JP2017518494A - Ｔｈ１及びｔｈ２細胞集団を検出するためのアッセイ - Google Patents

Abstract

本開示は、免疫構成要素を有する疾患または障害に罹患した対象において、Ｔヘルパー細胞またはＣＴＬ亜集団を検出するための方法に関する。本方法はまた、治療方向または有害方向へのＴヘルパー細胞及びＣＴＬの偏在を検出することによって、疾患または障害の治療の有効性を判定するために有用である。

Description

本開示は、免疫構成要素を有する疾患または障害に罹患した対象において、Ｔヘルパー（Ｔｈ）細胞及び多機能細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）亜集団を検出するための方法に関する。本方法はまた、治療方向または有害方向へのＴヘルパー細胞またはＣＴＬ細胞の偏在を検出することによって、疾患または障害の治療の有効性を判定するために有用である。

Ｔ細胞サブセットとしては、ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋）及び細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋ＣＴＬ）が挙げられる。ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞は、一般にいくつかの異なる亜型に分類することができる。一般に分けられる集団としては、免疫関連疾患及び障害の媒介において異なる役割を果たすことが見出されているＴヘルパー１（Ｔｈ１）細胞及びＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞が挙げられる。Ｔｈ１細胞及びＴｈ２細胞は、それらのサイトカイン発現プロファイルに基づいて区別することができる。Ｔｈ１細胞は、典型的にインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−ｇ、ＩＦＮ−γ）、リンホトキシン（ＬＴ）を発現し、インターロイキン−２（ＩＬ−２）及び腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−ａ、ＴＮＦ−α）も分泌し得る（Ｚｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４４５−４８９，２０１０）。Ｔｈ２細胞は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１３の産生を特徴とし、ＩＦＮ−γまたはリンホトキシンは分泌しない。いくつかのＴｈ２細胞は、ＴＮＦ−α及びＩＬ−９を産生することが見出されている（Ｚｈｕ、上記）。Ｔｈ１７細胞もまた、近年Ｔヘルパー細胞の異なるサブセットであると判断されている。Ｔｈ１７細胞は、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、及びＩＬ−２２サイトカインを分泌し、ＩＬ−２１もまた産生する。Ｔｈ１細胞対Ｔｈ２細胞、及びＴｈ１７細胞の比率の調節不全は、自己免疫疾患、アレルギー反応、及び癌を含む特定の疾患状態と関連付けられている。サイトカイン産生によって識別され得る２つの追加のＣＤ４＋Ｔ細胞サブセットとしては、Ｔｒｅｇ（ＩＬ−１０）細胞及び濾胞性ヘルパーＴ細胞（Ｔｆｈ）（ＩＬ−２１）が挙げられる。

多機能ＣＤ８＋ＣＴＬは、多機能性が（例えば、ＩＦＮ−ｇ、ＴＮＦ−ａ、及び／またはＩＬ−２）を含む複数のサイトカインの産生として定義される、細胞内病原体及び腫瘍からの保護を提供する重要なエフェクター細胞である。癌対象において、これらの多機能Ｔ細胞の応答は抑圧されることが示されている。いくつかの新しい治療（例えば、抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ１）は、ＣＴＬの逆機能抑制が示されており、ＴＶＥＣ（タリモジーン・ラハーパレプベック）との組み合わせにより、有意義な抗腫瘍応答に寄与し得る活性化された機能性ＣＴＬの数の増加が更に期待できる。追加のＴ細胞サブセットとしては、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）及びガンマデルタＴ細胞（ｇｄＴ）が挙げられる。

インビボでのＴ細胞レベルの判定、及びこれらの細胞によって産生されるサイトカインのレベルの判定は、困難であり得る。実験室技術における近年の進歩は、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、及び（細胞内サイトカイン染色アッセイを含む）フローサイトメトリーアッセイを含む、Ｔヘルパー亜型及びサイトカインレベルを判定するためのいくつかの方法を提供している。方法論の進展にも関わらず、疾患または障害を有する患者において、特定のＴ細胞亜型及びサイトカインプロファイルを識別することは依然として困難であるが、これは、所与の患者試料におけるこれらの特定の細胞型及びサイトカインのレベルが、低レベル〜検出不能レベルであり得るためである。

ある細胞型を識別し、別の細胞型から分別するための一般的な技術は、例えば、蛍光標示式細胞分取器（ＦＡＣＳ）における、標識色素を使用するフローサイトメトリーである。フローサイトメトリーを実行する方法は、例えば、米国特許第８，３８９，２９１号、米国特許第７，９３２，５０３号、米国特許第７，０１２，６８９号、及び米国特許第６，２８７，７９１号に論じられる。

サイトカインに加えて、細胞の表面マーカーの組み合わせもまた、サブセットによってＴ細胞を（例えば、Ｔｈ２細胞はＣＲＴＨ２を発現する）、またはＦＡＣＳによって活性化状態を（例えば、活性化ＣＴＬはＨＬＡ−ＤＲを発現する）分類するために使用され得る。

以前の研究は、刺激に応答するＴヘルパー細胞プロファイルを分析するための実験を行っている。国際特許出願第ＷＯ１９９７／０２６８８３号は、リバビリン（登録商標）を有するまたは有しない、ＰＭＡ／イオノマイシンでインビトロ刺激されたＰＢＭＣ上のみでの、ＩＬ−２の細胞内サイトカイン染色を記載する。提供された結果は、インビトロデータに基づく推定上の薬理学的効果を記載する。

米国特許第６，０３９，９６９号は、主に分泌されたサイトカイン結果に基づいて、薬物イミキモドを含む化合物のクラスが、Ｔｈ２から離れるように免疫応答を偏在させ得ることを実証する動物モデルデータを記載する。ヒト臨床データ及び細胞内サイトカイン染色は開示されなかった。

米国特許出願第２００１／０００６７８９号は、抗原特異的Ｔ細胞を識別するために使用される方法を記載する。抗原特異的Ｔ細胞に対する薬理学的効果の測定は実証されない。

国際特許出願第ＷＯ２０００／０２４２４５号は、ＮＦＡＴｐ及び／またはＮＦＡＴ４を標的化して、Ｔｈ２細胞を調節するための方法を記載する。同第ＷＯ２００２／０８９８３２号は、Ｔｈｌ／Ｔｈ２比率を偏在させるためのサイトカイン＋ＳＤＦ−ｌａの組み合わせに関する。培養された臍帯血Ｔ細胞を使用する、ＩＦＮ−ｇ及びＩＬ−４に特異的な細胞内サイトカイン染色を含むインビトロデータが提示される。ヒト臨床データの実証は含まれない。

Ｌｏｒｅら（Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ１７１：４３２０−２８，２００３）は、Ｔｈ１特異的サイトカインＩＦＮ−ｇ、ＴＮＦ−ａ、及びＩＬ−２のレベルが、フローサイトメトリー分析によって単一試料中で測定される方法を使用する、ＣＭＶ特異的及びＨＩＶ特異的ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の分析を記載する。Ｔｈ１サイトカインは、そのそれぞれが同一のフルオロフォアで標識されるサイトカイン特異性抗体を使用して検出される。この方法は、Ｔｈ１細胞対Ｔｈ２細胞の比率は判定しない。

Ｌｕｄｖｉｋｓｓｏｎら（Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ１６０：３６０２−３６０９，１９９８）は、ウェゲナー肉芽腫症と、ＩＬ−１０による不均衡なＴｈ１細胞サイトカインパターン及び反転を呈するＨＬＡ−ＤＲ＋ＣＤ４＋細胞との関連性を記載する。Ｗａｎｇら（Ｉｎｔ Ｉｍｍ２１：１０６５−１０７７，２００９）は、メラノーマ環境において、ＰＤ１遮断がＣＴＬの機能抑制を反転させることを実証する。Ｓｆａｎｏｓら（Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ１４：３２５４−３２６１，２００８）は、前立腺癌におけるＴｈ１７及びＴｒｅｇサブセットに対する腫瘍浸潤リンパ球の偏在を実証する。

本開示は、免疫構成要素を有する疾患または障害を有する対象において、Ｔヘルパー細胞またはＣＴＬ細胞の集団を識別し、区別するための方法を対象とする。本技術は、治療剤での治療の前後に実行されて、治療を受ける患者の治療レジメンを改善し得る。

本開示は、疾患もしくは障害を有するか、または治療レジメン後の対象において、Ｔ細胞サブセット集団の変化を測定するための方法を提供する。本方法は、治療レジメンの有効性を判定し、患者のための最適な治療レジメンの設計を支援するために有用である。

本開示は、患者からの試料中のＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞及びＴヘルパー１（Ｔｈ１）細胞の比率を検出するための方法であって、Ｔｈ２特異的及びＴｈ１特異的サイトカインのレベルを測定することを含み、本方法は、ａ）試料を、ｉ）２つ以上のＴｈ２サイトカインに結合する２つ以上の特異的結合剤であって、Ｔｈ２特異的サイトカインに対する２つ以上の特異的結合剤が、第１のフルオロフォアで標識される、２つ以上の特異的結合剤、及びｉｉ）Ｔｈ１サイトカインに結合する少なくとも１つの特異的結合剤であって、Ｔｈ１サイトカインに対する特異的結合剤が、第１のフルオロフォアとは異なる第２のフルオロフォアで標識される、少なくとも１つの特異的結合剤、と接触させることと、ｂ）試料中の第１及び第２のフルオロフォアのレベルを測定し、検出されたＴｈ１特異的及びＴｈ２特異的フルオロフォアのレベルに基づいて、細胞をＴｈ１またはＴｈ２細胞として指定することと、ｃ）試料中のＴｈ２細胞対Ｔｈ１細胞の比率を判定することと、を含む、方法を提供する。

様々な実施形態において、本方法は、試料中のＴｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、及びＴｈ１７細胞の比率を判定することを更に含み、ａ）試料を、ｉｉｉ）Ｔｈ１７サイトカインに結合する少なくとも１つの特異的結合剤であって、Ｔｈ１７サイトカインに対する特異的結合剤が、第１のフルオロフォアとは異なる第２のフルオロフォアで標識されるか、または第３のフルオロフォアで標識される、少なくとも１つの特異的結合剤と接触させることと、ｂ）試料中の第１及び第２（及び／または第３）のフルオロフォアのレベルを測定し、検出されたＴｈ１特異的、Ｔｈ２特異的、またはＴｈ１７特異的フルオロフォアのレベルに基づいて、細胞をＴｈ１、Ｔｈ２、またはＴｈ１７細胞として指定することと、ｃ）試料中のＴｈ１細胞対Ｔｈ２細胞対Ｔｈ１７細胞の比率を判定することと、を含む。

様々な実施形態において、本開示は、患者からの試料中のＴヘルパー１（Ｔｈ１）細胞及びＴヘルパー１７（Ｔｈ１７）細胞の比率を検出するための方法であって、Ｔｈ１特異的及びＴｈ１７特異的サイトカインのレベルを測定することを含み、本方法は、ａ）試料を、ｉ）２つ以上のＴｈ１７サイトカインに結合する２つ以上の特異的結合剤あって、Ｔｈ１７特異的サイトカインに対する２つ以上の特異的結合剤が、第１のフルオロフォアで標識される、２つ以上の特異的結合剤、及びｉｉ）Ｔｈ１サイトカインに結合する少なくとも１つの特異的結合剤であって、Ｔｈ１サイトカインに対する特異的結合剤が、第１のフルオロフォアとは異なる第２のフルオロフォアで標識される、少なくとも１つの特異的結合剤、と接触させることと、ｂ）試料中の第１及び第２のフルオロフォアのレベルを測定し、検出されたＴｈ１特異的及びＴｈ１７特異的フルオロフォアのレベルに基づいて、細胞をＴｈ１またはＴｈ１７細胞として指定することと、ｃ）試料中のＴｈ１細胞対Ｔｈ１７細胞の比率を判定することと、を含む、方法を提供する。

様々な実施形態において、本開示は、患者からの試料中のＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞及びＴヘルパー１７（Ｔｈ１７）細胞の比率を検出するための方法であって、Ｔｈ２特異的及びＴｈ１７特異的サイトカインのレベルを測定することを含み、本方法は、ａ）試料を、ｉ）２つ以上のＴｈ２サイトカインに結合する２つ以上の特異的結合剤であって、Ｔｈ２特異的サイトカインに対する２つ以上の特異的結合剤が、第１のフルオロフォアで標識される、２つ以上の特異的結合剤、及びｉｉ）Ｔｈ１７サイトカインに結合する少なくとも１つの特異的結合剤であって、Ｔｈ１７サイトカインに対する特異的結合剤が、第１のフルオロフォアとは異なる第２のフルオロフォアで標識される、少なくとも１つの特異的結合剤、と接触させることと、ｂ）試料中の第１及び第２のフルオロフォアのレベルを測定し、検出されたＴｈ２特異的及びＴｈ１７特異的フルオロフォアのレベルに基づいて、細胞をＴｈ２またはＴｈ１７細胞として指定することと、ｃ）試料中のＴｈ２細胞対Ｔｈ１７細胞の比率を判定することと、を含む、方法を提供する。

特定の実施形態において、Ｔｈ１細胞対Ｔｈ２細胞の比率が本方法を使用して計算され、この比率が治療有効性及び患者のための治療レジメンの潜在的な変更を判定するために使用されることもまた企図される。同様に、本明細書に記載される方法について、逆の比率（例えば、Ｔｈ１７／Ｔｈ１、Ｔｈ１７／Ｔｈ２、またはＴｈ１、Ｔｈ２、及びＴｈ１７の任意の組み合わせ比率）が判定され得、判定された細胞の比率に基づいて治療判定もまた行われ得ることが特に企図される。

様々な実施形態において、Ｔｈ２サイトカインは、ＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１３からなる群から選択される。様々な実施形態において、Ｔｈ１サイトカインは、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ｇ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−ａ）、及びＩＬ−２からなる群から選択される。

様々な実施形態において、Ｔｈ１７サイトカインは、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＦＮ−ｇ、及びＩＬ−２２からなる群から選択される。
様々な実施形態において、特異的結合剤は、Ｔｈ１特異的、Ｔｈ２特異的、またはＴｈ１７特異的サイトカインに特異的な抗体である。

様々な実施形態において、本方法は、本方法によって検出されたＴ細胞サブセットの比率を鑑みて、治療剤を投与するか、治療剤の用量レジメンを変更するか、または治療剤の用量レジメンを維持するステップを更に含み、特定の比率の検出は、与えられるべき治療レジメンを示す。

様々な実施形態において、患者は、喘息、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、線維性疾患、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症、及び癌からなる群から選択される疾患または障害を患う。本方法において企図される追加の障害は、発明を実施するための形態においてより詳細に論じられる。

様々な実施形態において、試料は、治療剤での治療前及び／または後に得られる。特定の実施形態において、試料は、患者からの全血、末梢血単核球、脳脊髄液、気管支肺胞上皮洗浄液、鼻洗浄液、誘発喀痰、または生検である。

様々な実施形態において、治療剤は抗ＴＳＬＰ抗体である。
様々な実施形態において、第１のフルオロフォアはフィコエリトリン（ＰＥ）であり、第２のフルオロフォアはフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）である。本方法における使用が企図される更なるフルオロフォアとしては、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）３５０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４０５、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４３０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５１４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５４６、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５５５、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５６８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５９４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６１０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６３３、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６３５、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６６０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６８０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）７００、ＢＯＤＩＰＹ ＦＬ、ＢＯＤＩＰＹ６３０／６５０、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、ＥＣＤ、ＦＩＴＣ、ＦｌｕｏｒＸ（登録商標）、Ｃａｓｃａｄｅ（登録商標）Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ（登録商標）、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｇｒｅｅｎ（登録商標）、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｏｒａｎｇｅ（登録商標）、ｅＦｌｕｏｒ（登録商標）４５０、ｅＦｌｕｏｒ（登録商標）６０５ＮＣ、ｅＦｌｕｏｒ（登録商標）６２５ＮＣ、ｅＦｌｕｏｒ（登録商標）６５０ＮＣ、ｅＦｌｕｏｒ（登録商標）６６０、ｅＦｌｕｏｒ（登録商標）７１０、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ（商標）（ＢＶ）フルオロフォアＢＶ４２１、ＢＶ５１０、ＢＶ５７０、ＢＶ６０５、ＢＶ６５０、ＢＤ Ｈｏｒｉｚｏｎ（商標）Ｖ４５０、ＢＤ Ｈｏｒｉｚｏｎ（商標）Ｖ５００、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、ローダミン、シアニン、フィコエリトリン（ＰＥ）、フィコシアニン、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、ｏ−フタルアルデヒド、フルオレサミン、Ｏｒｅｇｏｎ Ｇｒｅｅｎ（登録商標）４８８、ＰＥ−ＡＰＣ、ＰＥ−Ｃｙ５、ＰｅｒＣＰ、ＰＥ−ＴＲ、ローダミングリーン、及びロードルグリーン、ならびにこれらのタンデム型色素が挙げられるが、これらに限定されない。

一実施形態において、サイトカインは、細胞内で特異的結合剤と接触させられる。特定の実施形態において、サイトカインは、細胞外で特異的結合剤と接触させられる。特定の実施形態において、サイトカインは、細胞からインビトロで分泌されるか、またはにおいて流体試料中で検出可能である。

様々な実施形態において、本開示は、治療剤での治療に対して応答性である喘息患者の亜集団を識別するための方法であって、患者試料中のＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞及びＴヘルパー１（Ｔｈ１）細胞のベースライン比率、または治療剤の投与後の比率の変化を測定することを含み、本方法は、ａ）試料を、ｉ）２つ以上のＴｈ２サイトカインに結合する２つ以上の特異的結合剤であって、Ｔｈ２特異的サイトカインに対する２つ以上の特異的結合剤が、第１のフルオロフォアで標識される、２つ以上の特異的結合剤、及びｉｉ）Ｔｈ１サイトカインに結合する少なくとも１つの特異的結合剤であって、Ｔｈ１サイトカインに対する特異的結合剤が、第１のフルオロフォアとは異なる第２のフルオロフォアで標識される、少なくとも１つの特異的結合剤、と接触させることと、ｂ）試料中の第１及び第２のフルオロフォアのレベルを測定し、検出されたＴｈ２特異的及びＴｈ１特異的フルオロフォアのレベルに基づいて、細胞をＴｈ１またはＴｈ２細胞として指定することと、ｃ）検出されたＴｈ２特異的サイトカイン及びＴｈ１特異的サイトカインのレベルに基づいて、試料中のＴｈ２細胞対Ｔｈ１細胞の比率を判定することであって、Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞の比率が減少する場合、患者が治療剤に対して応答性であると識別される、判定することと、ｄ）患者が治療剤に対して非応答性であると判定される場合、治療剤での治療を変更すること、または患者が治療剤での治療に対して応答性であると判定される場合、治療剤の用量を維持することと、を含む、方法を提供する。様々な実施形態において、喘息患者におけるＴｈ１７細胞対Ｔｈ１細胞及びＴｈ２細胞の比率は、本明細書に記載されるように測定される。

様々な実施形態において、前記試料を得る前に、治療剤は、１週間、２週間、３週間、４週間、６週間、２ヶ月間、３ヶ月間、またはそれを超えて投与される。本方法によって企図される追加の投薬レジメンは、発明を実施するための形態においてより詳細に論じられる。

様々な実施形態において、治療剤は、抗ＴＳＬＰ抗体または抗ＴＳＬＰ受容体抗体である。
様々な実施形態において、喘息患者は、軽度、中等度、または重度の喘息を含むアトピー性喘息を有する。特定の実施形態において、喘息患者におけるＴｈ２／Ｔｈ１比率はＴｈ２表現型に向かって偏在し、この偏在は、Ｔｈ２パスウェイを標的化する治療剤での治療の候補として患者を識別し得る。様々な実施形態において、Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞の比率が約０．２以上である場合、患者はＴｈ２標的化治療の候補であり得る。

一実施形態において、Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞の比率が、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、またはそれを超えて減少する場合、喘息患者は、治療に対して応答性であるとして識別される。応答性の程度は、治療前または治療中の特定の時点で得られたベースライン値と比較されることが企図される。一実施形態において、患者が治療に対して応答性であると識別されるＴｈ２／Ｔｈ１比率は、約０．１以下である。

様々な実施形態において、本開示は、免疫不全の治療において、抗ＴＳＬＰ剤の用量レジメンを変更する方法であって、本明細書に記載される方法を使用して、試料中のＴｈ２細胞／Ｔｈ１細胞、及び／またはＴｈ１７細胞の比率を判定し、Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞、及び／またはＴｈ１７細胞の比率が治療中に変化する場合、抗ＴＳＬＰ抗体の用量を変更することを含み、Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞の比率が安定しているか、または増加し、Ｔｈ２プロファイルに向かう偏在（すなわち、Ｔｈ２細胞の割合の増加及び／またはＴｈ１細胞の割合の減少）を示す場合、治療剤の用量が増加され、Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞の比率が減少し、Ｔｈ２プロファイルの低減（すなわち、Ｔｈ２細胞の割合の減少及び／またはＴｈ１細胞の割合の増加）を示す場合、治療剤の用量が減少される、方法を提供する。

様々な実施形態において、抗ＴＳＬＰまたは抗ＴＳＬＰ受容体剤によって治療される免疫不全は、アトピー性疾患または障害である。アトピー性疾患または障害の例としては、喘息、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性結膜炎、及びアトピー性皮膚炎が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、免疫不全は線維性疾患である。

様々な実施形態において、喘息治療剤の用量レジメンを変更する方法であって、本明細書に記載される方法を使用して、試料中のＴｈ２細胞／Ｔｈ１細胞、及び／またはＴｈ１７細胞の比率を判定し、Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞、及び／またはＴｈ１７細胞の比率が治療中に変化する場合、喘息治療剤の用量を変更することを含み、Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞の比率が安定しているか、または増加し、Ｔｈ２プロファイルに向かう偏在を示す場合、治療剤の用量が増加され、Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞の比率が減少し、Ｔｈ２プロファイルの低減を示す場合、治療剤の用量が減少される、方法が本明細書に企図される。

特定の実施形態において、高い割合のＴｈ１７細胞が検出される場合、本方法は、ＩＬ−１７活性またはＩＬ−１７パスウェイを阻害する治療剤を投与することを更に含む。
ＣＤ８＋ＣＴＬを検出する方法もまた、企図される。本開示は、多機能ＣＴＬなどのＣＴＬのサブセットを検出するための方法であって、ａ）試料を、１つ以上の多機能ＣＴＬサイトカインに結合する１つ以上の特異的結合剤であって、多機能ＣＴＬサイトカインに対する１つ以上の特異的結合剤が、第１のフルオロフォア及び／または第２のフルオロフォア及び／または第３のフルオロフォアで標識される、１つ以上の特異的結合剤と接触させることと、ｂ）試料中の第１及び第２及び／または第３のフルオロフォアのレベルを測定し、検出された特異的フルオロフォアのレベルに基づいて、細胞を多機能ＣＴＬ細胞として指定することと、ｃ）試料中の他のＴ細胞（例えば、試料中のＴｈ、Ｔｒｅｇ、ＮＫＴ、またはｇｄＴ）に対する多機能ＣＴＬの比率を判定することと、を含む、方法を提供する。

様々な実施形態において、多機能ＣＴＬサイトカインは、ＩＦＮ−ｇ、ＩＬ−１７、ＴＮＦ−ａ、及びＩＬ−２からなる群から選択される。
様々な実施形態において、細胞表面マーカーは、Ｔ細胞亜集団の識別のために使用される。例示的な細胞表面マーカーとしては、Ｔｈ２細胞に対するＳＴ２、ＣＲＴＨ２、及びＣＣＲ４、Ｔｈ１細胞に対するＣＸＣＲ３、ならびに／またはＴｈ１７細胞に対するＣＣＲ６が挙げられるが、これらに限定されない。Ｔ細胞亜集団はまた、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＣＤ４０Ｌ、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、４１ＢＢ、ＴＩＭ−３、ＧＩＴＲ、ＨＬＡ−ＤＲ、ならびにＴｈ１、Ｔｈ２、及びＴｈ１７細胞のＫｉ６７を含む、活性化状態を示すバイオマーカーに基づいて区別される。

上記に加えて、本発明は、追加の一態様として、上記の特定の段落により定義される変形形態よりも、いかようにも範囲がより狭義の本発明の全ての実施形態を含む。例えば、１つの属として記載される本発明の特定の態様、１つの属の全ての構成員が個々に、本発明の一態様であることが理解されるべきである。また、１つの属として記載されるか、または１つの属の構成員を選択する態様は、その属の２つ以上の構成員の組み合わせを包含することが理解されるべきである。出願者（複数可）は、本明細書に記載される本発明の全範囲を発明したものの、出願者は、他者の先行技術において記載される主題の特許を取得することは意図しない。したがって、ある段落の範囲内の法定先行技術が、特許事務所または他の主体もしくは個人によって出願者（複数可）の気付くところとなる場合、出願者（複数可）は、該当する特許法の下、補正権を行使して、そのような法定先行技術または法定先行技術の明白な変形形態をそのような段落の範囲から特に除外するように、そのような段落の主題を再定義する権利を留保する。そのような補正された段落によって定義される本発明の変形形態もまた、本発明の態様として意図される。

図１は、ＦＥＶ_１のアレルゲン誘発低下割合（％）を図示する。スクリーニング、４２日目、及び８４日目でのＦＥＶ_１の割合（％）−時間曲線が提示されるデータは平均±ＳＥＭとして示される。プラセボと比較して、ＡＭＧ１５７治療は、４２及び８４日目でＦＥＶ１の遅発型アレルゲン誘発低下を有意に減弱し、４２及び８４日目でＦＥＶ_１の即時型アレルゲン誘発低下を減弱した。ＦＥＶ_１は１秒間の強制呼気量を意味し、＊はプラセボと比較したｐ＜０．０５のＡＭＧ１５７を意味する。 図２は、アレルゲン誘発気道反応における、治療差異の推定（ＡＭＧ１５７引くプラセボ）を示す。平均予想はＡＮＣＯＶＡに基づいた。ＡＵＣは曲線下面積を意味し、ＥＡＲは即時型喘息反応を意味し、ＦＥＶ_１は１秒間の強制呼気量を意味し、ＦＥＶ_１−時間ＡＵＣは時間調整ＦＥＶ_１の曲線下面積を意味し、％ＦＥＶ_１−時間ＡＵＣはＦＥＶ_１の低下割合（％）曲線下の時間調整面積の曲線下面積を意味し、ＬＡＲは遅発型喘息反応を意味し、ＦＥＶ_１の最大％低下はＦＥＶ_１の最大低下割合（％）を意味し、メタコリンＰＣ２０はＦＥＶ_１の２０％の低下を引き起こすメタコリンの誘発濃度を意味する。^＊Ｐ≦０．０５。 図３Ａ〜３Ｃは、末梢血好酸球及び喀痰好酸球、ならびに呼息一酸化窒素濃度の変化を示す。末梢血好酸球（図３Ａ）、喀痰好酸球（図３Ｂ）、及び呼息一酸化窒素濃度（図３Ｃ）を、−１５日目の投薬前ベースラインから８５日目まで測定した。データを平均±ＳＥＭとして示す。ＦＥｅＮＯは呼息一酸化窒素濃度を意味し、赤い矢印は投薬を意味し、黒い矢印はアレルゲン吸入負荷を意味し、＊はプラセボと比較したｐ＜０．０５のＡＭＧ１５７を意味する。 図４は、抗ＴＳＬＰ治療を受ける喘息患者における、Ｔｈ２表現型から離れる薬理学的偏在を意味する。 図５Ａ−５Ｂは、ＰＭＡ／イオノマイシンで刺激されていない（図５Ａ）及び刺激されている（図５Ｂ）ときにＳＣＬＥ患者から採取された細胞のサイトカインプロファイルを示す。

Ｔｈ２細胞は、アレルギー性喘息の確立及び進行の一因として強く意味付けられる。臨床試験設定において、治療標的を遮断することがＴｈ２細胞またはＴｈ２／Ｔｈ１比率の変化につながるかどうかを理解することは、有用な探索目的であり得る。更に、ベースラインでの極性化ヘルパーＴ細胞の相対的な割合は、患者を最適な治療とマッチさせる助けになり得る。同様に、癌設定において、Ｔｈサブセット（特にＴｈ１、Ｔｈ１７、及びＴｒｅｇ）のレベルならびにＣＴＬの機能性は、治療レジメンを識別し、最適化するための有用な測定基準であり得る。本開示は、ＰＭＡ及びイオノマイシンでの幅広い刺激を使用して開発したＴヘルパー細胞及びＣＴＬの変化を測定し、その後、細胞内サイトカイン染色してＴｈサイトカイン応答を分析するためのアッセイを記載する。ＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１３を使用するＴｈ２サイトカイン染色の組み合わせ方法と、各サイトカインを別々に染色する交替方法とを比較した後、Ｔｈ２細胞の検出を改善するための組み合わせ方法を開発した。

定義
別段述べない限り、明細書及び特許請求の範囲を含む本出願において使用される以下の用語は、以下に与えられる定義を有する。

明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、別段文脈が明らかに指示しない限り、不定冠詞「ａ」及び「ａｎ」、ならびに定冠詞「ｔｈｅ」は、複数形ならびに単数形の参照対象を含む。

別段定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術的用途及び科学的用語は、本開示が属する当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を有する。以下の参照文献は、当業者に、本開示で使用される用語のうちの多くの一般的な定義を提供する、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ ＯＦ ＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ（２ｄ Ｅｄ．１９９４）、ＴＨＥ ＣＡＭＢＲＩＤＧＥ ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ ＯＦ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（Ｗａｌｋｅｒ Ｅｄ．，１９８８）、ＴＨＥ ＧＬＯＳＳＡＲＹ ＯＦ ＧＥＮＥＴＩＣＳ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｒ．Ｒｉｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｅｄｓ．），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ（１９９１）、及びＨａｌｅ＆Ｍａｒｈａｍ，ＴＨＥ ＨＡＲＰＥＲ ＣＯＬＬＩＮＳ ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ ＯＦ ＢＩＯＬＯＧＹ（１９９１）を含むが、これらに限定されない。

「ａｂｏｕｔ」または「ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ」という用語は、当業者によって判定される特定の値について許容される誤差を意味し、この誤差は、一部にはその値がどのように測定または判定されるかに依存する。特定の実施形態において、「ａｂｏｕｔ」または「ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ」は、１、２、３、または４の標準偏差を意味する。特定の実施形態において、「ａｂｏｕｔ」または「ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ」という用語は、所与の値または範囲の３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、または０．０５％以内を意味する。「ａｂｏｕｔ」または「ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ」という用語が、２つ以上の一連の数値における第１の数値に先行する場合、「ａｂｏｕｔ」または「ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ」という用語は、その一連の数値の１つ１つに適用されることが理解される。

本明細書で使用される場合、「ｃｙｔｏｋｉｎｅ」という用語は、細胞間の相互作用及び通信に対して、または免疫細胞増殖及び分化などの細胞の挙動に対して特異的効果を有する細胞によって放出される、１つ以上の小（５〜２０ｋＤ）タンパク質を指す。免疫系におけるサイトカインの機能としては、循環する白血球及びリンパ球の、免疫遭遇の部位への流入の促進と、Ｂ細胞、Ｔ細胞、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、及び他の免疫細胞の発達及び増殖の刺激と、抗菌活性の提供とが挙げられる。例示的な免疫サイトカインとしては、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、インターフェロン（ＩＦＮアルファ、ベータ、及びガンマを含む）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦアルファ、ベータを含む）、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦアルファ、ベータを含む）、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭＣＳＦ）、ならびに胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）が挙げられるが、これらに限定されない。

「Ｔ ｈｅｌｐｅｒ（Ｔｈ）１ｃｙｔｏｋｉｎｅ」または「Ｔｈ１−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｙｔｏｋｉｎｅ」は、Ｔｈ１Ｔ細胞によって発現される（細胞内で、及び／または分泌される）サイトカインを指し、ＩＦＮ−ｇ、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−１２、及びいくつかの集団において、ＩＬ−２が挙げられる。「Ｔｈ２ｃｙｔｏｋｉｎｅ」または「Ｔｈ２−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｙｔｏｋｉｎｅ」は、Ｔｈ２Ｔ細胞によって発現される（細胞内で、及び／または分泌される）サイトカインを指し、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−１０、及び特定の集団において、ＩＬ−２が挙げられる。「Ｔｈ１７ｃｙｔｏｋｉｎｅ」または「Ｔｈ１７−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｙｔｏｋｉｎｅ」は、Ｔｈ１７Ｔ細胞によって発現される（細胞内で、及び／または分泌される）サイトカインを指し、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−２２、及びＩＬ−２１が挙げられる。Ｔｈ１７細胞の特定の集団は、本明細書に列挙されるＴｈ１７サイトカインに加えてＩＦＮ−ｇ及び／またはＩＬ−２を発現する。多機能ＣＴＬサイトカインとしては、ＩＦＮ−ｇ、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−２、及びＩＬ−１７が挙げられる。

「ｆｌｕｏｒｏｐｈｏｒｅ」という用語は、所与の波長の光エネルギーを許容（励起）し、より長い波長でそれを再放射（放射）する小分子色素またはタンパク質を指す。本方法において、フルオロフォアは抗体または酵素基質などの特異的結合剤に結合され、特定の実施形態において、色素の励起を引き起こすレーザーに標識された物質を通過させることによって検出される。本方法において有用である例示的なフルオロフォアとしては、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）３５０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４０５、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４３０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５１４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５４６、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５５５、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５６８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５９４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６１０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６３３、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６３５、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６６０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６８０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）７００、ＢＯＤＩＰＹ ＦＬ、ＢＯＤＩＰＹ６３０／６５０、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、ＥＣＤ、ＦＩＴＣ、ＦｌｕｏｒＸ（登録商標）、Ｃａｓｃａｄｅ（登録商標）Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ（登録商標）、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｇｒｅｅｎ（登録商標）、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｏｒａｎｇｅ（登録商標）、ｅＦｌｕｏｒ（登録商標）４５０、ｅＦｌｕｏｒ（登録商標）６０５ＮＣ、ｅＦｌｕｏｒ（登録商標）６２５ＮＣ、ｅＦｌｕｏｒ（登録商標）６５０ＮＣ、ｅＦｌｕｏｒ（登録商標）６６０、ｅＦｌｕｏｒ（登録商標）７１０、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ（商標）（ＢＶ）フルオロフォアＢＶ４２１、ＢＶ５１０、ＢＶ５７０、ＢＶ６０５、ＢＶ６５０、ＢＤ Ｈｏｒｉｚｏｎ（商標）Ｖ４５０、ＢＤ Ｈｏｒｉｚｏｎ（商標）Ｖ５００、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、ローダミン、シアニン、フィコエリトリン（ＰＥ）、フィコシアニン、アロフィコシアニン （ＡＰＣ）、ｏ−フタルアルデヒド、フルオレサミン、Ｏｒｅｇｏｎ Ｇｒｅｅｎ（登録商標）４８８、ＰＥ−ＡＰＣ、ＰＥ−Ｃｙ５、ＰｅｒＣＰ、ＰＥ−ＴＲ、ローダミングリーン、及びロードルグリーン、ならびにこれらのタンデム型色素が挙げられるが、これらに限定されない。

「ｆｉｒｓｔ ｆｌｕｏｒｏｐｈｏｒｅ」及び「ｓｅｃｏｎｄ ｆｌｕｏｒｏｐｈｏｒｅ」という用語は、本開示の方法において有用なフルオロフォアを指し、本方法において異なる波長で放射し、重複しないフルオロフォアの使用を指定するために使用される。例えば、「ｆｉｒｓｔ ｆｌｕｏｒｏｐｈｏｒｅ」は、本方法において１つ以上の特異的結合を標識するのに使用され、第１の波長で光を放射する１つ以上のフルオロフォアを指し、第１の波長範囲内で重複するスペクトル放射プロファイルを有する２つの異なるフルオロフォアの使用を含む。「ｓｅｃｏｎｄ ｆｌｕｏｒｏｐｈｏｒｅ」は、フルオロフォア（複数可）の波長放射が第１のフルオロフォア（複数可）の放射波長と重複しない、本方法において使用される１つ以上のフルオロフォアを指す。第３の波長または一般的な波長範囲で光を放射するが、第１のフルオオフォアとも第２のフルオロフォアともスペクトル的に重複しない、１つ以上の色素を含む「第３のフルオロフォア（ｔｈｉｒｄ ｆｌｕｏｒｏｐｈｏｒｅ）」または更なる後続フルオロフォアを使用して本方法を実行することもまた可能ある。重複するスペクトルプロファイルを有するフルオロフォアの例としては、ＦＩＴＣ及びＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８；ＡＰＣ、ｅＦｌｕｏｒ（登録商標）６６０、及びＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７；ＰＥ及びＰＥ−Ｃｙ５；Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５５５及びＣｙ３；Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７及びＣｙ５；ならびに重複する放射スペクトルにあると判定される他のものが挙げられる。当業者は、フルオロフォアの放射スペクトルを記載する一般に入手可能な資料を使用して、フルオロフォアが重複するスペクトルを有するかを判定することができる。

「ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ」という用語は、「ａｎｔｉｇｅｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ（抗原特異的）」であり、「ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ（選択的結合剤）」、「ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ（特異的結合剤）」、「ａｎｔｉｇｅｎ ｔａｒｇｅｔ（抗原標的）」「ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｆｏｒ（に特異的）」であるか、または、抗原と「ｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｅ（免疫反応性）」であり、類似する配列の他の抗原よりも大きな親和性で標的抗原に結合する抗体またはポリペプチドを指す。薬剤は、例えば、表面抗原（例えば、Ｔ細胞受容体、ＣＤ３）、及びサイトカイン（例えば、ＴＳＬＰ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７、ＩＦＮ−ｇ、ＴＮＦ−ａ）などの、免疫細胞型の識別において有用な標的タンパク質に特異的に結合することが本明細書に企図される。

「ａｎｔｉｂｏｄｙ」という用語は、最も幅広い意味で使用され、完全組立抗体、四量体抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、抗原に結合し得る抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ′、Ｆ′（ａｂ）２、Ｆｖ、一本鎖抗体、ダイアボディ）、及びそれらが所望される生物活性を呈する限り、上記を含む組み換えペプチドを含む。「ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ」または「ｔｅｔｒａｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ」は、それぞれが可変領域及び定常領域を含む、２つの重鎖及び２つの軽鎖からなる四量体糖タンパク質である。抗原結合部分は、組み換えＤＮＡ技術によって、または完全な抗体の酵素もしくは化学開裂によって産生され得る。抗体フラグメントまたは抗原結合部分としては、とりわけ、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、相補性決定領域（ＣＤＲ）フラグメント、ＣＤＲ移植抗体、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体フラグメント、キメラ抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、線状抗体；キレート化組み換え抗体、トライボディもしくはバイボディ、イントラボディ、ナノボディ、小モジュラー免疫医薬品（ＳＭＩＰ）、抗原結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質、ラクダ化抗体、ＶＨＨ含有抗体、またはこれらの変異形もしくは誘導体、及び抗体が所望される生物活性を保持する限り、１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲ配列などの、ポリペプチドに特異性抗原結合を与えるのに十分な免疫グロブリンの少なくとも一部分を含有するポリペプチドが挙げられる。

「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、少量で存在し得る可能性のある天然に存在する変異を除いて、集団を構成する個々の抗体は同一である。

「ｓａｍｐｌｅ」または「ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓａｍｐｌｅ」という用語は、本方法における使用のために対象から得られる検体を指し、尿、全血、血漿、血清、唾液、組織生検、インビトロ刺激を有する脳脊髄液末梢血単核球、インビトロ刺激を有しない末梢血単核球、インビトロ刺激を有する腸リンパ組織、インビトロ刺激を有しない腸リンパ組織、腸洗浄液、気管支肺胞上皮洗浄液、鼻洗浄液、及び誘発喀痰を含む。

「ｆｉｂｒｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ」または「ｆｉｂｒｏｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｒ ｄｉｓｏｒｄｅｒ」は、１つ以上の組織における線維症に関与する病態を指す。本明細書で使用される場合、「ｆｉｂｒｏｓｉｓ」は、器官または組織の正常な構成物としてではなく、修復または反応過程としての線維性組織の形成を指す。

線維性疾患としては、全身性または局所性強皮症、ケロイド及び肥厚性瘢痕、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、肺炎症及び肺線維症、間質性肺炎、特発性肺線維症、肝硬変症、Ｂ型またはＣ型慢性肝炎感染症の結果としての線維症、放射線誘発線維症、創傷治癒から生じる線維症、腎疾患、瘢痕組織から生じる心疾患、黄斑変性などの眼疾患、ならびに網膜症及び硝子体網膜症が挙げられるが、これらに限定されない。追加の線維性疾患としては、化学療法薬から生じる線維症、放射線誘発線維症、ならびに外傷及び熱傷が挙げられる。

「ｔｒｅａｔ」、「ｔｒｅａｔｉｎｇ」、及び「ｔｒｅａｔｍｅｎｔ」という用語は、一時的または永久的のいずれか、部分的または完全のいずれかで、臨床症状、事象の徴候または進行、本明細書に記載される炎症性障害と関連付けられる疾患または病態を除去、低減、抑制、または寛解させることを指す。関連分野において認識されるように、治療剤として用いられる薬物は、所与の疾患状態の重症度を低減し得るが、有用な治療剤と見なされるのに、疾患の全ての徴候を消失させる必要はない。同様に、予防的に与えられる治療は、実行可能な予防剤を構成するのに、病態の発症の予防において完全に有効である必要はない。（例えば、その症状の数または重症度を低減することによって、もしくは別の治療の有効性を増加させることによって、もしくは別の有益な効果を産生することによって）疾患の影響を単に低減すること、または対象において疾患が発生または悪化する可能性を低減することは、十分である。本発明の一実施形態は、特定の障害の重症度を反映する指標のベースラインを超える、持続した改善を誘発するのに十分な量及び時間、患者に治療剤を投与することを含む治療の有効性を判定するための方法を対象とする。

「ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ」という用語は、疾患または障害と関連付けられる疾患の症状もしくは徴候を寛解または軽減させるのに有効である治療剤の量を指す。

特異的結合剤
それらの標的抗原、例えば、表面分子及びサイトカインなどに結合する抗体及び抗体フラグメントなどの特異的結合剤は、本発明の方法において有用である。一実施形態において、特異的結合剤は抗体である。抗体は、単一特異性ポリクローナル、モノクローナル（ＭＡｂ）、組み換え、キメラ、補性決定領域（ＣＤＲ）移植などのヒト化、ヒト、一本鎖、及び／または二重特異性、ならびにこれらのフラグメント、変異形、もしくは誘導体を含む、ポリクローナルであっても良い。抗体フラグメントとしては、対象となるポリペプチドのエピトープに結合する抗体の部分が挙げられる。そのようなフラグメントの例としては、全長抗体の酵素開裂によって生成されるＦａｂフラグメント及びＦ（ａｂ′）フラグメントが挙げられる。他の結合フラグメントとしては、抗体可変領域をコードする核酸配列を含有する組み換えプラスミドの発現などの、組み換えＤＮＡ技術によって生成されるものが挙げられる。

モノクローナル抗体は、治療剤または診断剤としての使用のために修飾され得る。一実施形態は、重鎖（Ｈ）及び／もしくは軽鎖（Ｌ）の一部分が、特定の種に由来するか、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一であるか、あるいは相同である一方で、鎖（複数可）の残部が、別の種に由来するか、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一であるか、あるいは相同である、「キメラ」抗体である。それらが所望される生物活性を呈する限り、そのような抗体のフラグメントもまた含まれる。米国特許第４，８１６，５６７号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：６８５１−５５を参照されたい。

別の実施形態において、モノクローナル抗体は「ヒト化」抗体である。非ヒト抗体をヒト化するための方法は、当該技術分野において周知である。米国特許第５，５８５，０８９号及び同第５，６９３，７６２号を参照されたい。一般に、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源からその中に導入された１つ以上のアミノ酸残渣を有する。ヒト化は、例えば、当該技術分野において記載される方法（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２−２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３−２７、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４−３６）を使用して、げっ歯類相補性決定領域の少なくとも一部分を、ヒト抗体の対応する領域と置換することによって実行され得る。

対象となる抗原に結合するヒト抗体もまた、本発明によって網羅される。内在性免疫グロブリン産生の不在下で、ヒト抗体のレパートリーを産生することのできる遺伝子導入動物（例えば、マウス）を使用して、そのような抗体は、任意で担体に共役されたポリペプチド抗原（すなわち、少なくとも６個の近接アミノ酸を有する）による免疫化によって産生される。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：２５５１−５５、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｎａｔｕｒｅ３６２：２５５−５８、Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ．７：３３を参照されたい。ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９６／０５９２８号及び同第ＰＣＴ／ＵＳ９３／０６９２６号もまた参照されたい。追加の方法は、米国特許第５，５４５，８０７号、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９１／２４５号及び同第ＰＣＴ／ＧＢ８９／０１２０７号、ならびに欧州特許第５４６０７３Ｂ１号及び同第５４６０７３Ａ１号に記載される。ヒト抗体はまた、本明細書に記載されるように、宿主細胞中での組み換えＤＮＡの発現によって、またはハイブリドーマ細胞中での発現によって産生され得る。

ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリから産生され得る（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１）。これらの過程は、糸状バクテリオファージの表面上での抗体レパートリーのディスプレイを通した免疫選択、及び選択された抗原へのそれらの結合による後続するファージの選択を模倣する。１つのそのような技術は、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９８／１７３６４号に記載され、これは、そのようなアプローチを使用する、ＭＰＬ受容体及びｍｓｋ受容体のための高親和性、機能性アゴニスト抗体の単離を記載する。

キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、及びヒト化抗体は、典型的に組み換え法によって産生される。抗体をコードする核酸は、本明細書に記載される材料及び手順を使用して宿主細胞中に導入され、発現される。好ましい一実施形態において、抗体は、ＣＨＯ細胞などの哺乳類宿主細胞中で産生される。モノクローナル（例えば、ヒト）抗体は、本明細書に記載されるように、宿主細胞中の組み換えＤＮＡの発現によって、またはハイブリドーマ細胞中の発現によって産生され得る。

Ｔ細胞集団を検出するために有用なサイトカインに結合する特異的結合剤が本明細書で企図され、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＦＮ−ｇ、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−２２、及びＩＬ−１０に特異的な結合剤を含むが、これらに限定されない。

細胞表面マーカーに結合する特異的結合剤が、Ｔ細胞亜集団の識別における使用のために企図される。例示的な細胞表面マーカーとしては、Ｔｈ２細胞に対するＳＴ２、ＣＲＴＨ２、及びＣＣＲ４、Ｔｈ１細胞に対するＣＸＣＲ３、ならびに／またはＴｈ１７細胞に対するＣＣＲ６が挙げられるが、これらに限定されない。Ｔ細胞亜集団はまた、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＣＤ４０Ｌ、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、４１ＢＢ、ＴＩＭ−３、ＧＩＴＲ、ＨＬＡ−ＤＲ、ならびにＴｈ１、Ｔｈ２、及びＴｈ１７細胞のＫｉ６７を含む、活性化状態を示すバイオマーカーに基づいて区別され得る。

治療剤
本明細書に記載される方法は、治療剤との併用において有用である。特に好ましい治療剤としては、サイトカインをアンタゴナイズするか、または患者におけるＴヘルパー細胞またはＣＴＬ比率を変更する受容体に結合する抗体が挙げられる。例としては、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ受容体、ＩＬ−２５、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７−Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ（ＩＬ−２５としても知られる）、ＩＬ−１７−Ｆ、ＩＬ−１７ＲＡ、ＩＬ−１７−ＲＢ、ＩＬ−１７ＲＣ、ＩＬ−１７ＲＤ、ＩＬ−１７ＲＥ、ＩＬ−３３、ＳＴ２、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ４／１３Ｒ、ＩＬ−５、ＩＬ−５Ｒ、ＴＮＦ、ＴＮＦ−Ｒ、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１０Ｒ、ＩＬ−１２ｐ３５、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３／ｐ１９、ＴＧＦ−ｂ、ＩＬ−２、ＩＦＮ−ｇ、ＩＦＮ−ａ、ＩＬ−１、ＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−９、ＩＬ−３６、及びＧＭ−ＣＳＦに対する抗体が挙げられるが、これらに限定されない。ＣＣＬ１７、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２０、及びＩＰ−１０などを含むが、これらに限定されない、Ｔｈ細胞またはＣＴＬの走化性因子であるケモカインもまた企図される。

特定の実施形態において使用され得る抗ＴＳＬＰ抗体の例としては、米国特許第７，９８２，０１６号、米国公開特許出願第２００９０１８６０２２号、及び米国特許第８，２３２，３７２号に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。抗ＴＳＬＰ受容体抗体の例としては、米国特許第８，１０１，１８２号に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。特に好ましい実施形態において、抗ＴＳＬＰ抗体は、米国特許第７，９８２，０１６号内でＡ５として指定される抗体である。

特定の実施形態において使用され得る抗ＩＬ−１７ＲＡ抗体の例としては、米国特許第７，７６７，２０６号、米国特許第７，７８６，２３４号、米国特許第７，９３９，０７０号、米国特許第７，８３３，５２７号、同第８，４３５，５１８号、米国特許第８，５４５，８４２号、及び米国公開特許出願第２０ １３００２２６２１号に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ Ｎａｍｅｓ：Ｌｉｓｔ６７（ＷＨＯ Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．２６，Ｎｏ．１，２０１２；Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）に記載される抗ＩＬ−１７ＲＡ抗体ブロダルマブの使用もまた好適である。特定の実施形態において使用され得る抗ＩＬ−１７Ａ抗体の例としては、Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ Ｎａｍｅｓ：Ｌｉｓｔ６９（ＷＨＯ Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｖｏｌ．２７，Ｎｏ．１，２０１３；Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）に記載されるペラキズマブ、Ｐｒｏｐｏｓｅｄ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ Ｎａｍｅｓ：Ｌｉｓｔ１０２（ＷＨＯ Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．４，２００９；Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）に記載されるセクキヌマブ、Ｐｒｏｐｏｓｅｄ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ Ｎａｍｅｓ：Ｌｉｓｔ１０５（ＷＨＯ Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．２，２０１１；Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）に記載されるイキセキズマブ、Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ Ｎａｍｅｓ：Ｌｉｓｔ７０（ＷＨＯ Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．２７，Ｎｏ．３，２０１３；Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）に記載されるチルダキズマブ（ｔｉｌｄａｋｉｚｕｍａｂ）が挙げられるが、これらに限定されない。

特定の実施形態において使用され得る抗ＳＴ２抗体の例としては、ＷＯ２０１３１７３７６１に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。特に好ましいのは、ＷＯ２０１３１７３７６１においてＡｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ３０、Ａｂ３２、及びＡｂ３３として記載される抗体である。

本質的にいかなる抗体も、本明細書に記載される方法に組み込まれ得ることが企図される。例示的な抗体（及びそれらが特異的に結合する抗原）としては、米国特許第７，９４７，８０９号及び米国特許出願公開第２００９００４１７８４号（グルカゴン受容体）；米国特許第７９３９０７０号、米国特許第７，８３３，５２７号、米国特許第７，７６７，２０６号、及び米国特許第７，７８６，２８４号（ＩＬ−１７受容体Ａ）；米国特許第７，８７２，１０６号及び米国特許第７，５９２，４２９号（スクレロスチン）；米国特許第７，８７１，６１１号、米国特許第７，８１５，９０７号、米国特許第７，０３７，４９８号、米国特許第７，７００，７４２号、及び米国特許出願公開第２０１００２５５５３８号（ＩＧＦ−１受容体）；米国特許第７，８６８，１４０号（Ｂ７ＲＰ１）；米国特許第７，８０７，１５９号及び米国特許出願公開第２０１１００９１４５５号（ミオスタチン）；米国特許第７，７３６，６４４号、米国特許第７，６２８，９８６号、米国特許第７，５２４，４９６号、及び米国特許出願公開第２０１００１１１９７９号（上皮増殖因子受容体の欠失変異体）；米国特許第７，７２８，１１０号（ＳＡＲＳコロナウイルス）；米国特許第７，７１８，７７６号及び米国特許出願公開第２０１００２０９４３５号（ＯＰＧＬ）；米国特許第７，６５８，９２４号及び米国特許第７，５２１，０５３号（アンジオポエチン−２）；米国特許第７，６０１，８１８号、米国特許第７，７９５，４１３号、米国特許出願公開第２００９０１５５２７４号、米国特許出願公開第２０１１００４００７６号（ＮＧＦ）；米国特許第７，５７９，１８６号（ＴＧＦ−βＩＩ型受容体）；米国特許第７，５４１，４３８号（結合組織増殖因子）；米国特許第７，４３８，９１０号（ＩＬ１−Ｒ１）；米国特許第７，４２３，１２８号（プロパージン）；米国特許第７，４１１，０５７号、米国特許第７，８２４，６７９号、米国特許第７，１０９，００３号、米国特許第６，６８２，７３６号、米国特許第７，１３２，２８１号、及び米国特許第７，８０７，７９７号（ＣＴＬＡ−４）；米国特許第７，０８４，２５７号、米国特許第７，７９０，８５９号、米国特許第７，３３５，７４３号、米国特許第７，０８４，２５７号、及び米国特許出願公開第２０１１００４５５３７号（インターフェロン−ガンマ）；米国特許第７，９３２，３７２号（ＭＡｄＣＡＭ）；米国特許第７，９０６，６２５号、米国特許出願公開第２００８０２９２６３９号、及び米国特許出願公開第２０１１００４４９８６号（アミロイド）；米国特許第７，８１５，９０７号及び米国特許第７７００７４２号（インスリン様増殖因子Ｉ）；米国特許第７，５６６，７７２号及び米国特許第７９６４１９３号（インターロイキン−１β）；米国特許第７，５６３，４４２号、米国特許第７，２８８，２５１号、米国特許第７３３８６６０号、米国特許第７，６２６，０１２号、米国特許第７，６１８，６３３号、及び米国特許出願公開第２０１０００９８６９４号（ＣＤ４０）；米国特許第７，４９８，４２０号（ｃ−Ｍｅｔ）；米国特許第７，３２６，４１４号、米国特許第７，５９２，４３０号、及び米国特許第７，７２８，１１３号（Ｍ−ＣＳＦ）；米国特許第６，９２４，３６０号、米国特許第７，０６７，１３１号、及び米国特許第７，０９０，８４４号（ＭＵＣ１８）；米国特許第６，２３５，８８３号、米国特許第７，８０７，７９８号、及び米国特許出願公開第２０１００３０５３０７号（上皮増殖因子受容体）；米国特許第６，７１６，５８７号、米国特許第７，８７２，１１３号、米国特許第７４６５４５０号、米国特許第７，１８６，８０９号、米国特許第７，３１７，０９０、及び米国特許第７６３８６０６号（インターロイキン−４受容体）；米国特許出願公開第２０１１０１３５６５７号（ＢＥＴＡ−ＫＬＯＴＨＯ）；米国特許第７，８８７，７９９及び米国特許第７，８７９，３２３号（線維芽細胞増殖因子様ポリペプチド）；米国特許第７，８６７，４９４号（ＩｇＥ）；米国特許出願公開第２０１００２５４９７５号（アルファ−４ＢＥＴＡ−７）；米国特許出願公開第２０１００１９７００５号及び米国特許第７５３７７６２号（アクチビン受容体様キナーゼ−１）；米国特許第７，５８５，５００号及び米国特許出願公開第２０１０００４７２５３号（ＩＬ−１３）；米国特許出願公開第２００９０２６３３８３号及び米国特許第７，４４９，５５５号（ＣＤ１４８）；米国特許出願公開第２００９０２３４１０６号（アクチビンＡ）；米国特許出願公開第２００９０２２６４４７号（アンジオポエチン−１及びアンジオポエチン−２）；米国特許出願公開第２００９０１９１２１２号（アンジオポエチン−２）；米国特許出願公開第２００９０１５５１６４号（Ｃ−ＦＭＳ）；米国特許第７，５３７，７６２号（アクチビン受容体様キナーゼ−１）；米国特許第７，３７１，３８１号（ガラニン）；米国特許出願公開第２００７０１９６３７６号（インスリン様増殖因子）；米国特許第７，２６７，９６０号及び米国特許第７，７４１，１１５号（ＬＤＣＡＭ）；ＵＳ７２６５２１２（ＣＤ４５ＲＢ）；米国特許第７，７０９，６１１号、米国特許出願公開第２００６０１２７３９３号、及び米国特許出願公開第２０１０００４０６１９号（ＤＫＫ１）；米国特許第７，８０７，７９５号、米国特許出願公開第２００３０１０３９７８号、及び米国特許第７，９２３，００８号（オステオプロテゲリン）；米国特許出願公開第２００９０２０８４８９号（ＯＶ０６４）；米国特許出願公開第２００８０２８６２８４号（ＰＳＭＡ）；米国特許第７，８８８，４８２号、米国特許出願公開第２０１１０１６５１７１号、及び米国特許出願公開第２０１１００５９０６３号（ＰＡＲ２）；米国特許出願公開第２０１１０１５０８８８号（ＨＥＰＣＩＤＩＮ）；米国特許第７，９３９，６４０号（Ｂ７Ｌ−１）；米国特許第７，９１５，３９１号（ｃ−Ｋｉｔ）；米国特許第７，８０７，７９６号、米国特許第７，１９３，０５８号、及び米国特許第７，４２７，６６９号（ＵＬＢＰ）；米国特許第７，７８６，２７１号、米国特許第７，３０４，１４４号、及び米国特許出願公開第２００９０２３８８２３号（ＴＳＬＰ）；米国特許第７，７６７，７９３号（ＳＩＧＩＲＲ）；米国特許第７，７０５，１３０号（ＨＥＲ−３）；米国特許第７，７０４，５０１号（アタキシン−１様ポリペプチド）；米国特許第７，６９５，９４８号及び米国特許第７，１９９，２２４号（ＴＮＦ−α変換酵素）；米国特許出願公開第２００９０２３４１０６号（アクチビンＡ）；米国特許出願公開第２００９０２１４５５９号及び米国特許第７，４３８，９１０号（ＩＬ１−Ｒ１）；米国特許第７，５７９，１８６号（ＴＧＦ−βＩＩ型受容体）；米国特許第７，５６９，３８７号（ＴＮＦ受容体様分子）；米国特許第７，５４１，４３８号（結合組織増殖因子）；米国特許第７，５２１，０４８号（ＴＲＡＩＬ受容体−２）；米国特許第６，３１９，４９９号、米国特許第７，０８１，５２３号、及び米国特許出願公開第２００８０１８２９７６号（エリスロポエチン受容体）；米国特許出願公開第２００８０１６６３５２号及び米国特許第７，４３５，７９６号（Ｂ７ＲＰ１）；米国特許第７，４２３，１２８号（プロパージン）；米国特許第７，４２２，７４２号及び米国特許第７，１４１，６５３号（インターロイキン−５）；米国特許第６，７４０，５２２号及び米国特許第７，４１１，０５０号（ＲＡＮＫＬ）；米国特許第７，３７８，０９１号（炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡ ＩＸ）腫瘍抗原）；米国特許第７，３１８，９２５号及び米国特許第７，２８８，２５３号（副甲状腺ホルモン）；米国特許第７，２８５，２６９号（ＴＮＦ）；米国特許第６，６９２，７４０号及び米国特許第７，２７０，８１７号（ＡＣＰＬ）；米国特許第７，２０２，３４３号（単球走化性タンパク質−１）；米国特許第７，１４４，７３１（ＳＣＦ）；米国特許第６，３５５，７７９号及び米国特許第７，１３８，５００（４−１ＢＢ）；米国特許第７，１３５，１７４号（ＰＤＧＦＤ）；米国特許第６，６３０，１４３号及び米国特許第７，０４５，１２８号（Ｆｌｔ−３リガンド）；米国特許第６，８４９，４５０号（メタロプロテアーゼ阻害剤）；米国特許第６５９６８５２号（ＬＥＲＫ−５）；米国特許第６，２３２，４４７号（ＬＥＲＫ−６）；米国特許第６，５００，４２９号（脳由来神経栄養因子）；米国特許第６，１８４，３５９号（上皮由来Ｔ細胞因子）；米国特許第６，１４３，８７４号（神経栄養因子ＮＮＴ−１）；米国特許出願公開第２０１１００２７２８７号（プロタンパク質転換酵素サブチリシンケキシン型９（ＰＣＳＫ９））；米国特許出願公開第２０１１００１４２０１号（ＩＬ−１８受容体）；ならびに米国特許出願公開第２００９０１５５１６４（Ｃ−ＦＭＳ）に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。上記の特許及び公開特許出願の全体が、抗体ポリペプチド、核酸をコードする抗体、宿主細胞、ベクター、抗体を作製する方法、医薬組成物、及び抗体のそれぞれの標的と関連付けられる疾患を治療する方法のそれらの開示の目的上、参照によって本明細書に組み込まれる。

治療指標
本発明の方法は、免疫構成要素、すなわち、疾患もしくは障害の発症または進行において免疫細胞の関与を有する幅広い疾患もしくは障害を有する対象において、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、及びＴｈ１７細胞などのＴ細胞サブセットを検出するために有用である。

喘息：喘息は気道の慢性的な炎症性障害である。毎年、喘息は、米国において推定１１０万人の外来患者来院、１６０万人の救急治療室来院、４４万４千人の入院（Ｄｅｆｒａｎｃｅｓ ｅｔ ａｌ，２００８）（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｄｃ．ｇｏｖ／ｎｃｈｓ／ｄａｔａ／ｎｈｓｒ／ｎｈｓｒ００５．ｐｄｆから入手可能）、及び３，５００人の死亡を占める。感受性個人において、喘息性炎症は、喘鳴、息切れ、胸部絞扼感、及び咳の再発性エピソードを引き起こす。喘息の病因は、複数要因であり、遺伝的環境機序^１、２の両方によって影響されるが、環境アレルゲンが重要な原因であると考えられている。^２、３ほとんどの原因は、人がアレルゲンに対して過敏性（アトピー）になるときに生じる。アトピーは、Ｔｈ２細胞、Ｔｈｈ２サイトカイン発現、及びＩｇＥ産生の増加を特徴とする。米国において約１０００万人の患者が、アレルギー誘発性喘息を有すると考えられている。利用可能な治療の選択肢にも関わらず、喘息は主要な健康問題であり続けている。世界中で現在約３億人が喘息に罹患し、２０２０年までに４億人が喘息を罹患すると予想されている（Ｐａｒｔｒｉｄｇｅ，Ｅｕｒ Ｒｅｓｐ Ｒｅｖ．１６：６７−７２，２００７）。

アトピー性喘息患者によるアレルゲン吸入は、可逆性気流閉塞、気道過敏症、ならびに好酸球性及び好塩基球性気道炎症を含む、喘息の徴候のうちのいくつかを誘発する。アレルゲン吸入負荷は、多くの種において喘息の主要なモデルとなっている（Ｂａｔｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２９７（３）：Ｌ４０１−１０，２００９、Ｄｉａｍａｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３２（５）：１０４５−１０５５，２０１３）。

ステロイド治療に対して屈折する異なる喘息亜型が識別されている。好酸球は、Ｔｈ２−型ＣＤ４＋Ｔ細胞によって特徴的に媒介されるアレルギー性喘息において、重要な炎症性細胞である。好中球性気道炎症は、重度の喘息においてコルチコステロイド治療と関連付けられ、Ｔｈ１−またはＴｈ１７−型Ｔ細胞によって媒介され得る（Ｍｉｓｈｒａ ｅｔ ａｌ．Ｄｉｓ．Ｍｏｄｅｌ．Ｍｅｃｈ．６：８７７−８８８，２０１３）。

胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）は、炎症促進性の刺激に応答して産生され、主に樹状細胞（Ｇｉｌｌｉｅｔ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１９７：１０５９−１０６７，２００３、Ｓｏｕｍｅｌｉｓ，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３：６７３−６８０，２００２、Ｒｅｃｈｅ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：３３６−３４３２００１）、マスト細胞（Ａｌｌａｋｈｖｅｒｄｉ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２０４：２５３−２５８，２００７）、及びＣＤ３４＋前駆細胞に対するその活性を通してアレルギー性炎症応答を駆り立てる、上皮細胞由来のサイトカインである。^９ＴＳＬＰは、インターロイキン（ＩＬ）−７受容体アルファ（ＩＬ−７Ｒα）鎖及び共通γ鎖様受容体（ＴＳＬＰＲ）からなるヘテロ二量体受容体を通して信号伝達する（Ｐａｎｄｅｙ，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：５９−６４，２０００、Ｐａｒｋ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１９２：６５９−６６９，２０００）。

ヒトＴＳＬＰ ｍＲＮＡレベル^{１０、１１}及びタンパク質レベル^１１は、対照と比較して喘息個人の気道において増加し、この発現の大きさは疾患の重症度に相関する。^１０ 近年の研究は、ヒトＴＳＬＰ座位における一塩基多型と、喘息、アトピー性喘息、及び気道過敏症からの保護との関連性を実証しており、これは、ＴＳＬＰ遺伝子発現の分化制御が疾患感受性に影響を与え得ることを示唆する。^{１、１２、１３}これらのデータは、ＴＳＬＰを標的化することが、喘息に関与する複数の生物学的パスウェイを阻害し得ることを示唆する。

線維性疾患：線維症は、任意の特定の組織における正常な沈着を超える線維芽細胞蓄積及びコラーゲン沈着を特徴とする。線維芽細胞は、身体中の結合組織中に分散する結合組織細胞である。線維芽細胞は、Ｉ型及び／またはＩＩＩ型コラーゲンを含有する軟質細胞外マトリクスを分泌する。組織への外傷に応答して、近くの線維芽細胞は、創傷内へと移動し、増殖し、大量のコラーゲン性細胞外マトリクスを産生する。コラーゲンは、細胞外マトリクス及び結合組織、軟骨、ならびに骨の主要な構成要素であるグリシン及びプロリンに富んだ線維性タンパク質である。コラーゲン分子は、縄様ヘリックスにおいて互いの周りに巻き付いたアルファ鎖と呼ばれる三本鎖ヘリックス構造である。コラーゲンは、いくつかの形態または型で存在し、これらのうち、最も一般的なＩ型は皮膚、腱、及び骨に見られ、ＩＩＩ型は皮膚、血管、及び内臓に見られる。

線維性疾患としては、全身性または局所性強皮症、ケロイド及び肥厚性瘢痕、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、肺炎症及び肺線維症、間質性肺炎、特発性肺線維症、肝硬変症、Ｂ型またはＣ型慢性肝炎感染症の結果としての線維症、放射線誘発線維症、創傷治癒から生じる線維症、腎疾患、瘢痕組織から生じる心疾患、黄斑変性などの眼疾患、ならびに網膜症及び硝子体網膜症が挙げられるが、これらに限定されない。追加の線維性疾患としては、化学療法薬から生じる線維症、放射線誘発線維症、ならびに外傷及び熱傷が挙げられる。

強皮症：強皮症は、皮膚または他の器官における、線維芽細胞による新しいコラーゲンの過剰産生によって引き起こされる、皮膚の肥厚及び硬化を特徴とする線維性疾患である。強皮症は、局所性または全身性疾患として発生し得る。全身性強皮症は、いくつかの器官に影響を与え得る。全身性硬化症は、皮膚の肥厚及び下層組織（特に手及び顔の下層組織）への癒着を有する、ヒアリン化及び肥厚化したコラーゲン線維性組織の形成を特徴とする。この疾患はまた、蠕動の損失及び食道の粘膜下線維症による嚥下障害、肺線維症による呼吸困難、心筋線維症、及び腎血管変化を特徴とし得る。（Ｓｔｅｄｍａｎ’ｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ，２６．ｓｕｐ．ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，１９９５））。肺線維症は、強皮症患者の３０〜７０％に影響を与え、しばしば拘束性肺疾患をもたらす（Ａｔａｍａｓ ｅｔ ａｌ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ａｎｄ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ１４：５３７−５５０（２００３））。特発性肺線維症は、慢性、進行性、かつ通常致死性の肺障害であり、慢性炎症性過程の結果であると考えられる（Ｋｅｌｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍａ Ｄｅｓｉｇｎ９：３９−４９（２００３））。

ループス：全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）は、腎臓、皮膚、及び関節を含む複数の器官における血管に対する反復性外傷によって引き起こされる、自己免疫疾患である。米国において、５００，０００人以上がＳＬＥに罹患すると推定される。ＳＬＥを有する患者において、Ｔ細胞とＢ細胞との間の不完全な相互作用は、細胞核を攻撃する自己抗体の産生をもたらす。これらは、抗二本鎖ＤＮＡ及び抗Ｓｍ抗体を含む。リン脂質に結合する自己抗体はまた、ＳＬＥ患者の約半数において見出され、血管損傷及び低血球数の原因となる。免疫複合体は、ＳＬＥ患者の腎臓、血管、及び関節に蓄積し、炎症及び組織損傷を引き起こす。Ｔｈ２細胞が自己抗体の過剰産生の一因となると仮定されている。

ループスはまた、亜急性皮膚エリテマトーデス（ＳＣＬＥ）を含む。自己抗体が役割を果たす他の障害としては、シェーグレン症候群及び免疫血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）が挙げられる。

癌：近年の研究は、多くの癌が、疾患の進行及び腫瘍細胞の死滅に寄与する免疫構成要素を有することを示している。特定の癌は、Ｔｈ１またはＴｈ２表現型に向かう偏在と関連付けられている。Ｔｈ１様細胞は、典型的に細胞媒介免疫の促進、細胞傷害性応答の惹起に関与し、一般に宿主の重要な抗癌機序の１つであると考えられている。Ｔｈ１サイトカインＩＦＮ−ｇが、インビボでの抗腫瘍活性を促進し得ることが示されている（Ｉｋｅｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．１３：９５−１０９，２００２）。Ｉｔｏら（Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ２５：２０２７−２０３１，２００５）は、非小細胞肺癌腫患者において、ＩＩ期またはＩＩＩ期癌において、低い末梢血Ｔｈ１／Ｔｈ２比率を有する対象が、高いＴｈ１／Ｔｈ２比率を有する対象よりも有意に良好な予後を有したことを記載する。Ｄａｉら（Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３６（４）：２４８−５７，２０１３）は、マウスモデルにおける卵巣腫瘍及びメラノーマ腫瘍の排除が、Ｔｈ２環境から細胞傷害性Ｔｈ１環境への変化と関連付けられることを実証した。更に、Ｔｈ１７細胞は、特定の研究において腫瘍細胞に対して細胞傷害性であることが示されているが、他の研究において好ましくない結果の指標ともなり得る（Ｍｕｒａｎｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ１２１：２４０２−２４１４，２０１３）。本明細書の方法は、治療前後で癌において偏在するＴｈ集団を識別するため、及び癌治療剤の投与を変更して、Ｔｈ１集団を、対象における腫瘍の退行を促進する集団へと偏在させるために有用である。

本明細書に企図される例示的な癌としては、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、肛門癌、肛門直腸癌、肛門管癌、虫垂癌、小児小脳星細胞腫、小児大脳星細胞腫、基底細胞癌腫、皮膚癌（非メラノーマ）、胆道癌、肝外胆管癌、肝内胆管癌、膀胱癌（ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｎｃｅｒ）、膀胱癌（ｕｒｉｎａｒｙ ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｎｃｅｒ）、骨及び関節癌、骨肉腫及び悪性線維性組織球腫、脳癌、脳腫瘍、脳幹神経膠腫、小脳星細胞腫、大脳星細胞腫／悪性神経膠腫、上衣腫、髄芽細胞腫、テント上原始神経外胚葉腫瘍、視覚路及び視床下部膠腫、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫瘍、胃腸、神経系癌、神経系リンパ腫、中枢神経系癌、中枢神経系リンパ腫、子宮頸癌、小児癌、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性障害、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、リンパ系腫瘍、菌状息肉腫、セザリー症候群、子宮内膜癌、食道癌、頭蓋外細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、眼（ｅｙｅ）癌、眼内メラノーマ、網膜芽細胞腫、胆嚢癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ及びｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、胃腸カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、胚細胞腫瘍、卵巣胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛腫瘍膠腫、頭頸部癌、肝細胞（肝臓）癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、眼内メラノーマ、眼癌（ｏｃｕｌａｒ ｃａｎｃｅｒ）、島細胞腫瘍（膵島）、カポジ肉腫、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ ｃａｎｃｅｒ）、腎臓癌（ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、有毛細胞性白血病、口唇及び口腔癌、肝臓癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、ワルデンストアームマクログロブリン血症（Ｗａｌｄｅｎｓｔｒａｍ ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）、髄芽腫、メラノーマ、眼内（眼）メラノーマ、メルケル細胞癌腫、悪性中皮腫、中皮腫、転移性扁平上皮性頸部癌、口癌（ｍｏｕｔｈ ｃａｎｃｅｒ）、舌癌、多発性内分泌腫瘍症候群、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、慢性骨髄増殖性障害、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔癌（ｏｒａｌ ｃａｎｃｅｒ）、口腔癌（ｏｒａｌ ｃａｖｉｔｙ ｃａｎｃｅｒ）、口腔咽頭癌、卵巣癌、卵巣上皮癌、卵巣低悪性度腫瘍、膵臓癌、島細胞膵臓癌、副鼻腔及び鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、松果体芽細胞腫及びテント上原始神経外胚葉腫瘍、下垂体部腫瘍、形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、前立腺癌、直腸癌、腎盂及び尿管、移行上皮癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、ユーイング肉腫腫瘍ファミリー、カポジ肉腫、軟部組織肉腫、子宮癌、子宮肉腫、皮膚癌（非メラノーマ）、皮膚癌（メラノーマ）、メルケル細胞皮膚癌腫、小腸癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌腫、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ及びｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、テント上原始神経外胚葉腫瘍、精巣 癌、咽喉癌、胸腺腫、胸腺腫及び胸腺癌、甲状腺癌、腎盂及び尿管ならびに他の泌尿器の移行上皮癌、妊娠性絨毛腫瘍、尿道癌、子宮内膜性子宮癌、子宮肉腫、子宮体癌、膣癌、外陰癌、ならびにウィルムス腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、腫瘍は、乳癌、メラノーマ、前立腺癌、膵臓癌、頭頸部癌、肺癌、非小細胞肺癌腫、腎臓癌、結腸直腸癌、結腸癌、卵巣癌、肝臓癌、及び胃癌からなる群から選択される癌と関連付けられる。いくつかの実施形態において、癌は膵臓癌である。

本明細書の方法によって企図される追加の疾患、障害、または病態としては、炎症、自己免疫疾患、軟骨炎症、線維性疾患及び／または骨分解、関節炎、リウマチ性関節炎、若年性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、小関節若年性リウマチ性関節炎、多関節型若年性リウマチ性関節炎、全身型若年性リウマチ性関節炎、若年性強直性脊椎炎、若年性腸炎性関節炎、若年性反応性関節炎、若年性ライター症候群、ＳＥＡ症候群（血清陰性、腱付着部症、関節症症候群）、若年性皮膚筋炎、若年性乾癬性関節炎、若年性強皮症、若年性全身性エリテマトーデス、若年性脈管炎、小関節リウマチ性関節炎、多関節型リウマチ性関節炎、全身型リウマチ性関節炎、強直性脊椎炎、腸炎性関節炎、反応性関節炎、ライター症候群、ＳＥＡ症候群（血清陰性、腱付着部症、関節症症候群）、皮膚筋炎、乾癬性関節炎、強皮症、全身性エリテマトーデス、脈管炎、筋炎、多発性筋炎、皮膚筋炎、骨関節炎、結節性多発性動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、動脈炎、リウマチ性多発性筋痛（ｐｌｏｙｍｙａｌｇｉａ ｒｈｅｕｍａｔｉｃａ）、サルコイドーシス、強皮症、硬化症、原発性胆汁性硬化症、硬化性胆管炎、シェーグレン症候群、乾癬、尋常性乾癬、滴状乾癬、逆乾癬（Ｉｎｖｅｒｓｅ ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）、膿疱性乾癬、乾癬性紅皮症、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、アテローム性動脈硬化症、スチル病、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症、重症筋無力症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、セリアック病、多発性硬化症（ＭＳ）、喘息、ＣＯＰＤ、ギラン・バレー病、Ｉ型真性糖尿病、グレーブス病、アジソン病、レイノー現象、自己免疫肝炎、及びＧＶＨＤなどが挙げられるが、これらに限定されない。

標識
いくつかの実施形態において、抗体物質は、その検出を促進するために標識される。「標識」、「検出可能な標識」、または「検出可能な部分」は、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、化学的、または他の物理的手段によって検出可能な組成物である。例えば、本開示における使用のために好適な標識としては、放射性標識（例えば、３２Ｐ）、フルオロフォア（例えば、フルオレセイン）、高電子密度試薬、酵素（例えば、ＥＬＩＳＡにおいて一般的に使用されるもの）、ビオチン、ジゴキシゲニン、またはハプテン、ならびに、例えば、ハプテンもしくはペプチド内に放射標識を組み込むことによって検出可能となり得るか、あるいはハプテンもしくはペプチドに特異的に反応する抗体を検出するのに使用されるタンパクが挙げられる。

標識の例としては、本明細書に記載される蛍光色素、放射標識（例えば、^３Ｈ、^１２５Ｉ、^３５Ｓ、^１４Ｃ、または^３２Ｐ）、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、及びＥＬＩＳＡにおいて一般的に使用される他のもの）、ならびにコロイド金、色ガラス、プラスチックビーズ（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスなど）などの比色標識が挙げられるが、これらに限定されない。

標識は、当該技術分野において周知の方法に従って、アッセイの所望される構成要素に直接的または間接的に結合され得る。好ましくは、一実施形態において、標識は、本明細書に従う活性剤の共役のためのイソシアネート試薬を使用してバイオポリマーに共有結合される。本開示の一態様において、本開示の二機能性イソシアネート試薬は、バイオポリマーに標識を共役させて、活性剤が結合しない標識バイオポリマー共役体を形成するために使用され得る。標識バイオポリマー共役体は、本開示に従う標識された共役体の合成のための中間体として使用されてもよく、またはバイオポリマー共役体を検出するために使用されても良い。上記に示すように、標識の選択は必要とされる感受性、アッセイの所望される構成要素との共役の容易さ、安定性要求、利用可能な計測手段、及び処分設備によって、幅広い標識が使用され得る。非放射性標識は、しばしば間接的な手段で結合される。一般に、リガンド分子（例えば、ビオチン）は分子に共有結合される。その後、リガンドは、本質的に検出可能であるか、検出可能な酵素、蛍光化合物、または化学発光化合物などの信号系に共有結合されるかのいずれかである、別の分子（例えば、ストレプトアビジン）分子に結合する。

本開示の化合物はまた、例えば、酵素またはフルオロフォアとの共役によって、信号生成化合物に直接共役され得る。標識としての使用のために好適な酵素としては、加水分解酵素、特にホスファターゼ、エステラーゼ、グリコシダーゼ、またはオキシドターゼ（ｏｘｉｄｏｔａｓｅ）、特にペルオキシダーゼが挙げられるが、これらに限定されない。標識としての使用のために好適な蛍光化合物、すなわち、フルオロフォアとしては、フルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロンなどが挙げられるが、これらに限定されない。好適なフルオロフォアの更なる例としては、エオシン、ＴＲＩＴＣ−アミン、キニーネ、フルオレセインＷ、アクリジンイエロー、リサミンローダミン、Ｂスルホニルクロライドエリスロセイン、ルテニウム（トリス、ビピリジニウム）、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、フラビンアデニンジヌクレオチドなどが挙げられるが、これらに限定されない。標識としての使用のために好適な化学発光化合物としては、ルシフェリン及び２，３−ジヒドロフタラジンジオン、例えば、ルミノールが挙げられるが、これらに限定されない。本開示の方法において使用され得る様々な標識化または信号発生系の概説については、米国特許第４，３９１，９０４号を参照されたい。

方法
本開示は、治療剤での治療の文脈において、Ｔｈｌ／Ｔｈ２／Ｔｈ１７／Ｔｈ２２細胞などのＴ細胞集団及び／またはＣＴＬサブセットにおける細胞信号伝達変化の測定を可能にする全血刺激法を提供する。例えば、本開示は、抗ＴＳＬＰ中和抗体で治療される喘息患者において、Ｔｈ２プロファイルから離れる偏在を実証する。更に、ベースラインでのサイトカイン発現プロファイルの判定は、治療を受ける患者の亜集団を特性評価し、患者に対する治療剤投与のレベルを調整するために有用である。このアッセイは、多発性炎症疾患の臨床試験において、Ｔ細胞サブセットを評価するために有用である。この特異的適用は、ヒト臨床試験において以前に実証されていない。

本明細書の方法は、患者からの試料中のＴｈ２細胞及びＴｈ１細胞の比率を検出することであって、Ｔｈ２特異的及びＴｈ１特異的サイトカインのレベルを測定することを含み、本方法は、ａ）試料を、ｉ）２つ以上のＴｈ２サイトカインに結合する２つ以上の特異的結合剤であって、Ｔｈ２特異的サイトカインに対する２つ以上の特異的結合剤が、第１のフルオロフォアで標識される、２つ以上の特異的結合剤、及びｉｉ）Ｔｈ１サイトカインに結合する少なくとも１つの特異的結合剤であって、Ｔｈ１サイトカインに対する特異的結合剤が、第１のフルオロフォアとは異なる第２のフルオロフォアで標識される、少なくとも１つの特異的結合剤、と接触させることと、ｂ）試料中の第１及び第２のフルオロフォアのレベルを測定し、検出されたＴｈ１特異的及びＴｈ２特異的フルオロフォアのレベルに基づいて、細胞をＴｈ１またはＴｈ２細胞として指定することと、ｃ）試料中のＴｈ２細胞対Ｔｈ１細胞の比率を判定することと、を含む、検出することを提供する。本方法は、任意でＴｈ１７細胞の比率を判定するために実行され、Ｔｈ１７サイトカインは、本明細書に記載される第３のフルオロフォアで標識される。

本方法はまた、Ｔｈ１細胞／Ｔｈ１７細胞及びＴｈ２細胞／Ｔｈ１７細胞の比率を判定するためにも適合される。逆の比率、すなわち、本明細書に述べられる比率の分子及び分母の反転が、上記の方法を使用して計算されることもまた企図される。

様々な実施形態において、Ｔｈ２サイトカインは、ＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１３からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、Ｔｈ１サイトカインは、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ｇ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−ａ）、及びＩＬ−２からなる群から選択される。様々な実施形態において、Ｔｈ１７サイトカインは、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＦＮ−ｇ、及びＩＬ−２２からなる群から選択される。様々な実施形態において、特異的結合剤は、Ｔｈ１特異的、Ｔｈ２特異的、またはＴｈ１７特異的サイトカインに特異的な抗体である。

ＣＤ８＋ＣＴＬを検出する方法もまた、企図される。本開示は、多機能ＣＴＬなどのＣＴＬのサブセットを検出するための方法であって、ａ）試料を、１つ以上の多機能ＣＴＬサイトカインに結合する１つ以上の特異的結合剤であって、多機能ＣＴＬサイトカインに対する１つ以上の特異的結合剤が、第１のフルオロフォア及び／または第２のフルオロフォア及び／または第３のフルオロフォアで標識される、１つ以上の特異的結合剤と接触させることと、ｂ）試料中の第１及び第２及び／または第３のフルオロフォアのレベルを測定し、検出された特異的フルオロフォアのレベルに基づいて、細胞を多機能ＣＴＬ細胞として指定することと、ｃ）試料中の他のＴ細胞（例えば、試料中のＴｈ、Ｔｒｅｇ、ＮＫＴ、またはｇｄＴ）に対する多機能ＣＴＬの比率を判定することと、を含む、方法を提供する。

様々な実施形態において、多機能ＣＴＬサイトカインは、ＩＦＮ−ｇ、ＩＬ−１７、ＴＮＦ−ａ、及びＩＬ−２からなる群から選択される。
一実施形態において、サイトカインは、細胞内で接触させられる。細胞内での接触は、フローサイトメトリーのための細胞内染色の当該技術分野において記載されるプロトコルに従って実行される（例えば、Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ Ｔｈｅｒ．８（４）：Ｒ１３６，２００６、Ｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ２５：２０２７−２０３１，２００５を参照されたい）。簡潔に述べると、細胞は試料から得られ、例えば、固定透過処理緩衝剤を使用して、固定、透過処理される。その後、細胞は、サイトカインなどの標的抗原に結合する特異的結合剤によって細胞に接触する。細胞は、実施例に記載されるように、任意で、固定前にＰＭＡ／イオノマイシンまたは別の刺激剤を使用してインビトロ刺激される。

いくつかの実施形態において、サイトカインは、細胞外で接触させられる。特定の実施形態において、サイトカインは、細胞からインビトロで分泌されるか、またはにおいて流体試料中で検出可能である。その後、試料流体は、対象となるサイトカインに結合する特異的結合剤と接触させられ、サイトカインのレベルが判定され得、サイトカインのレベルは、対象試料における特定のＴｈ１、Ｔｈ２、もしくはＴｈ１７表現型またはＣＴＬ集団に対する偏在を予測する。細胞がインビトロ刺激される場合、流体中に排出されるサイトカインが測定され得る。

試料は、治療剤の投与の前後の様々な時点で得られることが企図される。治療剤の投与と同時に試料を得ることは、薬剤がそれらの治療効果を発揮する期間中に重複が存在する限り、薬剤が試料を得るのと同時に投与されることを必要としない。同時または段階的タイミングが企図される。

特定の実施形態において、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔ１７細胞またはＣＴＬの相対数（割合（％））は、治療剤の投与の前後の様々な時点で比較される。特定の実施形態において、治療剤の投与は、対象から収集された試料中に存在するＴｈ２細胞の相対数の減少を引き起こす。

薬剤が分析のための試料を得るのと同時に投与されることが企図され、同時にとは試料を得る前後３０分以内に薬剤が与えられることを指す。
別の態様において、治療剤は試料を得る前に投与される。投与前とは、試料を得る１週間前から、最大で試料を得る３０分前の範囲以内の薬剤の投与を意味する。薬剤が、試料を得ることに後続して投与されることが更に企図される。後続投与は、治療の３０分後から、最大で治療剤投与の１週間後までの投与を記載することが意味される。

特定の実施形態において、試料を得る前に、治療剤は、１週間、２週間、３週間、４週間、６週間、２ヶ月間、３ヶ月間、またはそれを超えて投与される。
様々な実施形態において、喘息患者はアトピー性喘息または軽度の喘息を有する。特定の実施形態において、Ｔｈ２／Ｔｈ１比率は、Ｔｈ２表現型に向かって偏在し、この偏在は、Ｔｈ２パスウェイを標的化する治療剤での治療の候補として患者を識別し得る。様々な実施形態において、Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞の比率が約０．２以上である場合、患者はＴｈ２標的化治療の候補であり得る。

特定の実施形態において、Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞の比率が、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、またはそれを超えて減少する場合、患者は、喘息治療に対して応答性であるとして識別される。様々な実施形態において、Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞の比率は、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、もしくは９０％、または２０〜４０％、４０〜６０％、６０〜８０％、もしくは５０〜９０％の範囲内で減少する。一実施形態において、患者が治療に対して応答性であると識別されるＴｈ２／Ｔｈ１比率は、約０．１以下である。

様々な実施形態において、本開示は、免疫不全の治療において、抗ＴＳＬＰ剤の用量レジメンを変更する方法であって、試料中のＴｈ２細胞／Ｔｈ１細胞、及び／またはＴｈ１７細胞の比率を判定し、Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞、及び／またはＴｈ１７細胞の比率が治療中に変化する場合、抗ＴＳＬＰ抗体の用量を変更することを含み、Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞の比率が安定しているか、または増加し、Ｔｈ２プロファイルに向かう偏在（すなわち、Ｔｈ２細胞の割合の増加及び／またはＴｈ１細胞の割合の減少）を示す場合、治療剤の用量が増加され、Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞の比率が減少し、Ｔｈ２プロファイルの低減（すなわち、Ｔｈ２細胞の割合の減少及び／またはＴｈ１細胞の割合の増加）を示す場合、治療剤の用量が減少される、方法を提供する。特定の実施形態において、用量レジメンは変更されない。むしろ、用量レジメンは本アッセイの結果として継続される。

一実施形態において、本方法は、フローサイトメトリーによるＴｈｌ細胞、Ｔｈ２細胞、及びＴｈ１７細胞の７色細胞内サイトカインアッセイ、ならびに全血中のＴｈ１７細胞表面マーカー及びメモリーＴ細胞サブセットのための６色免疫表現型検査パネルのための検証プロトコルを提供する。特定の実施形態において、Ｔｈ２サイトカイン産生細胞の割合（％）は、１〜５％の範囲である。刺激されていない試料が、０．１６％のバックグラウンドレベルを示した一方で、染色を遮断するための標識されていない検出抗体での事前インキュベーションは、０．５％の下限を示唆することが見出された。縦方向サンプリング及び単離ＣＲＴＨ２＋細胞を使用するスパイク回収実験は、アッセイが経時的なＴｈ２細胞の変化を検出するのに十分に感受性であることを示唆する。

一実施形態において、アッセイは、ヒト末梢血試料中の特定の細胞集団からのサイトカイン産生（特に、ＩＬ−２、ＩＬ−４−５−１３、１Ｌ−１７Ａ、ＩＬ−２２、ＩＦＮ−ｙ、ＴＮＦ−ａ）を測定するための全血フローサイトメトリー法である。この方法は、喘息対象における吸入アレルゲン負荷試験での、Ｔｈ２特異的細胞内サイトカイン産生の低減及びＴＳＬＰ特異性抗体によるＴｈ２／Ｔｈ１比率の変化を実証するために使用された。記載されるアッセイは、抗ＴＳＬＰ抗体などの抗炎症治療のための、ならびに広くは免疫関連障害のための薬力学的活性、用量選択、及び患者階層化を実証することにおいて有用性を有する。

本方法はまた、Ｔｈ２特異的サイトカインから離れるか、またはそれに向かう偏在が、例えば、抗ＴＳＬＰ抗体を使用する治療の有効性における役割を果たすかどうかを判定するためにも有用である。本方法は、治療される患者においてＩＬ−４、ＩＬ−５、またはＩＬ−１３のレベルが変化するかどうか、及び治療利益を最大化するために治療剤投与がどのように変化され得るかを判定し得る。

投与及び投薬
一態様において、本開示の方法は、任意で薬学的に許容される担体または賦形剤において、治療剤を投与するステップを含む。特定の実施形態において、薬学的組成物は、無菌組成物である。

投与は、治療剤を哺乳類対象に直接的または間接的に導入するための任意の医学的に許容される手段を使用して実行され、これには、注入、経口摂取、鼻腔内、局所的、経皮、非経口、吸入噴霧、腟内、または直腸内投与が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、非経口という用語は、皮下、静脈内、筋肉内、及び嚢内注入、ならびにカテーテルまたは輸注技術を含む。皮内、乳房内、腹腔内、髄腔内、球後、肺内、及びまたは特定の部位での外科的植め込みによる投与もまた、企図される。

一実施形態において、投与は、全身的に、あるいはその部位への直接注入による、または製剤を内部に送達し得る持続的送達もしくは持続的放出機序を介した治療を必要とする癌、線維症、もしくは罹患した組織の部位で実行される。例えば、生分解性ミクロスフェアもしくはカプセル、または組成物の持続的送達が可能な他の生分解性ポリマー構成（例えば、可溶性ポリペプチド、抗体、もしくは小分子）が、癌、線維症、もしくは罹患した組織もしくは器官の近く、またはその部位に植め込まれる、本開示の製剤中に含まれ得る。

治療組成物はまた、複数の部位で患者に送達され得る。複数投与は、同時に与えられても、またはある期間にわたって投与されても良い。特定の場合、治療組成物の継続的流動を提供することが有益である。追加の治療は、期間に基づいて、例えば、毎時、毎日、毎週、２週間に１回、３週間に１回、毎月、またはより長い間隔で与えられ得る。

本開示において、本明細書に記載される第２の薬剤（抗炎症剤、化学療法剤、または線維症の治療に有用な薬剤が挙げられるが、これらに限定されない）と併用される抗体組成物などの、複数の薬剤の投与もまた企図される。

所与の投与量における抗体などの治療剤の量は、治療が与えられる個体の大きさ及び治療される障害の特徴に従って変動し得る。例示的な治療において、約１ｍｇ／日、５ｍｇ／日、１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、５０ｍｇ／日、７５ｍｇ／日、１００ｍｇ／日、１５０ｍｇ／日、２００ｍｇ／日、２５０ｍｇ／日、５００ｍｇ／日、または１０００ｍｇ／日を投与することが必要であり得る。これらの濃度は、単回剤形として、または複数用量として投与され得る。まず動物モデルにおける、及びその後の臨床試験における標準用量応答研究は、特定の疾患状態及び患者集団に対する最適な投与量を明らかにする。

従来の治療剤が本開示の治療剤との組み合わせで投与される場合、投薬は修正されても良いことは明らかであろう。
キット
追加の一態様として、本開示は、本開示の方法を実行するためのそれらの使用を促進する様式でパッケージ化された１つ以上の化合物または組成物を含むキットを含む。一実施形態において、そのようなキットは、本明細書に記載される化合物または組成物（例えば、単体で特異的結合剤を含む組成物、または標識もしくはフルオロフォアに付加された特異的結合剤を含む組成物）を含み、これは、容器に付加される、あるいはパッケージ内に含まれる、本方法を実行する上での化合物または組成物の使用を記載するラベルとともに、密封瓶または管などの容器中にパッケージ化される。好ましくは、化合物または組成物は、単位剤形中にパッケージ化される。

本開示の追加の態様及び詳細は、限定的ではなく、例示的であることが意図される以下の実施例から明らかになるであろう。

実施例１
材料及び方法
試験参加者
適格な参加者は、陽性皮膚穿刺試験によって確認された軽度の安定したアトピー性喘息、予測の７０％以上の１秒間の強制呼気量（ＦＥＶ）（ＦＥＶ_１）、及び気道過敏症を有する、１８〜６０歳までの年齢の非喫煙者の男性及び女性であった。参加者は、彼らの喘息に影響を与える花粉の季節外で試験され、他の肺疾患を有しなかった。一切の喘息制御剤治療は許可されず、１週間に２回未満使用される、救命治療としての短時間作用性β_２アゴニストの吸入が許容された。全ての他の喘息薬物療法は、登録の少なくとも４週前に中断された。喘息の悪化、６週間以内の救急科への呼吸器関連の来院、ＡＭＧ１５７の以前の使用、またはＡＭＧ１５７賦形剤に対する既知の感受性については、参加者を除外した。

試験設計及び監視
この概念証明、無作為化、二重盲検、プラセボ対照試験を、カナダにおける５つの施設において実行した。双方向音声応答システムによって参加者を無作為に１：１に割り当て、試験日１日目、２９日目、及び５７日目に、１時間の静脈内輸注によって７００ｍｇのＡＭＧ１５７またはプラセボを受けさせた。−１５、−１４、及び−１３日目、４１、４２、４３、８３、８４、及び８５日目にアレルゲン及びメタコリン吸入負荷を実行した。−１５、−１３、１、４１、４３、８３、及び８５日目に分画呼気一酸化窒素（ＦＥＮＯ）レベルを測定し、−１５、−１４、−１３、１、４１、４２、４３、８３、８４、及び８５日目に誘発喀痰を測定し、−１５、１、２９、４３、５７、８５、１１３、及び１６９日目に血液試料を測定した。一次エンドポイントは、ＦＥＶ_１における最大低下割合（％）及びＦＥＶ_１における時間調整低下割合（％）の曲線下面積（ＡＵＣ）（％ＦＥＶ１−時間ＡＵＣ）として表現された後、アレルゲン負荷後３〜７時間の間に測定された遅発性喘息反応（ＬＡＲ）であった。二次エンドポイントは、最小ＦＥＶ_１及び時間調整最小ＦＥＶ_１のＡＵＣ（ＦＥＶ１−時間ＡＵＣ）によって測定されたＬＡＲ、アレルゲン負荷後０〜２時間の間に測定された即時型喘息反応（ＥＡＲ）、ならびにＡＭＧ１５７の安全性、副作用プロファイル及び免疫原性であった。探索エンドポイントは、喀痰及び血中好酸球、ＦＥＮＯ、Ｔｈ２サイトカイン、Ｔｈ２／Ｔｈ１細胞比率及び血中全ＩｇＥ、ならびにメタコリンＰＣ_２０を含んだ。安全性評価は、有害事象の発生率及び重症度、心電図の変化、実験室プロファイル、生命徴候、ならびに抗ＡＭＧ１５７抗体の存在を含んだ。

試験プロトコルは各参加施設における施設内研究倫理委員会によって承認され、全ての参加者は書面でのインフォームドコンセントを提供した。
実験室手順
吸入するアレルゲンは、皮膚穿刺試験の結果を使用して選択された。アレルゲン吸入負荷を、記載するように実行した。^１４−１４日目のスクリーニング負荷中、アレルゲンの１０分後でのＦＥＶ_１における２０％以上の低下が到達されるまで、２〜３ｍＬの溶液を充填したＷｒｉｇｈｔネブライザー（Ｒｏｘｏｎ，Ｑｕｅｂｅｃ）からの換気呼吸によって、倍加する濃度のアレルゲンを２分間かけて吸入させた。その後、規則的な間隔で７時間、ＦＥＶ_１を測定した。ＥＡＲ（０〜２時間）エンドポイント及びＬＡＲ（３〜７時間）エンドポイントを計算した。アレルゲン用量の選択及びメタコリン負荷を、記載するように実行した。^１５白血球、全ＩｇＥ、及びサイトカインについて静脈血をサンプリングし、標準的な方法を使用して、誘発喀痰から気道好酸球をサンプリングした。^１６ＦＥＮＯ測定は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｏｃｉｅｔｙのガイドラインに従った。^１７
統計学的分析
３０人（１治療群当たり１５人）の参加者の試料の大きさを、１治療群当たり１５人の参加者が、ＡＭＧ１５７プラセボのＬＡＲ減弱効果を区別するのに十分な検出力を提供することを示唆する以前の研究^{１８〜２０}からの経験的証拠に基づいて、選択した。各エンドポイントのための分析集団は、少なくとも１用量のＡＭＧ１５７またはプラセボを受けた、無作為化された全ての参加者からの全ての入手可能なデータを含み、受けた初期治療に従ってデータを分析した。独立変数としての治療及び来院、治療／来院相互作用項、及びモデル共変数としての対応する事前用量測定を含む反復測定分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）を使用して、ＥＡＲ及びＬＡＲを分析した。平均治療差異、対応する９５％信頼区間（ＣＩ）、及び両側Ｐ値を各来院毎に推定し、報告した。反復測定ＡＮＣＯＶＡ（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｌ Ａｐｐｅｎｄｉｘ）を使用して、探索エンドポイントを分析した。要約データを平均±ＳＥＭとして報告し、対数正規分布するエンドポイントを幾何平均（９５％ＣＩ）として提示する一方で、カテゴリーデータを数（％）として提示する。

結果
試験集団
合計３１人の参加者を無作為化し、１６人をＡＭＧ１５７に、１５人をプラセボに割り当てた。全ての参加者が、無作為化スケジュールに従って少なくとも１用量の試験薬を受けた。約１８ヶ月間、試験を実行した。２８人の参加者（９０％）が全介入期間を終了し、２７人（８７％）が試験を終了した。試験を終了しなかった４人の参加者のうち３人が追跡不能（プラセボが２人、ＡＭＧ１５７が１人）であり、１人の参加者が喘息の悪化のために３４日目で中止した（ＡＭＧ１５７）。各群１人の参加者が８４日目のアレルゲン負荷を終了せず、１人の参加者がＬＡＲ測定前に８４日目のアレルゲン負荷を中止した（ＡＭＧ１５７）。２つの群において、人口統計及び吸入アレルゲンは類似し、２つの群の間で測定されたベースライン変数のうちのいずれにおいても有意な差異は存在しなかった。

エンドポイント
ＡＭＧ１５７治療は、４２及び８４日目で、４つのアレルゲン負荷エンドポイントのそれぞれにおいて、プラセボと比較してＬＡＲ及びＥＡＲの両方を部分的に減弱した（図１、図２）。統計学的に有意なＡＭＧ１５７に関連付けられる減弱は、最後の注入の追加の利益なしで、４２日目のＬＡＲ最小ＦＥＶ_１及びＦＥＶ_１時間調整ＡＵＣ_{３〜７時間}について、ならびに８４日目のＦＥＶ_１におけるＬＡＲ最大低下割合（％）及び最小ＦＥＶ_１について達成された。遅発型反応中のＦＥＶ１における最大減少割合（％）は、４２日目にはプラセボ群よりもＡＭＧ−１５７群において３４．０％小さく（Ｐ＝０．０９）、８４日目には４５．９％（１１．７％対２１．６の減少）小さかった（Ｐ＝０．０２）。ＡＭＧ−１５７群の患者は、プラセボ群の患者と比較して、遅発型反応中、４２日目には最小ＦＥＶ１において有意な増加（Ｐ＝０．０１）、及び時間調整最小ＦＥＶ_１のＡＵＣにおいて有意な増加（Ｐ＝０．０２）を有し、８４日目には最小ＦＥＶ_１（Ｐ＝０．０１）を有した。更に、即時型反応中、４２日目には、プラセボ群よりもＡＭＧ−１５７群において、ＦＥＶ_１の時間調整減少割合（％）のＡＵＣは有意に小さく、時間調整最小ＦＥＶ_１のＡＵＣは有意に大きく（両方の比較についてＰ＝０．０３）、８４日目には、ＦＥＶ_１の時間調整減少割合（％）のＡＵＣは有意に小さかった（Ｐ＝０．０３０）（図１及び２）。

平均ベースライン血中好酸球数は、ＡＭＧ１５７について、−１５日目での２９６．５±４０．２×１０^６／Ｌから２９日目で１２１．９±１４．７×１０^６／Ｌへと減少し、プラセボについて、−１５日目での２８１．１±５７．３×１０^６／Ｌから２９日目で２２４．１±３６．５×１０^６／Ｌへと減少した。（図３Ａ）。血中好酸球数は４３及び８５日目でアレルゲン後に増加したが、そのレベルは、プラセボと比較して、ＡＭＧ１５７治療について有意により低かった（全体的な治療効果Ｐ＝０．００４）。

ＡＭＧ１５７治療は、アレルゲン負荷の前後で喀痰好酸球を減少させた。平均事前アレルゲン喀痰好酸球レベルは、−１５日目での４．１±２．３％から８３日目で０．４±０．１％へと低減した。プラセボと比較して、ＡＭＧ１５７は、試験の過程にわたって事前アレルゲン喀痰好酸球レベルを有意に低減させ（全体的な治療効果Ｐ＝０．０１５）（図３Ｂ）、負荷の２４時間後のアレルゲン誘発変化を有意に減弱した（全体的な治療効果Ｐ＝０．００４）。

Ｆ_ＥＮＯは、ベースライン条件下では、両方の治療群において上昇した。プラセボと比較して、ＡＭＧ１５７治療は、試験全体を通してＦ_ＥＮＯを有意に減少させ（全体的な治療効果Ｐ＝０．００２）、負荷の２４時間後のアレルゲン誘発変化を有意に減弱した（全体的な治療効果Ｐ＝０．０２）（図３Ｃ）。

ＡＭＧ１５７での治療は、４１及び８３日目に測定される事前アレルゲンＦＥＶ_１値を有意には変化させなかった。８３及び８５日目には、プラセボと比較して、ＡＭＧ１５７についてメタコリンＰＣ_２０の有意な増加が存在した（ｐ＜０．０５）。メタコリンＰＣ_２０のアレルゲン誘発変化（４１〜４３日目及び８３〜８５日目）は、ＡＭＧ１５７治療について数値的に低く、プラセボと比較して、ＡＭＧ１５７についてそれぞれ０．７６及び０．４９の倍加する用量で増加したが、この差異はプラセボと比較して統計学的に有意ではなかった（図２）。ＨｕｍａｎＭＡＰ（登録商標）ｖ．２．０パネルにおいて、全ＩｇＥまたは定量化可能血清マーカーに対するＡＭＧ１５７の影響は存在しなかった。インターロイキン４、５、及び１３、ならびにＴＮＦレベルは、試料の９５％未満において、定量化レベル未満であった。

治療される患者からの試料において、幾何平均Ｔｈ２／Ｔｈ１比率（９５％信頼間隔）を測定した。ＡＭＧ１５７での治療は、数値的にはＴｈ２／Ｔｈ１細胞比率と関連付けられたが、プラセボよりも統計学的に低くはなかった（ＡＮＯＶＡのｐ値は、治療の主要効果について０．０５８、時間相互作用による治療について０．３６７であった）。Ｔｈ２／Ｔｈ１比率の減少は、主にＴｈ２細胞の減少によって駆り立てられた。ヘパリンナトリウムバキュテナー中に血液試料を収集し、収集後２４時間以内に実験室手順を開始した。サイトカイン産生細胞のサブセットを分類するために、まず、タンパク質輸送阻害剤ブレフェルジンＡの存在下、ホルボール１２−ミリスチン酸１３−酢酸（ＰＭＡ）及びイオノマイシンによって全血を活性化させた。具体的には、１０ｕＬの白血球活性化カクテル（ＬＡＣ，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を５００ｕＬのＲＰＭＩと混合し、その後、１５ｍＬの管（ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ）中、１−１で全血と組み合わせた。アッセイの確立中、（滴定ＰＭＡ／イオノマイシンと比較して）ＬＡＣ刺激レベルがＥＣ９０を超えることが見出されたため、ＬＡＣ刺激レベルを選択した。ＲＰＭＩ中、ブレフェルジンＡ（ＢＤ ＧｏｌｇｉＳｔｏｐ）の単独存在下で同様にインキュベートした試料アリコートを、陰性対照として含めた。３７℃で４時間インキュベーションし、１８℃で一晩保持した後、表面及び細胞内染色手順を実行した。

細胞内サイトカイン分析は、ＩＦＮ−γ（ＢＤ、クローン２５７２３．１１ＦＩＴＣ）、及びＩＬ−４（ＢＤ、クローン３０１０．２１１ＰＥ）と、ＩＬ−５（ＢＤ、クローンＪＥＳ１−３９Ｄ１０ＰＥ）と、ＩＬ−１３（ＢＤクローン、ＪＥＳ１０−５Ａ２ＰＥ）との組み合わせ分析を含んだ。検証されたＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩフローサイトメーター上で蛍光データを取得し、標準化されたテンプレートを使用して、ＦＣＳ Ｅｘｐｒｅｓｓソフトウェア（Ｄｅ Ｎｏｖｏ，Ｌｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓ ＣＡ）において分析を実行した。Ｔｈ１細胞を、ＩＦＮ−γは発現するが、ＩＬ−４、ＩＬ−５、またはＩＬ−１３は発現しないＣＤ３^＋ＣＤ８⁻Ｔ細胞として識別し、Ｔｈ２細胞を、ＩＬ−４、ＩＬ−５、またはＩＬ−１３は発現するが、ＩＦＮ−γは発現しないＣＤ３^＋ＣＤ８⁻Ｔ細胞として識別した。重要なエンドポイントは、ＡＭＧ１５７治療前後のＴｈ２細胞対Ｔｈ１細胞の比率であった。

変量因子としての対象とともに、用量後試験来院、治療群、及び来院と治療との間の相互作用を含む、ベースライン調整混合効果モデルにおける対数変換の後、Ｔｈ１、Ｔｈ２の割合（％）及びＴｈ２細胞／Ｔｈ１細胞の比率を分析した。ベースライン値を共変数として含めた。４１及び８３日目のみが、ＡＭＧ１５７暴露を有する時点での潜在的なＴｈ２／Ｔｈ１比率変化を試験するための統計学的分析に考慮された。ＡＮＯＶＡを使用して、治療群が全ての来院（用量項）にわたって、または任意の所与の時点（来院／治療相互作用項）で平均されたとき、治療群が異なるかどうかを評価した。図における信頼区間は、推定される平均の数について調整している（Ｄｕｎｎ−Ｓｉｄａｋ）。^＊プラセボと比較して、Ｐ＜０．０５。

循環するＴｈ２／Ｔｈ１細胞比率は、プラセボと比較して、ＡＭＧ１５７治療によって低減し、低減は４１日目には２９％（Ｐ＝０．０１６）、８３日目には２３％（Ｐ＝０．４７）であった（表１）。

安全性
ＡＭＧ１５７による治療は、測定された実験室値、温度、血圧、脈拍、または呼吸の変化とは関連付けられなかった。プラセボ治療には１２の有害事象が、及びＡＭＧ１５７には１５の有害事象が存在した。重篤有害事象または死亡は存在しなかった。１人のプラセボ治療参加者が抗ＡＭＧ１５７抗体に対して陽性反応を示し、ＡＭＧ１５７治療参加者には抗ＡＭＧ１５７抗体に対して陽性反応を示した者はいなかった。

考察
この試験は、モノクローナル抗体ＡＭＧ１５７による治療が、安定したアレルギー性喘息参加者において、全身性及び気道炎症のマーカーとともに、アレルゲン誘発性気管支収縮（ＥＡＲ及びＬＡＲ）のほとんどの測定を減弱することを実証した。そのようなものとして、データの重みは、マウスモデルにおいてアレルゲン誘発気道反応を誘発することにおける、文書化ＴＳＬＰの役割と一貫する。^２１ＡＭＧ１５７はまた、試験期間を通して、気道炎症（ＦＥＮＯ及び喀痰好酸球）の指標ならびに全身性炎症（循環する好酸球）を含む、ベースライン評価において測定された炎症変数の全てを低減した。好酸球の変化が、アレルゲン誘発性気管支収縮の減弱の原因となるのかどうかは未知である。この概念証明試験は、ＴＳＬＰが、アレルギー性喘息を有する患者において、アレルゲン誘発気道反応においてだけでなく、持続性気道炎症を引き起こすことにおいてもまた中枢的なサイトカインであることを示唆する。

ＴＳＬＰは、マウスモデルにおいて、アレルギー性炎症の「マスタースイッチ」として識別されている。^２２健康な個体からの上皮細胞に対して、喘息患者からの上皮細胞においてより高いレベルのＴＳＬＰが産生され^１１、ＴＳＬＰ遺伝子における多型は、小児アレルギー性喘息及び成人アレルギー性喘息の両方と関連付けられている。^{１３、２３}ＴＳＬＰは、ヒト主要組織適合抗原複合体Ｉ及びＩＩ、ならびに骨髄樹状細胞上でのＣＤ４０、ＣＤ８０、及びＣＤ８６などの同時刺激分子の発現を強く誘発した。^６ＴＳＬＰの誘発は、アレルゲン誘発性遅発型皮膚反応中、樹状細胞の皮膚内への浸潤に先行した。^２４ＴＳＬＰはまた、ヒトマスト細胞Ｔｈ２サイトカイン産生を誘発し得る。^８ＴＳＬＰは更に、ウイルス媒介過程において役割を果たし得る。^２５
ＴＳＬＰは、アレルギー性喘息患者において、インターロイキン−５及びインターロイキン−１３を含む炎症促進性のサイトカインの産生により、気道樹状細胞の活性化及びＴｈ２細胞の数の増加を通して、気道及び血中好酸球増加症を引き起こすと考えられる。^２１ＴＳＬＰはまた、マスト細胞^８、ＣＤ３４^＋前駆細胞^９、及び最も近年では２型自然リンパ球系細胞からのインターロイキン−５及びインターロイキン−１３の産生に影響を与えることが示されている。^２６インターロイキン−５の阻害は、アレルゲン誘発気道好酸球増加症を予防する^２７ことが以前に示されており、この仮定を裏付ける。他の気道上皮由来のサイトカイン、特にインターロイキン−２５及びインターロイキン−３３はまた、マウスモデルにおけるアレルゲン誘発気道炎症に関係付けられている^２８が、現在の所、それらをヒトにおけるアレルギー性喘息に関係付ける直接的な証拠は存在しない。

疫学的証拠は、小児喘息の病理生物学において、環境アレルゲンに対する重要な役割を裏付ける。^２９アレルギー性喘息患者によるアレルゲン吸入は、可逆性気流閉塞、気道過敏症、^３０ならびに好酸球性及び好塩基球性気道炎症を含む喘息の多くの徴候をもたらす。^３１アレルゲン吸入負荷は、アレルギー性喘息の機序の試験及び潜在的な新しい治療の評価のための貴重な臨床モデルとなっている。^{２０、３２}しかしながら、アレルゲン吸入は、アレルゲンに対して非アレルギー性であるか、アレルゲンに対して暴露されていない多くの喘息患者において、喘息の発症もしくは持続の原因とはならない。したがって、これらの患者における持続性気道炎症におけるＴＳＬＰの重要性は、現在の試験からは外挿され得ない。しかしながら、アレルギー性喘息参加者におけるアレルゲン誘発気道反応の薬理学的減弱は、非アレルギー性対象においてすら、以前に有効な喘息治療と関連付けられている。^５
気道マスト細胞及び好塩基球からのヒスタミン及びシステイニルロイコトリエンは、ＥＡＲ及びＬＡＲの主要部分に寄与する。^{３３、３４}ＬＡＲはまた、炎症性細胞、特に好塩基球及び好酸球のアレルゲン誘発流入によって引き起こされる。^{３１、３３}したがって、ＡＭＧ１５７は、マスト細胞活性化及び炎症性細胞動員の両方に対する作用を通して、これらの反応を減弱する可能性がある。

安全性の理由から、及び吸入コルチコステロイドまたはロイコトリエン受容体拮抗剤などの維持治療によるアレルゲン誘発気道反応の潜在的な修正を避けるため、定期的な維持喘息治療を受けておらず、ほぼ正常なベースライン肺機能を有する、安定したアレルギー性喘息患者においてこの試験を実行した。この患者集団を評価する他の研究のように、^{２０、３２、３３}参加者は、試験への登録時点で、増加したＦ_ＥＮＯ及び喀痰好酸球増加症とともに、気道炎症の証拠を有した。これらの安定した喘息患者において持続性気道炎症を引き起こす機序は未知である。何人かは、チリダニなどの遍在性のアレルゲンに定期的に暴露され得るが、これは研究された参加者のうちの半数未満を占めた（図２）。また、参加者はほぼ正常なベースラインＦＥＶ_１値を有したため、ベースラインＦＥＶ_１の改善を観察することは可能ではなかった。

全ての現在利用可能な喘息治療は、アレルゲン誘発気道反応の構成要素を減弱する。しかしながら、吸入コルチコステロイドのみが、Ｆ_ＥＮＯ及び好酸球のベースライン気道レベル^３５、ならびにこれらのパラメータにおけるアレルゲン誘発増加を減弱する。^３６この試験は、ＴＳＬＰの標的化が、ベースラインＦＥＮＯならびに血中及び気道好酸球増加症を低減し得ることを示す。重度の難治性喘息を有する何人かの患者は、高用量の吸入及び経口コルチコステロイドによる治療にも関わらず、持続性気道好酸球増加症を有する。Ｔｈ２サイトカイン、つまりインターロイキン−５、インターロイキン−１３、及びインターロイキン−４の標的化は、重度の喘息パラメータを改善している。重度の難治性喘息を有する患者におけるインターロイキン−５の標的化は、喘息増悪を低減し、経口コルチコステロイドの維持用量の低減を可能にした。^{３７、３８}これらの研究は、持続性気道好酸球増加症が、重度の難治性喘息を有する何人かの患者にとって重度な機序であることを示唆する。インターロイキン−１３を対象とした抗体は、「Ｔｈ２表現型」を有する喘息患者において、循環するペリオスチンのレベルの上昇によって示される様に、肺機能を改善することが示されている。^３９更に、インターロイキン−４受容体及びインターロイキン−１３受容体の共有の構成要素であるインターロイキン−４−受容体−αを対象とした抗体は、喘息制御を悪化させることなく、吸入コルチコステロイドと長時間作用性β_２アゴニストとの組み合わせによる維持治療の除去を可能にした。^４０これらの炎症促進性のサイトカインのそれぞれの産生は、上皮細胞ＴＳＬＰ産生及び樹状細胞活性化の結果（下流）であり得、これは、ＴＳＬＰの標的化がまた、これらの患者集団において利益を提供し得ることを示唆する。しかしながら、この潜在的な利益を評価するためには、更なる臨床研究が必要とされるであろう。

要約すると、ＡＭＧ１５７による１２週間の治療は、アレルギー性喘息参加者において、ベースラインＦ_ＥＮＯならびに血中及び喀痰好酸球を低減した。この治療はまた、これらの炎症性パラメータにおけるアレルゲン誘発変化、ならびにＥＡＲ及びＬＡＲを減弱した。これらの結果は、不良に制御された喘息を有する患者における、ＡＭＧ１５７の作用の機序及び臨床利益の調査についての更なる研究を裏付ける。

実施例２
実施例１におけるＴｈ２／Ｔｈ１比率を判定するために、細胞内サイトカイン染色を実行して、Ｔｈ１サイトカイン、つまりＩＦＮ−ｇ、ＴＮＦ−ａ、及び／またはＩＬ−２を発現する細胞と比較して、ＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１３などのＴｈ２サイトカインを発現する細胞の比率を判定する方法論を使用した。

Ｔｈ２関連サイトカインの検出を最大化するために、フィコエリトリン（ＰＥ）フルオロフォアで標識した抗サイトカイン抗体を使用して、ＩＬ４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１３サイトカインのそれぞれを検出した。これらのサイトカインの個々の測定及び集団的測定を、Ｔｈ１細胞を示す同一の細胞集団におけるＩＦＮ−ｇのレベルと比較した。

サイトカイン産生細胞の割合（％）を、表２に提示する。

この表は６人のドナーの結果であり、細胞の平均、最大、及び最小数を提供する。このアッセイにおいて、Ｔｈは、示されたサイトカイン（複数可）を発現するＣＤ３＋ＣＤ８−リンパ球の割合（％）として定義される。

相対絶対Ｔ細胞数が並行して判定される場合、このデータは細胞の数としても表現され得る。特定の実施形態において、正規化のために、参照カウントビーズを使用して細胞数を判定する。

パネル１の増加した信号対ノイズ比率（Ｓ／Ｎ）は、Ｔｈ２細胞の検出のために、ＩＬ−４−５−１３の組み合わせ測定を使用する利点を示唆する。ＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１３の大部分は、同一の細胞によって発現され、これはＩＬ−５及びＩＬ−１３について特に当てはまる。分析の結果を、表３に提示する。結果はまた、図４に図解的に提示され、治療される患者においてＴｈ２から離れる偏在を示す。

実施例３
本方法を使用して、乾癬患者及び亜急性皮膚エリテマトーデス（ＳＣＬＥ）患者からの試料を評価し、Ｔｈ１７細胞に対する影響を探した。ＳＣＬＥ試料は、刺激されていない対照が高レベルのＩＦＮ−ｇ及びＴＮＦ−ａを示し、このアッセイが、異なる型のループス関連疾患を患う患者のための治療を導くための診断的ツールとして有用で有り得ることを示唆したという意味において、特有であった（図５）。

上記の例示的な実施例で説明される本発明における多数の修正形態及び変形形態が、当業者に着想されることが予想される。したがって、添付の特許請求の範囲に示される限定のみが、本発明に課されるべきである。

本出願に引用される全ての出版物及び特許文書の全体が、あたかも個々の各出版物及び特許文書の内容が本明細書に組み込まれているかのように、同じ程度で、参照によって本明細書に組み込まれる。

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７．Ｒｅｃｈｅ ＰＡ，Ｓｏｕｍｅｌｉｓ Ｖ，Ｇｏｒｍａｎ ＤＭ，ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍａｎ ｔｈｙｍｉｃ ｓｔｒｏｍａｌ ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｔｉｎ ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｍｙｅｌｏｉｄ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ２００１；１６７：３３６−４３。

８．Ａｌｌａｋｈｖｅｒｄｉ Ｚ，Ｃｏｍｅａｕ ＭＲ，Ｊｅｓｓｕｐ ＨＫ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｙｍｉｃ ｓｔｒｏｍａｌ ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｔｉｎ ｉｓ ｒｅｌｅａｓｅｄ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｍｉｃｒｏｂｅｓ， ｔｒａｕｍａ，ｏｒ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｏｔｅｎｔｌｙ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｍａｓｔ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ２００７；２０４：２５３−８。

９．Ａｌｌａｋｈｖｅｒｄｉ Ｚ，Ｃｏｍｅａｕ ＭＲ，Ｓｍｉｔｈ ＤＥ，ｅｔ ａｌ．ＣＤ３４＋ｈｅｍｏｐｏｉｅｔｉｃ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｐｏｔｅｎｔ ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ ｏｆ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ２００９；１２３：４７２−８。

１０．Ｙｉｎｇ Ｓ，Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ Ｂ，Ｒａｔｏｆｆ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｙｍｉｃ ｓｔｒｏｍａｌ ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｔｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ａｓｔｈｍａｔｉｃ ａｉｒｗａｙｓ ａｎｄ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｔｈ２−ａｔｔｒａｃｔｉｎｇ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ ｓｅｖｅｒｉｔｙ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ２００５；１７４：８１８３−９０。

１１．Ｙｉｎｇ Ｓ，Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ Ｂ，Ｒａｔｏｆｆ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｙｍｉｃ ｓｔｒｏｍａｌ ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｔｉｎ ａｎｄ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｅｖｅｒｅ ａｓｔｈｍａ ａｎｄ ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ２００８；１８１：２７９０−８。

１２．Ｈｅ ＪＱ，Ｈａｌｌｓｔｒａｎｄ ＴＳ，Ｋｎｉｇｈｔ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｔｈｙｍｉｃ ｓｔｒｏｍａｌ ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｔｉｎ ｇｅｎｅ ｖａｒｉａｎｔ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｓｔｈｍａ ａｎｄ ａｉｒｗａｙ ｈｙｐｅｒｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ．Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ２００９；１２４：２２２−９。

１３．Ｈａｒａｄａ Ｍ，Ｈｉｒｏｔａ Ｔ，Ｊｏｄｏ ＡＩ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｙｍｉｃ ｓｔｒｏｍａｌ ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｔｉｎ ｇｅｎｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｂｒｏｎｃｈｉａｌ ａｓｔｈｍａ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ２０１１；４４：７８７−９３。

１４．Ｏ’Ｂｙｒｎｅ ＰＭ，Ｄｏｌｏｖｉｃｈ Ｊ，Ｈａｒｇｒｅａｖｅ ＦＥ．Ｌａｔｅ ａｓｔｈｍａｔｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ａｍ Ｒｅｖ Ｒｅｓｐｉｒ Ｄｉｓ１９８７；１３６：７４０−５１。

１５．Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ ＤＷ，Ｍｕｒｄｏｃｋ ＫＹ，Ｋｉｒｂｙ Ｊ，Ｈａｒｇｒｅａｖｅ Ｆ．Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｉｒｗａｙ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ ｔｏ ａｌｌｅｒｇｅｎ ｆｒｏｍ ｓｋｉｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ａｌｌｅｒｇｅｎ ａｎｄ ａｉｒｗａｙ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ ｔｏ ｈｉｓｔａｍｉｎｅ．Ａｍ Ｒｅｖ Ｒｅｓｐｉｒ Ｄｉｓ１９８７；１３５：２６４−７。

１６．Ｐｉｚｚｉｃｈｉｎｉ Ｅ，Ｐｉｚｚｉｃｈｉｎｉ ＭＭ，Ｅｆｔｈｉｍｉａｄｉｓ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｄｉｃｅｓ ｏｆ ａｉｒｗａｙ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｐｕｔｕｍ：ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｖａｌｉｄｉｔｙ ｏｆ ｃｅｌｌ ａｎｄ ｆｌｕｉｄ−ｐｈａｓｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ１９９６；１５４：３０８−１７。

１７．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｓ．ＡＴＳ／ＥＲＳ ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｏｎｌｉｎｅ ａｎｄ ｏｆｆｌｉｎｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｅｘｈａｌｅｄ ｌｏｗｅｒ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ａｎｄ ｎａｓａｌ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ，２００５．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ２００５；１７１：９１２−３０。

１８．Ｉｎｍａｎ ＭＤ，Ｗａｔｓｏｎ Ｒ，Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ ＤＷ，Ｗｏｎｇ ＢＪ，Ｈａｒｇｒｅａｖｅ ＦＥ，Ｏ’Ｂｙｒｎｅ ＰＭ．Ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ａｌｌｅｒｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｅａｒｌｙ ａｎｄ ｌａｔｅ ａｓｔｈｍａｔｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ１９９５；９５：１１９１−５。

１９．Ｇａｕｖｒｅａｕ ＧＭ，Ｗａｔｓｏｎ ＲＭ，Ｒｅｒｅｃｉｃｈ ＴＪ，Ｂａｓｗｉｃｋ Ｅ，Ｉｎｍａｎ ＭＤ，Ｏ’Ｂｙｒｎｅ ＰＭ．Ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ａｌｌｅｒｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｉｒｗａｙ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ１９９９；１０４：６６−７１。

２０．Ｇａｕｖｒｅａｕ ＧＭ，Ｂｏｕｌｅｔ ＬＰ，Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ ＤＷ，ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１３ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｏｎ ａｌｌｅｒｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｉｒｗａｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ｍｉｌｄ ａｔｏｐｉｃ ａｓｔｈｍａ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ２０１１；１８３：１００７−１４。

２１．Ｚｈｏｕ Ｂ，Ｃｏｍｅａｕ ＭＲ，Ｄｅ Ｓｍｅｄｔ Ｔ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｙｍｉｃ ｓｔｒｏｍａｌ ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｔｉｎ ａｓ ａ ｋｅｙ ｉｎｉｔｉａｔｏｒ ｏｆ ａｌｌｅｒｇｉｃ ａｉｒｗａｙ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ２００５；６：１０４７−５３。

２２．Ｌｉｕ ＹＪ．Ｔｈｙｍｉｃ ｓｔｒｏｍａｌ ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｔｉｎ：ｍａｓｔｅｒ ｓｗｉｔｃｈ ｆｏｒ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ２００６；２０３：２６９−７３。

２３．Ｂｕｎｙａｖａｎｉｃｈ Ｓ，Ｍｅｌｅｎ Ｅ，Ｗｉｌｋ ＪＢ，ｅｔ ａｌ． Ｔｈｙｍｉｃ ｓｔｒｏｍａｌ ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｔｉｎ（ＴＳＬＰ）ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｒｈｉｎｉｔｉｓ ｉｎ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｉｔｈ ａｓｔｈｍａ．Ｃｌｉｎ Ｍｏｌ Ａｌｌｅｒｇｙ２０１１；９：１。

２４．Ｃｏｒｒｉｇａｎ ＣＪ，Ｊａｙａｒａｔｎａｍ Ａ，Ｗａｎｇ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｅａｒｌｙ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｙｍｉｃ ｓｔｒｏｍａｌ ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｔｉｎ ｐｒｅｃｅｄｅｓ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｉｔｓ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ａｌｌｅｒｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｌａｔｅ ｐｈａｓｅ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ａｔｏｐｉｃ ｓｕｂｊｅｃｔｓ．Ａｌｌｅｒｇｙ２００９；６４：１０１４−２２。

２５．Ｋａｔｏ Ａ，Ｆａｖｏｒｅｔｏ Ｓ，Ｊｒ．，Ａｖｉｌａ ＰＣ，Ｓｃｈｌｅｉｍｅｒ ＲＰ．ＴＬＲ３−ａｎｄ Ｔｈ２ ｃｙｔｏｋｉｎｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｙｍｉｃ ｓｔｒｏｍａｌ ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｔｉｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ａｉｒｗａｙ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ２００７；１７９：１０８０−７。

２６．Ｍｊｏｓｂｅｒｇ Ｊ，Ｂｅｒｎｉｎｋ Ｊ，Ｇｏｌｅｂｓｋｉ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＧＡＴＡ３ ｉｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｔｙｐｅ２ｉｎｎａｔｅ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｃｅｌｌｓ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ２０１２；３７：６４９−５９。

２７．Ｌｅｃｋｉｅ ＭＪ，ｔｅｎ Ｂｒｉｎｋｅ Ａ，Ｋｈａｎ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｎ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−５ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｏｎ ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ，ａｉｒｗａｙ ｈｙｐｅｒ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｌａｔｅ ａｓｔｈｍａｔｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｌａｎｃｅｔ２０００；３５６：２１４４−８。

２８．Ｇａｖａｌａ ＭＬ，Ｂａｓｈｉｒ Ｈ，Ｇｅｒｎ ＪＥ．Ｖｉｒｕｓ／ａｌｌｅｒｇｅｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ａｓｔｈｍａ．Ｃｕｒｒ Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｓｔｈｍａ Ｒｅｐ２０１３；１３：２９８−３０７。

２９．Ｓｅａｒｓ ＭＲ，Ｂｕｒｒｏｗｓ Ｂ，Ｆｌａｎｎｅｒｙ ＥＭ，Ｈｅｒｂｉｓｏｎ ＧＰ，Ｈｏｌｄａｗａｙ ＭＤ．Ａｔｏｐｙ ｉｎ ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ．Ｉ．Ｇｅｎｄｅｒ ａｎｄ ａｌｌｅｒｇｅｎ ｒｅｌａｔｅｄ ｒｉｓｋｓ ｆｏｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｈａｙ ｆｅｖｅｒ ａｎｄ ａｓｔｈｍａ．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ１９９３；２３：９４１−８。

３０．Ｇａｕｖｒｅａｕ ＧＭ，Ｗａｔｓｏｎ ＲＭ，Ｏ’Ｂｙｒｎｅ ＰＭ．Ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ａｌｌｅｒｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｉｒｗａｙ ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｉｒｗａｙ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ１９９９；１６０：６４０−７。

３１．Ｇａｕｖｒｅａｕ ＧＭ，Ｌｅｅ ＪＭ，Ｗａｔｓｏｎ ＲＭ，Ｉｒａｎｉ ＡＭ，Ｓｃｈｗａｒｔｚ ＬＢ，Ｏ’Ｂｙｒｎｅ ＰＭ．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｆ ｂｏｔｈ ａｉｒｗａｙ ｂａｓｏｐｈｉｌｓ ａｎｄ ｍａｓｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｓｐｕｔｕｍ ａｆｔｅｒ ａｌｌｅｒｇｅｎ ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ ｏｆ ａｔｏｐｉｃ ａｓｔｈｍａｔｉｃｓ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ２０００；１６１：１４７３−８。

３２．Ｇａｕｖｒｅａｕ ＧＭ，Ｂｏｕｌｅｔ ＬＰ，Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ ＤＷ，ｅｔ ａｌ．ＯＸ４０Ｌ ｂｌｏｃｋａｄｅ ａｎｄ ａｌｌｅｒｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｉｒｗａｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ｗｉｔｈ ｍｉｌｄ ａｓｔｈｍａ．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ２０１４；４４：２９−３７。

３３．Ｄａｖｉｓ ＢＥ，Ｉｌｌａｍｐｅｒｕｍａ Ｃ，Ｇａｕｖｒｅａｕ ＧＭ，ｅｔ ａｌ．Ｓｉｎｇｌｅ−ｄｏｓｅ ｄｅｓｌｏｒａｔａｄｉｎｅ ａｎｄ ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ ａｎｄ ａｌｌｅｒｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｌａｔｅ ａｉｒｗａｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ２００９；３３：１３０２−８。

３４．Ｐａｒａｍｅｓｗａｒａｎ Ｋ，Ｌｉａｎｇ Ｈ，Ｆａｎａｔ Ａ，Ｗａｔｓｏｎ Ｒ，Ｓｎｉｄｅｒ ＤＰ，Ｏ’Ｂｙｒｎｅ ＰＭ．Ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｃｙｓｔｅｉｎｙｌ ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｓ ｉｎ ａｌｌｅｒｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｎｕｍｂｅｒ ｉｎ ａｓｔｈｍａ．Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ２００４；１１４：７３−９。

３５．Ｎｏｌｔｅ Ｈ，Ｐａｖｏｒｄ Ｉ，Ｂａｃｋｅｒ Ｖ，ｅｔ ａｌ．Ｄｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｎｈａｌｅｄ ｍｏｍｅｔａｓｏｎｅ ｆｕｒｏａｔｅ／ｆｏｒｍｏｔｅｒｏｌ ｉｎ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ｗｉｔｈ ａｓｔｈｍａ．Ｒｅｓｐｉｒ Ｍｅｄ２０１３；１０７：６５６−６４。

３６．Ｄａｈｌｅｎ Ｂ，Ｌａｎｔｚ ＡＳ，Ｉｈｒｅ Ｅ，ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｆｏｒｍｏｔｅｒｏｌ ｗｉｔｈ ｏｒ ｗｉｔｈｏｕｔ ｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ ｉｎ ｒｅｐｅａｔｅｄ ｌｏｗ−ｄｏｓｅ ａｌｌｅｒｇｅｎ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ．Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ２００９；３３：７４７−５３。

３７．Ｎａｉｒ Ｐ，Ｐｉｚｚｉｃｈｉｎｉ ＭＭ，Ｋｊａｒｓｇａａｒｄ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｍｅｐｏｌｉｚｕｍａｂ ｆｏｒ ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｓｔｈｍａ ｗｉｔｈ ｓｐｕｔｕｍ ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉａ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ２００９；３６０：９８５−９３。

３８．Ｈａｌｄａｒ Ｐ，Ｂｒｉｇｈｔｌｉｎｇ ＣＥ，Ｈａｒｇａｄｏｎ Ｂ，ｅｔ ａｌ．Ｍｅｐｏｌｉｚｕｍａｂ ａｎｄ ｅｘａｃｅｒｂａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ ａｓｔｈｍａ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ２００９；３６０：９７３−８４。

３９．Ｃｏｒｒｅｎ Ｊ，Ｌｅｍａｎｓｋｅ ＲＦ，Ｈａｎａｎｉａ ＮＡ，ｅｔ ａｌ．Ｌｅｂｒｉｋｉｚｕｍａｂ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｎ ａｄｕｌｔｓ ｗｉｔｈ ａｓｔｈｍａ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ２０１１；３６５：１０８８−９８。

４０．Ｗｅｎｚｅｌ Ｓ，Ｆｏｒｄ Ｌ，Ｐｅａｒｌｍａｎ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ｄｕｐｉｌｕｍａｂ ｉｎ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ａｓｔｈｍａ ｗｉｔｈ ｅｌｅｖａｔｅｄ ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ ｌｅｖｅｌｓ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ２０１３；３６８：２４５５−６６。

Claims (22)

1. 患者からの試料中のＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞及びＴヘルパー１（Ｔｈ１）細胞の比率を検出するための方法であって、Ｔｈ２特異的サイトカイン及びＴｈ１特異的サイトカインのレベルを測定することを含み、前記方法が、
   ａ）前記試料を、
   ｉ）２つ以上のＴｈ２サイトカインに結合する２つ以上の特異的結合剤であって、前記Ｔｈ２特異的サイトカインに対する前記２つ以上の特異的結合剤が、第１のフルオロフォアで標識される、２つ以上の特異的結合剤、及び
   ｉｉ）Ｔｈ１サイトカインに結合する少なくとも１つの特異的結合剤であって、前記Ｔｈ１サイトカインに対する前記特異的結合剤が、前記第１のフルオロフォアとは異なる第２のフルオロフォアで標識される、少なくとも１つの特異的結合剤、と接触させることと、
   ｂ）前記試料中の前記第１及び第２のフルオロフォアのレベルを測定し、検出されたＴｈ１特異的及びＴｈ２特異的フルオロフォアの前記レベルに基づいて、前記細胞をＴｈ１またはＴｈ２細胞として指定することと、
   ｃ）試料中のＴｈ２細胞対Ｔｈ１細胞の前記比率を判定することと、を含む、前記方法。
2. 前記試料中のＴｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、及びＴｈ１７細胞の前記比率を判定することを更に含み、
   ａ）前記試料を、
   ｉｉｉ）Ｔｈ１７サイトカインに結合する少なくとも１つの特異的結合剤であって、前記Ｔｈ１７サイトカインに対する前記特異的結合剤が、前記第１のフルオロフォアとは異なる第２のフルオロフォアで標識されるか、または第３のフルオロフォアで標識される、少なくとも１つの特異的結合剤と接触させることと、
   ｂ）前記試料中の前記第１及び第２のフルオロフォアのレベルを測定し、検出されたＴｈ１特異的、Ｔｈ２特異的、及びＴｈ１７特異的フルオロフォアの前記レベルに基づいて、前記細胞をＴｈ１、Ｔｈ２、またはＴｈ１７細胞として指定することと、
   ｃ）試料中のＴｈ１細胞対Ｔｈ２細胞対Ｔｈ１７細胞の前記比率を判定することと、を含む、請求項１に記載の前記方法。
3. 患者からの試料中のＴヘルパー１（Ｔｈ１）細胞及びＴヘルパー１７（Ｔｈ１７）細胞の比率を検出するための方法であって、Ｔｈ１特異的サイトカイン及びＴｈ１７特異的サイトカインのレベルを測定することを含み、前記方法が、
   ａ）前記試料を、
   ｉ）２つ以上のＴｈ１７サイトカインに結合する２つ以上の特異的結合剤であって、前記Ｔｈ１７特異的サイトカインに対する前記２つ以上の特異的結合剤が、第１のフルオロフォアで標識される、２つ以上の特異的結合剤、及び
   ｉｉ）Ｔｈ１サイトカインに結合する少なくとも１つの特異的結合剤であって、前記Ｔｈ１サイトカインに対する前記特異的結合剤が、前記第１のフルオロフォアとは異なる第２のフルオロフォアで標識される、少なくとも１つの特異的結合剤、と接触させることと、
   ｂ）前記試料中の前記第１及び第２のフルオロフォアのレベルを測定し、検出されたＴｈ１特異的及びＴｈ１７特異的フルオロフォアの前記レベルに基づいて、前記細胞をＴｈ１またはＴｈ１７細胞として指定することと、
   ｃ）試料中のＴｈ１細胞対Ｔｈ１７細胞の前記比率を判定することと、を含む、前記方法。
4. 患者からの試料中のＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞及びＴヘルパー１７（Ｔｈ１７）細胞の比率を検出するための方法であって、Ｔｈ２特異的サイトカイン及びＴｈ１７特異的サイトカインのレベルを測定することを含み、前記方法が、
   ａ）前記試料を、
   ｉ）２つ以上のＴｈ２サイトカインに結合する２つ以上の特異的結合剤であって、前記Ｔｈ２特異的サイトカインに対する前記２つ以上の特異的結合剤が、第１のフルオロフォアで標識される、２つ以上の特異的結合剤、及び
   ｉｉ）Ｔｈ１７サイトカインに結合する少なくとも１つの特異的結合剤であって、前記Ｔｈ１７サイトカインに対する前記特異的結合剤が、前記第１のフルオロフォアとは異なる第２のフルオロフォアで標識される、少なくとも１つの特異的結合剤、と接触させることと、
   ｂ）前記試料中の前記第１及び第２のフルオロフォアのレベルを測定し、検出されたＴｈ２特異的及びＴｈ１７特異的フルオロフォアの前記レベルに基づいて、前記細胞をＴｈ２またはＴｈ１７細胞として指定することと、
   ｃ）試料中のＴｈ２細胞対Ｔｈ１７細胞の前記比率を判定することと、を含む、前記方法。
5. 前記Ｔｈ２サイトカインが、ＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１３からなる群から選択される、先行請求項のいずれかに記載の前記方法。
6. 前記Ｔｈ１サイトカインが、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−ｇ）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−ａ）、及びＩＬ−２からなる群から選択される、先行請求項のいずれかに記載の前記方法。
7. 前記Ｔｈ１７サイトカインが、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＦＮ−ｇ、及びＩＬ−２２からなる群から選択される、先行請求項のいずれかに記載の前記方法。
8. 前記特異的結合剤が、Ｔｈ１特異的、Ｔｈ２特異的、またはＴｈ１７特異的サイトカインに特異的な抗体である、先行請求項のいずれかに記載の前記方法。
9. 前記患者が、喘息、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、線維性疾患、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症、及び癌からなる群から選択される疾患または障害を患う、先行請求項のいずれかに記載の前記方法。
10. 前記試料が、治療剤での治療前及び／または後に得られる、先行請求項のいずれかに記載の前記方法。
11. 前記治療剤が抗ＴＳＬＰ抗体である、先行請求項のいずれかに記載の前記方法。
12. 前記第１のフルオロフォアがフィコエリトリン（ＰＥ）であり、前記第２のフルロフォアがフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）である、先行請求項のいずれかに記載の前記方法。
13. 前記試料が、前記患者からの全血、末梢血単核球、脳脊髄液、気管支肺胞上皮洗浄液、鼻洗浄液、誘発喀痰、または生検である、請求項１に記載の前記方法。
14. 前記サイトカインが、細胞内で接触させられる、先行請求項のいずれかに記載の前記方法。
15. 治療剤での治療に対して応答性である喘息患者の亜集団を識別するための方法であって、患者試料中のＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞及びＴヘルパー１（Ｔｈ１）細胞のベースライン比率、または前記治療剤の投与後の前記比率の変化を測定することを含み、前記方法が、
    ａ）前記試料を、
    ｉ）２つ以上のＴｈ２特異的サイトカインに結合する２つ以上の特異的結合剤であって、前記Ｔｈ２特異的サイトカインに対する前記２つ以上の特異的結合剤が、第１のフルオロフォアで標識される、２つ以上の特異的結合剤、及び
    ｉｉ）Ｔｈ１特異的サイトカインに結合する少なくとも１つの特異的結合剤であって、前記Ｔｈ１特異的サイトカインに対する前記特異的結合剤が、前記第１のフルオロフォアとは異なる第２のフルオロフォアで標識される、少なくとも１つの特異的結合剤、と接触させることと、
    ｂ）前記試料中の前記第１及び第２のフルオロフォアのレベルを測定し、検出されたＴｈ２特異的及びＴｈ１特異的フルオロフォアの前記レベルに基づいて、前記細胞をＴｈ１またはＴｈ２細胞として指定することと、
    ｃ）検出されたＴｈ２特異的サイトカイン及びＴｈ１特異的サイトカインの前記レベルに基づいて、試料中のＴｈ２細胞対Ｔｈ１細胞の前記比率を判定することであって、Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞の前記比率が減少する場合、前記患者が前記治療剤に対して応答性であると識別される、判定することと、
    ｄ）前記患者が前記治療剤に対して非応答性であると判定される場合、前記治療剤での治療を変更すること、または前記患者が前記治療剤での治療に対して応答性であると判定される場合、治療剤の用量を維持することと、を含む、前記方法。
16. 前記治療剤が抗ＴＳＬＰ抗体である、請求項１５に記載の前記方法。
17. 前記試料を得る前に、前記治療剤が、１週間、２週間、３週間、４週間、６週間、２ヶ月間、３ヶ月間、またはそれを超えて投与される、請求項１５に記載の前記方法。
18. Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞の前記比率が、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、またはそれを超えて減少する場合、前記患者が、治療に対して応答性であると識別される、請求項１５に記載の前記方法。
19. 前記患者が治療に対して応答性であると識別されるＴｈ２／Ｔｈ１比率が、約０．１以下である、請求項１５に記載の前記方法。
20. 免疫不全の治療において、抗ＴＳＬＰ剤の用量レジメンを変更する方法であって、請求項１または２に記載の前記方法を使用して、試料中のＴｈ２細胞／Ｔｈ１細胞、及び／またはＴｈ１７細胞の比率を判定し、Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞、及び／またはＴｈ１７細胞の前記比率が治療中に変化する場合、抗ＴＳＬＰ抗体の前記用量を変更することを含み、
    Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞の前記比率が安定しているか、または増加し、Ｔｈ２プロファイルに向かう偏在を示す場合、治療剤の前記用量が増加され、
    Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞の前記比率が減少し、Ｔｈ２プロファイルの低減を示す場合、治療剤の前記用量が減少される、前記方法。
21. 前記免疫不全が、喘息、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、及び線維性疾患からなる群から選択される、請求項２０に記載の前記方法。
22. 喘息治療剤の用量レジメンを変更する方法であって、請求項１または２に記載の前記方法を使用して、試料中のＴｈ２細胞／Ｔｈ１細胞、及び／またはＴｈ１７細胞の比率を判定し、Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞、及び／またはＴｈ１７細胞の前記比率が治療中に変化する場合、喘息治療剤の前記用量を変更することを含み、
    Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞の前記比率が安定しているか、または増加し、Ｔｈ２プロファイルに向かう偏在を示す場合、治療剤の前記用量が増加され、
    Ｔｈ２細胞／Ｔｈ１細胞の前記比率が減少し、Ｔｈ２プロファイルの低減を示す場合、治療剤の前記用量が減少される、前記方法。