JP2017023158A - 胚性幹細胞培養のための自動化された方法および装置 - Google Patents
胚性幹細胞培養のための自動化された方法および装置 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017023158A JP2017023158A JP2016217785A JP2016217785A JP2017023158A JP 2017023158 A JP2017023158 A JP 2017023158A JP 2016217785 A JP2016217785 A JP 2016217785A JP 2016217785 A JP2016217785 A JP 2016217785A JP 2017023158 A JP2017023158 A JP 2017023158A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- cell
- culture
- item
- medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
- C12N5/0606—Pluripotent embryonic cells, e.g. embryonic stem cells [ES]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/50—Means for positioning or orientating the apparatus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M33/00—Means for introduction, transport, positioning, extraction, harvesting, peeling or sampling of biological material in or from the apparatus
- C12M33/04—Means for introduction, transport, positioning, extraction, harvesting, peeling or sampling of biological material in or from the apparatus by injection or suction, e.g. using pipettes, syringes, needles
- C12M33/06—Means for introduction, transport, positioning, extraction, harvesting, peeling or sampling of biological material in or from the apparatus by injection or suction, e.g. using pipettes, syringes, needles for multiple inoculation or multiple collection of samples
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M33/00—Means for introduction, transport, positioning, extraction, harvesting, peeling or sampling of biological material in or from the apparatus
- C12M33/04—Means for introduction, transport, positioning, extraction, harvesting, peeling or sampling of biological material in or from the apparatus by injection or suction, e.g. using pipettes, syringes, needles
- C12M33/07—Dosage or metering devices therefore
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/48—Automatic or computerized control
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/70—Enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/999—Small molecules not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Computer Hardware Design (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Virology (AREA)
- Transplantation (AREA)
Abstract
Description
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される:
(項目1)
規定の培地条件下における多能性幹細胞の自動化増殖のための方法であって:
(a)規定の増殖培地において多能性細胞の第一の集団を得る工程と;
(b)自動化分離システムによって該多能性細胞を分離する工程と;
(c)新鮮な規定の増殖培地中に該分離された細胞を懸濁して多能性細胞の増殖した集団を得る工程と、
を包含する、方法。
(項目2)
前記多能性細胞がES細胞または人工多能性細胞(iPS)である項目1に記載の方法。
(項目3)
前記細胞がヒトES細胞である、項目1に記載の方法。
(項目4)
前記培養された増殖した多能性ES細胞のうち少なくとも97%で分化が全く生じないか、または本質的に生じない、項目1に記載の方法。
(項目5)
前記増殖培地がTeSR培地を含む、項目1に記載の方法。
(項目6)
多能性細胞の前記第一の集団が細胞培養プレート上に含まれる、項目1に記載の方法。
(項目7)
前記細胞培養プレートがゲル・マトリックスを含む、項目6に記載の方法。
(項目8)
多能性細胞の前記第一の集団が細胞分離の時点で約50%コンフルエントと約99%コンフルエントとの間である、項目6に記載の方法。
(項目9)
多能性細胞の前記第一の集団が細胞分離の時点で約60%、70%、80%または90%コンフルエントである、項目8に記載の方法。
(項目10)
新鮮増殖培地中の前記分離された細胞を懸濁する工程が、1つ以上の新規な細胞培養プレート(単数または複数)中に該細胞を播種する工程を包含する、項目6に記載の方法。
(項目11)
前記新規な細胞培養プレート(単数または複数)の表面積がES細胞の前記第一の集団を含んでいる該プレートの該表面積よりも約5倍と約35倍との間大きい、項目10に記載の方法。
(項目12)
前記新規な細胞培養プレート(単数または複数)の前記表面積がES細胞の前記第一の集団を含んでいる該プレートの該表面積よりも約10と約35倍との間大きい、項目11に記載の方法。
(項目13)
前記自動化分離プロトコールが、多能性細胞の前記第一の集団とタンパク質分解酵素とを接触させる工程を包含する、項目1に記載の方法。
(項目14)
前記タンパク質分解酵素がトリプシンである、項目13に記載の方法。
(項目15)
前記タンパク質分解酵素が、組み換えトリプシン、トリプシン様プロテイナーゼ、またはTRYPLEである、項目13に記載の方法。
(項目16)
前記タンパク質分解酵素が、組み換え酵素である、項目13に記載の方法。
(項目17)
前記新鮮増殖培地がタンパク質分解酵素のインヒビターを含む、項目1に記載の方法。
(項目18)
前記新鮮増殖培地が細胞分離のために用いられる前記タンパク質分解酵素のインヒビターを含む、項目13に記載の方法。
(項目19)
前記タンパク質分解酵素インヒビターがトリプシンインヒビターである、項目18に記載の方法。
(項目20)
前記タンパク質分解酵素インヒビターがダイズトリプシンインヒビターである、項目19に記載の方法。
(項目21)
前記新鮮増殖培地が約0.5mg/mlのダイズトリプシンインヒビターを含む、項目20に記載の方法。
(項目22)
前記分離システムがリキッド・ハンドラー・ロボットによって自動化される、項目1に記載の方法。
(項目23)
前記自動化分離システムが:
(i)前記第一の多能性細胞集団から前記培地を除去する工程と;
(ii)該多能性細胞とタンパク質分解酵素とを接触させる工程と;
(iii)該細胞とタンパク質分解酵素とをインキュベートして細胞集合を分離する工程と、
を包含する、項目13に記載の方法。
(項目24)
タンパク質分解酵素インヒビターとRho関連キナーゼ(ROCK)インヒビターとを含む規定の培地が工程(iii)の後に溶液に添加される、項目23に記載の方法。
(項目25)
前記ES細胞が、約2〜約10分の間前記タンパク質分解酵素とともにインキュベートされる、項目23に記載の方法。
(項目26)
前記ES細胞が、約25℃と約40℃との間で前記タンパク質分解酵素とともにインキュベートされる、項目23に記載の方法。
(項目27)
前記ES細胞が、約37℃で前記タンパク質分解酵素とともにインキュベートされる、項目26に記載の方法。
(項目28)
前記自動化分離システムがさらに:
(iv)前記インキュベートされた細胞を機械的攪拌に供して、細胞集合をさらに分離する工程、
を包含する、項目23に記載の方法。
(項目29)
前記機械的攪拌が、前記ES細胞を剪断力または吸引に供する工程を包含する、項目28に記載の方法。
(項目30)
前記タンパク質分解酵素インヒビターを含む前記増殖培地を、該インヒビターを実質的に含まない増殖培地で置き換える工程をさらに包含する、項目17に記載の方法。
(項目31)
多能性細胞の前記集団が非多能性細胞を含まないか、または実質的に含まない、項目1に記載の方法。
(項目32)
多能性細胞の前記集団がヒトES細胞であり、ヒトES細胞の集団が非ヒト細胞を含まないか、または実質的に含まない、項目31に記載の方法。
(項目33)
胚性幹(ES)細胞の自動化連続増殖のための方法としてさらに規定され:
(a)増殖培地においてES細胞の第一の集団を得る工程と;
(b)自動化分離システムによって該ES細胞を分離する工程と;
(c)新鮮な増殖培地中に該分離された細胞を懸濁してES細胞の増殖した集団を得る工程と、
(d)細胞増殖を支持する条件下で該増殖したES細胞集団をインキュベートする工程と、
(e)工程b〜dを1回以上反復してES細胞の連続増殖した集団を得る工程と、
を包含する、項目1に記載の方法。
(項目34)
(d)細胞増殖を支持する条件下で前記増殖したES細胞集団をインキュベートする工程が、培地灌流培養で該細胞をインキュベートする工程を包含する、項目33に記載の方法。
(項目35)
前記増殖培地がRho関連キナーゼ(ROCK)インヒビターの有効量を含む、項目1に記載の方法。
(項目36)
前記Rho関連キナーゼ(ROCK)インヒビターがHA−100である、項目35に記載の方法。
(項目37)
前記HA−100が約10μMの濃度で存在する、項目36に記載の方法。
(項目38)
前記Rho関連キナーゼ(ROCK)インヒビターがH−1135である、項目35に記載の方法。
(項目39)
前記H−1135が約1〜3μMの濃度で存在する、項目38に記載の方法。
(項目40)
多能性細胞の自動化した維持および増殖のための装置であって:
a)インキュベーター;
b)リキッド・ハンドラー・ユニット;
c)1つ以上のリザーバであって、i)多能性細胞の生きている集団と、ii)規定の培地であって、多能性細胞が未分化状態で培養および維持され得る培地である、規定の培地と、iii)プロテアーゼ、プロテアーゼインヒビターおよびRho関連キナーゼ(ROCK)インヒビターのうちの1つ以上とを含むリザーバ;ならびに
d)該リキッド・ハンドラー・ユニットと連絡したコントローラであって、該多能性細胞の自動化された増殖および維持を達成するように該リキッド・ハンドラー・ユニットに仕向けるように構成されている、コントローラ;
を備える、装置。
(項目41)
前記コントローラが操作プログラムを含むコンピューター読み取り可能な媒体を備える、項目40に記載の装置。
(項目42)
前記コントローラが:前記リキッド・ハンドラー・ユニット、1つ以上の前記リザーバ、および前記インキュベーターのうちの少なくとも1つをi)多能性細胞集団から培地を除去するように;ii)多能性細胞とタンパク質分解酵素とを接触させるように;およびiii)多能性細胞とタンパク質分解酵素とをインキュベートさせて細胞集合を分離するように仕向ける、項目40に記載の装置。
(項目43)
前記装置がさらに機械的攪拌装置および吸引装置を備え、かつ前記コントローラがさらに:前記リキッド・ハンドラー・ユニット、1つ以上の前記リザーバ、および前記インキュベーターのうちの少なくとも1つを、該多能性細胞が機械的攪拌または吸引に供されるように仕向けて、細胞集合をさらに分離する、項目40に記載の装置。
(項目44)
前記コントローラがさらに:前記リキッド・ハンドラー・ユニット、1つ以上の前記リザーバ、および前記インキュベーターのうちの少なくとも1つを、インキュベートされた多能性細胞がプロテアーゼインヒビターと接触するように仕向ける、項目40に記載の装置。
(項目45)
前記コントローラがさらに:前記リキッド・ハンドラー・ユニット、1つ以上の前記リザーバ、および前記インキュベーターのうちの少なくとも1つを、インキュベートされた多能性細胞がRho関連キナーゼ(ROCK)インヒビターと接触するように仕向ける、項目44に記載の装置。
(項目46)
前記リキッド・ハンドラー・ユニットが少なくとも第一のリザーバおよび第二のリザーバを備え、該第一のリザーバがTeSR培地を含み、かつ該第二のリザーバがTeSR培地、Rho関連キナーゼ(ROCK)インヒビター、およびプロテアーゼインヒビターを含む、項目40に記載の装置。
(項目47)
前記Rho関連キナーゼ(ROCK)インヒビターがH−1152またはH−100である、項目40に記載の装置。
(項目48)
前記多能性細胞がES細胞または人工多能性細胞(iPS)である、項目40に記載の装置。
(項目49)
前記リキッド・ハンドラーが、グリッパー・ツールおよびリキッド・ハンドリング・ツールを備える、項目40に記載の装置。
(項目50)
前記多能性細胞がヒトES細胞である、項目40に記載の装置。
(項目51)
前記リキッド・ハンドラー・ユニットと前記インキュベーターとの間の流体連絡を容易にするように構成されたロボット様デバイスをさらに備える、項目40に記載の装置。
(項目52)
前記リキッド・ハンドラー・ユニットと連絡した第二のまたはそれ以上のリザーバをさらに備える、項目40に記載の装置。
(項目53)
前記第二のリザーバが細胞培養プレート、細胞増殖培地、またはタンパク質分解酵素溶液を備える、項目52に記載の装置。
(項目54)
前記リキッド・ハンドラーが少なくとも第一のリザーバおよび第二のリザーバと連絡しており、該第一のリザーバがTeSR培地を含み、かつ該第二のリザーバがTeSR培地を含み、該培地がさらに、Rho関連キナーゼ(ROCK)インヒビター、およびプロテアーゼインヒビターを含む、項目40に記載の装置。
(項目55)
前記コントローラがコンピューター中に含まれる、項目40に記載の装置。
(項目56)
前記インキュベーターが前記多能性細胞の一部を含み、前記装置が該増殖された多能性細胞のうち少なくとも97%で該細胞のさらなる分化を伴わないかまたは本質的に伴わずに、前記多能性細胞の増殖をもたらすように構成されている、項目40に記載の装置。
(項目57)
前記インキュベーターが前記多能性細胞の一部を含み、かつ前記多能性細胞がヒトES細胞である、項目40に記載の装置。
ES細胞培養物のための種々の培地および培養条件が当該分野で公知である。特定の局面では、細胞は、線維芽細胞などのフィーダー細胞とともにまたは線維芽細胞馴化培地中で増殖され得る。しかし、ある場合には、ES細胞がフィーダー細胞の非存在下で増殖されることが好ましい場合がある。さらにより好ましい局面では、細胞はTeSR(例えば、BD Biosciencesから入手可能なMTESR(商標)1)などの規定の培地中で増殖され得る(Ludwigら、2006a、米国特許出願公開第2006/0084168号)。このような培地は、ES細胞の無血清培地について用いられ得る。例えば、ある場合には増殖培地は、表1に規定される培地であってもよい。しかし、特定の場合には無血清システムの高いコストのせいで、無血清培養物に用いられる増殖因子は、コストを減じるために、Ludwigら(2006b)に記載されるようにゼブラフィッシュからクローニングされたFGFなど別の供給源から得る場合がある。さらに、特定の局面では、培地には必須の増殖因子を供給するためにウシまたはヒトの血清を補充する(Ludwigら、2006b)。従って、特定の場合には、ES増殖培地は、表1に示される成分を含んでもよく、この培地は本明細書に例示されるように、示された「増殖因子およびタンパク質」の代わりにウシ血清を補充される。
本発明のなおさらなる局面では、細胞が解離されるとき(例えば、細胞集団の分割の間)ES細胞のアポトーシスを軽減する分子など、追加の培地成分がES細胞増殖培地に含まれてもよい。例えば、本発明での使用のための培地は、1つ以上のRho関連キナーゼ(ROCK)インヒビター、例えばY−27632またはその誘導体を含んでもよい。さらに、ある局面では、本発明の培地はHA−100;またはその誘導体を含んでもよい。
ある局面では、本発明は、バイオリアクター技術を利用し得る。バイオリアクター中の本発明による細胞増殖によって、最終用途のためのさらなる分化が可能な完全に生物学的に活性な細胞の大規模産生が可能になる。バイオリアクターは、懸濁および固着の両方に依存した動物細胞培養からの生物学的産物の産生のために広範に用いられている。攪拌されたタンクバイオリアクターにおけるマイクロキャリア細胞培養によって、極めて高い容積に対する培養表面積比が得られ、かつウイルスワクチンの産生のために用いられている(Griffiths,1986)。さらに、攪拌されたタンクバイオリアクターは産業的に拡大可能であることが証明されているが、このような技術は、固着とは独立した培養で細胞が増殖され得るときにのみ使用され得る。Corning−Costarnによって増殖されるマルチプレートCELLCUBE(商標)細胞培養システムはまた、極めて高い、容積に対する培養面積比をもたらす。培養プレートの両側で増殖する細胞は緻密な立方の形状で一緒に密閉された。攪拌タンクバイオリアクターと異なり、CELLCUBE(商標)培養ユニットは使い捨て可能である。これは臨床産物の初期の産生では、使い捨て可能なシステムに関連する設備投資、品質管理および品質保証コストの軽減の理由で極めて望ましい。
伝統的に、固着に依拠した細胞培養は、本明細書に記載の小型のガラスまたはプラスチックの容器の底で増殖される。実験室規模に適切である、古典的かつ伝統的な技術によって得られる限定された表面対容積比が、大規模での細胞の産生および細胞産物における障壁を生じている。小さい培養容積で増殖される細胞の大きいアクセス可能な表面をもたらすシステムを提供する試みでは、多数の技術が提唱されている:ローラー・ボトル・システム、スタック・プレート・プロパゲータ、スパイラル・フィルム・ボトル・システム、ホロー・ファイバー・システム、充填層、プレート交換システム(plate exchanger system)、および膜チューブ・リール(membrane tubing reel)。これらのシステムは自然には均一ではなく、時には複数のプロセスに基づくので、それらは以下の欠点を被る−−大規模化能力の制限、細胞サンプルを採取することが困難、重要なプロセスパラメーターを測定および制御する能力の限界、ならびに培養全体にわたって均一な環境条件を維持することの困難性。
伝統的な固着に依拠する培養プロセスの欠点を克服する試みでは、van Wezel(1967)はマイクロキャリア培養系の概念を発展させた。このシステムでは、細胞はゆっくりした攪拌によって増殖培地中で懸濁される小さい固体粒子の表面で増殖される。細胞はマイクロキャリアに結合して、そのマイクリキャリア表面上で徐々にコンフルエンシーまで増殖する。実際には、この大規模培養システムは、単一のディスクプロセスから単層および懸濁培養物の両方が一緒にされている単位プロセスまで固着依存性培養をアップグレードする。従って、細胞が増殖するために必須の表面を組み合わせて、均質な懸濁培養物の利点によって産生を増大する。
哺乳動物細胞を培養するために特に有用であることが示されている1方法は、マイクロカプセル化である。哺乳動物細胞は、半透過性のヒドロゲル膜の内側に保持される。多孔性の膜は細胞の周囲に形成され、このカプセルを囲んでいるバルク培地との栄養物、ガスおよび代謝産物の交換を可能にする。穏やかで、急速でかつ非毒性であり、得られた膜が培養の期間全体にわたって増殖中の細胞塊を維持するために十分多孔性であってかつ強力であるいくつかの方法が開発されている。これらの方法は全て、カルシウム含有溶液と接触した液滴によってゲル化される可溶性のアルギン酸塩に基づく。Lim(参照によって本明細書に援用される、1982、米国特許第4,352,883号)は、液滴を形成し、かつ約1%の塩化カルシウム溶液中に自由にさせる、小さい開口部を通じて強制されるアルギン酸ナトリウムの約1%の溶液中で濃縮した細胞を記載している。次いで、この液滴は表面のアルギン酸塩に対してイオン的に結合するポリアミノ酸の層にキャスティングされる。結局、このアルギン酸塩はカルシウムイオンを除去するためにキレート剤で液滴を処理することによって再液化される。他の方法はカルシウム溶液中で細胞を用いてアルギン酸溶液中に滴下させ、これによって中空のアルギン酸塩の球を作製する。同様のアプローチは、アルギン酸塩中に滴下されたキトサン溶液中に細胞を含み、これによっても中空の球を作製する。
灌流される固着システムは、本発明の好ましい形態である。灌流とは、(生理学的な栄養溶液の)細胞のある集団全体にわたるかまたはそれを覆う一定速度御での連続的な流れをいう。これは回収(withdrawn)培地(例えば、ケモスタット)で細胞を洗浄する連続流培養とは対照的に培養ユニット内の細胞の保持を意味する。灌流のアイデアは今世紀の初めから公知であって、拡大された顕微鏡観察のために生きている組織の小片を保持するために適用されている。この技術は、インビボで細胞環境を模倣するために始まり、ここでは細胞は血液、リンパ液または他の体液を連続的に供給される。灌流がなければ、培養中の細胞は、フィーディングおよび枯渇されているという交互の段階を経ることになり、これによってその増殖および代謝能力の完全な発現が制限される。
本発明の特定の局面は、図2Aおよび図2Bに図形として示され、かつ図3A〜図3Dに市販のハードウェア構成要素で図示される、ES細胞などの多能性細胞の自動化増殖のための装置またはシステムに関する。従って、理解できるとおり、例示的なデバイスは、生きているES細胞集団(102)、インキュベーター(104)と液体連絡しているリキッド・ハンドラー・ユニット(100)、および細胞分離のための操作プログラムを備えるコントローラ(106)を備え得る。
(実施例1)
幹細胞の自動化継代および増殖
H1細胞継代185および62を、TeSR培地を用いて培養し、Beckman Coulter Biomek2000リキッド・ハンドラー(B2K),Gibco TrypLE Trypsin,TeSR培地およびTeSR Plus(10μMのHA−100および0.5mg/mlのInvitrogen Soybean Trypsin Inhibitorを含有)を用いて分割した。H1細胞(ほぼ70%コンフルエント)を、8.6μg/cm2のMATRIGEL(商標)(BD Bioscience)でコーティングした6ウェルのプレートおよびTRYPLE(商標)トリプシンを含有するリザーバとともにB2K作業表面に置いた。グリッパー・ツールを用いて、分割すべきプレートからのリッドを取り出した。このロボットはグリッパー・ツールを廃棄して、Wash1ツールをロードして細胞を含むプレートから培地を吸引した。次に、P1000ツールを用いてTRYPLE(商標)酵素を分割すべきプレートに移した。このリッドをプレートにおいて、そのプレートを37℃のCYTOMAT(商標)インキュベーターに移動し7分間細胞をプレートから解離させた。
(実施例2)
自動化したHES細胞培養および維持のシステム
HES細胞の労力および時間集約的な維持を改善するために、本発明者らは、HES細胞のフィーディングをまず自動化した。この提唱された実験は、滅菌および再生可能な条件を確立するために自動化培地交換による継代の間10個の6ウェルプレートを維持することであった。本発明者らは、確立されたリキッド・ハンドリング・システムを用いる首尾よい自動的な培地交換によってその目標を達成した。これは、この実施形態でのHES細胞培養の自動化に向かう重要な段階であった。
(実施例3)
hES細胞の自動化された継代および増殖
HES細胞の継代はHES細胞培養において最も労働集約的であってかつ変動する工程であるので、技術者の技術に極めて依存して実験の結果に膨大な変動がもたらされる。本発明者らは、継代の自動化がさらに堅調であってかつ再現可能なHES細胞培養をもたらすということを仮定した。本発明者らは、現行のシステムでかつこのプロジェクトで利用可能な限られた時間に起因してこの理論が確認できないが、本発明者らは、そうでなければ一人ではほぼ不可能な作業である、3週にわたる1000倍の増殖に等しい、HES細胞の6ウェルプレートのうちの1ウェル(約250万個の細胞)から160プレートという最終数(約20〜30億個の細胞)までの増殖によって原理の証明を示すことができた。
細胞ベースのスクリーニングのための96ウェルの形式についてのHES細胞培養の自動化播種
本発明者らは、個別化された細胞からTeSR1培地中でHES細胞のコロニー形成を活発に増大した、HA−100由来の第二世代の低分子に相当する、新規な化合物H1152を用いた。HA−100は、フォローアップ研究においてH1152のような関連の化合物の発見をもたらした、第一のHES細胞ベースの低分子スクリーニングのうちの1つで発見された。H−1152は、96ウェルのプレート中の個別化されたHES細胞の極めて効率的な播種を可能にし(HA−100と同様であるが、10分の1の濃度である)、HES細胞ベースの低分子スクリーニングを可能にする。そうでなければ細胞集塊中で継代される個別化されたHES細胞によって、細胞ベースの低分子スクリーニングのストリンジェントな必要条件である1ウェルあたりについてさらに均一な細胞密度が可能になる。本発明者らはまた、現在の低分子(HA−100)および関連の化合物H1152がヒトES細胞を継代するために十分であると判断した。
以下の引用文献は、それらが例示的な手順上のまたは他の詳細な補遺をそこに示す引用文献に対して提供する程度まで、参照によって本明細書に詳細に援用される。
Claims (1)
- 本願図面に記載の発明。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US94701307P | 2007-06-29 | 2007-06-29 | |
US60/947,013 | 2007-06-29 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016125186A Division JP2016168056A (ja) | 2007-06-29 | 2016-06-24 | 胚性幹細胞培養のための自動化された方法および装置 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017023158A true JP2017023158A (ja) | 2017-02-02 |
Family
ID=39672032
Family Applications (4)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010515226A Active JP5991796B2 (ja) | 2007-06-29 | 2008-06-30 | 胚性幹細胞培養のための自動化された方法および装置 |
JP2014063625A Pending JP2014110817A (ja) | 2007-06-29 | 2014-03-26 | 胚性幹細胞培養のための自動化された方法および装置 |
JP2016125186A Pending JP2016168056A (ja) | 2007-06-29 | 2016-06-24 | 胚性幹細胞培養のための自動化された方法および装置 |
JP2016217785A Pending JP2017023158A (ja) | 2007-06-29 | 2016-11-08 | 胚性幹細胞培養のための自動化された方法および装置 |
Family Applications Before (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010515226A Active JP5991796B2 (ja) | 2007-06-29 | 2008-06-30 | 胚性幹細胞培養のための自動化された方法および装置 |
JP2014063625A Pending JP2014110817A (ja) | 2007-06-29 | 2014-03-26 | 胚性幹細胞培養のための自動化された方法および装置 |
JP2016125186A Pending JP2016168056A (ja) | 2007-06-29 | 2016-06-24 | 胚性幹細胞培養のための自動化された方法および装置 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US8815585B2 (ja) |
EP (2) | EP3293256B1 (ja) |
JP (4) | JP5991796B2 (ja) |
KR (2) | KR20160005142A (ja) |
AU (1) | AU2008272949B2 (ja) |
CA (1) | CA2691793A1 (ja) |
DK (2) | DK3293256T3 (ja) |
WO (1) | WO2009006422A1 (ja) |
Families Citing this family (77)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8476070B2 (en) | 2005-08-29 | 2013-07-02 | Technion Research & Development Foundation Limited | Media for culturing stem cells |
DK3441459T3 (da) | 2006-08-02 | 2021-06-07 | Technion Res & Dev Foundation | Fremgangsmåder til ekspansion af embryonale stamceller i en suspensionskultur |
US9080145B2 (en) | 2007-07-01 | 2015-07-14 | Lifescan Corporation | Single pluripotent stem cell culture |
CN101952415B (zh) | 2007-07-31 | 2017-06-27 | 生命扫描有限公司 | 人胚胎干细胞的分化 |
CN105886459A (zh) | 2008-02-21 | 2016-08-24 | 詹森生物科技公司 | 用于细胞粘附、培养和分离的方法、表面改性培养板和组合物 |
US8691565B2 (en) | 2008-03-05 | 2014-04-08 | Terumo Bct, Inc. | Method of reseeding adherent cells grown in a hollow fiber bioreactor system |
AU2009225665B9 (en) | 2008-03-17 | 2015-01-15 | The Scripps Research Institute | Combined chemical and genetic approaches for generation of induced pluripotent stem cells |
US8828720B2 (en) | 2008-03-17 | 2014-09-09 | Agency For Science, Technology And Research | Microcarriers for stem cell culture |
US8691569B2 (en) | 2008-03-17 | 2014-04-08 | Agency For Science, Technology And Research | Microcarriers for stem cell culture |
US9458431B2 (en) | 2008-03-17 | 2016-10-04 | Agency For Science, Technology And Research | Microcarriers for stem cell culture |
WO2009116951A2 (en) | 2008-03-17 | 2009-09-24 | Agency For Science, Technology And Research | Microcarriers for stem cell culture |
CA2729121C (en) | 2008-06-30 | 2019-04-09 | Centocor Ortho Biotech Inc. | Differentiation of pluripotent stem cells |
JP5688970B2 (ja) * | 2008-07-07 | 2015-03-25 | タカラバイオ株式会社 | 多能性幹細胞の製造方法 |
MX2011005288A (es) | 2008-11-20 | 2011-06-01 | Centocor Ortho Biotech Inc | Celulas madre pluripotentes en microportadores. |
CN102257132B (zh) | 2008-11-20 | 2014-09-03 | 森托科尔奥索生物科技公司 | 用于在平面基底上进行细胞附着和培养的方法和组合物 |
EP3312269A1 (en) | 2008-12-17 | 2018-04-25 | The Scripps Research Institute | Generation and maintenance of stem cells |
CA2753208C (en) | 2009-02-20 | 2018-08-21 | Cellular Dynamics International, Inc. | Methods and compositions for the differentiation of stem cells |
WO2010107392A1 (en) * | 2009-03-20 | 2010-09-23 | Agency For Science, Technology And Research | Culture of pluripotent and multipotent cells on microcarriers |
JP6219568B2 (ja) | 2009-07-20 | 2017-10-25 | ヤンセン バイオテツク,インコーポレーテツド | ヒト胚性幹細胞の分化 |
US9008406B2 (en) * | 2009-10-09 | 2015-04-14 | Kawasaki Jukogyo Kabushiki Kaisha | Method and apparatus for discriminating undifferentiated pluripotent stem cells, and automated culture method and system |
EP3235901B1 (en) * | 2009-10-16 | 2022-12-21 | The Scripps Research Institute | Induction of pluripotent cells |
KR101775926B1 (ko) | 2009-11-04 | 2017-09-07 | 셀룰러 다이내믹스 인터내셔널, 인코포레이티드 | 화학 물질을 이용한 에피솜 재프로그래밍 |
EP4166652A1 (en) | 2009-11-12 | 2023-04-19 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Culture media, cell cultures and methods of culturing pluripotent stem cells in an undifferentiated state |
US8349609B2 (en) * | 2009-11-24 | 2013-01-08 | University Of Connecticut | Differentiation of human embryonic and induced pluripotent stem cells |
BR112012017761A2 (pt) | 2009-12-23 | 2015-09-15 | Centocor Ortho Biotech Inc | diferenciação das células-tronco embrionárias humanas |
US9969981B2 (en) | 2010-03-01 | 2018-05-15 | Janssen Biotech, Inc. | Methods for purifying cells derived from pluripotent stem cells |
JP5909482B2 (ja) | 2010-03-31 | 2016-04-26 | ザ スクリプス リサーチ インスティテュート | 細胞の再プログラム |
US20130071927A1 (en) * | 2010-05-05 | 2013-03-21 | Sydney Ivf Limited | Media and methods for cell culture |
EP2580320B1 (en) | 2010-06-14 | 2018-08-01 | The Scripps Research Institute | Reprogramming of cells to a new fate |
WO2011161962A1 (ja) | 2010-06-25 | 2011-12-29 | 川崎重工業株式会社 | 多能性幹細胞コロニーの識別方法及び装置並びに多能性幹細胞の自動培養方法及び装置 |
BR112013004616A2 (pt) | 2010-08-31 | 2016-07-05 | Janssen Biotech Inc | diferenciação das células tronco embrionárias humanas |
CA2810488A1 (en) | 2010-09-07 | 2012-03-15 | Technion Research & Development Foundation Limited | Novel methods and culture media for culturing pluripotent stem cells |
AU2011349446C1 (en) | 2010-12-22 | 2016-01-21 | Fate Therapauetics, Inc. | Cell culture platform for single cell sorting and enhanced reprogramming of iPSCs |
KR101293300B1 (ko) * | 2011-04-05 | 2013-08-09 | (주)로고스바이오시스템스 | 세포의 분리시기를 판정하는 방법과, 이를 이용한 세포의 계대 배양 방법 및 계대 배양 장치 |
WO2013058403A1 (ja) * | 2011-10-21 | 2013-04-25 | 国立大学法人京都大学 | 層流による多能性維持単一分散細胞培養法 |
BR112014013152B1 (pt) | 2011-12-01 | 2021-08-31 | New York Stem Cell Foundation, Inc | Sistema automatizado para geração de células-tronco pluripotentes induzidas (ipscs) |
US10428309B2 (en) | 2011-12-01 | 2019-10-01 | New York Stem Cell Foundation, Inc. | Systems and methods for producing stem cells and differentiated cells |
KR102090751B1 (ko) | 2011-12-22 | 2020-03-19 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 인간 배아 줄기 세포의 단일 인슐린 호르몬 양성 세포로의 분화 |
CN102604894B (zh) * | 2012-02-29 | 2014-07-30 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | 用于制备神经干细胞的培养基及其用途 |
DK3450542T3 (da) | 2012-06-08 | 2021-11-01 | Janssen Biotech Inc | Differentiering af humane embryonale stamceller til endokrine pancreatiske celler |
US10370644B2 (en) | 2012-12-31 | 2019-08-06 | Janssen Biotech, Inc. | Method for making human pluripotent suspension cultures and cells derived therefrom |
SG11201505112SA (en) | 2012-12-31 | 2015-07-30 | Janssen Biotech Inc | Differentiation of human embryonic stem cells into pancreatic endocrine cells using hb9 regulators |
CN105705634A (zh) | 2012-12-31 | 2016-06-22 | 詹森生物科技公司 | 用于分化成胰腺内分泌细胞的人多能细胞的悬浮和群集 |
RU2018116647A (ru) | 2012-12-31 | 2018-10-24 | Янссен Байотек, Инк. | Культивация эмбриональных стволовых клеток человека в воздушно-жидкостной зоне взаимодействия с целью их дифференцировки в панкреатические эндокринные клетки |
US9790465B2 (en) | 2013-04-30 | 2017-10-17 | Corning Incorporated | Spheroid cell culture well article and methods thereof |
WO2015006751A1 (en) * | 2013-07-12 | 2015-01-15 | President And Fellows Of Harvard College | Systems and methods for cell culture device interconnection and fluidic device interconnection |
WO2015023658A2 (en) * | 2013-08-12 | 2015-02-19 | Invivosciences Inc. | Automated cell culture system and method |
EP3805369A1 (en) | 2014-03-04 | 2021-04-14 | Fate Therapeutics, Inc. | Improved reprogramming methods and cell culture platforms |
RU2694311C2 (ru) | 2014-05-16 | 2019-07-11 | Янссен Байотек, Инк. | Применение малых молекул для увеличения экспрессии mafa в панкреатических эндокринных клетках |
CA2957801C (en) | 2014-08-19 | 2022-08-30 | Cellular Dynamics International, Inc. | Neural networks formed from cells derived from pluripotent stem cells |
CN113481097A (zh) | 2014-10-29 | 2021-10-08 | 康宁股份有限公司 | 灌注生物反应器平台 |
KR102460969B1 (ko) | 2014-10-29 | 2022-10-31 | 코닝 인코포레이티드 | 세포 배양 인서트 |
KR20230050478A (ko) | 2014-12-19 | 2023-04-14 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 만능성 줄기 세포의 현탁 배양 |
US9944894B2 (en) | 2015-01-16 | 2018-04-17 | General Electric Company | Pluripotent stem cell expansion and passage using a rocking platform bioreactor |
EP3315604A4 (en) * | 2015-06-25 | 2018-12-26 | Kaneka Corporation | Liquid injection method |
WO2017007278A1 (ko) * | 2015-07-09 | 2017-01-12 | 사회복지법인 삼성생명공익재단 | 자동 세포 배양기 및 그 배양기의 동작 방법 |
US11286454B2 (en) * | 2015-08-31 | 2022-03-29 | I Peace, Inc. | Pluripotent stem cell manufacturing system and method for producing induced pluripotent stem cells |
TWI737631B (zh) | 2015-10-01 | 2021-09-01 | 美商柏克萊燈光有限公司 | 多槽盤培養器 |
AU2016338680B2 (en) | 2015-10-16 | 2022-11-17 | Fate Therapeutics, Inc. | Platform for the induction and maintenance of ground state pluripotency |
WO2017147536A1 (en) | 2016-02-24 | 2017-08-31 | The Rockefeller University | Embryonic cell-based therapeutic candidate screening systems, models for huntington's disease and uses thereof |
CA3014584A1 (en) * | 2016-03-21 | 2017-09-28 | General Electric Company | Pluripotent stem cell expansion and passage using a stirred tank bioreactor |
MA45479A (fr) | 2016-04-14 | 2019-02-20 | Janssen Biotech Inc | Différenciation de cellules souches pluripotentes en cellules de l'endoderme de l'intestin moyen |
JP2018000130A (ja) * | 2016-07-05 | 2018-01-11 | 株式会社Ihi | 細胞培養装置 |
IL264283B2 (en) * | 2016-07-19 | 2023-12-01 | Accellta Ltd | A medium for growing pluripotent stem cells in suspension |
DE102016114043B3 (de) | 2016-07-29 | 2017-08-10 | Technische Universität Dresden | Vorrichtung zur Isolierung von Stammzellen aus fötalen Geweben |
CN115044471A (zh) | 2016-08-27 | 2022-09-13 | 三维生物科技有限公司 | 生物反应器 |
CN109923588B (zh) * | 2016-11-10 | 2022-12-02 | 伯克顿迪金森公司 | 用于监测培养基方案的时间线系统 |
CA3045898A1 (en) | 2016-12-01 | 2018-06-07 | Berkeley Lights, Inc. | Well-plate incubator |
CN110392733B (zh) * | 2017-02-27 | 2021-02-26 | 田边刚士 | 体细胞制造系统 |
US11857970B2 (en) | 2017-07-14 | 2024-01-02 | Corning Incorporated | Cell culture vessel |
PL3652291T3 (pl) | 2017-07-14 | 2022-03-28 | Corning Incorporated | Naczynie do hodowli komórkowej |
JP7195302B2 (ja) | 2017-07-14 | 2022-12-23 | コーニング インコーポレイテッド | 3d培養のための細胞培養容器及び3d細胞の培養方法 |
CN111051494B (zh) | 2017-07-14 | 2024-03-29 | 康宁股份有限公司 | 用于手动或自动培养基交换的3d细胞培养容器 |
KR102220125B1 (ko) * | 2018-04-26 | 2021-02-25 | (주)세포바이오 | 세포배양 자동화 장치 및 방법 |
PL3649229T3 (pl) | 2018-07-13 | 2021-12-06 | Corning Incorporated | Naczynia do hodowli komórkowych ze stabilizującymi urządzeniami |
PL3649226T3 (pl) | 2018-07-13 | 2022-05-16 | Corning Incorporated | Płytki mikrodołkowe z boczną ścianką zawierającą powierzchnię dostarczającą płynną pożywkę |
EP3649227A1 (en) | 2018-07-13 | 2020-05-13 | Corning Incorporated | Fluidic devices including microplates with interconnected wells |
Family Cites Families (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4352883A (en) | 1979-03-28 | 1982-10-05 | Damon Corporation | Encapsulation of biological material |
US4284412A (en) | 1979-07-13 | 1981-08-18 | Ortho Diagnostics, Inc. | Method and apparatus for automated identification and enumeration of specified blood cell subclasses |
JPS58155087A (ja) * | 1982-03-12 | 1983-09-14 | Olympus Optical Co Ltd | 細胞の自動培養装置 |
US4498766A (en) | 1982-03-25 | 1985-02-12 | Becton, Dickinson And Company | Light beam focal spot elongation in flow cytometry devices |
US4661913A (en) | 1984-09-11 | 1987-04-28 | Becton, Dickinson And Company | Apparatus and method for the detection and classification of articles using flow cytometry techniques |
US4774189A (en) | 1984-12-24 | 1988-09-27 | Flow Cytometry Standards Corp. | Fluorescent calibration microbeads simulating stained cells |
US4767206A (en) | 1984-12-24 | 1988-08-30 | Flow Cytometry Standards Corporation | Calibration method for flow cytometry using fluorescent microbeads and synthesis thereof |
US4857451A (en) | 1984-12-24 | 1989-08-15 | Flow Cytometry Standards Corporation | Method of compensating and calibrating a flow cytometer, and microbead standards kit therefor |
US4989977A (en) | 1985-07-29 | 1991-02-05 | Becton, Dickinson And Company | Flow cytometry apparatus with improved light beam adjustment |
US4714682A (en) | 1985-12-11 | 1987-12-22 | Flow Cytometry Standards Corporation | Fluorescent calibration microbeads simulating stained cells |
US5160974A (en) * | 1990-06-25 | 1992-11-03 | Flow Science, Inc. | Closed sample cell for use in flow cytometry |
US5478722A (en) | 1991-02-17 | 1995-12-26 | The Curators Of The University Of Missouri | Preserved cell preparations for flow cytometry and immunology |
EP0682697A4 (en) | 1993-01-29 | 1997-07-30 | New Brunswick Scientific Co | METHOD AND APPARATUS FOR CULTURING ANCHOR AND SUSPENSION CELLS. |
US5843780A (en) | 1995-01-20 | 1998-12-01 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Primate embryonic stem cells |
US6325114B1 (en) | 2000-02-01 | 2001-12-04 | Incyte Genomics, Inc. | Pipetting station apparatus |
CA2853267C (en) | 2002-04-08 | 2018-06-26 | Octane Biotech Inc. | Automated tissue engineering system comprising sensors linked to a microprocessor |
DE102004043256B4 (de) * | 2004-09-07 | 2013-09-19 | Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn | Skalierbarer Prozess zur Kultivierung undifferenzierter Stammzellen in Suspension |
NZ553241A (en) * | 2004-09-08 | 2009-11-27 | Wisconsin Alumni Res Found | Medium and culture of pluripotent stem cells |
WO2006084040A2 (en) * | 2005-02-04 | 2006-08-10 | Massachusetts Institute Of Technology | Engineering vascularized muscle tissue |
US20060199265A1 (en) * | 2005-03-02 | 2006-09-07 | Wolf Michael F | Seeding implantable medical devices with cells |
-
2008
- 2008-06-30 CA CA2691793A patent/CA2691793A1/en not_active Abandoned
- 2008-06-30 US US12/164,969 patent/US8815585B2/en active Active
- 2008-06-30 DK DK17192886.4T patent/DK3293256T3/da active
- 2008-06-30 EP EP17192886.4A patent/EP3293256B1/en active Active
- 2008-06-30 KR KR1020157036767A patent/KR20160005142A/ko not_active Application Discontinuation
- 2008-06-30 KR KR1020107002003A patent/KR20100059789A/ko active Application Filing
- 2008-06-30 WO PCT/US2008/068814 patent/WO2009006422A1/en active Application Filing
- 2008-06-30 EP EP08781187.3A patent/EP2173863B1/en active Active
- 2008-06-30 DK DK08781187.3T patent/DK2173863T3/en active
- 2008-06-30 JP JP2010515226A patent/JP5991796B2/ja active Active
- 2008-06-30 AU AU2008272949A patent/AU2008272949B2/en active Active
-
2013
- 2013-03-19 US US13/847,349 patent/US20130316445A1/en not_active Abandoned
-
2014
- 2014-03-26 JP JP2014063625A patent/JP2014110817A/ja active Pending
-
2016
- 2016-06-24 JP JP2016125186A patent/JP2016168056A/ja active Pending
- 2016-11-08 JP JP2016217785A patent/JP2017023158A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2173863A1 (en) | 2010-04-14 |
KR20160005142A (ko) | 2016-01-13 |
EP3293256B1 (en) | 2019-05-22 |
JP2010532173A (ja) | 2010-10-07 |
US20130316445A1 (en) | 2013-11-28 |
WO2009006422A1 (en) | 2009-01-08 |
US8815585B2 (en) | 2014-08-26 |
DK2173863T3 (en) | 2019-01-21 |
EP3293256A1 (en) | 2018-03-14 |
CA2691793A1 (en) | 2009-01-08 |
JP2016168056A (ja) | 2016-09-23 |
JP2014110817A (ja) | 2014-06-19 |
KR20100059789A (ko) | 2010-06-04 |
EP2173863B1 (en) | 2018-10-10 |
JP5991796B2 (ja) | 2016-09-14 |
US20090029462A1 (en) | 2009-01-29 |
DK3293256T3 (da) | 2019-08-12 |
AU2008272949B2 (en) | 2014-05-15 |
AU2008272949A1 (en) | 2009-01-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5991796B2 (ja) | 胚性幹細胞培養のための自動化された方法および装置 | |
Kehoe et al. | Scalable stirred-suspension bioreactor culture of human pluripotent stem cells | |
CN102307991B (zh) | 微载体上的多能干细胞培养 | |
Rodrigues et al. | Stem cell cultivation in bioreactors | |
JP7123412B2 (ja) | オルガノイドを培養するための方法 | |
EP2398897B1 (en) | Methods and compositions for the differentiation of stem cells | |
JP6495281B2 (ja) | オートメーション化された細胞培養システム及び方法 | |
US20100093083A1 (en) | Large scale production of stem cells | |
US20190002834A1 (en) | Method for preparing population of stem cell spheroids | |
Reid | [12] Cloning | |
AU2014201955B2 (en) | Automated method and apparatus for embryonic stem cell culture | |
JP7092309B2 (ja) | 単一細胞ヒト多能性幹細胞の継代及び採取用配合物 | |
KR20220113349A (ko) | 생물반응기의 현탁액에서 줄기세포의 확장 | |
Yamada et al. | Using piggyBac transposon gene expression vectors to transfect Zscan5b gene into mouse pluripotent stem cells | |
US20230113241A1 (en) | Automated method for preparing keratinocytes | |
Jing et al. | Stem cell bioprocessing for regenerative medicine | |
Szczypka et al. | Strategies for Microcarrier Culture Optimization |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20161108 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20171127 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20180124 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20180215 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180226 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20180731 |