JP2017029174A - 身体状態の評価方法、情報の提示方法、および身体状態を改善又は予防する物質のスクリーニング方法 - Google Patents

Abstract

【課題】種々の身体状態を的確に評価可能な方法、当該方法を利用した情報の提示方法、および身体状態を改善又は予防する物質のスクリーニング方法を提供すること。【解決手段】被験者の身体状態を評価する方法は、前記身体状態との相関性基準が作成済みである、皮膚表面の皮膚常在微生物の存在割合又は前記存在割合に基づくパラメータについて、被験者の皮膚表面から採取した皮膚微生物叢の値を決定し、前記相関性基準と対比する工程を有する。【選択図】なし

Description

本発明は、身体状態の評価方法、有用成分の提示方法、および身体状態を改善又は予防する物質のスクリーニング方法に関する。

従来、ヒトの肌状態はハリ、キメ、シミ、しわ、水分量、油分量、水分蒸散量（バリア機能）などの指標で評価されている。評価法としては、アンケート調査や、特許文献１等に開示される皮膚表面の画像解析（ハリ、キメ、シミ、しわ等）、機器による計測（水分量、油分量、水分蒸散量等）が用いられている。

しかし、アンケート調査では、被験者の主観に大きく影響されるため、客観的な評価が得られ難いという問題がある。これに対して、画像解析では、客観的な指標を得ることができるが、洗顔の有無、ファンデーションやスキンクリームの塗布等によって肌質が変化するため、的確な肌状態の評価を行うことが困難であるという問題があった。

また、肌状態に影響する要因は、必ずしも上記した指標だけに限られないことが分かってきており、上記した指標に依存する従来技術では評価困難な肌状態が存在する。そのような肌状態を評価可能な技術へのニーズが高まっている。このニーズは、肌状態に限られず、身体状態一般について同様である。

特開２０１３−１８８３２６号公報

本発明は、上記従来の実情に鑑みてなされたものであり、客観的な評価が可能であって、洗顔等による肌質の変動に左右され難い肌状態の評価方法を提供することを解決すべき１つの課題としている。

また、本発明は、種々の身体状態を的確に評価可能な方法、当該方法を利用した情報の提示方法、および身体状態を改善又は予防する物質のスクリーニング方法を提供することも、解決すべき課題とする。

ヒトは約６０兆個の細胞で構成されているのに対し、ヒトの体表、体内に生息する細菌は１００兆個以上といわれている。これらの常在細菌はヒトの健康状態や病気と深く関わっていることが明らかとされつつある。すなわち、人体はヒト細胞と微生物叢（細菌叢および真菌叢）の共生体であるといえる。本発明者らは、多くのヒトの顔の微生物叢を測定した結果、新たな身体状態の指標として、ヒトの皮膚表面の微生物叢を利用できるのではないかという考えに到達した。そして、さらに鋭意研究を行った結果、皮膚表面に存在する特定の常在菌の存在割合等が、身体状態の良い指標となることを見出し、本発明を完成するに至った。

（１） 被験者の身体状態を評価する方法であって、前記身体状態との相関性基準が作成済みである、皮膚表面の皮膚常在微生物の存在割合又は前記存在割合に基づくパラメータについて、被験者の皮膚表面から採取した皮膚微生物叢の値を決定し、前記相関性基準と対比する工程を有する方法。

（２） 被験者に情報を提示する方法であって、
（１）記載の方法により、被験者の身体状態を評価する工程と、
前記身体状態が目標状態にないと評価された場合、前記身体状態が目標状態にあるときに前記相関性基準に基づいて前記存在割合又は前記パラメータが示す数値範囲の方に、前記存在割合又は前記パラメータの値を誘導可能な成分としてデータベースに登録されている情報を提示する工程と、を有する方法。

（３） 前記成分を摂取した後の被験者の身体状態を（１）記載の方法により再度評価する工程と、
前記再度評価した身体状態の改善の程度に基づき、前記情報をアップデートする工程と、をさらに有する（２）記載の方法。

（４） 身体状態を改善又は予防する物質をスクリーニングする方法であって、
前記身体状態との相関性基準が作成済みである、皮膚表面の皮膚常在微生物の存在割合又は前記存在割合に基づくパラメータの値に関する、候補物質による変化に基づいて、前記候補物質を選抜する工程を有する方法。

（５） 前記存在割合は、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ門に属する細菌、Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ門に属する細菌およびＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門に属する細菌からなる群より選ばれる少なくとも１種の細菌の存在割合である（１）から（４）いずれか記載の方法。

（６） 前記パラメータは、前記存在割合の比または差、および皮膚常在微生物の多様性指数からなる群より選ばれる少なくとも１種である（１）から（５）いずれか記載の方法。

（７） 前記身体状態は、肌年齢、脂性肌、ニキビ肌、肌のしみ、くすみ、たるみ、しわ、はりの状態、毛穴の状態の少なくとも１種である（１）から（６）いずれか記載の方法。

（８） 前記身体状態は、薄毛および脱毛の少なくとも１種である（１）から（６）いずれか記載の方法。

（９） 前記身体状態は、歯周病および歯槽膿漏の少なくとも１種である（１）から（６）いずれか記載の方法。

（１０） 前記身体状態は、閉経である（１）から（６）いずれか記載の方法。

（１１） 肝機能、高尿酸、膝の痛み、骨粗鬆症、自律神経失調症、肌の黄ばみ、および糖尿病の少なくとも１種である（１）から（６）いずれか記載の方法。

（１２） 前記相関性基準は、前記身体状態と相関することが既知の事象の少なくとも１つによる影響の排除後における、前記身体状態と前記存在割合又は前記パラメータとの相関性基準である（１）から（１１）いずれか記載の方法。

（１３） 前記相関性基準は、母集団の年齢、性別、居住地域、国籍および人種からなる群より選ばれる少なくとも１種で分類した準母集団に関して作成されたものである（１）から（１２）いずれか記載の方法。

皮膚表面の細菌叢の解析は、皮膚表面に存在するＤＮＡを解析することにより行うことが好ましい。ＤＮＡによって細菌叢を調べる方法は、皮膚表面から採取した細菌を寒天培地で培養して細菌叢を推定する方法と比べて、細菌叢をより正確に調べることができる。なぜならば、寒天で培養可能な微生物の割合は１％ 程度と言われており、ほとんどの微生物種は培養困難だからである。これに対して、ＤＮＡを解析する方法では、皮膚表面から採取した細菌叢をありのまま正確に分析することができる。

前記細菌叢の解析は、
皮膚表面に接触させた粘着部材を該皮膚表面から剥がして該皮膚表面に存在する細菌を該粘着部材に付着させる剥離工程と、
該細菌が付着した該粘着部材を液体と接触させて該細菌に含まれるＤＮＡを抽出する抽出工程と、
抽出された該ＤＮＡをゲノム解析するゲノム解析工程と、を備える方法により行うことが好ましい。

この細菌叢の解析方法では、皮膚表面に接触させた粘着部材を皮膚表面から剥がして皮膚表面に存在する細菌を粘着部材に付着させたまま回収する（剥離工程）。これにより皮膚表面に存在する細菌のうち、粘着部材に接触した皮膚表面の細菌がそのままの分布で粘着部材側に付着し採取される。このため、綿棒で皮膚表面を掻きとったりする方法のように、掻きとられる力や掻きとられる範囲の違いによって、細菌叢のデータにバラツキが生じるというおそれがない。また、皮膚表面の細菌叢を忠実に写し取ることができる。そして、さらに細菌が付着した粘着部材を液体と接触させて細菌に含まれるＤＮＡが抽出される（抽出工程）。このため、粘着部材の表面に付着した物質を拡大鏡などを用いて分別して試料に供する方法と比較して、細菌が付着した粘着部材から極めて迅速に細菌叢を測定可能なＤＮＡ溶液の状態にすることができる。このため、試料採取のための経過時間中に細菌叢が変化するのを最小限とすることができる。そして、抽出されたＤＮＡを次世代シーケンサー（ＮＧＳ）等により解析すれば、皮膚表面に存在する細菌叢を簡便、均一に測定することができる。
ただし、皮膚表面からの微生物の採取手段は、粘着部材に限られず、綿棒等であってもよい。また、ＤＮＡの抽出手段および解析手段も特に限定されない。

本発明者らの細菌叢の分析結果によれば、顔面皮膚表面に存在する特定の常在菌として、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ門に属する細菌の相対量、またＰｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ門に属する細菌とＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門に属する細菌の存在量比を調べれば、ニキビや広がった毛穴などの様々な顔面皮膚状態や、歯周病や頭部の薄毛・脱毛などの顔に限局されない様々な身体症状の生じやすさを評価することができる。

また、特定の細菌種の相対量がその他の身体症状の惹起されやすさと相関することも見いだされた。例えば、高尿酸値（Ｒｏｔｈｉａ属、Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｅｒｙｔｈｒｏｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ科、等）、骨粗鬆症（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ 属、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ 属）、肝機能の低下（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ属、等）、肌の黄ばみ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｒｏｔｈｉａ ｄｅｎｔｏｃａｒｉｏｓａ 菌、等）、糖尿病（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ目に属する細菌）などの発生が、それぞれ括弧内の細菌種の相対量と相関を示した。

顔の皮膚のたるみやしわ、ハリのなさなどの有無から算出される老化肌指数は、Ｇａｍｍａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ 綱に属する細菌種やＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｒａｎｕｌｏｓｕｍ菌などからなる「老化肌細菌」と呼びうる一群の細菌の存在量と相関を示した。

本発明の一実施形態で用いる細菌叢測定方法の工程図である。 本発明の一実施形態で用いる粘着テープの斜視図である。 １０７４名の日本人女性額から採取した皮膚細菌叢を検体間の非類似度（ｗｅｉｇｈｔｅｄ ＵｎｉＦｒａｃ 距離）に基づいてクラスタリング解析した結果を示す図である。 １０７４名の細菌叢に含まれる細菌種の内訳を門レベルで可視化したグラフである。 １０７４名の細菌叢に含まれる細菌種の内訳を科レベルで可視化したグラフである（上位３種の細菌種を表示）。 １０７４名の細菌叢中でＡｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ門に含まれる細菌の内訳を種のレベルで表示したグラフである。 １０７４名の細菌叢をｗｅｉｇｈｔｅｄ ＵｎｉＦｒａｃ 距離に基づいて主座標解析した結果を示す図である。 主座標解析で見いだされた座標軸の一つはＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ 菌の相対量と呼応することを示す図である。 主座標解析で見いだされたもう一つの座標軸はＰｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ門と Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門の相対量の差に呼応することを示す図である。 Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ 菌の相対量が実年齢および肌の脂性度と相間を示すことを表したグラフである。 Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ 菌の量が若年層においてニキビ症状の重さと相関を示すことを表すグラフである。 Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ 菌の量が毛穴の広がり具合と相関を示すことを表すグラフである。 Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ門と Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門のそれぞれに属する細菌種の相対量の差がニキビ症状の重さと相関することを表すグラフである。 Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ門と Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門のそれぞれに属する細菌種の相対量の差が頭部の薄毛・脱毛の発生と相関を示すことを表すグラフである。 Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ門と Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門のそれぞれに属する細菌種の相対量の差が歯槽膿漏・歯周病の発生と相関を示すことを表すグラフである。 １０７４名の細菌叢に存在する各種細菌種について、その存在相対量と実年齢が様々な身体症状と相関しているかを重回帰分析によって解析した結果を示し、細菌量が統計的に有意な相関を示す身体症状を一覧にして示している。 細菌叢の多様性の指数（Ｓｉｍｐｓｏｎｓ指数）が実年齢と相間を示すことを表したグラフである。 Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ 菌の量と細菌叢の多様性によって細菌叢が分類できることを示す図である。 Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ 菌の量が少ないにも関わらず多様性が乏しい細菌叢は、シミやくすみの問題がある肌に付随して現れることを示す図である。 ５０歳代では老化肌細菌の量が老化肌指数（しわ、たるみ、ハリのなさなどを総合的に示す指数）と相関することを示す図である。 Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ 菌の量が閉経と相関を示すことを表すグラフである。

以下、本発明の実施形態を説明するが、これらに本発明が限定されるものではない。

本発明の一実施形態は、被験者の身体状態を評価する方法であって、
前記身体状態との相関性基準が作成済みである、皮膚表面の皮膚常在微生物の存在割合又は前記存在割合に基づくパラメータについて、被験者の皮膚表面から採取した皮膚微生物叢の値を決定し、前記相関性基準と対比する工程を有する方法である。
これにより、種々の身体状態を的確に評価することができる。また、従来、一括りにされていた、ある身体状態を、皮膚常在微生物の存在割合又はパラメータの値によって細分化でき、これにより、被験者の身体状態の改善をより高確度に行うことが期待される。

本発明の別の実施形態は、被験者に情報を提示する方法であって、
上記の評価方法により、被験者の身体状態を評価する工程と、
前記身体状態が目標状態にないと評価された場合、前記身体状態が目標状態にあるときに前記相関性基準に基づいて前記存在割合又は前記パラメータが示す数値範囲の方に、前記存在割合又は前記パラメータの値を誘導可能な成分としてデータベースに登録されている情報を提示する工程と、を有する方法である。
これにより、身体状態の改善等に関する情報を、被験者にパーソナライズして提示することができる。なお、ここでいう情報は、成分または成分含有製剤の名前、成分・製剤の用法・用量、身体状態の期待される改善の仕方や程度、副作用等を指す。

一実施形態において、成分を摂取した後の被験者の身体状態を上記の評価方法により再度評価する工程と、
前記再度評価した身体状態の改善の程度に基づき、前記情報をアップデートする工程と、をさらに有することが好ましい。
これにより、データベース内の情報が改良され、身体状態の改善の確度等をより高めることが期待される。

再度評価のタイミングは、特に限定されず、例えば、成分使用後に身体状態の改善が期待される（データベース内の情報に含まれ得る）時間が経過した時であってよい。

本発明の別の実施形態は、身体状態を改善又は予防する物質をスクリーニングする方法であって、
前記身体状態との相関性基準が作成済みである、皮膚表面の皮膚常在微生物の存在割合又は前記存在割合に基づくパラメータの値に関する、候補物質による変化に基づいて、前記候補物質を選抜する工程を有する方法である。
これにより、身体状態を改善または予防する物質を高確率でスクリーニングすることが期待される。

なお、本発明におけるスクリーニングとは、身体状態を改善又は予防する物質の存在確率が、スクリーニング後の候補物質群においてスクリーニング前の候補物質群に比べて高まっていれば足り、スクリーニング後の候補物質が必ず身体状態を改善または予防できることを要しない。したがって、スクリーニングされた候補物質が、身体状態を改善又は予防する効果を有することを確認する工程をさらに行うことが好ましい。

皮膚常在微生物は、細菌または真菌であってよく、中でも細菌が好ましい。その存在割合は、門、綱、目、科、属および種のいずれに関してもよい。例えば、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ門に属する細菌、Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ門に属する細菌およびＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門に属する細菌からなる群より選ばれる少なくとも１種の細菌ｎ存在割合であってよく、中でもＰ． ａｃｎｅｓ 菌の存在割合が挙げられる。

パラメータは、皮膚常在微生物の存在割合に基づく限りにおいて特に限定されず、複数の皮膚常在微生物の存在割合の差、和、積、比またはそれらの組合せであってよく、中でも比、差またはその組み合わせであってよい。例えば、Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ門に属する細菌種とＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門に属する細菌種の相対量の差が挙げられる。あるいは、パラメータは、皮膚常在微生物の多様性指数であってもよい。

身体状態は、皮膚表面の皮膚常在微生物の存在割合又は存在割合に基づくパラメータとの相関性を有するものであれば特に限定されず、肌、毛髪、歯、尿、骨、内臓、血液、尿、神経等のあらゆる箇所に関する状態であり得る。肌の状態としては、肌年齢、脂性肌、ニキビ肌、肌のしみ、くすみ、たるみ、しわ、はりの状態、毛穴の状態、肌の黄ばみ等が挙げられる。毛髪の状態としては、薄毛、脱毛等が挙げられる。歯の状態としては、歯周病および歯槽膿漏等が挙げられる。骨、内臓、血液、尿、神経の状態としては、肝機能、高尿酸、膝の痛み、骨粗鬆症、自律神経失調症、糖尿病等が挙げられる。その他、女性ホルモン、美容性に影響を与え得る閉経も身体状態に包含される。

相関性基準は、皮膚微生物叢から求めた上記存在割合またはパラメータの値に基づいて、評価すべき身体状態の良好度または重篤度を定性的または定量的に特定可能な基準である。

身体状態の多くは、皮膚微生物叢だけでなく、他の事象（例えば実年齢）との相関性も有する。このため、相関性基準は、身体状態と相関することが既知の事象の少なくとも１つによる影響の排除後におけるものであることが好ましい。これにより、被験者に関する上記他の事象の有無や程度に影響を抑え、皮膚微生物叢の存在割合またはパラメータの値に基づき、より正確な身体状態の評価が可能である。
また、被験者に情報を提示する方法においては、被験者に関する上記他の事象の有無や程度も考慮して、より適切な情報を提示することが可能である。このため、上記存在割合又はパラメータに加え、被験者に関する上記他の事象の有無や程度のインプットが好ましいことになる。
また、身体状態を改善又は予防する物質のスクリーニング方法においては、使用者の上記他の事象にかかわらず身体状態を改善または予防可能な物質を取得しやすくなる。

また、相関性基準は、母集団の年齢、性別、居住地域、国籍および人種からなる群より選ばれる少なくとも１種で分類した準母集団に関して作成されたものであってよい。これにより、被験者の年齢、性別、居住地域、国籍および人種等までも考慮した、身体状態の正確な評価が可能である。
また、被験者に情報を提示する方法においては、被験者の年齢、性別、居住地域、国籍および人種も考慮して、より適切な情報を提示することが可能である。このため、上記存在割合又はパラメータに加え、被験者に関する年齢、性別、居住地域、国籍および人種からなる群より選ばれる少なくとも１種のインプットが好ましいことになる。
また、身体状態を改善又は予防する物質のスクリーニング方法においては、使用者の年齢、性別、居住地域、国籍および人種に適した、身体状態を改善または予防可能な物質を取得しやすくなる。

皮膚微生物叢を採取する箇所は、特に限定されず、顔面、頭皮、脇、臍等であってよく、中でも顔面、特に額が挙げられる。なお、相関性基準が作成された母集団サンプルの採取箇所と、被験者サンプルの採取箇所とは一致することが好ましい。

＜実施例１＞
沖縄を除くすべての都道府県から任意に選ばれた１８歳〜６９歳の日本女性１，１００人に対し、年齢、肌質等のアンケート調査を行った。また、アンケート調査を行った女性に対し、アンケートと同時に、以下に示す方法により、顔の皮膚の細菌叢を解析した。

（アンケート）
アンケートは、インターネットを通じて、サンプリング直前に回答する方法で行った。

（細菌叢の解析）
細菌叢の解析は図１に示すフローチャートに従って行った。
・接触工程Ｓ１及び剥離工程Ｓ２
図２に示す粘着テープ１を用意する。この粘着テープ１はベースとなる薄片状のテープ基材２に粘着剤からなる塗布層３が設けられた構造とされている。このため、通常の絆創膏やドレッシングテープと同様にして、ヒトの皮膚に貼付けることによって、簡単に接触工程Ｓ１を行うことができる。粘着テープ１は図示しない剥離紙に貼り付けられており、密封可能な乾燥剤入りのアルミ袋に封入された状態でラテックス手袋と共に被験者に送付された。被験者は、起床直後ラテックス手袋を装着し、アルミ袋を開封して粘着テープ１が貼られた剥離紙を取り出し、粘着テープ１を剥がして被験者の額に貼り付ける。そして、５分間接着させた状態を保ったのち、粘着テープ１を剥がし、剥離紙の上に張り戻し、これを乾燥剤と共にアルミ袋に入れて密封した。その後、ＤＮＡ解析試験を行うまでの間冷凍保存した。

・抽出工程Ｓ３
ＤＮＡの抽出は、森田らの方法（ＭｉｃｒｏｂｅｓＥｎｖｉｒｏｎ． Ｖｏｌ２２，Ｎｏ．３，２１４−２２２， ２００７）に従って粘着テープ１から直接行い、ＤＮＡ溶液を調製した。

・ゲノム解析工程Ｓ４
上記のようにして得られたＤＮＡ溶液を用い、溶液内に含まれる１６ＳリボゾームＲＮＡ遺伝子をＰＣＲ法を用いて増幅した後、シークエンサー（ＮＧＳ）（ｉｌｌｕｍｉｎａ社製、商品名：Ｍｉｓｅｑ）を用いてＤＮＡ解析を行った。

以上のようにして得られた結果をパイプライン解析ツールＱｉｉｍｅを用いて解析した。そして、細菌をＰｈｙｌｕｍ（門）で分類し、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ門、Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ 門、Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ 門、及びＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ 門の細菌の存在割合と年齢との関係について求めた。

−結 果−
まず得られた１０７４名の顔面細菌叢の相互関係を、検体間の非類似度（Ｗｅｉｇｈｔｅｄ ＵｎｉＦｒａｃ距離）を指標に評価した。Ｗｅｉｇｈｔｅｄ ＵｎｉＦｒａｃ距離に基づいたクラスタリング解析の結果を図３に示す。この検体は大きく４つのグループに分けられることがわかった。このうち最大のグループには約半数の検体が属し、グループ内部での差異は比較的小さいことが見いだされた。

細菌叢の構成種の内訳を調べた。門レベルでの構成内訳を可視化したのが図４である。顔面細菌叢はＡｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ， Ｐｒｏｔｅｐｂａｃｔｅｒｉａ， Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ の３つの門に属する細菌でほとんどが占められていた。最大構成種である Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ 門の量がクラスタリング解析で得られたグルーピングとおおむね呼応して変化することが見いだされた。

より下位の分類群である科で同様の解析を行ったのが図５である。存在量の多い３つの科はＡｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ門のＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ科、Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ門のＸａｎｔｈｏｍｏｎａｄｅｃｅａｅ科、Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門のＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｃｅａｅ科であった。この３科で細菌叢の平均７２％を占めていた。尚、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｃｅａｅ科には著名な皮膚常在菌、表皮ブドウ球菌が含まれる。

最大の構成科であるＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ科についてさらに詳細に調べた。その結果該当科のほとんどは Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉａ ａｃｎｅｓという細菌種（以下 Ｐ． ａｃｎｅｓ と表記。いわゆるアクネ菌）であることが確かめられた（図６）。

各個人の細菌叢の特性をどのようなパラメータで表すことができるか知るために、各検体間のＷｅｉｇｈｔｅｄ ＵｎｉＦｒａｃ距離情報を主座標分析の手法で解析した。その結果（図７）、各検体を２次元平面上での分布としてよく表すことができることがわかった。クラスタリング解析で得られたグループはこの分布図上でもひとまとまりに存在しており、この分布の妥当性を示しているといえる。

主座標分析で得られた２次元分布図の各座標軸が、細菌叢のどのような特性を示すものであるか検討を行った。その結果、第１軸については細菌叢中のＰ． ａｃｎｅｓ菌の総体存在量とよい相関を示すことがわかった（図８）。また２つ目の軸については、Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ門に属する細菌種とＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門に属する細菌種の相対量の差という指数（以下、Ｐ−Ｆ 量と記す）とよい相関がみられた（図９）。以上の結果から各細菌叢の特性を表す指標として、Ｐ． ａｃｎｅｓ 菌の量とＰ−Ｆ 量の２つがまず挙げられることがわかった。

（実施例３）
最大の構成菌種であるＰ． ａｃｎｅｓ 菌の量を規定する宿主因子の探索を行った。その結果、Ｐ． ａｃｎｅｓ 菌の相対量は実年齢と相関を示し、年齢が進むほどＰ． ａｃｎｅｓ 菌量が減少することがわかった（図１０左。箱ひげ図。赤は各年齢群の平均値を示す）。また、Ｐ． ａｃｎｅｓ 菌の量は肌の脂性度とも相関を示した。１０７４ 名を年齢と肌質（脂性、普通、乾燥肌の各タイプ）の双方に基づいて分け、分類群ごとのＰ． ａｃｎｅｓ 菌量の平均値を算出してプロットした（図１０右）。その結果Ｐ． ａｃｎｅｓ 菌の量は年齢とは独立に肌の脂性度とも相関を示すことが見いだされた。

（Ｐ． ａｃｎｅｓ 菌量とニキビとの関係）
ニキビの発症、症状の強さがＰ． ａｃｎｅｓ 菌の相対量と相関を示すことがわかった。前項で述べたようにＰ． ａｃｎｅｓ量は年齢と相関を示し、ニキビもまた若年層でよく発症する疾患なので、年齢による効果を除去するため検体を若年（２９歳以下）、中年（３０歳以上４９歳以下）、老年（５０歳以上）の３つのグループに分けて解析を行った。ニキビ症状は自己評価によるアンケート結果に基づいて点数化した（ニキビがとても気になる（３点）、気になる（２点）、やや気になる（１点）、気にならない（０点））。その結果、若年層では Ｐ． ａｃｎｅｓ菌の多い（相対量７０％ 以上）グループと少ないグループでニキビ症状の強さに有意な差が認められた（図１１）。Ｐ． ａｃｎｅｓ量は若年層でニキビの発症、および症状の強化と相関を示すことがわかった。

（Ｐ． ａｃｎｅｓ 菌量と毛穴の広がりとの関係）
同様の解析からＰ． ａｃｎｅｓ量と毛穴の広がりについても相関があることがわかった（図１２）。毛穴の広がりは自己評価によるアンケート結果から点数化した（とても気になる（３点）、気になる（２点）、やや気になる（１点）、気にならない（０点））。若年、中年、老年の全ての層でＰ． ａｃｎｅｓ量が多いと毛穴の広がりのスコアも悪いことがわかった。

（実施例４）
（Ｐ−Ｆ 量とニキビの関係）
次に、Ｐ−Ｆ 量（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ門に属する細菌種とＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門に属する細菌種の相対量の差）もニキビ症状と相関を示すことがわかった。検体を Ｐ−Ｆ 量に応じて３群に分けたところ、値が小さいグループ（Ｆｉｒｍｕｃｕｔｅｓ門が Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ 門に比して多く存在する検体）ではニキビ症状が強いことが見いだされた（図１３）。尚、Ｐ−Ｆ 量は年齢と相関した変化を示さないので、年齢効果を除く処理は行っていない。

（Ｐ−Ｆ 量と薄毛・脱毛との関係）
Ｐ−Ｆ 量はまた、頭部の薄毛・脱毛症状とも相関を示すことがわかった。自己評価に夜アンケート結果より、薄毛・脱毛の治療中（２点）、薄毛・脱毛の症状有（１点）、薄毛・脱毛の症状無（０点）として薄毛・脱毛症状を点数化した。Ｐ−Ｆ 量が小さい群では、薄毛の症状を訴える人が有意に少なかった（図１４）。このことは顔面の皮膚細菌叢の様相が顔面以外の身体症状と関係を持つことを示すものである。

（Ｐ−Ｆ 量と歯周病・歯槽膿漏との関係）
Ｐ−Ｆ 量はまた、歯周病・歯槽膿漏の症状とも相関を示した。アンケート結果に基づき、歯周病・歯槽膿漏の治療中（２点）、歯周病・歯槽膿漏の症状有り（１点）、歯周病・歯槽膿漏の症状なし（０点）として点数化した。図１５に示すように、Ｐ−Ｆ 量が小さい群では歯周病・歯槽膿漏の症状が有意に少なかった。

門より下位の分類群である“種”の情報と身体症状の相関関係についても解析を行った。細菌叢中に同定された各細菌種の相対量と数値化・点数化したアンケート結果の相関関係を評価した。この際、身体症状の中には実年齢と相関することが明らかなものがあるため、細菌量と実年齢という２つの変数と身体症状の関係を重回帰分析で調べることにより、年齢による効果を別にしてみられる細菌量−身体症状の相関関係を検出した。多重検定となるため偽陽性検出率をＢｅｎｊａｍｉｎｉ−Ｈｏｃｈｂｅｒｇ法を用いて １０％ となるように調節した。その結果、ｐ ＝ ６ｘ１０^−４以下という統計的に非常に有意差の高い相関関係のみが抽出された。得られた結果を図１６にまとめる。ここには、様々な皮膚ならびに身体の疾患・症状ごとに相関を示した細菌種がまとめられている。例えば、そばかすとＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｋｒｏｐｐｅｎｓｔｅｄｔｉ 菌の量、Ｂａｃｉｌｌｕｓ 属やＲｏｔｈｉａ ｄｅｎｔｏｃａｒｉｏｓａ 菌の量と肌の黄ばみ、Ｒｏｔｈｉａ 属やＢｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ 属などに属する細菌量と高尿酸値、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ 属やＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属に属する細菌量と骨粗鬆症、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の菌量と薄毛・脱毛症、などが相関を示すことが認められた。細菌叢データから有益な情報を抽出することで、様々な身体疾患・症状との関係を見いだすことができることがわかった。

（細菌叢の多様性と身体症状の相関）
各種細菌の量の他に、細菌叢の多様性という指標も身体症状と相関をしめすことがわかった。各検体の内部での細菌叢の多様性はＳｉｍｐｓｏｎ指数という指標で表し得ることが知られている。まずＳｉｍｐｓｏｎ指数と実年齢との相関を調べたところ、年齢が上昇すると共にＳｉｍｐｓｏｎ指数も上昇する、すなわち細菌叢の多様性が上昇することが見いだされた（図１７）。ついで、この多様性指数とＰ． ａｃｎｅｓ菌の２つのパラメータを用いて、各検体の細菌叢の構造は３つに分類されうることがわかった（図１８）。すなわち、Ｐ． ａｃｎｅｓ 菌を多くもつ（そして多様性が低い）グループ（群Ｉ）、Ｐ． ａｃｎｅｓ菌の量は少ないが多様性が大きくないグループ（群ＩＩ）、最後にＰ． ａｃｎｅｓ菌量が少なく多様性の大きなグループ（群ＩＩＩ）、である。各グループに特異的に見られる身体症状がないかアンケート結果との相関関係を調べたところ、皮膚の加齢によるシミ、そばかす、皮膚のくすみの３つのアンケート結果のスコア合計値とよい相関を示すことがわかった（図１９）。群ＩＩには“シミ・くすみ”症状を訴える（“シミ・くすみ”指数が高い）人が多く、群Ｉとの違いは統計的に有意であった。この違いは、群を構成する人の年齢分布の違いによるものではなかった（年齢の差は統計的に有意なものでなかった）。

（肌老化と皮膚細菌叢の関係）
アンケートの項目には肌の老化とみなされる項目（例、肌の弾力のなさ、ほほのたるみ、など）も含まれていた。そこで、これらの項目と特に相関を示す細菌種を検出することを試みた。「まぶた、目尻のたるみ・ゆるみ」「（加齢やホルモンのアンバランスによる）しみ」「肌のハリのなさ」「肌の弾力のなさ」「ほほのたるみ」「ほほのこけ・やせ」「口元の小じわ」「ホウレイ線（鼻唇溝）」「口角のたるみ・口角が下がっている」「おでこのしわ」「眉間のしわ」「首のしわ」「肌の黄ばみ」「フェースライン（輪郭）のたるみ・ゆるみ」という１４項目のアンケート結果のそれぞれについて、症状が気になると答えた場合に１点を加算する方法で“老化肌”指数を算出したところ、この指数が２つの細菌種（Ｇａｍｍａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ 綱に属する細菌種とＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｒａｎｕｌｏｓｕｍ 菌）の存在量とよい相関を示すことがわかった。図２０にその結果を示す。縦軸は上述の老化肌指数を正規化して示したものである。各検体は年齢と上述の細菌種の存在量でグループ化されている。細菌量による分類では、Ｇａｍｍａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ 綱の相対存在量とＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｒａｎｕｌｏｓｕｍ 菌の相対存在量を１０倍したものとの和（“老化肌”細菌量と呼称する）を用い、この値が全検体中で上位２５％に含まれる人、下位２５％に含まれる人、それ以外の３グループに分類している。５０歳代の人では、老化肌細菌量の低いグループは、それ以外のグループに比べ有意に老化肌指数が小さいことが見いだされた。４０歳代においても同様に、老化肌細菌量が多いと老化肌指数が大きくなる傾向が見いだされた（ｐ ＝ ０．０７）。老化肌細菌の多寡と、肌の老化の進み食い合いに違いに相関があることが示唆された。

この結果は、細菌叢データに含まれる情報から有益な情報を抽出することで、肌の老化のように客観的評価の容易でない事象についても評価を行ったり、予防のための方策を考えたりすることが可能となることを示している。

（Ｐ． ａｃｎｅｓ 菌量と閉経の関係）
Ｐ． ａｃｎｅｓ 菌量は生理の有無と相関を示すことがわかった。前項で述べたようにＰ． ａｃｎｅｓ 量は年齢と相関を示し、閉経もまた年齢と関係する現象である。年齢と閉経による効果を弁別するために、４５歳以上６０歳未満の人を年齢によって３つの群にわけ、各群を閉経前および閉経後の２つの群にさらに分けた。各群に見られる Ｐ． ａｃｎｅｓ 量の分布を箱ひげ図で図示したのが図２１である。その結果、５０歳以上５４歳以下の群では閉経後の場合により少ない Ｐ． ａｃｎｅｓ 量が観察され、その差は統計的に有意なものであった。４５歳以上４９歳以下の群でも同様の傾向が見られたが、この年齢層に該当する閉経後の検体数が少なく、統計的有意差を検出するには至らなかった。より厳密な解析を行うため、４０歳以上６０歳未満の人を対象とし、年齢と生理の有無の２つを説明変数、Ｐ． ａｃｎｅｓ 量を目的変数とした重回帰分析を行った。その結果、Ｐ． ａｃｎｅｓ 量は年齢と閉経のいずれとも相関を示す（年齢が上がるほど、また閉経した方が Ｐ． ａｃｎｅｓ 量が減少する）ことが確認され、その相関は統計的に有意なレベルであることがわかった（年齢に対して ｐ ＝ ０．０２７、閉経に対して ｐ ＝ ０．０３７）。以上より、Ｐ． ａｃｎｅｓ量は閉経と相関を示すことがわかった。

この発明は上記発明の実施の態様及び実施例の説明に何ら限定されるものではない。特許請求の範囲を逸脱せず、当業者が容易に想到できる範囲で種々の変形態様もこの発明に含まれる。

１ 粘着テープ
２ テープ基材
３ 塗布層

Claims (3)

1. 被験者の身体状態を評価する方法であって、
   前記身体状態との相関性基準が作成済みである、皮膚表面の皮膚常在微生物の存在割合又は前記存在割合に基づくパラメータについて、被験者の皮膚表面から採取した皮膚微生物叢の値を決定し、前記相関性基準と対比する工程を有する方法。
2. 被験者に情報を提示する方法であって、
   請求項１記載の方法により、被験者の身体状態を評価する工程と、
   前記身体状態が目標状態にないと評価された場合、前記身体状態が目標状態にあるときに前記相関性基準に基づいて前記存在割合又は前記パラメータが示す数値範囲の方に、前記存在割合又は前記パラメータの値を誘導可能な成分としてデータベースに登録されている情報を提示する工程と、を有する方法。
3. 身体状態を改善又は予防する物質をスクリーニングする方法であって、
   前記身体状態との相関性基準が作成済みである、皮膚表面の皮膚常在微生物の存在割合又は前記存在割合に基づくパラメータの値に関する、候補物質による変化に基づいて、前記候補物質を選抜する工程を有する方法。