JP2018516841A - ジペノサイド７５の抗糖尿病効果 - Google Patents

Abstract

本発明は、糖尿病予防、改善又は治療用組成物に関し、具体的にはジペノサイド７５又はその薬学的に許容される塩を含む薬学的組成物、食品組成物、飼料組成物に関する。また、本発明は、前記組成物を用いて糖尿病を予防又は治療する方法に関する。

Description

本発明は、ジペノサイド７５又はその薬学的に許容される塩を含む糖尿病予防又は治療用薬学的組成物に関し、より詳細にはジペノサイド７５又はその薬学的に許容される塩を含む薬学的組成物をヒト以外の個体に投与するステップを含む糖尿病予防又は治療方法、ジペノサイド７５又はその食品学的に許容される塩を含む糖尿病予防又は改善用食品組成物、ジペノサイド７５又はその食品学的に許容される塩を含む糖尿病予防又は改善用飼料組成物に関する。

人類の健康を脅かす疾患の１つである糖尿病は、慢性代謝性疾患であり、長時間経過すると血管障害や、神経、腎臓、網膜などの機能異常を招き、それにより生命を失うこともある疾患である。糖尿病は、発生する機序によってインスリン依存型糖尿病（１型糖尿病）とインスリン非依存型糖尿病（２型糖尿病）に大きく分けられる。

インスリン依存型糖尿病は、膵臓β細胞が選択的に損傷又は破壊されて体内でインスリンを生成できないため、血中グルコースを消費できずに発症することが知られており、重度の高血糖症やケトアシドーシス、多渇症、多飲症、多尿症、体重減少、疲労感が現れる。子供や１０代の青少年などが発症するインスリン依存性糖尿病において、その治療方法はインスリンの投与である。

インスリン非依存型糖尿病は、糖尿病患者の９０％以上を占めており、主に成人に発生する。明確な原因は解明されていないが、遺伝的な要因や、異常な食生活、ストレス、運動、肥満、老化などの環境的な要因による膵臓β細胞のインスリン分泌低下、又は肝臓、筋肉、脂肪などの組織におけるインスリン抵抗性の増加が複合的に関連して誘発されるものと推定されている。前記インスリン非依存型糖尿病は一般にインスリンに対して抵抗性を示し、通常はインスリンの作用不全により過血糖状態が続く。慢性的高血糖は膵臓β細胞に損傷をもたらしてアポトーシスを引き起こすので、２型糖尿病の治療のためには効果的な血糖の調節が必要であり、その中軸となる正常なインスリンの作用が非常に重要である。

一方、老人に現れるインスリン抵抗性の原因を把握するための臨床実験において、身体条件が同程度の老人と若者を比較した結果、老人の筋肉でグルコース代謝に欠陥が見られた。また、核磁気共鳴装置（nuclear magnetic resonance）分析によれば、老人の筋肉においてミトコンドリア活性が減少していた。この結果は、老人の筋肉細胞においてミトコンドリア機能異常がインスリン非依存型糖尿病の原因となり得ることを示すものである。実際に、インスリン非依存型糖尿病患者の筋肉においてミトコンドリアタンパク質であるＡＴＰ ｓｙｎｔｈａｓｅ βの発現が減少することが発見された（非特許文献１）。結局、ミトコンドリア活性化もインスリン非依存型糖尿病を治療するための１つのアプローチ方法となる。

現在、インスリン非依存型糖尿病の治療法としては、食事療法、運動療法、薬物療法などが挙げられる。糖尿病治療に用いられている薬物としては、スルホニルウレア系、ビグアナイド系、α−グルコシダーゼ阻害薬系、チアゾリジンジオン系、メグリチニド系などの様々な種類の優れた血糖降下剤が生産、市販されている。しかし、これらの医薬品は、嘔吐、腹痛、腹部膨満などの軽い症状（非特許文献２）から、低血糖症、肝機能低下（非特許文献３）や、重度の場合は死亡（非特許文献２）に至る副作用をもたらし得る。さらに、肝臓疾患、胃腸障害、腎臓疾患、妊娠などの状態にある人は、その使用が制限されている。

また、メトホルミン（Metformin）に基づく医薬品は、効果的な薬物のスクリーニングにおいて、ｇｌｕｃｏｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓ ｐａｔｈｗａｙのうち肝臓での糖代謝に重要な役割を果たすＡＭＰＫ（AMP activated kinase）を強力に活性化して異常な糖新生合成を能動的に抑制するので、現在多くの製薬会社が製造、販売している。しかし、メトホルミンの服用量が多いほど、また服用期間が長いほどビタミンＢ１２欠乏症のリスクが増加するという研究結果が報告されており、安全な医薬品とはいえない現状である。

よって、毒性や副作用がほとんどなく、薬理活性に優れた新たな糖尿病治療剤及び機能性食品の開発のために、以前から漢方や民間療法などで用いられていた天然物についての広範囲な研究が行われている。特許文献１においてジンセノサイドＲｇ２及びＲｇ３を含む糖尿病予防又は治療用組成物に関する発明が出願されるなど、最近も糖尿病予防及び治療についての研究が行われている。

一方、高麗人参は、パナキサジオール（Panaxadiol, PD）系、パナキサトリオール（Panaxatriol, PT）系、オレアナン（Oleanane）系などの各種ジンセノサイド（Ginsenoside）及びジペノサイド（Gypenoside）を含有する。その種類によって免疫機能増強、中枢興奮作用、副腎皮質刺激ホルモン分泌促進、血小板凝集抑制など機能が異なるので、同系のジンセノサイドでも同じ効果を予測することは困難な現状である。

韓国公開特許第２０１１−００２０４６９号公報

J Biol Chem, 278: 10436-10442(2003) International Hepatology Comminications, 5: 289-296(1996) Diabetes Care 1995: 18(6): 817-824

本発明は、ジペノサイド７５又はその薬学的に許容される塩を含む糖尿病予防又は治療用薬学的組成物を提供することを目的とする。
また、本発明は、前記薬学的組成物をヒト以外の個体に投与するステップを含む糖尿病予防又は治療方法を提供することを目的とする。

さらに、本発明は、ジペノサイド７５又はその食品学的に許容される塩を含む糖尿病予防又は改善用食品組成物を提供することを目的とする。
さらに、本発明は、ジペノサイド７５又はその食品学的に許容される塩を含む糖尿病予防又は改善用飼料組成物を提供することを目的とする。

本発明者らは、糖尿病の予防又は治療方法を開発すべく鋭意研究を重ねた結果、ジペノサイド７５がインスリン分泌細胞のインスリン分泌を増進させ、インスリン分泌細胞のミトコンドリア機能を活性化することにより、糖尿病を予防又は治療する効果があることを確認し、本発明を完成するに至った。

本発明によるジペノサイド７５を含有する組成物は、インスリン分泌を促進し、ミトコンドリア活性を増加させることにより、糖尿病を予防及び治療する効能を有する。

ジペノサイド７５の投与により分泌されたインスリンの量についてのＥＬＩＳＡ定量分析結果を示す図である。 ジペノサイド７５の投与により増加した細胞内のＡＴＰの量についてのルシフェラーゼ（Luciferase）活性測定方法の分析結果を示す図である。 ジペノサイド７５の投与により増加したミトコンドリア膜電位についてのＴＭＲＭ（Tetramethylrhodamine methyl ester）染色及びＦＡＣＳ（Fluorescence activated cell sorting）分析結果を示す図である。

上記目的を達成するために、本発明の一態様は、ジペノサイド７５又はその薬学的に許容される塩を含む糖尿病予防又は治療用薬学的組成物を提供する。
本発明の前記ジペノサイド７５は、下記化学式（１）の構造を有するジペノサイド７５であることが好ましい。

前記ジペノサイド７５は、化学的に合成することもでき、天然物質から分離することもできる。本発明のジペノサイド７５を天然物質から分離したものには、前記ジペノサイド７５を含むものであれば、天然物の抽出物又はその分画物が全て含まれる。

本発明における「薬学的に許容される塩」とは、投与されるジペノサイド７５の生物学的活性及び物性を損なわない剤形を意味する。前記薬学的に許容される塩には、特に断らない限り、前記ジペノサイド７５の化合物に存在し得る酸性基又は塩基性基の塩が全て含まれる。例えば、前記薬学的に許容される塩としては、ヒドロキシ基のナトリウム塩、カルシウム塩、カリウム塩などが挙げられ、アミノ基のその他の薬学的に許容される塩としては、臭化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、リン酸水素塩、リン酸二水素塩、酢酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、乳酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩（メシル酸塩）、ｐ−トルエンスルホン酸塩（トシル酸塩）などが挙げられ、当業界で公知の塩の製造方法で製造することができる。

本発明における「予防」とは、本発明の前記組成物を個体に投与することにより糖尿病を抑制又は遅延させるあらゆる行為を意味する。
本発明における「治療」とは、本発明の前記組成物を個体に投与することにより糖尿病の症状を好転又は有利に変化させるあらゆる行為を意味する。

本発明の前記薬学的組成物は、有効成分である前記ジペノサイド７５又はその薬学的に許容される塩の作用により糖尿病を予防又は治療する効果に優れ、毒性がないため人体に適用しても副作用を起こさず、安全である。

本発明の前記薬学的組成物は、単一製剤として用いてもよく、公認された糖尿病治療効果を有することが知られている薬物をさらに含む複合製剤に製造して用いてもよく、薬学的に許容される担体又は賦形剤を用いて製剤化することにより単位用量形態に製造されてもよく、多用量容器内に収納して製造されてもよい。

本発明の前記薬学的組成物は、それぞれ通常の方法により散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン剤、シロップ剤、エアゾール剤などの経口剤形、外用剤、滅菌注射溶液などの形態に剤形化して用いられ、組成物に含まれる担体、賦形剤及び希釈剤としては、ラクトース、グルコース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリトリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、鉱物油などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。これらは単独で用いてもよく、２種以上を混合して用いてもよい。

本発明の前記薬学的組成物を製剤化する場合は、通常用いる充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤又は賦形剤を用いて調製することができる。
経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、これらの固形製剤は、少なくとも１つの賦形剤、例えば澱粉、炭酸カルシウム（calcium carbonate）、スクロース、ラクトース、ゼラチンなどを混合して調製することができる。また、通常の賦形剤以外に、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤も用いられる。経口用液体製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが挙げられ、通常用いられる通常の希釈剤である水、液体パラフィン以外にも種々の賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが用いられる。

非経口用製剤としては、滅菌水溶液剤、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤、外用剤などが挙げられる。前記非水性溶剤、前記懸濁剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物性油、オレイン酸エチルなどの注射可能なエステルなどが用いられる。

本発明の前記薬学的組成物の薬学的に有効な投与量は、前記薬学的組成物の製剤化方法、投与方法、投与時間及び／又は投与経路などにより異なり、前記薬学的組成物の投与で達成しようとする反応の種類と程度、投与対象となる個体の種類、年齢、体重、一般的な健康状態、疾病の症状や程度、性別、食餌、排泄、該当個体に同時又は異時に共に用いられる薬物、その他組成物の成分などをはじめとする様々な因子及び医薬分野で周知の類似の因子に応じて異なり、当該技術分野における通常の知識を有する者であれば、目的とする治療に効果的な投与量を容易に決定、処方することができる。

本発明の前記薬学的組成物は、薬学的に有効な量のジペノサイド７５を含んでもよい。
本発明における「薬学的に有効な量」とは、医学的治療に適用できる合理的な受益／リスク比で疾患を治療するのに十分な量を意味し、一般に０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．０５〜２００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの量を１日１回又は数回に分けて投与することができる。しかし、発明の目的上、特定の患者に対する具体的な治療的有効量は、達成しようとする反応の種類と程度、場合によっては他の製剤が用いられるか否か、具体的な組成物、患者の年齢、体重、一般的な健康状態、性別、食餌、投与時間、投与経路、組成物の比率、治療期間、具体的な組成物と共に又は同時に投与される薬物をはじめとする様々な因子や、医薬分野で周知の類似の因子に応じて異なるように適用するのが好ましい。

前記薬学的組成物に含まれる抽出物の含有量は、特にこれらに限定されるものではないが、薬学的組成物の総重量に対して０．０１〜１００重量％、より好ましくは１〜８０重量％である。

本発明の薬学的組成物は、単独で又は他の治療剤と併用して投与してもよく、従来の治療剤と順次又は同時に投与してもよい。また、単一又は多重投与してもよい。前記要素を全て考慮して副作用なく最小限の量で最大限の効果が得られる量を投与することが重要であり、これは当業者により容易に決定される。

本発明の前記薬学的組成物の投与経路及び投与方法は、それぞれ独立したものであってもよく、その方法が特に限定されるものではなく、目的とする該当部位に前記薬学的組成物が到達できるものであれば任意の投与経路及び投与方法を用いることができる。前記薬学的組成物は、経口投与又は非経口投与方法で投与することができるが、非経口投与方法で投与することが好ましい。

前記非経口投与方法としては、例えば静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、経皮投与、皮下投与などを用いることができる。
本発明の他の態様は、前記薬学的組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む薬学的組成物を提供する。

本発明における「薬学的に許容される担体」とは、生物体を刺激することなく、注入される化合物の生物学的活性及び特性を損なわない担体又は希釈剤を意味する。本発明に使用される前記担体の種類は特に限定されるものではなく、当該技術分野において通常用いられて薬学的に許容される担体であれば、いかなるものでも用いることができる。前記担体の例としては、食塩水、滅菌水、リンゲル液、緩衝食塩水、アルブミン注射液、グルコース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセロール、エタノールなどが挙げられる。これらは単独で用いてもよく、２種以上を混合して用いてもよい。前記担体は、非天然担体（non-naturally occuring carrier）を含んでもよい。

また、必要に応じて、抗酸化剤、緩衝液及び／又は静菌剤など他の通常の添加剤を添加して用いてもよく、希釈剤、分散剤、界面活性剤、結合剤、滑沢剤などをさらに添加して水溶液、懸濁液、乳濁液などの注射用剤形、丸薬、カプセル、顆粒、錠剤などに製剤化して用いてもよい。

本発明のさらに他の態様は、前記薬学的組成物の予防又は治療対象である糖尿病がインスリン非依存型糖尿病である薬学的組成物を提供する。
本発明における「インスリン非依存型糖尿病」とは、２型糖尿病ともいい、インスリンが分泌されるもののその量が十分でないか、人体が分泌されるインスリンを効果的に活用できないことにより発生するものである。インスリン非依存型糖尿病は、糖尿病全体の９０〜９５％を占めており、主に４０代以降に多く発生するが、近年は発症年齢が低くなっており、子供において見られることもある。インスリン非依存型糖尿病の症状としては、激しい喉の渇きを感じる、尿が近くなる、疲労を感じることが多い、空腹感が増大するなどの症状が現れる。

本発明のさらに他の態様は、前記ジペノサイド７５又はその薬学的に許容される塩を含む糖尿病予防又は治療用薬学的組成物をヒト以外の個体に投与するステップを含む糖尿病予防又は治療方法を提供する。

本発明の前記糖尿病を予防又は治療する方法における前記薬学的組成物は、本発明の前記薬学的組成物に関連して前記で説明したものと同一である。
本発明における「個体」とは、ヒト、マウス、家畜などを含む哺乳動物をはじめとするあらゆる動物を意味する。

本発明の前記予防又は治療方法における前記薬学的組成物の投与量、投与経路及び投与方法は、本発明の前記薬学的組成物に関連して前記で説明したものと同一である。
本発明の前記予防又は治療方法における前記薬学的組成物は、特に限定されるものではなく、経口又は非経口投与方法で投与することができる。

本発明のさらに他の態様は、ジペノサイド７５又はその食品学的に許容される塩を含む糖尿病予防又は改善用食品組成物を提供する。
本発明の前記ジペノサイド７５は、下記化学式（１）の構造を有するジペノサイド７５であることが好ましい。

本発明の食品組成物に含まれるジペノサイド７５又はその食品学的に許容される塩は、ジペノサイド７５を含む動植物、その抽出物、その分画物又はその加工物の形態で含まれる。また、前記組成物は、食品学的に許容される食品補助添加剤を含んでもよい。

本発明における「食品補助添加剤」とは、食品に補助的に添加する構成要素を意味し、各剤形の機能性食品を製造する際に添加されるものであり、当業者が適宜選択して用いることができる。食品補助添加剤の例としては、様々な栄養剤、ビタミン、ミネラル（電解質）、合成風味剤や天然風味剤などの風味剤、着色剤及び充填剤、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護コロイド、増粘剤、ｐＨ調整剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に用いられる炭酸化剤などが挙げられるが、前記例に本発明の食品補助添加剤の種類が限定されるものではない。

本発明の食品組成物には機能性食品が含まれる。本発明における「機能性食品」とは、人体に有用な機能性を有する原料や成分を用いて、錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、液剤、丸剤などの形態に製造及び加工した食品を意味する。ここで、「機能性」とは、人体の構造及び機能に対して栄養素を調節するか、生理学的作用などの保健用途に有用な効果を与えることを意味する。本発明の機能性食品は、当業界で通常用いられる方法により製造することができ、その製造時には当業界で通常添加する原料及び成分を添加して製造することができる。また、前記機能性食品の剤形も、機能性食品として認められる剤形であれば限定されるものではない。本発明の食品用組成物は、様々な形態の剤形に製造することができ、一般薬品とは異なり、食品を原料とするので薬品の長期服用時に発生し得る副作用などがないという利点があり、本発明の機能性食品は、携帯性に優れるので、糖尿病予防又は改善効果を増進させる補助剤として摂取することができる。

本発明の機能性食品が用いられる形態には制限がなく、通常の意味の食品が全て含まれ、健康機能食品などの当業界で公知の用語と混用される。また、本発明のジペノサイド７５を含む機能性食品は、当業者の選択により食品に含まれ得る好適な他の補組成分や公知の添加剤を混合して製造することができる。添加できる食品の例としては、肉類、ソーセージ、パン、チョコレート、キャンディー類、スナック類、菓子類、ピザ、ラーメン、その他の麺類、ガム類、アイスクリーム類をはじめとする酪農製品、各種スープ、飲料水、茶、ドリンク剤、アルコール飲料、ビタミン複合剤などが挙げられ、本発明によるジペノサイド７５を主成分として、製造した汁、茶、ゼリー、ジュースなどに添加することにより製造することができる。

ここで、前記食品組成物に含まれる抽出物の含有量は、特にこれらに限定されるものではないが、食品組成物の総重量に対して０．０１〜１００重量％、より好ましくは１〜８０重量％である。

本発明のさらに他の態様は、ジペノサイド７５又はその食品学的に許容される塩を含む糖尿病予防又は改善用飼料組成物を提供する。
本発明の前記ジペノサイド７５は、下記化学式（１）の構造を有するジペノサイド７５であることが好ましい。

本発明の飼料組成物は、ウシ、ブタなどの脊椎動物、ニワトリ、アヒルなどの家禽類、魚類、甲殻類などの飼料組成物であるが、これらに限定されるものではなく、ジペノサイド７５を摂取できる動物であれば本発明を実施できることは言うまでもない。

本発明の飼料組成物は、飼料組成物の配合比に関係なく用いることができる。例えば、タンパク質含有量が多い飼料であっても本発明に用いることができる。
ここで、前記飼料組成物に含まれる抽出物の含有量は、特にこれらに限定されるものではないが、飼料組成物の総重量に対して０．０１〜１００重量％、より好ましくは１〜８０重量％である。

本発明の飼料組成物は、トウモロコシなどの穀物類、フスマ、米糠、トウモロコシ糠などの糠類、ダイズ粕、エゴマ粕などの粕類、サツマイモ、ジャガイモなどの根塊類、製パン副産物、アミノ酸発酵副産物などの食品加工副産物類、クロレラ、ワカメなどの藻類、牧草、山野草などの繊維質類及びその発酵物、高麗人参粕、イノシトール粕などの製薬副産物類、トウモロコシ油、ダイズ油、牛脂、豚脂、漁油などの油脂類、穀物類の澱粉などの澱粉類、魚粉、カニ粉などのタンパク質類、骨粉、魚骨粉、貝片などのミネラル類、鉱塩、天日塩などの食塩類、リン酸塩類、カルシウム塩類などを含んでもよい。

本発明の飼料組成物は、飼料の品質低下を防止するために、グアーガム、松脂、ゼラチン、カゼイン、アルギン酸ナトリウム、カゼインナトリウムなどの結着剤、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステルなどの乳化剤、クエン酸、乳酸などの酸味剤、ホワイトカーボンなどの抗凝固剤、エトキシキン、ブチルヒドロキシトルエンなどの抗酸化剤などを含んでもよい。

本発明の飼料組成物は、アミノ酸剤、ビタミン剤、糖分解酵素などの酵素剤、ラクトバチルス・ロイテリなどの生菌剤、ビール酵母などの酵母剤などをさらに含んでもよい。
本発明の飼料組成物の剤形は限定されるものではなく、一般に用いられる飼料組成物であれば本発明に用いられる。例えば、本発明の飼料組成物は、液状、粉末、顆粒、グラニュール、ペレット又は粒状であってもよい。

以下、実施例を挙げて本発明の構成及び効果をより詳細に説明する。これらの実施例はあくまで本発明を例示するためのものにすぎず、本発明がこれらの実施例に限定されるものではない。

［実施例１］
ジペノサイド７５のインスリン分泌増加効果
ジペノサイド７５のインスリン分泌増加効果を確認するために、ジペノサイド７５で処理し、その後分泌されたインスリンの量を測定した。

具体的には、ジペノサイド７５によるインスリン分泌増加効果を確認するために、インスリン分泌細胞であるＩＮＳ−１細胞をインキュベーターで培養し（３７℃，５％ＣＯ_２，ＲＰＭＩ培地，１０％ＦＢＳ）、その後それぞれ１０μＭのジペノサイド７５、ジンセノサイドＦ１、ジンセノサイドＲｇ３、ジンセノサイドＲｂ２、ジンセノサイドＲｂ３で細胞を処理し、２時間処理後に分泌されたインスリンの量をＥＬＩＳＡ法で測定した。

その結果、図１に示すように、ジペノサイド７５で処理した場合、対照群（ＤＭＳＯ）に比べてインスリン分泌量が約１１０％増加することが確認された。よって、ジペノサイド７５の処理によるインスリン分泌量増加効果により、糖尿病を予防又は治療できることが分かる。ジンセノサイドＦ１、ジンセノサイドＲｇ３、ジンセノサイドＲｂ２、ジンセノサイドＲｂ３は、約５０％のインスリン分泌量増加効果があることが確認された。

［実施例２］
ジペノサイド７５のミトコンドリア機能活性化
ミトコンドリアの機能が低下すると、インスリンシグナル伝達の阻害により糖尿病の原因となることがある。よって、ジペノサイド７５のミトコンドリア機能活性化効果を確認するために、ジペノサイド７５で処理し、その後増加したＡＴＰ量とミトコンドリア膜電位を測定した。

具体的には、ジペノサイド７５によるミトコンドリア機能活性化効果を確認するために、インスリン分泌細胞であるＩＮＳ−１細胞をインキュベーターで培養し（３７℃，５％ＣＯ_２，ＲＰＭＩ培地，１０％ＦＢＳ）、その後１０μＭのジペノサイド７５で細胞を処理し、２時間処理後に細胞内のＡＴＰ量とミトコンドリア膜電位を測定した。まず、細胞内のＡＴＰ量を測定するために、ジペノサイド７５で処理したＩＮＳ−１細胞を凍結・解凍及び超音波処理により破砕し、細胞破砕液をルシフェラーゼ、ルシフェリンと混合して蛍光発色を誘導した。ルシフェラーゼの活性及びそれによる蛍光発色はＡＴＰ量に依存するので、蛍光発色の程度を蛍光測定器で測定することによりＡＴＰ量を測定した。次に、ミトコンドリア膜電位を測定するために、ジペノサイド７５で処理したＩＮＳ−１細胞をＴＭＲＭで染色し、その後各細胞の染色の程度をＦＡＣＳ装置で測定した。ミトコンドリア膜電位が高いほどＴＭＲＭによる染色の程度が高くなる。

その結果、図２に示すように、ジペノサイド７５で処理した場合、対照群（ＤＭＳＯ）に比べて細胞内のＡＴＰ量が約５０％増加することが確認された。また、ジンセノサイドＦ１、ジンセノサイドＲｇ３、ジンセノサイドＲｂ２、ジンセノサイドＲｂ３は、約４０％のＡＴＰ量増加効果があることが確認された。また、図３に示すように、ジペノサイド７５で処理した場合、対照群（ＤＭＳＯ）に比べてミトコンドリア膜電位が約４０％増加することが確認された。ジンセノサイドＦ１、ジンセノサイドＲｇ３、ジンセノサイドＲｂ２、ジンセノサイドＲｂ３は、約２０％のミトコンドリア膜電位増加効果があることが確認された。

これらの結果は、ジペノサイド７５で細胞を処理した場合、ミトコンドリアの機能が活性化されてＡＴＰ合成とミトコンドリア膜電位が増加することを意味する。つまり、ジペノサイド７５の処理によるミトコンドリア機能活性効果により、糖尿病を予防又は治療できることが分かる。

Claims (9)

1. ジペノサイド７５又はその薬学的に許容される塩を含む糖尿病予防又は治療用薬学的組成物。
2. 前記ジペノサイド７５は、化学式（１）で表されるものである、請求項１に記載の薬学的組成物。
   
3. 前記組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１に記載の薬学的組成物。
4. 前記糖尿病はインスリン非依存型糖尿病である、請求項１に記載の薬学的組成物。
5. 請求項１〜４のいずれか一項に記載の薬学的組成物をヒト以外の個体に投与するステップを含む糖尿病予防又は治療方法。
6. ジペノサイド７５又はその食品学的に許容される塩を含む糖尿病予防又は改善用食品組成物。
7. 前記ジペノサイド７５は、化学式（１）で表されるものである、請求項６に記載の食品組成物。
   
8. ジペノサイド７５又はその薬学的に許容される塩を含む糖尿病予防又は改善用飼料組成物。
9. 前記ジペノサイド７５は、化学式（１）で表されるものである、請求項８に記載の飼料組成物。