JP2018534942A5 - - Google Patents

Claims (11)

1. 単一標的核酸分子を単離および増幅するための方法であって：
   ａ）ｉ）単一の核酸分子が接続された固体支持体を、ｉｉ）少なくともその一つが標的核酸分子である、複数の核酸分子を含む溶液と接触させること、ここで、前記標的核酸分子の少なくとも一部が前記固体支持体に接続された前記核酸分子の一部と相補的であり、前記固体支持体に接続された前記単一の核酸分子の少なくとも一部が前記標的核酸分子の対応する部分に対して相補的でない；
   ｂ）前記固体支持体に接続された前記単一の核酸分子を、前記標的核酸分子にハイブリダイズさせることにより、単一標的核酸分子を捕獲すること；
   ｃ）前記捕獲された単一標的核酸分子を、前記固体支持体に接続された前記単一の核酸分子をテンプレートとして使用する重合反応によって伸長し、これにより更なる３’配列を前記捕獲された標的核酸分子に組み込むこと；そして
   ｄ）前記更なる３’配列を使用して前記伸長した捕獲された標的核酸分子のみを増幅し、前記単一標的核酸分子の複数のコピーを提供すること；
   の工程を含む、前記方法。
2. 前記核酸分子の非相補的部分が固体支持体に接続された分子の末端に存在する、請求項１に記載の方法。
3. 前記分子の前記相補的分が少なくとも１０ヌクレオチドの長さである、請求項１又は請求項２に記載の方法。
4. 前記溶液が、伸長された標的核酸分子よりも有意に多いコピー数の伸長されない標的核酸分子を含む、請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。
5. 固体支持体がポリマービーズである、請求項１から４のいずれか１項に記載の方法。
6. それに接続された単一の核酸分子をそれぞれ有する複数の固体支持体が提供される、請求項１から５のいずれか１項に記載の方法。
7. 増幅が、複数の単一標的核酸分子の単独のクローン増幅である、請求項１から６のいずれか１項に記載の方法。
8. 工程ｄがＰＣＲである、請求項１から７のいずれか１項に記載の方法。
9. 工程ｃとｄが異なる温度で実施される、請求項１から８のいずれか１項に記載の方法。
10. 工程ｄが工程ｃよりも高い温度で実施される、請求項９に記載の方法。
11. 単一の核酸分子が接続された前記固体支持体が複数の増幅プライマーを含有する、請求項１から１０のいずれか１項に記載の方法。