JP2019047774A5 - - Google Patents
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Claims (17)
- 連続するコドン最適化セクションと連続する非最適化セクションを含み、
前記連続するコドン最適化セクションが、キメラコラーゲンＤＮＡ配列の長さの４０〜９０％を含み、前記連続する非最適化セクションが、キメラコラーゲンＤＮＡ配列の長さの１０〜６０％を含み、前記連続する非最適化セクションが、非最適化ＤＮＡのみを含む、キメラコラーゲンＤＮＡ配列。 - 前記連続するコドン最適化セクションが、コラーゲン分子のＣ末端のアミノ酸セグメントをコードする、請求項１に記載のキメラコラーゲンＤＮＡ配列。
- 前記連続するコドン最適化セクションが、コラーゲン分子のＮ末端のアミノ酸セグメントをコードする、請求項１に記載のキメラコラーゲンＤＮＡ配列。
- 請求項１に記載のキメラコラーゲンのＤＮＡ配列を含むベクターを含む、コラーゲン産生酵母株。
- 水酸化コラーゲンの製造方法であって：
請求項４のコラーゲン産生酵母株を、コラーゲンを産生するのに十分な期間、培地中で増殖させることを含む、前記製造方法。 - 前記酵母株が、Ｐｉｃｈｉａ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｋｏｍａｔａｇａｅｌｌａ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
- 前記培地が、緩衝グリセロール複合培地、緩衝メタノール複合培地、及び酵母抽出ペプトンデキストロースからなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
- 前記期間が、２４時間〜７２時間の範囲である、請求項５に記載の方法。
- 前記ベクターが、ｐＴＨＸ１構成的二方向性プロモーター又はｐＧＣＷ１４−ｐＧＡＰ１構成的二方向性プロモーターをさらに含む、請求項５に記載の方法。
- 前記ベクターが、抗生物質耐性をコードするＤＮＡ及び栄養要求性マーカーをコードするＤＮＡからなる群から選択される少なくとも１つの選択マーカーをさらに含む、請求項５に記載の方法。
- 前記キメラコラーゲンＤＮＡ配列がＩ型コラーゲンをコードし、前記連続するコドン最適化セクションがＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓでの発現のためにコドン最適化されている、請求項１に記載のキメラコラーゲンＤＮＡ配列。
- 前記キメラコラーゲンＤＮＡ配列がＩＩＩ型コラーゲンをコードし、前記連続するコドン最適化セクションがＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓでの発現のためにコドン最適化されている、請求項１に記載のキメラコラーゲンＤＮＡ配列。
- 前記キメラコラーゲンＤＮＡ配列がＰ４ＨＡ１、Ｐ４ＨＢ、またはその両方をコードするポリヌクレオチド配列に連結している、請求項１に記載のキメラコラーゲンＤＮＡ配列。
- 前記連続するコドン最適化セクションがＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓでの発現のためにコドン最適化されている配列番号１のセクションを含み、前記連続する非最適化セクションが最適化されていない配列番号１のセクションを含む、請求項１に記載のキメラコラーゲンＤＮＡ配列。
- 前記連続するコドン最適化セクションがキメラコラーゲンＤＮＡ配列の長さの６０〜９０％を含む、請求項１に記載のキメラコラーゲンＤＮＡ配列。
- 前記連続するコドン最適化セクションがキメラコラーゲンＤＮＡ配列の長さの６０〜８０％を含む、請求項１に記載のキメラコラーゲンＤＮＡ配列。
- Ｐ４ＨＡ１、Ｐ４ＨＢ、またはその両方をコードするポリヌクレオチド配列をさらに含む、請求項４に記載の酵母株。
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