JP2017206513A - 増加した半減期を有する治療用タンパク質およびそれを調製する方法 - Google Patents
増加した半減期を有する治療用タンパク質およびそれを調製する方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017206513A JP2017206513A JP2017107268A JP2017107268A JP2017206513A JP 2017206513 A JP2017206513 A JP 2017206513A JP 2017107268 A JP2017107268 A JP 2017107268A JP 2017107268 A JP2017107268 A JP 2017107268A JP 2017206513 A JP2017206513 A JP 2017206513A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- therapeutic protein
- peg
- a1pi
- protein
- group
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 0 *C(ON(C(CC1)=O)C1=O)=O Chemical compound *C(ON(C(CC1)=O)C1=O)=O 0.000 description 3
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Description
本明細書に記載のように、本開示は、治療用タンパク質複合体を調製する方法を提供する。本開示によって提供される方法の様々な構成要素、例えば、治療用タンパク質、水溶性ポリマー、還元性物質等、ならびに方法によって提供される様々な条件、例えば、様々な構成要素の反応時間および濃度が、以下に記載される。
本明細書に記載される際、治療用タンパク質という用語は、治療用タンパク質に関連する生物学的活性を呈する、任意の治療用タンパク質分子を指す。本発明の一実施形態において、治療用タンパク質分子は、完全長のタンパク質である。本開示の様々な実施形態において、治療用タンパク質は、その天然源から産生され、精製され得る。代替として、本開示に従って、「組換え治療用タンパク質」という用語は、組換えDNA技術を介して得られた任意の治療用タンパク質を含む。ある特定の実施形態において、用語は本明細書に記載のタンパク質を含む。
一実施形態において、A1PIは、本開示で提供される方法に従って、水溶性ポリマーに複合化される。A1PI(α1−プロテイナーゼ阻害物質またはA1PIまたはα1抗トリプシンまたはα1抗トリプシンまたはA1AT)は、ヒト血漿内に存在する394アミノ酸の52kDの糖タンパク質である(Carrell,R.W.,et al.,Nature298(5872):329−34(1982)、ユニプロットKB/スイスプロット受託番号P01009)。ヒトα1抗トリプシンの構造および変異。1つの炭水化物鎖(N−グリカン)は、翻訳後修飾によって、3つのβ−アスパラギン残基それぞれに添加される(Brantly,Am.J.Respir.Cell.Mol.Boil.,27:652−654(2002))。A1PIは、3つの非コードイントロンおよび4つのエクソンからなるヒト染色体14q31〜32.3上で、12.2kb遺伝子によってコードされる。
一実施形態において、FVIIは、本開示で提供される方法に従って、水溶性ポリマーに複合化される。FVII(安定因子またはプロコンベルチンとしても公知である)は、止血および凝固で中枢的役割を有する、ビタミンK依存性セリンプロテアーゼ糖タンパク質である(Eigenbrot,Curr Protein Pept Sci.2002;3:287−99)。
FIXは、カルシウムイオン、リン脂質、およびFVIIIaの存在下でFXをその活性型に変換することによって、血液凝固の内因系経路に関与するビタミンK依存性血漿タンパク質である。FIXの主要な触媒能力は、セリンプロテアーゼとしての触媒能力であり、FX内の特定のアルギニン−イソロイシン結合に対して特異性を有する。FXIaによってFIXの活性化が生じ、これはFIXから活性化ペプチドを切除し、1つ以上のジスルフィド結合によって保持される2つの鎖を含む活性FIX分子を産生する。FIXの欠損は、劣性X連鎖血友病Bの原因である。
凝固第VIII因子(FVIII)は、非常に低い濃度で血漿中を循環し、フォンヴィレブランド因子(VWF)に非共有結合する。止血中、FVIIIは、VWFから分離し、カルシウムおよびリン脂質、または細胞膜の存在下で活性化の速度を高めることによって、活性第IX因子(FIXa)媒介のFX活性化のための補因子として機能する。
フォンヴィレブランド因子(VWF)は、サイズが約500〜20,000kDの範囲の一連の多量体として血漿中を循環する糖タンパク質である。VWFの多量体形態は、ジスルフィド結合によって連結した250kDのポリペプチドサブユニットからなる。VWFは、損傷した血管壁の内皮下層への初期の血小板粘着を媒介する。より大きな多量体のみが止血活性を呈する。内皮細胞は大きいポリマー形態のVWFを分泌し、低分子量を有するVWFの形態(低分子量VWF)はタンパク質分解的切断から生じると考えられている。高分子質量を有する多量体は、内皮細胞のバイベル・パラーデ小体中に貯蔵され、刺激時に遊離する。
一態様では、本開示の出発物質は、タンパク質またはポリペプチドである。企図される治療用タンパク質分子は、完全長のタンパク質、完全長のタンパク質の前駆体、完全長のタンパク質の生物学的に活性なサブユニットまたは断片、ならびに治療用タンパク質のこれらの形態のうちのいずれかの生物学的に活性な誘導体および変異体を含む。したがって、治療用タンパク質は、(1)参照核酸によってコードされたポリペプチドまたは本明細書に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも約25個、約50個、約100個、約200個、約300個、約400個、またはそれ以上のアミノ酸の領域にわたり、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、もしくは約99%を上回る、またはそれ以上のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を有するもの、および/または(2)本明細書に記載の参照アミノ酸配列、その免疫原性断片、および/またはその保存的に改変された変異体を含む免疫原に対して生じた抗体、例えばポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体に特異的に結合するものを含む。
本開示の治療用タンパク質をコードする核酸には、例えば、遺伝子、プレmRNA、mRNA、cDNA、多型変異体、対立遺伝子、合成変異体および天然に存在する変異体があるが、これらに限定されない。
「天然に存在する」ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、典型的には、例えばヒトといった霊長類、例えばラット、マウス、ハムスターといった齧歯類、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジまたは任意の哺乳動物を含むがこれらに限定されない哺乳動物に由来する。本開示の核酸およびタンパク質は、組換え分子(例えば、異種であり、野生型配列もしくはその変異体をコードするもの、または非天然のもの)であってもよい。様々な実施形態において、天然に存在する治療用タンパク質は、ヒトから得られた血液または血漿試料から精製される。
一実施形態において、本開示の治療用複合タンパク質は、静脈注射、筋肉注射、または腹腔内注射などの注射によって投与してもよい。
本開示の一実施形態において、治療用タンパク質複合体分子は、ポリエチレングリコール(PEG)、分岐PEG、PolyPEG(登録商標)(Warwick Effect Polymers、Coventry、UK)、ポリシアル酸(PSA)、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン(HES)、ヒドロキシアルキルデンプン(HAS)、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、デンプン、デキストラン、カルボキシメチル−デキストラン、ポリアルキレンオキサイド(PAO)、ポリアルキレングリコール(PAG)、ポリプロピレングリコール(PPG)、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール(PVA)、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−無水マレイン酸、ポリスチレン−コ−無水マレイン酸、ポリ(1−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール)(PHF)、2−メタクリロイルオキシ−2’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート(MPC)、およびそれらの機能的誘導体が挙げられるが、これらに限定されない水溶性ポリマーに結合される。
PSAは、N−アセチルノイラミン酸のポリマー(通常、ホモポリマー)からなる。二級アミノ基は、一般に、アセチル基を保有するが、その代わりにグリコシル基を保有してもよい。ヒドロキシル基における可能な置換基としては、アセチル基、ラクチル基、エチル基、硫酸基、およびリン酸基が挙げられる。
ある特定の態様では、治療用タンパク質は、種々の化学的方法のいずれかによって、水溶性ポリマーに複合化される(Roberts JM et al.,Advan Drug Delivery Rev 2002;54:459−76)。例えば、一実施形態において、治療用タンパク質は、PEGの複合化によって、N−ヒドロキシスクシンイミド(NHS)エステルを使用して、タンパク質の遊離アミノ基に修飾される。別の実施形態において、水溶性ポリマー、例えば、PEGは、マレイミド化学、または前酸化後に、治療用タンパク質の炭水化物部分へのPEGヒドラジドもしくはPEGアミンのカップリングを使用して、遊離SH基にカップリングされる。
mPEG−プロピオン酸スクシンイミジル(mPEG−SPA)
治療用タンパク質は、当業者に既知の種々の技術のいずれかによって、多糖類化合物に共有連結され得る。
代替として、水溶性ポリマーは、非共有様式で治療用タンパク質と会合する。例えば、一態様では、水溶性ポリマーおよび薬学的に活性な化合物は、疎水性相互作用を介して連結される。他の非共有会合は、相互に求引する逆帯電されたイオンでの静電相互作用を含む。
一実施形態において、オキシム基を形成する、ヒドロキシルアミンまたはヒドロキシルアミン誘導体のアルデヒド(例えば、過ヨウ素酸ナトリウムによる酸化後の炭水化物部分上のもの)との反応が、血液凝固タンパク質の複合体の調製に適用される。例えば、糖タンパク質(例えば、グリコシル化された、またはグリコシル化されることが可能な、本発明に従う治療用タンパク質)をまず過ヨウ素酸ナトリウム(NaIO4)などの酸化剤で酸化する(Rothfus JA and Smith EL.,J Biol Chem 1963,238,1402−10、およびVan Lenten L and Ashwell G.,J Biol Chem 1971,246,1889−94)。糖タンパク質の過ヨウ素酸塩酸化は、隣接ジオールを過ヨウ素酸で酸化して活性アルデヒド基を形成する、1928年に記載された古典的なマラプラード反応に基づく(Malaprade L.,Analytical application,Bull Soc Chim France,1928,43,683−96)。かかる酸化剤のさらなる例は、四酢酸鉛(Pb(OAc)4)、酢酸マンガン(MnO(Ac)3)、酢酸コバルト(Co(OAc)2)、酢酸タリウム(TlOAc)、硫酸セリウム(Ce(SO4)2)(米国特許第4,367,309号)、または過ルテニウム酸カリウム(KRuO4)(Marko et al.,J Am Chem Soc 1997,119,12661−2)である。「酸化剤」とは、炭水化物中の隣接ジオールを酸化し、それによって生理学的反応条件下で、活性アルデヒド基を生成することが可能な穏やかな酸化の化合物を意味する。
様々な実施形態において、治療用タンパク質への水溶性ポリマーの複合化は、アニリンまたはアニリン誘導体によって触媒され得る。アニリンは、アルデヒドおよびケトンのアミンとの水性反応を強く触媒して、安定なイミン、例えばヒドラゾンおよびオキシムを形成する。以下の略図は、無触媒反応とアニリン触媒オキシムライゲーション反応を比較する(Kohler JJ,ChemBioChem 2009;10:2147−50):
本発明の様々な実施形態において、穏やかな還元のステップを使用して、治療用タンパク質のアクセス可能なシステイン残基が還元され、それにより、スルフヒドリル特異的基を有する水溶性ポリマーの治療用タンパク質への複合化を可能にする。本明細書に開示されるように、還元性物質または「チオール還元剤」には、Tris[2−カルボキシエチル]ホスフィンヒドロクロリド(TCEP)、ジチオスレイトール(DTT)、ジチオエリトリトール(DTE)、水素化ホウ素ナトリウム(NaBH4)、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(NaCNBH3)、β−メルカプトエタノール(BME)、およびシステインヒドロクロリドが挙げられるが、これらに限定されない。
様々な実施形態において、酸化剤でインキュベートされているタンパク質および/または本開示に従って水溶性ポリマーで複合化されている治療用タンパク質の精製が所望される。多くの精製技術が、当分野で知られており、これには、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、および親和性クロマトグラフィー、またはそれらの組み合わせ等のクロマトグラフ法、濾過法、ならびに沈殿法(Guide to Protein Purification,Meth.Enzymology Vol 463(edited by Burgess RR and Deutscher MP),2nd edition,Academic Press 2009)が挙げられるが、これらに限定されない。
本開示は以下の例示的実施形態を提供する:
A1.治療用タンパク質複合体を調製する方法であって、
(a)治療用タンパク質上に還元システインスルフヒドリル基を産生する、および
(b)水溶性ポリマーの該還元システインスルフヒドリル基への複合化を可能にする条件下で、該治療用タンパク質、またはその生物学的に活性な断片を、チオール還元剤および該水溶性ポリマーに接触させるステップを含み、
該治療用タンパク質が、アクセス可能なシステインスルフヒドリル基を1つしか有しないアミノ酸配列を有する、方法。
B1.治療用タンパク質複合体を調製する方法であって、
治療用タンパク質上でのスルフヒドリル基の還元を可能にする条件下で、該治療用タンパク質またはその生物学的に活性な断片をチオール還元剤と接触させるステップと、
水溶性ポリマーの該還元スルフヒドリル基への複合化を可能にする条件下で、該水溶性ポリマーを該治療用タンパク質と接触させるステップと、を含み、
該治療用タンパク質が、少なくとも1つのシステイン残基を含み、
該治療用タンパク質が、完全にまたは部分的に酸化されたアクセス可能なスルフヒドリル基を含むシステイン残基を1つだけ含み、該1つだけのシステイン残基は、該治療用タンパク質のアミノ酸配列中の別のシステイン残基とのジスルフィド結合に関与しない、方法。
該A1PI上でのスルフヒドリル基の還元を可能にする条件下で、該A1PIをTCEPと接触させるステップと、
該水溶性ポリマーの該還元スルフヒドリル基への複合化を可能にする条件下で、MAL基を含有するように誘導体化された直鎖PEGを該A1PIと接触させるステップと、を含み、
該A1PIが、完全にまたは部分的に酸化されたアクセス可能なスルフヒドリル基を含むシステイン残基を1つだけ含み、該1つだけのシステイン残基は、該A1PIのアミノ酸配列中の別のシステイン残基とのジスルフィド結合に関与せず、
該TCEP濃度が、該A1PI濃度と比べて、3〜4倍モル過剰であり、
少なくとも70%の該A1PI複合体が、単一の水溶性ポリマーを構成し、
該A1PI複合体が、天然のA1PIと比べて増加した半減期を有し、
該A1PI複合体が、天然のA1PIと比べて、少なくとも60%の生物学的活性を保持する、方法。
該水溶性ポリマーまたはその機能的誘導体が、ポリシアル酸(PSA)、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン(HES)、ヒドロキシアルキルデンプン(HAS)、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、デキストラン、カルボキシメチル−デキストラン、PolyPEG(登録商標)(Warwick Effect Polymers、Coventry、UK)、ポリアルキレンオキサイド(PAO)、ポリアルキレングリコール(PAG)、ポリプロピレングリコール(PPG)、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール(PVA)、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−無水マレイン酸、ポリスチレン−コ−無水マレイン酸、ポリ(1−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール)(PHF)、2−メタクリロイルオキシ−2’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート(MPC)、N−ヒドロキシスクシンイミドエステル−PEG(NHS−PEG)、PEGカルボン酸、PEGアルデヒド、アミノオキシ−PEG、PEGヒドラジド(PEG−Hz)、PEGヒドラジン、PEGチオール(PEG−SH)、アミノPEG(PEG−NH2)、カルボキシルPEG(PEG−COOH)、ヒドロキシルPEG(PEG−OH)、PEGエポキシド、酸化PSA、アミノオキシ−PSA、PSAヒドラジド(PSA−Hz)、PSAヒドラジン、PEGビニルスルホン、PEGオルトピリジル−ジスルフィド(OPSS)、PEGヨードアセトアミド(ioacetamide)、PEGベンゾトリアゾール、PSAチオール(PSA−SH)、MAL−PSA、およびアミノPSA(PSA−NH2)からなる群から選択され、
該セルピン複合体が、天然のグリコシル化セルピンと比べて、少なくとも60%の生物学的活性を保持する、方法。
該PSAが、該PSAの該非還元末端において、末端アルデヒド基を形成するように、酸化剤を用いたインキュベーションによって、酸化される、項B46に記載の方法。
(a)少なくとも1つのシステイン残基を含む治療用タンパク質またはその生物学的に活性な断片であって、該治療用タンパク質が完全にまたは部分的に酸化されたアクセス可能なスルフヒドリル基を含む1つだけのシステイン残基を含み、該1つだけのシステイン残基は、該治療用タンパク質のアミノ酸配列中の別のシステイン残基とのジスルフィド結合に関与しない、治療用タンパク質またはその生物学的に活性な断片と、
(b)該治療用タンパク質の該スルフヒドリル基に結合される1つの水溶性ポリマーまたはその機能的誘導体、を含む、治療用タンパク質複合体。
(a)セルピンまたはその生物学的に活性な断片と、
(b)該セルピンまたはその生物学的に0活性な断片に結合される少なくとも1つの水溶性ポリマーまたはその機能的誘導体であって、ポリシアル酸(PSA)、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン(HES)、ヒドロキシアルキルデンプン(HAS)、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、デキストラン、PolyPEG(登録商標)(Warwick Effect Polymers、Coventry、UK)、カルボキシメチル−デキストラン、ポリアルキレンオキサイド(PAO)、ポリアルキレングリコール(PAG)、ポリプロピレングリコール(PPG)、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール(PVA)、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−無水マレイン酸、ポリスチレン−コ−無水マレイン酸、ポリ(1−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール)(PHF)、2−メタクリロイルオキシ−2’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート(MPC)、N−ヒドロキシスクシンイミドエステル−PEG(NHS−PEG)、PEGカルボン酸、PEGアルデヒド、アミノオキシ−PEG、PEGヒドラジド(PEG−Hz)、PEGヒドラジン、PEGチオール(PEG−SH)、アミノPEG(PEG−NH2)、カルボキシルPEG(PEG−COOH)、ヒドロキシルPEG(PEG−OH)、PEGエポキシド、酸化PSA、アミノオキシ−PSA、PSAヒドラジド(PSA−Hz)、PSAヒドラジン、PEGビニルスルホン、PEGオルトピリジル−ジスルフィド(OPSS)、PEGヨードアセトアミド(ioacetamide)、PEGベンゾトリアゾール、PSAチオール(PSA−SH)、MAL−PSAおよびアミノPSA(PSA−NH2)からなる群から選択される、該水溶性ポリマーまたはその機能的誘導体、を含み、
天然のグリコシル化セルピンと比べて、少なくとも60%の生物学的活性を保持する、セルピン複合体。
C1.治療用タンパク質複合体を調製する方法であって、
スルフヒドリル基の還元を可能にする条件下で、単一の、アクセス可能、および酸化可能なスルフヒドリル基を含む治療用タンパク質を、チオール還元剤と接触させるステップと、
水溶性ポリマーの該還元スルフヒドリル基への複合化を可能にする条件下で、該水溶性ポリマーを該治療用タンパク質と接触させるステップと、を含む、方法。
D1.グリコシル化セルピン複合体を調製する方法であって、複合化を可能にする条件化で、水溶性ポリマーをグリコシル化セルピンと接触させることを含み、
該グリコシル化セルピン複合体が、天然のグリコシル化セルピンと比べて、少なくとも20%の生物学的活性を保持し、
該グリコシル化セルピン複合体が、天然のグリコシル化セルピンと比べて、増加した半減期を有する、方法。
該スルフヒドリル基の該還元を可能にする条件下で、単一の、アクセス可能および酸化可能なスルフヒドリル基を含むグリコシル化A1PIタンパク質を、TCEPを含む溶液に接触させることと、
複合化を可能にする条件下で、水溶性ポリマーまたはその機能的誘導体を該グリコシル化A1PIに接触させることと、を含み、
該グリコシル化A1PI複合体が、天然のグリコシル化A1PIと比べて、少なくとも20%の生物学的活性を保持し、
該グリコシル化A1PI複合体が、天然のグリコシル化A1PIと比べて、増加した半減期を有し、
少なくとも70%の該A1PIがモノPEG化される、方法。
オキシム連結が、該アミノオキシリンカーで誘導体化された水溶性ポリマー上の該酸化炭水化物部分と活性アミノオキシ基との間に形成され、それにより、該グリコシル化セルピン複合体を形成する、項D36〜D38のいずれか1つに記載の方法。
該PSAが、該PSAの該非還元末端において、末端アルデヒド基を形成するように、酸化剤を用いたインキュベーションによって、酸化される、項D42に記載の方法。
a)グリコシル化セルピンタンパク質、および
b)(a)の該グリコシル化セルピンタンパク質に結合する少なくとも1つの水溶性ポリマー、を含み、それにより、グリコシル化セルピン複合体を形成し、
該グリコシル化セルピン複合体が、天然のグリコシル化セルピンと比べて、少なくとも60%の生物学的活性を保持し、
該グリコシル化セルピン複合体が、天然のグリコシル化セルピンと比べて、増加した半減期を有する、グリコシル化セルピン複合体。
E1.複合化が可能である条件下で、水溶性ポリマーをグリコシル化治療用タンパク質に接触させることを含む、グリコシル化治療用タンパク質複合体を調製する方法であって、該グリコシル化治療用タンパク質複合体が、天然のグリコシル化治療用タンパク質と比べて、少なくとも20%の生物学的活性を保持し、該グリコシル化治療用タンパク質複合体が、天然のグリコシル化治療用タンパク質と比べて、増加した半減期を有する、方法。
該PSAが、該PSAの該非還元末端において、末端アルデヒド基を形成するように、酸化剤を用いたインキュベーションによって、酸化される、項E27に記載の方法。
F1.項E1〜E46のいずれか1つに記載の方法によって産生される、グリコシル化セルピン複合体。
(a)グリコシル化セルピン、および
(b)(a)の該グリコシル化セルピンに結合する少なくとも1つの水溶性ポリマーを含み、該グリコシル化セルピン複合体が、天然のグリコシル化セルピンと比べて、少なくとも20%の生物学的活性を保持し、該グリコシル化セルピン複合体が、天然のグリコシル化セルピンと比べて、増加した半減期を有する、グリコシル化セルピン複合体。
該PSAが、該PSAの該非還元末端において、末端アルデヒド基を形成するように、酸化剤を用いたインキュベーションによって、酸化される、項F27に記載のグリコシル化セルピン複合体。
G1.セルピンに関連する疾患を治療する方法であって、該疾患を治療するのに有効な量の、上記いずれかの項に記載のグリコシル化セルピン複合体を投与することを含む、方法。
H1.該セルピンに関連する疾患を治療する方法における、薬学的組成物の使用について記載したラベルを伴う容器にパッケージ化された、i)上記項のいずれかに記載のグリコシル化セルピン複合体、およびii)薬学的に許容可能な賦形剤、を含む、該薬学的組成物を含む、キット。
3−オキサ−ペンタン−1,5ジオキシアミンを、実施例1に概説される2ステップ有機合成で、Botyrynら(Tetrahedron 1997;53:5485−92)に従って合成した。
700mLの無水N,N−ジメチルホルムアミド中のエンド−N−ヒドロキシ−5−ノルボルネン−2,3−ジカルボキシイミド(59.0g、1.00当量)の溶液に、無水K2CO3(45.51g、1.00当量)および2,2−ジクロロジエチルエーテル(15.84mL、0.41当量)を添加した。反応混合物を50℃で22時間撹拌した。混合物を減圧下で乾燥するまで蒸発させた。残渣を、2Lのジクロロメタン中で懸濁し、NaCl飽和水溶液(各1L)で2回、抽出した。ジクロロメタン層を、Na2SO4で乾燥させ、次いで、減圧下で乾燥するまで蒸発させ、高真空内で乾燥して、白黄色の固体(中間体1)として64.5gの3−オキサペンタン−1,5−ジオキシ−エンド−2’,3’−ジカルボキシジイミドノルボルネンを得た。
800mLの無水エタノール中の中間体1(64.25g、1.00当量)の溶液に、31.0mlのヒドラジン水和物(4.26当量)を添加した。次いで、反応混合物を2時間還流させた。混合物を、減圧下で溶媒を蒸発させることによって、出発体積の半分まで濃縮した。生じた沈殿物を濾去した。残りのエタノール層を、減圧下で乾燥するまで蒸発させた。粗生成物3−オキサ−ペンタン−1,5−ジオキシアミンを含有する残渣を、真空内で乾燥させ、46.3gを得た。粗生成物をさらに、カラムクロマトグラフィ(シリカゲル60、ジクロロメタン/メタノール混合物での定組成溶離、9+1)によって精製して、11.7gの純最終生成物3−オキサ−ペンタン−1,5−ジオキシアミンを得た。
Serum Institute of India(Pune、India)から得た1000mgの酸化PSA(分子量=20kD)を、16mLの50mMのリン酸緩衝液、pH6.0中に溶解した。次いで、170mgの3−オキサ−ペンタン−1,5−ジオキシアミンを反応混合物に付与した。室温で2時間振とうした後、78.5mgのシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加し、反応を、一晩かけて18時間行った。次いで、反応混合物を、再生成されたセルロース(Millipore)から作製された5kDのカットオフを有する膜を使用する限外濾過/透析濾過の手順(UF/DF)に供した。
アミノオキシ−PSA試薬を実施例5に従い調製した。透析濾過後、生成物を−80℃で凍結し、凍結乾燥した。凍結乾燥後、試薬を適切な体積の水中で溶解し、炭水化物修飾を介するPSA−タンパク質複合体の調製のために使用した。
25mgの精製されたA1PIを反応緩衝液(20mMのNa2HPO4、5mMのEDTA、pH7.0)中に溶解し、10mg/mlの最終濃度を得た。この溶液に、TCEP(Tris[2−カルボキシエチル]ホスフィンヒドロクロリド/Thermo Scientific)原液(5mgのTCEP/ml反応緩衝液)のアリコートを添加し、3M TCEPのモル過剰を得た。混合物を暗室において室温で1時間インキュベートした。次いで、TCEPを、PD−10カラム(GE−Healthcare)を使用したゲル濾過によって、分離した。続いて、A1PIを、10モル過剰で分岐PEGマレイミド20kD(NOF Sunbright MA Series)を用いて、化学的に修飾した。修飾反応を暗室においてT=+2〜8℃の温度で1時間行い、L−システイン(最終濃度:10mM)を用いた反応停止ステップが続いた。L−システインの添加後、反応混合物を、穏やかな振とう下で、同じ温度でさらに1時間インキュベートした。
30mgの精製されたA1PIを反応緩衝液(20mMのNa2HPO4、5mMのEDTA、pH7.0)中に溶解し、10mg/mlの最終濃度を得た。この溶液に、TCEP原液(5mgのTCEP/ml反応緩衝液)のアリコートを添加し、4M TCEPのモル過剰を得た。混合物を10分間インキュベートし、次いで、化学修飾を、10モル過剰で分岐PEGマレイミド20kD(NOF Sunbright MA Series)の添加によって、開始した。修飾反応を暗室においてT=+2〜8℃の温度で1時間行い、L−システイン(最終濃度:10mM)を用いた反応停止ステップが続いた。L−システインの添加後、反応混合物を、穏やかな振とう下で、同じ温度でさらに1時間インキュベートした。
PEG−A1PI ELISAを使用して、ラット薬物動態的研究から得られた血漿試料中のPEG化A1PIの濃度を特異的に測定した。アッセイは基本的に、米国特許出願第12/342,405号に従った。端的には、本発明者は、炭酸塩緩衝液、pH9.5中5μg/mLの濃度で、ウサギ抗PEG IgG(Epitomics、#YG−02−04−12P)をMaxisorp F96プレートに被覆し、結合PEG化A1PIが、抗ヒトA1PI−ペルオキシダーゼ調製物(結合部位、PP034)を使用して検出された。アッセイは、A1PI−結合PEG 2〜32ng/mLの範囲の線形線量濃度関係を示した。本発明者は、このアッセイ範囲を、PEG化A1PIの調製物をPEGの既知の濃度で連続的に希釈することによって証明し、Nagら(Anal Biochem1996;237:224−31)によって説明される比色分析法によって測定した。比色分析アッセイはアンモニウムフェロチオシアネート)を用いて、ポリエチレングリコールおよびポリエチレングリコール化タンパク質を推算し、試料のシグナルを推定するために得られた検量線を使用した。図3は、得られた薬物動態プロファイルを示す。
A1PIは、20kDの分子量を有し、活性NHSエステル(組織名:2,3−ビス(メチルポリオキシエチレン−オキシ)−1−(1,5−ジオキソ−5−スクシンイミジルオキシ,ペンチルオキシ)プロパン))を含有するPEG化試薬(SUNBRIGHT GL2−200GS/NOF,Tokyo,Japan)で、PEG化された。50mMのリン酸緩衝液、pH7.5中の精製されたA1PIの溶液を、3.3mg/mlのタンパク質濃度に調整し、PEG化試薬(原液:50mg試薬/ml 2mMのHCl)を添加し、10mg/mlの最終濃度を得た。PEG化反応を、穏やかな攪拌下で、室温で2時間実施した。次いで、反応をグトリシン(gtlycine)(最終濃度10mM)の添加によって1時間停止した。続いて、反応のpHを2NのHClの添加によって6.5に調整し、混合物を25mMのリン酸緩衝液、pH6.5で事前に平衡化された陰イオン交換クロマトグラフィー樹脂(Q−Sepharose FF/GE−Healthcare)上に負荷した。次いで、カラムを、過剰な試薬を除去するために20CVの平衡化緩衝液で洗浄し、PEG化A1PIを、1ml/分の流速を用いた溶出緩衝液(25mMのリン酸緩衝液、1MのNaCl)で溶出した。
1.5mlの20mMのリン酸緩衝液、pH6.0中に溶解した2.0mgのA1PIに、水性過ヨウ素酸ナトリウム溶液(10mM)を添加し、100μMの最終濃度を得た。混合物を、暗室において4℃で1時間振とうし、1Mのグリセロール溶液(最終濃度:10mM)の添加によって、室温で15分間反応停止させた。次いで、低分子量の混入物質を、ゲル濾過によって、同じ緩衝系で事前に平衡化されたPD−10カラム(GE Healthcare)上で、分離した。続いて、直鎖アミノオキシ−PEG試薬(NOF SUNBRIGHT ME 200C/NOF,Tokyo,Japan)を、留分を含有するA1PIに添加し、混合物を、pH6.0、4℃で18時間振とうした。最終的に、複合体を、上述の条件下でIEXによって、さらに精製した。
10mgのA1PIを、12mlのヒスチジン−緩衝液、pH6.0(20mMのL−ヒスチジン、150mMのNaCl、5mMのCaCl2)中に溶解する。次いで、水性過ヨウ素酸ナトリウム溶液(5mM)を添加し、120μMの最終濃度を得る。続いて、20kDの分子量を伴う、直鎖PEG−アミノオキシ試薬(試薬(NOF SUNBRIGHT ME 200C/NOF,Tokyo,Japan)を添加し、PEG試薬の5倍モル過剰を得る。混合物を、穏やかな攪拌下で、暗室において4℃で18時間インキュベートし、25μlの1Mの水性システイン溶液の添加によって、室温で15分間反応停止させる。最終的に、複合体を、上述の条件下でIEXによって、さらに精製する。
A1PIは、上述のように、炭水化物残基を介してPEG化される。アミノオキシ試薬との化学反応を、10mMの濃度を用いて、求核触媒アニリン(Zhengら,Nature Methods 2009;6:207−9)の存在下で行う。この触媒の代替として、m−トルイジン(濃度:10mM)を使用する。化学反応を、4℃で18時間の代わりに、室温で2時間実施する。代替として、米国特許第2012/0035344 A1号に記載のm−トルイジンまたは他の求核触媒を使用してもよい。
0.68gの酸化PSAを、15.1mlの50mMのリン酸緩衝液、pH6.0中に溶解し、43mg/mlの最終濃度を得た。次いで、マレイミドおよびヒドラジド基を含有する二官能性EMCHリンカー(Pierce/50mMのリン酸緩衝液中16.7mg/ml)の50mMの溶液を添加した。pHをpH6.0に修正し、溶液を暗室において室温で30分間、穏やかな攪拌下で、インキュベートした。続いて、2.6mlの1M NaBH3CN溶液(=50M過剰)を添加し、暗室において室温で180分間、穏やかな攪拌下で、別のインキュベーションを実行した。次いで、溶液を50mMのリン酸緩衝液、pH6で1:1に希釈し、伝導率を下げた(約7mS/cm)。次いで、混合物を、4ml/分の流速でPSAマレイミドリンカーを精製するために、8mlの総容積の事前充填されたIEXカラム(モノリス型DEAE CIM/BIA Separations)上に適用した。次いで、カラムを、40ml/分の流速を用いて、32カラム体積の50mMのリン酸緩衝液、pH6.0で洗浄した。次いで、リンカーを、勾配59%の50mMのリン酸緩衝液、pH6.0、および勾配41%の50mMのリン酸緩衝液/1MのNaCl、pH7.5で溶出した。最終的に、溶出液を、ポリエーテルスルホン膜(型BIOMAX5/Millipore)を使用する、限外濾過/透析濾過に供した。最終透析濾過ステップを、90mMのNaClを含有する50mMのリン酸緩衝液、pH7.5に対して、実施した。
A1PIを、活性マレイミド基を含有するポリシアル化試薬の使用によってポリシアル化する。この種の試薬の実施例が上述される(二官能性EMCHリンカー(Pierce)を用いた酸化PSAの反応およびイオン交換クロマトグラフィーによるその後の精製)。
A1PIを、活性マレイミド基を含有するポリシアル化試薬の使用によってポリシアル化する。この種の試薬の実施例が上述される(二官能性EMCHリンカー(Pierce)を用いた酸化PSAの反応およびイオン交換クロマトグラフィーによるその後の精製)。
30mgの精製されたHSAを反応緩衝液(20mMのNa2HPO4、5mMのEDTA、pH7.0)中に溶解し、10mg/mlの最終濃度を得る。この溶液に、TCEP原液(5mgのTCEP/ml反応緩衝液)のアリコートを添加し、4のモル過剰を得る。混合物を10分間インキュベートする。末端マレイミド基を含有する10倍モル過剰の分岐PEG試薬(分子量20kD)の添加によって、化学修飾を開始する。この種の試薬の例は、NOF(NOF Corp.,Tokyo,Japan)のSunbright(登録商標)MA seriesである。修飾反応を暗室においてT=+2〜8℃の温度で1時間行い、L−システイン(最終濃度:10mM)を用いた反応停止ステップが続く。L−システインの添加後、反応混合物を、穏やかな振とう下で、同じ温度でさらに1時間インキュベートする。次いで、pH値を0.1MのHClの滴加によって6.8に調整する。
遊離およびアクセス可能なスルフヒドリル基を含有する組換えFVIII(rFVIII)変異体を、米国特許第7,632,921 B2号に従って、組換えDNA技術により調製し、遊離SH基を介する化学修飾に使用する。この変異体を、末端マレイミド基を含有する分岐PEG試薬(分子量20kD)の10倍モル過剰を使用して、化学的に修飾する。この種の試薬の例は、NOF(NOF Corp.,Tokyo,Japan)のSunbright(登録商標)MA seriesである。反応を、5倍過剰のTCEPの存在下で、室温で1時間実施する。次いで、複合体を疎水性相互作用クロマトグラフィー(HIC)によって精製する。イオン強度を、8Mの酢酸アンモニウム(8Mの酢酸アンモニウム、50mMのHepes、5mMのCaCl2、350mMのNaCl、0.01% Tween80、pH6.9)を含有する緩衝剤の添加により増加し、2.5Mの酢酸アンモニウムの最終濃度を得る。次いで、反応混合物を、平衡化緩衝液(2.5Mの酢酸アンモニウム、50mMのHepes、5mMのCaCl2、350mMのNaCl、0.01% Tween80、pH6.9)で平衡化されたPhenyl−Sepharose FFで充填されたクロマトグラフィーカラム上に負荷する。生成物を、溶出緩衝液(50mMのHepes、5mMのCaCl2、0.01% Tween80、pH7.4)で溶出し、溶出液を、再生成されたセルロースから作製された30kD膜を使用する限外濾過/透析濾過によって、濃縮する。
本明細書に記載のm−トルイジンまたはo−アミノ安息香酸のような代替的な求核触媒の存在下で行われるポリシアル化反応は、他の治療用タンパク質まで拡大され得る。例えば、本開示の様々な態様において、上述のポリシアル化または上述のようにPSAアミノオキシまたはPEGアミノオキシ試薬によるPEG化反応を、本明細書に説明されるこれらのタンパク質等の治療用タンパク質で繰り返す。
本開示の治療用タンパク質のPEG化は、アルデヒドおよび活性アミノオキシ基を含有する好適なリンカーから作製される分岐鎖または直鎖PEG化試薬まで拡大され得る。
本明細書に記載のm−トルイジンまたはo−アミノ安息香酸のような代替的な求核触媒の存在下で行われるポリシアル化反応は、他の治療用タンパク質まで拡大され得る。例えば、本開示の様々な態様において、上述のポリシアル化または上述のようにPSAアミノオキシまたはPEGアミノオキシ試薬によるPEG化反応を、本明細書に説明されるこれらのタンパク質等の治療用タンパク質で繰り返す。ポリシアル化反応を、個々の反応ステップにおいて、または、代替としては、本明細書に記載の並発反応において、実施する。
本開示の治療用タンパク質のPEG化は、本明細書に提供される実施例に従って、アルデヒドおよび活性アミノオキシ基を含有する好適なリンカーから作製される分岐鎖または直鎖PEG化試薬まで拡大され得る。
本開示の治療用タンパク質のPEG化は、上述のように、アルデヒドおよび活性アミノオキシ基を含有する好適なリンカーから作製される分岐鎖または直鎖PEG化試薬まで拡大され得る。PEG化反応を、個々の反応ステップにおいて、または、代替としては、本明細書に記載の並発反応において、実施する。
PSAマレイミドを実施例14に従って調製し、逐次手法を使用する遊離SH基を介したヒト血清アルブミン(HSA)のポリシアル化に使用する。HSAを、10mg/mlのタンパク質濃度および3Mの試薬過剰を用いて、反応緩衝液(20mMのNa2HPO4、5mMのEDTA、pH7.0)中で、TCEP試薬(Tris[2−カルボキシエチル]ホスフィンヒドロクロリド/Thermo Scientific)で還元する。混合物を、暗室において室温で1時間インキュベートする。次いで、TCEPを、PD−10カラム(GE−Healthcare)を使用するゲル濾過によって分離する。続いて、HSAを10モル過剰の試薬を使用し、反応緩衝液中のPSAマレイミドで化学的に修飾する。修飾反応を暗室において4℃の温度で1時間行い、L−システイン(最終濃度:10mM)を用いた反応停止ステップが続く。L−システインの添加後、反応混合物を、穏やかな攪拌下で、同じ温度でさらに1時間インキュベートした。最終的に、ポリシアル化HSAをQ−Sepharose FF上でIEXによって精製する。
PSAマレイミドを実施例14に従って調製し、同時手法を使用する遊離SH基を介したヒト血清アルブミン(HSA)のポリシアル化に使用した。HSAを反応緩衝液(20mMのNa2HPO4、5mMのEDTA、pH7.0)中に溶解し、10mg/mlの最終濃度を得る。この溶液に、TCEP(Tris[2−カルボキシエチル]ホスフィンヒドロクロリド/Thermo Scientific)原液(5mgのTCEP/ml反応緩衝液)のアリコートを添加し、4倍モル過剰を得る。混合物を、10分間インキュベートし、次いで、10倍モル過剰のPSAマレイミド試薬(実施例14)の添加によって、化学修飾を開始する。修飾反応を暗室において4℃で1時間行う。L−システインの添加後、反応混合物を、穏やかな攪拌下で、同じ温度でさらに1時間インキュベートする。最終的に、ポリシアル化HSAをQ−Sepharose FF上でIEXによって精製する。
1mlの反応緩衝液(20mMのNa2HPO4、5mMのEDTA、pH7.0)中の2.6mgのA1PI(純A1PI出発物質)での数回のバッチが、還元剤TCEPの異なるモル過剰の使用によって、処理された。これらの研究の目標は、PEG−マレイミドとA1PIの反応に対するTCEP濃度の最適化であった。
PEG化反応に対するPEG過剰の影響を、同時および逐次プロセスの両方で試験した。このために、還元剤(TCEP)の最適化に関して、修飾バッチを同じ反応条件下で扱った。同時プロセスを4倍、および逐次プロセスを3倍モル過剰のTCEP、すなわち、先に決定された理想の還元剤過剰に調整した。PEG過剰を除くすべての要因が一定に保たれた。それぞれのバッチのPEG化ターンオーバーの分析は、HPLCによって実施された。
モノPEG化A1PIを、実施例8に記載のように、MAL−PEG 20kDとの反応によるSH基の修飾を介して調製し、インビトロ活性試験に供した。この試験は、ブタ膵臓エラスターゼを抑制する能力を、その機能活性の評価基準として判定する。要するに、A1PIまたはA1PI誘導体のエラスターゼ阻害物質活性を、2ステップ反応で判定した。第1のステップにおいて、A1PI試料を過剰なブタエラスターゼでインキュベートした。これは、錯体形成およびエラスターゼの活性化を引き起こす。第2のステップにおいて、残りのエラスターゼ活性を、エラスターゼ特異的発色性基質Suc(Ala)3−pNAの添加によって測定した。pNAの放出を、測光法で、405nmで測定することができ、残留エラスターゼ活性の直接的尺度である。残留エラスターゼ活性は、A1PI濃度に対する間接比例の所定の範囲内である。アッセイ検定を、α1抗トリプシン(WHO05/162;12.4mg 機能的に活性なA1PI/mL)の第1のWHO標準に対して検査するA1PI基準調製物を使用して、達成する。結果を、mg活性A1PI/mlに表した。加えて、総タンパク質含有量をブラッドフォードアッセイによって測定し、活動比率/総タンパク質を検査した。
Claims (34)
- 治療用タンパク質複合体を調製する方法であって、
(a)治療用タンパク質上に還元システインスルフヒドリル基を産生する、および
(b)水溶性ポリマーの前記還元システインスルフヒドリル基への複合化を可能にする条件下で、前記治療用タンパク質、またはその生物学的に活性な断片を、チオール還元剤および前記水溶性ポリマー、またはその機能的誘導体に接触させるステップを含み、
前記治療用タンパク質が、アクセス可能なシステインスルフヒドリル基を1つしか有しないアミノ酸配列を有する、方法。 - 前記治療用タンパク質が、
A1PI(α−1プロテイナーゼ阻害物質)、またはA1AT(α−1抗トリプシン)、ATR(α−1抗トリプシン関連タンパク質)、AACTまたはACT(α−1抗キモトリプシン)、PI4(プロテイナーゼ阻害物質4)、PCIまたはPROCI(タンパク質C阻害物質)、CBG(コルチコステロイド結合グロブリン)、TBG(チロキシン結合グロブリン)、AGT(アンギオテンシノーゲン)、センテリン、PZI(タンパク質Z依存性プロテアーゼ阻害物質)、PI2(プロテイナーゼ阻害物質2)、PAI2またはPLANH2(プラスミノゲン活性化因子阻害物質−2)、SCCA1(扁平上皮癌抗原1)、SCCA2(扁平上皮癌抗原2)、PI5(プロテイナーゼ阻害物質5)、PI6(プロテイナーゼ阻害物質6)、メグシン、PI8(プロテイナーゼ阻害物質8)、PI9(プロテイナーゼ阻害物質9)、PI10(プロテイナーゼ阻害物質10)、エピピン(epipin)、ユコピン(yukopin)、PI13(プロテイナーゼ阻害物質13)、PI8L1(プロテイナーゼ阻害物質8様1)、AT3またはATIII(抗トロンビンIII)、HC−IIまたはHCF2(ヘパリン補助因子II)、PAI1またはPLANH1(プラスミノゲン活性化因子阻害物質1)、PN1(プロテイナーゼネキシンI)、PEDF(色素上皮由来因子)、PLI(プラスミン阻害物質)、C1INまたはC1 INH(血漿プロテイナーゼC1阻害物質)、CBP1(コラーゲン結合タンパク質1)、CBP2(コラーゲン結合タンパク質2)、PI12(プロテイナーゼ阻害物質12)、およびPI14(プロテイナーゼ阻害物質14)からなる群から選択されるセルピンスーパーファミリーのタンパク質、
抗トロンビンIII、α−1抗キモトリプシン、ヒト血清アルブミン、アルコール脱水素酵素、ビリベルジンレダクターゼ、ブチリルコリンエステラーゼ、補体C5a、コルチゾール結合タンパク質、クレアチンキナーゼ、フェリチン、ヘパリン補助因子、インターロイキン2、タンパク質C阻害物質、組織因子、ビトロネクチン、オボアルブミン、プラスミノゲン活性化因子阻害物質、ニューロセルピン、C1阻害物質、ネキシン、α−2抗プラスミン、ヘパリン補助因子II、α1抗キモトリプシン、α1ミクログロブリンからなる群から選択されるタンパク質、ならびに、
第IX因子(FIX)、第VIII因子(FVIII)、第VIIa因子(FVIIa)、フォンヴィレブランド因子(VWF)、第V因子(FV)、第X因子(FX)、第XI因子(FXI)、第XII因子(FXII)、第XIII因子(FXIII)、トロンビン(FII)、タンパク質C、タンパク質S、tPA、PAI−1、組織因子(TF)、およびADAMTS13プロテアーゼからなる群から選択される、血液凝固因子タンパク質からなる群から選択される、請求項1に記載の方法。 - 前記治療用タンパク質がA1PIである、請求項3に記載の方法。
- 前記治療用タンパク質がヒト血清アルブミンである、請求項3に記載の方法。
- 前記治療用タンパク質が糖タンパク質である、請求項1に記載の方法。
- 前記治療用タンパク質がインビボでグリコシル化される、請求項5に記載の方法。
- 前記治療用タンパク質がインビトロでグリコシル化される、請求項5に記載の方法。
- 0.100〜10.0グラム重の量の治療用タンパク質を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記水溶性ポリマーが、直鎖、分岐、またはマルチアーム水溶性ポリマーからなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記水溶性ポリマーが、3,000〜150,000ダルトン(Da)の分子量を有する、請求項9に記載の方法。
- 前記水溶性ポリマーが直鎖であり、10,000〜50,000Daの分子量を有する、請求項10に記載の方法。
- 前記水溶性ポリマーが直鎖であり、20,000の分子量を有する、請求項11に記載の方法。
- 前記水溶性ポリマーが、ポリエチレングリコール(PEG)、分岐PEG、PolyPEG(登録商標)(Warwick Effect Polymers、Coventry、UK)、ポリシアル酸(PSA)、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン(HES)、ヒドロキシアルキルデンプン(HAS)、炭水化物、多糖類、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、デキストラン、カルボキシメチル−デキストラン、ポリアルキレンオキサイド(PAO)、ポリアルキレングリコール(PAG)、ポリプロピレングリコール(PPG)、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール(PVA)、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリエチレン−コ−無水マレイン酸、ポリスチレン−コ−無水マレイン酸、ポリ(1−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール)(PHF)、2−メタクリロイルオキシ−2’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート(MPC)、およびそれらの機能的誘導体からなる群から選択される、請求項9に記載の方法。
- 前記水溶性ポリマーが、マレイミド(MAL)、ビニルスルホン、オルトピリジル−ジスルフィド(OPSS)、およびヨードアセトアミドからなる群から選択されるスルフヒドリル特異的基を含有するように誘導体化される、請求項9に記載の方法。
- 前記水溶性ポリマーがPEGであり、前記スルフヒドリル特異的基がMALである、請求項13に記載の方法。
- 前記水溶性ポリマーがPSAであり、前記スルフヒドリル特異的基がMALである、請求項13に記載の方法。
- 前記チオール還元剤が、Tris[2−カルボキシエチル]ホスフィンヒドロクロリド(TCEP)、ジチオスレイトール(DTT)、ジチオエリトリトール(DTE)、水素化ホウ素ナトリウム(NaBH4)、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(NaCNBH3)、β−メルカプトエタノール(BME)、システインヒドロクロリド、およびシステインからなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記チオール還元剤がTCEPである、請求項17に記載の方法。
- 前記チオール還元剤の濃度が、治療用タンパク質濃度と比べて1〜100倍モル過剰である、請求項17に記載の方法。
- 前記チオール還元剤の濃度が、前記治療用タンパク質濃度と比べて1〜10倍モル過剰である、請求項19に記載の方法。
- 前記治療用タンパク質の前記アミノ酸配列が、システイン残基を1つしか含有しない、請求項1に記載の方法。
- 前記アクセス可能なシステインスルフヒドリル基が、前記治療用タンパク質の天然アミノ酸配列に存在する、請求項1に記載の方法。
- 前記治療用タンパク質の前記アミノ酸配列が、前記アクセス可能なシステインスルフヒドリル基を含むように修飾される、請求項1に記載の方法。
- 前記治療用タンパク質上に還元システインスルフヒドリル基を産生するという前記条件は、前記タンパク質中の他のシステインアミノ酸間のジスルフィド結合を還元しない、請求項1に記載の方法。
- 治療用タンパク質が、完全にまたは部分的に酸化されたアクセス可能なスルフヒドリル基を含むシステイン残基を1つだけ含み、前記1つだけのシステイン残基は、前記治療用タンパク質のアミノ酸配列中の別のシステイン残基とのジスルフィド結合に関与しない、請求項1に記載の方法。
- 前記治療用タンパク質複合体を精製するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記治療用タンパク質複合体が、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、および親和性クロマトグラフィー、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される技術を用いて精製される、請求項26に記載の方法。
- 前記治療用タンパク質、水溶性ポリマー、およびチオール還元剤が共に単一の容器中でインキュベートされ、前記酸化したSH基の前記還元および前記複合化反応が、同時に実施される、請求項1に記載の方法。
- 前記チオール還元剤が、前記治療用タンパク質とのインキュベーションの後、かつ前記治療用タンパク質を前記水溶性ポリマーとインキュベートする前に除去され、前記酸化したSH基の前記還元および前記複合化反応が順次実施される、請求項1に記載の方法。
- 前記治療用タンパク質複合体は、天然の治療用タンパク質と比べて、少なくとも20%の生物学的活性を保持する、請求項1に記載の方法。
- 少なくとも70%の前記治療用タンパク質複合体が、単一の水溶性ポリマーを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記治療用タンパク質複合体が、天然の治療用タンパク質と比べて、増加した半減期を有する、請求項1に記載の方法。
- 前記治療用タンパク質複合体が、天然の治療用タンパク質と比べて、半減期が少なくとも1.5倍増加する、請求項32に記載の方法。
- A1PI複合体を調製する方法であって、
前記A1PI上でのスルフヒドリル基の還元を可能にする条件下で、前記A1PIをTCEPと接触させるステップと、
前記水溶性ポリマーの前記還元スルフヒドリル基への複合化を可能にする条件下で、MAL基を含有するように誘導体化された直鎖PEGを前記A1PIと接触させるステップと、を含み、
前記A1PIが、完全にまたは部分的に酸化されたアクセス可能なスルフヒドリル基を含むシステイン残基を1つだけ含み、前記1つだけのシステイン残基は、前記A1PIのアミノ酸配列中の別のシステイン残基とのジスルフィド結合に関与せず、
前記TCEP濃度が、前記A1PI濃度と比べて3〜4倍モル過剰であり、
少なくとも70%の前記A1PI複合体が、単一の水溶性ポリマーを含み、
前記A1PI複合体が、天然のA1PIと比べて、増加した半減期を有し、
前記A1PI複合体が、天然のA1PIと比べて、少なくとも60%の生物学的活性を保持する、方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161490869P | 2011-05-27 | 2011-05-27 | |
US61/490,869 | 2011-05-27 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014512150A Division JP2014520094A (ja) | 2011-05-27 | 2012-05-25 | 増加した半減期を有する治療用タンパク質およびそれを調製する方法 |
Related Child Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018120337A Division JP2018162293A (ja) | 2011-05-27 | 2018-06-26 | 増加した半減期を有する治療用タンパク質およびそれを調製する方法 |
JP2019081408A Division JP2019151643A (ja) | 2011-05-27 | 2019-04-23 | 増加した半減期を有する治療用タンパク質およびそれを調製する方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017206513A true JP2017206513A (ja) | 2017-11-24 |
Family
ID=46208843
Family Applications (6)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014512150A Pending JP2014520094A (ja) | 2011-05-27 | 2012-05-25 | 増加した半減期を有する治療用タンパク質およびそれを調製する方法 |
JP2017107268A Pending JP2017206513A (ja) | 2011-05-27 | 2017-05-31 | 増加した半減期を有する治療用タンパク質およびそれを調製する方法 |
JP2018120337A Pending JP2018162293A (ja) | 2011-05-27 | 2018-06-26 | 増加した半減期を有する治療用タンパク質およびそれを調製する方法 |
JP2019081408A Pending JP2019151643A (ja) | 2011-05-27 | 2019-04-23 | 増加した半減期を有する治療用タンパク質およびそれを調製する方法 |
JP2019209238A Pending JP2020059717A (ja) | 2011-05-27 | 2019-11-20 | 増加した半減期を有する治療用タンパク質およびそれを調製する方法 |
JP2021134697A Pending JP2021183636A (ja) | 2011-05-27 | 2021-08-20 | 増加した半減期を有する治療用タンパク質およびそれを調製する方法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014512150A Pending JP2014520094A (ja) | 2011-05-27 | 2012-05-25 | 増加した半減期を有する治療用タンパク質およびそれを調製する方法 |
Family Applications After (4)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018120337A Pending JP2018162293A (ja) | 2011-05-27 | 2018-06-26 | 増加した半減期を有する治療用タンパク質およびそれを調製する方法 |
JP2019081408A Pending JP2019151643A (ja) | 2011-05-27 | 2019-04-23 | 増加した半減期を有する治療用タンパク質およびそれを調製する方法 |
JP2019209238A Pending JP2020059717A (ja) | 2011-05-27 | 2019-11-20 | 増加した半減期を有する治療用タンパク質およびそれを調製する方法 |
JP2021134697A Pending JP2021183636A (ja) | 2011-05-27 | 2021-08-20 | 増加した半減期を有する治療用タンパク質およびそれを調製する方法 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US20120329127A1 (ja) |
EP (3) | EP2714093A1 (ja) |
JP (6) | JP2014520094A (ja) |
AU (5) | AU2012262428C1 (ja) |
CA (2) | CA3012117A1 (ja) |
TW (4) | TW201835109A (ja) |
WO (1) | WO2012166622A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114652848A (zh) * | 2022-03-18 | 2022-06-24 | 山东大学齐鲁医院 | 一种peg化人血清白蛋白纳米材料及其制备方法和在肿瘤诊疗中的应用 |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013004844A1 (en) | 2011-07-07 | 2013-01-10 | Novo Nordisk A/S | Drug delivery injection pen with add-on dose capturing and display module |
WO2013138694A1 (en) * | 2012-03-16 | 2013-09-19 | Enzon Pharmaceuticals, Inc. | Polymeric conjugates of c-1 inhibitors |
US9353165B2 (en) * | 2012-07-25 | 2016-05-31 | Grifols, S.A. | Purification of cell culture derived alpha1 protease inhibitor |
CN103333250A (zh) * | 2013-06-24 | 2013-10-02 | 上海大学 | 一种生物安全性好的纳米荧光探针的制备方法 |
ES2869309T3 (es) | 2013-12-13 | 2021-10-25 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Método para la conjugación de proteínas con tioéter |
US10046058B2 (en) | 2014-12-02 | 2018-08-14 | Rezolute, Inc. | Use of hydrophobic organic acids to increase hydrophobicity of proteins and protein conjugates |
WO2016196017A1 (en) | 2015-06-04 | 2016-12-08 | Antriabio, Inc. | Amine pegylation methods for the preparation of site-specific protein conjugates |
US10589615B2 (en) * | 2015-08-03 | 2020-03-17 | Ford Global Technologies, Llc | Decoupler for a hydraulic engine mount |
MA45473A (fr) * | 2016-04-04 | 2019-02-13 | Shire Human Genetic Therapies | Inhibiteur de c1 estérase conjugué et ses utilisations |
CN109072482A (zh) * | 2016-05-12 | 2018-12-21 | Z生物科技有限公司 | 多价性聚糖微阵列平台 |
JP6773987B2 (ja) * | 2019-08-22 | 2020-10-21 | サミー株式会社 | 遊技機 |
MX2022002337A (es) | 2019-08-27 | 2022-06-08 | Tonix Pharma Ltd | Polipéptidos de tff2 modificados. |
JP6773989B2 (ja) * | 2019-09-09 | 2020-10-21 | サミー株式会社 | 遊技機 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002534119A (ja) * | 1999-01-14 | 2002-10-15 | ボルダー バイオテクノロジー, インコーポレイテッド | 自由システイン残基を有するタンパク質の生産方法 |
JP2007527891A (ja) * | 2004-03-11 | 2007-10-04 | フレゼニウス・カビ・ドイチュラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | ヒドロキシアルキルデンプンとタンパク質とのコンジュゲート |
JP2008524117A (ja) * | 2004-11-12 | 2008-07-10 | バイエル・ヘルスケア・エルエルシー | Fviiiの特定部位の変更 |
JP2009513643A (ja) * | 2005-10-25 | 2009-04-02 | メディカル、ユニバーシティー、オブ、オハイオ、アット、トレド | 少なくとも1つの保護されたチオール領域を有するアルブミンベースコロイド組成物、その製造方法および使用方法 |
Family Cites Families (40)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS54113492A (en) | 1978-02-24 | 1979-09-05 | Sanyo Chem Ind Ltd | Preparation of glucoprotein derivative |
US4356170A (en) | 1981-05-27 | 1982-10-26 | Canadian Patents & Development Ltd. | Immunogenic polysaccharide-protein conjugates |
US4496689A (en) | 1983-12-27 | 1985-01-29 | Miles Laboratories, Inc. | Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer |
US5766897A (en) | 1990-06-21 | 1998-06-16 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Cysteine-pegylated proteins |
US5846951A (en) | 1991-06-06 | 1998-12-08 | The School Of Pharmacy, University Of London | Pharmaceutical compositions |
US5621039A (en) | 1993-06-08 | 1997-04-15 | Hallahan; Terrence W. | Factor IX- polymeric conjugates |
US6284874B1 (en) | 1994-06-17 | 2001-09-04 | Alpha Therapeutic Corporation | Process for separating α1-proteinase inhibitor from cohn fraction IV1 and IV4 paste |
WO1996040662A2 (en) | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Cellpro, Incorporated | Aminooxy-containing linker compounds and their application in conjugates |
US5616693A (en) | 1996-07-01 | 1997-04-01 | Alpha Therapeutic Corporation | Process for seperating alpha-1-proteinase inhibitor from COHN IV1 +1V4 paste |
WO1999003887A1 (en) * | 1997-07-14 | 1999-01-28 | Bolder Biotechnology, Inc. | Derivatives of growth hormone and related proteins |
US6531298B2 (en) | 1997-07-21 | 2003-03-11 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Factor IX antihemophilic factor with increased clotting activity |
US7074878B1 (en) | 1999-12-10 | 2006-07-11 | Harris J Milton | Hydrolytically degradable polymers and hydrogels made therefrom |
US6413507B1 (en) | 1999-12-23 | 2002-07-02 | Shearwater Corporation | Hydrolytically degradable carbamate derivatives of poly (ethylene glycol) |
ATE313554T1 (de) | 2000-05-16 | 2006-01-15 | Lipoxen Technologies Ltd | Derivatisierung von proteinen in wässrigem lösungsmittel |
US7265084B2 (en) | 2001-10-10 | 2007-09-04 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylation methods and proteins/peptides produced by the methods |
AU2002352524B2 (en) | 2001-11-07 | 2007-10-04 | Nektar Therapeutics | Branched polymers and their conjugates |
JP2006516534A (ja) | 2002-09-11 | 2006-07-06 | フレセニウス・カビ・ドイッチュラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | Has化ポリペプチド、特にhas化エリスロポエチン |
EP1681303B1 (en) | 2002-09-11 | 2013-09-04 | Fresenius Kabi Deutschland GmbH | HASylated polypeptides, especially HASylated erythropoietin |
ES2512499T3 (es) | 2003-04-08 | 2014-10-24 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Fármacos pegilados reversibles |
SG155777A1 (en) | 2003-04-09 | 2009-10-29 | Neose Technologies Inc | Glycopegylation methods and proteins/peptides produced by the methods |
EP1653991A2 (en) | 2003-08-08 | 2006-05-10 | Fresenius Kabi Deutschland GmbH | Conjugates of a polymer and a protein linked by an oxime linking group |
JP4566194B2 (ja) | 2003-08-12 | 2010-10-20 | リポクセン テクノロジーズ リミテッド | タンパク質の誘導体化及び結合のためのシアル酸誘導体 |
PT1664123E (pt) | 2003-09-22 | 2008-07-16 | Kamada Ltd | Preparação em larga escala de um inibidor da alfa-1 proteinase e sua utilização |
US8633157B2 (en) | 2003-11-24 | 2014-01-21 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated erythropoietin |
CA2549409C (en) | 2003-12-03 | 2013-10-29 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor |
US20060040856A1 (en) | 2003-12-03 | 2006-02-23 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated factor IX |
US7875708B2 (en) | 2004-08-12 | 2011-01-25 | Lipoxen Technologies Limited | Sialic acid derivatives |
WO2006031811A2 (en) | 2004-09-10 | 2006-03-23 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated interferon alpha |
JP5022231B2 (ja) | 2004-12-27 | 2012-09-12 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド | ポリマー−フォンビルブラント因子結合体 |
EP2279758B1 (en) | 2005-06-16 | 2015-02-25 | Nektar Therapeutics | Conjugates having a degradable linkage and polymeric reagents useful in preparing such conjugates |
US7645860B2 (en) | 2006-03-31 | 2010-01-12 | Baxter Healthcare S.A. | Factor VIII polymer conjugates |
US7683158B2 (en) * | 2006-03-31 | 2010-03-23 | Baxter International Inc. | Pegylated factor VIII |
JP5570809B2 (ja) | 2006-09-01 | 2014-08-13 | ノボ ノルディスク ヘルス ケア アーゲー | 修飾タンパク質 |
JP2011503101A (ja) * | 2007-11-09 | 2011-01-27 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド | 修飾された組換え第viii因子およびフォンウィルブランド因子ならびにその使用方法 |
AU2009239641B2 (en) * | 2008-04-24 | 2013-11-07 | Cantab Biopharmaceuticals Patents Limited | Factor IX conjugates with extended half-lives |
PL2326349T3 (pl) * | 2008-07-21 | 2015-08-31 | Polytherics Ltd | Nowe reagenty i sposób sprzęgania cząsteczek biologicznych |
CN102573920B (zh) | 2009-07-27 | 2015-01-14 | 利普森技术有限公司 | 非凝血蛋白的糖基多唾液酸化 |
US8642737B2 (en) | 2010-07-26 | 2014-02-04 | Baxter International Inc. | Nucleophilic catalysts for oxime linkage |
DK2513294T3 (en) * | 2009-12-16 | 2016-06-06 | Regentis Biomaterials Ltd | SKELETS FOR POLYMER-PROTEIN CONJUGATES, PROCEDURES FOR GENERATION THEREOF AND APPLICATIONS THEREOF |
WO2011118739A1 (ja) * | 2010-03-26 | 2011-09-29 | 協和発酵キリン株式会社 | 新規修飾部位導入抗体および抗体フラグメント |
-
2012
- 2012-05-25 EP EP12725992.7A patent/EP2714093A1/en not_active Withdrawn
- 2012-05-25 US US13/481,260 patent/US20120329127A1/en not_active Abandoned
- 2012-05-25 WO PCT/US2012/039637 patent/WO2012166622A1/en unknown
- 2012-05-25 CA CA3012117A patent/CA3012117A1/en not_active Abandoned
- 2012-05-25 JP JP2014512150A patent/JP2014520094A/ja active Pending
- 2012-05-25 CA CA2836478A patent/CA2836478A1/en not_active Abandoned
- 2012-05-25 EP EP18182890.6A patent/EP3412314A1/en active Pending
- 2012-05-25 EP EP20197463.1A patent/EP3808378A1/en not_active Withdrawn
- 2012-05-25 AU AU2012262428A patent/AU2012262428C1/en active Active
- 2012-05-28 TW TW107120205A patent/TW201835109A/zh unknown
- 2012-05-28 TW TW101118935A patent/TW201247709A/zh unknown
- 2012-05-28 TW TW106116645A patent/TWI714769B/zh not_active IP Right Cessation
- 2012-05-28 TW TW109123605A patent/TW202039006A/zh unknown
-
2017
- 2017-05-31 JP JP2017107268A patent/JP2017206513A/ja active Pending
- 2017-10-05 AU AU2017239551A patent/AU2017239551A1/en not_active Abandoned
-
2018
- 2018-06-15 AU AU2018204313A patent/AU2018204313A1/en not_active Abandoned
- 2018-06-26 JP JP2018120337A patent/JP2018162293A/ja active Pending
- 2018-07-11 US US16/033,044 patent/US20190142958A1/en not_active Abandoned
- 2018-07-11 US US16/033,042 patent/US20180318432A1/en not_active Abandoned
-
2019
- 2019-04-23 JP JP2019081408A patent/JP2019151643A/ja active Pending
- 2019-04-29 AU AU2019202970A patent/AU2019202970A1/en not_active Abandoned
- 2019-11-20 JP JP2019209238A patent/JP2020059717A/ja active Pending
-
2020
- 2020-10-05 US US17/063,116 patent/US20210106691A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-04-23 AU AU2021202508A patent/AU2021202508A1/en not_active Abandoned
- 2021-08-20 JP JP2021134697A patent/JP2021183636A/ja active Pending
-
2022
- 2022-02-22 US US17/677,926 patent/US20220175939A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002534119A (ja) * | 1999-01-14 | 2002-10-15 | ボルダー バイオテクノロジー, インコーポレイテッド | 自由システイン残基を有するタンパク質の生産方法 |
JP2007527891A (ja) * | 2004-03-11 | 2007-10-04 | フレゼニウス・カビ・ドイチュラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | ヒドロキシアルキルデンプンとタンパク質とのコンジュゲート |
JP2008524117A (ja) * | 2004-11-12 | 2008-07-10 | バイエル・ヘルスケア・エルエルシー | Fviiiの特定部位の変更 |
JP2009513643A (ja) * | 2005-10-25 | 2009-04-02 | メディカル、ユニバーシティー、オブ、オハイオ、アット、トレド | 少なくとも1つの保護されたチオール領域を有するアルブミンベースコロイド組成物、その製造方法および使用方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
CANTIN ANDRE M ET AL: "Polyethylene glycol conjugation at Cys232 prolongs the half-life of alpha1 proteinase inhibitor", AMERICAN JOURNAL OF RESPIRATORY CELL AND MOLECULAR BIOLOGY, vol. 27, no. 6, JPN6016008363, 1 December 2002 (2002-12-01), pages 659 - 665, XP002534785, ISSN: 0003903477, DOI: 10.1165/rcmb.4866 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114652848A (zh) * | 2022-03-18 | 2022-06-24 | 山东大学齐鲁医院 | 一种peg化人血清白蛋白纳米材料及其制备方法和在肿瘤诊疗中的应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2714093A1 (en) | 2014-04-09 |
WO2012166622A1 (en) | 2012-12-06 |
JP2018162293A (ja) | 2018-10-18 |
EP3808378A8 (en) | 2021-06-09 |
TW202039006A (zh) | 2020-11-01 |
JP2021183636A (ja) | 2021-12-02 |
AU2018204313A1 (en) | 2018-07-05 |
US20190142958A1 (en) | 2019-05-16 |
TWI714769B (zh) | 2021-01-01 |
AU2019202970A1 (en) | 2019-05-16 |
AU2017239551A1 (en) | 2017-10-26 |
CA2836478A1 (en) | 2012-12-06 |
TW201835109A (zh) | 2018-10-01 |
TW201731863A (zh) | 2017-09-16 |
EP3412314A1 (en) | 2018-12-12 |
TW201247709A (en) | 2012-12-01 |
JP2019151643A (ja) | 2019-09-12 |
CA3012117A1 (en) | 2012-12-06 |
JP2020059717A (ja) | 2020-04-16 |
AU2012262428C1 (en) | 2018-10-11 |
US20210106691A1 (en) | 2021-04-15 |
US20120329127A1 (en) | 2012-12-27 |
JP2014520094A (ja) | 2014-08-21 |
AU2021202508A1 (en) | 2021-05-20 |
US20220175939A1 (en) | 2022-06-09 |
US20180318432A1 (en) | 2018-11-08 |
EP3808378A1 (en) | 2021-04-21 |
AU2012262428B2 (en) | 2017-07-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20210106691A1 (en) | Therapeutic proteins with increased half-life and methods of preparing same | |
JP7258999B2 (ja) | オキシム連結のための求核触媒 | |
JP5908401B2 (ja) | 血液凝固タンパク質複合体 | |
AU2012262428A1 (en) | Therapeutic proteins with increased half-life and methods of preparing same | |
JP7304402B2 (ja) | オキシム連結のための求核触媒 | |
JP2018035192A (ja) | 血液凝固タンパク質複合体 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180417 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180626 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20181023 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190117 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20190702 |