JP2017503014A - がんの治療のための組合せ調製物 - Google Patents
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Abstract
Description
ヒトLAG−3配列のアミノ酸残基23から448;
LAG−3のドメインD1およびD2のアミノ酸配列;
次の位置:ARGがGLUで置換されている73位;ARGがALAまたはGLUで置換されている75位;ARGがGLUで置換されている76位;ASPがALAで置換されている30位;HISがALAで置換されている56位;TYRがPHEで置換されている77位;ARGがALAで置換されている88位;ARGがALAで置換されている103位;ASPがGLUで置換されている109位;ARGがALAで置換されている115位、の1つまたは複数にアミノ酸置換を有するLAG−3のドメインD1およびD2のアミノ酸配列;
アミノ酸残基54から66の欠失を有するLAG−3のドメインD1のアミノ酸配列;
ヒトIgG1 Fcに融合されたhLAG−3の細胞外ドメインをコードするプラスミドでトランスフェクトされたチャイニーズハムスター卵巣細胞で産生された組換え可溶性ヒトLAG−3Ig融合タンパク質(IMP321)−200kDa二量体
を含む誘導体を含む。
がんの治療でのLAG−3誘導体およびトポイソメラーゼI阻害剤の投与の効果
マウス同系皮膚腫瘍モデルを、結腸直腸腺癌細胞株CT26を使用して確立した。
群1(マウス8匹):陰性対照:D11、D14、D18、D21、D25およびD28にPBS s.c.注射;
群2(マウス7匹):D11、D14、D18、D21、D25およびD28にIMP321 s.c.注射(50μg、1.9mg/ml);
群3(マウス8匹):D11、D14、D18、D21、D25およびD28にIMP321 s.c.注射(50μg、1.9mg/ml)、加えてD10、D13およびD17にトポテカンi.p.注射(45μg、2.5mg/kg);
群4(マウス8匹):D10、D13およびD17にトポテカンi.p.注射(45μg、2.5mg/kg)。
がんの治療でのLAG−3誘導体および白金ベースの抗悪性腫瘍剤の投与の効果
マウス同系皮膚腫瘍モデルを、リンパ腫細胞株EL4を使用して確立した。
群1(マウス8匹):陰性対照:D7、D11、D14、D19、D21およびD24にPBS s.c.注射;
群2(マウス8匹):D7、D11、D14、D19、D21およびD24にIMP321 s.c.注射(50μg、3.96mg/ml);
群3(マウス8匹):D7、D11、D14、D19、D21およびD24にIMP321 s.c.注射(50μg、3.96mg/ml)、加えてD6、D10、D13およびD17にカルボプラチンi.p.注射(288μg、16mg/kg);
群4(マウス8匹):D6、D10、D13およびD17にカルボプラチンi.p.注射(288μg、16mg/kg)。
がんの治療でのLAG−3誘導体およびさまざまな白金ベースの抗悪性腫瘍剤の投与の効果
マウス同系皮膚腫瘍モデルを、リンパ腫細胞株EL4を使用して確立した。
群1(マウス10匹):陰性対照:D7、D11、D14、D18、D21およびD25にPBS s.c.注射;
群2(マウス10匹):D7、D11、D14、D18、D21およびD25にIMP321 s.c.注射(50μg、1.9mg/ml);
群3(マウス9匹):D7、D11、D14、D18、D21およびD25にIMP321 s.c.注射(50μg、1.9mg/ml)、加えてD6、D10、D13およびD17にカルボプラチンi.p.注射(288μg、16mg/kg);
群4(マウス10匹):D6、D10、D13およびD17にカルボプラチンi.p.注射(288μg、16mg/kg);
群5(マウス10匹):D7、D11、D14、D18、D21およびD25にIMP321 s.c.注射(50μg、1.9mg/ml)に加えてD6およびD10にオキサリプラチンi.p.注射(54μg、3mg/kg);
群6(マウス10匹):D6およびD10にオキサリプラチンi.p.注射(54μg、3mg/kg)。
がんの治療でのLAG−3誘導体および白金ベースの抗悪性腫瘍剤の投与の効果
C38結腸腺癌腫瘍モデルでのLAG−3誘導体IMP321(hLAG−3Igとも称される)およびオキサリプラチンでの併用治療の効果を評価した。このモデルでは、腫瘍断片は外科的に皮下にインプラントした。治療が始まったときに(12日目、平均腫瘍体積が200mm3であるとき)、腫瘍は比較的成熟しており、実際の腫瘍についての良いモデルを提供する。
群1(マウス10匹):4週連続での週1回のPBSのSC注射;
群2(マウス10匹):4週連続での週1回の5mg/kg/注射でのオキサリプラチンのIV注射;
群3(マウス10匹):4週連続での週1回の20μg IMP321のSC注射;
群4(マウス10匹):4週連続での週1回の20μg IMP321のSC注射と組み合わされた週1回のオキサリプラチン5mg/kg/注射のIV注射。
LAG−3誘導体のMHCクラスII陽性細胞への結合
LAG−3のいくつかの誘導体をMHCクラスII陽性細胞に結合するそれらの能力について検査した:
i)第1のリンカーによって免疫グロブリンFc(Ig Fc)配列に連結されたLAG−3のドメインD1〜D4(LAG−3 D1D4−リンカー1−Ig、sLAG−3 D1D4−IgまたはIMP321);
ii)第2のリンカーによってIg Fc配列に連結されたLAG−3のドメインD1〜D4(LAG−3 D1D4−リンカー2−IgまたはsLAG−3 D1D4−リンカーB−Ig);
iii)第2のリンカーによってIg Fc配列に連結されたLAG−3のドメインD1およびD2(LAG−3 D1D2−リンカー2−IgまたはsLAG−3 D1D2−リンカーB−Ig);ならびに
iv)第1のリンカーによってIg Fc配列に連結されたLAG−3のドメインD1〜D4だが、3倍またはそれを超えるまでMHCクラスII分子への結合を増強する変異をLAG−3のD1ドメインのMHCクラスII結合部位中のR75位(R75A)に有する(Huardら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、1997年、94巻:5744頁)(IMP321 R75A)。
LAG−3のMHCクラスII分子への結合を遮断する抗体によるLAG−3誘導体IMP321のMHCクラスII陽性細胞への結合の阻害
17B4および11E3は、LAG−3のMHCクラスII分子への結合を遮断することが知られている抗LAG−3モノクローナル抗体である。IMP321−標識コンジュゲート(LAG−3Ig−Alexa488)のMHCクラスII陽性B細胞(Raji細胞)への結合を、17B4もしくは11E3遮断抗体またはアイソタイプ適合(isotype matched)陰性対照モノクローナル抗体(mIgG1)とのコンジュゲートの予備インキュベーション(4μg/ml、4℃)に続いて決定した。細胞結合蛍光の分析を、蛍光活性化細胞選別(FACS)を使用して実行した。結果を図7に示す。
LAG−3誘導体による単球の活性化
THP−1細胞を図5に例示するLAG−3誘導体と、または陰性対照としてのヒトIgG1と4時間、4℃でインキュベートした。ケモカインCCL4、およびサイトカイン腫瘍壊死因子−α、TNF−αのTHP−1細胞による分泌の量を決定し、単球活性化の測定値として使用した。CCL4およびTNF−α分泌をCytometric Beads Arrayを使用して細胞上清中で定量した。CCL4決定の結果を図8に示し、TNF−α決定の結果を図9に示す。
LAG−3のMHCクラスII分子への結合を遮断する抗体によるIMP321誘導単球活性化の阻害
THP−1細胞との混合物の4時間のインキュベーションの前にIMP321(20ng/ml)を17B4または11E3抗体と予備インキュベート(+37℃で)した。THP−1細胞によるCCL4分泌の量を単球活性化のレベルを決定するために使用した。2つの実験の結果を図10に示す。
LAG−3誘導体による初代抗原提示細胞(APC)の活性化
ヒト末梢血液単核細胞(PBMC)を図5に例示するLAG−3誘導体と、または陰性対照としてのヒトIgG1と、分泌阻害物質であるブレフェルジンの存在下で4時間インキュベートした。PBMCに存在するAPCのサイトカイン応答をCCL4(Th1およびCD8陽性応答を支持することが知られているケモカイン)ならびにTNF−α(腫瘍形成を直接阻害する多機能性サイトカイン)の細胞内染色によって決定した。結果をサイトメトリーによって分析した。結果をMHCクラスII陽性細胞においてCCL4および/またはTNF−αを発現している細胞の百分率によって表し、図11に示す。
LAG−3誘導体によるT細胞の活性化
ヒトPBMCを図5に例示するLAG−3誘導体と、または陰性対照としてのヒトIgG1と18時間インキュベートした。ブレフェルジンは、インキュベーションの最後の16時間に存在した。LAG−3誘導体への18時間曝露後のCD8陽性T細胞のサイトカイン応答をCCL4、IFN−γおよびTNF−αの細胞内染色によって追跡し、サイトメトリーによって分析した。結果をCD3陽性/CD8陽性T細胞においてCCL4、IFN−γおよび/またはTNF−αを発現している細胞の百分率として表し、図12に示す。
Claims (29)
- (a)LAG−3タンパク質またはMHCクラスII分子に結合できるその誘導体;および(b)白金ベースの抗悪性腫瘍剤またはトポイソメラーゼI阻害剤である抗悪性腫瘍剤を含む、組合せ調製物。
- 前記LAG−3タンパク質またはその誘導体および前記抗悪性腫瘍剤の共投与または逐次投与のための、請求項1に記載の組合せ調製物。
- 前記LAG−3タンパク質またはその誘導体が、前記抗悪性腫瘍剤から分離されている、請求項1または2に記載の組合せ調製物。
- 前記LAG−3タンパク質またはその誘導体が、LAG−3Ig融合タンパク質IMP321の0.25〜30mgのモル当量である用量で存在する、先行する請求項のいずれかに記載の組合せ調製物。
- 前記LAG−3タンパク質またはその誘導体の複数の用量を含む、先行する請求項のいずれかに記載の組合せ調製物。
- 前記抗悪性腫瘍剤の複数の用量を含む、先行する請求項のいずれかに記載の組合せ調製物。
- 前記白金ベースの抗悪性腫瘍剤が、オキサリプラチンまたはカルボプラチンを含む、先行する請求項のいずれかに記載の組合せ調製物。
- 前記トポイソメラーゼI阻害剤が、トポテカンを含む、請求項1から6のいずれかに記載の組合せ調製物。
- LAG−3タンパク質の前記誘導体が、LAG−3タンパク質、好ましくはヒトLAG−3タンパク質のドメインD1および任意選択でドメインD2と少なくとも70%のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、先行する請求項のいずれかに記載の組合せ調製物。
- LAG−3タンパク質の前記誘導体が、LAG−3タンパク質、好ましくはヒトLAG−3タンパク質のドメインD1、D2、D3および任意選択でD4と少なくとも70%のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、先行する請求項のいずれかに記載の組合せ調製物。
- LAG−3タンパク質の前記誘導体が、免疫グロブリンFc配列に融合されている、先行する請求項のいずれかに記載の組合せ調製物。
- (a)LAG−3タンパク質、またはMHCクラスII分子に結合できるその誘導体;(b)白金ベースの抗悪性腫瘍剤またはトポイソメラーゼI阻害剤である抗悪性腫瘍剤;および(c)薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤を含む医薬組成物。
- 医薬としての使用のための、請求項1から11のいずれかに記載の組合せ調製物または請求項12に記載の医薬組成物。
- がんを予防する、治療するまたは回復させるための、請求項1から11のいずれかに記載の組合せ調製物または請求項12に記載の医薬組成物。
- がんを予防する、治療するまたは回復させるための医薬の製造における、請求項1から11のいずれかに記載の組合せ調製物または請求項12に記載の医薬組成物の使用。
- がんを予防する、治療するまたは回復させる方法であって、LAG−3タンパク質またはMHCクラスII分子に結合できるその誘導体および抗悪性腫瘍剤を、そのような予防、治療または回復を必要とする対象に投与することを含み、該抗悪性腫瘍剤が白金ベースの抗悪性腫瘍剤またはトポイソメラーゼI阻害剤である、方法。
- 前記LAG−3タンパク質またはその誘導体および前記抗悪性腫瘍剤が、前記対象に逐次投与される、請求項16に記載の方法。
- 前記LAG−3タンパク質またはその誘導体が、前記抗悪性腫瘍剤の後に投与される、請求項16に記載の方法。
- 前記LAG−3タンパク質またはその誘導体および前記抗悪性腫瘍剤が、互いに96時間以内に前記対象に投与される、請求項17または18に記載の方法。
- 前記LAG−3タンパク質またはその誘導体および前記抗悪性腫瘍剤が、前記対象に共投与される、請求項16に記載の方法。
- 前記LAG−3タンパク質またはその誘導体が、LAG−3Ig融合タンパク質IMP321の0.25〜30mgのモル当量である用量で前記対象に投与される、請求項16から20のいずれかに記載の方法。
- 前記LAG−3タンパク質またはその誘導体の複数の用量が、前記対象に投与される、請求項16から21のいずれかに記載の方法。
- 前記抗悪性腫瘍剤の複数の用量が、前記対象に投与される、請求項16から22のいずれかに記載の方法。
- 前記LAG−3タンパク質またはその誘導体の用量が、2またはそれを超える用量の前記抗悪性腫瘍剤の各投与の前に、それと共にまたはその後に投与される、請求項22または23に記載の方法。
- 前記白金ベースの抗悪性腫瘍剤が、オキサリプラチンまたはカルボプラチンを含む、請求項16から24のいずれかに記載の方法。
- 前記トポイソメラーゼI阻害剤が、トポテカンを含む、請求項16から25のいずれかに記載の方法。
- LAG−3タンパク質の前記誘導体が、LAG−3タンパク質、好ましくはヒトLAG−3タンパク質のドメインD1、および任意選択でD2と少なくとも70%のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項16から26のいずれかに記載の方法。
- LAG−3タンパク質の前記誘導体が、LAG−3タンパク質、好ましくはヒトLAG−3タンパク質のドメインD1、D2、D3および任意選択でD4と少なくとも70%のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項16から27のいずれかに記載の方法。
- LAG−3タンパク質の前記誘導体が、免疫グロブリンFc配列に融合されている、請求項16から28のいずれかに記載の方法。
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