JP2016500445A - 薄層クロマトグラフィを実施する方法および装置 - Google Patents
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Abstract
Description
薄層クロマトグラフィを実施するのに必要な個々の方法ステップが自動化できる実践から、さらなる発展が知られている。
このことによって、先行する添加操作中に分離層に添加されたサンブルの残留物により、後続のサンプル添加操作が汚染されることを排除することが、基本的に可能になった。
本発明による方法の一実施態様においては、移動相は、移動相添加操作毎に新品のピペットチップ(8、9)を使用して移動相格納容器(16)から採取されて、分離層(14)に添加される。
本発明による方法の一実施態様においては、溶離剤が、各溶離毎に新品のピペットチップ(8、9)を使用して採取されて、評価しようとする分離層(14)の部位に接触させられるとともに、その溶離物は評価装置(20)に供給される。評価装置への供給は、ピペットチップ内に溶離剤を再び採取して、そのピペットチップを使用して溶離剤を評価装置に供給することによって実施するのが好ましい。
別の実施態様においては、評価しようとする分離層(14)の部位は、各溶離毎に新品のピペットチップ(8、9)を使用して、ベース支持体まで密封され、密封部位に位置する吸着剤は溶離剤と接触させられて、形成された溶離物は、再びピペットチップ内に採取されて、評価装置(20)へと供給される。
一実施態様において、支持プレート(15)は、毛細管活性材料を含む接触装置(22)を介して、移動相用の格納容器(16)に接続することが可能である。
一実施態様において、少なくとも2つの異なるタイプのピペットチップ(8、9)が、ピペットチップ(8、9)用の格納容器(7)に格納されている。
一実施態様において、装置(5)は、分離層(14)の部位を分離させるとともに、分離層(14)の切出し部位(separated-out area)を評価ユニット(20)に転送するための、ピペットチップ(8、9)を有する。
本発明によれば、分離層は、吸着剤層がそれに付着されたベース支持体からなる。薄層クロマトグラフィ用の分離層は、TL(thin-layer)プレートとも呼ばれ、当業者に知られている。シリカゲルまたは、アミノ基またはアルキル基などの官能基で誘導体化されたシリカゲルを含むか、または非誘導体化または誘導体化された酸化アルミニウム、珪酸マグネシウム、珪藻土(kieselguhr)、ポリアミドまたはセルロースも含む、吸着剤層が、典型的には、ここでガラス、プラスチックまたはアルミニウムを含む、ベース支持体に付着される。
本発明によれば、添加操作は、それぞれの場合に液体だけが1つの格納容器から除去される、1回または2回以上のピペット操作を含んでもよい。好ましくは、ピペッティングは、添加操作当たり1回、実施されるだけである。しかしながら、例えば、毛細管活性材料を含む接触装置を介して分離層に接続された移動相を収容するための、格納容器を充填する場合には、格納容器の適当な充填深さを生成するために、2回または多数回のピペッティングが必要とすることも可能である。この場合には、同一のピペットチップを使用する、2回または多数回のピペッティングを、1回の添加操作において実施することができる。
オートピペットで1回のみ、または短期間使用するのに適する、様々なピペットチップが、安価に市販されている。サンプルの添加には、典型的には、0.1から10μlの間のサンプル体積のピペッティング用のピペットチップ、例えば、サンプル内に存在するサンプル物質の濃度に応じて、0.1〜2μl、1〜5μl、または10μlまでのピペッティング用のピペットチップが使用される。移動相のピペッティングには、100μlから1mlの間の液体体積に適するピペットチップが使用される。
分離層への十分に正確で精密なサンプルの分注および添加が、好適なピペットチップと組み合わせてオートピペットを使用することにより可能であることが見いだされた。
一実施態様において、移動相添加操作毎に新品のピペットチップを使用して、移動相が移動相格納容器から採取されて、分離層に添加される。この場合に、サンプルを添加するためだけでなく、移動相を直接的に分離層に添加するのにも、オートピペットを使用するのが有利である。様々な物質の、それぞれの場合に異なる量およびその位置決め精度を、ピペットチップを好適に選択することによって支援および加速することができる。移動相が、分離層上に直接的にピペッティングされる場合には、典型的には、円形クロマトグラムが展開される。このために、移動相は、一実施態様においては、先に添加されたサンプルスポット上に直接的にピペッティングされる。毛管力は、円形の移動相フロントを形成させて、サンプルは、円形に外方向に運ばれる。代替的に、複数のサンプルを、分離層に円形にして添加することができる。次いで、移動相が、円の中心に添加されて、円形の移動相フロントを形成し、この移動相フロントが、それぞれの円セグメント内で外向きにサンプルを運ぶ。
スタンプアウトと同様に、疎水性および親水性の分離層にも適している、別の実施態様においては、好ましくはカッティングリング(cutting ring)を設けられたピペットチップが、吸着剤層を介して押圧するのに使用されるとともに、カッティングリングが、ベース支持体から密封するのに使用される。次いで、対応する溶離剤がピペットチップに追加されて、ピペットチップによって画定された吸着剤部位が溶離剤に浸漬されて、溶離される。カッティングリングを備えるピペットチップは、その下方縁が、安定でありながら、分離層の吸着剤層を介してベース支持体上に押圧されて、そこを密封するのに十分に微細であるという特性を有する、ピペットチップである。
本発明思想の別の実施態様によれば、装置は、吸着剤層を貫通して、ベース支持体とともに、それを密封することができる、ピペットチップを有するようにされる。
別の実施態様においては、本発明による装置は、さらに、分離層用の格納容器を有する。この実施態様の好ましい変形形態では、分離層は、格納容器から自動的に除去して、支持プレート上に載せることができる。
本発明を、以下の図面を参照して、より詳細に説明する。
第2の端部領域24は、第2の格納容器16内で回動可能に装着されており、それによって、移動相は、毛管力によって、第2の格納容器16から屈曲した端部領域23中へと連続的に移送される。接触装置22が接触位置にあるとき、またはそこにある限り、移動相は、屈曲した端部領域23を介して、分離層14上へと運ばれる。接触装置22は、勿論のこと、例として示された、説明のための実施態様から逸脱した形状または姿勢を有してもよい。
上記および下記で言及したすべての出願、特許、および刊行物、特に、2012年12月20日出願の対応する出願EP12008479.3の完全な開示内容が、参照により本願に組み込まれる。
完全自動薄層クロマトグラフィの実施に対する説明
この実施例は、NanoMate(登録商標)システム(Advion)および5×5cmプレートフォーマット(Desaga)用の水平チャンバを使用する、完全自動化薄層クロマトグラフィの実施について説明する。NanoMate(登録商標)システムは、質量分析法に結合するためのナノスプレー源(nano spray source)と組み合わせたピペッティングシステムである。水平チャンバは、専用に製作されたアダプタ部によって、NanoMate(登録商標)中に一体化される。水平チャンバに加えて、アダプタ部も、サンプルまたは溶媒の導入に使用することのできる、複数の貯留器を収納する。
層を上向きとして、水平チャンバの支持部にプレートが配置され、サンプルは、貯留器の1つに導入される。当該機器は、サンプルが、新鮮なピペットチップを使用して採取されて、プレート上の対応する位置にピペッテヒングされるようにプログラムされている。
移動相に必要な溶媒が、貯留器に導入される。対応する量の溶媒が、新鮮なピペットチップを使用して常に採取されて、自由貯留器内で合わせられて、混合されるように、当該機器がプログラムされている。混合の後に、当該機器は、移動相の必要量を採取して、それを、水平チャンバの移動相容器中に分注する。移動相は、毛管力によってフリットを介して自動的に吸引されて、プレート材料との接触を介して、分離層中に運ばれて、クロマトグラム展開を、自動的に開始させる。プロマトグラム展開は、移動相が消費されるか、または当該機器が移動相容器から残部をピペッティングすることによって、終了する。
質量分析計への結合は、システムのLESA(登録商標)モードを介して実施される。このために、製造業者からのオリジナルのホルダが、当該機器に導入されるとともに、プレートが、層を上向きにして締め付けられる。LESA(登録商標)モードに対するソフトウェアはオリジナルのホルダに対して較正されているので、変換が必要である。対応する溶離剤は、移動相準備と同様に、貯留器に導入されるか、または当該機器内で混合される。当該機器は、溶離剤の一滴が物質ゾーンと接触させられて、このようにして得られたサンプル溶液が、ナノスプレー源を介して質量分析計中へと自動的に供給される。
Claims (14)
- 少なくとも1種の液体サンプルが、分離層(14)に添加され、続いて移動相が分離層(14)に添加されて、前記サンプルと接触させられるとともに、展開フェーズの後に、薄層クロマトグラムが生成される、薄膜クロマトグラフィを実施する方法であって、
液体サンプルが、サンプル添加操作毎に新品のピペットチップ(8、9)を使用する、オートピペット(4)の補助によって、1つまたは2つ以上のサンプル格納容器(11、12、13)から採取されて、分離層(14)に添加されることを特徴とする、前記方法。 - 移動相が、移動相添加操作毎に新品のピペットチップ(8、9)を使用して移動相格納容器(16)から採取されて、分離層(14)に添加されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 移動相が充填された移動相格納容器(16)が、毛細管活性材料を含む接触装置(22)を介して、分離層(14)に接続されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 溶離剤が、各溶離毎に新品のピペットチップ(8、9)を使用して採取されて、評価しようとする分離層(14)の部位に接触させられこと、および前記溶離剤が評価装置(20)に供給されることを特徴とする、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 評価しようとする分離層(14)の部位が、分離操作毎に新品のピペットチップ(8、9)を使用してスタンプアウトされて、評価装置(20)へと供給されることを特徴とする、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 評価しようとする分離層(14)の部位は、各溶離毎に新品のピペットチップ(8、9)を使用して、ベース支持体まで密封され、密封部位に位置する吸着剤は溶離剤と接触させられて、形成された溶離物は評価装置(20)へと供給されることを特徴とする、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 分離層(14)を収容するための支持プレート(15)と、サンプルを収容するための第1の格納容器(10、11、12、13)と、移動相を収容するための第2の格納容器(16)とを有する、薄層クロマトグラフィを自動的に実施する装置(5)であって、
前記支持プレート(15)の一表面上と、前記第1の格納容器(10、11、12、13)および前記第2の格納容器(16)の上とを移動可能である、自動ピペッティング装置(4)を有するとともに、前記ピペッティング装置(4)によって連続的に取り上げて、使用して、続いて前記ピペッティング装置(4)から再び取り外して、除去することが可能な、ピペットチップ(8、9)のストックを有することを特徴とする、前記装置(5)。 - 支持プレート(15)が、装置(5)のハウジング内に移動可能に配設されていることを特徴とする、請求項7に記載の装置(5)。
- 支持プレート(15)は、毛細管活性材料を含む接触装置(22)を介して、移動相用の格納容器(16)に接続することが可能であることを特徴とする、請求項7または8に記載の装置(5)。
- 装置(5)が、支持プレート(15)を収容するための、本質的に閉鎖された展開容器を有することを特徴とする、請求項7〜9の一項または二項以上に記載の装置(5)。
- 少なくとも2つの異なるタイプのピペットチップ(8、9)が、ピペットチップ(8、9)用の格納容器(7)に格納されていることを特徴とする、請求項7〜10の一項または二項以上に記載の装置(5)。
- 装置(5)が、溶離剤用の格納容器(21)を有することを特徴とする、請求項7〜11の一項または二項以上に記載の装置(5)。
- 装置(5)は、分離層(14)の部位を分離させるとともに、前記分離層(14)の前記切出し部位を評価ユニット(20)に転送するための、ピペットチップ(8、9)を有することを特徴とする、請求項7〜12の一項または二項以上に記載の装置(5)。
- 装置(5)は、分離層(14)の吸着剤部位をベース支持体から密閉し、溶離剤により前記吸着剤部位を溶離させ、前記溶離物を評価ユニット(20)への転送するための、ピペットチップ(8、9)を有することを特徴とする、請求項7〜12のいずれか一項に記載の装置(5)。
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