JP2017503787A - モノクローナル抗tk1抗体 - Google Patents
モノクローナル抗tk1抗体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017503787A JP2017503787A JP2016541139A JP2016541139A JP2017503787A JP 2017503787 A JP2017503787 A JP 2017503787A JP 2016541139 A JP2016541139 A JP 2016541139A JP 2016541139 A JP2016541139 A JP 2016541139A JP 2017503787 A JP2017503787 A JP 2017503787A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- monoclonal antibody
- human
- amino acid
- acid sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- C12N9/1205—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1), e.g. protein kinases
- C12N9/1211—Thymidine kinase (2.7.1.21)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
- C12Y207/01—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1)
- C12Y207/01021—Thymidine kinase (2.7.1.21)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/91—Transferases (2.)
- G01N2333/912—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- G01N2333/91205—Phosphotransferases in general
- G01N2333/9121—Phosphotransferases in general with an alcohol group as acceptor (2.7.1), e.g. general tyrosine, serine or threonine kinases
- G01N2333/91215—Phosphotransferases in general with an alcohol group as acceptor (2.7.1), e.g. general tyrosine, serine or threonine kinases with a definite EC number (2.7.1.-)
- G01N2333/9122—Thymidine kinase (2.7.1.21)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/26—Infectious diseases, e.g. generalised sepsis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/54—Determining the risk of relapse
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/70—Mechanisms involved in disease identification
- G01N2800/7023—(Hyper)proliferation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
本発明の実施形態は、一般に、モノクローナル抗TK1抗体、そのようなモノクローナル抗TK1抗体の使用を含むキットおよび方法に関する。
チミジンキナーゼ1、TK1(ATP:チミジン5’−ホスホトランスフェラーゼ、EC2.7.1.21)は、DNA前駆体合成に関与する酵素である。TK1の形態は、悪性腫瘍のヒトおよび動物の血清中にも高レベルで存在する。それゆえ血清TK1活性の測定は、複数の異なる悪性疾患で、しかし主に白血病およびリンパ腫の例で、モニタリングおよび診断目的で用いられてきた。
ヒトTK1の血清形態に結合することが可能なモノクローナル抗体またはフラグメントを提供することを目的とする。
ヒトTK1のGEAVAARKLF(SEQ ID NO:2)と;
ヒトTK1のNCPVPGKPGE(SEQ ID NO:4)、PVPGKPGEAV(SEQ ID NO:5)およびNCPVPGKPGEAV(SEQ ID NO:3)のうちの少なくとも1つと;
ヒトTK1のコンホメーション依存エピトープと、
からなる群から選択されるエピトープへの特異性を有する。
ヒトTK1のGEAVAARKLF(SEQ ID NO:2)と;
ヒトTK1のNCPVPGKPGE(SEQ ID NO:4)、PVPGKPGEAV(SEQ ID NO:5)およびNCPVPGKPGEAV(SEQ ID NO:3)のうちの少なくとも1つと;
ヒトTK1のコンホメーション依存エピトープと、
からなる群から選択される第一のエピトープへの特異性を有する。第二のモノクローナル抗体は、この群から選択される第二の異なるエピトープへの特異性を有する。
本発明の実施形態は、一般に、モノクローナル抗チミジンキナーゼ1(抗TK1)抗体または抗体フラグメント、およびそのようなモノクローナル抗TK1抗体または抗体フラグメントの使用を含む方法およびキットに関する。
・ヒトTK1のGEAVAARKLF(SEQ ID NO:2)と;
・ヒトTK1のNCPVPGKPGE(SEQ ID NO:4)、PVPGKPGEAV(SEQ ID NO:5)およびNCPVPGKPGEAV(SEQ ID NO:3)のうちの少なくとも1つと;
・ヒトTK1のコンホメーション依存エピトープと、
からなる群から選択されるエピトープへの特異性を有する。
・DYEMH(SEQ ID NO:6)、またはSEQ ID NO:6への少なくとも90%の配列同一性、好ましくは少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列;
・AIHPGYGGTAYNQKFKG(SEQ ID NO:7)、またはSEQ ID NO:7への少なくとも90%の配列同一性、好ましくは少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列;
・FITKFDY(SEQ ID NO:8)、またはSEQ ID NO:8への少なくとも90%の配列同一性、好ましくは少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列;
・KSSQSLLDSDGKTFLN(SEQ ID NO:9)、またはSEQ ID NO:9への少なくとも90%の配列同一性、好ましくは少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列;
・LVSKLDS(SEQ ID NO:10)、またはSEQ ID NO:10への少なくとも90%の配列同一性、好ましくは少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列;および
・WQGTHFPWT(SEQ ID NO:11)、またはSEQ ID NO:11への少なくとも90%の配列同一性、好ましくは少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列、
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域(CDR)を有する。
・DYEMH(SEQ ID NO:6)、またはSEQ ID NO:6への少なくとも90%の配列同一性、好ましくは少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列;
・AILPGSGGTAYNQKFKG(SEQ ID NO:12)、またはSEQ ID NO:12への少なくとも90%の配列同一性、好ましくは少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列;
・LITTFDY(SEQ ID NO:13)、またはSEQ ID NO:13への少なくとも90%の配列同一性、好ましくは少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列;
・KSSQSLLDSDGKTYLN(SEQ ID NO:14)、またはSEQ ID NO:14への少なくとも90%の配列同一性、好ましくは少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列;
・LVSKLDS(SEQ ID NO:10)、またはSEQ ID NO:10への少なくとも90%の配列同一性、好ましくは少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列;および
・WQGTHFPWT(SEQ ID NO:11)、またはSEQ ID NO:11への少なくとも90%の配列同一性、好ましくは少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列、
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDRを有する。
・SGYSWH(SEQ ID NO:15)、またはSEQ ID NO:15への少なくとも90%の配列同一性、好ましくは少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列;
・YIHYSGSTTYNPSLKG(SEQ ID NO:16)、またはSEQ ID NO:16への少なくとも90%の配列同一性、好ましくは少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列;
・WGTGHWYFDV(SEQ ID NO:17)、またはSEQ ID NO:17への少なくとも90%の配列同一性、好ましくは少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列;
・RSSTGAVTTTNYAN(SEQ ID NO:18)、またはSEQ ID NO:18への少なくとも90%の配列同一性、好ましくは少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列;
・GTNNRVP(SEQ ID NO:19)、またはSEQ ID NO:19への少なくとも90%の配列同一性、好ましくは少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列;および
・ALWYSNHWV(SEQ ID NO:20)、またはSEQ ID NO:20への少なくとも90%の配列同一性、好ましくは少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列、
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDRを有する。
本発明の実施例は、3つの独特なモノクローナル抗TK1抗体の設計および多段階単離を示す。該モノクローナル抗TK1抗体は、組換えTK、細胞TK1および血清TK1を認識することが可能である。さらに、TK1アミノ酸配列内のエピトープ結合領域を含む特有のモノクローナル抗TK1抗体を得るための免疫化、選択および最終的スクリーニング手順を開示する。健常な血液ドナーの試料および異なる型の癌疾患の患者からの試料を用いたこれらのモノクローナル抗TK1抗体のうちの2つに基づくサンドイッチELISAの設計および実施も説明する。
ヒトTK1タンパク質配列[19]から開始して以下の配列GQPAGPDNKENCPVPGKPGEAVAARKLFAPQ(SEQ ID NO:1)を含むヒトTK1のC末端領域に対するマウスモノクローナル抗体の免疫化および選択を、2つの例で実施した。
この手順を本質的に[21]に記載された通り実施した。要約すると、ペプチド3〜5μl(3〜300pg/スポット)、ヒトrTK1(0.02〜0.2ng/スポット)または血清試料を、ニトロセルロース膜に直接塗布した。膜を10%脱脂乳を含むトリス緩衝生理食塩水(TBS)中で4時間ブロックし、上清または他の一次抗TK1抗体を添加した後、室温(RT、23〜25℃)で一晩インキュベートした。ビオチン化二次抗マウスIgG抗体と共にRTで1時間インキュベートした後、膜をアビジン−HRP−ストレプトアビジンを含むTBS緩衝液中でインキュベートし、その後、ECL基質(GE Healthcare)を添加した。膜上の単一スポットのケミルミネッセンス強度を、2〜4分間暴露されたフィルム(GE Healthcare)上で検出した。複数の血清試料もまた、健常対照および異なる腫瘍疾患の患者の両方からの膜に塗布した。
該アッセイを、二段階で実施した。最初に、ドットブロットアッセイの結果(実施例2)に基づいて選択された抗XPA210抗体を、ヒトrTK1、または血清TK1レベルの高い血液癌に罹患した患者の血清試料と反応させた。第二段階で、抗原抗体複合体に結合する磁気ビーズ含有抗マウスIgG抗体を添加し、次にその混合物が磁場に供し、反応溶液から取り出すことができた。非結合TK1タンパク質を、酵素活性測定により検出した。
選択されたモノクローナル抗体が結合するアミノ酸領域を決定するために、ビオチン化された10のアミノ酸標的ペプチドを用いたPepscan分析を実施した。その手順は、実施例1に関連して示されたTK1配列の193〜226の領域を表す14の十量体アミノ酸ペプチドの組み合わせの合成に基づいている。各ペプチドは、8つのアミノ酸オーバーラップおよび2つのアミノ酸ギャップを有し、それにより14の異なるペプチドの組み合わせが得られる(表2参照)。全長ペプチド全体も含まれており、これらのペプチド全てを、ストレプトアビジンをコーティングしたマイクロタイタープレートに固定した。1時間の吸着ステップの後、プレートをPBS、1%BSAおよび0.1% Twen20で洗浄した。その後、異なる抗体をおよそ5μg/mlで添加し、プレートを1時間インキュベートした後、3回洗浄した。その後、HRPコンジュゲートを添加して、1時間インキュベートした。その後、プレートを同じ緩衝液で6回洗浄した。最後に、100μl3,3’,5,5’−テトラメチルベンジジン(TMB)基質を用いて吸光度を測定した(一連の抗体での1回のテスト結果を表2に示す)。
試料と相互作用する「キャッチャー」として働く、マイクロタイタープレート(MTP)のウェルに結合させた第一のモノクローナル抗TK1抗体を含むサンドイッチELISAアッセイの概要を、図3に示す。第二のモノクローナル抗TK1抗体を、第二のステップで添加して、試料中に存在してウェルに固定された第一のモノクローナル抗TK1抗体に結合させたTK1に、第二のモノクローナル抗TK1抗体を結合させる。第二のモノクローナル抗TK1抗体を、ビオチン化により修飾するが、それは、HRP標識ストレプトアビジンに関してレポータ複合体と非常に効率的に相互作用して、容易に測定可能な発色反応を生じ得ることを意味している。サンドイッチELISAアッセイの標準手順の概要を以下に表す:
1.バイアル中の等容量(70μl)の試料および試料希釈緩衝液をピペットで注入して、ボルテックス処理する;
2.23〜25℃で30分間インキュベートする;
3.試料と試料希釈緩衝液との混合物100μl/ウェルを添加する;
4.25℃、650rpmで振とうしながら2時間インキュベートする;
5.PBS Tween−20(PBST)350μlで4回洗浄する;
6.試薬緩衝液中のビオチン標識された抗TK1抗体100μl/ウェルを添加する;
7.25℃、650rpmで振とうしながら1時間インキュベートする;
8.PBST 350μlで4回洗浄する;
9.ストレプトアビジン ポリ−HRP 100μl/ウェルを添加する;
10.25℃、650rpmで振とうしながら30分間インキュベートする;
11.PBST 350μlで4回洗浄する;
12.TMB基質 100μl/ウェルを添加する;
13.15分間インキュベートする;
14.停止溶液 100μl/ウェルを添加する;
15.450nmで吸光度を読み取る。
ここでは、XPA210−Ar1およびXPA−Ar2モノクローナル抗体を用いて実施例5に記載された通り実施されたプロトタイプのELISAで得られた結果を示す。テストされた試料は、異なる疾患ステージの前立腺がん患者からの血清28種であった(Biotheme Incから購入)。参照法として、TK LIAISON(登録商標)活性アッセイを用い、結果を図4に示す。図5にはELISAアッセイの結果を示し、この場合、直接の吸光度値を表す。
総RNAを凍結ハイブリドーマ細胞から抽出し、cDNAをRNAから合成した。その後、RT−PCRを実施して、抗体の可変領域(重鎖および軽鎖)を増幅させて、その後、別々に標準クローニングベクターにクローニングして配列決定した。
ハイブリドーマ細胞株XPA210−Ar1からのモノクローナル抗TK1抗体を、アイソタイピングアッセイに用い、それをSBA Clonotyping(商標)System−HRP(SouthernBiotech、Cat. No.5300−05)の技術マニュアルに従って実施した。モノクローナル抗体XPA210−Ar1のアイソタイプは、IgG1重鎖およびK軽鎖であると決定された。以下の表3を参照されたい。
組換えTK1と、サンドイッチELISA手順で用いられた2つのモノクローナル抗体との相互作用の結合特性を測定するために、予備結合試験を、表面共鳴センサー技術で、より具体的にはAttana200デュアルチャネルコンティニュアスフローシステムにより実施した。この方法は、水晶振動子マイクロバランス法に基づいており、抗体−抗原相互作用の結合特性に関係する生物学的関連性の高い情報を提供する。
[1] Gronowitz, J.S., Hagberg, H., Kallander, C.F., Simonsson, B., 1983, The use of serum deoxythymidine kinase as a prognostic marker, and in the monitoring of patients with non−Hodgkin’s lymphoma. British Journal of Cancer 47, 487−495.
[2] Karlstrom, A.R., Neumuller, M., Gronowitz, J.S., Kallander, C.F., 1990. Molecular forms in human serum of enzymes synthesizing DNA precursors and DNA. Molecular and Cellular Biochemistry 92, 23−35.
[3] He, Q.M., Skog, S., Wang, N.N., Eriksson, S., Tribukait, B., 1996. Characterization of a peptide antibody against a C−terminal part of human and mouse cytosolic thymidine kinase, which is a marker for cell proliferation. European Journal of Cell Biology 70, 117−124.
[4] Zhang, F., Li, H., Pendleton, A.R., Robison, J.G., Monson, K.O., Murray, B.K., O’Neill, K.L., 2001. Thymidine kinase 1 immunoassay: a potential marker for breast cancer. Cancer Detectection and Prevention 25, 8−15.
[5] He, Q., Zou, L., Zhang, P.A., Liu, J.X., Skog, S., Fornander, T., 2000. The clinical significance of thymidine kinase 1 measurement in serum of breast cancer patients using anti−TK1 antibody. The International Journal of Biological Markers 15, 139−146.
[6] Hallek, M., Langenmayer, I., Nerl, C., Knauf, W., Dietzfelbinger, H., Adorf, D., Ostwald, M., Busch, R., Kuhn−Hallek, I., Thiel, E., Emmerich, B., 1999. Elevated serum thymidine kinase levels identify a subgroup at high risk of disease progression in early, nonsmoldering chronic lymphocytic leukemia. Blood 93, 1732−1737.
[7] O’Neill, K.L., Zhang, F., Li, H., Fuja, D.G., Murray, B.K., 2007. Thymidine kinase 1 − A prognostic and diagnostic indicator in ALL and AML patients. Leukemia 21, 560−563.
[8] von Euler, H., Eriksson, S., 2011. Comparative aspects of the proliferation marker thymidne kinase 1 in human and canine tumor diseases. Veterinary and Comparative Oncolgy 9, 1−15.
[9] Ohrvik, A., Lindh, M., Einarsson, R., Grassi, J., Eriksson, S., 2004. Sensitive nonradiometric method for determining thymidine kinase 1 activity. Clinical Chemistry 50, 1597−1606.
[10] He, Q., Fornander, T., Johansson, H., Johansson, U., Hu, G.Z., Rutqvist, L.E., Skog, S., 2006. Thymidine kinase 1 in serum predicts increased risk of distant or loco−regional recurrence following surgery in patients with early breast cancer. Anticancer Research 26, 4753−4759.
[11] He, Q.M., Zhang, P.G., Zou, L., Li, H.X., Wang, X.Q., Zhou, S., Fornander, T., Skog, S., 2005. Concentration of thymidine kinase 1 in serum (S−TK1) is a more sensitive proliferation marker in human solid tumors than its activity. Oncology Reports 14, 1013−1019.
[12] He, E., Xu, X.H., Guan, H., Chen, Y., Chen, Z.H., Pan, Z.L., Tang, L.L., Hu, G.Z., Li, Y., Zhang, M., Zhou, J., Eriksson, S., Fornander, T., Skog, S., 2010. Thymidine kinase 1 is a potential marker for prognosis and monitoring the response to treatment of patients with breast, lung, and esophageal cancer and non−Hodgkin’s lymphoma. Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids. 29, 352−358.
[13] Wu, C., Yang, R., Zhou, J., Bao, S., Zou, L., Zhang, P., Mao, Y., Wu, J., He, Q., 2003. Production and characterisation of a novel chicken IgY antibody raised against C−terminal peptide from human thymidine kinase 1. Journal of Immunological Methods 277, 157−169.
[14] Sherley, J.L., Kelly, T.J., 1988. Regulation of human thymidine kinase during the cell cycle. Journal of Biological Chemistry 263, 8350−8358.
[15] Ke, P.Y., Chang, C.−F., 2004. Mitotic degradation of human thymidine kinase 1 is dependent on the anaphase−promoting complex/cyclosome−CDH1−mediated pathway. Molecular and. Cellular Biology 24, 514−526.
[16] Eriksson, S., Munch−Petersen, B., Johansson, K., Eklund, H., 2002. Structure and function of cellular deoxyribonucleoside kinases. Cellular and Molecular Life Sciences 59, 1327−1346.
[17] Sharif, H., Kiran Kumar, J., Wang, L., He, E., Eriksson, S., 2012. Quaternary structures of recombinant, cellular, and serum forms of Thymidine Kinase 1 from dogs and humans. BMC Biochemistry 13, 12.
[18] Kiran Kumar J, Sharif, H., Westberg, S., von Euler, H., Eriksson , S., 2013. High levels of inactive thymidine kinase 1 polypeptide in sera from dogs with solid tumours by immunoaffinity methods: Implications for in vitro diagnostics. The Veterinary Journal 197, 854−860.
[19] Flemington, F., Bradshaw Jr., H.D., Traina−Dorge, V., Slagel, V., Deininger, P.L., 1987. Sequence, structure and promoter characterization of the human thymidine kinase gene. Gene 52, 267−277.
[20] Welin M, Kosinska U, Mikkelsen NE, Carnrot C, Zhu C, Wang L, Eriksson S, Munch−Petersen B, Eklund H, 2004. Structures of thymidine kinase 1 of human and mycoplasmic origin. Proceedings of the National Academy of Sciences USA, 101, 17970−17975.
[21] Wu, J.P., Mao, Y.R., Hu, L.X., Wang, N., Wu, C.J., He, Q., Skog, S., 2000. A new cell proliferating marker: Cytosolic thymidine kinase as compared to proliferating cell nuclear antigen in patients with colorectal carcinoma. Anticancer Research 20, 4815−4820.
[22] Sharif, H., von Euler, H., Westberg, S., He, E., Wang, L., Eriksson , S., 2012,. A sensitive and kinetically defined radiochemical assay for canine and human serum thymidine kinase 1 (TK1) to monitor canine malignant lymphoma. The Veterinary Journal 194, 40−47.
[23] Gasparri, F., Wang, N., Skog, S., Galvani, A., Eriksson, S., 2009.Thymidine kinase 1 expression defines an activated G1 state of the cell cycle as revealed with site−specific antibodies and ArrayScan assays. European Journal of Cell Biology 88, 779−785.
[24] WO2004/100760号
[25] WO2008/142664号
[26] Munch−Petersen B., 2009. Reversible tetramerization of human TK1 to the high catalytic efficient form is induced by pyrophosphate, in addition to tripolyphosphates, or high enzyme concentration . FEBS Journal 276, 571−580
Claims (24)
- ヒトチミジンキナーゼ1(TK1)の血清形態に結合することが可能なモノクローナル抗体またはモノクローナル抗体フラグメントであって、
前記ヒトTK1のGEAVAARKLF(SEQ ID NO:2)と;
前記ヒトTK1のNCPVPGKPGE(SEQ ID NO:4)、PVPGKPGEAV(SEQ ID NO:5)およびNCPVPGKPGEAV(SEQ ID NO:3)のうちの少なくとも1つと;
前記ヒトTK1のコンホメーション依存エピトープと、
からなる群から選択されるエピトープへの特異性を有する、モノクローナル抗体またはモノクローナル抗体フラグメント。 - 前記モノクローナル抗体またはフラグメントが、ヒト組換えTK1およびヒトTK1の細胞形態に結合することが可能である、請求項1に記載のモノクローナル抗体またはフラグメント。
- 前記モノクローナル抗体またはフラグメントが、アミノ酸配列GQPAGPDNKENCPVPGKPGEAVAARKLFAPQ(SEQ ID NO:1)を有するペプチドに結合することが可能である、請求項1または2に記載のモノクローナル抗体またはフラグメント。
- 第一のキャリアタンパク質に連結したアミノ酸配列GQPAGPDNKENCPVPGKPGEAVAARKLFAPQ(SEQ ID NO:1)を有するペプチドを含む第一のペプチドコンジュゲート、または前記第一のキャリアタンパク質とは異なる第二のキャリアタンパク質に連結したアミノ酸配列GQPAGPDNKENCPVPGKPGEAVAARKLFAPQ(SEQ ID NO:1)を有する前記ペプチドを含む第二のペプチドコンジュゲートにより非ヒト動物を免疫化すること;
前記第一のペプチドコンジュゲートまたは前記第二のペプチドコンジュゲートに関する血中力価を有する前記非ヒト動物から、脾細胞を単離すること;
前記脾細胞を黒色腫と融合させることにより、ハイブリドーマを形成させること;
前記第一のペプチドコンジュゲートでの免疫化により得られたハイブリドーマからの上清を、前記第二のペプチドコンジュゲートへの力価についてスクリーニングすること、および前記第二のペプチドコンジュゲートでの前記免疫化により得られたハイブリドーマからの上清を、前記第一のペプチドコンジュゲートへの力価についてスクリーニングすること;
前記第一のペプチドコンジュゲートに、前記第二のペプチドコンジュゲートに、そしてヒト組換えTK1に結合することが可能なモノクローナル抗体を生成するハイブリドーマを選択すること;ならびに
前記選択されたハイブリドーマの上清から前記モノクローナル抗体を単離すること、
を含む工程により得ることができる、請求項1〜3のいずれかに記載のモノクローナル抗体またはフラグメント。 - 前記モノクローナル抗体またはフラグメントが、
アミノ酸配列(SEQ ID NO:6)を有する可変重鎖(VH)ドメイン相補性決定領域1(CDR1);
アミノ酸配列(SEQ ID NO:7)を有するVHドメインCDR2;
アミノ酸配列(SEQ ID NO:8)を有するVHドメインCDR3;
アミノ酸配列(SEQ ID NO:9)を有する可変軽鎖(VL)ドメインCDR1;
アミノ酸配列(SEQ ID NO:10)を有するVLドメインCDR2;および
アミノ酸配列(SEQ ID NO:11)を有するVLドメインCDR3、
を有する、請求項1〜4のいずれかに記載のモノクローナル抗体またはフラグメント。 - 前記モノクローナル抗体またはフラグメントが、
アミノ酸配列(SEQ ID NO:6)を有するVHドメインCDR1;
アミノ酸配列(SEQ ID NO:12)を有するVHドメインCDR2;
アミノ酸配列(SEQ ID NO:13)を有するVHドメインCDR3;
アミノ酸配列(SEQ ID NO:14)を有するVLドメインCDR1;
アミノ酸配列(SEQ ID NO:10)を有するVLドメインCDR2;および
アミノ酸配列(SEQ ID NO:11)を有するVLドメインCDR3、
を有する、請求項1〜4のいずれかに記載のモノクローナル抗体またはフラグメント。 - 前記モノクローナル抗体またはフラグメントが、
アミノ酸配列(SEQ ID NO:15)を有するVHドメインCDR1;
アミノ酸配列(SEQ ID NO:16)を有するVHドメインCDR2;
アミノ酸配列(SEQ ID NO:17)を有するVHドメインCDR3;
アミノ酸配列(SEQ ID NO:18)を有するVLドメインCDR1;
アミノ酸配列(SEQ ID NO:19)を有するVLドメインCDR2;および
アミノ酸配列(SEQ ID NO:20)を有するVLドメインCDR3、
を有する、請求項1〜4のいずれかに記載のモノクローナル抗体またはフラグメント。 - 身体試料中の細胞および/または血清TK1材料のレベルを測定する方法であって、
前記身体試料を、請求項1〜7のいずれかに記載のモノクローナル抗体またはフラグメントと接触させること;および
結合されたモノクローナル抗体またはフラグメントの量を検出すること、
を含む、方法。 - 身体試料中の細胞および/または血清TK1材料のレベルを測定するキットであって、
固体担体に固定された、または前記固体担体に固定されることを意図した、請求項1〜7のいずれかに記載の第一のモノクローナル抗体と;
請求項1〜7のいずれかに記載の第二のモノクローナル抗体と、
を含み、
前記第一のモノクローナル抗体が、
ヒトTK1のGEAVAARKLF(SEQ ID NO:2)と;
前記ヒトTK1のNCPVPGKPGE(SEQ ID NO:4)、PVPGKPGEAV(SEQ ID NO:5)およびNCPVPGKPGEAV(SEQ ID NO:3)のうちの少なくとも1つと;
前記ヒトTK1のコンホメーション依存エピトープと、
からなる群から選択される第一のエピトープへの特異性を有し、
前記第二のモノクローナル抗体が、前記群から選択される第二の異なるエピトープへの特異性を有する、キット。 - 前記キットがサンドイッチアッセイキットである、請求項9に記載のキット。
- 前記キットが酵素結合免疫吸着法(ELISA)キットである、請求項9または10に記載のキット。
- 前記第二のモノクローナル抗体が、共有結合により付着されたビオチンまたは共有結合により付着されたストレプトアビジンもしくはアビジンを有する、請求項11に記載のキット。
- 西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)で標識されたストレプトアビジンもしくはアビジン、またはHRP標識ビオチンと;
3,3’,5,5’−テトラメチルベンジジン(TMB)基質、3,3’−ジアミノベンジジン(DAB)基質および2,2’−アジノ−ビス(3−エチルベンゾチアゾリン−6−スルホン酸(ABTS)基質からなる群から選択されるHRP基質と、
をさらに含む、請求項12に記載のキット。 - 前記固体担体としてマイクロタイタープレートをさらに含む、請求項9〜13のいずれかに記載のキット。
- 前記固体担体としてアガロースビーズまたは磁気ビーズをさらに含む、請求項9〜13のいずれかに記載のキット。
- 前記第一のモノクローナル抗体が、前記ヒトTK1のGEAVAARKLF(SEQ ID NO:2)および前記ヒトTK1の前記コンホメーション依存エピトープのうちの一方から選択される前記第一のエピトープへの特異性を有し、
前記第二のモノクローナル抗体が、前記ヒトTK1のGEAVAARKLF(SEQ ID NO:2)および前記ヒトTK1の前記コンホメーション依存エピトープのうちの他方から選択される前記第二のエピトープへの特異性を有する、
請求項9〜15のいずれかに記載のキット。 - 対象における腫瘍の再発の可能性を推定する方法であって、
請求項8に記載の方法または請求項9〜16のいずれかに記載のキットを用いて、前記対象からの身体試料中の血清TK1材料のレベルを測定すること;および
前記身体試料中の血清TK1材料の前記レベルを、健常対象集団を代表する血清TK1材料のレベル、または前記対象で過去に測定された血清TK1材料のレベルと比較すること、
を含む、方法。 - 対象における細胞増殖を測定する方法であって、
請求項8に記載の方法または請求項9〜16のいずれかに記載のキットを用いて、前記対象からの身体試料中の血清TK1材料のレベルを測定すること;および
前記身体試料中の血清TK1材料の前記レベルに基づいて、前記細胞増殖を測定すること、
を含む、方法。 - 悪性疾患に罹患した対象において増殖工程の応答を測定する方法であって、
請求項8に記載の方法または請求項9〜16のいずれかに記載のキットを用いて、前記対象からの身体試料中の血清TK1材料のレベルを測定すること;および
前記身体試料中の血清TK1材料の前記レベルに基づいて、前記増殖工程の応答を測定すること、
を含む、方法。 - 対象の炎症、感染、または腫瘍細胞増殖のレベルを測定する方法であって
請求項8に記載の方法または請求項9〜16のいずれかに記載のキットを用いて、前記対象からの身体試料中の血清TK1材料のレベルを測定すること;および
前記身体試料中の血清TK1材料の前記レベルに基づいて、炎症、感染、または腫瘍細胞増殖の前記レベルを測定すること、
を含む、方法。 - 前記身体試料が、細胞試料、組織試料、血液試料、血清試料、脳脊髄液試料、肋膜液試料、滑液試料、および腹腔液試料からなる群から選択される、前記請求項8、17〜20のいずれかに記載の方法。
- アミノ酸配列GEAVAARKLF(SEQ ID NO:2)、NCPVPGKPGE(SEQ ID NO:4)、PVPGKPGEAV(SEQ ID NO:5)、またはNCPVPGKPGEAV(SEQ ID NO:3)からなる単離されたペプチド。
- ヒトチミジンキナーゼ1(TK1)の血清形態に結合することが可能なモノクローナル抗体を生成する方法であって、
第一のキャリアタンパク質に連結したアミノ酸配列GQPAGPDNKENCPVPGKPGEAVAARKLFAPQ(SEQ ID NO:1)を有するペプチドを含む第一のペプチドコンジュゲート、または前記第一のキャリアタンパク質とは異なる第二のキャリアタンパク質に連結したアミノ酸配列GQPAGPDNKENCPVPGKPGEAVAARKLFAPQ(SEQ ID NO:1)を有する前記ペプチドを含む第二のペプチドコンジュゲートで、非ヒト動物を免疫化すること;
前記第一のペプチドコンジュゲートまたは前記第二のペプチドコンジュゲートに関する血中力価を有する前記非ヒト動物から脾細胞を単離すること;
前記脾細胞を黒色腫と融合させることによりハイブリドーマを形成させること;
前記第二のペプチドコンジュゲートへの力価について、前記第一のペプチドコンジュゲートでの免疫化から得られたハイブリドーマからの上清をスクリーニングすること、および前記第一のペプチドコンジュゲートへの力価について、前記第二のペプチドコンジュゲートでの免疫化から得られたハイブリドーマからの上清をスクリーニングすること;
前記第一のペプチドコンジュゲートに、前記第二のペプチドコンジュゲートに、そしてヒトrTK1に結合することが可能なモノクローナル抗体を生成するハイブリドーマを選択すること;ならびに
前記選択されたハイブリドーマの上清から前記モノクローナル抗体を単離すること、
を含む、方法。 - 前記ハイブリドーマを選択することが、前記第一のペプチドコンジュゲートに、前記第二のペプチドコンジュゲートに、前記ヒトrTK1に、そして癌に罹患したヒト対象から得られた血清試料に存在するTK1に結合することが可能なモノクローナル抗体を生成するハイブリドーマを選択することを含む、請求項23に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SE1351531 | 2013-12-19 | ||
SE1351531-7 | 2013-12-19 | ||
PCT/SE2014/051535 WO2015094106A1 (en) | 2013-12-19 | 2014-12-18 | Monoclonal anti-tk1 antibodies |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017503787A true JP2017503787A (ja) | 2017-02-02 |
JP6715770B2 JP6715770B2 (ja) | 2020-07-01 |
Family
ID=53403255
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016541139A Active JP6715770B2 (ja) | 2013-12-19 | 2014-12-18 | モノクローナル抗tk1抗体 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US10100128B2 (ja) |
EP (3) | EP3083698B1 (ja) |
JP (1) | JP6715770B2 (ja) |
CN (1) | CN105980407B (ja) |
ES (2) | ES2737626T3 (ja) |
WO (1) | WO2015094106A1 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2021522192A (ja) * | 2018-04-18 | 2021-08-30 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 新規抗チミジンキナーゼ抗体 |
JP2021535410A (ja) * | 2018-09-04 | 2021-12-16 | 華瑞同康生物技術(深▲セン▼)有限公司Sino−Swed Tongkang Bio−Tech (Shenzhen) Limited | 全自動化学発光分析装置に基づく血清tk1検出キット |
Families Citing this family (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10434153B1 (en) | 2015-05-20 | 2019-10-08 | Kim Leslie O'Neill | Use of car and bite technology coupled with an scFv from an antibody against human thymidine kinase 1 to specifically target tumors |
US11352439B2 (en) * | 2015-08-13 | 2022-06-07 | Kim Leslie O'Neill | Macrophage CAR (MOTO-CAR) in immunotherapy |
CN109416358A (zh) * | 2016-08-10 | 2019-03-01 | 阿尔贝蒂兽医诊断公司 | 非人哺乳动物tk1蛋白水平的确定 |
US20180321244A1 (en) * | 2017-05-04 | 2018-11-08 | Yenepoya University | Method for Detection And Diagnosis of Oral Cancer in a sample |
US11242398B2 (en) | 2017-08-01 | 2022-02-08 | Remd Biotherapeutics, Inc. | Anti-OX40 antibodies and methods of activating OX40 |
EP3796935A4 (en) * | 2018-05-23 | 2022-03-16 | The Jackson Laboratory | ANTI-NGLY-1 ANTIBODIES AND METHODS OF USE |
EP3844503B1 (en) | 2018-08-31 | 2024-05-29 | F. Hoffmann-La Roche AG | Thymidine kinase (tk-1) in prognostic indices for dlbcl |
CN110872354B (zh) * | 2018-09-04 | 2022-11-01 | 华瑞同康生物技术(深圳)有限公司 | 哺乳动物细胞重组抗人tk1的鸡源的单克隆抗体、单链抗体及其制备方法和应用 |
CN110878123B (zh) * | 2018-09-05 | 2022-08-23 | 华瑞同康生物技术(深圳)有限公司 | 一种抗tk1原核重组单链抗体及制备方法 |
CN113785198A (zh) * | 2019-05-06 | 2021-12-10 | 阿罗塞尔公司 | 呼吸道感染检测和分类 |
CN110346569A (zh) * | 2019-06-28 | 2019-10-18 | 安徽恩禾生物技术有限公司 | 一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒及其制备方法 |
US20230070840A1 (en) * | 2020-01-30 | 2023-03-09 | Arocell Ab | Predicting patient survival |
CN113773389B (zh) * | 2020-06-10 | 2022-08-30 | 华瑞同康生物技术(深圳)有限公司 | 鼠抗人胸苷激酶1单克隆抗体及其制药用途 |
CN112646039B (zh) * | 2021-01-06 | 2022-07-22 | 华瑞同康生物技术(深圳)有限公司 | Tk1抗体、试剂盒及其用途 |
CN112940131A (zh) * | 2021-02-04 | 2021-06-11 | 福建亿彤生物科技有限公司 | 一种针对人血清中tk1的兔单克隆抗体及应用 |
CN113150159A (zh) * | 2021-02-20 | 2021-07-23 | 华瑞同康生物技术(深圳)有限公司 | 鸡抗人胸苷激酶1-IgY多克隆抗体用于识别大分子复合物的用途 |
CN117616280A (zh) * | 2021-06-23 | 2024-02-27 | 阿洛赛尔公司 | 预测癌症复发 |
CN117510638A (zh) * | 2022-10-10 | 2024-02-06 | 华瑞同康生物技术(深圳)有限公司 | 一种鸡源抗人TK1重组全长单克隆IgY抗体及其应用 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6083707A (en) * | 1994-04-22 | 2000-07-04 | Eriksson; Staffan | Thymidine kinase TK1, peptide, corresponding antibodies and use of these in determination of tumor proliferation |
CN1414017A (zh) * | 2002-09-13 | 2003-04-30 | 深圳市华瑞同康生物技术有限公司 | 抗细胞质胸苷激酶-IgY的制备及肿瘤诊断组合物 |
JP2006526156A (ja) * | 2003-05-16 | 2006-11-16 | シー・バオ・リサーチ・アクティエボラーグ | 癌進行の予測 |
WO2008142664A2 (en) * | 2007-05-23 | 2008-11-27 | Arocell Ab | Exposed thymidine kinase 1 peptides, ligands and methods employing the same |
CN102504027A (zh) * | 2011-10-28 | 2012-06-20 | 周际 | 一种多表位tk1抗体的制备及其在人群体检筛查中早期肿瘤检测和风险预警中的应用 |
CN102516390A (zh) * | 2011-10-28 | 2012-06-27 | 周际 | 一种多表位tk1抗体的制备及其在评估肿瘤患者治疗效果中的应用 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8551486B2 (en) | 2004-05-21 | 2013-10-08 | Savoy Pharmaceuticals, Inc. | Monoclonal antibodies to human thymidine kinase to treat cancer |
CN101275954B (zh) | 2008-05-09 | 2012-01-04 | 丁克祥 | 一种简便快速测定人类i型胸苷激酶基因蛋白的乳癌预警芯片 |
-
2014
- 2014-12-18 ES ES14871151T patent/ES2737626T3/es active Active
- 2014-12-18 JP JP2016541139A patent/JP6715770B2/ja active Active
- 2014-12-18 US US15/105,999 patent/US10100128B2/en active Active
- 2014-12-18 EP EP14871151.8A patent/EP3083698B1/en active Active
- 2014-12-18 ES ES19163949T patent/ES2823351T3/es active Active
- 2014-12-18 CN CN201480075429.5A patent/CN105980407B/zh active Active
- 2014-12-18 WO PCT/SE2014/051535 patent/WO2015094106A1/en active Application Filing
- 2014-12-18 EP EP20192397.6A patent/EP3770178A1/en active Pending
- 2014-12-18 EP EP19163949.1A patent/EP3536713B1/en active Active
-
2018
- 2018-09-14 US US16/132,047 patent/US20190002587A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6083707A (en) * | 1994-04-22 | 2000-07-04 | Eriksson; Staffan | Thymidine kinase TK1, peptide, corresponding antibodies and use of these in determination of tumor proliferation |
CN1414017A (zh) * | 2002-09-13 | 2003-04-30 | 深圳市华瑞同康生物技术有限公司 | 抗细胞质胸苷激酶-IgY的制备及肿瘤诊断组合物 |
JP2006526156A (ja) * | 2003-05-16 | 2006-11-16 | シー・バオ・リサーチ・アクティエボラーグ | 癌進行の予測 |
WO2008142664A2 (en) * | 2007-05-23 | 2008-11-27 | Arocell Ab | Exposed thymidine kinase 1 peptides, ligands and methods employing the same |
CN102504027A (zh) * | 2011-10-28 | 2012-06-20 | 周际 | 一种多表位tk1抗体的制备及其在人群体检筛查中早期肿瘤检测和风险预警中的应用 |
CN102516390A (zh) * | 2011-10-28 | 2012-06-27 | 周际 | 一种多表位tk1抗体的制备及其在评估肿瘤患者治疗效果中的应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
ABSTRACTS OF THE 14TH INTERNATIONAL HAMBURG SYMPOSIUM ON TUMOR MARKERS, vol. Anticancer Res., JPN6018042293, December 2008 (2008-12-01), pages 28, ISSN: 0004119400 * |
EUR. J. CELL BIOL., vol. 88, JPN6018042296, 2009, pages 779 - 785, ISSN: 0004119401 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2021522192A (ja) * | 2018-04-18 | 2021-08-30 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 新規抗チミジンキナーゼ抗体 |
JP2021535410A (ja) * | 2018-09-04 | 2021-12-16 | 華瑞同康生物技術(深▲セン▼)有限公司Sino−Swed Tongkang Bio−Tech (Shenzhen) Limited | 全自動化学発光分析装置に基づく血清tk1検出キット |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN105980407A (zh) | 2016-09-28 |
EP3536713A1 (en) | 2019-09-11 |
EP3770178A1 (en) | 2021-01-27 |
EP3536713B1 (en) | 2020-09-16 |
US20190002587A1 (en) | 2019-01-03 |
EP3083698A4 (en) | 2017-08-16 |
CN105980407B (zh) | 2020-01-07 |
EP3083698B1 (en) | 2019-04-10 |
JP6715770B2 (ja) | 2020-07-01 |
US20160311927A1 (en) | 2016-10-27 |
ES2823351T3 (es) | 2021-05-06 |
EP3083698A1 (en) | 2016-10-26 |
US10100128B2 (en) | 2018-10-16 |
WO2015094106A1 (en) | 2015-06-25 |
ES2737626T3 (es) | 2020-01-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6715770B2 (ja) | モノクローナル抗tk1抗体 | |
JP6336911B2 (ja) | アドレノメジュリンアッセイおよび成熟アドレノメジュリンの測定方法 | |
US9309312B2 (en) | Immunoassay method for human CXCL1 protein | |
US20190120846A1 (en) | Cell surface prostate cancer antigen for diagnosis | |
JP5864918B2 (ja) | オートタキシンアイソフォーム特異的抗体および検出方法 | |
KR20120134547A (ko) | 항-atic 자가면역항체를 포함하는 간암 진단 마커 및 이의 항원을 포함하는 간암 진단용 조성물 | |
JPWO2009044561A1 (ja) | 抗proNT/NMNモノクローナル抗体 | |
JP5553603B2 (ja) | 新規肝癌マーカー | |
JP6407990B2 (ja) | アウグリン免疫学的検定 | |
JP6099393B2 (ja) | オートタキシンアイソフォーム特異的抗体および検出方法 | |
US9127054B2 (en) | Immunoassay of cofilin 1 protein | |
JP4856381B2 (ja) | ヒトオロト酸ホスホリボシルトランスフェラーゼタンパク質の測定法 | |
US20240117070A1 (en) | Recombinant antibodies, kits comprising the same, and uses thereof | |
WO2024115562A1 (en) | Assay for detecting cancer by using an antibody that binds to c-terminal epitope of type ix collagen | |
CN113366021A (zh) | 糖基化Apo J特异性抗体及其用途 | |
JP2013032990A (ja) | 分子シャペロン結合分子を標的とした血中タンパク質の高効率同定システム |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20171214 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20181024 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20181030 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190129 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190401 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20190402 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190924 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20191212 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20200519 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20200609 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6715770 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |