JP2017518038A - 抗her2完全ヒト抗体の突然変異体抗体、及びそれをコードする遺伝子並びにそれらの使用 - Google Patents
抗her2完全ヒト抗体の突然変異体抗体、及びそれをコードする遺伝子並びにそれらの使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017518038A JP2017518038A JP2016562486A JP2016562486A JP2017518038A JP 2017518038 A JP2017518038 A JP 2017518038A JP 2016562486 A JP2016562486 A JP 2016562486A JP 2016562486 A JP2016562486 A JP 2016562486A JP 2017518038 A JP2017518038 A JP 2017518038A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cancer
- antibody
- her2
- seq
- mutant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title description 43
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 claims abstract description 69
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 claims abstract description 58
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 39
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 12
- 102000051957 human ERBB2 Human genes 0.000 claims abstract description 11
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 5
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 claims description 55
- 229960002087 pertuzumab Drugs 0.000 claims description 35
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 28
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 23
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 23
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 11
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 7
- 206010046431 Urethral cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010046458 Urethral neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 3
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061424 Anal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007860 Anus Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010006143 Brain stem glioma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010014967 Ependymoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001342 Fallopian tube cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000013452 Fallopian tube neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000022072 Gallbladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000017891 HER2 positive breast carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061252 Intraocular melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 2
- 208000032271 Malignant tumor of penis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000172 Medulloblastoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000821 Parathyroid Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002471 Penile Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010034299 Penile cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007913 Pituitary Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005746 Pituitary adenoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061538 Pituitary tumour benign Diseases 0.000 claims description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000032383 Soft tissue cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005969 Uveal melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010047741 Vulval cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000004354 Vulvar Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005188 adrenal gland cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000024447 adrenal gland neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011165 anus cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000024207 chronic leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 229940000425 combination drug Drugs 0.000 claims description 2
- 208000030381 cutaneous melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 210000000750 endocrine system Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 claims description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000020984 malignant renal pelvis neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000026045 malignant tumor of parathyroid gland Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010027191 meningioma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007538 neurilemmoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002575 ocular melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 2
- 208000021310 pituitary gland adenoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015347 renal cell adenocarcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000007444 renal pelvis carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010039667 schwannoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000003708 skin melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002314 small intestine cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010062261 spinal cord neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010046885 vaginal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000013139 vaginal neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005102 vulva cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010915 Glioblastoma multiforme Diseases 0.000 claims 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 claims 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 claims 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 28
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 28
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 28
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 86
- 108010034429 heregulin alpha Proteins 0.000 description 70
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 43
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 43
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 38
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 34
- 101710100969 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 description 31
- 102100029986 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Human genes 0.000 description 31
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 28
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 24
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 21
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 21
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 20
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 19
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 description 19
- 239000000047 product Substances 0.000 description 18
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 16
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 14
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 13
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 13
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 13
- 102000019149 MAP kinase activity proteins Human genes 0.000 description 12
- 108040008097 MAP kinase activity proteins Proteins 0.000 description 12
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 description 12
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 12
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 10
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 10
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 9
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 8
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 8
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 8
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 7
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 238000000533 capillary isoelectric focusing Methods 0.000 description 7
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 238000000113 differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 7
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 6
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 6
- 239000012743 FreeStyle Max reagent Substances 0.000 description 6
- 101000702488 Rattus norvegicus High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001818 capillary gel electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 6
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 6
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 6
- DWCNMHMZSYJSGO-IMJCQESISA-N beta-D-GlcpNAc-(1->2)-alpha-D-Manp-(1->3)-[beta-D-GlcpNAc-(1->2)-alpha-D-Manp-(1->6)]-beta-D-Manp-(1->4)-beta-GlcpNAc-(1->4)-[alpha-L-Fucp-(1->6)]-beta-D-GlcpNAc Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@H]3[C@H]([C@@H](O[C@@H]4[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)NC(C)=O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]4[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)NC(C)=O)O3)O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@H](O)[C@@H](NC(C)=O)[C@H](O)O1 DWCNMHMZSYJSGO-IMJCQESISA-N 0.000 description 5
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 5
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 5
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 4
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 4
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 4
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 4
- 238000001195 ultra high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 3
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 3
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100314454 Caenorhabditis elegans tra-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 101001010819 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 description 2
- 101001010823 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Proteins 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 2
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 102000057750 human ERBB3 Human genes 0.000 description 2
- 102000053810 human ERBB4 Human genes 0.000 description 2
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 230000037351 starvation Effects 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 2
- CWGFSQJQIHRAAE-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol tetrahydrochloride Chemical compound Cl.Cl.Cl.Cl.OCC(N)(CO)CO CWGFSQJQIHRAAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- GCACQYDBDHRVGE-LKXGYXEUSA-N Asp-Thr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@H](O)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O GCACQYDBDHRVGE-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010055113 Breast cancer metastatic Diseases 0.000 description 1
- 102220468054 Brother of CDO_N73Q_mutation Human genes 0.000 description 1
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 101710127404 Glycoprotein 3 Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101000851181 Homo sapiens Epidermal growth factor receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 1
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- 125000002842 L-seryl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108090000556 Neuregulin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102400000058 Neuregulin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 201000000053 blastoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 201000008184 embryoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 102000045108 human EGFR Human genes 0.000 description 1
- NBZBKCUXIYYUSX-UHFFFAOYSA-N iminodiacetic acid Chemical compound OC(=O)CNCC(O)=O NBZBKCUXIYYUSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 229940125645 monoclonal antibody drug Drugs 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- OESFSXYRSCBAQJ-UHFFFAOYSA-M sodium;3-carboxy-3,5-dihydroxy-5-oxopentanoate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound [Na+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC([O-])=O OESFSXYRSCBAQJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3015—Breast
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3023—Lung
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/303—Liver or Pancreas
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3038—Kidney, bladder
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3046—Stomach, Intestines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3053—Skin, nerves, brain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3061—Blood cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3069—Reproductive system, e.g. ovaria, uterus, testes, prostate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
- C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/54—F(ab')2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/567—Framework region [FR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/71—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
Abstract
Description
ELISA技術の抗原−抗体結合の特異性を利用して、ヒトHER2(細胞外ドメイン)−Fc融合タンパク質(hHER2−Fcと略する)抗原をELISAプレート上にコートし、コートした抗原に特異的に結合したファージを洗浄し、ピックアップした。ヒトHER2−Fc(Sino Biological Inc.から購入したもの、カタログ番号:10004−H02H)抗原はPBS(0.01M Na2HPO4・12H2O+0.002M KH2PO4+0.14M NaCl+0.002M KCl,pH=8.6)により5μg/mlに希釈し、ELISAプレートに100μl/ウェルにて加え、4℃、一晩コートした。プレートはPBST(0.05%のTween 20を含むPBS緩衝液)で4回洗浄し、その後5%BSA(アメリカ合衆国、Amresco Inc.から購入したもの、カタログ番号:0332−100g、溶液はPBSである)を300μl/ウェルにて、37℃、1時間、ブロッキングを行った。プレートはPBSTにて2回、再洗浄した。7×1010の独立したクローンを含む完全ヒトscFvファージ抗体ライブラリーの懸濁液(複数の健康な個体のリンパ細胞からの抗体可変領域遺伝子を人工的に合成した重鎖CDR3遺伝子と組み合わせることにより、EUREKA(北京)Biotechnology Ltd.により構築されたもの)を、ELISAプレートに100μl/ウェルにて加え、37℃で2時間、インキュベーションを行った。インキュベーションが終了した後に、ELISAプレートのウェルの中のファージ懸濁液は吸引された。その後、PBSTを各々のウェルに300μl/ウェルにて加え、ウェルの内容物を5分間の間、充分に流し去り、コートした抗原に特異的に結合していないファージを除去した。0.1%BSA(アメリカ合衆国、Amresco Inc.、カタログ番号:0332−100g、溶液はPBSである)を含む0.2Mグリシン−HCl(pH=2.2)溶出液を加え、室温で10分間、インキュベーションを行った。その後、コートした抗原に特異的に結合したファージを溶出するために、ウェル中の内容物を充分に流し去った。溶出したファージ懸濁液は1M Tris−HCl(pH9.1)緩衝液で中和した。溶出したファージは(約0.3から0.4であるOD600の値で示される)対数増殖期における1mLのバクテリアTG1(アメリカ合衆国、Lucigen Inc.、カタログ番号:60500−0)に加え、得られたバクテリア溶液は37℃、1時間、静置することにより感染させた。10μlの感染バクテリア溶液を10倍連続希釈に供し、10倍、100倍、1000倍希釈をプレーティングし、カウントした。90μlの感染バクテリア溶液を最終濃度10%グリセリンのグリセリン中、−80℃にて保存した。残りの感染バクテリア溶液は全て150mm 2×YT−A固体プレート(17g/Lのトリプトン、10g/Lの酵母エキス、5g/Lの塩化ナトリウム、15g/Lの寒天及び100μg/mlのアンピシリン)上にプレーティングし、37℃、一晩培養した。5mlの2×YT−A−10%グリセリン培地を150mmプレートに一晩加えた。プレートは滅菌した播種ロッドを用いて、残留バクテリア溶液がプレート上から無くなるまで、静かに掻爬した。第2回目の増幅段階において、適切な量の掻爬したバクテリア溶液を5mlの2×YT−AMP−グルコース液体培地(17g/Lのトリプトン、10g/Lの酵母エキス、5g/Lの塩化ナトリウム、2%のグルコース及び100μg/mlのアンピシリン)(OD600は好ましくは約0.05から0.1である)に加え、37℃、200rpmで対数増殖期まで培養した(OD600は約0.3から0.4である)。その後、バクテリアの総数の20倍の量のM13K07ヘルパーファージ(アメリカ合衆国、NEB Inc.から購入したもの、カタログ番号:N0315S)を加え、37℃、1時間、感染を行った。感染後、1500g、5分間で回収したバクテリアのペレットを2×YT−AMP−Kana培地(17g/Lのトリプトン、10g/Lの酵母エキス、5g/Lの塩化ナトリウム、50μg/mlのカナマイシン及び100μg/mlのアンピシリン)に再懸濁させ、30℃、200rpm、一晩培養し、組み換えファージの増幅及び調製を完結させた。第2段階のピックアップ及び第3段階の増幅及びピックアップは同じ要領で実行された。バクテリアコロニーを5mlの2×YT−AMP−グルコース液体培地(17g/Lのトリプトン、10g/Lの酵母エキス、5g/Lの塩化ナトリウム、2%のグルコース及び100μg/mlのアンピシリン)へ移し、37℃、200rpm、一晩培養した。プラスミドはプラスミド抽出キット(アメリカ合衆国、Qiagen Inc.から購入したもの、カタログ番号:12943)を用いて抽出し、塩基配列決定法により同定し、−80℃にて保存した。
酵素結合性免疫吸着検定法(ELISA)を用いて、実施例1において得られたヒトHER2−Fcに特異的に結合するファージの免疫反応性をさらに同定した。ヒトHER2−Fc抗原(Sino Biological Inc.から購入したもの、カタログ番号:10004−H02H)をPBS(pH=8.6)により、2μg/mlに希釈し、ELISAプレートに100μl/ウェルにて加え、4℃、一晩コーティングを行った。プレートはPBSTを用いて4回洗浄し、その後、5%BSA(アメリカ合衆国、Amresco社から購入したもの、カタログ番号:0332−100g、溶液はPBSである)を300μl/ウェルにて加え、37℃、1時間、ブロッキングを行った。プレートは再びPBSTを用いて2回洗浄し、その後、ファージクローンの懸濁液を100μl/ウェルにて加え、37℃で、2時間、インキュベーションを行った。プレートはPBSTを用いて4回洗浄した。HRP標識化抗M13K07ファージ抗体(アメリカ合衆国、GE Inc.から購入したもの、カタログ番号:27−9421−01、PBSTを用いて1:5000希釈、100μl/ウェル)を加え、室温で、1時間、インキュベーションを行った。プレートはPBSTを用いて4回洗浄し、その後、可溶単一成分基質3,3’,5,5’−テトラメチルベンジジン(Tiangen Co., Ltd.から購入したもの、カタログ番号:PA107−01)を100μl/ウェルにて加え、室温で15分間、可視化のためにインキュベーションを行った。停止溶液(1M硫酸)を50μl/ウェルにて加え、450/570nm波長の吸光度を多機能ELISAプレート(アメリカ合衆国、バイオラッド社、モデル680マイクロリーダー)上で読み取った。
102個のヒトHER2−Fc特異的scFvの、種間交差反応性、及びHERファミリーメンバー間の分子間交差反応性を、ELISAを用いて検出した。コーティングのためのヒトHER2−Fc抗原をサルHER2−Fc(Sino Biological Inc.から購入したもの、カタログ番号:90295−C02H)、マウスHER2−Fc(Sino Biological Inc.から購入したもの、カタログ番号:50714−M02H)、ヒトHER1−Fc(Sino Biological Inc.から購入したもの、カタログ番号:10001−H02H)、ヒトHER3−Fc(Sino Biological Inc.から購入したもの、カタログ番号:10201−H05H)及びヒトHER4−Fc(Sino Biological Inc.から購入したもの、カタログ番号:10363−H02H)に置き換えること以外は実施例2と同様の手順に従った。それぞれの抗原はPBS(pH=8.6)により2μg/mlに希釈し、100μl/ウェルにてELISAプレートに加え、コーティングを4℃、一晩行った。プレートはPBSTを用いて4回洗浄し、その後、5%BSA(アメリカ合衆国、Amresco社から購入したもの、カタログ番号:0332−100g、溶液はPBSである)を300μl/ウェルにて加え、37℃で、1時間、ブロッキングを行った。プレートは再びPBSTを用いて2回洗浄し、その後、ScFvファージの102クローンの懸濁液を100μl/ウェルにて加え、37℃で、2時間、インキュベーションを行った。プレートはPBSTを用いて4回洗浄した。HRP標識化抗M13K07ファージ抗体(アメリカ合衆国、GE Inc.から購入したもの、カタログ番号:27−9421−01、PBSTを用いて1:5000希釈、100μl/ウェル)を加え、室温で、1時間、インキュベーションを行った。プレートはPBSTを用いて4回洗浄し、その後、可溶単一成分基質3,3’,5,5’−テトラメチルベンジジン(Tiangen Co., Ltd.から購入したもの、カタログ番号:PA107−01)を100μl/ウェルにて加え、室温で15分間、可視化のためにインキュベーションを行った。停止溶液(1M硫酸)を50μl/ウェルにて加え、450/570nm波長の吸光度を多機能ELISAプレート(アメリカ合衆国、バイオラッド社、モデル680マイクロリーダー)上で読み取った。
102クローンのScFvファージの親和性ランキングをELISAによって行った。最初の濃度が25μg/mlであるヒトHER2−Fc抗原を、PBS緩衝液を用いた10倍希釈に供し、8つの濃度勾配を得た。希釈液はそれぞれ102クローンのScFvファージと共に、室温で4時間インキュベーションし、平衡に達しさせた。その後、得られた混合液を2μg/mlのヒトHER2−Fc抗原(pH=8.6 PBS、4℃、一晩、100μl/ウェル)で予めコートしたELISAプレートに加え、ELISAプレートは5%BSA(アメリカ合衆国、Amresco Inc.から購入したもの、カタログ番号:0332−100g、溶液はPBSである)を用いて捕獲されなかったScFv抗体が結合することから遮蔽するようにした。HRP標識化抗M13ファージ抗体(アメリカ合衆国、GE Inc.、カタログ番号:27−9421−01、PBSTにより1:5000希釈、100μl/ウェル)を加え、検出を実施例2と同様の手順にて実行した。102の陽性クローンの親和性ランキングをIC50値の観点で行った(IC50値がより低ければ、より高い親和性を示す)。
組み換え全長IgG1アイソタイプ抗体GB235−019(組み換え全長抗体配列019クローンはGB235−019と命名された)のための真核生物発現ベクターをScFvファージの102クローン塩基配列から構築した。完全ヒトScFvファージライブラリーからのスクリーニングにより得られたWG1−019単鎖抗体クローン(ScFvファージライブラリーからのスクリーニングにより得られた単鎖抗体配列クローンはWG1−019と命名された)のヌクレオチド配列は配列番号9であり、配列番号3(配列番号1のアミノ酸配列をコードするもの)及び配列番号4(配列番号2のアミノ酸配列をコードするもの)のヌクレオチド配列をそれぞれ有する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。シグナルペプチドはMELGLSWIFLLAILKGVQCのアミノ酸配列とATGGAGTTGGGACTGTCTTGGATTTTCCTGTTGGCTATTCTGAAAGGTGTGCAGTGTのヌクレオチド配列を有していた(Shanghai Generay Biotech Co, Ltdにより合成したもの)。
1−1:5’−GAATTCGCGGCCGCATGGAGTTGGGACTG−3’
2−3:5’−CTGGGTCATCTGGATGTCACACTGCACACCTTTC−3’
3−3:5’−GAAAGGTGTGCAGTGTGACATCCAGATGACCCAG−3’
4−4:5’−GATGGTGCAGCCACAGTACGTTTGATCTCCACCTTG−3’
5−2:5’−ATCAAACGTACTGTGGCTGCACCATC−3’
6−1:5’−GTTTAAACGGATCCCTAACACTCTCCCCTGTTG−3’
7−7:5’−GTACCAGCTGGACCTC ACACTGCACACCTTTC−3’
8−7:5’−GAAAGGTGTGCAGTGTGAGGTCCAGCTGGTAC−3’
9−1:5’−GATGGGCCCTTGGTGGAGGCTGAGGAGACGGTCAC−3’
10−1:5’−ACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATC−3’
11−1:5’−GTTTAAACGGATCCTCATTTACCGGGAGACAGGGAG−3’
実施例5において構築したGB235−019抗体についての組み換えベクターの発現のために、フリースタイル293F細胞(アメリカ合衆国、Invitrogen社から購入したもの、カタログ番号:R790−07)を共形質移入する方法を使用することができる。形質移入の24時間前に、フリースタイル293F細胞を6×105細胞/mlに継代培養し、温度自動調節器付きシェーカー上で135rpm、37℃、8% CO2の条件下で、形質移入の日に(血球数計測法による)細胞密度が1.2〜1.5×106細胞/mlとなるように培養した。細胞はフリースタイル293培地(アメリカ合衆国、Invitrogen Inc.、カタログ番号:12338−018)を用いて、密度が1×106細胞/mlとなるように希釈した。最良の形質移入を確実にするためには(トリパンブルー染色法による)細胞生存度が95%を超えるべきである。
10μgのGB235−019抗体中にジチオスレイトールを最終濃度20mMになるように加え、混合液を水槽に37℃で、30分間インキュベーションし、全ての鎖間ジスルフィド結合を破壊した。分離した軽鎖及び重鎖は質量分析計を組み合わせた逆相クロマトグラフィーを用いて解析した。ウォーターズ H−クラス・バイオ超高速液体クロマトグラフィー(アメリカ合衆国、Waters Inc.)を使用して、クロマトグラフィーカラム:PLRP−S 300Å, 3.0μm、2.1×150mm(アメリカ合衆国、Agilent Inc.から購入したもの、カタログ番号:1912−3301)で;移動相:A(水)、B(アセトニトリル)及びC(1%トリフルオロ酢酸)で、4分後に35%Bである勾配を20分後に42%Bに変化させた。ここでC相は10%に維持し、流速は0.3mL/分、及び添加量は20μgである。サーモLTQ−Orbitrapディスカバリー(Thermo LTQ−Orbitrap Discovery)質量分析計(アメリカ合衆国、Thermo Fisher社)を使用した。ここでスプレイング電圧(spraying voltage)は3.7 KVであり、チューブレンズは230Vであり、キャピラリー温度は300℃であり、分解能は30000であり、質量−電荷比の範囲は1000から3000である。重鎖(GOFグリカン型を含むFc)の理論的分子量を、GPMAW6.0ソフトウェアを用いて計算すると50416.7Daであり、軽鎖の理論的分子量は23120.8Daであった。質量分析計から生成されたオリジナルシグナルはPROMASSソフトウェアを用いてデコンヴォリューションを行い、対応する測定分子量を得た。
保存的なN−グリコシル化部位はAsn−X−Thr/Serであり、ここでXはProを除く任意のアミノ酸である。N−連結グリカンはAsn−X−Ser/Thr特徴的配列のAsn残基に結合していた(Imperiali B, O’Connor SE. Effect of N−linked glycosylation on glycopeptide and glycoprotein structure. Curr Opin Chem Biol 3 (6): 643−649)。実施例5において得られた全長抗体GB235−019のFabフレームワーク領域3のAsn73位はN−グリコシル化部位であった。保存的なN−グリコシル化部位はAsn−X−Ser/Thrのユニーク配列に変異を入れることにより取り除いた(Walsh G. Biopharmaceutical benchmarks−2003. Nat Biotechnol, 2003, 21:865−870)。IgBLAST配列比較により、生殖細胞系列遺伝子におけるAsp−Thr−Serの組み合わせの存在が明らかになった。ヌクレオチド配列比較により示されたように、Asnに対応するコドン「AAC」はAsnをAspに変化させるように「GAC」と変異させることもできた。Asn及びGlnの両方はアミド型のアミノ酸であり、Glnが側鎖にAsnよりも1つ多いメチル基を有する点でそれらは互いに保存的な置換である。同様に、Asnに対応するコドン「AAC」はAsnをGlnに変化させるように「CAG」と変異させることもできた。IgBLASTにより、生殖細胞系列遺伝子内でSerの位置におけるAlaの存在が明らかになった。生殖細胞系列ヌクレオチド配列比較により、Serに対応するコドン「TCC」は、SerをAlaに置き換えるために「GCC」に変異させることもできた。
12−1:5’−GTCACCATGACCAGGGACACCTCCAT−3’
12−2:5’−ATGGAGGTGTCCCTGGTCATGGTGAC−3’
13−1:5’−GTCACCATGACCAGGCAGACCTCCATAAGC−3’
13−2:5’−GCTTATGGAGGTCTGCCTGGTCATGGTGAC−3’
14−1:5’−CATGACCAGGAACACCGCCATAAGCAC−3’
14−2:5’−GTGCTTATGGCGGTGTTCCTGGTCATG−3’
実施例8において構築した突然変異体抗体についての組み換えベクターの発現は、実施例6におけるものと同じ手順によって行った。293−VH−CH−N73D、293−VH−CH−N73Q及び293−VH−CH−S75Aは、フリースタイル293F細胞(アメリカ合衆国、Invitrogen社から購入したもの、カタログ番号:R790−07)に共形質移入するためにそれぞれ293−VL−CLと共に使用した。
実施例9において得られた突然変異体抗体GB235−019N73D、GB235−019N73Q及びGB235−019S75Aの還元分子量を解析する方法は実施例7のものと同じである。10μgのGB235−019突然変異体抗体GB235−019N73D、GB235−019N73Q及びGB235−019S75Aの各々にジチオスレイトールを最終濃度20mMになるように加え、突然変異体抗体を水槽にて37℃で、30分間インキュベーションし、全ての鎖間ジスルフィド結合を破壊した。分離した軽鎖及び重鎖は質量分析計を組み合わせた逆相クロマトグラフィーを用いて解析した。ウォーターズ H−クラス・バイオ超高速液体クロマトグラフィー(アメリカ合衆国、Waters Inc.)を使用して、クロマトグラフィーカラム:PLRP−S 300Å, 3.0μm、2.1×150mm(アメリカ合衆国、Agilent Inc.から購入したもの、カタログ番号:1912−3301)で;移動相:A(水)、B(アセトニトリル)及びC(1%TFA)、4分後に35%Bから20分後に42%Bへの勾配にした、ここでC相は10%に維持し、流速は0.3mL/分、及び添加量は20μgである。サーモLTQ−Orbitrapディスカバリー(Thermo LTQ−Orbitrap Discovery)質量分析計(アメリカ合衆国、Thermo Fisher Inc.)を使用した。ここでスプレイング電圧は3.7KVであり、チューブレンズは230Vであり、キャピラリー温度は300℃であり、分解能は30000であり、質量−電荷比の範囲は1000から3000である。3つの突然変異体抗体の重鎖(GOFグリカン型を含むFc)の理論的分子量を、GPMAW6.0ソフトウェアを用いて計算すると、GB235−019S75Aについては50400.7Da、GB235−019N73Dについては50417.7Da及びGB235−019 N73Qについては50430.7Daであった。質量分析計から収集されたオリジナルシグナルはPROMASSソフトウェアを用いてデコンヴォリューションを行い、対応する測定分子量を得た。
GB235−019野生型抗体(GB235−019WT)及び突然変異体抗体GB235−019N73D、GB235−019N73Q及びGB235−019S75AのヒトHER2抗原への結合能を、ELISA結合アッセイを用いて下記の手順により検証した。ヒトHER2抗原(Sino Biological Inc.から購入したもの、カタログ番号:10004−H08H)を、PBSを用いて1μg/mlに希釈し、ELISAプレートに100μl/ウェルにて加え、4℃、一晩コーティングを行った。プレートはPBSTを用いて4回洗浄し、その後、5%BSA(アメリカ合衆国、Amresco社から購入したもの、カタログ番号:0332−100g、溶液はPBSである)を300μl/ウェルにて加え、室温で1時間、ブロッキングを行った。プレートを、PBSTを用いて4回洗浄した後、GB235−019WT抗体及び突然変異体抗体GB235−019N73D、GB235−019N73Q及びGB235−019S75Aの各々、並びにペルツズマブ(Roche Corp.から購入したもの)及びハーセプチン(Roche Corp.から購入したもの)のそれぞれを5μg/mlから始めて、5倍希釈に供し、7つの濃度勾配を得た。各々の希釈液はELISAプレートに100μl/ウェルにて加え、室温で1時間インキュベーションした。プレートはPBSTを用いて4回洗浄し、その後HRP標識化ヤギ抗ヒトIgG Fc抗体(アメリカ合衆国、CalBiochem Inc.から購入したもの、カタログ番号:AP113A−K)を、PBS緩衝液を用いて1:10000に希釈し、ELISAプレートに100μl/ウェルにて加え、室温で1時間、インキュベーションを行った。プレートはPBSTを用いて4回洗浄し、その後、可溶単一成分基質3,3’,5,5’−テトラメチルベンジジン(Tiangen Co., Ltd.から購入したもの、カタログ番号:PA107−01)を100μl/ウェルにて加え、室温で15分間、可視化のためにインキュベーションを行った。停止溶液(1M硫酸)を50μl/ウェルにて加え、450/630nm波長の吸光度をM5多機能ELISAプレート(アメリカ合衆国、Molecular Devices Inc.)上で読み取った。
乳がんBT−474細胞は中程度レベルのHER2及びHER3並びに高レベルのP−HER2を発現するが、P−HER3は発現しない(Richard M. Neve. Acollection of breast cancer cell lines for the study of functionally distinct cancer subtypes. CANCER CELL, 2006, 515−527)。本明細書において上記に定義したように、乳がんBT−474細胞はHER2陽性腫瘍細胞である。ヘレグリン−α(アメリカ合衆国、R&D Inc.から購入したもの、カタログ番号:296−HR)を補填した完全培地を用いた増殖阻害アッセイにおいて、対数増殖期のBT−474細胞を96ウェル培養プレート内で10%のウシ胎仔血清(アメリカ合衆国、Invitrogen Inc.から購入したもの、カタログ番号:A10491)を含むRPMI1640完全培地(アメリカ合衆国、Invitrogen Inc.から購入したもの、カタログ番号:10099−141)内で5000細胞/ウェルにて、37℃、5% CO2中で24時間、培養した。GB235−019WT抗体及び突然変異体抗体GB235−019N73D、GB235−019N73Q及びGB235−019S75Aを別途に、並びにハーセプチンと組み合わせて投与することにより阻害アッセイを行った。別途投与グループ内において、GB235−019WT抗体及びGB235−019N73D、GB235−019N73Q及びGB235−019S75A突然変異体抗体並びにペルツズマブ及びハーセプチンをそれぞれ加えた(最終操作濃度、75、18.8、4.7、1.2、0.29、0.07、0.018、0.005、0.0011、及び0μg/ml);並びに組み合わせ投与グループにおいて、上記の用量のGB235−019WT、GB235−019N73D、GB235−019N73Q、GB235−019S75A及びペルツズマブの各々はハーセプチンと組み合わせて投与した。2時間の上記のような抗体処置の後、最終操作濃度100ng/mlのヘレグリン−α溶液を加えた。ここでウェルにはヘレグリン−α溶液の添加が無いウェルも含めている。プレートはさらに37℃、5% CO2中、6日間、培養した。アラマーブルー(アメリカ合衆国、Invitrogen Inc.から購入したもの、カタログ番号:DAL1100)をBT−474細胞の生存率を検出するために加え、544/590nmにおける蛍光度をM5多機能ELISAプレートリーダー(アメリカ合衆国、Molecular Devices Inc.)上で読み取った。
対数増殖期のBT−474細胞は6ウェル培養プレート中で10%ウシ胎仔血清(アメリカ合衆国、Invitrogen Inc.から購入したもの、カタログ番号:10099−141)を含むRPMI1640完全培地(アメリカ合衆国、Invitrogen Inc.から購入したもの、カタログ番号:A10491)内に1.8×105細胞/ウェルにて、37℃で、5%CO2中、24時間、培養した。次の日、培地を廃棄し、0.1%ウシ胎仔血清(アメリカ合衆国、Invitrogen Inc.から購入したもの、カタログ番号:10099−141)を含む低血清培養用培地を代わりに使用し、24時間、インキュベーションした。
乳がんMCF7細胞は低レベルのHER2及び高レベルのHER3を発現するが、P−HER2及びP−HER3は発現しない(Richard M. Neve. A collection of breast cancer cell lines for the study of functionally distinct cancer subtypes. CANCER CELL, 2006: 515−527)。上記に定義したように、乳がんMCF7細胞はHER2陰性腫瘍細胞である。対数増殖期におけるMCF7細胞を6ウェル培養プレート中で10%ウシ胎仔血清(アメリカ合衆国、Invitrogen Inc.から購入したもの、カタログ番号:10099−141)を含むRPMI1640完全培地(アメリカ合衆国、Invitrogen Inc.から購入したもの、カタログ番号:A10491)内に1.8×105細胞/ウェルにて、24時間、培養した。次の日、培地を廃棄し、0.1%ウシ胎仔血清を含む低血清培養用培地を代わりに使用し、24時間、飢餓培養を行った。MCF7細胞を20μg/mlの各々のGB235−019WT抗体及び突然変異体抗体GB235−019N73D、GB235−019N73Q及びGB235−019S75Aで処置し、ペルツズマブ及びハーセプチンを別途に又はRPMI−0.1%ウシ胎仔血清培養液内に組み合わせて6時間、投与した。10分間の誘導のためにヘレグリン−α(アメリカ合衆国、R&D Inc.から購入したもの、カタログ番号:296−HR)を100ng/mlの操作最終濃度にて加えた。ここでウェルにはヘレグリン−αを添加しないブランク対照ウェルを含めている。反応を停止するために、プレートは予め4℃で冷却したPBSを用いて1度洗浄した。その後、120μlのLDS(アメリカ合衆国、Invitrogen Inc.から購入したもの、カタログ番号:NP0007)をプレートに加え、プレートは氷上に置いた。細胞可溶化物を即座に回収し、後の使用のために−80℃にて保存した。
GB235−019突然変異体抗体GB235−019N73D、GB235−019N73Q及びGB235−019S75Aを、それらの純度を決定するために分子サイズ排除クロマトグラフィー(SEC−HPLC)にそれぞれ供した。実験条件は下記の通りである:ウォーターズ2695液体クロマトグラフィー(アメリカ合衆国、Waters Inc.);連結したTSKゲル G3000SWXLクロマトグラフィーカラム(2カラム)(アメリカ合衆国、Waters Inc.から購入したもの);0.1Mリン酸緩衝液、0.1M塩化ナトリウム、pH7.0、1.0mL/min、30分間のアイソクラチック保持である移動相;各々の抗体30μgである添加量;及び280nmである検出波長。
突然変異体抗体GB235−019N73D、GB235−019N73Q及びGB235−019S75Aはそれぞれ画像化キャピラリー等電点電気泳動(imaging capillary isoelectric focusing;iCIEF)に供し、それぞれの主要ピークの等電点(pI)及び荷電アイソマーの純度を決定した。実験条件は下記の通りである:プロテインシンプル(ProteinSimple) iCE280 キャピラリー等電点電気泳動装置(アメリカ合衆国、Protein Simple Inc.);iCIEFカートリッジ(アメリカ合衆国、Protein Simple Inc.から購入したもの);両性電解質溶液は、12μlのファーマライト(Pharmalyte)3−10(アメリカ合衆国、GE Inc.から購入したもの、カタログ番号:17045601)、0.5μlのpIマーカー5.85(アメリカ合衆国、GE Inc.から購入したもの、カタログ番号:17−0472−01)、0.5μlのpIマーカー9.77(アメリカ合衆国、GE Inc.から購入したもの、カタログ番号:17−0473−01)、
2μlの500mM L−アルギニン(Sangon Inc.から購入したもの、カタログ番号:AB0205−100g)、2μlの200mM イミノ二酢酸(Sangon Inc.から購入したもの、カタログ番号:IB0530−100g)、70μlの1%メチルセルロース(Sangon Inc.から購入したもの、カタログ番号:MB0616−250g)及び113μlの5.3M尿素(Sangon Inc.から購入したもの、カタログ番号:UB0148−500g)を混合することにより調製した。添加溶液を180μlの両性電解質溶液を20μlの2.5mg/mLタンパク質溶液と混合することにより調製した。サンプルシステムは1500V、1分間、プレフォーカスさせ、3000V、10分間、フォーカスさせた。フォーカスパターンは280nmの検出波長でCCDカメラを用いて記録した。
突然変異体抗体GB235−019N73D、GB235−019N73Q及びGB235−019S75Aは、それぞれ還元キャピラリーゲル電気泳動解析(rCE−SDS)に供し、それぞれの純度(軽鎖及び重鎖のパーセンテージの合計)について決定した。実験条件は下記の通りである。SDS−MW解析キット(アメリカ合衆国、Beckman Inc.から購入したもの、カタログ番号:390953)及び非コーティングキャピラリーチューブ(Micro solv Inc.から購入したもの)を解析に使用した。100mM Tris−HCl、pH9.0、1% SDS(Sangon Inc.から購入したもの、カタログ番号:SB0485−100g)溶液をβ−メルカプトエタノール(アメリカ合衆国、Sigma Inc.から購入したもの、カタログ番号:M6250)と55:5の割合で混合させた。60μlの上述の混合溶液を40μlの2.5mg/mLサンプル溶液と混合させ、70℃の水槽に10分間インキュベーションした。サンプル添加は5KV、20秒間で行い、分離は15KV、30分間で行った。波長を214nmとして、UV検出器を使用した。
突然変異体抗体GB235−019N73D、GB235−019N73Q及びGB235−019S75Aは、示差走査熱量測定(DSC)にそれぞれ供し、それぞれのTm値(50%の生物学的分子がその温度においてアンフォールド状態にあることを意味する、相転移温度)を決定した。実験条件は下記の通りである。130μlの検出細胞容量を有するマイクロキャル(MicroCal) VP−キャピラリー DSC示差走査熱量測定器(アメリカ合衆国、GE Inc.)を使用した。3つの突然変異体抗体をPBS(0.01M Na2HPO4・12H2O+0.002M KH2PO4+0.14M NaCl+0.002M KCl,pH=8.6)を用いて各々0.9mg/mLに希釈した。PBSはブランク対照として使用し、温度変化を30℃から95℃へと設定し、スキャニング速度を60℃/時に設定した。
Claims (10)
- 抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列がそれぞれ、配列番号10及び配列番号2;配列番号11及び配列番号2、或いは、配列番号12及び配列番号2である、抗HER2完全ヒト抗体。
- Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv又はscFvの形態である、請求項1に記載の抗HER2完全ヒト抗体。
- ヒトIgGの重鎖定常領域及び軽鎖定常領域をさらに含み;好ましくは、ヒトIgGがIgG1であり、より好ましくは、ヒトIgG重鎖定常領域のアミノ酸配列が配列番号5であり、ヒトIgG軽鎖定常領域のアミノ酸配列が配列番号6である、請求項1に記載の抗HER2完全ヒト抗体。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗HER2完全ヒト抗体をコードするヌクレオチド配列であって、好ましくは、前記ヌクレオチド配列において、重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列が配列番号13、配列番号14又は配列番号15であり、軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列が配列番号4である、ヌクレオチド配列。
- 請求項4に記載のヌクレオチド配列を含む発現ベクターであって、前記ヌクレオチド配列が前記発現ベクターの発現制御配列に作動可能に連結しており;好ましくは、前記発現ベクターはpGEM−Tベクター又は293ベクターである、発現ベクター。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗HER2完全ヒト抗体及び医薬的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗HER2完全ヒト抗体及び1つ又は複数の付加的なHER2陽性腫瘍治療剤を含み、前記1つ又は複数の付加的なHER2陽性腫瘍治療剤がハーセプチン又はペルツズマブである、組み合わせ薬剤。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗HER2完全ヒト抗体を含む、ヒトHER2を検出するためのキット。
- 対象のHER2陽性腫瘍、弱陽性腫瘍又は陰性腫瘍を治療するための薬剤の調製における、請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗HER2完全ヒト抗体の使用であって、好ましくは、前記HER2陽性腫瘍が、HER2陽性の乳がん、胃がん、肺がん、肺非小細胞がん、骨のがん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部がん、皮膚又は眼内メラノーマ、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肛門がん、大腸がん、卵管がん、子宮体がん、子宮頸がん、膣がん、外陰がん、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌系のがん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織のがん、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、膀胱がん、腎臓又は尿道がん、腎細胞がん、腎盂がん、中皮腫、肝細胞がん、胆嚢がん、慢性又は急性白血病、リンパ細胞リンパ腫、中枢神経系(CNS)がん、脊髄腫瘍、脳幹の神経膠腫、多形性神経膠芽細胞腫、星細胞腫、神経鞘腫、上衣腫、髄芽腫、髄膜腫、扁平上皮癌及び下垂体腺腫から選択される、使用。
- 対象がHER2陽性腫瘍、弱陽性腫瘍又は陰性腫瘍を有するヒトである、請求項9に記載の使用。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510051280.3A CN105985435B (zh) | 2015-01-30 | 2015-01-30 | 全人源her2抗体的突变抗体及其编码基因和应用 |
CN201510051280.3 | 2015-01-30 | ||
PCT/CN2015/096674 WO2016119523A1 (zh) | 2015-01-30 | 2015-12-08 | 全人源her2抗体的突变抗体及其编码基因和应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017518038A true JP2017518038A (ja) | 2017-07-06 |
JP6263778B2 JP6263778B2 (ja) | 2018-01-24 |
Family
ID=56542351
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016562486A Active JP6263778B2 (ja) | 2015-01-30 | 2015-12-08 | 抗her2完全ヒト抗体の突然変異体抗体、及びそれをコードする遺伝子並びにそれらの使用 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10253108B2 (ja) |
EP (1) | EP3115377B1 (ja) |
JP (1) | JP6263778B2 (ja) |
KR (1) | KR101886772B1 (ja) |
CN (1) | CN105985435B (ja) |
RU (1) | RU2639531C1 (ja) |
WO (1) | WO2016119523A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2016164477A1 (en) * | 2015-04-06 | 2016-10-13 | Meso Scale Technologies, Llc. | High throughput system for performing assays using electrochemiluminescence including a consumable shaking apparatus |
EP3509622A4 (en) | 2016-09-08 | 2020-06-17 | Regenerative Research Foundation | BI-FUNCTIONAL ANTI-TAU POLYPEPTIDES AND THEIR USE |
EP3565845A4 (en) * | 2017-01-06 | 2020-10-07 | Biosion, Inc. | ERBB2 ANTIBODIES AND THEIR USES |
CN110790840A (zh) * | 2018-08-01 | 2020-02-14 | 三生国健药业(上海)股份有限公司 | 结合人her2的抗体、其制备方法和用途 |
CA3134363A1 (en) * | 2019-03-22 | 2020-10-01 | Olivia Newton-John Cancer Research Institute | Anti-her2 binding molecules |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5714350A (en) * | 1992-03-09 | 1998-02-03 | Protein Design Labs, Inc. | Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region |
JP2004501605A (ja) * | 2000-02-16 | 2004-01-22 | オレゴン ヘルス サイエンセズ ユニヴァーシティー | Her−2に結合するアンタゴニスト |
JP2011517456A (ja) * | 2008-04-02 | 2011-06-09 | マクロジェニクス,インコーポレーテッド | HER2/neu特異的抗体およびその使用方法 |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB8823869D0 (en) * | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
US5661016A (en) * | 1990-08-29 | 1997-08-26 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
AU2003224916B2 (en) | 2002-04-10 | 2009-01-08 | Genentech, Inc. | Anti-HER2 antibody variants |
HUP0600340A3 (en) | 2002-07-15 | 2011-06-28 | Genentech Inc | Methods for identifying tumors that are responsive to treatment with anti-erbb2 antibodies |
KR20070038557A (ko) * | 2004-07-22 | 2007-04-10 | 제넨테크, 인크. | Her2 항체 조성물 |
JO3000B1 (ar) | 2004-10-20 | 2016-09-05 | Genentech Inc | مركبات أجسام مضادة . |
CN102167742B (zh) * | 2010-02-25 | 2014-05-14 | 上海百迈博制药有限公司 | 一种全人源抗her2单克隆抗体、其制备方法及用途 |
CN103153339B (zh) * | 2010-05-27 | 2021-05-04 | 根马布股份公司 | 针对her2表位的单克隆抗体 |
AU2011274510A1 (en) * | 2010-07-09 | 2013-01-24 | Exelixis, Inc. | Combinations of kinase inhibitors for the treatment of cancer |
RU2014114015A (ru) * | 2011-11-08 | 2015-12-20 | Пфайзер Инк. | Способы лечения воспалительных расстройств с использованием антител против m-csf |
CN104530236B (zh) * | 2014-11-26 | 2018-02-23 | 嘉和生物药业有限公司 | 一种全人源her2抗体、其编码基因及应用 |
-
2015
- 2015-01-30 CN CN201510051280.3A patent/CN105985435B/zh active Active
- 2015-12-08 KR KR1020167032586A patent/KR101886772B1/ko active IP Right Grant
- 2015-12-08 US US15/304,199 patent/US10253108B2/en active Active
- 2015-12-08 JP JP2016562486A patent/JP6263778B2/ja active Active
- 2015-12-08 RU RU2016140699A patent/RU2639531C1/ru active
- 2015-12-08 EP EP15879721.7A patent/EP3115377B1/en active Active
- 2015-12-08 WO PCT/CN2015/096674 patent/WO2016119523A1/zh active Application Filing
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5714350A (en) * | 1992-03-09 | 1998-02-03 | Protein Design Labs, Inc. | Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region |
JP2004501605A (ja) * | 2000-02-16 | 2004-01-22 | オレゴン ヘルス サイエンセズ ユニヴァーシティー | Her−2に結合するアンタゴニスト |
JP2011517456A (ja) * | 2008-04-02 | 2011-06-09 | マクロジェニクス,インコーポレーテッド | HER2/neu特異的抗体およびその使用方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
IGAWA, T. ET AL.: "Engineering the variable region of therapeutic IgG antibodies", MABS, vol. 3, JPN6017034669, 2011, pages 243 - 252, XP055532830, ISSN: 0003638785, DOI: 10.4161/mabs.3.3.15234 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN105985435A (zh) | 2016-10-05 |
EP3115377A4 (en) | 2017-11-15 |
US20170037146A1 (en) | 2017-02-09 |
US10253108B2 (en) | 2019-04-09 |
KR101886772B1 (ko) | 2018-08-08 |
EP3115377B1 (en) | 2020-02-26 |
EP3115377A1 (en) | 2017-01-11 |
KR20160145185A (ko) | 2016-12-19 |
CN105985435B (zh) | 2019-10-15 |
WO2016119523A1 (zh) | 2016-08-04 |
JP6263778B2 (ja) | 2018-01-24 |
RU2639531C1 (ru) | 2017-12-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN113347994B (zh) | 使用her3抗原结合分子治疗和预防癌症 | |
JP7046973B2 (ja) | 抗ox40抗体およびその使用 | |
JP6263778B2 (ja) | 抗her2完全ヒト抗体の突然変異体抗体、及びそれをコードする遺伝子並びにそれらの使用 | |
KR102593409B1 (ko) | Her3 항원 결합 분자 | |
JP2019503687A (ja) | 抗pd−l1抗体およびその使用 | |
JP2021533790A (ja) | 抗ヒトclaudin18.2モノクローナル抗体及びその使用 | |
US20230287139A1 (en) | Anti-her2/pd1 bispecific antibody | |
AU2014267171A1 (en) | Anti-CXCL1, CXCL7 and CXCL8 antibodies and their applications | |
JP7099709B2 (ja) | ヒト化抗ベイシジン抗体およびその使用 | |
CN109988240B (zh) | 抗gpc-3抗体及其用途 | |
JP2023540526A (ja) | ネクチン-4抗体およびそれの使用 | |
CN114790242A (zh) | 一种结合人pd-l1的抗体 | |
KR101953299B1 (ko) | EGFRvIII에 대한 항체 및 이의 이용 | |
CN114805571B (zh) | 抗cldn18.2抗体及其应用 | |
CN113227148B (zh) | 抗gpc3抗体、其抗原结合片段及其医药用途 | |
JP2024512260A (ja) | Vegfa結合分子 | |
US20210009713A1 (en) | Methods of using monoclonal antibodies targeting epitopes of asph | |
RU2802272C2 (ru) | Антитело к cd3 и его фармацевтическое применение | |
WO2023236844A1 (zh) | 靶向her2和pd-l1的双特异性抗体及其制备方法和应用 | |
WO2023186092A1 (zh) | 针对c-Met的单克隆抗体以及双特异性抗体 | |
JP2024509369A (ja) | 抗pd-l1抗体及びその使用 | |
WO2022238459A1 (en) | New humanized anti-vegfc antibodies and uses thereof | |
TW202221038A (zh) | 抗trop-2抗體、其抗原結合片段或其突變體、及其醫藥用途 | |
CN116143933A (zh) | 抗人cd38双特异性抗体及其用途 | |
JP2022525627A (ja) | Gpnmb及びcd3に特異的に結合する二重特異性抗体並びにその使用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170912 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20171108 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20171121 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20171127 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6263778 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |