JP2016504308A - 抗原特異的ｔ細胞反応を誘導する免疫原エンハンサーとして使用する融合タンパク質 - Google Patents

抗原特異的ｔ細胞反応を誘導する免疫原エンハンサーとして使用する融合タンパク質 Download PDF

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Abstract

抗原特異的T細胞反応を向上させるための免疫原エンハンサーとしての融合タンパク質を開示する。上記融合タンパク質は、(a)抗原提示細胞(APC)-結合ドメイン又はCD91受容体-結合ドメイン;(b)タンパク質トランスダクションドメイン;及び(c)病原体の抗原を含み、上記APC-結合ドメイン又は上記CD91受容体-結合ドメインは、上記融合タンパク質のN末端に位置し、上記病原体の抗原は、上記タンパク質トランスダクションドメインのC末端に位置する。上記タンパク質トランスダクションドメインは、(i)T細胞感作シグナル伝達ペプチド、リンカー及びトランスロケーションペプチドを含む、融合ポリペプチド(ii)T細胞-感作シグナル伝達ペプチド;及び(iii)長さ34-112のアミノ酸残基のトランスロケーションペプチドからなる群より選択される。【選択図】なし

Description

本発明は、概して、融合タンパク質に関する。より詳しくは、本発明は、T細胞性免疫応答を向上させる融合タンパク質に関する。
発明の背景
分子生物学は、サブユニットワクチンの生産を可能にした。免疫原は、親タンパク質又は複合体の断片又はサブユニットである。T細胞感作反応を誘発することができ、病原菌の多くの株由来の配列を組み込むのに十分な柔軟性がある安定ワクチンの開発が望まれている。
発明の開示
一つの態様では、本発明は、融合タンパク質であって、上記融合タンパク質は、
(a) 上記融合タンパク質のN末端に位置する、抗原提示細胞(APC)-結合ドメイン又はCD91受容体-結合ドメイン；
(b) 上記APC-結合ドメイン又は上記CD91受容体-結合ドメインのC末端に位置するタンパク質トランスダクションドメインであって、
(i) T細胞感作シグナル伝達ペプチド、リンカー及びトランスロケーションペプチドを含む融合ポリペプチドであって、
(1) 上記T細胞感作シグナル伝達ペプチドは、上記融合ポリペプチドのN末端に位置し、
(2) 上記リンカーは、配列番号:15を含み、且つ、上記T細胞感作シグナル伝達ペプチドとトランスロケーションペプチドとを結合し、
(3) 上記トランスロケーションペプチドは、長さ34-112のアミノ酸残基を有し、配列番号:3、20又は4と少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含む、融合ポリペプチドと、
(ii) T細胞感作シグナル伝達ペプチドと、
(iii) 配列番号:3、20又は4と少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含む、長さ34-112のアミノ酸残基のトランスロケーションペプチドからなる群より選択される上記タンパク質トランスダクションドメイン；及び、
(c) 上記タンパク質トランスダクションドメインのC末端に位置する、病原体の抗原；を含み、
上記T細胞感作シグナル伝達ペプチドは、長さ28-53のアミノ酸残基を有し、配列番号:31と少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含み、Xaa8はI又はLであり、Xaa10はV、F又はAであり、Xaa11はM又はLであり、Xaa17はL又はIであり、
上記APC-結合ドメイン又は上記CD91受容体-結合ドメインは、上記タンパク質トランスダクションドメインが上記トランスロケーションペプチド(biii)である場合、シュードモナスエキソトキシンA(PE)結合ドメインIのアミノ酸配列を有さない、融合タンパク質に関する。
本発明の一実施形態において、上記APC-結合ドメイン又はCD91受容体-結合ドメインは、配列番号:5、9、6、7及び8からなる群より選択される配列と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドである。あるいは、上記APC-結合ドメインは、受容体関連タンパク質-1(RAP1)ドメインIII、アルファ-2-マクログロブリン受容体関連タンパク質(A2M)、HIV-Tat及びヒートショックタンパク質(HSP)及びシュードモナスエキソトキシンA(PE)結合ドメインIからなる群より選択される。
本発明の別の実施形態において、上記融合タンパク質は、シュードモナスエキソトキシンA(PE)結合ドメインIのアミノ酸配列を含まない。
本発明の別の実施形態において、上記融合タンパク質は、更に、融合タンパク質のC末端に位置する小胞体リテンション配列を有する。
本発明の別の実施形態において、上記小胞体リテンション配列は、Lys-Asp-Glu-Leu(配列番号:14)のアミノ酸配列を含む。上記ERリテンション配列は、配列番号:14、16-19からなる群より選択される配列を含んでいてもよい。あるいは、ERリテンション配列は、配列番号:16-19からなる群より選択される配列からなっていてもよい。
本発明の別の実施形態において、上記抗原が10又は10超のエピトープを含む場合、上記融合タンパク質はそのC末端において小胞体リテンション配列を含まない。
本発明の別の実施形態において、上記タンパク質トランスダクションドメインは、上記融合ポリペプチド(bi)である。
本発明の別の実施形態において、上記タンパク質トランスダクションドメインは、上記T細胞感作シグナル伝達ペプチド(bii)である。
本発明の別の実施形態において、上記融合タンパク質は、上記タンパク質トランスダクションドメインと上記抗原との間の追加のリンカーを更に含み、上記追加のリンカーは、配列番号: 15を含む。
本発明の別の実施形態において、上記タンパク質トランスダクションドメインは、上記トランスロケーションペプチド(biii)である。
本発明の別の実施形態において、上記融合タンパク質は、上記APC-結合ドメイン又はCD91受容体-結合ドメインと上記トランスロケーションペプチドとの間の追加のリンカーを更に含み、上記追加のリンカーは、配列番号: 15を含む。
本発明の別の実施形態において、上記タンパク質トランスダクションドメインは、配列番号: 30の配列を含む。
本発明の別の実施形態において、上記APC-結合ドメインは、配列番号: 5、9、6、7及び8からなる群より選択される配列と少なくとも95%同一であるアミノ酸配列を含む。
本発明の別の実施形態において、APC-結合ドメイン又はCD91受容体-結合ドメインは、配列番号:5、9、6、7及び8からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
本発明の別の実施形態において、上記T細胞感作シグナル伝達ペプチドは、配列番号:1又は2と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含む。
本発明の別の実施形態において、上記T細胞感作シグナル伝達ペプチドは、配列番号:1及び2からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
本発明の別の実施形態において、上記トランスロケーションペプチドは、配列番号:3、20及び4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
本発明の別の実施形態において、トランスロケーションペプチドは、長さが34-61のアミノ酸残基を有する。
本発明の別の実施形態において、上記融合タンパク質のタンパク質トランスダクションドメインは、(i)T細胞感作シグナル伝達ペプチドは、配列番号:1又は2のアミノ酸配列を含み、(ii)トランスロケーションペプチドは、配列番号:3と少なくとも95%同一であるアミノ酸配列を含む。
上記T細胞感作シグナル伝達ペプチドは、T細胞上のCD28受容体のK1(X)2E3(X)4(X)5Y6P7P8P9Y10(配列番号:32)のアミノ酸配列を認識して結合する抗体を誘導する特性を示し、(X)2はI又はLであり、(X)4はV、F又はAであり、(X)5はM又はLである。
別の態様においては、本発明は、融合タンパク質であって、上記融合タンパク質は、
(a) 上記融合タンパク質のN末端に位置するCD91受容体-結合ドメイン又は抗原提示細胞(APC)-結合ドメイン；
(b) 上記APC-結合ドメイン又はCD91受容体-結合ドメインのC末端に位置するタンパク質トランスダクションドメインであって、
(i) T細胞感作シグナル伝達ペプチド、リンカー及びトランスロケーションペプチドを含む融合ポリペプチドであって、
(1) T細胞感作シグナル伝達ペプチドは、上記融合ポリペプチドのN末端に位置し、
(2) 上記リンカーは、配列番号:15を含み、且つ、上記T細胞感作シグナル伝達ペプチドとトランスロケーションペプチドとを結合し、
(3) 上記トランスロケーションペプチドは、長さ34-112のアミノ酸残基を有し、配列番号:3、20又は4と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含む、融合ポリペプチドと、
(ii) T細胞感作シグナル伝達ペプチドと、
(iii) 配列番号:3、20又は4と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含む、長さ34-112のアミノ酸残基のトランスロケーションペプチドからなる群より選択されるタンパク質トランスダクションドメイン；及び、
(C) 上記タンパク質トランスダクションドメインのC末端に位置する病原体の抗原；、からなり、
上記T細胞感作シグナル伝達ペプチドは、長さ28-53のアミノ酸残基を有し、配列番号:31と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含み、Xaa8はI又はLであり、Xaa10はV、F又はAであり、Xaa11はM又はLであり、Xaa17はL又はIであり、
上記タンパク質トランスダクションドメインがトランスロケーションペプチド(biii)である場合、上記APC-結合ドメイン又はCD91受容体-結合ドメインは、シュードモナスエキソトキシンA(PE)ドメインIのアミノ酸配列を有さない。
上記抗原提示細胞(APC)は、樹状細胞、マクロファージ、B細胞及び単核細胞からなる群より選択してもよい。
本発明の一実施形態において、APCの細胞膜は、CD91受容体を含む。
別の態様においては、本発明は、(a)治療的有効量の上記融合タンパク質と、(b)アジュバントを含む、ワクチン組成物に関する。
上記アジュバントは、抗原デリバリー薬剤又は免疫強化剤である。本発明の一実施形態において、ワクチン組成物は、抗原デリバリー薬剤を含み、免疫強化剤を含まない。
更に別の態様においては、本発明は、治療的有効量の上記融合タンパク質を含むワクチン組成物を、それを必要とする対象に投与することによって、病原体抗原特異的T細胞反応の向上を誘導するステップを含む、病原体抗原特異的T細胞反応の向上を誘導する方法に関する。
更に別の態様においては、本発明は、治療的有効量の前記融合タンパク質を含むワクチン組成物を、それを必要とする対象に投与することによって、疾患細胞の細胞膜上のクラスI MHC分子を介して抗原を提示する疾患細胞を殺すステップを有する、疾患細胞の細胞膜上のクラスI MHC分子を介した抗原を提示する疾患細胞を殺す方法に関する。
本発明の一実施形態において、上記疾患細胞は、がん細胞である。
更に別の態様においては、本発明は、治療的有効量の請求項1の融合タンパク質を含むワクチン組成物を、それを必要とする対象に投与することによって、病原体によって引き起こされる感染を予防する、治療する、又は、感染によって引き起こされる症状を最小限にするステップを有する、病原体によって引き起こされる感染を予防する、治療する、又は、感染によって引き起こされる症状を最小限にする方法に関する。本発明は、病原体抗原特異的T細胞反応の向上を誘導するため、又は、疾患細胞の細胞膜上のクラスI MHC分子を介して抗原を提示する疾患細胞を殺すため、又は、病原体によって引き起こされる感染を予防する、治療する、若しくは、感染によって引き起こされる症状を最小限にするために使用する、上記融合タンパク質又はワクチン組成物にも関する。
病原体は、ヒトパピローマウイルス(HPV)、豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス(PRRSV)、ヒト免疫不全ウイルス(HIV-１)、インフルエンザウイルス、デング(Dangue)ウイルス、肝炎Cウイルス(HCV)、肝炎Bウイルス(HBV)及びブタサーコウイルス2(PCV2)からなる群より選択される少なくとも1つであってもよい。
本発明の一実施形態において、上記融合タンパク質は、抗原特異的細胞障害性T細胞反応を向上させるために、その必要がある対象に使用するためのものである。融合タンパク質は、抗原特異的CD4+ T細胞反応を向上させるために、又は、抗原特異的抗体価反応の向上を誘導するための免疫原エンハンサーとして使用するために、その必要がある対象に使用してもよい。
これらの態様及び他の態様は、以下の図面に関連する好適な実施形態に関する以下の記述から明らかになるだろう。但し、その中の変更形態及び修正形態は、開示する新規の概念の精神と範囲から逸脱することなく作用し得るものである。
添付の図面は、本発明の1又は複数の実施形態を例示して、明細書と共に本発明の原理を説明するのに役立つ。可能限り、同じ参照番号を図面の全体にわたって使用して、実施形態における同一又は類似の構成要素を指す。
図1は、ベクター図である。 図2は、融合タンパク質のSDS-PAGE分析結果を示している写真である。 図3は、ベクター図である。 図4は、本発明の一実施形態を示す略図である。 図5Aは、免疫化のスケジュールを示す。 図5Bは、融合タンパク質のSDS-PAGE分析結果を示している写真である。 図5C-Dは、それぞれ、様々な融合タンパク質又はプラセボによってワクチン接種を受けた動物群における、腫瘍サイズ曲線と腫瘍がないマウスのパーセンテージを示しているグラフである。 図6は、融合タンパク質の調製のための流れ図(左パネル)と、融合タンパク質のSDS-PAGE分析結果を示している写真(右パネル)を示している。 図7は、T細胞感作融合タンパク質の作用のメカニズムを示す模式図である。 図8は、様々な種由来のCD28の配列アライメントを示す。 図9Aは、免疫化のスケジュールを示す。図9B-Cは、それぞれ、様々な融合タンパク質又はプラセボによってワクチン接種を受けた動物群における腫瘍サイズ曲線及び生存率を示す。 図10は、病原体由来のDNA挿入物を含むプラスミドを作成するために使用するRAP1含有ベクターを示す模式図である。 図11は、様々な病原体の抗原を含む融合タンパク質の構造を示す模式図である。 図12A-Fは、様々な融合タンパク質のSDS-PAGE分析結果を示している写真である。 図13A-Bは、動物を免疫化するために使用する動物群、ワクチン及び用量、並びに、免疫化スケジュールを示す。 図14A-Dは、E716、E718、HCVコア若しくはHBx抗原を含む融合タンパク質又はプラセボによってワクチン接種を受けた図13Aの動物群由来のCD3+/CD4+脾細胞及びCD3+/CD8+脾細胞のex vivo抗原特異的免疫反応分析結果を示している表である。 図15A-Bは、PCV2(15A-B)を含む融合タンパク質又はプラセボによってワクチン接種を受けた図13Aの動物群由来のCD3+/CD8+脾細胞及びCD3+/CD4+脾細胞のex vivo抗原特異的免疫反応分析におけるIFNγ+細胞計数を示す。 図15C-Jは、PRRSV抗原(15C-J)を含む融合タンパク質又はプラセボによってワクチン接種を受けた図13Aの動物群由来のCD3+/CD8+脾細胞及びCD3+/CD4+脾細胞のex vivo抗原特異的免疫反応分析におけるIFNγ+細胞計数を示す。
発明の詳細な説明
本発明は、以下の実施例に特に記載されている。多数の変更形態及びバリエーションが当業者にとって明らかであるため、実施例は、説明のためであることを意図している。以下、本発明の様々な実施形態の詳細について説明する。図面に関して、同じ番号は、図全体にわたって、同じ構成要素を示す。本願明細書及び添付の請求項全体に渡る記述において使用している通り、「a」、「an」及び「the」の意味は、文脈において別途明確に示していない限り、複数を含むまた、本願明細書及び添付の請求項全体に渡る記述において使用している通り、「in」の意味は、文脈において別途明確に示していない限り、「in」及び「on」を含む。さらに、表題又は副題は、読者の便宜のために明細書において使用されているが、本発明の範囲に対する影響を及ぼすものではない。加えて、この明細書において使用するある種の用語は、下でより詳しくは規定している。
定義
この明細書において使用する用語は、一般的に、本発明の背景内の技術分野、及び、各用語が使用されている特定の文脈における通常の意味を有する。本発明を説明するために用いるある種の用語は、本発明の記述に関して実践者に追加のガイダンスを提供するために、以下、又は、別途明細書中にて説明する。便宜上、ある種の用語は、例えば、イタリック及び/又は引用符を使用して、強調されているだろう。強調表示の使用は、用語の範囲及び意味に対する影響を与えない。用語の範囲及び意味は、それが強調されていようといまいと、同じ文脈において同じである。同じことを複数の方法で述べることができることはいうまでもない。その結果、代替の言葉及び同義語を、本願明細書において述べられる任意の1又は複数の用語のために用いることができるが、本願明細書において詳しく述べている又は議論されているか否かによって与えられる任意の特別な用語ではない。ある種の用語には同義語が提供される。1又は複数の同義語の記載は、他の同義語の使用を排除しない。この明細書における例示(本願明細書に記載の任意の用語の例示を含む)の使用は、解説のためだけにあり、本発明又は任意の例示用語の範囲及び意味を限定するものではない。同様に、本発明は、この明細書が提供する様々な実施形態に限定されない。
別途規定されない限り、本願明細書において用いられる全ての技術的及び科学的な用語は、一般的に、本発明が関係する当業者が理解するのと同じ意味を有する。不一致の場合は、定義を含む本書が支配的である。
本明細書で用いられるように、「約」、「凡そ」又は「だいたい」は、所定の値又は範囲の20パーセント以内、好ましくは10パーセント以内、より好ましくは5パーセント以内を一般的に意味する。はっきりと明言されていない場合、本願明細書が与える数量は、用語「約」、「凡そ」又は「だいたい」を推定することができることをだいたい意味する。
「抗原提示細胞(APC)又は補助細胞」という用語は、それらの表面上の主要組織適合性複合体(MHC)と複合体を形成した外来抗原を提示する細胞を指す。T細胞は、それらのT細胞受容体(TCR)を使用しているこれらの複合体を認識することができる。これらの細胞は、抗原を処理して、それらをT細胞に提示する。主要なタイプの成熟抗原提示細胞は、樹状細胞(DC)、マクロファージ、単核細胞及びある種のB細胞である。
「抗原提示細胞(APC)-結合ドメイン」という用語は、抗原提示細胞(APC)に結合することができるドメインをいう。APC-結合ドメインは、配列番号: 5、6、7、8及び9からなる群より選択される配列と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドであってもよい。APC-結合ドメインは、APC上の受容体を認識して結合するリガンドである。
分化抗原群91(CD91)は、細胞膜の受容体を形成し、受容体依存性エンドサイトーシスに関連するタンパク質である。
「タンパク質トランスダクションドメイン」という用語は、T細胞を感作することによって抗原特異的T細胞反応を向上させる機能及び/又は抗原提示のクラスI主要組織適合複合体(MHC-I)経路(即ち、細胞障害性T細胞経路)に抗原を案内又は導く(即ち、標的にする)機能を有するポリペプチド又は融合ポリペプチドを指す。
「T細胞を感作する」という用語は、CD8+及びCD4+ T細胞を感作して、結果として、抗原投与に対するCD8+(CTL)及びCD4+ T細胞反応が向上することを一般的に意味する。抗原特異的細胞性免疫反応は、抗原に対する応答として抗原特異的に誘導されたγ-インターフェロンの生産を定量化することによって測定される。例えば、感作シグナルがない(即ち、タンパク質トランスダクションドメインなし)と、単独抗原は、細胞性免疫反応を弱く誘導する又はまったく誘導しない可能性、即ち、CD8+及びCD4+ T細胞由来の抗原特異的γ-インターフェロンを弱く誘導する又は全く誘導しない可能性がある一方で、感作シグナル(タンパク質トランスダクションドメイン)の存在下において、抗原は、細胞性免疫反応の向上を誘導することができる。従って、感作シグナル(タンパク質トランスダクションドメイン)の機能は、宿主においてCD4+及びCD8+ T細胞を感作することである。その後、宿主に抗原が投与されると、抗原は、CD4+及びCD8+ T細胞感作が先であるため抗原特異的細胞性免疫反応の向上を誘導することができる。
タンパク質トランスダクションドメインは、
(i) T細胞感作シグナル伝達ペプチド、リンカー及びトランスロケーションペプチドを含む融合ポリペプチドであって、
(1) 上記T細胞感作シグナル伝達ペプチドは、融合ポリペプチドのN末端に位置し、
(2) 上記リンカーは、配列番号: 15を含み、且つ、上記T細胞感作シグナル伝達ペプチド及びトランスロケーションペプチドを結合し、
(3) 上記トランスロケーションペプチドは、長さ34-112のアミノ酸残基を有し、配列番号:3、20又は4と少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含む、融合ポリペプチド;
(ii) T細胞感作シグナル伝達ペプチド;
(iii) 配列番号:3、20又は4と少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含む、長さ34-112のアミノ酸残基のトランスロケーションペプチド;からなる群より選択されるペプチド及び/又はポリペプチドであってもよい。
タンパク質トランスダクションドメインは、「融合ポリペプチド」であってもよく、上記融合ポリペプチドは、T細胞感作シグナル伝達ペプチド、リンカー及びトランスロケーションペプチドを含む。例えば、融合ポリペプチドは、ポリペプチド「CD28convPEt」であってもよい。
「CD28conv」という用語は、「T細胞感作シグナル伝達ペプチド」であるCD28保存領域を指す。これは、CD28アゴニスト抗体を誘導するエピトープである。
「PEt」という用語は、長さ34-112のアミノ酸残基を有するトランスロケーションペプチドを指す。
リンカーは、「CD28conv」と「PEt」との間に存在する。融合ポリペプチド「CD28convPEt」の方向又は配置は重要であり、「CD28conv」(又は、T細胞感作シグナル伝達ペプチド)は、PEt(又は、トランスロケーションペプチド)の上流に位置しなければならない、即ち、PEtは、T細胞反応の向上を得るために「CD28conv」のC末端に位置しなければならない。「CD28convPEt」は、逆方向融合ペプチドPEtCD28convよりもCD28convに特異的なIgG価をより高く上げることができる(CD28特異的アゴニスト抗体と呼ばれる)。CD28-特異的アゴニスト抗体は、CD4+及びCD8+ T細胞を感作することができる。適切な方向の融合ポリペプチドCD28convPEtは、CD28convとPEtドメインとの間にリンカー(RXRXKR)を含む。リンカーは、抗原提示細胞-(APC)特異的プロテアーゼ(カテプシンL)切断サイトLys-Arg(KR)を含む。従って、融合タンパク質RAP1-CD28convPEt-抗原-K3は、2つの断片(RAP1-CD28conv及びPEt-抗原-K3)に消化され得る。RAP1-CD28conv断片は、リソソームにおいて更に消化され、次に、CD28convのエピトープは、MHC II経路を介してAPC細胞表面に提示される。これは、CD28アゴニスト抗体を生産する体液性免疫反応を誘導する。従って、CD28アゴニスト抗体は、B細胞によって生産される。このCD28アゴニスト抗体は、T細胞表面上のCD28に結合することができ、T細胞(CD4+及びCD8+ T細胞)を予め活性化することができる。
「T細胞-感作シグナル伝達ペプチド」は、長さ28-53のアミノ酸残基を有し、配列番号:31と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有し、Xaa8はI又はLであり、Xaa10はV、F又はAであり、Xaa11はM又はLであり、Xaa17はL又はIである。
T細胞-感作シグナル伝達ペプチドは、臨界領域K1(I/L)2E3(V/F/A)4(M/L)5Y6P7P8P9Y10 (配列番号:32)を有し、(X)2はI又はLであり、(X)4はV、F又はAであり、(X)5はM又はLである。
マウスに特異的なT細胞感作シグナル伝達ペプチド(TDIYFCKIEFMYPPPYLDNEKSNGTIIH;配列番号:31、X8はIであり、X10はFであり、X11はMである)を、以下の実施例で使用した。
図7は、一例として、融合タンパク質RAP1-CD28convPEt-E7-K3を使用した、T細胞-感作融合タンパク質の作用メカニズムを示す模式図である。RAP1-CD28convPEt-E7-K3は、N末端からC末端にかけて、(1)N末端の完全長RAP1のドメインIII、(2)CD28conv、(3)リンカー、(4)シュードモナスエキソトキシンA由来の改変トランスロケーションペプチド、(5)完全長HPVタイプ16 E7タンパク質、及び(6)C末端のERリテンションシグナルである３つのKDELを含む。HPV16 E7タンパク質は、融合タンパク質によって免疫化される対象の細胞内においてエピトープに加工される。RAP1-CD28convPEt-E7-K3は、抗原だけを有する従来のワクチンよりも良好な細胞障害性T細胞(CTL)反応を誘導することができる。RAP1-CD28convPEt-E7-K3タンパク質は、APC(例えば樹状細胞)取り込み効率を上げて、プロテアソーム経路、そしてMHC I複合体を経て提示する、HPV16 E7抗原処理を向上させるように設計した。ワクチンRAP1-CD28convPEt-E7-K3によって誘導されるHPV16 E7タンパク質特異的CTL免疫反応の作用メカニズムは、図7に示しており、(a)ワクチンは、APC(例えば樹状細胞)表面受容体(CD91)に結合して、エンドサイトーシスを介して内在化する(b1)、RAP1-CD28convPEt-E7-K3は、トランスロケーションペプチドPEt前のサイトにおいてカテプシンLプロテアーゼ消化によってタンパク質加水分解を受ける(b2)、又はE.R.にリサイクルして、トランスロケーションペプチドPEt前のサイトにおいてフーリンプロテアーゼによってタンパク質加水分解を受ける(b3)。その間に、RAP1-CD28convは、リソソームプロテアーゼによって消化され、そして、CD28convのエピトープがMHC IIを介して細胞表面に提示され、CD28アゴニスト抗体産生を誘導する。これは、T細胞をプレ活性化させることができる。(c)最も重要なステップは、トランスロケーションペプチド(PEt)によるリソソーム由来の細胞質区画へのPEt-E7-K3の膜貫通トランスロケーションであり、(d)PEt-E7-K3は、プロテアソーム経路を介して消化を受けて、そして、E7のエピトープはMHC I複合体によって提示され、E7特異的細胞性免疫反応を誘導する。
図8は、様々な種由来のCD28保存領域の配列アライメント及びコンセンサス配列を示す。コンセンサス配列中の下線を引いた配列(KIEVMYPPPY;配列番号: 32、X2はIであり、X4はVであり、X5はMである)は、CD28アゴニスト抗体認識及び結合のための臨界領域である。この臨界領域配列は、K1(I/L)2E3(V/F/A)4(M/L)5Y6P7P8P9Y10によって表すことができ、その中の第四アミノ酸残基だけは、種特異的であり、ヒト、ラット、ブタ、ウシ、ヒツジ、イヌ及びウマにおいてV、マウスにおいてF及びシチメンチョウおいてVでなければならない。臨界領域配列は、K1(X)2E3(X)4(X)5Y6P7P8P9Y10(配列番号:32)として表すことができ、(X)2はI又はLであり、(X)4はV、F又はAであり、(X)5はM又はLである。
PEtは、配列番号:3又は20と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含むことができる。例えば、PEtのアミノ酸配列は、PEのa.a.280 - a.a.313(配列番号: 3)、a.a.268 - a.a.313(配列番号: 20)、a.a.253 - a.a.313又はa.a.253 - a.a.364(配列番号: 4)であってもよい。すなわち、PEtのアミノ酸配列は、a.a.280-a.a.313(配列番号: 3)必須断片を含む限り、PEドメインII(a.a.253〜a.a.364;配列番号:4)の任意の領域を含むことができる。
抗原は、病原体によって引き起こされる疾患の原因となる、又は、病原体によって感染している宿主の免疫学的反応を誘導することができる病原性タンパク質、ポリペプチド又はペプチド、又は、具体的には、腫瘍細胞において特異的に発現したポリペプチドである腫瘍関連抗原(TAA)であってもよい。抗原は、ヒトパピローマウイルス(HPV)、PRRSV、HIV-１、インフルエンザウイルス、デングウイルス、肝炎Cウイルス(HCV)、肝炎Bウイルス(HBV)、ブタサーコウイルス2(PCV2)、非小細胞肺がん、乳がん、メラノーマ、リンパ腫、結腸がん、肝細胞がん及び任意のそれらの組み合わせを含むがこれに限定されない病原体又はがん細胞から選択することができる。例えばHPV E7タンパク質(E7)、HCVコアタンパク質(HCVコア)で、ある、HBV Xタンパク質(HBx)を、ワクチン開発のための抗原として選択した。抗原は、1又は複数の病原性タンパク質から選択される2以上の抗原の融合由来の融合抗原であってもよい。例えば、PRRSV ORF6及びORF5断片の融合抗原又はPRRSV及びPCV2病原体由来の抗原タンパク質の融合。
小胞体リテンション配列の機能は、エンドサイトーシス区画からERへの抗原のトランスロケーションを促進することであり、それをルーメンに保持する。これは、配列Lys Asp Glu Leu(KDEL)又はRDELを有する。ER配列は、KKDLRDELKDEL(配列番号: 16)、KKDELRDELKDEL(配列番号: 17)、KKDELRVELKDEL(配列番号: 18)の配列からなる、から本質的になる、又は含むことができる。
39kDaの分子量を有する受容体関連タンパク質(RAP1)は、LDL受容体関連タンパク質に関する分子シャペロン及びERタンパク質である。これは、CD91に対する高結合親和性(Kd〜3nM)を有し、3つの機能が類似するドメインによって構成される。
本発明は、本発明の融合タンパク質によるT細胞性免疫反応の向上及び誘導の発見に関する。一実施例としてRAP1-CD28convPEt-E7-K3を用いたRAP1-CD28convPEt-E7-K3ワクチンの戦略は、標的抗原E7発現HPV16感染細胞を認識することができるT細胞の生産及び活性化を刺激することに主に焦点をおいている。抗原を樹状細胞に送達することによって、抗原特異的CD8+ T細胞及びCD4+ T細胞を生産することができる。１型-ヘルパーCD4+ T細胞は、特に、細胞毒性CD8+ T細胞の免疫反応を効率的に刺激して増やすことが可能である。共に、適応免疫系のこれら2つのアームは、著しい損傷を正常組織に与えることなく、身体における複数の部位でHPV16-感染細胞又はHPV16関連腫瘍細胞を殺す特異性及び力価を有する。
「対象」という用語は、ヒト又は非ヒト動物をいう。
「治療」又は「処置」という用語は、疾患、その症状又はその素因の治癒、緩和、軽減、救済、寛解又は予防の目的で、有効量の融合タンパク質を、それを必要とする対象(上記対象はがん又は感染、又はかかる疾患に対する症状又は素因を有する)に投与することを指す。かかる対象は、任意の適切な診断法からの結果に基づいて健康ケアの専門家によって同定することができる。
「有効量」という用語は、治療対象に治療効果を与える必要がある有効化合物の含量を指す。有効量は、当業者が認識している通り、他の治療薬との共同使用の可能性に応じて変化するだろう。
略称: CD 28(分化抗原群28)。
本発明の範囲を制限する意図なしに、本発明の実施形態による例示的な機器、装置、方法及びそれらの関連結果を以下に示す。表題又は副題は、読者の便宜のために実施例に使用しているが、本発明の範囲を決して制限してはならないことに注意されたい。さらに、ある種の理論が提唱されており、本願明細書に開示している。しかしながら、正しいか間違っているかどうかに関係なく、任意の特定の理論又は作用のスキームに関係なく本発明によって実施される限り、本発明の範囲を決して制限してはならない。
実施例1
発現ベクターの構造
図1は、融合タンパク質RAP1-PE268-313-E7-K3の発現ベクターを示す。これは、RAP1ドメイン3(配列番号:5)、トランスロケーション最小必須ペプチド(PE268-313;配列番号:20)、抗原E7及び小胞体リテンション配列(K3又はKDELシグナル;配列番号:16、17、18、又は19)を含む。トランスロケーション最小必須ペプチド(PE268-313;配列番号:20)は、a.a.268からa.a.313のPE(配列番号:10)ポリペプチド配列領域から得られた。
この発現ベクターは、図10に示されるプラスミドRAP1-K3を用いて構成した。プラスミドRAP1-K3(図10)は、RAP-1ドメイン3及びK3の融合遺伝子を含むものであり、以下のようにして生成した。NdeIRAP1-(EcoRI、XhoI)-K3XhoIをエンコードしているDNA断片を、PCR方法によって合成して、カナマイシン耐性遺伝子を有するプラスミドpUC18主鎖に結合し、プラスミドRAP1-K3(図10)を得た。発現ベクターRAP1-PE268-313-E7-K3(図1)の作成のために、PE268-313-E7をエンコードしているDNA断片を、プラスミドRAP1-K3(図10)に挿入した。同様の方法を用いて、様々な融合ペプチドをエンコードしているDNA断片を、PCR(図11)によって作成して、それぞれをプラスミドRAP1-K3(図10)に挿入し、様々な融合タンパク質の発現ベクター(図12A-F)を作成した。図3は、融合タンパク質RAP1-CD28convPEt-E7-K3(図3)の発現ベクターを示している。
断片CD28convPEtは、カテプシンL及びフーリンプロテアーゼ切断サイトを含む。図4は、融合タンパク質RAP1-CD28convPEt-E7-K3のアミノ酸配列マップを示し、断片CD28convPEtの重要性を示している。2本の矢は、それぞれ、カテプシンL及びフーリンプロテアーゼ切断サイトを示している。これらの2つの切断サイトは、CD28convとPEt-E7を結合するためのリンカーの役割を果すだけでなく、融合タンパク質の切断がリソソームから細胞質への断片PEt-E7-K3の放出も可能になる。様々な病原体由来の関心のある任意の他の抗原は、E7に代えて、CD28convPEtと融合することができ、そして、融合産物を図10のプラスミドに挿入して、図11に示す融合タンパク質に関する様々な発現ベクターを作成することができる。
PE268-313の配列は、pletftrhrqprgweqleqcgypvqrlvalylaarlswnqvdqvir(配列番号:20)である。CD28convPEtの全配列は、以下の通りである: tdiyfckiefmypppyldneksngtiihrarykrgweqleqcgypvqrlvalylaarlswnqvdqvirgs(配列番号:30)。下線の配列は、カテプシンL及びフーリンプロテアーゼ切断サイトを含むリンカー配列を表す。
実施例2
タンパク質発現
タンパク質発現ベクターを含む大腸菌BL21細胞を、25μg/mlのカナマイシンを含むルーリアベルターニブロス中で37℃で培養した。培養が初期対数期(A600=0.1から0.4)に到達すると、誘導のためにイソプロピル-1-チオ-β-D-ガラクトピラノシド(IPTG)を0.5〜2mMの終濃度で加えた。IPTG誘導の4時間後、細胞を回収して、超音波処理によって破壊した。過剰発現タンパク質含有封入体を単離して、8Mの尿素/TN緩衝液(8Mの尿素、50mMのトリス、50mMのNaCl、pH 8.0)に可溶化した。
融合タンパク質RAP1-PE268-313-E7-K3のリフォールディングは、4℃で一晩、50X体積のTNZ緩衝液(50mMのトリス、50mMのNaCl及び0.01mMのZnCl2、pH8.0)において透析によって実行した。リフォールディングしたタンパク質を、還元(ジチオトレイトール;+DTT)条件及び非還元(ジチオトレイトールなし;-DTT)条件下でSDS-PAGE分析を行った。この結果から、ほとんどのリフォールディングタンパク質は還元条件下で単量体であることが示されたことから、RAP1融合タンパク質は容易にリフォールディングされ、凝集されなかったことが示された(図2)。
図6Aは、(マウスCD28conv又はヒトCD28convを有する)融合タンパク質RAP1-CD28PEt-E7-K3を発現させて、大腸菌細胞の封入体から抽出することを示す流れ図である。SDS-PAGE分析から、融合タンパク質がよくリフォールディングされていることが示された(図6B)。
図11は、上述の方法と類似の方法を使用して発現された融合タンパク質のリストを示している。(1)RAP1-PE268-313-E7-K3;(2)RAP1-CD28convPEt-E7-K3;(3)RAP1-CD28PEt-E718-K3;(4)RAP1-HCVコア-K3;(5)RAP1-CD28conv-HCVコア-K3;(6)RAP1-CD28convPEt-HCVコア-K3;(7)RAP1-HBx;(8)RAP1-HBx-K3;(9)RAP1-CD28conv-HBx;(10)RAP1-CD28conv-HBx-K3;(11)RAP1-CD28convPEt-HBx;(12)RAP1-CD28convPEt-HBx-K3;(13)RAP1-PCV2ORF2-K3;(14)RAP1-PE268-313-PCV2ORF2-K3;(15)RAP1-CD28convPEt-PCV2ORF2-K3;(16)RAP1-PE268-313-DGD-K3;(17)RAP1-PE268-313-M12-K3;(18)RAP1-PE268-313-PQAB-K3;(19)RAP1-PE268-313-RSAB-K3;(20)RAP1-CD28convPEt-DGD-K3;(21)RAP1-CD28convPEt-M12-K3;(22)RAP1-CD28convPEt-PQAB-K3;(23)RAP1-CD28convPEt-RSAB-K3。これらの融合タンパク質は、上述の方法と同じ方法を使用して、リフォールディングさせた。SDS-PAGE分析の結果から、これらの融合タンパク質は、よくリフォールディングされたことから、ワクチン作成に用いた(図12A-F)。
実施例3
RAP1-PE268-313-E7-K3は、ヒトパピローマウイルス(HPV)タイプ16 E7タンパク質によって誘導される腫瘍の成長を阻害する。
融合タンパク質PE407-E7-K3及びRAP1-PE268-313-E7-K3は、上記の通りに発現させて、SDS-PAGE(図5B)によってタンパク質リフォールディングを検討した。s.c.注射を介して2×103のTC-01細胞(HPVタイプ16 E7遺伝子を含むマウス肺上皮細胞株)をマウスに投与して、HPV-16タイプ上皮性悪性腫瘍を誘導した。TC-01細胞投与の12日後、1週1回を3週間、アジュバントとしてのAS04C(グラクソスミスクライン)と共に、プラセボ(PBS+リン酸アルミニウム)、PE407-E7-K3(200μg/投与)又はRAP1-PE268-313-E7-K3(200μg/投与)をs.c.にてマウスにワクチン接種した(図5A)。AS04Cは、細胞毒性Tリンパ球向上アジュバントであり、MPL(モノホスホリルリピドA、免疫強化剤)及びリン酸アルミニウム(抗原デリバリーのためのタンパク質吸着剤)を含む。「K3」という用語は、アミノ酸配列KDELKDELKDEL(配列番号:19)を表す。各群における腫瘍のサイズ及び腫瘍がない動物の数を記録した(図5C-D)。腫瘍成長は、アジュバントとしてのAS04Cを有するワクチンPE407-E7-K3及びRAP1-PE268-313-E7-K3によって著しく抑制された。しかしながら、RAP1-PE268-313-E7-K3によるワクチン接種を受けたマウス群は、腫瘍がないマウスの割合が高かった。これは、ワクチンRAP1-PE268-313-E7-K3は、腫瘍成長の抑制についてPE407-E7-K3と同じくらい有効又はそれよりも有効であるが、腫瘍がない動物のパーセンテージはより増加することを示している。
実施例4
RAP1-CD28convPEt-E7-K3は、ヒトパピローマウイルス(HPV)タイプ16 E7タンパク質によって誘導された腫瘍の成長を阻害して、生存率を増加させる。
腫瘍サイズ及び生存率について、免疫強化剤の有無での融合タンパク質PE407-E7-K3及びRAP1-CD28convPEt-E7-K3の効果を検討した。マウスは、s.c.注射を経て高用量のTC-01細胞(3x104)を投与した。投与の7日後、1週1回を3週間、免疫強化剤GPI-0100又はタンパク質吸着性リン酸アルミニウムと共に、プラセボ、PE407-E7-K3(100μg/投与)又はRAP1-CD28convPEt-E7-K3(100μg/投与)をs.c.にてワクチン接種した(図9A)。GPI-0100は、Th1/CTL刺激アジュバント(免疫強化剤)である。各群における腫瘍のサイズ及び生残率を記録した(図9B-C)。アジュバントGPI-0100と組み合わせると、PE407-E7-K3及びRAP1-CD28convPEt-E7-K3の両方は、腫瘍成長を抑制した。予想外に、腫瘍成長を阻害するRAP1-CD28convPEt-E7-K3の効果がアジュバントに依存していないということを発見した。アジュバントGPI-0100よりもむしろ吸着性リン酸アルミニウムと組み合わせると、RAP1-CD28convPEt-E7-K3は、免疫強化剤GPI-0100と組み合わせた時と同じ力価にて腫瘍成長を更に著しく抑制することができた(図9B、非中塗り三角形対中塗り逆三角形)。
対照的に、腫瘍成長を抑制するPE407-E7-K3の力価は、アジュバント次第であった。吸着性リン酸アルミニウムと組み合わせると、PE407-E7-K3は、免疫強化剤GPI-0100と組み合わせたときよりも低い力価になった(図9B、中塗り正方形対非中塗り円)。
一方では、免疫強化剤GPI-0100又は吸着性リン酸アルミニウムと組み合わせて、RAP1-CD28convPEt-E7-K3を投与したマウスは、GPI-0100又はリン酸アルミニウム組み合わせて、PE407-E7-K3をワクチン接種した群よりも生存率が良好であった(図9C)。このことから、RAP1-CD28convPEt-E7-K3は、免疫強化剤GPI-0100がなくてもTh1/CTL免疫反応を引き出すことができることが示された。この結果は、融合タンパク質RAP1-CD28convPEt-E7-K3が動物の生存率を増加させるワクチンとしてPE407-E7-K3よりも優れていることも示した。
実施例5
免疫原性アッセイ
様々なワクチンの免疫原性を試験した。簡潔にいえば、マウスを以下の群に分けた。HPV16 E7、HPV 18 E7、HCVコア、HBV HBx、PCV2 ORF2及びPRRSV(図13A)。各群をサブ群に更に分けて、1週1回を3週間間、病原体の1又は複数のある種の抗原を標的にするように設計したワクチン又はプラセボを各サブ群にs.c.を経て投与した(図13B)。PRRSVを標的にしたワクチンを除いて、各ワクチンは、単一の融合タンパク質及び吸着性リン酸アルミニウムから構成した。単一の融合タンパク質は、少なくとも病原体の抗原を含むこととした。抗原は、病原体由来の全長タンパク質又は病原体の抗原の少なくとも一つのエピトープを含む若しくは2以上の抗原の融合ペプチドである非全長タンパク質とした。各抗原は、病原体の種々のタンパク質から選択した。
免疫化スケジュール、ワクチン及び用量を図13A-Bに示している。簡潔にいえば、マウスは、図13Aにリストしたワクチンを用いて、1周間に1回を3週間、ワクチン接種を受けさせた。全てのマウスは、最後の免疫の7日後に屠殺して、脾臓を回収した。脾細胞を単離して、10μg/mlの各病原体の組み換え抗原と共に6ウェルプレートで培養(2x107細胞/2ml/ウェル)し、37℃で16時間、1μg/ml GolgiPlug(BD Pharmingen、サンディエゴ、CA)の存在下で脾細胞を刺激した。
刺激した脾細胞を、FACScan緩衝液にて洗浄して、細胞表面マーカーCD8a、CD4及びCD3を、フィコエリトリン共役モノクローナルラット抗マウスCD8a、AF700共役モノクローナルラット抗マウスCD4及びAF647共役モノクローナルラット抗マウスCD3抗体で染色した。次に、細胞を、製造業者(BD Pharmingen)の指示に従ってCytofix/Cytopermキットによって透過処理して固定した。細胞内IFN-γを、AF488共役ラット抗マウスIFN-γで着色して、免疫反応及びサイトカインレベルを測定した。Kaluza分析ソフトウェア(ベックマンクールター)用いたガリオフローサイトメトリーを使用してフローサイトメトリー分析を実施した。
以下のPRRSVワクチンにおける免疫原性を試験した:PE407-PRRSV-K3、RAP1-PE268-313-PRRSV-K3又はRAP1-CD28convPEt-PRRSV-K3ワクチン。各ワクチンは、4つの異なる融合タンパク質の混合物を含ませ、各融合タンパク質は、DGD、M12、PQAB及びRSABからなる群より選択される種々の抗原を含ませた(図13A)。マウスのワクチン接種及び脾細胞の刺激は、上記方法と類似の方法を使用して実施した。簡潔にいえば、全てのマウスは、最後の免疫の7日後に屠殺して、脾臓を回収した。脾細胞を単離して、10μg/mlの組換え型DGD、M12、PQAB又はRSAB抗原と共に別々に6ウェルプレートで培養(2x107細胞/2ml/ウェル)し、37℃で16時間、1μg/ml GolgiPlug(BD Pharmingen、サンディエゴ、CA)の存在下で脾細胞を刺激した。
「DGD」のアミノ酸配列(配列番号:26)は、以下の通りである:
DGDは、PRRSV ORF7 a.a.64 - a.a.123(太字)、リンカー(下線)及びORF7 a. a.64 - a.a.123(太字)の融合抗原を表す。
「M12」という用語は、PRRSV ORF1b a.a.1046 - a.a.1210の抗原を表す。そのアミノ酸配列(配列番号:27)は、以下の通りである:
NNKECTVAQALGNGDKFRATDKRVVDSLRAICADLEGSSSPLPKVAHNLGFYFSPDLTQFAKLPIELAPHWPVVSTQNNEKWPDRLVASLRPLDKYSRACIGAGYMVGPSVFLGTPGVVSYYLTKFVKGEAQVLPETVFSTGRIEVDCREYLDDREREVAASLPH。
「PQAB」のアミノ酸配列(配列番号:28)は、以下の通りである:
GSSLDDFCYDSTAPQKVLLAFSITYASNDSSSHLQLIYNLTLCELNGTDWLANKFDWA。
PQABは、PRRSVアメリカン株ORF6 a.a.2 - a.a.26及びORF5 a.a.31 - a.a.63(下線)の融合抗原を表す。
RSABのアミノ酸配列は、MGSLDDFCNDSTAAQKLVLAFSITYTPIFVAGGSSSTYQYIYNLTICELNGTDWLSNHFDWA(配列番号: 29)である。「RSAB」という用語は、PRRSVヨーロピアン株ORF6 a.a.2-28及びORF5 a.a.31-64(下線)の融合抗原を表す。
実施例6
融合タンパク質RAP1-CD28convPEt-E7-K3のRAP1ドメイン3の断片を、A2Mミニマム(配列番号:6)、HIV-Tatミニマム(配列番号:7)又はHSPミニマム(配列番号:8)と置き換えて、融合タンパク質A2M-CD28convPEt-E7-K3、Tat-CD28convPEt-E7-K3及びHSP-CD28convPEt-E7-K3ワクチンをそれぞれ生成する。これらのワクチンによって向上した細胞性免疫反応及びTC-1腫瘍抑制活性は、上記方法と類似の方法を使用して検討する。表1は、様々な融合タンパク質の構成成分の配列番号を示している。表2は、動物のT細胞性免疫応答に対する効果に関して試験した融合タンパク質及び抗原の配列を示している。
免疫原性アッセイにおいて、様々なワクチンによって誘導される抗原特異的細胞性免疫応答は、CD3+/CD4+/IFNγ+の数及び脾細胞のCD3+/CD8+/IFNγ+ T細胞を測定することによって評価した。この結果から、ワクチンRAP1-CD28convPEt-抗原-K3が強いT細胞反応を誘導できることが示された。図14Bは、CD28convPEt-E718-K3によって誘導されるCD3+/CD4+/IFNγ+ T細胞数及びCD3+/CD8+/IFNγ+ T細胞数は、それぞれ、RAP1-K3の約50倍及び9倍超であったことを示している。
ワクチンRAP1-CD28convPEt-抗原-K3は、T細胞性免疫原性を引き出す点でPE407-抗原-K3より優れている。例えば、図14Aは、CD28convPEt-E716-K3によって誘導されるCD3+/CD4+/IFNγ+ T細胞数及びCD3+/CD8+/IFNγ+ T細胞数は、それぞれ、PE407-E716-K3の約5倍及び7倍であった。これは、ワクチンRAP1-CD28convPEt-E7-K3は、PE407-E7-K3よりも細胞性免疫原性が良好であることを示している。
RAP1ドメインIII、トランスロケーションペプチドPEtなしの単独感作シグナルCD28conv、抗原及びERリテンションシグナルを含む融合タンパク質は、選択した抗原が10個又は10個超のエピトープを含む場合、強い抗原特異的T細胞性免疫反応を誘導するには充分である。図14Cは、ワクチンRAP1-CD28conv-HCVコア-K3が、CD3+/CD4+/IFNγ+の数及びCD3+/CD8+/IFNγ+ T細胞の数がそれぞれプラセボ群の20倍及び7.6倍、T細胞反応を誘導することを示している。抗原HCVコアは、11個の周知のMHC Iエピトープを含む。
ERリテンションシグナルは、強い細胞性免疫原性を誘導するのに、本発明の融合タンパク質にとって必須でないことは予想外であった。言い換えると、ERリテンション配列がなくても、本発明の融合タンパク質は、強いT細胞反応を更に誘導することができる。図14Dは、RAP1-CD28convPEt-HBx(ERリテンションシグナルK3なし)によって誘導されるCD3+/CD4+/IFNγ+及びCD3+/CD8+/IFNγ+ T細胞の数は、プラセボ群の7倍及び74倍であったことを示している。
対照的に、米国特許番号7378100B2及び7335361において、ERリテンションシグナルK3は、T細胞反応を誘導するためにPE関連融合タンパク質(PE407-抗原-K3)に不可欠であることを示している。
RAP1ドメインIII、トランスロケーションペプチドPE218-313(感作用シグナルCD28convなし)、抗原及びERリテンションシグナルを含む融合タンパク質がRAP1ドメインIIIを含まないPE関連融合タンパク質よりも優れているということも発見した。図15C-Jは、ワクチンRAP1-PE268-313-PRRSV-K3は、ワクチンPE407-PRRSV-K3よりも大きいCD3+/CD4+/IFNγ+及びCD3+/CD8+/IFNγ+ T細胞計数を誘導したことを示している。
本発明の例示的な実施形態に関する前述の説明は、図示及び説明の目的のためだけに示しており、網羅的であったり開示される厳密な形態に本発明を制限したりすることを意図するものではない。上記説明の観点から多くの修正形態及び変更形態が可能である。実施形態及び実施例は、本発明及びそれらの実用的な応用の原理を説明する目的で選択し記載しており、他の当業者が本発明及び各種実施形態を、予想される特定の用途に適している各種変更形態を伴って利用することができるようにしている。代わり実施形態は、その趣旨及び範囲を逸脱しない範囲内で、関係する当業者にとって明らかになるだろう。従って、本発明の範囲は、ここで記載されている前述の記述及び例示的な実施形態よりは、むしろ添付の特許請求の範囲によって規定される。
発明の開示
一つの態様では、本発明は、融合タンパク質であって、上記融合タンパク質は、
(a) 上記融合タンパク質のN末端に位置する、抗原提示細胞(APC)-結合ドメイン又はCD91受容体-結合ドメイン；
(b) 上記APC-結合ドメイン又は上記CD91受容体-結合ドメインのC末端に位置するタンパク質トランスダクションドメインであって、
(i) T細胞感作シグナル伝達ペプチド、リンカー及びトランスロケーションペプチドを含む融合ポリペプチドであって、
(1) 上記T細胞感作シグナル伝達ペプチドは、上記融合ポリペプチドのN末端に位置し、
(2) 上記リンカーは、配列番号:15を含み、且つ、上記T細胞感作シグナル伝達ペプチドとトランスロケーションペプチドとを結合し、
(3) 上記トランスロケーションペプチドは、長さ34-112のアミノ酸残基を有し、配列番号:3、20又は4と少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含む、融合ポリペプチドと、
(ii) T細胞感作シグナル伝達ペプチドと、
(iii) 配列番号:3又は20と少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含む、長さ34-46のアミノ酸残基のトランスロケーションペプチドからなる群より選択される上記タンパク質トランスダクションドメイン；及び、
(c) 上記タンパク質トランスダクションドメインのC末端に位置する、病原体の抗原；を含み、
上記T細胞感作シグナル伝達ペプチドは、長さ28-53のアミノ酸残基を有し、配列番号:31のアミノ酸配列を含み、Xaa8はI又はLであり、Xaa10はV、F又はAであり、Xaa11はM又はLであり、Xaa17はL又はIであり、
上記APC-結合ドメイン又は上記CD91受容体-結合ドメインは、上記タンパク質トランスダクションドメインが上記トランスロケーションペプチド(biii)である場合、シュードモナスエキソトキシンA(PE)結合ドメインIのアミノ酸配列を有さない、融合タンパク質に関する。
本発明の別の実施形態において、上記トランスロケーションペプチドは、配列番号:3のアミノ酸配列を含む。
別の態様においては、本発明は、融合タンパク質であって、上記融合タンパク質は、
(a) 上記融合タンパク質のN末端に位置するCD91受容体-結合ドメイン又は抗原提示細胞(APC)-結合ドメイン；
(b) 上記APC-結合ドメイン又はCD91受容体-結合ドメインのC末端に位置するタンパク質トランスダクションドメインであって、
(i) T細胞感作シグナル伝達ペプチド、リンカー及びトランスロケーションペプチドを含む融合ポリペプチドであって、
(1) T細胞感作シグナル伝達ペプチドは、上記融合ポリペプチドのN末端に位置し、
(2) 上記リンカーは、配列番号:15を含み、且つ、上記T細胞感作シグナル伝達ペプチドとトランスロケーションペプチドとを結合し、
(3) 上記トランスロケーションペプチドは、長さ34-112のアミノ酸残基を有し、配列番号:3、20又は4と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含む、融合ポリペプチドと、
(ii) T細胞感作シグナル伝達ペプチドと、
(iii) 配列番号:3又は20と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含む、長さ34-46のアミノ酸残基のトランスロケーションペプチドからなる群より選択されるタンパク質トランスダクションドメイン；及び、
(C) 上記タンパク質トランスダクションドメインのC末端に位置する病原体の抗原；、からなり、
上記T細胞感作シグナル伝達ペプチドは、長さ28-53のアミノ酸残基を有し、配列番号:31のアミノ酸配列を含み、Xaa8はI又はLであり、Xaa10はV、F又はAであり、Xaa11はM又はLであり、Xaa17はL又はIであり、
上記タンパク質トランスダクションドメインがトランスロケーションペプチド(biii)である場合、上記APC-結合ドメイン又はCD91受容体-結合ドメインは、シュードモナスエキソトキシンA(PE)ドメインIのアミノ酸配列を有さない。
本発明は、病原体抗原特異的T細胞反応の向上を誘導するための、又は、疾患細胞の細胞膜上のクラスI MHC分子を介して抗原を提示する疾患細胞を殺すための、又は、病原体によって引き起こされる感染を予防する、治療する、若しくは、感染によって引き起こされる症状を最小限にするための、上記融合タンパク質又はワクチン組成物にも関する。
「PEt」又は「PE t コア」という用語は、長さ34のアミノ酸残基を有するPEトランスロケーションドメインコアを指す。
PEトランスロケーションペプチドは、配列番号:3又は20と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含むことができる。例えば、PEトランスロケーションペプチドのアミノ酸配列は、PEのa.a.280 - a.a.313(配列番号: 3)、a.a.268 - a.a.313(配列番号: 20)、a.a.253 - a.a.313又はa.a.253 - a.a.364(配列番号: 4)であってもよい。すなわち、PEトランスロケーションペプチドのアミノ酸配列は、a.a.280-a.a.313(配列番号: 3)必須断片を含む限り、PEドメインII(a.a.253〜a.a.364;配列番号:4)の任意の領域を含むことができる。


Claims (20)

  1. 融合タンパク質であって、上記融合タンパク質は、
    (a) 上記融合タンパク質のN末端に位置する、抗原提示細胞(APC)-結合ドメイン又はCD91受容体-結合ドメイン；
    (b) 上記APC-結合ドメイン又は上記CD91受容体-結合ドメインのC末端に位置するタンパク質トランスダクションドメインであって、
    (i) T細胞感作シグナル伝達ペプチド、リンカー及びトランスロケーションペプチドを含む融合ポリペプチドであって、
    (1) 上記T細胞感作シグナル伝達ペプチドは、上記融合ポリペプチドのN末端に位置し、
    (2) 上記リンカーは、配列番号:15を含み、且つ、上記T細胞感作シグナル伝達ペプチドとトランスロケーションペプチドとを結合し、
    (3) 上記トランスロケーションペプチドは、長さ34-112のアミノ酸残基を有し、配列番号:3、20又は4と少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含む、融合ポリペプチドと、
    (ii) T細胞感作シグナル伝達ペプチドと、
    (iii) 配列番号:3、20又は4と少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含む、長さ34-112のアミノ酸残基のトランスロケーションペプチドからなる群より選択される上記タンパク質トランスダクションドメイン；及び、
    (c) 上記タンパク質トランスダクションドメインのC末端に位置する、病原体の抗原；を含み、
    上記T細胞感作シグナル伝達ペプチドは、長さ28-53のアミノ酸残基を有し、配列番号:31と少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含み、Xaa8はI又はLであり、Xaa10はV、F又はAであり、Xaa11はM又はLであり、Xaa17はL又はIであり、
    上記APC-結合ドメイン又は上記CD91受容体-結合ドメインは、上記タンパク質トランスダクションドメインが上記トランスロケーションペプチド(biii)である場合、シュードモナスエキソトキシンA(PE)結合ドメインIのアミノ酸配列を有さない、融合タンパク質。
  2. 前記APC-結合ドメイン又は前記CD91受容体-結合ドメインは、配列番号: 5、9、6、7及び8からなる群より選択される配列と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドである、請求項1に記載の融合タンパク質。
  3. 前記融合タンパク質のC末端に位置する小胞体リテンション配列を更に含む、請求項1に記載の融合タンパク質。
  4. 前記小胞体リテンション配列は、Lys-Asp-Glu-Leu(配列番号: 14)のアミノ酸配列を含む、請求項3に記載の融合タンパク質。
  5. 前記抗原が10個又は10個超のエピトープを含む場合、前記融合タンパク質は、そのC末端に前記小胞体リテンション配列を含まない、請求項1に記載の融合タンパク質。
  6. 前記タンパク質トランスダクションドメインは、前記融合ポリペプチド(bi)である、請求項1に記載の融合タンパク質。
  7. 前記タンパク質トランスダクションドメインは、前記T細胞-感作シグナル伝達ペプチド(bii)である、請求項1に記載の融合タンパク質。
  8. 前記タンパク質トランスダクションドメインと前記抗原との間に追加のリンカーを更に含み、前記追加のリンカーは、配列番号:15を含む、請求項7に記載の融合タンパク質。
  9. 前記タンパク質トランスダクションドメインは、前記トランスロケーションペプチド(biii)である、請求項1に記載の融合タンパク質。
  10. 前記APC-結合ドメイン又は前記CD91受容体-結合ドメインと前記トランスロケーションペプチドと間に追加のリンカーを更に含み、前記追加のリンカーは、配列番号:15を含む、請求項9に記載の融合タンパク質。
  11. 前記タンパク質トランスダクションドメインは、配列番号:30の配列を有する、請求項1に記載の融合タンパク質。
  12. (a) 請求項1に記載の治療的有効量の融合タンパク質と、
    (b) アジュバントを含む、ワクチン組成物。
  13. 前記APC-結合ドメイン又は前記CD91受容体-結合ドメインは、配列番号: 5、9、6、7及び8からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドである、請求項1に記載の融合タンパク質。
  14. 前記T細胞感作シグナル伝達ペプチドは、配列番号:1又は2と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の融合タンパク質。
  15. 前記T細胞感作シグナル伝達ペプチドは、配列番号:1及び2からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項14に記載の融合タンパク質。
  16. 前記トランスロケーションペプチドは、配列番号:3、20及び4からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の融合タンパク質。
  17. 病原体抗原特異的T細胞反応の向上を誘導するために使用する、請求項1から16のいずれかに記載の融合タンパク質又はワクチン組成物。
  18. 疾患細胞の細胞膜上のクラスI MHC分子を介して抗原を提示する疾患細胞を殺すために使用する、請求項1から17のいずれかに記載の融合タンパク質又はワクチン組成物。
  19. 前記疾患細胞は、がん細胞である、請求項18に記載の使用のための、融合タンパク質又はワクチン組成物。
  20. 病原体によって引き起こされる感染を予防する、治療する、及び/又は、感染によって引き起こされるを症状を最小限にするために使用する、請求項1から19のいずれかに記載の融合タンパク質又はワクチン組成物。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2019531292A (ja) * 2016-09-19 2019-10-31 ザヴァックス ジェネティクス ワクチン カンパニー リミテッドＴｈｅｖａｘ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｃｏ．， Ｌｔｄ． Ｂ型肝炎治療ワクチン

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11246915B2 (en) 2010-09-15 2022-02-15 Applied Molecular Transport Inc. Cholix toxin-derived fusion molecules for oral delivery of biologically active cargo
CN109553688A (zh) * 2012-12-05 2019-04-02 生控基因疫苗股份有限公司 用作诱发抗原特异性t细胞反应的免疫原性增强剂的融合蛋白
CN107249629A (zh) * 2015-02-26 2017-10-13 生控基因疫苗股份有限公司 包含免疫原性蛋白质及组合佐剂并用以诱发抗原特异性t细胞反应的疫苗组合物
WO2016196383A1 (en) * 2015-06-01 2016-12-08 Reber Genetics Co., Ltd. Vaccine compositions against porcine reproductive and respiratory syndrome and porcine circovirus associated diseases
JP2018521983A (ja) 2015-07-16 2018-08-09 バイオカイン セラピューティックス リミテッド がんを治療するための組成物および方法
KR102153303B1 (ko) * 2015-11-23 2020-09-09 뵈링거 잉겔하임 애니멀 헬스 유에스에이 인코포레이티드 Fmdv 및 e2 융합 단백질 및 이의 용도
US11186618B2 (en) * 2016-09-21 2021-11-30 The Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University Dendritic-cell-targeted peptide, fusion peptide utilizing said peptide, and vaccine utilizing said fusion peptide
CN107991481A (zh) * 2016-10-27 2018-05-04 武汉科前生物股份有限公司 一种检测猪伪狂犬病毒和口蹄疫病毒的二联阻断elisa抗体检测试剂盒及其应用
CN107937354A (zh) * 2017-11-10 2018-04-20 南京天邦生物科技有限公司 2型猪圆环病毒及其应用
PL3762009T3 (pl) 2018-03-08 2022-09-12 Applied Molecular Transport Inc. Pochodzące z toksyny konstrukty dostarczające do dostarczania doustnego
CN109134667A (zh) * 2018-09-19 2019-01-04 天康生物股份有限公司 融合蛋白及其制备方法、应用、表达系统和疫苗
JP2022512976A (ja) 2018-11-07 2022-02-07 アプライド モレキュラー トランスポート インコーポレイテッド 異種ペイロードの経口送達のためのコリックス由来担体
CN109593136B (zh) * 2018-12-26 2021-03-19 天康生物股份有限公司 禽副粘病毒融合蛋白及其制备方法、应用和用于鸽子的apmv疫苗
KR20220012256A (ko) * 2019-05-24 2022-02-03 프로비바 테라퓨틱스 (홍콩) 리미티드 Il-2 조성물 및 이의 사용 방법
CN110051832B (zh) * 2019-05-31 2020-11-10 四川农业大学 一种犬恶丝虫病疫苗
CN110452928A (zh) * 2019-08-13 2019-11-15 成都天邦生物制品有限公司 一株pk-15稳定细胞株的构建及应用
AU2020329290A1 (en) * 2019-08-13 2022-03-24 Elpis Biopharmaceuticals Engineered interleukin-2 receptor beta agonists
CN110669142B (zh) * 2019-09-30 2021-10-12 湖南农业大学 融合rgd的猪圆环病毒2型病毒样颗粒、突变型感染性克隆及其制备方法和应用
US20230173049A1 (en) * 2019-12-31 2023-06-08 The Johns Hopkins University Fusion proteins and methods of use thereof
CN111548395A (zh) * 2020-05-25 2020-08-18 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种口蹄疫病毒二价多表位重组病毒样颗粒及其应用
KR102507298B1 (ko) 2020-12-21 2023-03-08 충남대학교산학협력단 면역증강을 위한 조성물
CN112812171B (zh) * 2021-01-22 2022-04-08 浙江辉肽生命健康科技有限公司 具有氨基酸结构vvrkplnkegkkp的生物活性肽及其制备方法和应用
CN114539429B (zh) * 2022-03-24 2022-07-29 上海普铭生物科技有限公司 融合蛋白组合物及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004069207A2 (en) * 2003-02-04 2004-08-19 University Of Connecticut Health Center Immunogenic cd91 ligand-antigenic molecule complexes and fusion proteins
WO2004069206A2 (en) * 2003-02-04 2004-08-19 University Of Connecticut Health Center Immunogenic cd91 ligand-antigenic molecule complexes and fusion proteins
US20120213811A1 (en) * 2008-01-31 2012-08-23 Healthbanks Usa Inc. Chimeric hiv fusion proteins as vaccines

Family Cites Families (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US843505A (en) * 1905-10-09 1907-02-05 Alexandre Leonard Tombelaine Safety closing device for miner's lamps.
PT651805E (pt) * 1992-07-17 2007-02-28 Dana Farber Cancer Inst Inc Método de ligação intracelular de moléculas-alvo
US5712149A (en) * 1995-02-03 1998-01-27 Cell Genesys, Inc. Chimeric receptor molecules for delivery of co-stimulatory signals
US6451592B1 (en) * 1996-04-05 2002-09-17 Chiron Corporation Recombinant alphavirus-based vectors with reduced inhibition of cellular macromolecular synthesis
US20050119470A1 (en) * 1996-06-06 2005-06-02 Muthiah Manoharan Conjugated oligomeric compounds and their use in gene modulation
DE19651443A1 (de) * 1996-12-11 1998-06-18 Hoechst Ag Selbstverstärkende, pharmakologisch kontrollierbare Expressionssysteme
US7314632B1 (en) 1997-07-11 2008-01-01 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pseudomonas exotoxin A-like chimeric immunogens
DK1000163T3 (da) * 1997-07-11 2006-02-06 Us Gov Health & Human Serv Pseudomonas-exotoksin A-lignende kimære immunogener
ATE359084T1 (de) * 1998-02-20 2007-05-15 Univ Miami Modifizierter hitzeschockprotein/peptidantigen komplex
WO1999045127A2 (en) * 1998-03-06 1999-09-10 Oxford Biomedica (Uk) Limited Enhanced prodrug activation
US20030215421A1 (en) * 1999-07-21 2003-11-20 Mcdonald John R. Methods and compositions for treating secondary tissue damage and other inflammatory conditions and disorders
US20020061848A1 (en) * 2000-07-20 2002-05-23 Ajay Bhatia Compounds and methods for treatment and diagnosis of chlamydial infection
WO2000049041A1 (fr) * 1999-02-19 2000-08-24 Sumitomo Electric Industries, Ltd. Preparations proteiques
JP4637368B2 (ja) * 1999-04-14 2011-02-23 ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド アルファウイルスに基づくベクター系を利用する免疫応答を生成するための組成物および方法
EP1222289B1 (en) * 1999-10-20 2008-04-16 The Johns Hopkins University School Of Medicine Chimeric immunogenic compositions and nucleic acids encoding them
US8128922B2 (en) * 1999-10-20 2012-03-06 Johns Hopkins University Superior molecular vaccine linking the translocation domain of a bacterial toxin to an antigen
US7030219B2 (en) * 2000-04-28 2006-04-18 Johns Hopkins University B7-DC, Dendritic cell co-stimulatory molecules
CA2453528C (en) * 2001-08-01 2011-07-26 Cellomics, Inc. Novel fusion proteins and assays for molecular binding
US7235631B2 (en) * 2002-02-07 2007-06-26 Mayo Foundation For Medical Education And Research ICOS mutants
WO2004087754A1 (en) * 2003-04-03 2004-10-14 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Broad-spectrum in-vivo effective superantigen toxin antagonists based on the interaction between cd28 and the superantigen and uses thereof
IL164799A0 (en) * 2002-04-25 2005-12-18 Univ Connecticut Using heat shock proteins to improve the therapeutic benefit of a non-vaccine treatment modality
US7595054B2 (en) * 2003-06-09 2009-09-29 Healthbanks Biotech Co., Ltd. Fusion antigen used as vaccine
US7335361B2 (en) 2003-06-09 2008-02-26 Animal Technology Institute Taiwan Fusion antigen used as vaccine
EP1756147A2 (en) * 2004-06-01 2007-02-28 Innogenetics N.V. Peptides for inducing a ctl and/or htl response to hepatitis c virus
JP4474264B2 (ja) * 2004-08-20 2010-06-02 生寶生物科技股▲ふん▼有限公司 子宮頸癌抑制の融合蛋白
WO2006135428A2 (en) * 2004-10-04 2006-12-21 Trinity Biosystems, Inc. Methods and compositions for inducing an immune response against multiple antigens
US7964200B2 (en) * 2005-05-18 2011-06-21 Children's Hospital & Research Center At Oakland Methods and compositions for immunizing against Chlamydia infection
US7465455B2 (en) 2006-07-05 2008-12-16 Healthbanks Biotech Co., Ltd. Fusion protein of porcine reproductive and respiratory syndrome virus as PRRS vaccine
WO2008047243A2 (en) * 2006-08-29 2008-04-24 Forhumantech. Co., Ltd. Pharmaceutical composition for suppression of apoptosis and method for delivering the same
MX2009002893A (es) * 2006-09-18 2009-07-10 Raptor Pharmaceutical Inc Tratamiento de trastornos hepaticos mediante la administracion de conjugados de la proteina asociada al receptor (rap).
US7887801B2 (en) * 2007-07-13 2011-02-15 Topotarget Germany Ag Optimized DNA and protein sequence of an antibody to improve quality and yield of bacterially expressed antibody fusion proteins
WO2009036349A1 (en) * 2007-09-12 2009-03-19 Anaphore, Inc. Hsp70-based treatment for autoimmune diseases
EP2078726A1 (en) * 2008-01-09 2009-07-15 Vision 7 GmbH Secretable HIV entry inhibitory peptides for therapy of HIV infection
WO2010040023A2 (en) * 2008-10-03 2010-04-08 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Methods and compositions for protein delivery
PL391627A1 (pl) * 2010-06-25 2012-01-02 Adamed Spółka Z Ograniczoną Odpowiedzialnością Przeciwnowotworowe białko fuzyjne
CN109553688A (zh) * 2012-12-05 2019-04-02 生控基因疫苗股份有限公司 用作诱发抗原特异性t细胞反应的免疫原性增强剂的融合蛋白

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004069207A2 (en) * 2003-02-04 2004-08-19 University Of Connecticut Health Center Immunogenic cd91 ligand-antigenic molecule complexes and fusion proteins
WO2004069206A2 (en) * 2003-02-04 2004-08-19 University Of Connecticut Health Center Immunogenic cd91 ligand-antigenic molecule complexes and fusion proteins
US20120213811A1 (en) * 2008-01-31 2012-08-23 Healthbanks Usa Inc. Chimeric hiv fusion proteins as vaccines

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2019531292A (ja) * 2016-09-19 2019-10-31 ザヴァックス ジェネティクス ワクチン カンパニー リミテッドＴｈｅｖａｘ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｃｏ．， Ｌｔｄ． Ｂ型肝炎治療ワクチン

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