JP2017523424A - ハイブリッドナノポアセンサ - Google Patents
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Abstract
Description
(1)構造的安定性:タンパク質ナノポアは、ハイブリッド膜に挿入され、固体ナノポアは、膜の大部分を支持し、ナノメートルサイズの孔を提供する。
(2)スケーラブル作製:タンパク質ナノポア含有脂質ナノディスクとソリッドステートナノポアとの相互作用の性質は、ソリッドステート孔へのナノポアのポアソン式ロードに頼る組立て方法よりも作製がはるかに安定するように自己制御的である。1つのタンパク質ナノポアの二重層への挿入は、脂質ナノディスクの再構築中に行われ得る。脂質ナノディスクのサイズ(例えば、いくつかの実施形態では10〜13nm)は、単一のタンパク質ナノポア(例えば、約5nm Mspポア)の組み込みに有利であるように選択され得る。さらに、ソリッドステートナノポアサイズ(例えば、いくつかの実施形態では、7〜10nm直径孔)は、ソリッドステートナノポア孔1つにつき1つだけのタンパク質ナノディスク複合体の組立てが可能であるように選択され得る。したがって、多くの実施形態では、複数回の挿入の組立て及びスクリーニング中の電気特性の能動的な監視が必要ない。
(3)良好な電気絶縁性:タンパク質ナノポアのソリッドステートナノポアへの直接の挿入は、通常、適切なイオン電流絶縁を達成するために、2つのナノポア間のサイズ及び形状を細かく合致させることを必要とする。本明細書にて開示する方法では、脂質ナノディスクは、単に、ソリッドステートナノポアの入口よりも大きくなるように選択され得る。電流漏洩は、最小値を超える広範囲のナノディスクサイズによって防止できるため、電流漏洩の回避は、タンパク質とソリッドステートナノポアとの間の細かい形状の合致を必要としなくなる。
(4)ソリッドステートナノポアの作製要件の緩和:5nm超のポア直径を有するソリッドステートナノポアは、タンパク質ナノポア含有脂質ナノディスクを用いて機能的ハイブリッドナノポアを形成できる。この特徴となるサイズは、最先端の半導体技術によって容易に得ることができるのに対し、最先端のポア作製は、タンパク質ナノポアの直接の挿入に必要とされる2〜3nm範囲の直径を有するソリッドステートナノポアの作製に必要とされるが、非常にばらつきがあり、費用がかかり、また操作者の技能に過度に依存する。
(5)大規模並列化を可能にする:ミクロンサイズの脂質膜をなくすことによって、ソリッドステートナノポアプラットフォームに、オンチップ増幅器及びデータ収集回路の組み込みを介して高度の並列化を達成させることができる。データ収集に有用な例示的なアンプ、回路、及びその他のハードウェア は、それぞれが参照により本明細書に組み込まれている米国特許第8,673,550号又は米国特許第8,999,716号、Rosensteinら、Nano Lett 13巻、2682〜2686ページ(2013年)又はUddinら、Nanotechnology 24巻、155501ページ(2013年)に記載される。
(6)少ない固有ノイズ:ソリッドステートナノポアは通常、安定した相互コンダクタンスのために適切な濡れを必要とする。本明細書に記載されるシステムの特定の実施形態において、ソリッドステートナノポアは機械的支持体としてのみ利用されるため、これら実施形態は、独立ソリッドステートナノポアよりも少ないノイズを示すことが期待される。
(1)ただ1つのナノポアが各電極に対応するように立体排除を活用する能力による、ナノポア配置の空間的制御レベルの上昇。
(2)複数のナノポアの検出装置への高度に並行した組立て。
(3)ナノポアを複数の検出装置にロードする標準的方法を妨げるポアソン統計の制限に勝るナノポアロード効率を実現する能力。
実験計画の2つの主要な要旨は、(a)タンパク質ナノディスク複合体を操作、合成、及び精製することと、(b)電気泳動力によってソリッドステートナノポアプラットフォームで複合体を組み立てることである。電気泳動駆動力は、高分子電解質又はDNA分子をディスク又はポア形成タンパク質に結合することで強化され得る。さらなる表面処理が、脂質ディスクと固体ナノポアとの界面における絶縁を改善するために必要とされる場合がある。
中間目標:(a)ブランク脂質ナノディスクの組立て及び特性決定、(b)分離及び精製のためのHisタグ付きMspAタンパク質の操作、(c)MspAタンパク質の脂質ナノディスクへの組み込み、生成物の精製及び形態の特性決定。
ブランク脂質ナノディスクは脂質及びMSP比の滴定により合成する。実験手法は図3に関連して上記で考察された。C末端にHisタグを有するバイオポア突然変異体を調製する。Hisタグ付き突然変異体をナノディスク前駆体混合物に添加し、その後、バイオポア組み込みが脂質ナノディスク自己集合プロセス中に行われるように界面活性剤を除去する。過剰な量のナノディスク成分を使用して、高率での組み込みを確実なものとする。ナノポア−ナノディスク複合体は、Hisタグアフィニティカラムにより空のナノディスクから分離される。プロセス全体を、サイズ排除クロマトグラフィ(SEC)及びドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS−PAGE)により監視及び分析し、さらに、液相原子間力顕微鏡及び透過型電子顕微鏡により特性決定する。
中間目標:(a)ナノポア及び電気泳動基礎構造の確立、(b)電気泳動によるブランク脂質ナノディスクのソリッドステートナノポアへの組立て、(c)必要である場合、>100GΩのシールを確実にするためのソリッドステートナノポアの化学的機能化、(d)ハイブリッドシステムにおけるMspA生物学的ポア活性の実証。
ソリッドステートナノポアの作製方法は、例えば、透過型電子顕微鏡(TEM)の電子ビーム(例えば、参照により本明細書に組み込まれているStormら、Nature Materials 2巻、537〜540ページ(2003年)参照)、集束イオンビーム(FIB)のGaイオンビーム(例えば、参照により本明細書に組み込まれているPattersonら、Nanotechnology 19巻、235304ページ(2008年)参照)、又はヘリウムイオンビーム(例えば、参照により本明細書に組み込まれているYangら、Nanotechnology 22巻、285310ページ(2011年)参照)を用いた通電したビームドリルを歴史的に利用してきた。商業的に供給される7〜10nmナノポアは最初の実証及びシステム開発のために使用される。必要とされる設備の初期プロトタイピングは図6A及び図6Bに関連して上述されるように実行される。パッチクランプ増幅器及び電気化学ワークステーション等の電気生理学ツール並びにクリーンルーム設備はさらなるナノファブリケーション作業のために使用される。
ソリッドステートナノポアを通じた電気泳動により駆動された生体分子の転位は、過去10年間で徹底的に研究されてきた。同じ戦略を適用して、ソリッドステートナノポアを比較的大きなサイズの脂質ナノディスクで封止し、組み込まれたタンパク質ナノポアをイオン電流のための唯一の通路として、またポアを通過させることにより検出される検体の唯一の通路として残すことができる。封止効率はブランク脂質ナノディスク(バイオポアなし)を用いて試験される。脂質ナノディスクは軽く荷電しているため、コレステロール−TEGで誘導体化されたDNA分子を利用して、脂質ナノディスク捕捉の電気泳動効果を改善できる。コレステロールタグ付きDNAは、疎水性コレステロールユニットを膜に挿入することによって脂質膜に結合する傾向がある。核酸テザーを有するブランクナノディスクの概略図を図8に示す。
ハイブリッドナノポアデバイスの一部としてのバイオポア活性の試験
本実施例は、実施例Iの特定の目的#1の発展について記述している。より詳細には、(a)直径10〜13nmのブランク脂質ナノディスクを組立て及び特性決定し、(b)MspAナノポアタンパク質を脂質ナノディスクに組み込み、複合体の形態を特性決定するためのプロトコルを確立した。
Claims (104)
- 検出装置であって、
(a)ソリッドステートナノポアのアレイを備えた固体支持体と、
(b)前記固体支持体の表面上の複数の脂質ナノディスクであって、
前記脂質ナノディスクのそれぞれが前記ソリッドステートナノポアのそれぞれにシールを形成し、
前記固体支持体の表面上の隙間領域によって互いに分離されている、前記複数の脂質ナノディスクと、
(c)前記脂質ナノディスクに挿入され、前記シールのそれぞれに孔を形成する複数のタンパク質ナノポアと
を備える検出装置。 - 前記ソリッドステートナノポアが、前記固体支持体によって分離されたリザーバ間に孔を形成する、請求項1に記載の検出装置。
- イオン電流が、前記タンパク質ナノポアのみを通って感知可能に流れ、前記シールを通って流れない、請求項1又は2に記載の検出装置。
- 前記シールが流体又は電流の流れを防止する、請求項1〜3のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記ソリッドステートナノポアがそれぞれ、少なくとも7nmの孔直径を有する、請求項1〜4のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記ソリッドステートナノポアがそれぞれ、最大5ミクロンの孔直径を有する、請求項1〜5のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記タンパク質ナノポアのそれぞれが、前記ナノディスクの少なくとも直径5nmである面積を占める、請求項1〜6のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記タンパク質ナノポアのそれぞれが、前記ナノディスクの最大直径1ミクロンである面積を占める、請求項1〜7のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記脂質ナノディスクがそれぞれ、少なくとも7nmの直径を有する、請求項1〜8のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記脂質ナノディスクがそれぞれ、最大1ミクロンの直径を有する、請求項1〜9のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記脂質ナノディスクがそれぞれ、前記固体支持体の表面上の50,000nm2以下の面積を占める、請求項1〜10のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記脂質ナノディスクが前記ソリッドステートナノポアの少なくとも50%にシールを形成する、請求項1〜11のいずれか一項に記載の検出装置。
- タンパク質ナノポアが前記脂質ナノディスクの少なくとも50%に挿入される、請求項1〜12のいずれか一項に記載の検出装置。
- タンパク質ナノポアが前記ソリッドステートナノポアの少なくとも50%に挿入される、請求項1〜13のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記隙間領域が少なくとも5nm前記脂質ナノディスクを分離する、請求項1〜14のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記隙間領域が脂質材料を有していない、請求項1〜15のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記アレイが少なくとも1000個のソリッドステートナノポアを備える、請求項1〜16のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記アレイが少なくとも1000個の脂質ナノディスクを備える、請求項1〜17のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記アレイが少なくとも1000個のタンパク質ナノポアを備える、請求項1〜18のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記タンパク質ナノポアによって形成された前記孔に配置された核酸検体をさらに含む、請求項1〜19のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記ソリッドステートナノポアのアレイと接触しているシスリザーバと、前記ソリッドステートナノポアのアレイと接触しているトランスリザーバとをさらに備える、請求項1〜20のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記シスリザーバ及び前記トランスリザーバが、前記タンパク質ナノポアによって形成された前記孔を通して電流を印加するように配置された電極を備える、請求項21に記載の検出装置。
- 前記タンパク質ナノポアで発生した電気信号を増幅するように構成された増幅器をさらに備える、請求項1〜22のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記アレイのソリッドステートナノポアにシールを形成する前記脂質ナノディスクのそれぞれが、1個以下の前記タンパク質ナノポアを備える、請求項1〜23のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記脂質ナノディスクが膜骨格タンパク質をさらに含む、請求項1〜24のいずれか一項に記載の検出装置。
- 検出装置の作製方法であって、
前記タンパク質ナノポア又は前記脂質ナノディスクに結合した核酸テザーをさらに備える、請求項1〜25のいずれか一項に記載の検出装置。 - (a)ソリッドステートナノポアのアレイを備える固体支持体を用意するステップと、
(b)前記脂質に挿入されたタンパク質ナノポアを備える複数の脂質ナノディスクを用意するステップと、
(c)前記複数の脂質ナノディスクを前記ソリッドステートナノポアのアレイと接触させ、前記アレイの個々のソリッドステートナノポアを前記脂質ナノディスクのうちの1つで被覆するステップと
を含む検出装置の作製方法。 - 前記ソリッドステートナノポアを被覆する前記脂質ナノディスクが、前記固体支持体の表面上の隙間領域によって互いに分離されている、請求項27に記載の方法。
- 前記アレイと接触する前記脂質ナノディスクが膜骨格タンパク質をさらに含む、請求項27又は28に記載の方法。
- ステップ(b)の前記用意するステップは、前記タンパク質ナノポアを前記脂質ナノディスクに挿入する条件下で、脂質と一緒に前記タンパク質ナノポアをインキュベートすることをさらに含む、請求項27〜29のいずれか一項に記載の方法。
- 前記脂質が、界面活性剤で可溶化され、前記条件が、前記界面活性剤を前記タンパク質ナノポアから除去することを含む、請求項30に記載の方法。
- ステップ(c)において脂質ナノディスクを前記ソリッドステートナノポアに電気で牽引することをさらに含む、請求項27〜31のいずれか一項に記載の方法。
- 前記脂質ナノディスクが荷電したテザーをさらに備える、請求項27〜32のいずれか一項に記載の方法。
- 前記荷電したテザーが、前記脂質又は前記タンパク質ナノポアに結合した核酸を含む、請求項33に記載の方法。
- ステップ(c)において前記荷電したテザーが、前記ソリッドステートナノポアに電気で牽引される、請求項33又は34に記載の方法。
- ステップ(c)において、前記脂質ナノディスクの量がソリッドステートナノポアの量を上回る、請求項27〜35のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(c)において、前記脂質ナノディスクの量が前記ソリッドステートナノポアの量を少なくとも2倍上回る、請求項36に記載の方法。
- 前記ソリッドステートナノポアのそれぞれが、1個以下の前記脂質ナノディスクによって被覆される、請求項27〜37のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ソリッドステートナノポアが、前記固体支持体によって分離されたリザーバ間に孔を形成する、請求項27〜38のいずれか一項に記載の方法。
- 前記被覆が、前記タンパク質ナノポアの通過を除いて流体の流れ又は電流の流れを防止する、請求項28〜39のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ソリッドステートナノポアがそれぞれ、少なくとも7nmの孔直径を有する、請求項27〜40のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ソリッドステートナノポアがそれぞれ、最大5ミクロンの孔直径を有する、請求項27〜41のいずれか一項に記載の方法。
- 前記タンパク質ナノポアのそれぞれが、前記ナノディスクの少なくとも直径5nmの面積を占める、請求項27〜42のいずれか一項に記載の方法。
- 前記タンパク質ナノポアのそれぞれが、前記ナノディスクの最大直径1ミクロンの面積を占める、請求項27〜43のいずれか一項に記載の方法。
- 前記脂質ナノディスクがそれぞれ、少なくとも7nmの直径を有する、請求項27〜44のいずれか一項に記載の方法。
- 前記脂質ナノディスクがそれぞれ、最大1ミクロンの直径を有する、請求項27〜45のいずれか一項に記載の方法。
- 前記脂質ナノディスクがそれぞれ、前記固体支持体の表面上の50,000nm2以下の面積を占める、請求項27〜46のいずれか一項に記載の方法。
- 前記脂質ナノディスクが前記ソリッドステートナノポアの少なくとも50%を被覆する、請求項27〜47のいずれか一項に記載の方法。
- タンパク質ナノポアが前記脂質ナノディスクの少なくとも50%に挿入される、請求項27〜48のいずれか一項に記載の方法。
- タンパク質ナノポアが前記ソリッドステートナノポアの少なくとも50%に挿入される、請求項27〜49のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(c)が、前記固体支持体の表面上に、少なくとも5nm前記脂質ナノディスクを分離する前記隙間領域を作り出す、請求項27〜50のいずれか一項に記載の方法。
- 前記脂質ナノディスクが前記隙間領域に結合しない、請求項27〜51のいずれか一項に記載の方法。
- 前記アレイが少なくとも1000個のソリッドステートナノポアを備える、請求項27〜52のいずれか一項に記載の方法。
- 前記脂質ナノディスクの少なくとも1000個が前記アレイのソリッドステートナノポアを被覆する、請求項27〜53のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ソリッドステートナノポアを被覆する前記脂質ナノディスクの少なくとも1000個がタンパク質ナノポアを備える、請求項27〜54のいずれか一項に記載の方法。
- 前記複数の脂質ナノディスクが、ステップ(c)の間前記ソリッドステートナノポアのアレイと大量に接触している、請求項27〜55のいずれか一項に記載の方法。
- 核酸をシークエンシングする方法であって、
(a)(i)ソリッドステートナノポアのアレイを備えた固体支持体と、
(ii)前記固体支持体の表面上にあり、各々が前記ソリッドステートナノポアそれぞれにシールを形成し、前記固体支持体の表面上の隙間領域によって互いに分離されている、複数の脂質ナノディスクと、
(iii)前記脂質ナノディスクに挿入され、前記シールのそれぞれに孔を形成する複数のタンパク質ナノポアと
を備える検出装置を用意するステップと、
(b)前記シールそれぞれの前記孔を通る、
(i)核酸、
(ii)前記核酸から除去された一連のヌクレオチド、又は
(iii)前記核酸に組み込まれたヌクレオチドから誘導された一連のプローブ
の通過を検出し、以て前記核酸の配列を決定するステップと、
を含む核酸をシークエンシングする方法。 - 検出装置であって、
(a)電極と、
(b)前記電極に係留されたナノポアと、
(c)前記ナノポアを取り囲む膜と
を備える検出装置。 - 前記ナノポアが、前記電極の一部を被覆する前記誘電パッドを介して前記電極に係留される、請求項58に記載の検出装置。
- 前記誘電パッドが1μm2未満の面積を有する、請求項59に記載の検出装置。
- 前記ナノポアが、前記誘電パッドの面積よりも大きい面積を占める、請求項59又は60に記載の検出装置。
- 二重層中の脂質が前記電極に係留される、請求項58〜61のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記ナノポアが、前記膜の少なくとも25nm2の面積を占める、請求項58〜62のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記ナノポアが、最大1μm2の面積を占める、請求項58〜63のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記ナノポアによって形成された前記孔に配置された核酸検体をさらに含む、請求項58〜64のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記ナノポアが、タンパク質ナノポアを含む、請求項58〜65のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記ナノポアで発生した電気信号を増幅するように構成された増幅器をさらに備える、請求項58〜66のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記ナノポアが、核酸テザーを介して前記電極に係留される、請求項58〜67のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記電極が金属を含む、請求項58〜68のいずれか一項に記載の検出装置。
- 検出装置であって、
(a)複数の電極と、
(b)前記複数の電極のうちの1つの電極にそれぞれが係留された複数のナノポアと、
(c)前記ナノポアそれぞれを取り囲む膜と
を備える検出装置。 - それぞれが前記複数の電極のうちの1つの電極の一部を被覆する複数の誘電パッドをさらに備える、請求項70に記載の検出装置。
- 前記誘電パッドのそれぞれが、1個以下の前記ナノポアに係留される、請求項71に記載の検出装置。
- 前記誘電パッドのそれぞれが、1μm2未満の面積を有する、請求項71又は72に記載の検出装置。
- 前記ナノポアが、前記誘電パッドの面積よりも大きい面積を占める、請求項71〜73のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記電極を互いに分離する隙間領域をさらに備える、請求項70〜74のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記隙間領域が少なくとも5nm前記電極を分離する、請求項75に記載の検出装置。
- 前記隙間領域が膜材料を有していない、請求項75又は76に記載の検出装置。
- 前記複数の電極が、少なくとも1000個の電極を備える、請求項70〜77のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記複数のナノポアが、少なくとも1000個のナノポアを備える、請求項70〜78のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記電極のそれぞれが、1個以下の前記ナノポアに係留される、請求項70〜79のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記ナノポアそれぞれを取り囲む前記膜が、前記ナノポアが係留される前記電極にシールを形成し、前記シールが、前記ナノポアが係留される電極から前記検出装置の他の電極への流体又は電流の流れを防止する、請求項70〜80のいずれか一項に記載の検出装置。
- 検出装置の作製方法であって、
(a)電極のアレイを備える固体支持体を用意するステップと、
(b)複数のナノポアを設けるステップと、
(c)前記複数のナノポアを前記電極のアレイと接触させて、第1のテザーを介して個々のナノポアを個々の電極に結合させ、以て前記複数の電極の電極に係留されたナノポアのアレイを作製するステップと、
(d)前記ナノポアのアレイを膜材料に接触させて、前記アレイの前記ナノポアそれぞれを取り囲む膜を形成するステップと
を含む検出装置の作製方法。 - ステップ(c)で前記電極のアレイと接触している前記ナノポアの量は前記アレイの電極の量を上回る、請求項82に記載の方法。
- 前記膜材料を第2のテザーを介して前記アレイの電極に結合させるステップをさらに含む、請求項82又は83に記載の方法。
- 前記膜材料を前記電極に結合させるステップが、前記電極のアレイをステップ(c)の前に前記第2のテザーに結合させることと、前記第2のテザーをステップ(c)の後に前記膜材料に結合させることとを含む、請求項84に記載の方法。
- 前記膜材料を前記電極に結合させるステップが、前記電極のアレイをステップ(c)の後に前記第2のテザーに結合させることと、前記第2のテザーをステップ(c)の後に前記膜材料に結合させることとを含む、請求項84に記載の方法。
- 前記電極が金属を含む、請求項82〜86のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(c)で前記電極のアレイと接触する前記ナノポアのそれぞれが、予め前記第1のテザーに結合されている、請求項82〜87のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(c)で前記ナノポアと接触する前記電極のそれぞれが、予め前記第1のテザーに結合されている、請求項82〜87のいずれか一項に記載の方法。
- 前記電極は隙間領域によって互いに分離されている、請求項82〜89のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ナノポアが、界面活性剤で可溶化され、ステップ(d)が、前記界面活性剤を前記タンパク質ナノポアから除去することを含む、請求項82〜90のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(c)において前記ナノポアを前記電極に電気で牽引することをさらに含む、請求項82〜91のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1のテザーが核酸を含む、請求項82〜92のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第2のテザーが核酸を含む、請求項82〜93のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ナノポアそれぞれを取り囲む前記膜が、前記ナノポアが係留される前記電極にシールを形成し、前記シールが、前記ナノポアが係留される電極から前記検出装置の他の電極への流体又は電流の流れを防止する、請求項82〜94のいずれか一項に記載の方法。
- 誘電パッドが前記電極のそれぞれに結合され、ステップ(c)の間、前記個々のナノポアが、前記個々の電極に結合された前記誘電パッドを介して前記個々の電極に結合され、以て前記複数の電極の誘電パッドを介して電極にそれぞれが係留されたナノポアのアレイを作製する、請求項82〜95のいずれか一項に記載の方法。
- 前記誘電パッドのそれぞれが、1μm2未満の面積を有する、請求項96に記載の方法。
- 前記ナノポアのそれぞれが、前記誘電パッドの面積よりも大きい面積を占める、請求項96又は97に記載の方法。
- 前記複数の電極が、少なくとも1000個の電極を備える、請求項82〜98のいずれか一項に記載の方法。
- 前記複数のナノポアが、少なくとも1000個のナノポアを備える、請求項82〜99のいずれか一項に記載の方法。
- 前記電極のそれぞれが、1個以下の前記ナノポアに係留される、請求項82〜100のいずれか一項に記載の方法。
- 前記個々のナノポアが前記電極の少なくとも50%に結合する、請求項82〜101のいずれか一項に記載の方法。
- 前記複数のナノポアが、ステップ(c)の間前記電極のアレイと大量に接触している、請求項82〜102のいずれか一項に記載の方法。
- 核酸をシークエンシングする方法であって、
(a)(i)複数の電極と、
(ii)前記複数の電極のうちの1つの電極にそれぞれが係留された複数のナノポアと、
(iii)前記ナノポアそれぞれを取り囲む膜と
を備える検出装置を用意するステップと、
(b)前記ナノポアそれぞれを通る、
(i)核酸、
(ii)前記核酸から除去された一連のヌクレオチド、又は
(iii)前記核酸に組み込まれたヌクレオチドから誘導された一連のプローブ
の通過を検出し、以て前記核酸の配列を決定するステップと
を含む核酸をシークエンシングする方法。
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