JP2018500911A - ジアミンの製造および処理方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2015年8月28日に提出された米国仮特許出願第62/211,315号、2015年7月17日に提出された米国仮特許出願第62/193,693号、および2014年12月23日に提出された米国仮特許出願第62/096,309号の利益を主張し、各出願の開示が引用によって本書中に組み込まれる。
a)遺伝子組み換え微生物を培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、DA炭酸塩、DA重炭酸塩、DAビス重炭酸塩(炭酸塩類)および/またはDAカルバミン酸塩もしくはDAビスカルバミン酸塩(カルバミン酸塩類)のうちの1つ以上を当該培地中に形成する工程であって、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸が当該培地のpHを培養した培地として主に制御している工程;
b)上記DA炭酸塩、DA重炭酸塩、DAビス重炭酸塩、DAカルバミン酸塩またはDAビスカルバミン酸塩を、HMD遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程;および
c)上記DA遊離塩基を単離する工程:
を含む、ジアミン(DA)の製造方法を提供する。
a)遺伝子組み換え微生物を培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、DA炭酸塩、DA重炭酸塩、DAビス重炭酸塩、DAカルバミン酸塩またはDAビスカルバミン酸塩のうちの1つ以上を形成する工程であって、溶存無機炭素パーセント(DIC)が式:DIC/TDCA×100(TDCAは、全溶存カウンターアニオンであり、DICおよび他のアニオンの合計である)によって決定され、当該DIC%が40%以上である工程;
b)上記DA炭酸塩、DA重炭酸塩、DAビス重炭酸塩、DAカルバミン酸塩またはDAビスカルバミン酸塩を、DA遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程;および
c)上記DA遊離塩基を単離する工程:
を含む、ジアミン(DA)の製造方法を提供する。
a)遺伝子組み換え微生物を培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、ジアミンを生成して、DA炭酸塩、DA重炭酸塩、DAビス重炭酸塩(DA炭酸塩類)、および/またはDAカルバミン酸塩もしくはDAビスカルバミン酸塩(DAカルバミン酸塩類)のうちの1つ以上を当該培地中に形成する工程であって、当該培地中の炭酸塩類またはカルバミン酸塩類の少なくとも40%が、DA炭酸塩、DA重炭酸塩、DAビス重炭酸塩、DAカルバミン酸塩またはDAビスカルバミン酸塩のうちの1つ以上を含む工程;
b)上記炭酸塩類またはカルバミン酸塩類を、DA遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程;および
c)上記DA遊離塩基を単離する工程:
を含む、ジアミン(DA)の製造方法を提供する。
(a)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピル−CoAデヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピル−CoAデヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンタノイル−CoAレダクターゼ、アジピル−CoAレダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAトランスフェラーゼまたはシンセターゼおよび6−ACA−CoAレダクターゼ、または6−ACAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(b)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピル−CoAデヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピル−CoAデヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンタノイル−CoAレダクターゼ、アジピル−CoAレダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(c)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピル−CoAデヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピル−CoAデヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンタノイル−CoAレダクターゼ、アジピル−CoAトランスフェラーゼ、ヒドロラーゼまたはトランスフェラーゼ、アジピン酸レダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAトランスフェラーゼまたはシンセターゼ、6−ACA−CoAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(d)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピル−CoAデヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピル−CoAデヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンタノイル−CoAレダクターゼ、アジピル−CoAトランスフェラーゼ、ヒドロラーゼまたはトランスフェラーゼ、アジピン酸レダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(e)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピン酸デヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピン酸デヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンテン酸レダクターゼ、アジピン酸レダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAトランスフェラーゼまたはシンセターゼ、6−ACA−CoAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(f)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピン酸デヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピン酸デヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンテン酸レダクターゼ、アジピン酸レダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(g)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピン酸デヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピン酸デヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンテン酸レダクターゼ、アジピル−CoAトランスフェラーゼ、ヒドロラーゼまたはトランスフェラーゼ、アジピル−CoAレダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAトランスフェラーゼまたはシンセターゼ、6−ACA−CoAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(h)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピン酸デヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピン酸デヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンテン酸レダクターゼ、アジピル−CoAトランスフェラーゼ、ヒドロラーゼまたはトランスフェラーゼ、アジピル−CoAレダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(i)4−ヒドロキシ−2−オキソヘプタン−1,7−ジオエート(HODHアルドラーゼ);2−オキソヘプタ−4−エン−1,7−ジオエート(OHED)ヒドラターゼ;OHEDギ酸リアーゼおよびピルビン酸ギ酸リアーゼ活性化酵素もしくはOHEDデヒドロゲナーゼ;2,3−デヒドロアジピル−CoAレダクターゼ;アジピル−CoAデヒドロゲナーゼ;またはアジピン酸セミアルデヒドアミノトランスフェラーゼもしくはアジピン酸セミアルデヒドオキシドレダクターゼ(アミノ化);
(j)β−ケトチオラーゼもしくはアセチル−CoAカルボキシラーゼおよびアセトアセチル−CoAシンターゼ、3−ヒドロキシアシルCoAデヒドロゲナーゼもしくは3−オキソアシル−CoAレダクターゼ、エノイル−CoAヒドラターゼ、およびヘキサノイル−CoAを生成するためのトランス−2−エノイル−CoAレダクターゼ、1つ以上のチオエステラーゼ、アルデヒドデヒドロゲナーゼ、またはブタナールデヒドロゲナーゼ、上記宿主が生成するヘキサナールもしくはヘキサノエート類;1つ以上のモノオキシゲナーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、アルデヒドデヒドロゲナーゼ、6−ヒドロキシヘキサノエートデヒドロゲナーゼ、5−ヒドロキシペンタノエートデヒドロゲナーゼ、4−ヒドロキシブチレートデヒドロゲナーゼ、6−オキソヘキサノエートデヒドロゲナーゼ、もしくは7−オキソヘプタノエートデヒドロゲナーゼ、上記宿主が生成するアジピン酸またはアジピン酸セミアルデヒド;1つ以上のモノオキシゲナーゼ、トランスアミナーゼ、6−ヒドロキシヘキサノエートデヒドロゲナーゼ、5−ヒドロキシペンタノエートデヒドロゲナーゼ、4−ヒドロキシブチレートデヒドロゲナーゼ、およびアルコールデヒドロゲナーゼ、上記宿主が生成する6−アミノヘキサノエート;1つ以上のカルボキシレートレダクターゼ、ω−トランスアミナーゼ、デアセチラーゼ、N−アセチルトランスフェラーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、上記宿主が生成するヘキサメチレンジアミン;
(k)6−ヒドロキシ−3−オキソ−ヘキサノイル−CoAを形成するためのアセチルトランスフェラーゼもしくはチオラーゼ、6−ヒドロキシ−3−オキソ−ヘキサノイル−CoAデヒドロゲナーゼ、3,4−ジヒドロキシヘキサノイル−CoAデヒドロゲナーゼ、6−ヒドロキシ−2−ヘキサノイル−CoAレダクターゼ、6−ACAを形成するための6−ヒドロキシヘキサノイル−CoAヒドロラーゼ、HMDAを形成するための6−ヒドロキシカプロン酸デヒドロゲナーゼおよびトランスアミナーゼ;
(l)ホモクエン酸シンターゼ、2−ケトピメリン酸塩を形成するためのホモアコニターゼおよびホモイソクエン酸デヒドロゲナーゼ、α−ケトピメリン酸塩のアジピン酸セミアルデヒドへの転換を触媒する2−ケトデカルボキシラーゼ、α−ケトピメリン酸塩の2−アミノピメリン酸塩への転換を触媒する2−アミノピメリン酸トランスフェラーゼ、2−アミノピメリン酸塩を脱炭酸して6−ACAを形成するための2−アミノピメリン酸デカルボキシラーゼ、6−ACAの6−アミノヘキサナールへの転換を触媒するアルデヒドデヒドロゲナーゼおよび6−アミノヘキサナールの6−ヘキサメチレンジアミンへの転換を触媒するアミノトランスフェラーゼ;ならびに
(m)グルタミル−CoAトランスフェラーゼおよび/またはリガーゼ、β−ケトチオラーゼ、3−オキソ−6−アミノピメロイル−CoAオキシドレダクターゼ、3−ヒドロキシ−6−アミノピメロイル−CoAレダクターゼ、6−アミノ−7−カルボキシヘプタ−2−エノイル−CoAレダクターゼ、6−アミノピメロイル−CoAレダクターゼ(アルデヒド形成)、2−アミノ−7−オキソヘプタノエートアミノトランスフェラーゼおよび/またはアミノ化オキシドレダクターゼ、ホモリジンデカルボキシラーゼ、6−アミノピメロイル−CoAヒドロラーゼ、トランスフェラーゼおよび/またはリガーゼ、2−アミノピメリン酸デカルボキシラーゼ。
用いられる所望の微生物または株に応じて、適切な培養培地が使われるだろう。例えば、種々の培養培地が“Manual of Methods for General Bacteriology” of the American Society for Bacteriology (Washington D.C., USA, 1981)で見つかるだろう。本書において、生育源に関係する場合、「培地」とは、固体または液体の形態である開始培地を指す。一方、本書において、「培養された培地」とは、発酵性のある生育した微生物を含んでおり、他の細胞状のバイオマスも含み得る培地(例えば、液体培地)について言及する。培地は概して、1つまたはそれ以上の炭素源、窒素源、無機塩類、ビタミン、および/または微量元素を含む。
上述のように、所望のジアミン(例えば、HMD)を製造するため、および培養培地のpHを調製するために、CO2が加えられる。CO2の源は例えば、CO2、炭酸塩、重炭酸塩、または炭酸から採り得る。一実施形態において、CO2は培養された培地に外部から加えられることができる。他の実施形態では、CO2は呼吸によって、または副生成物として微生物によって産出され得る。例えば、呼吸のCO2は、グリオキシル酸塩経路、ペントースリン酸経路(例えば、gnd(ホスホグルコン酸をリブロース−5−リン酸(ribuloase-5-phosphate)およびCO2に転換するホスホグルコン酸デヒドロゲナーゼ))、またはエントナー・ドゥドロフ経路を経由して、トリカルボン酸(TCA)回路の転換によって生じ得る。さらに他の実施形態では、副生成物のCO2はアセトン、エタノール、コハク酸塩、3−オキソアジピン酸塩、および3−ヒドロキシアジピン酸塩から生じ得る。
→ C6H16N2+2.821 CO2+3.821 H2O
HMDのモル当たりの化学量論的なCO2生成量は、2.821モルである。この量よりも多く製造されたCO2はどれも、呼吸または副生成物形成のいずれかによって製造される。
+7.62 H2O+0.31 CO2
7 CH3OH+2 NH3+2 O2+C6H16N2+9 H2O+CO2
CO2が、pHが下がる(例えば、7に)ために用いられる場合、CO2の方の培地の溶解性は、発酵槽の上部における背圧が少なくとも2バール(ただし10バール以下)に高められることによって、二酸化炭素の溶解性が上昇され得る。他の実施形態では、CO2の培地の溶解性が高められるため、温度が低くなり得る。さらに他の実施形態では、CO2の溶解性を増大させるために、温度は37℃以下になる。
開示されたプロセスにおいて、微生物(例えば、遺伝子組み換え微生物)はCO2およびDA(例えば、HMD)を、約0.05:1から約5:1から約7:1の比で形成する。他の適した比としては0.2:1から約3:1が挙げられる。他の実施形態において、CO2とDA(例えば、HMD)との比としては、約0.05:1から約3:1.約0.05:1から約2.5:1、約0.05:1から約2:1、約0.05:1から約1.5:1、約0.05:1から約1:1が挙げられる。
上述のように、開始時の培養培地はpH約5〜約7を有し得る。培養培地上で微生物が増殖するおよび、所望のジアミン(例えば、HMD炭酸塩類および/またはHMDカルバミン酸塩類)を製造するとき、および、ジアミン炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類がジアミン遊離塩基に転換する前に、培養された培地のpHは11より小さい、10より小さい、10より小さい、9より小さい、または8より小さい。他の実施形態では、pHは少なくとも2、少なくとも3、少なくとも4、少なくとも5、少なくとも6、または、少なくとも7であり得る。他の実施形態では、培地のpHは約6から約9.5、約6から約9、約6から約8、約6.5から約7.5、約7.5から約9.5、または約8から約9である。
一度ジアミン炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類が形成されると、ジアミンの遊離塩基(例えば、HMDの遊離塩基)が転換されることでジアミンが得られる。いくつかの実施形態において、DA−炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類は、DAの遊離塩基に転換される前に、初めに培養された培地の中の微生物から分離される。DA炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類をDAの遊離塩基に転換するための例には、熱、減圧、イオン交換、または電気透析が含まれる。一実施形態において、ジアミンは放出する二酸化炭素によって転換され得るHMDの遊離塩基である。いくつかの実施形態において、重炭酸および/または炭酸イオンを二酸化炭素に転換することによって、DA炭酸塩類またはDAカルバミン酸塩類からの二酸化炭素の放出を高めるために、カルボニックアンヒドラーゼの酵素(上述の文章中でより詳しく説明した正反応に関する)が提供され得る。そのような実施形態では、酵素は外因的に提供され得て、例えば微生物の一部となり得るまたは、外因的に加えられ得る、操作された酵素などである。いくつかの実施形態において、操作されたCAは発酵ブロスまたは発酵溶液に排出されるように操作され得る。その他の実施形態では、操作されたCAは微生物のペリプラズム中に存在するように操作され得る。いくつかの実施形態において、DA炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類はDAの遊離塩基に転換する前に、初めに、培養された培地中の微生物から分離される。そのような実施形態においては、CAは外因的にCAを加えることによって提供され得る。他の実施形態においては、CAは固定され得る。他の実施形態では、CAはカルボニックアンヒドラーゼの活性を持つ、操作された微生物の一部である。他の実施形態では、カルボニックアンヒドラーゼの活性は、HMD合成経路およびカルボニックアンヒドラーゼの活性などのDA合成経路を含む、操作された微生物によって提供される。
放出されるCO2はシステム内へ再循環され得る(例えば、培養された培地へ)。
ジアミン(例えば、HMD)炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のジアミン遊離塩基への転換の前に、固体は培養された培地から分離され得る。そのような固体には、細胞および生成物によるその他の生物体および培養された培地の不純物が含まれ得る。結果として生じる液体フラクションは、ジアミン(例えば、HMD)炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類に富んでいる。
いくつかの実施形態において、固体除去の後および転換の前において、水は除去または低減させられ得る。水の除去または低減のための任意の公知の好適な方法(例えば、蒸発、逆浸透または電気透析など)が用いられ得る。
水の除去または低減は、より小さい溶媒抽出カラムおよびより低い溶解力を可能にし、二酸化炭素の除去は、溶媒抽出効率を増加させるためにジアミン化合物のアルカリ化(例えば、濾過浸透)を可能にする。上述の一実施形態において、蒸発器はどのような残りの二酸化炭素も(および、除去できる水もまた)除去するストリッピングカラムに続いて、十分な水を(および、除去可能なCO2もまた)除去するために用いられている。次の抽出に十分な程度のための一つの工程での水および二酸化炭素の同時除去は、コストおよび多数の工程に関わる休止時間を減らす利点がある。そのため、上述の他の実施形態においては、1つの工程または単位の操作は、下流工程での溶媒抽出などによるジアミンの回収を高めるために、十分な水および二酸化炭素(例えば、DIC)を除去することを目的として用いられる。そのため、1つの工程または単位の操作(例えば、水蒸発器またはストリッピングカラム)およびそれに関係する準備、維持、使用および休止時間のリスク、のコストは無くしまたは減らし得る。一実施形態において、同時の水および二酸化炭素の除去は、下流工程のHMDの回収を高める。
一度転換されると、DA(例えば、HMD)遊離塩基は有機溶媒と共に、培養された培地から単離され得る。単離されたDAは蒸留などのプロセスによって有機溶媒から分離される。抽出溶媒の例には、アルコール、アミン、エーテル、アルカンおよびケトンが含まれる。アルコールの例には、C4からC8の一価アルコールが含まれる。いくつかの実施形態において、抽出アルコールの例には、ヘキサノール、特に1−ヘキサノール、イソペンタノール、またはシクロヘキサノール、トルエンまたはエチルエーテルまたはこれらの混合物が含まれる。実施例で示されたように、アルカンは適した溶媒であり、特にHMDがジアミンである場合に適している。アルカン、特にヘキサンは、その極度に低い水溶解性のため、用いられ得る。ヘキサンはもし水が少しでもあれば、少ししか抽出されず、道理にかなった入手可能な遊離塩基の回収が提供される。アルカンは、そのため、ジアミン遊離塩基(例えば、HMD)の回収における利用のために適した溶媒である。適したアルカンには、C5〜C12の直鎖状または分岐状のものが含まれる。一実施形態において、抽出されるジアミンおよび溶媒として選ばれるアルカンの両方が、同数の炭素原子を有し得る。ヘプタンは特にHMDに適した他のアルカンであり、これは、下記のin silicoでのモデリング研究にさらに裏付けされている。ヘキサンおよびヘプタンの異性体は適している。ヘキサンの異性体は、2−メチルペンタン、3−メチルペンタン、2,2−ジメチルブタン、および2,3−ジメチルブタンである。ヘプタンの異性体は、2−メチルヘキサン、3−メチルヘキサン、2,2−ジメチルペンタン、2,3−ジメチルペンタン、2,4−ジメチルペンタン、3,3−ジメチルペンタン、3−エチルペンタンおよび、2,2,3−トリメチルブタンである。いくつかの実施形態において、DA(例えば、HMD)遊離塩基は培養された培地から直接蒸留されることができる。
蒸留は連続式またはバッチ式で実行され得る。単一蒸留塔または複数の互いに組となった蒸留塔が使われ得る。蒸留塔装置一式の配置および動作パラメーターの確立は、当業者の責務である。それぞれの場合に用いられる蒸留塔は、本質的に知られている方法で、設計されている(例えば、Sattler, Thermische Trennverfahren [Thermal separation methods], 2nd Edition 1995, Weinheim, p. 135ff; Perry's Chemical Engineers Handbook, 7th Edition 1997, New York, Section 13を参照)。それにより、用いられる蒸留塔は、分離トレイ、例えば、多孔板、バブルキャップトレイまたはバルブトレイ、配列された充填物、例えば、板金または布地充填物、または充填物のランダムな台、などの分離に効果的な内部を有している。用いられるカラムの中で必要とされる板の数および、還流の割合は、純度の要求、および液体が分離されるための、関係する煮沸位置によって本質的に決定され、当業者は知られた方法によって、特定の設計および作用しているデータを確かめることができる。
2.微生物の熱殺菌/転換:多くのプロセスは発酵の後の微生物の培養を必要とする。一度、ジアミン炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類が形成されると、それらは、高い温で滅菌/熱殺菌した場合、工程CO2が放出されたところで遊離塩基に転換され得る。
7:精製:有機溶媒を任意に溶媒抽出の工程へ戻して再循環する蒸留を含み、精製はジアミンを生成するおよび更なる蒸留塔および、色形成化合物および同様のものを除去する他の工程を含む。
9:CO2が放出されない任意の微生物の熱殺菌
10:任意の水除去、水の再循環および放出している場合に可能なCO2は炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物から水を除去し、水および/または二酸化炭素は発酵槽へ任意に再循環される。
12:アルカリ化(NaOHおよびCaOH)またはHMDから炭酸塩類を除去する他の工程(イオン交換、電気透析等):DA遊離塩基混合物から炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を除去するために水性塩基を加える。
1、2、3、4、5、6、7、8
1、3、4、5、6、7、8
1、9、3、4、5、6、7、8
1、2、3、10、4、5、6、7、8
1、3、10、4、5、6、7、8
1、9、3、10、4、5、6、7、8
1、2、3、10、11、8
1、3、10、11、8
1、9、3、10、11、8
1、2、3、11、8
1、3、11、8
1、9、3、11、8
1、2、3、4、11、8
1、2、3、10、4、11、8
1、3、10、4、11、8
1、3、4、11、8
1、9、3、4、11、8
1、9、3、10、4、11、8
1、2、3、4、12、6、7、8
1、2、3、10、4、12、6、7、8
1、3、4、12、6、7、8
1、3、10、4、12、6、7、8
1、9、3、4、12、6、7、8
1、9、3、10、4、12、6、7、8
1、2、3、4、5、12、6、7、8
1、2、3、10、4、5、12、6、7、8
1、3、4、5、12、6、7、8
1、3、10、4、5、12、6、7、8
1、9、3、4、5、12、6、7、8
1、9、3、10、4、5、12、6、7、8。
а)図13のA〜Nとして示されている工程
b)図13の工程A/L/N/C
c)図13の工程M/N/C
d)図13)の工程D/E/F/G/H
e)図13)の工程D/I/J/G/H
f)図13の工程D/E/K/J/G
g)図15の工程A〜H
h)図16の工程A/B/C/D/E/R/S
i)図16の工程A/B/F/G/D/E/R/S
j)図16の工程A/B/H/I/D/E/R/S
k)図16の工程A/B/C/AB/Z/R/S
l)図16の工程A/B/H/I/AB/Z/R/S
m)図16の工程A/B/F/G/AB/Z/R/S
n)図16の工程A/B//J/O/P/Q/S
o)図16の工程A/B/J/M/N/P/Q/S
p)図16の工程A/B/J/K/L/P/Q/S
q)図16の工程A/B/J/O/Z/R/S
r)図16の工程A/B/J/K/L/Z/R/S
s)図16の工程A/B/J/M/N/Z/R/S
t)図16の工程A/B/J/T/W/Q/S
u)図16の工程A/B/J/T/U/X/Q/S
v)図16の工程A/B/J/T/V/Y/Q/S
w)図17の工程A〜G
x)図19の工程O/Cまたは工程D/P/G/H
y)図21の工程A/B/C/G/H/I/J/K/L/M
z)図21の工程K/L/H
аа)図21の工程I/J/H
bb);図21の工程I/G/C
cc)図21の工程A/B/C
dd)図21の工程A/M/H
ee)図22の工程A/B/C
ff)図20の工程A/E/F/G/AA。
(а)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピル−CoAデヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピル−CoAデヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンタノイル−CoAレダクターゼ、アジピル−CoAレダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAトランスフェラーゼまたはシンセターゼおよび6−ACA−CoAレダクターゼ、または6−ACAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(b)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピル−CoAデヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピル−CoAデヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンタノイル−CoAレダクターゼ、アジピル−CoAレダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(c)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピル−CoAデヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピル−CoAデヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンタノイル−CoAレダクターゼ、アジピル−CoAトランスフェラーゼ、ヒドロラーゼまたはトランスフェラーゼ、アジピン酸レダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAトランスフェラーゼまたはシンセターゼ、6−ACA−CoAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(d)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピル−CoAデヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピル−CoAデヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンタノイル−CoAレダクターゼ、アジピル−CoAトランスフェラーゼ、ヒドロラーゼまたはトランスフェラーゼ、アジピン酸レダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(e)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピン酸デヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピン酸デヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンテン酸レダクターゼ、アジピン酸レダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAトランスフェラーゼまたはシンセターゼ、6−ACA−CoAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(f)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピン酸デヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピン酸デヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンテン酸レダクターゼ、アジピン酸レダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(g)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピン酸デヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピン酸デヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンテン酸レダクターゼ、アジピル−CoAトランスフェラーゼ、ヒドロラーゼまたはトランスフェラーゼ、アジピル−CoAレダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAトランスフェラーゼまたはシンセターゼ、6−ACA−CoAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(h)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピン酸デヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピン酸デヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンテン酸レダクターゼ、アジピル−CoAトランスフェラーゼ、ヒドロラーゼまたはトランスフェラーゼ、アジピル−CoAレダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(i)4−ヒドロキシ−2−オキソヘプタン−1,7−ジオエート(HODHアルドラーゼ);2−オキソヘプタ−4−エン−1,7−ジオエート(OHED)ヒドラターゼ;OHEDギ酸リアーゼおよびピルビン酸ギ酸リアーゼ活性化酵素もしくはOHEDデヒドロゲナーゼ;2,3−デヒドロアジピル−CoAレダクターゼ;アジピル−CoAデヒドロゲナーゼ;またはアジピン酸セミアルデヒドアミノトランスフェラーゼもしくはアジピン酸セミアルデヒドオキシドレダクターゼ(アミノ化);
(j)β−ケトチオラーゼもしくはアセチル−CoAカルボキシラーゼおよびアセトアセチル−CoAシンターゼ、3−ヒドロキシアシルCoAデヒドロゲナーゼもしくは3−オキソアシル−CoAレダクターゼ、エノイル−CoAヒドラターゼ、およびヘキサノイル−CoAを生成するためのトランス−2−エノイル−CoAレダクターゼ、1つ以上のチオエステラーゼ、アルデヒドデヒドロゲナーゼ、またはブタナールデヒドロゲナーゼ、上記宿主が生成するヘキサナールもしくはヘキサノエート類;1つ以上のモノオキシゲナーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、アルデヒドデヒドロゲナーゼ、6−ヒドロキシヘキサノエートデヒドロゲナーゼ、5−ヒドロキシペンタノエートデヒドロゲナーゼ、4−ヒドロキシブチレートデヒドロゲナーゼ、6−オキソヘキサノエートデヒドロゲナーゼ、もしくは7−オキソヘプタノエートデヒドロゲナーゼ、上記宿主が生成するアジピン酸またはアジピン酸セミアルデヒド;1つ以上のモノオキシゲナーゼ、トランスアミナーゼ、6−ヒドロキシヘキサノエートデヒドロゲナーゼ、5−ヒドロキシペンタノエートデヒドロゲナーゼ、4−ヒドロキシブチレートデヒドロゲナーゼ、およびアルコールデヒドロゲナーゼ、上記宿主が生成する6−アミノヘキサノエート;1つ以上のカルボキシレートレダクターゼ、ω−トランスアミナーゼ、デアセチラーゼ、N−アセチルトランスフェラーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ。このような経路は英国特許第20140186302号公報に開示されている;
(k)6−ヒドロキシ−3−オキソ−ヘキサノイル−CoAを形成するためのアセチルトランスフェラーゼもしくはチオラーゼ、6−ヒドロキシ−3−オキソ−ヘキサノイル−CoAデヒドロゲナーゼ、3,4−ジヒドロキシヘキサノイル−CoAデヒドロゲナーゼ、6−ヒドロキシ−2−ヘキサノイル−CoAレダクターゼ、6−ACAを形成するための6−ヒドロキシヘキサノイル−CoAヒドロラーゼ、HMDAを形成するための6−ヒドロキシカプロン酸デヒドロゲナーゼおよびトランスアミナーゼ。このような経路は国際公開番号WO2014/047407A1に開示されている;
(l)ホモクエン酸シンターゼ、2−ケトピメリン酸塩を形成するためのホモアコニターゼおよびホモイソクエン酸デヒドロゲナーゼ、α−ケトピメリン酸塩のアジピン酸セミアルデヒドへの転換を触媒する2−ケトデカルボキシラーゼ、α−ケトピメリン酸塩の2−アミノピメリン酸塩への転換を触媒する2−アミノピメリン酸トランスフェラーゼ、2−アミノピメリン酸塩を脱炭酸して6−ACAを形成するための2−アミノピメリン酸デカルボキシラーゼ、6−ACAの6−アミノヘキサナールへの転換を触媒するアルデヒドデヒドロゲナーゼおよび6−アミノヘキサナールの6−ヘキサメチレンジアミンへの転換を触媒するアミノトランスフェラーゼ。このような経路は国際公開番号WO/2010/068944に開示されている;ならびに
(m)グルタミル−CoAトランスフェラーゼおよび/またはリガーゼ、β−ケトチオラーゼ、3−オキソ−6−アミノピメロイル−CoAオキシドレダクターゼ、3−ヒドロキシ−6−アミノピメロイル−CoAレダクターゼ、6−アミノ−7−カルボキシヘプタ−2−エノイル−CoAレダクターゼ、6−アミノピメロイル−CoAレダクターゼ(アルデヒド形成)、2−アミノ−7−オキソヘプタノエートアミノトランスフェラーゼおよび/またはアミノ化オキシドレダクターゼ、ホモリジンデカルボキシラーゼ、6−アミノピメロイル−CoAヒドロラーゼ、トランスフェラーゼおよび/またはリガーゼ、2−アミノピメリン酸デカルボキシラーゼ。このような経路は国際公開番号WO2010/129936に開示されている。
ロイシン、イソロイシン、バリンおよび2−アミノブタン酸塩を含む幅広い基質範囲を有している(Stoyan et al., J. Biotechnol 54:77-80 (1997); Ansorge et al., Biotechnol Bioeng. 68:557-562 (2000))。アスパラギン酸デヒドロゲナーゼをコードしているThermotoga maritime由来のnadX遺伝子は、NADの生合成に関与している(Yang et al., J. Biol. Chem. 278:8804-8808 (2003))。
本実験は、変化する条件下でのHMD/CO2pH平衡を説明する。本実施例において、10%w/wのHMD水溶液を調製した(Sigma Aldrichから購入した70%HMD)。当該HMD溶液を30℃に加熱し、最初のpHを記録した。次いで、pHをモニタリングしながら、CO2(約98%純度)を溶液中へ60分間バブリングした。CO2のスパージを停止した。pHをモニタリングしながら、空気を溶液中へ30分間スパージした。空気のスパージを維持したまま、溶液を40分間80℃に加熱した。3mLをファルコンチューブにサンプリングして30℃に冷却することによって、pHを測定した。溶液を20分間88℃に加熱した。溶液を30℃に冷却し、最終的なpHを記録した。測定されたpH値は、下記のグラフ1−1、1−2および1−3にプロットされている。なお、pHメーターにおける温度プローブは、300分において44.4℃を示しており、60分の終了によって30℃まで冷却し戻した。これは放熱酸/塩基反応によって引き起こされたと最も考えられた。この温度増加はまた、グラフ1−3における非線形性の原因であり得る。なぜなら、温度増加に伴ってpHが減少するからである。
この実施例は、疑似的な発酵プロセスの結果を報告する。簡単にいうと、CO2(約98%純度)およびHMD(Sigma Aldrichから購入した70%HMD)を、以下の組成を有するMM9溶液中へ供給した:
・0.68%(6.8g/L) リン酸水素二ナトリウム Na2HPO4
・0.3%(3g/L) リン酸一カリウム KH2PO4
・0.15%(1.5g/L) 塩化アンモニウム NH4Cl
・0.1%(1g/L) 硫酸アンモニウム (NH4)2SO4
・0.05%(0.5g/L) 塩化ナトリウム NaCl
本実施例についての実験条件は表2−1に挙げられている。
本実施例は、HMDの水溶液(MM9培地であった)とCO2ガスとの接触によって形成される、プロトン化されたおよび/または炭酸塩/カルバミン酸塩化合物からの遊離塩基としてのHMDの生成を実証する。
本実施例は、上記実施例3において調製したCO2除去溶液からのHMDの溶媒抽出、および、溶媒の性能についてのコントロールとしてpH調整をしていない水溶液からのHMDの抽出を記載する。本実施例では、下記のプロトコールを用いた:
水性供給物のpHを測定した。50mLのファルコンチューブ中で、20gの溶媒と20gの供給物とを混合した。この混合物を上記ファルコンチューブ中で5分間さらに強く混合し、1分間ボルテックスした。混合された溶媒および供給物が入ったチューブを、相分離が完了するまで静置した。下部(水層)の体積を記録した。上層のサンプルを当該上層の外に注意深くピペットした。下層のサンプルも取得し、下層のpHを測定した。物質収支に基づく、回収率、分配係数および選択性を計算した。
比較例
モデル化したHMD発酵をH2SO4でpH7に制御した場合、質量ベースで88%のグルコースがHMDに転換され、且つ最終HMD滴定量が116g/Lであると仮定すると、pHを7に維持するためにHMD 1gあたり0.843gのH2SO4が必要である。使用される硫酸の量に起因して、二酸化炭素は直ちには吸収されない。これは、0.5%未満の最終DIC/TDCA値をもたらす。当該発酵モデルは、他の事項のうち、細胞の増殖および呼吸、副生成物の形成、ならびに必要な培地組成を考慮する。
HMD発酵をpH8.5においてモデル化した場合、質量ベースで88%のグルコースがHMDに転換され且つ最終HMD滴定量が116g/Lであると仮定すると、8.5のpHを維持するために硫酸は不要である(実験結果に基づく)。二酸化炭素は、HMDによって直ちに吸収される。種発酵の間に、DIC/TDCAは、<1%から約54%に上昇した。生成発酵の間に、当該値は、約54%から約96%に上昇した。当該発酵モデルは、他の事項のうち、細胞の増殖および呼吸、副生成物の形成、ならびに必要な培地組成を考慮する。
モデル化されたHMD発酵をCO2だけでpH7に制御する場合、質量ベースで88%のグルコースがHMDに転換され且つ最終HMD滴定量が116g/Lであると仮定すると、HMD 1モルあたり2.4モルのCO2が吸収される必要があることが示される。pH7はpH制御に用いる唯一の酸としてCO2を用いて達成することができることが、他の実施例において実験的に示されている。種発酵モデルの間に、DIC/TDCAは、<1%から約82%に上昇した。生成発酵モデルの間に、当該値は、約82%から約97%に上昇した。当該発酵モデルは、他の事項のうち、細胞の増殖および呼吸、副生成物の形成、ならびに必要な培地組成を考慮する。
水溶液からHMD遊離塩基を回収するのに適した溶媒として、アルカン等の溶媒を評価した。ヘキサンまたはヘプタンを用いた溶媒抽出によって50%HMD水溶液から回収されたHMDのパーセントをモデル化するために、ASPEN(Aspen Plus ver 8.6; Aspen Technology, Inc., USA)ソフトウェアを用いた。Aspenモデルに含まれる成分は、水、HMD、DIC(溶存無機炭素)、および溶媒(ヘキサンまたはヘプタン)であった。ASPENにおける電解質NRTLモデル(ENRTL-RK)を用いた。50%HMD溶液は、(特に水およびCO2除去について本書に記載された方法を用いて)達成できる濃度であり、また、HMDの沈殿を回避または低減する濃度であると思われるため、50%HMD溶液をモデル化した。50%HMD溶液中のモデルCO2含有量については、0.3%であった。しかしながら、HMD濃度が高くなるについて溶媒抽出の効率が増加するため、溶媒抽出についてのHMD濃度の限度はさらに高くなり得る。
HMDの回収の前に水およびCO2除去を達成するための、水蒸発器(多効蒸発器)または水蒸気ストリッピングカラムの何れかの単独使用をモデル化するために、ASPEN Plusを用いた。条件は上記のとおりであり、ASPENモデルに含まれる成分は、水、HMD,DIC化学種およびヘキサンであり、電解質NRTLモデルを用いた。何れかの工程を取り除くことができる一方、また、より多くの水を蒸発させる際に蒸発器における電気および水蒸気の使用が増加するにも関わらず、ストリッピングカラムよりも水の除去において効率的であるため、蒸発器の使用によって実用コストの削減が実現される。下記の図は、ストリッピングカラムが存在しない場合の水蒸気および電気の使用を、除去された水の総計の関数として示す。プロットされた実用コストは蒸発器工程に関する。最大の水蒸気および電気使用は、50重量%HMD水溶液が達成された時点に関する。上述のように、このHMD濃度は、抽出に適していると思われたので、当該モデルのために選択されたものであり、溶液が濃縮されるため沈殿形成を引き起こし得るさらなる水およびCO2除去を回避する。HMD濃度の上昇とともに溶媒抽出の効率は増加し、さらなる濃度が有益であり得る。
カルボニックアンヒドラーゼを有するHMDA生成微生物の調製
HMDA経路に利用される酵素およびカルボニックアンヒドラーゼをコードする核酸を有する、HMDAを生成するよう操作するための標的生物として、Escherichia coliを用いる。
Claims (217)
- a)遺伝子組み換え微生物を培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、ジアミン(DA)を生成して、DA炭酸塩、DA重炭酸塩、DAビス重炭酸塩(本書において纏めてDA炭酸塩類という)、および/またはDAカルバミン酸塩もしくはDAビスカルバミン酸塩(本書において纏めてDAカルバミン酸塩類という)のうちの1つ以上を当該培地中に形成する工程であって、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸が当該培地のpHを主に制御している工程;
b)少なくとも1つ以上の上記DA炭酸塩類または上記DAカルバミン酸塩類を、DA遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程;および
c)上記DA遊離塩基を単離する工程:
を含む、ジアミン(DA)の製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、ジアミン(DA)を生成して、DA炭酸塩、DA重炭酸塩、DAビス重炭酸塩、DAカルバミン酸塩またはDAビスカルバミン酸塩のうちの1つ以上を当該培地中に形成する工程であって、当該培地中の溶存無機炭素(DIC)のパーセントが40%以上であり、当該DICが式:DIC/TDCA×100(TDCAは、全溶存カウンターアニオンであり、DICおよび他のアニオンの合計である)によって決定される工程;
b)上記DA炭酸塩、DA重炭酸塩、DAビス重炭酸塩、DAカルバミン酸塩またはDAビスカルバミン酸塩を、DA遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程;および
c)上記DA遊離塩基を単離する工程:
を含む、ジアミン(DA)の製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、ジアミン(DA)を生成して、DA炭酸塩、DA重炭酸塩、DAビス重炭酸塩(DA炭酸塩類)、および/またはDAカルバミン酸塩もしくはDAビスカルバミン酸塩(DAカルバミン酸塩類)のうちの1つ以上を当該培地中に形成する工程であって、当該培地中のジアミン種の少なくとも40%が、DA炭酸塩、DA重炭酸塩、DAビス重炭酸塩、DAカルバミン酸塩またはDAビスカルバミン酸塩のうちの1つ以上を含む工程;
b)上記DA炭酸塩類および/またはDAカルバミン酸塩類を、DA遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程;および
c)上記DA遊離塩基を単離する工程:
を含む、ジアミン(DA)の製造方法。 - 上記ジアミンが、C2〜C7メチレンセグメントまたはC2〜C12メチレンセグメントを含む、請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。
- 上記ジアミンが、C4〜C7メチレンセグメントを含む、請求項4に記載の方法。
- 上記ジアミンが、ヘキサメチレンジアミン(HMD)、カダベリン、プトレッシン、エチレンジアミンまたはヘプタメチレンジアミンを含む、請求項4に記載の方法。
- 上記ジアミンが、ヘキサメチレンジアミンである、請求項6に記載の方法。
- 上記ジアミン炭酸塩類が、炭酸塩、重炭酸塩またはビス重炭酸塩を含み、上記ジアミンカルバミン酸塩類が、ヘキサメチレンジアミン(HMD)、カダベリン、プトレッシン、エチレンジアミンまたはヘプタメチレンジアミンの、カルバミン酸塩もしくはビスカルバミン酸塩またはそれらの任意の混合物を含む、請求項6に記載の方法。
- 上記ジアミンが、ヘキサメチレンジアミンである、請求項8に記載の方法。
- 上記培地中の上記ジアミンの少なくとも50%が、DA炭酸塩類(DA炭酸塩、DA重炭酸塩もしくはDAビス重炭酸塩)またはDAカルバミン酸塩類(DAカルバミン酸塩もしくはDAビスカルバミン酸塩)のうちの1つ以上を含む、請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。
- 上記培地中の上記ジアミンの少なくとも60%が、DA炭酸塩、DA重炭酸塩、DAビス重炭酸塩またはDAカルバミン酸塩もしくはDAビスカルバミン酸塩のうちの1つ以上を含む、請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。
- 上記培地中の上記ジアミンの少なくとも70%が、DA炭酸塩、DA重炭酸塩、DAビス重炭酸塩またはDAカルバミン酸塩もしくはDAビスカルバミン酸塩のうちの1つ以上を含む、請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。
- 上記培地中の上記ジアミンの少なくとも80%が、DA炭酸塩、DA重炭酸塩、DAビス重炭酸塩またはDAカルバミン酸塩もしくはDAビスカルバミン酸塩のうちの1つ以上を含む、請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。
- 上記培地中の上記ジアミンの少なくとも90%が、DA炭酸塩、DA重炭酸塩、DAビス重炭酸塩またはDAカルバミン酸塩もしくはDAビスカルバミン酸塩のうちの1つ以上を含む、請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。
- 上記培地中の上記ジアミンの少なくとも99.9%が、DA炭酸塩、DA重炭酸塩、DAビス重炭酸塩またはDAカルバミン酸塩もしくはDAビスカルバミン酸塩のうちの1つ以上を含む、請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸のうちの1つ以上をさらに形成する、請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物により形成された二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸が、ジアミン生成からの化学量論的な二酸化炭素を含む、請求項16に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物により形成された二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸が、呼吸作用の二酸化炭素または副生成物の二酸化炭素を含む、請求項16に記載の方法。
- 上記呼吸作用の二酸化炭素が、TCAサイクルの完了を介するか、グリオキシル酸経路を介するか、ペントースリン酸経路(例えばzwf)を介するか、またはエントナー・ドゥドロフ経路を介する、少なくとも1つの経路から形成される、請求項18に記載の方法。
- 上記副生成物の二酸化炭素が、酢酸塩、エタノール、コハク酸塩、3−オキソアジピン酸塩または3−ヒドロキシアジピン酸塩である副生成物の形成に関連する、請求項18に記載の方法。
- 二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸のうちの1つ以上が、上記培地に外部から添加される、請求項1〜3および16の何れか一項、または請求項1〜20の何れか一項に記載の方法。
- 上記炭酸塩類が、少なくともHMD炭酸塩を含む、請求項1〜3の何れか一項、または請求項1〜21の何れか一項に記載の方法。
- 上記炭酸塩類が、少なくともHMD重炭酸塩を含む、請求項1〜3の何れか一項、または請求項1〜22の何れか一項に記載の方法。
- 上記炭酸塩類が、少なくともHMDビス重炭酸塩を含む、請求項1〜3の何れか一項、または請求項1〜23の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルバミン酸塩類が、少なくともHMDカルバミン酸塩を含むか、または上記カルバミン酸塩類が、少なくともHMDビスカルバミン酸塩を含む、請求項1〜3の何れか一項、または請求項1〜24の何れか一項に記載の方法。
- 上記炭酸塩類が、少なくともHMD重炭酸塩およびHMDビス重炭酸塩を含む、請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。
- 上記培地中の二酸化炭素とDAとの比が、約0.05:1〜約7:1である、請求項1〜3の何れか一項、または請求項1〜26の何れか一項に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、二酸化炭素およびDAを約0.05:1〜約5:1の比において形成する、請求項1〜3の何れか一項、または請求項1〜27の何れか一項に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、二酸化炭素およびDAを約0.05:1〜約3.5:1の比において形成する、請求項28、または請求項1〜28の何れか一項に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、二酸化炭素およびDAを約0.05:1〜約3:1の比において形成する、請求項28、または請求項1〜29の何れか一項に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、二酸化炭素およびDAを約0.05:1〜約2.5:1の比において形成する、請求項28、または請求項1〜30の何れか一項に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、二酸化炭素およびDAを約0.05:1〜約2:1の比において形成する、請求項28、または請求項1〜31の何れか一項に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、二酸化炭素およびDAを約0.05:1〜約1.5:1の比において形成する、請求項28、または請求項1〜32の何れか一項に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、二酸化炭素およびDAを約0.05:1〜約1:1の比において形成する、請求項28、または請求項1〜33の何れか一項に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、二酸化炭素およびDAを約0.2:1〜約3:1の比において形成する、請求項28に記載の方法。
- 工程(a)における培養の間の上記培地は、外部から添加されたバッファを実質的に含まない、請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。
- 工程(a)における培養の間の上記培地は、外部から添加された無機酸または有機酸を実質的に含まない、請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。
- 上記培養した培地が、11未満、10未満、9未満または8未満のpHを有する、請求項1〜3の何れか一項、または請求項1〜37の何れか一項に記載の方法。
- 上記培養した培地が、少なくとも2、少なくとも3、少なくとも4、少なくとも5、少なくとも6または少なくとも7のpHを有する、請求項1〜3および38の何れか一項、または請求項1〜38の何れか一項に記載の方法。
- 上記培養した培地が、約6〜9.5のpHを有する、請求項39、または請求項1〜39の何れか一項に記載の方法。
- 上記培養した培地が、約6〜9のpHを有する、請求項39、または請求項1〜40の何れか一項に記載の方法。
- 上記培養した培地が、約6〜8のpHを有する、請求項39、または請求項1〜41の何れか一項に記載の方法。
- 上記培養した培地が、約6.5〜7.5のpHを有する、請求項39、または請求項1〜42の何れか一項に記載の方法。
- 上記培養した培地が、約7.5〜9.5のpHを有する、請求項39、または請求項1〜43の何れか一項に記載の方法。
- 上記培養した培地が、約8〜9のpHを有する、請求項39、または請求項1〜44の何れか一項に記載の方法。
- カルボニックアンヒドラーゼが、(a)二酸化炭素を重炭酸塩および/もしくは炭酸塩イオンに転換することによってDA炭酸塩類もしくはDAカルバミン酸塩類の形成を促進するか、(b)重炭酸塩および/もしくは炭酸塩イオンを二酸化炭素に転換することによってDA炭酸塩類もしくはDAカルバミン酸塩類の溶液からの二酸化炭素の放出を促進するか、または(c)(a)および(b)の両方を行う、のに十分な量において存在する、請求項1〜3の何れか一項、または請求項1〜45の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、DA炭酸塩類の形成を促進する、請求項46に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、DA炭酸塩類の溶液からの二酸化炭素の放出を促進する、請求項46〜47の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、DA炭酸塩類の形成を促進し、且つ、DA炭酸塩類の溶液からの二酸化炭素の放出を促進する、請求項46〜48の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、発酵ブロス中に存在して、DA炭酸塩類またはDAカルバミン酸塩類の形成を促進する、請求項46〜49の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、二酸化炭素を放出して遊離DA塩基を生成する工程において存在して、DA炭酸塩類またはDAカルバミン酸塩類の溶液からの二酸化炭素の放出を促進する、請求項46〜50の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、発酵ブロス中に存在して、DA炭酸塩類またはDAカルバミン酸塩類の形成を促進し、且つ、二酸化炭素を放出して遊離DA塩基を生成する工程において存在して、DA炭酸塩類またはDAカルバミン酸塩類の溶液からの二酸化炭素の放出を促進する、請求項46〜51の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、外因的に添加される、請求項46〜52の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、上記発酵ブロス中の遺伝子組み換え微生物によって提供され、任意で当該ブロスに排出され、任意で当該微生物のペリプラズム中に存在する、請求項46〜53の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、上記DAを生成する上記遺伝子組み換え微生物によって提供され、任意で上記ブロスに排出され、任意で当該微生物のペリプラズム中に存在する、請求項46〜54の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが天然の遺伝子または酵素であり、任意で上記カルボニックアンヒドラーゼが操作された遺伝子または酵素であり、任意で上記ブロスへの分泌について操作されており、任意で上記微生物のペリプラズム空間への分泌について操作されている、請求項46〜55の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、操作された酵素であり、任意で安定性、熱安定性、アルカリpH安定性または増加した活性を促進するよう操作されている、請求項46〜56の何れか一項に記載の方法。
- 上記DAが、HMD、カダベリン、プトレッシン、エチレンジアミン、ヘプタメチレンジアミン、またはC2〜C7メチレンセグメント、C2〜C12メチレンセグメントもしくはC4〜C7メチレンセグメントを含むジアミンであり、任意で上記DAがHMDである、請求項46〜57の何れか一項に記載の方法。
- 炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を上記DA遊離塩基に転換する前に、細胞を含む固体フラクションから、DA炭酸塩類および/またはDAカルバミン酸塩類に富んだ液体フラクションを分離する工程をさらに含む、請求項1〜3の何れか一項、または請求項1〜58の何れか一項に記載の方法。
- 上記分離する工程が、遠心分離、精密濾過、回転ドラムまたはそれらの組み合わせを含む、請求項59に記載の方法。
- 遠心がディスクスタック遠心またはデカンター遠心を含む、請求項60に記載の方法。
- 炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類に富んだ液体フラクションの濾過をさらに含む、請求項59に記載の方法。
- 濾過が限外濾過を含む、請求項62に記載の方法。
- 上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を上記DA遊離塩基に転換する工程の前に、上記培養した培地から水を除去する工程をさらに含み、任意で工程(a)の培養する工程へ当該水を再回収して再循環する工程をさらに含む、請求項1〜3および59の何れか一項、または請求項1〜63の何れか一項に記載の方法。
- 水を除去する工程が、蒸発、逆浸透または電気透析を含む、請求項64に記載の方法。
- 蒸発が、多効蒸発、熱蒸発再圧縮または機械的蒸発再圧縮を含む、請求項64に記載の方法。
- 上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類が、熱によって上記遊離塩基に転換される、請求項1〜3、59および64の何れか一項、または請求項1〜66の何れか一項に記載の方法。
- 上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類が、減圧によって上記遊離塩基に転換される、請求項1〜3、59および64の何れか一項、または請求項1〜67の何れか一項に記載の方法。
- 上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類が、イオン交換によって上記遊離塩基に転換される、請求項1〜3、59および64の何れか一項、または請求項1〜68の何れか一項に記載の方法。
- 上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類が、電気透析によって上記遊離塩基に転換される、請求項1〜3、59および64の何れか一項、または請求項1〜69の何れか一項に記載の方法。
- 上記電気透析が、双極性膜を用いて行われる、請求項70に記載の方法。
- 上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類が、70℃より高い、80℃より高い、105℃より高い、または200℃より高い温度において上記遊離塩基に熱的に転換される、請求項67に記載の方法。
- 上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類が、20℃より高い、30℃より高い、または40℃より高い温度において上記遊離塩基に熱的に転換され、且つ、減圧が存在する、請求項67に記載の方法。
- 上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類が、容器内で1〜10バールの圧力において上記遊離塩基に転換される、請求項1〜3、59および64の何れか一項、または請求項1〜73の何れか一項に記載の方法。
- 上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類が、当該炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のフラクションをガスでストリッピングすることによって上記DA遊離塩基に転換される、請求項1〜3、59および64の何れか一項、または請求項1〜74の何れか一項に記載の方法。
- 上記ガスが空気または不活性ガスであり、任意で当該不活性ガスが窒素、空気またはヘリウムである、請求項75に記載の方法。
- 上記ストリッピングが、約1〜10バールの圧力において行われる、請求項75〜76の何れか一項に記載の方法。
- 上記DA炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類化合物、好ましくはHMD炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類化合物が、水蒸気ストリッピングによって上記遊離塩基に転換される、請求項1〜3、59および64の何れか一項、または請求項1〜77の何れか一項に記載の方法。
- 上記水の除去と上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の上記DA遊離塩基への転換とが、同時に起こるか、または同一単位の操作中に起こる、請求項1〜3、59および64の何れか一項、または請求項1〜78の何れか一項に記載の方法。
- 上記水の除去と上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の上記DA遊離塩基への転換とが、熱によってか、またはストリッピング(任意で不活性ガスもしくは水蒸気を用いる)によって、同時に起こる、請求項1〜3、59および64の何れか一項、または請求項1〜79の何れか一項に記載の方法。
- DA抽出の前に、上記DA遊離塩基に富んだ溶液に、pHがさらに上昇するのに十分な強塩基(任意で水酸化ナトリウムまたは水酸化カルシウム)を添加する工程をさらに含む、請求項1〜80の何れか一項に記載の方法。
- 上記転換する工程が、少なくとも20%から少なくとも99%のDA遊離塩基を生成する、請求項1〜81の何れか一項に記載の方法。
- 上記溶存無機炭素(DIC)のパーセントが、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上または90%以上である、請求項2、または請求項1〜82の何れか一項に記載の方法。
- pHを制御するために外部から添加される二酸化炭素と外部から添加される他の酸とのモル比が、少なくとも1:1、少なくとも2:1、少なくとも5:1、少なくとも10:1、少なくとも50:1、または少なくとも100:1である、請求項1、または請求項1〜83の何れか一項に記載の方法。
- 上記ジアミンが、ヘキサメチレンジアミン、カダベリン、プトレッシン、エチレンジアミンまたはヘプタメチレンジアミンである、請求項1〜84の何れか一項に記載の方法。
- 上記ジアミンが、ヘキサメチレンジアミンである、請求項85に記載の方法。
- 上記ジアミンが、カダベリンである、請求項85に記載の方法。
- 上記ジアミンが、プトレッシンである、請求項85に記載の方法。
- 上記ジアミンが、エチレンジアミンである、請求項85に記載の方法。
- 上記ジアミンが、ヘプタメチレンジアミンである、請求項85に記載の方法。
- カルボニックアンヒドラーゼが、重炭酸塩および/または炭酸塩イオンを二酸化炭素に転換することによってDA炭酸塩類またはDAカルバミン酸塩類の溶液からの二酸化炭素の放出を促進するのに十分な量において存在する、請求項64〜90の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、DA炭酸塩類の溶液からの二酸化炭素の放出を促進する、請求項91に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、発酵ブロス中に存在する、請求項91〜92の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、二酸化炭素を放出して遊離DA塩基を生成する工程において存在して、DA炭酸塩類またはDAカルバミン酸塩類の溶液からの二酸化炭素の放出を促進し、任意で上記CAが、上記水を除去するまたは蒸発させる工程において存在し、任意で上記CAが上記CO2ストリッピング工程において存在し、任意で上記CAが、上記水を除去するまたは蒸発させる工程および上記CO2ストリッピング工程の両方において存在する、請求項91〜93の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、外因的に添加される、請求項91〜94の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、上記発酵ブロス中の遺伝子組み換え微生物によって提供され、任意で当該ブロスに排出され、任意で当該微生物のペリプラズム中に存在する、請求項91〜95の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、上記DAを生成する上記遺伝子組み換え微生物によって提供され、任意で上記ブロスに排出され、任意で当該微生物のペリプラズム中に存在する、請求項91〜96の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが天然の遺伝子または酵素であり、任意で上記カルボニックアンヒドラーゼが操作された遺伝子または酵素であり、任意で上記ブロスへの分泌について操作されており、任意で上記微生物のペリプラズム空間への分泌について操作されている、請求項91〜97の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、操作された酵素であり、任意で安定性、熱安定性、アルカリpH安定性または増加した活性を促進するよう操作されている、請求項91〜98の何れか一項に記載の方法。
- 上記DAが、HMD、カダベリン、プトレッシン、エチレンジアミン、ヘプタメチレンジアミン、またはC2〜C7メチレンセグメント、C2〜C12メチレンセグメントもしくはC4〜C7メチレンセグメントを含むジアミンであり、任意で、請求項91〜99の何れか一項に記載の方法。
- 上記転換する工程が、少なくとも20%から少なくとも99%のジアミン遊離塩基を生成する、請求項1〜100の何れか一項に記載の方法。
- 上記ジアミン遊離塩基、好ましくはHMD遊離塩基が、水相とジアミン遊離塩基含有有機相とを与えるための抽出溶媒を用いて、上記培地または上記ジアミンに富んだフラクションから単離される、請求項101に記載の方法。
- 上記DA遊離塩基、好ましくはHMD遊離塩基が、水相とDA遊離塩基含有有機相とを与えるための抽出溶媒を用いて、上記培地または上記DAに富んだフラクションから単離される、請求項1〜3および67〜82の何れか一項に記載の方法。
- 上記有機溶媒からDA遊離塩基を分離するための上記有機相の蒸留をさらに含む、請求項103に記載の方法。
- 上記DA遊離塩基が、水相とDA遊離塩基含有有機相とを作り出す抽出溶媒を用いて、上記培地または上記DAに富んだフラクションから単離され、DA遊離塩基含有有機相および上記DAが、蒸留によって当該抽出溶媒から分離される、請求項103に記載の方法。
- 上記抽出溶媒が、水より低い沸点を有する、請求項103に記載の方法。
- 上記抽出溶媒が、DA遊離塩基またはHMD遊離塩基より高い沸点を有する、請求項103に記載の方法。
- 上記抽出溶媒が、水の沸点とDA遊離塩基またはHMD遊離塩基の沸点との中間にある沸点を有する、請求項103に記載の方法。
- 上記抽出溶媒が、アルコール、アルカン、アミン、エーテルおよびケトンからなる群より選択される、請求項103に記載の方法。
- 上記抽出溶媒が、C4〜C8の一価のアルコールを含む、請求項109に記載の方法。
- 上記抽出溶媒が、ブタノール、ヘキサノール、1−ヘキサノール、イソペンタノールまたはシクロヘキサノールを含む、請求項109に記載の方法。
- 上記抽出溶媒が、トルエンまたはエチルエーテルを含む、請求項109に記載の方法。
- 上記抽出溶媒が、C5〜C12の直鎖状または分枝状のアルカンを含む、請求項109に記載の方法。
- 上記抽出溶媒が、ヘプタン、ヘキサン、それらの異性体、およびそれらの組み合わせを含む、請求項109に記載の方法。
- 上記抽出溶媒が、抽出されるジアミンの炭素原子数の炭素原子数を含む、請求項109に記載の方法。
- 上記有機相(抽出物)が、少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、または少なくとも50%のDAを、遊離塩基の形態またはHMD遊離塩基の形態において含む、請求項103に記載の方法。
- DAまたはHMDを回収するために上記溶媒抽出工程の水相(ラフィネート)を処理する工程をさらに含む、請求項103に記載の方法。
- 上記水相ラフィネートを上記転換する工程へ再循環する工程をさらに含む、請求項117に記載の方法。
- 蒸留工程が、水および溶媒を実質的に除去する、請求項103に記載の方法。
- 水および溶媒を実質的に除去するための蒸留が、170℃未満、160℃未満、150℃未満、または140℃未満である、請求項103に記載の方法。
- 水または溶媒が実質的にないDA遊離塩基、任意で少なくとも90%のDA、少なくとも94%のDAまたは少なくとも123%のDAを、アンモニア沈殿に供する工程をさらに含む、請求項103に記載の方法。
- 上記単離する工程が、炭素吸着、水素添加または蒸留のうちの1つ以上の工程をさらに含む、請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。
- 上記単離する工程が、色彩形成化合物を除去または低減する工程をさらに含む、請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。
- 溶媒抽出の後に、少なくとも1つの蒸留工程がある、請求項1〜3の何れか一項、または請求項103〜123の何れか一項に記載の方法。
- 溶媒抽出の後に、少なくとも2つの蒸留工程がある、請求項124に記載の方法。
- 上記DA遊離塩基が、1つ以上の蒸留工程において、上記培地から直接蒸留される、請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。
- 上記単離されたDA遊離塩基が、約90%より高い、約95%より高い、約99%より高い、または約99.9%より高い純度を有する、請求項1〜126の何れか一項に記載の方法。
- 上記抽出溶媒が、上記DA遊離塩基から分離された後に再循環される、請求項103〜127の何れか一項に記載の方法。
- 上記二酸化炭素の少なくとも一部が、請求項1〜3の何れかにおける工程(a)の培養する工程へ当該二酸化炭素を添加することによって再循環される、請求項1〜128の何れか一項に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、少なくとも1つのHMD炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類化合物を生成するのに十分な量において発現する、HMD合成経路の少なくとも1つの酵素をコードする少なくとも1つの外因性の核酸と共にHMD合成経路を備える、請求項1〜3の何れか一項、または請求項1〜129の何れか一項に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、少なくとも1つのHMD炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類化合物を生成するのに十分な量において発現する、HMD合成経路の少なくとも2つの酵素をコードする少なくとも2つの外因性の核酸と共にHMD合成経路を備える、請求項130に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、少なくとも1つのHMD炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類化合物を生成するのに十分な量において発現する、HMD合成経路の少なくとも3つの酵素をコードする少なくとも3つの外因性の核酸と共にHMD合成経路を備える、請求項130に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、少なくとも1つのHMD炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類化合物を生成するのに十分な量において発現する、HMD合成経路の少なくとも4つの酵素をコードする少なくとも4つの外因性の核酸と共にHMD合成経路を備える、請求項130に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、少なくとも1つのHMD炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類化合物を生成するのに十分な量において発現する、HMD合成経路の少なくとも5つの酵素をコードする少なくとも5つの外因性の核酸と共にHMD合成経路を備える、請求項130に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、少なくとも1つのHMD炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類化合物を生成するのに十分な量において発現する、HMD合成経路の少なくとも6つの酵素をコードする少なくとも6つの外因性の核酸と共にHMD合成経路を備える、請求項130に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、少なくとも1つのHMD炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類化合物を生成するのに十分な量において発現する、HMD合成経路の少なくとも7つの酵素をコードする少なくとも7つの外因性の核酸と共にHMD合成経路を備える、請求項130に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、少なくとも1つのHMD炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類化合物を生成するのに十分な量において発現する、HMD合成経路の少なくとも8つの酵素をコードする少なくとも8つの外因性の核酸と共にHMD合成経路を備える、請求項130に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、少なくとも1つのHMD炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類化合物を生成するのに十分な量において発現する、HMD合成経路の少なくとも9つの酵素をコードする少なくとも9つの外因性の核酸と共にHMD合成経路を備える、請求項130に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、少なくとも1つのHMD炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類化合物を生成するのに十分な量において発現する、HMD合成経路の少なくとも10個の酵素をコードする少なくとも10個の外因性の核酸と共にHMD合成経路を備える、請求項130に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、少なくとも1つのHMD炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類化合物を生成するのに十分な量において発現する、HMD合成経路の少なくとも11個の酵素をコードする少なくとも11個の外因性の核酸と共にHMD合成経路を備える、請求項130に記載の方法。
- 上記HMD合成経路が、3−オキソアジピル−CoA、アジピン酸セミアルデヒド、6−アミノカプロン酸塩(6−ACA)、6−ACAセミアルデヒド、2−アミノピメリン酸塩、3,6−ジヒドロキシヘキサノイル−CoA、およびホモリジンからなる群より選択される中間体化合物を含む、請求項130〜140の何れか一項に記載の方法。
- 上記HMD合成経路が、3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−アミノカプロイル−CoAレダクターゼ、6−ACAレダクターゼ、アジピル−CoAレダクターゼ、アジピン酸レダクターゼ、6−ヒドロキシ−3−オキソヘキサノイル−CoAデヒドロゲナーゼ、2−アミノピメリン酸デカルボキシラーゼ、およびホモリジンデカルボキシラーゼからなる群より選択される酵素を含む、請求項130〜140の何れか一項に記載の方法。
- 上記HMD合成経路が、スクシニル−CoAおよびアセチル−CoAに作用して3−オキソアジピル−CoAにする3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、アジピル−CoAに作用して6−ACAを形成する6−ACAトランスアミナーゼ、6−アミノカプロエイル−CoAに作用して6−ACAセミアルデヒドを形成する6−アミノカプロイル−CoAレダクターゼ、6−ACAに作用してそれを直接6−ACAセミアルデヒドに転換する6−ACAレダクターゼ、アジピル−CoAに作用してアジピン酸セミアルデヒドを形成するアジピル−CoAレダクターゼ、アジピン酸塩に作用してそれを直接アジピン酸セミアルデヒドに転換するアジピン酸レダクターゼ、6−ヒドロキシ−3−オキソヘキサノイル−CoAを還元して3,6−ジヒドロキシヘキサノイル−CoAを形成する6−ヒドロキシ−3−オキソヘキサノイル−CoAデヒドロゲナーゼ、2−アミノピメリン酸塩を脱炭酸して6−ACAを形成する2−アミノピメリン酸デカルボキシラーゼ、および、ホモリジンを脱炭酸してHMDAを形成するホモリジンデカルボキシラーゼからなる群より選択される酵素および基質−生成物ペアを含む、請求項130〜140の何れか一項に記載の方法。
- 上記HMD合成経路が、経路(a)〜(m)の群より選択される、請求項130〜140の何れか一項に記載の方法:
(a)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピル−CoAデヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピル−CoAデヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンタノイル−CoAレダクターゼ、アジピル−CoAレダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAトランスフェラーゼまたはシンセターゼおよび6−ACA−CoAレダクターゼ、または6−ACAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(b)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピル−CoAデヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピル−CoAデヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンタノイル−CoAレダクターゼ、アジピル−CoAレダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(c)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピル−CoAデヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピル−CoAデヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンタノイル−CoAレダクターゼ、アジピル−CoAトランスフェラーゼ、ヒドロラーゼまたはトランスフェラーゼ、アジピン酸レダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAトランスフェラーゼまたはシンセターゼ、6−ACA−CoAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(d)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピル−CoAデヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピル−CoAデヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンタノイル−CoAレダクターゼ、アジピル−CoAトランスフェラーゼ、ヒドロラーゼまたはトランスフェラーゼ、アジピン酸レダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(e)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピン酸デヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピン酸デヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンテン酸レダクターゼ、アジピン酸レダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAトランスフェラーゼまたはシンセターゼ、6−ACA−CoAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(f)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピン酸デヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピン酸デヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンテン酸レダクターゼ、アジピン酸レダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(g)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピン酸デヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピン酸デヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンテン酸レダクターゼ、アジピル−CoAトランスフェラーゼ、ヒドロラーゼまたはトランスフェラーゼ、アジピル−CoAレダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAトランスフェラーゼまたはシンセターゼ、6−ACA−CoAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(h)3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピン酸デヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピン酸デヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンテン酸レダクターゼ、アジピル−CoAトランスフェラーゼ、ヒドロラーゼまたはトランスフェラーゼ、アジピル−CoAレダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ、6−ACAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼまたはデヒドロゲナーゼ;
(i)4−ヒドロキシ−2−オキソヘプタン−1,7−ジオエート(HODHアルドラーゼ);2−オキソヘプタ−4−エン−1,7−ジオエート(OHED)ヒドラターゼ;OHEDギ酸リアーゼおよびピルビン酸ギ酸リアーゼ活性化酵素もしくはOHEDデヒドロゲナーゼ;2,3−デヒドロアジピル−CoAレダクターゼ;アジピル−CoAデヒドロゲナーゼ;またはアジピン酸セミアルデヒドアミノトランスフェラーゼもしくはアジピン酸セミアルデヒドオキシドレダクターゼ(アミノ化);
(j)β−ケトチオラーゼもしくはアセチル−CoAカルボキシラーゼおよびアセトアセチル−CoAシンターゼ、3−ヒドロキシアシルCoAデヒドロゲナーゼもしくは3−オキソアシル−CoAレダクターゼ、エノイル−CoAヒドラターゼ、およびヘキサノイル−CoAを生成するためのトランス−2−エノイル−CoAレダクターゼ、1つ以上のチオエステラーゼ、アルデヒドデヒドロゲナーゼ、またはブタナールデヒドロゲナーゼ、上記宿主が生成するヘキサナールもしくはヘキサノエート類;1つ以上のモノオキシゲナーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、アルデヒドデヒドロゲナーゼ、6−ヒドロキシヘキサノエートデヒドロゲナーゼ、5−ヒドロキシペンタノエートデヒドロゲナーゼ、4−ヒドロキシブチレートデヒドロゲナーゼ、6−オキソヘキサノエートデヒドロゲナーゼ、もしくは7−オキソヘプタノエートデヒドロゲナーゼ、上記宿主が生成するアジピン酸またはアジピン酸セミアルデヒド;1つ以上のモノオキシゲナーゼ、トランスアミナーゼ、6−ヒドロキシヘキサノエートデヒドロゲナーゼ、5−ヒドロキシペンタノエートデヒドロゲナーゼ、4−ヒドロキシブチレートデヒドロゲナーゼ、およびアルコールデヒドロゲナーゼ、上記宿主が生成する6−アミノヘキサノエート;1つ以上のカルボキシレートレダクターゼ、ω−トランスアミナーゼ、デアセチラーゼ、N−アセチルトランスフェラーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、上記宿主が生成するヘキサメチレンジアミン;
(k)6−ヒドロキシ−3−オキソ−ヘキサノイル−CoAを形成するためのアセチルトランスフェラーゼもしくはチオラーゼ、6−ヒドロキシ−3−オキソ−ヘキサノイル−CoAデヒドロゲナーゼ、3,4−ジヒドロキシヘキサノイル−CoAデヒドロゲナーゼ、6−ヒドロキシ−2−ヘキサノイル−CoAレダクターゼ、6−ACAを形成するための6−ヒドロキシヘキサノイル−CoAヒドロラーゼ、HMDAを形成するための6−ヒドロキシカプロン酸デヒドロゲナーゼおよびトランスアミナーゼ;
(l)ホモクエン酸シンターゼ、2−ケトピメリン酸塩を形成するためのホモアコニターゼおよびホモイソクエン酸デヒドロゲナーゼ、α−ケトピメリン酸塩のアジピン酸セミアルデヒドへの転換を触媒する2−ケトデカルボキシラーゼ、α−ケトピメリン酸塩の2−アミノピメリン酸塩への転換を触媒する2−アミノピメリン酸トランスフェラーゼ、2−アミノピメリン酸塩を脱炭酸して6−ACAを形成するための2−アミノピメリン酸デカルボキシラーゼ、6−ACAの6−アミノヘキサナールへの転換を触媒するアルデヒドデヒドロゲナーゼおよび6−アミノヘキサナールの6−ヘキサメチレンジアミンへの転換を触媒するアミノトランスフェラーゼ;ならびに
(m)グルタミル−CoAトランスフェラーゼおよび/またはリガーゼ、β−ケトチオラーゼ、3−オキソ−6−アミノピメロイル−CoAオキシドレダクターゼ、3−ヒドロキシ−6−アミノピメロイル−CoAレダクターゼ、6−アミノ−7−カルボキシヘプタ−2−エノイル−CoAレダクターゼ、6−アミノピメロイル−CoAレダクターゼ(アルデヒド形成)、2−アミノ−7−オキソヘプタノエートアミノトランスフェラーゼおよび/またはアミノ化オキシドレダクターゼ、ホモリジンデカルボキシラーゼ、6−アミノピメロイル−CoAヒドロラーゼ、トランスフェラーゼおよび/またはリガーゼ、2−アミノピメリン酸デカルボキシラーゼ。 - 上記遺伝子組み換え微生物が、少なくとも1つのHMD炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類化合物を生成するのに十分な量において発現する、3−オキソアジピル−CoAチオラーゼ、3−オキソアジピル−CoAデヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピル−CoAデヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンタノイル−CoAレダクターゼ、アジピル−CoAレダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼもしくはデヒドロゲナーゼ、3−オキソアジピル−CoA:アシルCoAトランスフェラーゼ、3−オキソアジピン酸デヒドロゲナーゼ、3−ヒドロキシアジピン酸デヒドラターゼ、5−カルボキシ−2−ペンタノエートレダクターゼ、アジピル−CoAトランスフェラーゼ、リガーゼ、ヒドロラーゼ、6−ACAトランスフェラーゼもしくはシンセターゼ、6−ACA−CoAレダクターゼ、HMDAトランスアミナーゼもしくはデヒドロゲナーゼ、アジピン酸レダクターゼ、6−ACAトランスアミナーゼもしくはデヒドロゲナーゼ、または6−ACAレダクターゼからなる群より選択されるHMD合成経路の少なくとも1つの酵素をコードする少なくとも1つの外因性の核酸と共にHMD合成経路を備える、請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、Escherichia、Klebsiella;Anaerobiospirillum属を含むAeromonadales目Succinivibrionaceae科;Actinobacillus属およびMannheimia属を含むPasteurellales目Pasteurellaceae科;Rhizobium属を含むRhizobiales目Bradyrhizobiaceae科;Bacillus属を含むBacillales目Bacillaceae科;Corynebacterium属およびStreptomyces属をそれぞれ含むActinomycetales目Corynebacteriaceae科およびStreptomycetaceae科;Gluconobacter属を含むRhodospirillales目Acetobacteraceae科;Zymomonas属を含むSphingomonadales目Sphingomonadaceae科;Lactobacillus属およびLactococcus属をそれぞれ含むLactobacillales目Lactobacillaceae科およびStreptococcaceae科;Clostridium属を含むClostridiales目Clostridiaceae科;Pseudomonas属、Alkaliphilus属、Methylobacterium属、Methyloversatilis属、Methylococcus属、Methylocystis属およびHyphomicrobium属を含むPseudomonadales目Pseudomonadaceae科;Saccharomyces属、Kluyveromyces属およびPichia属を含むSaccharomycetales目Saccaromycetaceae科;Yarrowia属を含むSaccharomycetales目Dipodascaceae科;Schizosaccharomyces属を含むSchizosaccharomycetales目Schizosaccaromycetaceae科;Aspergillus属を含むEurotiales目Trichocomaceae科;ならびにRhizopus属を含むMucorales目Mucoraceae科である、請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、Escherichia coli、Klebsiella oxytoca、Anaerobiospirillum succiniciproducens、Actinobacillus succinogenes、Mannheimia succiniciproducens、Rhizobium etli、Bacillus subtilis、Corynebacterium glutamicum、Gluconobacter oxydans、Zymomonas mobilis、Lactococcus lactis、Lactobacillus plantarum、Streptomyces coelicolor、Clostridium acetobutylicum、Pseudomonas fluorescens、およびPseudomonas putida、Bacillis pseudofirmus、Bacillus halodurans、Bacillus alcalophilus、Clostridium paradoxum、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pombe、Hansenula polymorpha、Pichia methanolica、Candida boidinii、Kluyveromyces lactis、Kluyveromyces marxianus、Aspergillus terreus、Aspergillus niger、Pichia pastoris、Rhizopus arrhizus、Rhizobus oryzae、Yarrowia lipolytica、Issatchenkia orientalis、Bacillis pseudofirmus、Bacillus halodurans、Bacillus alcalophilus、Clostridium paradoxum、Arthrospira platensis、Bacillus clausii、Oceanobacillus iheyensis、Alkaliphilus metalliredigens、Alkaliphilus oremlandii、Bacillus selentireducens、Desulfovibrio alkaliphiles、Dethiobacter alkaliphiles、Thioalkalivibrio sp.、Natranaerobius thermophilus、Alkalilimnicola ehrlichii、ならびにDesulfonatronospira thiodismutansを含む非限定的な宿主バクテリア種を含む、請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、改善されたアルカリ耐性について改変されている、請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、少なくとも1つのジアミン炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類化合物を生成するのに十分な量において発現する、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11個のジアミン合成経路の酵素をコードする少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10または11個の外因性の核酸と共にジアミン合成経路を備える、請求項1〜148の何れか一項に記載の方法。
- 上記ジアミンが、ヘキサメチレンジアミン、カダベリン、プトレッシン、ヘプタメチレンジアミンまたはエチレンジアミンである、請求項149に記載の方法。
- 上記培地が、スクロース、グルコース、ガラクトース、フルクトース、マンノース、イソマルトース、キシロース、パンノース、マルトース、アラビノース、セロビオース、およびそれらの3−、4−もしくは5−オリゴマーからなる群より選択される、上記遺伝子組み換え微生物のための糖炭素源を含む;または
上記培地が、メタノール、エタノール、グリセロール、ギ酸塩、および脂肪酸からなる群より選択される、上記遺伝子組み換え微生物のためのアルコール炭素源を含む;または
上記培地が、合成ガス、廃ガス、メタン、CO、CO2、およびCOもしくはCO2とH2との任意の混合物からなる群より選択される、上記遺伝子組み換え微生物のためのガス由来炭素源を含む、請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。 - 上記遺伝子組み換え微生物が、DA合成経路、好ましくはHMD合成経路の少なくとも1つの酵素、ならびに、少なくとも1つのDA炭酸塩類および/またはDAカルバミン酸塩類化合物、好ましくはHMD炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類化合物を生成するのに十分な量において発現するカルボニックアンヒドラーゼ酵素または変異体、をコードする少なくとも2つの外因性の核酸と共にDA合成経路、好ましくはHMD合成経路を備える、請求項1〜3の何れか一項、または請求項1〜151の何れか一項に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、DA合成経路、好ましくはHMD合成経路の少なくとも1つの酵素、ならびに、少なくとも1つ以上のDA遊離塩基、好ましくはHMD遊離塩基、および二酸化炭素を生成するのに十分な量において発現するカルボニックアンヒドラーゼ酵素または変異体、をコードする少なくとも2つの外因性の核酸と共にDA合成経路、好ましくはHMD合成経路を備える、請求項1〜3の何れか一項、または請求項1〜152の何れか一項に記載の方法。
- 上記DAを含み、任意でDA炭酸塩、DA重炭酸塩、DAビス重炭酸塩、DAカルバミン酸塩、DAビスカルバミン酸塩またはDA以外の窒素含有化合物のうちの1つ以上から選択される不純物を含み、当該窒素含有化合物が、アミノ酸、タンパク質、アンモニウム塩、尿素、および発酵微生物に由来し、任意で当該窒素含有化合物が約0.01〜約1000ppmである、請求項1〜3の何れか一項、または請求項1〜153の何れか一項に記載の方法。
- 請求項154のDAを含む、または、請求項154のDAを用いて作製された、ポリマー。
- HMD合成経路の少なくとも1つの酵素をコードする少なくとも1つの外因性の核酸、および、CO2利用能が増加する少なくとも1つの遺伝子改変と共にヘキサメチレンジアミン合成経路を備える遺伝子組み換え微生物であって、当該遺伝子改変は、当該遺伝子改変がない遺伝子組み換え微生物と比較してCO2化合物からのHMD炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の生成を増加させるためのものである、遺伝子組み換え微生物。
- DA合成経路、好ましくはHMD合成経路の少なくとも1つの酵素、ならびに、少なくとも1つのDA炭酸塩類および/またはDAカルバミン酸塩類化合物、好ましくはHMD炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類化合物を生成するのに十分な量において発現するカルボニックアンヒドラーゼ酵素または変異体、をコードする少なくとも2つの外因性の核酸と共にDA合成経路、好ましくはHMD合成経路を備える、請求項156に記載の遺伝子組み換え微生物。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、DA合成経路、好ましくはHMD合成経路の少なくとも1つの酵素、ならびに、少なくとも1つ以上のDA遊離塩基、好ましくはHMD遊離塩基、および二酸化炭素を生成するのに十分な量において発現するカルボニックアンヒドラーゼ酵素または変異体、をコードする少なくとも2つの外因性の核酸と共にDA合成経路、好ましくはHMD合成経路を備える、請求項156に記載の方法。
- a)遺伝子組み換え微生物を培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、HMD炭酸塩、HMD重炭酸塩、HMDビス重炭酸塩、HMDカルバミン酸塩またはHMDビスカルバミン酸塩のうちの1つ以上を当該培地中に形成する工程であって、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸が当該培地のpHを培養した培地として主に制御している工程;
b)上記HMD炭酸塩、HMD重炭酸塩、HMDビス重炭酸塩またはHMDカルバミン酸塩もしくはビスカルバミン酸塩を、HMD遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程;および
c)上記HMD遊離塩基を単離する工程:
を含む、ヘキサメチレンジアミン(HMD)の製造方法。 - 全ての他の酸の合計に対する、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸のモル比が、1:1より大きい、請求項159に記載の方法。
- 上記二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸が、外部から添加された二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸を含む、請求項159に記載の方法。
- 上記全ての他の酸が、少なくとも1つの外部から添加された他の酸を含む、請求項159に記載の方法。
- 全ての上記外部から添加された他の酸の合計に対する、上記外部から添加された二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸のモル比が、1:1より大きい、請求項159に記載の方法。
- 発酵の終わりにおけるpHが、11未満である、請求項159に記載の方法。
- a)遺伝子組み換え微生物を培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、HMD炭酸塩、HMD重炭酸塩、HMDビス重炭酸塩、またはHMDカルバミン酸塩もしくはビスカルバミン酸塩のうちの1つ以上を形成する工程であって、溶存無機炭素(DIC)のパーセントが40%以上であり、当該DICが式:DIC/TDCA×100によって決定される工程;
b)上記HMD炭酸塩、HMD重炭酸塩、HMDビス重炭酸塩、またはHMDカルバミン酸塩もしくはビスカルバミン酸塩を、HMD遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程;および
c)上記HMD遊離塩基を単離する工程:
を含む、ヘキサメチレンジアミン(HMD)の製造方法。 - 発酵の開始におけるDICが、TDCAの10%以下である、請求項165に記載の方法。
- 発酵の終わりにおけるDICとHMDとの比が、0.25:1〜3:1、より好ましくは1:5〜2:1である、請求項165に記載の方法。
- 発酵の終わりにおけるpHが、11未満である、請求項165に記載の方法。
- a)遺伝子組み換え微生物を二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸のうちの1つ以上を含む培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、HMDを生成して、HMD炭酸塩、HMD重炭酸塩、HMDビス重炭酸塩、HMDカルバミン酸塩またはHMDビスカルバミン酸塩のうちの1つ以上を当該培地中に形成する工程であって、当該培地中の炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の少なくとも40%が、HMD炭酸塩、HMD重炭酸塩、HMDビス重炭酸塩、またはHMDカルバミン酸塩のうちの1つ以上を含む工程;
b)上記HMD炭酸塩、HMD重炭酸塩、HMDビス重炭酸塩、またはHMDカルバミン酸塩を、HMD遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程;および
c)上記HMD遊離塩基を単離する工程:
を含む、ヘキサメチレンジアミン(HMD)の製造方法。 - HMDカルバミン酸塩および/またはHMDビスカルバミン酸塩が存在する、請求項1〜169に記載の方法。
- HMD遊離塩基が存在する、請求項1〜170に記載の方法。
- a)遺伝子組み換え微生物を培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を形成する工程であって、当該培地中の炭酸塩類またはカルバミン酸塩類の少なくとも40%が、HMD炭酸塩、HMD重炭酸塩、HMDビス重炭酸塩、またはHMDカルバミン酸塩のうちの1つ以上を含む工程;
b)細胞を含む固体フラクションからHMDに富んだ液体フラクションを分離する工程;
c)上記液体フラクションから水を除去し、上記液体フラクションから塩を除去して、HMDを精製する工程;
d)炭酸塩類またはカルバミン酸塩類を、式C6H16N2の脱プロトンHMD遊離塩基に転換する工程;および
e)上記HMD遊離塩基を単離する工程:
を含む、ヘキサメチレンジアミン(HMD)の製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)上記培養した培地を殺菌し、任意で、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の少なくとも一部をDA遊離塩基に転換して二酸化炭素を放出する工程;
c)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を、DA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換する工程;
e)上記DA遊離塩基混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
f)抽出器中で上記DA遊離塩基混合物を有機溶媒で抽出して、抽出されたDA遊離塩基溶液および水性ラフィネートを形成し、任意で、当該水性ラフィネートを当該抽出器へ再循環する工程;
g)上記DA遊離塩基溶液を蒸留して、精製されたDA遊離塩基および有機溶媒を形成し、任意で、当該溶媒を上記抽出器へ再循環し、任意で、望ましくない不純物を除去する工程;および
h)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
c)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を、DA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換する工程;
d)上記DA遊離塩基混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)抽出器中で上記DA遊離塩基混合物を有機溶媒で抽出して、抽出されたDA遊離塩基溶液および水性ラフィネートを形成し、任意で、当該水性ラフィネートを当該抽出器へ再循環する工程;
f)上記DA遊離塩基溶液を蒸留して、精製されたDA遊離塩基および有機溶媒を形成し、任意で、当該溶媒を上記抽出器へ再循環し、任意で、望ましくない不純物を除去する工程;および
g)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)任意で、上記培養した培地を殺菌する工程;
c)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を、DA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)上記DA遊離塩基混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
f)抽出器中で上記DA遊離塩基混合物を有機溶媒で抽出して、抽出されたDA遊離塩基溶液および水性ラフィネートを形成し、任意で、当該水性ラフィネートを当該抽出器へ再循環する工程;
g)上記DA遊離塩基溶液を蒸留して、精製されたDA遊離塩基および有機溶媒を形成し、任意で、当該溶媒を上記抽出器へ再循環し、任意で、望ましくない不純物を除去する工程;および
h)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)上記培養した培地を殺菌し、任意で、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の少なくとも一部をDA遊離塩基に転換して二酸化炭素を放出する工程;
c)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を、DA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換する工程;
f)上記DA遊離塩基混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
g)抽出器中で上記DA遊離塩基混合物を有機溶媒で抽出して、抽出されたDA遊離塩基溶液および水性ラフィネートを形成し、任意で、当該水性ラフィネートを当該抽出器へ再循環する工程;
h)上記DA遊離塩基溶液を蒸留して、精製されたDA遊離塩基および有機溶媒を形成し、任意で、当該溶媒を上記抽出器へ再循環し、任意で、望ましくない不純物を除去する工程;および
i)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
c)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を、DA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換する工程;
e)上記DA遊離塩基混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
f)抽出器中で上記DA遊離塩基混合物を有機溶媒で抽出して、抽出されたDA遊離塩基溶液および水性ラフィネートを形成し、任意で、当該水性ラフィネートを当該抽出器へ再循環する工程;
g)上記DA遊離塩基溶液を蒸留して、精製されたDA遊離塩基および有機溶媒を形成し、任意で、当該溶媒を上記抽出器へ再循環し、任意で、望ましくない不純物を除去する工程;および
h)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)任意で、上記培養した培地を殺菌する工程;
c)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を、DA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
f)上記DA遊離塩基混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
g)抽出器中で上記DA遊離塩基混合物を有機溶媒で抽出して、抽出されたDA遊離塩基溶液および水性ラフィネートを形成し、任意で、当該水性ラフィネートを当該抽出器へ再循環する工程;
h)上記DA遊離塩基溶液を蒸留して、精製されたDA遊離塩基および有機溶媒を形成し、任意で、当該溶媒を上記抽出器へ再循環し、任意で、望ましくない不純物を除去する工程;および
i)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)上記培養した培地を殺菌し、任意で、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の少なくとも一部をDA遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程;
c)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)任意で、上記培養した培地から上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を直接転換して、DA遊離塩基混合物を形成し、任意で、上記発酵槽へ再循環してもよい水および/または二酸化炭素を放出する工程;
f)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
c)任意で、上記培養した培地から上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を直接転換して、DA遊離塩基混合物を形成し、任意で、上記発酵槽へ再循環してもよい水および/または二酸化炭素を放出する工程;
d)任意で、上記培養した培地から上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を直接転換して、DA遊離塩基混合物を形成し、任意で、上記発酵槽へ再循環してもよい水および/または二酸化炭素を放出する工程;および
e)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)任意で、上記培養した培地を殺菌する工程;
c)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
d)任意で、上記培養した培地から上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を直接転換して、DA遊離塩基混合物を形成し、任意で、上記発酵槽へ再循環してもよい水および/または二酸化炭素を放出する工程;
e)任意で、上記培養した培地から上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を直接転換して、DA遊離塩基混合物を形成し、任意で、上記発酵槽へ再循環してもよい水および/または二酸化炭素を放出する工程;および
f)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)上記培養した培地を殺菌し、任意で、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の少なくとも一部をDA遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程;
c)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
d)任意で、上記培養した培地から上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を直接転換して、DA遊離塩基混合物を形成し、任意で、上記発酵槽へ再循環してもよい水および/または二酸化炭素を放出する工程;および
e)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
c)任意で、上記培養した培地から上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を直接転換して、DA遊離塩基混合物を形成し、任意で、上記発酵槽へ再循環してもよい水および/または二酸化炭素を放出する工程;および
d)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)任意で、上記培養した培地を殺菌する工程;
c)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
d)任意で、上記培養した培地から上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を直接転換して、DA遊離塩基混合物を形成し、任意で、上記発酵槽へ再循環してもよい水および/または二酸化炭素を放出する工程;および
e)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)上記培養した培地を殺菌し、任意で、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の少なくとも一部をDA遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程;
c)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物をDA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)任意で、上記培養した培地から上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を直接転換して、DA遊離塩基混合物を形成し、任意で、上記発酵槽へ再循環してもよい水および/または二酸化炭素を放出する工程;および
f)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)上記培養した培地を殺菌し、任意で、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の少なくとも一部をDA遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程;
c)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物をDA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
f)任意で、上記培養した培地から上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を直接転換して、DA遊離塩基混合物を形成し、任意で、上記発酵槽へ再循環してもよい水および/または二酸化炭素を放出する工程;および
g)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
c)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物をDA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)任意で、上記培養した培地から上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を直接転換して、DA遊離塩基混合物を形成し、任意で、上記発酵槽へ再循環してもよい水および/または二酸化炭素を放出する工程;および
f)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
c)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物をDA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
d)任意で、上記培養した培地から上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を直接転換して、DA遊離塩基混合物を形成し、任意で、上記発酵槽へ再循環してもよい水および/または二酸化炭素を放出する工程;および
e)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)任意で、上記培養した培地を殺菌する工程;
c)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物をDA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)任意で、上記培養した培地から上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を直接転換して、DA遊離塩基混合物を形成し、任意で、上記発酵槽へ再循環してもよい水および/または二酸化炭素を放出する工程;および
f)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)任意で、上記培養した培地を殺菌する工程;
c)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物をDA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
f)任意で、上記培養した培地から上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を直接転換して、DA遊離塩基混合物を形成し、任意で、上記発酵槽へ再循環してもよい水および/または二酸化炭素を放出する工程;および
g)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)上記培養した培地を殺菌し、任意で、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の少なくとも一部をDA遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程;
c)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物をDA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)水性塩基を添加して、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を上記DA遊離塩基混合物から除去する工程;
f)抽出器中で上記DA遊離塩基混合物を有機溶媒で抽出して、抽出されたDA遊離塩基溶液および水性ラフィネートを形成し、任意で、当該水性ラフィネートを当該抽出器へ再循環する工程;
g)上記DA遊離塩基溶液を蒸留して、精製されたDA遊離塩基および有機溶媒を形成し、任意で、当該溶媒を上記抽出器へ再循環し、任意で、望ましくない不純物を除去する工程;および
h)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)上記培養した培地を殺菌し、任意で、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の少なくとも一部をDA遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程;
c)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物をDA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
f)水性塩基を添加して、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を上記DA遊離塩基混合物から除去する工程;
g)抽出器中で上記DA遊離塩基混合物を有機溶媒で抽出して、抽出されたDA遊離塩基溶液および水性ラフィネートを形成し、任意で、当該水性ラフィネートを当該抽出器へ再循環する工程;
h)上記DA遊離塩基溶液を蒸留して、精製されたDA遊離塩基および有機溶媒を形成し、任意で、当該溶媒を上記抽出器へ再循環し、任意で、望ましくない不純物を除去する工程;および
i)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
c)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物をDA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
d)水性塩基を添加して、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を上記DA遊離塩基混合物から除去する工程;
e)抽出器中で上記DA遊離塩基混合物を有機溶媒で抽出して、抽出されたDA遊離塩基溶液および水性ラフィネートを形成し、任意で、当該水性ラフィネートを当該抽出器へ再循環する工程;
f)上記DA遊離塩基溶液を蒸留して、精製されたDA遊離塩基および有機溶媒を形成し、任意で、当該溶媒を上記抽出器へ再循環し、任意で、望ましくない不純物を除去する工程;および
g)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
c)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物をDA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)水性塩基を添加して、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を上記DA遊離塩基混合物から除去する工程;
f)抽出器中で上記DA遊離塩基混合物を有機溶媒で抽出して、抽出されたDA遊離塩基溶液および水性ラフィネートを形成し、任意で、当該水性ラフィネートを当該抽出器へ再循環する工程;
g)上記DA遊離塩基溶液を蒸留して、精製されたDA遊離塩基および有機溶媒を形成し、任意で、当該溶媒を上記抽出器へ再循環し、任意で、望ましくない不純物を除去する工程;および
h)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)任意で、上記培養した培地を殺菌する工程;
c)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物をDA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)水性塩基を添加して、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を上記DA遊離塩基混合物から除去する工程;
f)抽出器中で上記DA遊離塩基混合物を有機溶媒で抽出して、抽出されたDA遊離塩基溶液および水性ラフィネートを形成し、任意で、当該水性ラフィネートを当該抽出器へ再循環する工程;
g)上記DA遊離塩基溶液を蒸留して、精製されたDA遊離塩基および有機溶媒を形成し、任意で、当該溶媒を上記抽出器へ再循環し、任意で、望ましくない不純物を除去する工程;および
h)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)任意で、上記培養した培地を殺菌する工程;
c)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物をDA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
f)水性塩基を添加して、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を上記DA遊離塩基混合物から除去する工程;
g)抽出器中で上記DA遊離塩基混合物を有機溶媒で抽出して、抽出されたDA遊離塩基溶液および水性ラフィネートを形成し、任意で、当該水性ラフィネートを当該抽出器へ再循環する工程;
h)上記DA遊離塩基溶液を蒸留して、精製されたDA遊離塩基および有機溶媒を形成し、任意で、当該溶媒を上記抽出器へ再循環し、任意で、望ましくない不純物を除去する工程;および
i)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)上記培養した培地を殺菌し、任意で、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の少なくとも一部をDA遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程;
c)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物をDA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)上記DA遊離塩基混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
g)水性塩基を添加して、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を上記DA遊離塩基混合物から除去する工程;
h)抽出器中で上記DA遊離塩基混合物を有機溶媒で抽出して、抽出されたDA遊離塩基溶液および水性ラフィネートを形成し、任意で、当該水性ラフィネートを当該抽出器へ再循環する工程;
i)上記DA遊離塩基溶液を蒸留して、精製されたDA遊離塩基および有機溶媒を形成し、任意で、当該溶媒を上記抽出器へ再循環し、任意で、望ましくない不純物を除去する工程;および
j)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)上記培養した培地を殺菌し、任意で、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の少なくとも一部をDA遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程;
c)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物をDA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
f)上記DA遊離塩基混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
g)水性塩基を添加して、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を上記DA遊離塩基混合物から除去する工程;
h)抽出器中で上記DA遊離塩基混合物を有機溶媒で抽出して、抽出されたDA遊離塩基溶液および水性ラフィネートを形成し、任意で、当該水性ラフィネートを当該抽出器へ再循環する工程;
i)上記DA遊離塩基溶液を蒸留して、精製されたDA遊離塩基および有機溶媒を形成し、任意で、当該溶媒を上記抽出器へ再循環し、任意で、望ましくない不純物を除去する工程;および
j)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
c)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物をDA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
d)上記DA遊離塩基混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)水性塩基を添加して、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を上記DA遊離塩基混合物から除去する工程;
f)抽出器中で上記DA遊離塩基混合物を有機溶媒で抽出して、抽出されたDA遊離塩基溶液および水性ラフィネートを形成し、任意で、当該水性ラフィネートを当該抽出器へ再循環する工程;
g)上記DA遊離塩基溶液を蒸留して、精製されたDA遊離塩基および有機溶媒を形成し、任意で、当該溶媒を上記抽出器へ再循環し、任意で、望ましくない不純物を除去する工程;および
h)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
c)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物をDA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)上記DA遊離塩基混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
f)水性塩基を添加して、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を上記DA遊離塩基混合物から除去する工程;
g)抽出器中で上記DA遊離塩基混合物を有機溶媒で抽出して、抽出されたDA遊離塩基溶液および水性ラフィネートを形成し、任意で、当該水性ラフィネートを当該抽出器へ再循環する工程;
h)上記DA遊離塩基溶液を蒸留して、精製されたDA遊離塩基および有機溶媒を形成し、任意で、当該溶媒を上記抽出器へ再循環し、任意で、望ましくない不純物を除去する工程;および
i)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)任意で、上記培養した培地を殺菌する工程;
c)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物をDA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)上記DA遊離塩基混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
f)水性塩基を添加して、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を上記DA遊離塩基混合物から除去する工程;
g)抽出器中で上記DA遊離塩基混合物を有機溶媒で抽出して、抽出されたDA遊離塩基溶液および水性ラフィネートを形成し、任意で、当該水性ラフィネートを当該抽出器へ再循環する工程;
h)上記DA遊離塩基溶液を蒸留して、精製されたDA遊離塩基および有機溶媒を形成し、任意で、当該溶媒を上記抽出器へ再循環し、任意で、望ましくない不純物を除去する工程;および
i)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - a)遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類のうちの1つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程;
b)任意で、上記培養した培地を殺菌する工程;
c)上記培養した培地から固体を除去して、炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程;
d)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
e)上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類の混合物をDA遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
f)上記DA遊離塩基混合物から水を除去し、任意で、水および/または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程;
g)水性塩基を添加して、上記炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類を上記DA遊離塩基混合物から除去する工程;
h)抽出器中で上記DA遊離塩基混合物を有機溶媒で抽出して、抽出されたDA遊離塩基溶液および水性ラフィネートを形成し、任意で、当該水性ラフィネートを当該抽出器へ再循環する工程;
i)上記DA遊離塩基溶液を蒸留して、精製されたDA遊離塩基および有機溶媒を形成し、任意で、当該溶媒を上記抽出器へ再循環し、任意で、望ましくない不純物を除去する工程;および
j)精製されたDA遊離塩基を単離する工程:
を含む、DAの製造方法。 - カルボニックアンヒドラーゼが、(a)二酸化炭素を重炭酸塩および/もしくは炭酸塩イオンに転換することによってDA炭酸塩類もしくはDAカルバミン酸塩類の形成を促進するか、(b)重炭酸塩および/もしくは炭酸塩イオンを二酸化炭素に転換することによってDA炭酸塩類もしくはDAカルバミン酸塩類の溶液からの二酸化炭素の放出を促進するか、または(c)(a)および(b)の両方を行う、のに十分な量において存在する、請求項159〜202の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、DA炭酸塩類の形成を促進する、請求項203に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、DA炭酸塩類の溶液からの二酸化炭素の放出を促進する、請求項203〜204の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、DA炭酸塩類の形成を促進し、且つ、DA炭酸塩類の溶液からの二酸化炭素の放出を促進する、請求項203〜205の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、発酵ブロス中に存在して、DA炭酸塩類またはDAカルバミン酸塩類の形成を促進する、請求項203〜206の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、二酸化炭素を放出して遊離DA塩基を生成する工程において存在して、DA炭酸塩類またはDAカルバミン酸塩類の溶液からの二酸化炭素の放出を促進し、任意で上記CAが、上記水を除去するまたは蒸発させる工程において存在し、任意で上記CAが上記CO2ストリッピング工程において存在し、任意で上記CAが、上記水を除去するまたは蒸発させる工程および上記CO2ストリッピング工程の両方において存在する、請求項203〜207の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、発酵ブロス中に存在して、DA炭酸塩類またはDAカルバミン酸塩類の形成を促進し、且つ、二酸化炭素を放出して遊離DA塩基を生成する工程において存在して、DA炭酸塩類またはDAカルバミン酸塩類の溶液からの二酸化炭素の放出を促進する、請求項203〜208の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、外因的に添加される、請求項203〜209の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、上記発酵ブロス中の遺伝子組み換え微生物によって提供され、任意で当該ブロスに排出され、任意で当該微生物のペリプラズム中に存在する、請求項203〜210の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、上記DAを生成する上記遺伝子組み換え微生物によって提供され、任意で上記ブロスに排出され、任意で当該微生物のペリプラズム中に存在する、請求項203〜211の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが天然の遺伝子または酵素であり、任意で上記カルボニックアンヒドラーゼが操作された遺伝子または酵素であり、任意で上記ブロスへの分泌について操作されており、任意で上記微生物のペリプラズム空間への分泌について操作されている、請求項203〜212の何れか一項に記載の方法。
- 上記カルボニックアンヒドラーゼが、操作された酵素であり、任意で安定性、熱安定性、アルカリpH安定性または増加した活性を促進するよう操作されている、請求項203〜213の何れか一項に記載の方法。
- 上記DAが、HMD、カダベリン、プトレッシン、エチレンジアミン、ヘプタメチレンジアミン、またはC2〜C7メチレンセグメント、C2〜C12メチレンセグメントもしくはC4〜C7メチレンセグメントを含むジアミンであり、任意で上記DAがHMDである、請求項203〜214の何れか一項に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、DA合成経路、好ましくはHMD合成経路の少なくとも1つの酵素、ならびに、少なくとも1つのDA炭酸塩類および/またはDAカルバミン酸塩類化合物、好ましくはHMD炭酸塩類および/またはカルバミン酸塩類化合物を生成するのに十分な量において発現するカルボニックアンヒドラーゼ酵素または変異体、をコードする少なくとも2つの外因性の核酸と共にDA合成経路、好ましくはHMD合成経路を備える、請求項1〜3の何れか一項、または請求項159〜215の何れか一項に記載の方法。
- 上記遺伝子組み換え微生物が、DA合成経路、好ましくはHMD合成経路の少なくとも1つの酵素、ならびに、少なくとも1つ以上のDA遊離塩基、好ましくはHMD遊離塩基、および二酸化炭素を生成するのに十分な量において発現するカルボニックアンヒドラーゼ酵素または変異体、をコードする少なくとも2つの外因性の核酸と共にDA合成経路、好ましくはHMD合成経路を備える、請求項1〜3の何れか一項、または請求項159〜215の何れか一項に記載の方法。
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