JP2017105847A

JP2017105847A - Ｃ１エステラーゼ抑制因子欠乏に関連する障害の予防及び治療のためのｃ１−ｉｎｈ組成物ならびに方法

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Publication number: JP2017105847A
Application number: JP2017051361A
Authority: JP
Inventors: ギャラガーシンティア; Gallagher Cynthia; ラディースティーブン; Ruddy Steven; コーネルマニングマーク; Cornell Manning Mark
Original assignee: Shire Viropharma LLC
Current assignee: Viropharma Biologics LLC
Priority date: 2013-03-15
Filing date: 2017-03-16
Publication date: 2017-06-15
Anticipated expiration: 2034-03-17
Also published as: US20190160158A1; DE202014011208U1; HRP20190270T1; ZA201706929B; JP2021088599A; ZA201507604B; LT3290046T; EP2968434A2; US11364288B2; US20160015795A1; US11534482B2; JP6877471B2; EP2968434A4; JP2018119001A; WO2014145519A2; CY1119419T1; JP6473535B2; JP2019073546A; JP2019073544A; CA3054718A1

Abstract

【課題】Ｃ１エステラーゼ抑制因子欠乏に関連する障害の治療及び／または予防のための組成物ならびに方法を提供すること。【解決手段】障害の治療、抑制、または予防を必要とする対象におけるＣ１エステラーゼ抑制因子の欠乏に関連する障害を治療、抑制、または予防するための方法であって、該方法が、少なくとも１つのＣ１エステラーゼ抑制因子を含む組成物を投与することを含み、該Ｃ１エステラーゼ抑制因子が、約４００Ｕ／ｍｌ以上で存在する、前記方法。【選択図】なし

Description

本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下で、２０１３年３月１５日出願の米国仮特許出願第６１／７９１，３９９号の優先権を主張するものである。前述の出願は、参照により本明細書に組み込まれる。

本発明は、治療薬及びその使用方法の分野に関する。具体的には、本発明は、Ｃ１エステラーゼ抑制因子欠乏に関連する障害の治療及び／または予防のための組成物ならびに方法を提供する。

本発明が関する当技術分野の現状を説明するために、いくつかの刊行物及び特許文献が本明細書全体にわたって引用される。これらの参考文献の完全な引用は、本明細書全体にわたって見出すことができる。これらの引用のそれぞれは、参照により完全に記載されているかのように本明細書に組み込まれる。

遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）は、Ｃ１エステラーゼ抑制因子の欠乏によって引き起こされる、稀で重篤な遺伝性障害である（一般に、ｗｗｗ．ｈａｅｉ．ｏｒｇ及びｗｗｗ．ｈａｅａ．ｏｒｇを参照されたい）。米国においては少なくとも６，５００人の人々、そして欧州においては少なくとも１０，０００人の人々が、ＨＡＥを有する。ＨＡＥ患者は、反復性、予測不可能、衰弱性、かつ重篤な炎症の発作、及び粘膜下／皮下の腫脹を経験する。炎症は、典型的に、喉頭、腹部、顔、四肢、及び泌尿生殖路のものである。この遺伝性障害は、Ｃ１エステラーゼ抑制因子の合成を制御する遺伝子の欠損の結果である。したがって、これらの患者における活性Ｃ１エステラーゼ抑制因子のレベルを正常なレベルまたは、正常に近いレベルまで回復させることは、ＨＡＥを治療するための有効な手段である。依然として、Ｃ１エステラーゼ抑制因子の欠乏に関連する障害、例えばＨＡＥなどを治療及び予防する新規の改善された方法が所望される。

本発明に従って、対象におけるＣ１エステラーゼ抑制因子の欠乏に関連する障害を抑制、治療、及び／または予防するための方法が提供される。特定の実施形態では、本方法は、少なくとも１つのＣ１エステラーゼ抑制因子を含む組成物を投与することを含む。

本発明に従って、治療組成物も提供される。特定の実施形態では、本組成物は、少なくとも１つのＣ１エステラーゼ抑制因子と、任意に、送達（例えば、静脈内または皮下送達）のための少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを含む。少なくとも１つのＣ１エステラーゼ抑制因子を含む組成物を含むキットも、本明細書において提供される。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
障害の治療、抑制、または予防を必要とする対象におけるＣ１エステラーゼ抑制因子の欠乏に関連する障害を治療、抑制、または予防するための方法であって、該方法が、少なくとも１つのＣ１エステラーゼ抑制因子を含む組成物を投与することを含み、該Ｃ１エステラーゼ抑制因子が、約４００Ｕ／ｍｌ以上で存在する、前記方法。
（項目２）
該組成物が皮下投与される、項目１に記載の前記方法。
（項目３）
該組成物が静脈内投与される、項目１に記載の前記方法。
（項目４）
該障害が遺伝性血管性浮腫である、項目１に記載の前記方法。
（項目５）
該Ｃ１エステラーゼ抑制因子が、ヒトＣ１エステラーゼ抑制因子である、項目１に記載の前記方法。
（項目６）
該ヒトＣ１エステラーゼ抑制因子が、血漿から精製される、項目５に記載の前記方法。
（項目７）
該組成物がクエン酸塩を含む、項目３に記載の前記方法。
（項目８）
該組成物がリン酸塩を含む、項目２に記載の前記方法。
（項目９）
該組成物が約６．５を超えるｐＨを有する、項目１に記載の前記方法。
（項目１０）
少なくとも１つのＣ１エステラーゼを約４００Ｕ／ｍｌ以上で含む、組成物。
（項目１１）
少なくとも１つの薬学的に許容される担体をさらに含む、項目１０に記載の前記組成物。
（項目１３）
少なくとも１つの項目１０に記載の組成物を含む、キット。
（項目１４）
少なくとも１つのシリンジ及び／または再構成緩衝液をさらに含む、項目１３に記載の前記キット。
（項目１５）
該シリンジに該組成物が予め充填されている、項目１４に記載の前記キット。

ヒトＣ１エステラーゼ抑制因子のアミノ酸配列を提供する。初期スピン濃縮試料についての粘度に対するタンパク質濃度の影響のグラフを提供する。

欠乏または低減したレベルの活性Ｃ１エステラーゼ抑制因子に関連する障害（例えば、ＨＡＥ）を有する患者における、活性Ｃ１エステラーゼ抑制因子レベルの回復は、かかる障害を治療するための有効な手段である。現在、Ｃ１エステラーゼ抑制因子（例えばＣｉｎｒｙｚｅ（登録商標）（ＶｉｒｏＰｈａｒｍａ，Ｉｎｃ．；Ｅｘｔｏｎ，ＰＡ）など）は、医療従事者によって患者に静脈内投与されている。本明細書において、皮下（ＳＣ）投与に同様に有効である、Ｃ１エステラーゼ抑制因子の製剤（例えばＣｉｎｒｙｚｅ（登録商標）など）が提供される。驚くべきことに、Ｃ１エステラーゼ抑制因子の皮下投与は、Ｃ１エステラーゼ抑制因子の血中レベルを維持するのに十分である。Ｃ１エステラーゼ抑制因子のＳＣ投与は、ＨＡＥ患者における静脈内投与の制限に起因する、未だ満たされていない医学的必要性を満たす。

本発明に従って、対象におけるＣ１エステラーゼ抑制因子欠乏に関連する障害を抑制（例えば、低減または緩徐化）、治療、及び／または予防するための組成物ならびに方法が提供される。特定の実施形態では、本方法は、少なくとも１つのＣ１エステラーゼ抑制因子を、それを必要とする対象に、（例えば、皮下または静脈内）投与することを含む。特定の実施形態では、Ｃ１エステラーゼ抑制因子は、Ｃ１エステラーゼ抑制因子の初期の静脈内投与の後に、皮下投与される。

Ｃ１エステラーゼ抑制因子は、Ｃ１抑制因子（Ｃ１ＩΝΗ）としても知られる。Ｃ１エステラーゼ抑制因子は、補体Ｃ１の抑制因子であり、セリンプロテアーゼ抑制因子のスーパーファミリーに属する。ヒトＣ１エステラーゼ抑制因子は、２２アミノ酸シグナル配列を含む、５００個のアミノ酸のタンパク質である（Ｃａｒｔｅｒｅｔａｌ．（１９８８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１７３：１６３）。血漿において、Ｃ１エステラーゼ抑制因子は、およそ７６ｋＤａの重度にグリコシル化された糖タンパク質である（Ｐｅｒｋｉｎｓｅｔａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１４：７５１）。Ｃ１エステラーゼ抑制因子の活性は、既知の方法によってアッセイされ得る（例えば、Ｄｒｏｕｅｔｅｔａｌ．（１９８８）Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ．，１７４：１２１−３０を参照されたい）。特定の実施形態では、Ｃ１エステラーゼ抑制因子はヒト型である。ヒトＣ１エステラーゼ抑制因子のアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＣＡＡ３０３１４（Ｃ１エステラーゼ抑制因子のヌクレオチド配列も提供する、ＧｅｎｅＩＤ：７１０も参照されたい）及び図１において提供される。本発明の方法において使用するためのＣ１エステラーゼ抑制因子は、図１のアミノ酸配列と少なくとも６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９８、９９、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有し得る。Ｃ１エステラーゼ抑制因子は、血漿（例えば、ヒト血漿）から単離もしくは精製されるか、または組換えで産生され得る。血漿から精製される場合、Ｃ１エステラーゼ抑制因子は、ナノ濾過及び低温殺菌され得る。特定の実施形態では、血漿由来のＣ１エステラーゼ抑制因子は、Ｃｉｎｒｙｚｅ（登録商標）である。特定の実施形態では、Ｃ１エステラーゼ抑制因子は、高濃度で本発明の組成物中に存在する。実際に、非常に高レベルのＣ１エステラーゼ抑制因子を含む組成物は、驚くほど安定しており、かつ活性であると決定されている。特定の実施形態では、Ｃ１エステラーゼ抑制因子は、約２５０Ｕ／ｍｌ〜約１０００Ｕ／ｍｌ、約４００Ｕ／ｍｌ〜約６００Ｕ／ｍｌ、または約５００Ｕ／ｍｌで存在する。

特定の実施形態では、本発明の組成物は、クエン酸塩またはクエン酸を含有しない。クエン酸塩／クエン酸は注射部位反応を引き起こし得るため、クエン酸塩及びクエン酸を欠く組成物は、Ｃ１エステラーゼ抑制因子の皮下投与に特に有用である。特定の実施形態では、本組成物の緩衝液は、リン酸ナトリウム（例えば、約５ｍＭ〜約５０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１０ｍＭ〜約３０ｍＭのリン酸ナトリウム、または約２０ｍＭのリン酸ナトリウム）である。特定の実施形態（例えば、静脈内投与のための）では、本組成物の緩衝液は、カルボン酸基を含む。例えば、緩衝液は、制限なく、クエン酸、コハク酸、タータレート、マレイン酸、酢酸、及びこれらの塩であり得る。特定の実施形態では、本組成物の緩衝液は、クエン酸塩またはクエン酸ナトリウム（例えば、約５ｍＭ〜約５０ｍＭのクエン酸ナトリウム、約１０ｍＭ〜約３０ｍＭのクエン酸ナトリウム、または約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム）である。

本発明の組成物は、約６．５以上、具体的には約６．５〜約８．０、具体的には約６．５〜約７．５、そしてより具体的には約６．５〜約７．０のｐＨ範囲を有し得る。

本発明の組成物は、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ）を含んでもよい。ポリソルベート８０を含む組成物は、タンパク質凝集を低減／軽減するため、特に有用である。ポリソルベート８０はまた、シリンジ及び他の投与装置において使用されるものなどのシリコンを含有する潤滑剤／油と本組成物が接触するとき、タンパク質相互作用を制限することができる。ポリソルベート８０を含む組成物は、凍結乾燥した調製物のためにも有用である。特定の実施形態では、ポリソルベート８０は、約０．０１％〜約０．１％、具体的には約０．０２５％〜約０．０７５％、具体的には約０．０５％の濃度で存在する。

本発明の組成物は、スクロースを含んでもよい。スクロースは、「増量」剤ならびに凍結乾燥防止剤（ｌｙｏ−ｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）として添加され得る。特定の実施形態では、スクロースは、凍結乾燥される組成物に添加される。特定の実施形態では、本組成物は、約２５ｍＭ〜約１２５ｍＭのスクロース、具体的には約５０ｍＭ〜約１００ｍＭのスクロースを含む。

本発明の組成物は、少なくとも１個のアミノ酸またはその塩、具体的にはメチオニン及び／またはアルギニンを含んでもよい。アルギニンはその側鎖上に正電荷を帯び、リン酸塩を有する緩衝溶液に使用され得る。メチオニンは安定剤として作用する（例えば、酸化を制限することによって）。アミノ酸は、個別のアミノ酸として組成物中に存在するか、または短ペプチド（例えば、２〜約５個のアミノ酸、具体的にはジ−ペプチドまたはトリ−ペプチド）として存在し得る。

本明細書上文に記載の通り、本発明は、機能性Ｃ１エステラーゼ抑制因子の絶対的もしくは相対的欠乏に関連する任意の病態または疾患を治療、抑制、及びまたは予防する方法を包含する。かかる障害としては、制限なく、後天性血管性浮腫（ＡＡＥ）及び遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）が挙げられる。特定の実施形態では、該障害は、ＨＡＥ及び／またはそれに関連する発作である。本明細書上文に記載の通り、ＨＡＥは、Ｃ１エステラーゼ抑制因子の欠乏に起因する反復性の粘膜下／皮下腫脹発作として現れる重篤かつ衰弱性の疾患である（Ｚｕｒａｗ，Ｂ．Ｌ．（２００８）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３５９：１０２７−１０３６）。特定の実施形態では、遺伝性血管性浮腫は、Ｉ型またはＩＩ型である。Ｉ型及びＩＩ型の両方が、Ｃ１抑制因子を産生しない（Ｉ型ＨＡＥ）か、または機能障害性Ｃ１抑制因子を産生する（ＩＩ型ＨＡＥ）かのいずれかの、Ｃ１エステラーゼ抑制因子の合成の欠損遺伝子を有する（Ｒｏｓｅｎｅｔａｌ．（１９６５）Ｓｃｉｅｎｃｅ１４８：９５７−９５８、Ｂｉｓｓｌｅｒｅｔａｌ．（１９９７）Ｐｒｏｃ．Ａｓｓｏｃ．Ａｍ．Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ１０９：１６４−１７３、Ｚｕｒａｗｅｔａｌ．（２０００）Ｊ．ＡｌｌｅｒｇｙＣｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０５：５４１−５４６、Ｂｏｗｅｎｅｔａｌ．（２００１）Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９８：１５７−１６３）。

本発明の方法は、少なくとも１つのＣ１エステラーゼ抑制因子の投与を包含する。少なくとも１つのＣ１エステラーゼ抑制因子と、任意に、少なくとも１つの薬学的に許容される担体（例えば、皮下または静脈内投与に好適なもの）とを含む組成物は、本発明に包含される。かかる組成物は、治療上有効な量で、Ｃ１エステラーゼ抑制因子欠乏に関連する障害の治療のために、それを必要とする患者に投与され得る。本発明は、少なくとも１つの本発明の組成物、例えば、少なくとも１つのＣ１エステラーゼ抑制因子と、任意に、少なくとも１つの薬学的に許容される担体（例えば、静脈内または皮下投与に好適なもの）とを含む組成物を含むキットも包含する。本キットは、再構成緩衝液（複数可）、非経口（例えば、皮下）注射のためのシリンジ（例えば、使い捨て）、及び説明材料のうちの少なくとも１つをさらに含み得る。特定の実施形態では、本キットは、Ｃ１エステラーゼ抑制因子及び少なくとも１つの薬学的に許容される担体を含む、少なくとも１つの予め充填されているシリンジを含む。例えば、シリンジは、少なくとも１つのＣ１エステラーゼ抑制因子と、投与（例えば、静脈内または皮下投与）のための少なくとも１つの薬学的に許容される担体とで充填され得る。あるいは、単一のシリンジが、凍結乾燥したＣ１エステラーゼ抑制因子で充填されてよい。特定の実施形態では、予め充填されているシリンジは、（例えば、タンパク質−シリコン相互作用またはタンパク質凝集を防止する量で）ポリソルベート８０を構成成分として含有する薬学的組成物を有する。

本発明の薬剤及び組成物は、任意の好適な経路、例えば、注射（例えば、局所（直接）的または全身投与のため）によって投与され得る。特定の実施形態では、本組成物は、皮下または静脈内投与される。一般に、本組成物の薬学的に許容される担体は、希釈剤、保存剤、可溶化剤、乳化剤、アジュバント、及び／または担体の群から選択される。本組成物は、様々な緩衝液含量（例えば、トリスＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）、ｐＨ、及びイオン強度の希釈剤、ならびに、洗剤及び可溶化剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０、ポリソルベート８０）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、二亜硫酸ナトリウム）、保存剤（例えば、Ｔｈｉｍｅｒｓｏｌ、ベンジルアルコール）、及び増量物質（例えば、ラクトース、マンニトール）などの添加剤を含み得る。本発明の薬学的組成物は、例えば、液体形態で調製されるか、または（例えば、後の再構成のために凍結乾燥された）乾燥粉末形態であってもよい。

特定の実施形態では、本組成物は、凍結乾燥形態で製剤化される。本組成物が凍結乾燥形態で提供される場合、本組成物は、適切な緩衝液（例えば、無菌水、無菌生理食塩水、または適切な薬学的に許容される担体を含む無菌溶液（例えば、本明細書上文に記載の組成物を再構成するための））によって、使用前に（例えば、使用の１時間、数時間、または１日以上のうちに）再構成される。再構成緩衝液（複数可）は、本発明のキット内に提供されるか、または別々に取得もしくは提供されてよい。

本明細書において使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、前項に例示される通り、薬学的調製物の所望の投与経路に適切であり得る任意及びすべての溶剤、分散培地などを含む。薬学的に活性な物質のためのかかる培地の使用は、当技術分野において既知である。任意の従来の培地または薬剤が、投与される分子と不適合である場合を除き、薬学的調製物中のその使用が企図される。

好適な薬学的調製物の選択は、選択される投与の方法に依存する。この事例では、薬学的調製物は、それが投与される組織と適合性がある培地中に分散された分子を含む。非経口的または皮下に投与可能な組成物を調製するための方法は、当技術分野において周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ（Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）を参照されたい）。

本明細書上文に記載の通り、本発明の薬剤は、例えば血流への静脈内注射、及び／または皮下注射によって、非経口的に投与される。非経口、静脈内、及び皮下注射のための薬学的調製物は、当技術分野において既知である。分子を投与するための方法として非経口注射が選択される場合、十分な量の分子がそれらの標的細胞に到達し、生物学的効果を発揮することを確かにするための措置が講じられるべきである。

薬学的担体を有する密接混加物中の活性成分として本発明の化合物を含有する薬学的組成物は、従来の薬学的化合技術に従って調製され得る。担体は、投与、例えば、非経口的または皮下投与に所望される調製物の形態に依存して、広範な形態を取り得る。非経口については、担体は通常、無菌水を含むが、例えば、可溶性を補助するため、または保存目的のための、他の成分が含まれてもよい。注射用懸濁液も調製され得、その場合、適切な液体担体、懸濁化剤などが用いられ得る。

本発明の薬学的調製物は、投与の容易さ及び薬用量の均一性のために、薬用量単位形態で製剤化され得る。薬用量単位形態は、本明細書において使用される場合、治療を受けている患者に適切な薬学的調製物の物理的に別々の単位を指す。各薬用量は、選択された薬学的担体と関連して所望の効果を生み出すように算定された量の活性成分を含有すべきである。薬用量単位は、患者の体重に基づいて、比例して増加または減少してよい。特定の病理学的状態の緩和に適切な濃度は、薬用量濃度曲線算定によって決定され得る。適切な薬用量単位は、治療の効力を査定することによっても決定され得る。

本発明の分子を含む薬学的調製物は、病理学的症状が低減または緩和されるまで、適切な間隔で、例えば、毎日、１日おき、３日毎、毎７日中５日、または週に少なくとも１回、２回、もしくは３回以上投与され得、その後、薬用量は維持レベルまで低減され得る。特定の場合における適切な間隔は、通常は患者の病態に依存するであろう。

特定の実施形態では、Ｃ１エステラーゼ抑制因子は、約１００単位〜約１０，０００単位、約５００単位〜約５，０００単位、約１，０００単位〜約３，５００単位、または約１，５００単位〜約２，５００単位の範囲内で本組成物中に存在するか、または投与される。特定の実施形態では、少なくとも約２，０００単位が使用される。特定の実施形態では、高い初期用量のＣ１エステラーゼ抑制因子（上文に列記される通り（静脈内投与され得る））、続いてより低い維持用量が使用される。例えば、高い初期用量は、後続の用量の少なくとも１．５、２、３、４、または５倍であり得る。特定の実施形態では、Ｃ１エステラーゼ抑制因子は、約１００単位〜約５，０００単位、約２５０単位〜約２，０００単位、約２５０単位〜約１，０００単位の範囲内、または約５００単位で維持用組成物中に存在するか、または維持のために投与される。高い初期用量のＣ１エステラーゼ抑制因子は、目下特許請求される発明の方法において任意である（例えば、予防的方法では任意であり得る）。

特定の実施形態では、Ｃ１エステラーゼ抑制因子は、対象の血液中、少なくとも約０．３、またはより具体的には、０．４Ｕ／ｍｌ以上、最大約１Ｕ／ｍｌ（１単位／ｍｌは、１ｍｌの正常なヒト血漿中に存在するＣ１抑制因子の平均量である）までＣ１エステラーゼ抑制因子レベルを上昇させるような頻度及び薬用量で投与される。例えば、Ｃ１エステラーゼ抑制因子レベルは、時間（例えば、薬物が投与されている間の時間）の少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％以上、またはその時間の全体にわたり、０．４Ｕ／ｍｌに、またはそれを超えるレベルに保たれ得る。例えば、２０００Ｕの初期用量、続いて毎日２５０Ｕまたは１日おきに５００ＵのＣ１エステラーゼ抑制因子の投与は、血液中０．４Ｕ／ｍｌを少し下回る維持をもたらす。さらに、２０００Ｕの初期用量、続いて３日毎に１０００ＵのＣ１エステラーゼ抑制因子の投与は、血液中約０．４Ｕ／ｍｌの維持をもたらす。とりわけ、患者による使用の容易さのために、より低い頻度の投与が好ましい場合がある。２０００Ｕの初期用量、続いて週末の投与からの休息日を伴って毎日（すなわち、毎７日中５日）５００ＵのＣ１エステラーゼ抑制因子の投与も、血液中約０．４Ｕ／ｍｌ以上の維持をもたらす。とりわけ、維持用量のみの投与は、上昇し、かつ生理学的に関連があるが、初期の高用量を受けているものと比較すると遅延した、Ｃ１エステラーゼ抑制因子の血中レベルをもたらす。

定義
「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」という単数形は、文脈が別途明確に指示しない限り、複数形の指示対象を含む。

本明細書において使用される場合、用語「約」は、±５％、±２％、または±１％を指し得る。

本明細書において使用される場合、「宿主」、「対象」、及び「患者」という用語は、ヒトを含む、任意の動物を指す。

本明細書において使用される場合、用語「予防する」は、対象が病態を発症する可能性の減少をもたらす、病態（例えば、ＨＡＥまたはＨＡＥ発作）を発症する危険性がある対象の予防的処置に言及する。

用語「治療する」は、本明細書において使用される場合、患者の病態の（例えば、１つ以上の症状における）改善、病態の進行の遅延などを含む、障害を患う患者に対する利益を与えるいかなる種類の治療をも指す。特定の実施形態では、ＨＡＥの治療は、少なくともＨＡＥ発作の重症度及び／または数の低減をもたらす。

語句「有効な量」は、患者の病態の改善をもたらす治療薬のその量を指す。化合物または薬学的組成物の「治療上有効な量」は、特定の障害もしくは疾患の症状を予防、抑制、治療、または軽減するために有効な量を指す。

「薬学的に許容される」とは、動物における、より具体的にはヒトにおける使用のための、連邦政府もしくは州政府の規制機関による許可、または米国薬局方もしくは他の一般に認識される薬局方に列記されていることを示す。

「担体」は、例えば、希釈剤、アジュバント、保存剤（例えば、Ｔｈｉｍｅｒｓｏｌ、ベンジルアルコール）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、二亜硫酸ナトリウム）、可溶化剤（例えば、ＴＷＥＥＮ８０、ポリソルベート８０）、乳化剤、緩衝剤（例えば、トリスＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）、水、水溶液、油、増量物質（例えば、ラクトース、マンニトール）、凍結／凍結乾燥防止剤（ｃｒｙｏ−／ｌｙｏ−ｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）、張度変更剤、賦形剤、補助剤、または本発明の活性剤がともに投与されるビヒクルを指す。好適な薬学的担体は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ」（ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａ．Ｒ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，ＷｉｌｌｉａｍｓａｎｄＷｉｌｋｉｎｓ）、Ｌｉｂｅｒｍａｎ，ｅｔａｌ．，Ｅｄｓ．，ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓ，ＭａｒｃｅｌＤｅｃｋｅｒ，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、及びＫｉｂｂｅ，ｅｔａｌ．，Ｅｄｓ．，ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＥｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，ＡｍｅｒｉｃａｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎに記載されている。

用語「単離される」は、それが自然に関連するであろう環境から十分に分離された（例えば、「実質的に純粋な」形態で存在するように）タンパク質、核酸、化合物、または細胞に言及し得る。「単離される」は、他の化合物または材料との人工もしくは合成混合物、または、基礎的な活性に干渉せず、かつ、例えば、不完全な精製に起因して存在し得る不純物の存在の除外を必ずしも意味しない。

用語「実質的に純粋な」は、少なくとも５０〜６０重量％の所与の材料（例えば、核酸、オリゴヌクレオチド、タンパク質など）を含む調製物に言及する。ある特定の実施形態では、該調製物は、少なくとも７５重量％、具体的には９０〜９５重量％以上の所与の化合物を含む。純度は、所与の化合物に適切な方法（例えば、クロマトグラフィ法、アガロースまたはポリアクリルアミドゲル電気泳動、ＨＰＬＣ分析など）によって測定される。

以下の実施例は、本発明の様々な実施形態を例示するために提供される。実施例は例示的であり、本発明をいかようにも制限することを意図するものではない。

スピン濃縮研究
タンパク質をスピン濃縮器に充填し、５〜１０分間１０，５００ｒｐｍで回転させた。試料が回転を停止したとき、スピン濃縮器内の最終容積を記録し、それぞれのおおまかなタンパク質濃度を算定した。追加のタンパク質をスピン濃縮器に加え、所望のタンパク質濃度に達するまで回転させ、この時点でＵＶ測定を行った。それぞれの標的タンパク質濃度において、ＵＶ及び粘度の測定を実施した。タンパク質の粘度が試料のさらなる濃縮を防止するまで、上記の手順を続けた。

粘度測定
ゲルを充填するピペット先端の所定の距離まで試料が引き込まれるのにかかった時間の量を測定することによって、粘度を判定した。試料粘度を算定するために、既知の粘度を有する一連の標準を使用して、標準曲線をまず調製した。スクロース（またはＢｒｉｘ）溶液が、かかる曲線を調製するために好適だが、規定の温度で既知の粘度を有するいかなる材料も適切であろう。

測定を行うために、ピペットプランジャーを抑圧し、ピペット先端を試料バイアルに挿入し、プランジャーを解放し、流体がピペット先端の所定の距離を移動する時間をストップウォッチで測定した。これらの実験に使用した距離は、３０μＬの水であった。重要な点では、１つのピペット先端は単一の測定にしか信頼性がないため、複数の先端を使用して試料の反復測定を行う。また、ピペット先端に引き込まれる容積は、測定の間の試料の均一な引張を確かにするために先端上にマークされた容積よりも大きいべきである。ピペット先端上の３０μＬの容積のマークについては、４２μＬを引きこむようにマイクロピペットを設定した。

結果
本実施例は、単一製剤（ｍｏｎｏｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）としての、より高濃度のＣ１ＩΝΗの液体製剤を開発するための能力を判定した。初期研究は、スピン濃縮法を使用してＣ１ＩΝΗの原液の濃度に着目した。溶液を、はじめにｐＨについて調節したが、他の賦形剤は添加しなかった。３つのｐＨ値を調査した（ｐＨ５．９、６．９、及び７．９）。スピン濃縮すると、溶液のすべてが、試験したｐＨ値すべてについて、最大約５００Ｕ／ｍｌ（およそ１００ｍｇ／ｍｌ）の濃度まで、澄んだままであった（表１）。これらの研究では可溶性限度に達しなかったが、濃度が３００Ｕ／ｍｌを超えると粘度に測定可能な上昇があった（図２）。すべてのｐＨ値において、Ｃ１ＩＮＨ濃度が４００Ｕ／ｍｌを超えると、粘度が顕著に上昇し始める。

３つの標的ｐＨ値のそれぞれにおいて異なる緩衝液（２０ｍＭのリン酸塩、２０ｍＭのクエン酸塩、及び２０ｍＭのトリス）を検査して、より大きな実現可能性研究を実施した。４００Ｕ／ｍｌ及び５００Ｕ／ｍｌ両方の試料を調製し、４０℃で１週間後、そして２５℃で２週間後に安定性について評価した。初期粘度レベルは純水の値（約１ｍＰａ−ｓ）を優に超えたが、十分に注射用生成物としての使用のために通常設定される限度内であった（表２）。４００Ｕ／ｍｌの試料の粘度値は、５００Ｕ／ｍｌにおけるものを、通常７〜１０ｍＰａ−ｓの差で下回った。４０℃で１週間の保管すると、すべての試料の粘度が上昇した。ｐＨ５．９において、おそらく熱的に誘導された凝集に起因して、そのすべてがゲル化した。残りの製剤については、粘度はある程度上昇した。いくつかの場合では、これらの値は３０ｍＰａ−ｓを超えた。粘度の上昇は、４０℃よりも２５℃の保管時に少なかった。ｐＨ６．９における試料については、あったとしても少しの変化しかなく、ｐＨ６．９が長期の保管安定性のためにより好ましい場合があることを示した。

とりわけ、ｐＨ６．９において、クエン酸塩製剤はリン酸塩のものよりも低い粘度値を有し、一方で、ｐＨ７．９において、リン酸緩衝液はトリス緩衝液よりも低い粘度をもたらした。より高い粘度は、ある特定の時間枠内で指定の容積の薬物を送達するために、より大きな力が必要とされることを意味する。

ＲＰＨＰＬＣによる純度は、ｐＨ６．９及びそれを超えるｐＨの製剤について、はじめは８６〜８７％近くであった（表３）。初期レベルはｐＨ５．９においてより低く、単に試料を調製する過程においていくらかの分解が既に生じたことを示唆した。４０℃で１週間の保管すると、ｐＨ５．９の試料がゲル化し、ＲＰＨＰＬＣによる分析が不可能になった。他の試料のすべてについて、パーセント純度は本質的に変化せず、これらの条件下での保管では、起こるとしても少しの化学分解しか起こらないことを示す。

２５℃で２週間保管された試料について、ｔ１において見られたものに匹敵する少しの損失があった。まとめて、ＲＰＨＰＬＣデータは、化学分解に起因する少しの損失があることを示す。より高いｐＨは分解の速度を減少させるようであり、緩衝液組成物に対するいくらかの感受性があり得る。

Ｃ１ＩＮＨの化学的安定性は保管時に変化しないようであるが、ＳＥＣによって示される通り観測される来る物理的不安定性がある（表４）。Ｃ１ＩＮＨ混合物中に存在する他のタンパク質があり、ｔ０においておよそ約６７％の総合的な「純度」の結果が出る。４０℃で１週間の保管すると（ｔ１）、試料の総合的なモノマー含量は、ｐＨ６．９及びそれを超えるｐＨを有する試料については５４〜５６％に減少した。２つの異なるｐＨ条件、異なる緩衝液、及び２つのタンパク質濃度の間の差はほとんどなかった。２５℃で２週間保管したとき（ｔ２）、ｐＨ５．９の試料はゲル化しなかったが、それらはより高い保管温度でゲル化した。しかしながら、特にヒスチジン緩衝液では、かなり高い分解があった。ｐＨ６．９または７．９におけるこれらについては、半分の時間に対するより高い温度における１０〜１２％の損失と比較して、ＳＥＣによって測定された損失は約２％程度であった。

データは、分解の速度が４℃において２５℃におけるものよりも約１３倍〜３５倍緩徐になることを示す。より高い推定値はＡｒｒｈｅｎｉｕｓプロットを使用することから来る。より低い推定値は、温度が５℃低下するときの平均損失の決定、及び４℃の保管温度に外挿することから来る。現在のデータを指標として使用すると、これは、冷蔵温度において２年後の約３〜１０％損失の損失を予測する。言い換えると、これらのデータに基づいて、液体製剤はかなり安定しているようである。さらに、分解速度は、４００Ｕ／ｍＬの試料と５００Ｕ／ｍＬの試料との間でだいたい匹敵し、より高濃度の製剤を開発することが同様に実行可能であることを示唆する。

分解速度はｐＨ５．９ではるかに高く、４０℃におけるゲル化、及び２５℃におけるより大きな損失の原因となる。したがって、さらなるｐＨ／緩衝液スクリーニングは、ｐＨ６．５〜８．０の範囲に着目する。粘度に、そしておそらく安定性に対する明確な緩衝効果がある。

研究は、最大５００Ｕ／ｍｌの濃度におけるＣ１ＩΝΗの調製には可溶性の限度がないことを実証した。濃度が４００〜５００Ｕ／ｍｌの範囲（これは緩衝液に依存し、クエン酸塩は、トリスよりも良好なリン酸塩よりも良好である）に達すると粘度の上昇があったが、それらは管理可能であり、標準的なシリンジシステムのための注射による容易な送達が依然として可能である。一般に、Ｃ１ＩＮＨは、ＲＰＨＰＬＣによって決定されるように、化学分解に対して比較的安定している。

本発明の好ましい実施形態のいくつかを上文で説明し、具体的に例示したが、本発明がかかる実施形態に制限されることを意図するものではない。以下の特許請求の範囲に記載される、本発明の範囲及び趣旨から逸脱することなく、それらに対する様々な変更が行われ得る。

Claims

明細書に記載の発明。