル酸リン酸エステルが挙げられる。 The wrinkle improving ingredient is not particularly limited as long as it is generally used in cosmetics. For example, isopropyl trifluoride oxopropylaminocarbonylpyrrolidinecarbonylmethylpropylaminocarbonylbenzoylaminoacetate sodium, nicotinic acid amide, vitamin A or a derivative thereof (retinol, retinal, retinoic acid, trethinoin, isotretinoin, tocopherol retinoate, retinol palmitate). , Retinyl acetate, etc.), ursoleic acid benzyl ester, ursoleic acid phosphate ester, bethuric acid benzyl ester, benzylic acid phosphate ester.
動植物由来の抽出物としては、一般的に化粧料に用いられているものであれば特に限定
はない。例えば、アケビエキス、アスナロエキス、アスパラガスエキス、アボカドエキス、アマチャエキス、アーモンドエキス、アルニカエキス、アロエエキス、アロニアエキス、アンズエキス、イチョウエキス、インドキノエキス、ウイキョウエキス、ウドエキス、エイジツエキス、エゾウコギエキス、エンメイソウエキス、オウゴンエキス、オウバクエキス、オウレンエキス、オタネニンジンエキス、オトギリソウエキス、オドリコソウエキス、オレンジエキス、カキョクエキス、カッコンエキス、カモミラエキス、カロットエキス、カワラヨモギエキス、カンゾウエキス、キウイエキス、キューカンバーエキス、グアバエキス、クジンエキス、クチナシエキス、クマザサエキス、クララエキス、クルミエキス、グレープフルーツエキス、黒米エキス、クロレラエキス、クワエキス、ケイケットウエキス、ゲットウヨウエキス、ゲンチアナエキス、ゲンノショウコエキス、紅茶エキス、ゴボウエキス、コメエキス、コメ発酵エキス、コメヌカ発酵エキス、コメ胚芽油、コケモモエキス、サルビアエキス、サボンソウエキス、ササエキス、サンザシエキス、サンシャエキス、サンショウエキス、シイタケエキス、ジオウエキス、シコンエキス、シソエキス、シナノキエキス、シモツケソウエキス、シャクヤクエキス、ショウキョウエキス、ショウブ根エキス、シラカバエキス、スギナエキス、ステビアエキス、ステビア発酵物、セイヨウキズタエキス、セイヨウサンザシエキス、セイヨウニワトコエキス、セイヨウノコギリソウエキス、セイヨウハッカエキス、セージエキス、ゼニアオイエキス、センキュウエキス、センブリエキス、ソウハクヒエキス、ダイオウエキス、ダイズエキス、タイソウエキス、タイムエキス、タンポポエキス、茶エキス、チョウジエキス、チンピエキス、甜茶エキス、トウガラシエキス、トウキエキス、トウキンセンカエキス、トウニンエキス、トウヒエキス、ドクダミエキス、トマトエキス、納豆エキス、ニンジンエキス、ニンニクエキス、ノバラエキス、ハイビスカスエキス、バクモンドウエキス、ハスエキス、パセリエキス、バーチエキス、ハマメリスエキス、ヒキオコシエキス、ヒノキエキス、ビワエキス、フキタンポポエキス、フキノトウエキス、ブクリョウエキス、ブッチャーブルームエキス、ブドウエキス、ブドウ種子エキス、ヘチマエキス、ベニバナエキス、ペパーミントエキス、ボダイジュエキス、ボタンエキス、ホップエキス、マツエキス、マヨナラエキス、マロニエエキス、ミズバショウエキス、ムクロジエキス、メリッサエキス、モズクエキス、モモエキス、ヤグルマギクエキス、ユーカリエキス、ユキノシタエキス、ユズエキス、ユリエキス、ヨクイニンエキス、ヨモギエキス、ラベンダーエキス、緑茶エキス、リンゴエキス、ルイボス茶エキス、レイシエキス、レタスエキス、レモンエキス、レンギョウエキス、レンゲソウエキス、ローズエキス、ローズマリーエキス、ローマカミツレエキス、ローヤルゼリーエキス、ワレモコウエキス等のエキスが好ましいものとして挙げられる。
The animal and plant-derived extracts are not particularly limited as long as they are generally used in cosmetics. For example, akebi extract, asunaro extract, asparagus extract, avocado extract, amacha extract, almond extract, arnica extract, aloe extract, aronia extract, apricot extract, ginkgo extract, indokino extract, uikyo extract, udo extract, agetsu extract, elephant kogi extract. , Enmeisou extract, Ogon extract, Oubaku extract, Ouren extract, Otaneninjin extract, Otogirisou extract, Odorikosou extract, Orange extract, Kakyoku extract, Kakkon extract, Chamomile extract, Carrot extract, Kawarayomogi extract, Kanzo extract, Kiwi extract, Cucumber extract, Guava extract, Kujin extract, Kuchinashi extract, Kumazasa extract, Clara extract, Walnut extract, Grapefruit extract, Black rice extract, Chlorella extract, Kwa extract, Keiketto extract, Gettoyo extract, Gentiana extract, Gennoshoco extract, Tea extract, Gobo extract, Rice extract, Fermented rice extract, fermented rice bran extract, rice germ oil, kokemomo extract, salvia extract, sabonsou extract, sasa extract, sanzashi extract, sansha extract, sansho extract, shiitake extract, dioe extract, shikon extract, shiso extract, shinanoki extract, shimotsukesou extract, shakuyaku Extract, ginger extract, ginger root extract, white birch extract, sugina extract, stevia extract, stevia fermented product, ginger extract, ginger extract, ginger extract, ginger extract, ginger extract, sage extract, zenia oyster extract, senkyu Extract, Senburi extract, Souhakuhi extract, Daiou extract, Soybean extract, Taiso extract, Thyme extract, Dandelion extract, Tea extract, Chouji extract, Chinpi extract, Jincha extract, Togarashi extract, Touki extract, Tokinsenka extract, Tounin extract, Tohi extract, Dokudami extract , Tomato extract, Natto extract, Carrot extract, Garlic extract, Novara extract, Hibiscus extract, Bakumondou extract, Hass extract, Parsley extract, Birch extract, Hamamelis extract, Hikiokoshi extract, Hinoki extract, Biwa extract, Fukitanpopo extract, Fukinotou extract, Bukuryo extract , Butcher Bloom Extract, Grape Extract, Grape Seed Extract, Hechima Extract, Benibana Extract, Peppermint Extract, Bo Daiju extract, button extract, hop extract, pine extract, mayonara extract, marronnier extract, mizubasho extract, mukuroji extract, melissa extract, mozuku extract, peach extract, yagurumagiku extract, eucalyptus extract, yukinoshita extract, yuzu extract, lily extract, yokunin extract, yomogi extract, lavender Extracts such as extract, green tea extract, apple extract, louis bosce tea extract, reishi extract, lettuce extract, lemon extract, lotus extract, lotus extract, rose extract, rosemary extract, Roman chamomile extract, royal jelly extract, and crackle extract are preferable. Can be mentioned.
抗炎症成分としては、クラリノン、グラブリジン、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、パントテニルアルコール等が挙げられ、好ましくは、グリチルリチン酸及びその塩、グリチルレチン酸アルキル及びその塩、並びに、グリチルレチン酸及びその塩である。 Examples of the anti-inflammatory component include clarinone, glabridin, glycyrrhizinic acid, glycyrrhetinic acid, pantothenyl alcohol and the like, preferably glycyrrhizinic acid and its salt, alkyl glycyrrhetinate and its salt, and glycyrrhetinic acid and its salt.
油性成分としては、極性油、揮発性炭化水素油等が挙げられる。
極性油としては、合成エステル油として、ミリスチン酸イソプロピル、オクタン酸セチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸デシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、酢酸ラノリン、イソノナン酸２−エチルヘキシル、ステアリン酸イソセチル、イソステアリン酸イソセチル、１２−ヒドロキシステアリン酸コレステリル、ジ−２−エチルヘキサン酸エチレングリコール、ジペンタエリスリトール脂肪酸エステル、モノイソステアリン酸Ｎ−アルキルグリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、リンゴ酸ジイソステアリル、ジ−２−ヘプチルウンデカン酸グリセリル、トリ−２−エチルヘキサン酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、テトラ−２−エチルヘキサン酸ペンタンエリスリトール、トリ−２−エチルヘキサン酸グリセリル、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパンを挙げることができる。
Examples of the oily component include polar oils and volatile hydrocarbon oils.
As polar oils, synthetic ester oils include isopropyl myristate, cetyl octanate, octyldodecyl myristate, isopropyl palmitate, butyl stearate, hexyl laurate, myristyl myristate, decyl oleate, hexyl dimethyl octanoate, and lactic acid. Cetyl, myristyl lactate, lanolin acetate, 2-ethylhexyl isononanoate, isocetyl stearate, isocetyl isostearate, cholesteryl 12-hydroxystearate, ethylene glycol di-2-ethylhexanoate, dipentaerythritol fatty acid ester, N-monoisostearate Alkyl glycol, neopentyl glycol dicaprate, diisostearyl malate, glyceryl di-2-heptylundecanoate, trimethylolpropane tri-2-ethylhexanoate, trimethylolpropane triisostearate, pentan tetra-2-ethylhexanoate Examples thereof include erythritol, glyceryl tri-2-ethylhexanoate, and trimethylolpropane triisostearate.
さらに、セチル２−エチルヘキサノエート、２−エチルヘキシルパルミテート、トリミリスチン酸グリセリル、トリ−２−ヘプチルウンデカン酸グリセライド、ヒマシ油脂肪酸メチルエステル、オレイン酸オイル、セトステアリルアルコール、アセトグリセライド、パルミチン酸２−ヘプチルウンデシル、アジピン酸ジイソブチル、Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸−２−オクチルドデシルエステル、アジピン酸ジ−２−ヘプチルウンデシル、エチルラウレート、セバチン酸ジ−２−エチルヘキシル、ミリスチン酸２−ヘキシルデシル、パルミチン酸２−ヘキシルデシル、アジピン酸２−ヘキシルデシル、セバチン酸ジイソプロピル、コハク酸２−エチルヘキシル、酢酸エチル、酢酸ブチル、酢酸アミル、クエン酸トリエチル、オクチルメトキシシンナメート等も挙げられる。 In addition, cetyl 2-ethylhexanoate, 2-ethylhexyl palmitate, glyceryl trimyristine, glyceride tri-2-heptylundecanoate, methyl ester of castor oil fatty acid, oleic acid oil, cetostearyl alcohol, acetoglyceride, palmitic acid 2 -Heptylundecyl, diisobutyl adipate, N-lauroyl-L-glutamate-2-octyldodecyl ester, di-2-heptylundecyl adipyl, ethyllaurate, di-2-ethylhexyl sebatate, 2-hexyl myristate Examples thereof include decyl, 2-hexyldecyl palmitate, 2-hexyldecyl adipate, diisopropyl sebatate, 2-ethylhexyl succinate, ethyl acetate, butyl acetate, amyl acetate, triethyl citrate, and octylmethoxycinnamate.
また、天然油として、アボガド油、ツバキ油、タートル油、マカデミアナッツ油、トウモロコシ油、ミンク油、オリーブ油、ナタネ油、卵黄油、ゴマ油、パーシック油、小麦胚芽油、サザンカ油、ヒマシ油、アマニ油、サフラワー油、綿実油、エノ油、大豆油、落花生油、茶実油、カヤ油、コメヌカ油、シナギリ油、日本キリ油、ホホバ油、胚芽油、トリグリセリン、トリオクタン酸グリセリル、トリイソパルミチン酸グリセリル等が挙げられる。 Also, as natural oils, avocado oil, camellia oil, turtle oil, macadamia nut oil, corn oil, mink oil, olive oil, rapeseed oil, egg yolk oil, sesame oil, persic oil, wheat germ oil, southern ka oil, castor oil, flaxseed oil, Saflower oil, cotton seed oil, eno oil, soybean oil, peanut oil, tea seed oil, kaya oil, rice bran oil, cinnamon oil, Japanese millet oil, jojoba oil, germ oil, triglycerin, glyceryl trioctanoate, glyceryl triisopalmitate And so on.
揮発性炭化水素油としては、イソドデカン、イソヘキサデカン等が挙げられる。 Examples of the volatile hydrocarbon oil include isododecane and isohexadecane.
界面活性剤としては、脂肪酸セッケン（ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等）、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル等のアニオン界面活性剤類、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド等のカチオン界面活性剤類、ベタイン系界面活性剤（アルキルベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン等）、イミダゾリン系両性界面活性剤（２−ココイル−２−イミダゾリニウムヒドロキサイド−１−カルボキシエチロキシ２ナトリウム塩等）、アシルメチルタウリン等の両性界面活性剤類、
ソルビタン脂肪酸エステル類（ソルビタンモノステアレート、セスキオレイン酸ソルビタン等） 、グリセリン脂肪酸エステル類（モノステアリン酸グリセリル等）、プロピレングリコール脂肪酸エステル類（モノステアリン酸プロピレングリコール等）、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類（ＰＯＥソルビタンモノオレエート、モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン等）、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−ソルビットモノラウレート等）、ＰＯＥグリセリン脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−グリセリンモノイソステアレート等）、ＰＯＥ脂肪酸エステル類（ポリエチレングリコールモノオレート、ＰＯＥジステアレート等）、ＰＯＥアルキルエーテル類（ＰＯＥ２−オクチルドデシルエーテル等）、ＰＯＥアルキルフェニルエーテル類（ＰＯＥノニルフェニルエーテル等）、プルロニック型類、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル類（ＰＯＥ・ＰＯＰ２−デシルテトラデシルエーテル等）、テトロニック類、ＰＯＥヒマシ油・硬化ヒマシ油誘導体（ＰＯＥヒマシ油、ＰＯＥ硬化ヒマシ油等）、ショ糖脂肪酸エステル、アルキルグルコシド等の非イオン界面活性剤類、等が挙げられる。
Examples of the surfactant include anionic surfactants such as fatty acid sekken (sodium laurate, sodium palmitate, etc.), potassium lauryl sulfate, triethanolamine alkyl sulfate ether, stearyltrimethylammonium chloride, benzalconium chloride, laurylamine oxide. Cationic surfactants such as, betaine-based surfactants (alkylbetaine, amide betaine, sulfobetaine, etc.), imidazoline-based amphoteric surfactants (2-cocoyl-2-imidazolinium hydroxyside-1-carboxyethyroxy 2) (Sodium salt, etc.), amphoteric surfactants such as acylmethyltaurine,
Solbitan fatty acid esters (sorbitan monostearate, sorbitan sesquioleate, etc.), glycerin fatty acid esters (glyceryl monostearate, etc.), propylene glycol fatty acid esters (propylene glycol monostearate, etc.), hardened castor oil derivative, glycerin alkyl Ether, POE sorbitan fatty acid esters (POE sorbitan monooleate, monostearate polyoxyethylene sorbitan, etc.), POE sorbit fatty acid esters (POE-sorbit monolaurate, etc.), POE glycerin fatty acid esters (POE-glycerin monoiso) Stearetes, etc.), POE fatty acid esters (polyethylene glycol monooleate, POE distearate, etc.), POE alkyl ethers (POE2-octyldodecyl ether, etc.), POE alkylphenyl ethers (POE nonylphenyl ether, etc.), pluronic types, POE / POP alkyl ethers (POE / POP2-decyltetradecyl ether, etc.), Tetronics, POE castor oil / hardened castor oil derivative (POE castor oil, POE cured castor oil, etc.), sucrose fatty acid ester, alkyl glucoside, etc. Non-ionic surfactants, etc. may be mentioned.
多価アルコールとしては、ポリエチレングリコール、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ジグリセリン、イソプレングリコール、１，２−ペンタンジオール、２，４−ヘキシレングリコール、１，２−ヘキサンジオール、１，２−オクタンジオール等が挙げられる。 Polyhydric alcohols include polyethylene glycol, glycerin, 1,3-butylene glycol, erythritol, sorbitol, xylitol, martitol, propylene glycol, dipropylene glycol, diglycerin, isoprene glycol, 1,2-pentanediol, 2,4. -Hexylene glycol, 1,2-hexanediol, 1,2-octanediol and the like can be mentioned.
増粘剤としては、グアーガム、クインスシード、カラギーナン、ガラクタン、アラビアガム、ペクチン、マンナン、デンプン、キサンタンガム、カードラン、メチルセルロース
、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、グリコーゲン、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸ナトリウム、トラガントガム、ケラタン硫酸、コンドロイチン、ムコイチン硫酸、ヒドロキシエチルグアガム、カルボキシメチルグアガム、デキストラン、ケラト硫酸、ローカストビーンガム、サクシノグルカン、カロニン酸，キチン、キトサン、カルボキシメチルキチン、寒天、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アルキル変性カルボキシビニルポリマー、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、ベントナイト等が挙げられる。
As thickeners, guar gum, quince seed, carrageenan, galactan, arabic gum, pectin, mannan, starch, xanthan gum, curdran, methyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, carboxymethyl cellulose, methyl hydroxypropyl cellulose, chondroitin sulfate, dermatane sulfate, glycogen, Heparan sulfate, hyaluronic acid, sodium hyaluronate, traganth gum, keratane sulfate, chondroitin, mucoitin sulfate, hydroxyethyl guar gum, carboxymethyl guar gum, dextran, keratosulfate, locust bean gum, succinoglucan, carronic acid, chitin, chitosan, carboxymethyl Examples thereof include chitin, agar, polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone, carboxyvinyl polymer, alkyl-modified carboxyvinyl polymer, sodium polyacrylate, polyethylene glycol, bentonite and the like.
粉体類としては、表面を処理されていてもよい、マイカ、タルク、カオリン、合成雲母、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、無水ケイ酸（シリカ）、酸化アルミニウム、硫酸バリウム等の粉体類、表面を処理されていてもよい、ベンガラ、黄酸化鉄、黒酸化鉄、酸化コバルト、群青、紺青、酸化チタン、酸化亜鉛の無機顔料類、表面を処理されていてもよい、雲母チタン、魚燐箔、オキシ塩化ビスマス等のパール剤類、レーキ化されていてもよい赤色２０２号、赤色２２８号、赤色２２６号、黄色４号、青色４０４号、黄色５号、赤色５０５号、赤色２３０号、赤色２２３号、橙色２０１号、赤色２１３号、黄色２０４号、黄色２０３号、青色１号、緑色２０１号、紫色２０１号、赤色２０４号等の有機色素類、ポリエチレン末、ポリメタクリル酸メチル、ナイロン粉末、オルガノポリシロキサンエラストマー等の有機粉体類、が挙げられる。 As the powders, the surface may be treated, such as mica, talc, kaolin, synthetic mica, calcium carbonate, magnesium carbonate, anhydrous silicic acid (silica), aluminum oxide, barium sulfate and the like, and the surface. May be treated, red iron oxide, black iron oxide, cobalt oxide, ultramarine, navy blue, titanium oxide, zinc oxide inorganic pigments, surface may be treated, mica titanium, fish phosphorus foil, Pearl agents such as bismuth oxychloride, red 202, red 228, red 226, yellow 4, blue 404, yellow 5, red 505, red 230, red 223, which may be raked. Organic pigments such as No. 201, Orange No. 201, Red No. 213, Yellow No. 204, Yellow No. 203, Blue No. 1, Green No. 201, Purple No. 201, Red No. 204, Polyethylene powder, Polymethyl methacrylate, Nylon powder, Examples thereof include organic powders such as organopolysiloxane elastomers.
紫外線吸収剤としては、パラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤、アントラニル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、桂皮酸系紫外線吸収剤、ベンゾフェノン系紫外線吸収剤、糖系紫外線吸収剤、２−（２'−ヒドロキシ−５'−ｔ−オクチルフェニル)ベンゾトリアゾール、４−メトキシ−４'−ｔ−ブチルジベンゾイルメタン等の紫外線吸収剤類、等が挙げられる。 Examples of UV absorbers include paraaminobenzoic acid-based UV absorbers, anthranylic acid-based UV absorbers, salicylic acid-based UV absorbers, cinnamic acid-based UV absorbers, benzophenone-based UV absorbers, sugar-based UV absorbers, 2- (2). Examples thereof include UV absorbers such as'-hydroxy-5'-t-octylphenyl) benzotriazole and 4-methoxy-4'-t-butyldibenzoylmethane.
＜２＞口唇用のヒアルロン酸産生促進剤を評価又はスクリーニングする方法
本発明の口唇用のヒアルロン酸産生促進剤を評価又はスクリーニングする方法は、口唇由来の線維芽細胞を用いることを特徴とする。
後述の参考例及び比較例で示すように、口唇の線維芽細胞と口唇以外の部位の線維芽細胞とでは、ヒアルロン酸産生促進に対する応答性が異なり、口唇に適したヒアルロン酸産生促進剤の探索及びその評価をするには、口唇由来の線維芽細胞を用いることが必要である。なお、ここで口唇由来の線維芽細胞は、通常はヒト由来のものであるが、特に限定されない。
<2> Method for evaluating or screening a hyaluronic acid production promoter for lips The method for evaluating or screening a hyaluronic acid production promoter for lips of the present invention is characterized by using lip-derived fibroblasts.
As shown in the reference examples and comparative examples described later, the responsiveness to the promotion of hyaluronic acid production differs between the fibroblasts of the lips and the fibroblasts of the site other than the lips, and the search for a hyaluronic acid production promoter suitable for the lips is performed. And to evaluate it, it is necessary to use lip-derived fibroblasts. Here, the lip-derived fibroblasts are usually derived from humans, but are not particularly limited.
本発明の方法は、通常は、被験物質を口唇由来の線維芽細胞に添加する工程、及び
被験物質を添加した口唇由来の線維芽細胞におけるヒアルロン酸産生量が、被験物質を添加しなかった口唇由来の線維芽細胞における産生量と比較して大きい被験物質を、口唇用のヒアルロン酸産生促進作用を有すると判断する工程を含む。
In the method of the present invention, usually, the step of adding the test substance to the fibroblasts derived from the lips and the amount of hyaluronic acid produced in the fibroblasts derived from the lips to which the test substance was added increased the amount of hyaluronic acid produced in the lips to which the test substance was not added. A step of determining that a test substance having a large amount compared to the amount produced in the derived fibroblasts has a hyaluronic acid production promoting action for lips is included.
ヒアルロン酸量の測定は、直接的であっても間接的であってもよく、また定性的であっても定量出来であってもよく、任意の方法で行うことができる。例えば、ＥＬＩＳＡ法、標識ヒアルロン酸結合タンパクを用いて染色したヒアルロン酸を測定する方法、電気泳動法、液体クロマトグラフ法、ヒアルロン酸合成酵素の活性を測定する方法、前記酵素の遺伝子発現量をｍＲＮＡの解析等にて測定する方法等が挙げられる。 The amount of hyaluronic acid may be measured directly or indirectly, and may be qualitative or quantifiable, and can be carried out by any method. For example, the ELISA method, a method for measuring hyaluronan stained with a labeled hyaluronan-binding protein, an electrophoresis method, a liquid chromatograph method, a method for measuring the activity of hyaluronan synthase, and the gene expression level of the enzyme are expressed in mRNA. A method of measuring by analysis or the like of the above can be mentioned.
本発明の方法の判断工程においては、通常は、被験物質を添加した口唇由来の線維芽細胞におけるヒアルロン酸産生量が、被験物質を添加しなかった口唇由来の線維芽細胞における産生量と比較して大きければよく、その程度は特に限定されないが、好ましくは被験物質添加後１２〜４８時間経過後に１２０％以上に増大した場合に変化したとすることが
でき、より好ましくは１３０％以上に増大であり、さらに好ましくは１４０％以上に増大である。
In the determination step of the method of the present invention, the amount of hyaluronic acid produced in the lip-derived fibroblasts to which the test substance was added is usually compared with the amount produced in the lip-derived fibroblasts to which the test substance was not added. It may be as large as possible, and the degree thereof is not particularly limited, but it can be said that the change is preferably made when the amount increases to 120% or more 12 to 48 hours after the addition of the test substance, and more preferably to 130% or more. Yes, more preferably 140% or more.
本発明の方法が対象とする被験物質は、純物質、動植物由来の抽出物、又はそれらの混合物等のいずれであってもよいが、好ましくは植物抽出物である。
動植物由来の抽出物は、動物又は植物由来の抽出物自体のみならず、抽出物の画分、精製した画分、抽出物乃至は画分、精製物の溶媒除去物の総称を意味するものとし、植物由来の抽出物は、自生若しくは生育された植物、漢方生薬原料等として販売されるものを用いた抽出物、市販されている抽出物等が挙げられる。
抽出操作は、植物部位の全草を用いるほか、植物体、地上部、根茎部、木幹部、葉部、茎部、花穂、花蕾等の部位を使用することできるが、予めこれらを粉砕あるいは細切して抽出効率を向上させることが好ましい。抽出溶媒としては、水、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノールなどのアルコール類、１，３−ブタンジオール、ポリプロピレングリコールなどの多価アルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル類等の極性溶媒から選択される１種乃至は２種以上が好適なものとして例示することができる。具体的な抽出方法としては、例えば、植物体等の抽出に用いる部位乃至はその乾燥物１質量に対して、溶媒を１〜３０質量部加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬し、室温まで冷却した後、所望により不溶物及び／又は溶媒除去し、カラムクロマトグラフィー等で分画精製する方法が挙げられる。
The test substance targeted by the method of the present invention may be a pure substance, an extract derived from animals and plants, a mixture thereof, or the like, but is preferably a plant extract.
The animal or plant-derived extract shall mean not only the animal or plant-derived extract itself, but also the fraction of the extract, the purified fraction, the extract or the fraction, and the solvent-removed extract of the purified product. Examples of the plant-derived extract include native or grown plants, extracts using those sold as raw materials for Chinese herbal medicine, and commercially available extracts.
In the extraction operation, in addition to using the whole plant part, parts such as the plant body, the above-ground part, the rhizome part, the tree trunk, the leaf part, the stem part, the spikes, and the flower buds can be used, but these are crushed or finely divided in advance. It is preferable to cut it to improve the extraction efficiency. Extraction solvents include water, alcohols such as ethanol, isopropyl alcohol and butanol, polyhydric alcohols such as 1,3-butanediol and polypropylene glycol, ketones such as acetone and methyl ethyl ketone, and ethers such as diethyl ether and tetrahydrofuran. One or more selected from polar solvents such as the above can be exemplified as suitable ones. As a specific extraction method, for example, 1 to 30 parts by mass of a solvent is added to a part used for extraction of a plant or the like or 1 mass of a dried product thereof, and at room temperature for several days at a temperature near the boiling point. If there is, a method of immersing for several hours, cooling to room temperature, removing insoluble matter and / or solvent if desired, and fractionally purifying by column chromatography or the like can be mentioned.
本発明のスクリーニング方法により選択された口唇用のヒアルロン酸産生促進剤は、口唇の線維芽細胞においてヒアルロン酸の産生を促進し、その産生量を増加させる作用を有するため、口唇にハリや弾力を与え、ボリューム感や厚み感をもたらし、抗老化効果を提供するものである。したがって、本発明の方法によりスクリーニングされた口唇用のヒアルロン酸産生促進剤は、口唇用の化粧料等の外用組成物に好適に配合することができる。 The hyaluronic acid production promoter for lips selected by the screening method of the present invention has the effect of promoting the production of hyaluronic acid in the fibroblasts of the lips and increasing the amount of hyaluronic acid produced, thereby giving the lips firmness and elasticity. It gives a feeling of volume and thickness, and provides an anti-aging effect. Therefore, the hyaluronic acid production promoter for lips screened by the method of the present invention can be suitably blended in an external composition such as cosmetics for lips.
また、本発明の評価方法により、口唇用のヒアルロン酸産生促進剤の作用効果を評価することができる。これは、これまで肌一般に対して有効または有効ではないと判断されていたヒアルロン酸産生促進剤の、口唇におけるヒアルロン酸産生促進の有効性を適切に評価することができる点で画期的である。 In addition, the evaluation method of the present invention can evaluate the action and effect of the hyaluronic acid production promoter for lips. This is epoch-making in that the effectiveness of the hyaluronic acid production-promoting agent, which has been judged to be effective or not effective for the skin in general, can be appropriately evaluated for promoting hyaluronic acid production in the lips. ..
以下、本発明を実施例により更に詳細に説明するが、本発明は、その要旨を超えない限り、以下の実施例に限定されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples, but the present invention is not limited to the following Examples as long as the gist thereof is not exceeded.
＜参考例＞
96穴の細胞培養用プレートの各ウェルに、ヒト口唇由来の線維芽細胞（ＪＣＲＢ９１０３ ＫＤ，国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所より入手、以降の実験でも同じ）を１００００個／ウェルずつ播種した。ここに、ヤグルマギク抽出物（丸善製薬株式会社）又はスギナ抽出物（丸善製薬株式会社）を（１０％エタノール／１０％ブチレングリコール）を用いてそれぞれ希釈した被験液を１μＬ／ウェルずつ添加し（終濃度１容量％）、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ、シグマアルドリッチジャパン合同会社、以降の実験でも同じ）培地存在下で48時間培養した。その後、培地に放出されたヒアルロン酸量を、Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＡＮＤ ＤＩＡＧＮＯＳＴＩＣ
ＳＹＳＴＥＭＳ，ＩＮＣ．、以降の実験でも同じ）を用いてＥＬＩＳＡ法にて測定した。なお、陰性対照として、（１０％エタノール／１０％ブチレングリコール）を１μＬ／ウェル添加したものを設けた。
<Reference example>
In each well of the 96-well cell culture plate, 10,000 human lip-derived fibroblasts (JCRB9103 KD, obtained from the National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition, the same in subsequent experiments) were placed at 10,000 cells / well. Sown. To this, 1 μL / well of the test solution diluted with (10% ethanol / 10% butylene glycol) of Yagurumagiku extract (Maruzen Pharmaceuticals Co., Ltd.) or Sugina extract (Maruzen Pharmaceuticals Co., Ltd.) was added (final). Concentration 1% by volume), Dulvecco's Modified Eagle's Medium (DMEM, Sigma Aldrich Japan GK, the same in subsequent experiments) was cultured for 48 hours in the presence of medium. After that, the amount of hyaluronic acid released into the medium was measured by Hyaluronan Quantikine ELISA Kit (RESEARCH AND DIAGNOSTIC).
SYSTEMS, INC. , The same applies to the subsequent experiments), and the measurement was performed by the ELISA method. As a negative control, 1 μL / well of (10% ethanol / 10% butylene glycol) was added.
結果を図１に示す。ヤグルマギク抽出物又はスギナ抽出物を添加した場合のヒアルロン酸産生量は、陰性対照との有意差がなかった。すなわち、これらの抽出物については、口唇由来の線維芽細胞に対するヒアルロン酸産生促進作用は認められなかった。 The results are shown in FIG. The amount of hyaluronic acid produced when the cornflower extract or the horsetail extract was added was not significantly different from that of the negative control. That is, no hyaluronic acid production-promoting effect on lip-derived fibroblasts was observed in these extracts.
＜実施例１＞
９６穴の細胞培養用プレートの各ウェルに、ヒト口唇由来の線維芽細胞を１００００個／ウェルずつ播種した。ここに、以下に示す評価物質を（１０％エタノール／１０％ブチレングリコール）を用いてそれぞれ希釈した被験液を１μＬ／ウェルずつ添加し（終濃度１容量％）、ＤＭＥＭ培地存在下で48時間培養した。その後、培地に放出されたヒアルロン酸量を、Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔを用いてＥＬＩＳＡ法にて測定した。なお、陰性対照として、（１０％エタノール／１０％ブチレングリコール）を１μＬ／ウェル添加したものを設けた。
<Example 1>
10,000 human lip-derived fibroblasts / well were seeded in each well of the 96-well cell culture plate. To this, 1 μL / well of each test solution diluted with (10% ethanol / 10% butylene glycol) the following evaluation substances was added (final concentration 1 volume%), and cultured in the presence of DMEM medium for 48 hours. did. Then, the amount of hyaluronic acid released into the medium was measured by the ELISA method using a Hyaluronan Quantikine ELISA Kit. As a negative control, 1 μL / well of (10% ethanol / 10% butylene glycol) was added.
評価物質（入手元）：
セイヨウボダイジュ抽出物（香栄興業株式会社）、ローズマリー抽出物（香栄興業株式会社）、ユーカリ抽出物（丸善製薬株式会社）、紅茶抽出物（一丸ファルコス株式会社）、オウバク抽出物（一丸ファルコス株式会社）、オウゴン抽出物（一丸ファルコス株式会社）、レイシ抽出物（丸善製薬株式会社）、ユキノシタ抽出物（香栄興業株式会社）、キウイ抽出物（一丸ファルコス株式会社）、ローマカミツレ抽出物（香栄興業株式会社）、グレープフルーツ抽出物（一丸ファルコス株式会社）、ベニバナ抽出物（一丸ファルコス株式会社）、ホホバリーフ抽出物（香栄興業株式会社）、シモツケソウ抽出物（一丸ファルコス株式会社）、アルテア抽出物（香栄興業株式会社）、イチョウ葉抽出物（丸善製薬株式会社）、カミツレ抽出物（香栄興業株式会社）、ソウハクヒ抽出物（丸善製薬株式会社）、クチナシ抽出物（香栄興業株式会社）、オトギリソウ抽出物（一丸ファルコス株式会社）、ジユ抽出物（丸善製薬株式会社）、ガイヨウ抽出物（丸善製薬株式会社）
Evaluation substance (source):
Seiyoubodaiju Extract (Koei Kogyo Co., Ltd.), Rosemary Extract (Koei Kogyo Co., Ltd.), Eucalyptus Extract (Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.), Tea Extract (Ichimaru Falcos Co., Ltd.), Oubaku Extract (Ichimaru Falcos Co., Ltd.) Ogon Extract (Ichimaru Falcos Co., Ltd.), Reishi Extract (Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.), Yukinoshita Extract (Koei Kogyo Co., Ltd.), Kiwi Extract (Ichimaru Falcos Co., Ltd.), Roman Chamomile Extract (Ichimaru Falcos Co., Ltd.) Koei Kogyo Co., Ltd.), Grapefruit Extract (Ichimaru Falcos Co., Ltd.), Benibana Extract (Ichimaru Falcos Co., Ltd.), Hohoba Leaf Extract (Koei Kogyo Co., Ltd.), Shimotsukesou Extract (Ichimaru Falcos Co., Ltd.), Artea Extract (Koei Kogyo Co., Ltd.), Ginkgo Leaf Extract (Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.), Chamomile Extract (Koei Kogyo Co., Ltd.), Souhakuhi Extract (Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.), Kuchinashi Extract (Koei Kogyo Co., Ltd.) Company), Otogirisou Extract (Ichimaru Falcos Co., Ltd.), Jiyu Extract (Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.), Gaiyou Extract (Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.)
結果を図２に示す。セイヨウボダイジュ抽出物、及びジユ抽出物を添加した場合は、陰性対照に対して２０％超の有意なヒアルロン酸産生量の増加が認められた。すなわち、これらの抽出物については、口唇由来の線維芽細胞に対するヒアルロン酸産生促進作用が認められた。 The results are shown in FIG. A significant increase in hyaluronic acid production of more than 20% was observed with respect to the negative control when the Tilia platyphylla extract and the Diyu extract were added. That is, these extracts were found to have an effect of promoting hyaluronic acid production on lip-derived fibroblasts.
＜実施例２＞
９６穴の細胞培養用プレートの各ウェルに、ヒト口唇由来の線維芽細胞を１０００個／ウェルずつ播種した。ここに、ジユ抽出物（丸善製薬株式会社）を（１０％エタノール／１０％ブチレングリコール）を用いて希釈した被験液を１μＬ／ウェルずつ添加し（終濃度１容量％）、ＤＭＥＭ培地存在下で48時間培養した。その後、細胞表面に存在するヒアルロン酸を、３．７％ホルムアルデヒド−ＰＢＳ、７０％エタノール、及び５％酢酸で固定し（Ｅｖａｎｋｏ，Ｓ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．５７，１０４１―６０（２００９）．）、ビオチン標識されたヒアルロン酸結合タンパク（株式会社ホクドー）とフルオレセインイソチオシアネート標識されたストレプトアビジン（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．）とで染色した。蛍光顕微鏡で細胞を観察し、ヒアルロン酸の存在を評価した。なお、陰性対照として、（１０％エタノール／１０％ブチレングリコール）を１μＬ／ウェル添加したものを設けた。
<Example 2>
1000 human lip-derived fibroblasts / well were seeded in each well of the 96-well cell culture plate. To this, 1 μL / well of the test solution diluted with (10% ethanol / 10% butylene glycol) of Diyu extract (Maruzen Pharmaceuticals Co., Ltd.) was added (final concentration 1% by volume), and in the presence of DMEM medium. It was cultured for 48 hours. Then, the hyaluronic acid present on the cell surface was fixed with 3.7% formaldehyde-PBS, 70% ethanol, and 5% acetic acid (Evanko, SP, et al., J. Histochem. Cytochem. 57, 1041-60 (2009).), Biotin-labeled hyaluronic acid-binding protein (Hokudo Co., Ltd.) and fluorescein isothiocyanate-labeled streptavidin (Vector Laboratories Inc.). The cells were observed with a fluorescence microscope to evaluate the presence of hyaluronic acid. As a negative control, 1 μL / well of (10% ethanol / 10% butylene glycol) was added.
結果を図３に示す。ジユ抽出物を添加した場合は、陰性対照に比べて明らかに大きいヒアルロン酸量（緑色蛍光）が認められた。すなわち、ジユ抽出物については、口唇由来の線維芽細胞に対するヒアルロン酸産生促進作用が認められた。 The results are shown in FIG. When the diu extract was added, a clearly larger amount of hyaluronic acid (green fluorescence) was observed as compared with the negative control. That is, the diyu extract was found to have a hyaluronic acid production-promoting effect on lip-derived fibroblasts.
＜比較例＞
９６穴の細胞培養用プレートの各ウェルに、ヒトの腹部皮膚の真皮由来の線維芽細胞（
東洋紡株式会社）を１００００個／ウェルずつ播種した。ここに、ジユ抽出物（丸善製薬株式会社）を（希釈溶媒）を用いて希釈した被験液を１μＬ／ウェルずつ添加し（終濃度１容量％）、ＤＭＥＭ培地存在下で48時間培養した。その後、培地に放出されたヒアルロン酸量を、Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔを用いてＥＬＩＳＡ法にて測定した。なお、陰性対照として、（１０％エタノール／１０％ブチレングリコール）を１μＬ／ウェル添加したものを設けた。
<Comparison example>
In each well of the 96-well cell culture plate, fibroblasts derived from the dermis of human abdominal skin (
Toyobo Co., Ltd.) was sown at 10,000 pieces / well. To this, 1 μL / well of the test solution diluted with Jyu extract (Maruzen Pharmaceuticals Co., Ltd.) using (diluting solvent) was added (final concentration 1% by volume), and the cells were cultured in the presence of DMEM medium for 48 hours. Then, the amount of hyaluronic acid released into the medium was measured by the ELISA method using a Hyaluronan Quantikine ELISA Kit. As a negative control, 1 μL / well of (10% ethanol / 10% butylene glycol) was added.
結果を図４に示す。口唇以外の部位の真皮由来の線維芽細胞においては、ジユ抽出物を添加した場合のヒアルロン酸産生量は陰性対照と同等で、有意差は認められなかった。
この結果から、口唇におけるヒアルロン酸産生促進作用は、口唇以外におけるヒアルロン酸産生促進作用とは異なることが示唆された。また、口唇におけるヒアルロン酸産生促進作用を有する成分の評価又はスクリーニングを行う際は、口唇由来の線維芽細胞の使用が適することが示唆された。
The results are shown in FIG. In the dermis-derived fibroblasts at sites other than the lips, the amount of hyaluronic acid produced when the diu extract was added was the same as that of the negative control, and no significant difference was observed.
From this result, it was suggested that the hyaluronic acid production promoting action on the lips is different from the hyaluronic acid production promoting action on other than the lips. In addition, it was suggested that the use of lip-derived fibroblasts is suitable for evaluation or screening of components having a hyaluronic acid production-promoting effect on the lips.
＜実施例３＞
表１の処方成分を混合し８０℃に加温し、撹拌・混合しながら冷却し、口唇用の外用組成物を作製した。
<Example 3>
The formulation components shown in Table 1 were mixed, heated to 80 ° C., and cooled while stirring and mixing to prepare an external composition for lips.
＜実施例４＞
実施例３で作製した口唇用の外用組成物を、比較製造例は６人、製造例１及び２は各５人の被験者に２ヶ月間使用してもらった後、口唇の厚み感に対する満足度を７段階で評価してもらった。
結果を表２に示す。比較製造例に比べて、ジユ抽出物を含有する製造例１及びセイヨウボダイジュ抽出物を含有する製造例２では、満足度を高く評価した被験者が多かった。
<Example 4>
Satisfaction with the feeling of thickness of the lips after having the external composition for lips prepared in Example 3 used by 6 subjects in comparative production examples and 5 subjects in each of production examples 1 and 2 for 2 months. Was evaluated on a 7-point scale.
The results are shown in Table 2. Compared with the comparative production example, in Production Example 1 containing the diure extract and Production Example 2 containing the Tilia platyphylla extract, many subjects highly evaluated the satisfaction level.
本発明により、口唇におけるヒアルロン酸産生を促進させ、該産生量を増加させることができるヒアルロン酸産生促進剤を提供される。また、該ヒアルロン酸産生促進剤を口唇用の外用組成物に含有させることにより、口唇のボリューム向上用途に好適に供することができる。また、口唇用のヒアルロン酸産生促進剤を、適切に評価又は探索することができる方法が提供される。そのため、口唇用の化粧料等の設計・製造に有用となり得るので、産業上有用である。 INDUSTRIAL APPLICABILITY The present invention provides a hyaluronic acid production promoter capable of promoting hyaluronic acid production in the lips and increasing the production amount. In addition, by incorporating the hyaluronic acid production promoter in an external composition for lips, it can be suitably used for improving the volume of lips. In addition, a method capable of appropriately evaluating or searching for a hyaluronic acid production promoter for lips is provided. Therefore, it can be useful for designing and manufacturing cosmetics for lips, and is industrially useful.
Claims (2)
被験物質を添加した口唇由来の線維芽細胞におけるヒアルロン酸産生量が、被験物質を添加しなかった口唇由来の線維芽細胞における産生量と比較して大きい被験物質を、口唇用のヒアルロン酸産生促進作用を有すると判断する工程、
を含む、請求項１に記載の方法。 The step of adding the test substance to the lip-derived fibroblasts and the amount of hyaluronic acid produced in the lip-derived fibroblasts to which the test substance was added are the same as the amount produced in the lip-derived fibroblasts to which the test substance was not added. A step of determining that a relatively large test substance has a hyaluronic acid production promoting action for lips,
The method according to claim 1.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2021148287A JP2022001872A (en) | 2017-09-28 | 2021-09-13 | Screening method |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2017187327A JP7039812B2 (en) | 2017-09-28 | 2017-09-28 | Hyaluronic acid production promoter for lips |
| JP2021148287A JP2022001872A (en) | 2017-09-28 | 2021-09-13 | Screening method |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2017187327A Division JP7039812B2 (en) | 2017-09-28 | 2017-09-28 | Hyaluronic acid production promoter for lips |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2022001872A true JP2022001872A (en) | 2022-01-06 |
Family
ID=66176202
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2017187327A Active JP7039812B2 (en) | 2017-09-28 | 2017-09-28 | Hyaluronic acid production promoter for lips |
| JP2021148287A Pending JP2022001872A (en) | 2017-09-28 | 2021-09-13 | Screening method |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2017187327A Active JP7039812B2 (en) | 2017-09-28 | 2017-09-28 | Hyaluronic acid production promoter for lips |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (2) | JP7039812B2 (en) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004059480A (en) * | 2002-07-29 | 2004-02-26 | Oji Paper Co Ltd | Hyaluronic acid production promoter |
| JP2004137217A (en) * | 2002-10-18 | 2004-05-13 | Nagase & Co Ltd | Promoter of hyaluronic acid synthesis, promoter of collagen synthesis, and external preparation for skin, and food and drink using the same |
| JP2007051091A (en) * | 2005-08-18 | 2007-03-01 | Shiseido Co Ltd | Hyaluronic acid production accelerator |
| US20170252289A1 (en) * | 2016-03-04 | 2017-09-07 | Avon Products, Inc. | Hydroponic Tiliacora Triandra and Use Thereof |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH09124497A (en) * | 1995-02-10 | 1997-05-13 | Suntory Ltd | Hyaluronidase inhibitor comprising ellagitannin of god type as active ingredient an medicine and cosmetic mixed with the same |
| JPH09241150A (en) * | 1996-03-06 | 1997-09-16 | Noevir Co Ltd | Skin external agent |
| JP2010018594A (en) * | 2008-07-14 | 2010-01-28 | Noevir Co Ltd | Glycosaminoglycan-production promotor |
| KR101480697B1 (en) * | 2008-11-26 | 2015-01-09 | (주)아모레퍼시픽 | Method for preparing lip make-up cosmetic composition containing herb medicines |
| JP5921056B2 (en) * | 2009-07-22 | 2016-05-24 | 大峰堂薬品工業株式会社 | Cosmetic composition |
| US9044621B2 (en) * | 2011-05-13 | 2015-06-02 | Mary Kay Inc. | Lip stick |
-
2017
- 2017-09-28 JP JP2017187327A patent/JP7039812B2/en active Active
-
2021
- 2021-09-13 JP JP2021148287A patent/JP2022001872A/en active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004059480A (en) * | 2002-07-29 | 2004-02-26 | Oji Paper Co Ltd | Hyaluronic acid production promoter |
| JP2004137217A (en) * | 2002-10-18 | 2004-05-13 | Nagase & Co Ltd | Promoter of hyaluronic acid synthesis, promoter of collagen synthesis, and external preparation for skin, and food and drink using the same |
| JP2007051091A (en) * | 2005-08-18 | 2007-03-01 | Shiseido Co Ltd | Hyaluronic acid production accelerator |
| US20170252289A1 (en) * | 2016-03-04 | 2017-09-07 | Avon Products, Inc. | Hydroponic Tiliacora Triandra and Use Thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2019059700A (en) | 2019-04-18 |
| JP7039812B2 (en) | 2022-03-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR102096479B1 (en) | Melanogenesis Inhibitor Comprising D-Pantothenyl Alcohol, and Skin-Whitening Cosmetic Containing Same Melanogenesis Inhibitor | |
| JP6305727B2 (en) | Skin photoaging prevention composition | |
| JP7206635B2 (en) | External agent for lips | |
| JP2017112892A (en) | Method for screening skin aging inhibiting material | |
| JP7039812B2 (en) | Hyaluronic acid production promoter for lips | |
| JP2012214393A (en) | Antioxidant agent, and antioxidant cosmetic | |
| JP7021734B2 (en) | Screening method for pigmentation inhibitors | |
| JP6614566B2 (en) | Screening method for skin aging inhibiting material and skin aging inhibiting method | |
| JP6992220B2 (en) | Screening method for pigmentation inhibitors | |
| JP6209381B2 (en) | Cosmetic preparation method and cosmetic evaluation method | |
| JP6317993B2 (en) | Screening method for skin improvers | |
| JP7131801B2 (en) | Skin condition fluctuation inhibitor and screening method thereof | |
| JP6611212B2 (en) | Acne-improving composition | |
| JP6729964B2 (en) | Screening method for PGE2 production inhibitor using clock gene as an index | |
| JP6366343B2 (en) | Screening method of whitening material using clock gene as an index | |
| JP6060022B2 (en) | Topical skin preparation | |
| JP6880434B2 (en) | Screening method for pigmentation inhibitors | |
| JP7391517B2 (en) | Intercellular adhesion reduction inhibitor | |
| JP2015228829A (en) | Selection method for antimicrobial agent | |
| JP2023085569A (en) | Sunburn inhibitory composition | |
| JP7365134B2 (en) | Citric acid cycle activator | |
| JP2020180065A (en) | Melanocyte activator production inhibitor | |
| JP6346491B2 (en) | Composition for transdermal administration | |
| JP2023094400A (en) | Screening method of anti-aging agent | |
| JP2020180066A (en) | Melanocyte activator production inhibitor |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210913 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20220722 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220726 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220920 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221122 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230110 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20230307 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20230704 |