JP2016220685A - 変異したプロトポルフィリノーゲンixオキシダーゼ(ppx)遺伝子 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】PPX遺伝子に標的化された変異を有する遺伝子修復オリゴ核酸塩基(GRON)を導入した植物細胞、及び、再生した植物体。
【選択図】図1
Description
号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからロイシン;配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからアルギニン;配列ID番号:1の426の位置に対応する位置におけるチロシンからトレオニン;配列ID番号:1の426の位置に対応する位置におけるチロシンからバリン;配列ID番号:1の位置478に対応する位置におけるフェニルアラニンからセリン、配列ID番号:1の位置525に対応する位置におけるイソロイシンからトレオニン、配列ID番号:9の位置58に対応する位置におけるアスパラギン酸からアスパラギン、配列ID番号:9の位置64に対応する位置におけるグルタミン酸からバリン;配列ID番号:9の位置74に対応する位置におけるグリシンからシステイン;配列ID番号:9の位置84に対応する位置におけるグリシンからアスパラギン;配列ID番号:9の位置93に対応する位置におけるロイシンからヒスチジン、配列ID番号:9の位置97に対応する位置におけるリジンからアルギニン;配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン、配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからシステイン、配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからロイシン、配列ID番号:9の位置101に対応する位置におけるアラニンからバリン、配列ID番号:9の位置119に対応する位置におけるセリンからアスパラギン、配列ID番号:9の位置121に対応する位置におけるフェニルアラニンからロイシン、配列ID番号:9の位置124に対応する位置におけるトレオニンからイソロイシン;配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからチロシン、配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからアルギニン、配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからヒスチジン、配列ID番号:9の位置150に対応する位置におけるグルタミン酸からアスパラギン酸、配列ID番号:9の位置150に対応する位置におけるグルタミン酸からリジン、配列ID番号:9の位置151に対応する位置におけるセリンからトレオニン、配列ID番号:9の位置157に対応する位置におけるグルタミンからロイシン;配列ID番号:9の位置164に対応する位置におけるバリンからフェニルアラニン;配列ID番号:9の位置164に対応する位置におけるバリンからアラニン;配列ID番号:9の位置170に対応する位置におけるアスパラギン酸からグルタミン酸、配列ID番号:9の位置177に対応する位置におけるシステインからセリン;配列ID番号:9の位置187に対応する位置におけるヒスチジンからグルタミン;配列ID番号:9の位置188に対応する位置におけるロイシンからフェニルアラニン、配列ID番号:9の位置195に対応する位置におけるアスパラギンからリジン;配列ID番号:9の位置214に対応する位置におけるプロリンからセリン; 配列ID番号:9の位置214に対応する位置におけるプロリンからヒスチジン; 配列ID番号:9の位置215に対応する位置におけるイソロイシンからセリン;配列ID番号:9の位置215に対応するイソロイシンからヒスチジン;配列ID番号:9の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン酸、配列ID番号:9の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン、配列ID番号:9の位置230に対応する位置におけるリジンからアルギニン、配列ID番号:9の位置271に対応する位置におけるシステインからアルギニン、配列ID番号:9の位置274に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;配列ID番号:9の位置283に対応する位置におけるフェニルアラニンからグリシン、配列ID番号:9の位置292に対応する位置におけるアラニンからグリシン;配列ID番号:9の位置296に対応する位置におけるセリンからロイシン、配列ID番号:9の位置307に対応する位置におけるシステインからセリン;配列ID番号:9の位置324に対応する位置におけるアスパラギンからアスパラギン酸;配列ID番号:9の位置324に対応する位置におけるアスパラギンからリジン;配列ID番号:9の位置330に対応する位置におけるアスパラギン酸からグルタミン酸、配列ID番号:9の位置396に対応する位置におけるセリンからロイシン、配列ID番号:9の位置404に対応する位置におけるアラニンからセリン;配列ID番号:9の位置406に対応する位置におけるアルギニンからリジン、配列ID番号:9の位置410に対応する位置におけるリジンからイソロイシン、配列ID番号:9の位置421に対応する位置におけるロイシンからバリン、配列ID番号:9の位置423に対応する位置におけるアラニンからバリン、配列ID番号:9の位置434に対応する位置におけるシステインからセリン;配列ID番号:9の位置434に対応する位置におけるシステインからチロシン;配列ID番号:9の位置447に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;配列ID番号:9の位置448に対応する位置におけるセリンからアラニン、配列ID番号:9の位置449に対応する位置におけるバリンからグルタミン酸、配列ID番号:9の位置451に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン、配列ID番号:9の位置454に対応する位置におけるアスパラギン酸からアスパラギン;配列ID番号:9の位置465に対応する位置におけるチロシンからフェニルアラニン、配列ID番号:9の位置470に対応する位置におけるリジンからトレオニン、および配列ID番号:9の位置500に対応する位置におけるトレオニンからセリンから成る群から選択される1つもしくはそれ以上の変異、2つもしくはそれ以上の変異、または3つもしくはそれ以上の変異を含む。
本明細書中で開示される組成物および方法の様々な態様および実施形態のいずれにおいても、遺伝子およびタンパク質における変異は、例えば、Cibus社によって開発されたRapid Trait Development System(RTDS(登録商標))技術を用いて、作成され得る。本明細書中で開示されるいずれかの変異を含む植物は、組み合わせてまたは単独で、新規な除草剤耐性製品の基礎を形成することができる。また、PPX遺伝子の変異についてホモ接合性またはヘテロ接合性のいずれかである変異した植物から生成される種子も提供される。本明細書に開示される変異は、他の既知の任意の変異との、または将来発見される変異との組み合わせであってもよい。
本明細書中で開示される方法および組成物は、例えば、以下で詳述されるコンフォメーションおよび化学を有する「遺伝子修復オリゴ核酸塩基」を用いて、実施または製造することができる。本明細書において企図される「遺伝子修復オリゴ核酸塩基」は、公開された化学文献および特許文献において、例えば、「組換え誘導性(recombinagenic)オリゴ 核酸塩基」;「RNA/DNAキメラオリゴヌクレオチド」;「キメラオリゴヌクレオチド」;「混合デュープレックスオリゴヌクレオチド」(MDONs);「RNA DNAオリゴヌクレオチド(RDOs)」;「遺伝子標的化オリゴヌクレオチド」;「ジェノプラスト」;「一本鎖修飾オリゴヌクレオチド」;「一本鎖オリゴデオキシヌクレオチド変異用ベクター」(SSOMVs);「デュープレックス変異用ベクター」;および「ヘテロデュープレックス変異用ベクター」などの、他の名称を用いて記載されている。
植物細胞の形質転換する目的に用いられる任意の既知の方法を用いて、遺伝子修復オリゴ核酸塩基を送達することができる。例示的な方法について以下に説明する。
セルロース細胞壁を有する植物細胞中に大きなフラグメントのDNAを発射貫入により導入するための金属マイクロキャリア(微小球)の使用は、当業者によく知られている(以下、バイオリスティック送達と称する)。米国特許第4,945,050号;第5,100,792号および第5,204,253号は、マイクロキャリアおよびこれらを発射させるためのデバイスを選択する一般的手法を記載している。
代替の実施形態においては、遺伝子修復オリゴ核酸塩基は、植物の一部に由来するプロトプラストのエレクトロポレーションにより植物細胞に送達することができる。プロトプラストは、当業者によく知られる手法にしたがって、植物の一部、特に葉を酵素で処理することにより形成される。例えば、Galloisら、1996、Methods in Molecular Biology 55:89−107、Humana Press、Totowa、N.J.;Kipp etら、1999年、 Methods in Molecular Biology 133:213−221、Humana Press、Totowa、N.Jを参照されたい。プロトプラストは、エレクトロポレーション前に成長培地で培養する必要はない。エレクトロポレーションの条件の一例は、総容量0.3mL中に3x105個のプロトプラストであり、遺伝子修復オリゴ核酸塩基の濃度は0.6−4μg/mLである。
代替の実施形態においては、当業者によく知られる手法にしたがって、膜改変剤であるポリエチレングリコールの存在下で、核酸を植物プロトプラストに取り込ませる (例えば、Gharti−Chhetriら、1992;Dattaら、1992を参照されたい)。
代替の実施形態においては、遺伝子修復オリゴ核酸塩基は、マイクロキャピラリーを用いて植物細胞またはプロトプラストに注入することにより送達することができる(例えば、Mikiら、1989年;Schnorfら、1991年を参照)。
本明細書中に開示される組成物および方法の様々な態様および実施形態のいずれかにおいて、遺伝子およびタンパク質における変異は、例えばトランスジェニック技術を使って生成され得る。いくつかの実施形態では、該組成物および方法は、本明細書中に開示されたPPXヌクレオチドに操作可能な形で連結されたプロモーターを含む、形質転換された核酸構築体を有する植物または植物細胞を含む。本明細書中に開示された方法は、本明細書中に開示されたPPX核酸構築体を少なくとも1つの植物細胞に導入し、そこから形質転換された植物を再生することも含み得る。該核酸構築体は、本明細書中に開示されているような除草剤耐性PPXタンパク質をコードする少なくとも1つのヌクレオチド、特に図2、図4、図6、図8、図10および図12に規定されたヌクレオチド配列およびフラグメントならびにそれらの異型を含む。該方法は、さらに、植物細胞において遺伝子発現を推進することが可能なプロモーターの使用も伴う。1つの実施形態において、このようなプロモーターは、構成的プロモーターまたは組織優先プロモーターである。これらの方法で生成される植物は、形質転換されていない植物と比較すると、増加したPPX活性および/または特に除草剤耐性PPX活性を有し得る。したがって、これらの方法は、特にPPXを阻害する除草剤の存在下で、PPX酵素の活性を高める、少なくとも1つの除草剤に対する植物の抵抗性を強化または増加する上で有用である。
本明細書中で開示される核酸分子(例えば、変異したPPX遺伝子)は、組換え核酸構築体の生成に使用することができる。1つの実施形態では、本開示の核酸分子は、関心対象の植物における発現のために、核酸構築体、例えば、発現カセットの調製に使用することができる。
組成物および方法は、少なくとも部分的には、PPX遺伝子における変異、例えば、PPX阻害ファミリーの除草剤に属す除草剤に対するて抵抗性または耐性を植物に与える変異に関し得る。該組成物および方法は、また、特定の実施形態において、PPXタンパク質をコードする遺伝子において、染色体またはエピソー無配列に所望の変異を生じさせるための遺伝子修復オリゴ核酸塩基の使用に関する。変異したタンパク質は、いくつかの実施形態では、野生型タンパク質の触媒活性を実質的に維持することができ、PPX阻害ファミリーの除草剤に対して、植物の抵抗性または耐性の増加につながり、いくつかの実施形態では、除草剤の有無に関わらず、野生型の植物と比較して、植物、その器官、組織または細胞の実質的に正常な成長または発達を可能にする。該組成物および方法は、また、PPX遺伝子に変異が生じた非トランスジェニックまたはトランスジェニック植物細胞、そこから再生された非トランスジェニック植物またはトランスジェニック植物、ならびに再生された非トランスジェニック植物またはトランスジェニック植物を、例えば、異なるPPX遺伝子に変異を有する植物に対して使った交差から生じる植物に関する。これらの変異は作物植物、藻、細菌、菌類を含めた植物および哺乳類系で、これらの阻害剤に対する耐性を目的として適用することもできる。
含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置215に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置229に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置230に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置271に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置274に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置278に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置283に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置292に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置296に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置307に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置324に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置330に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置396に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置404に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置406に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置410に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置421に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置423に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置434に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置447に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置448に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置449に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置451に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置454に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置465に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置470に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置500に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、2つまたはそれ以上の変異を含み、少なくともそのうちの1つの変異は、配列ID番号:1の52、85、105、111、130、139、143、144、145、147、165、167、170、180、185、192、193、199、206、212、219、220、221、226、228、229、230、237、244、256、257、270、271、272、305、311、 316、318、332、343、354、357、359、360、366、393、403、424、426、430、438、440、444、455、457、470、478、483、484、485、487、490、503、508および525から成る群から選択される位置に対応するアミノ酸位置に存在する。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、2つまたはそれ以上の変異を含み、少なくともそのうちの1つの変異は配列ID番号:9の58、64、74、84、93、97、98、101、119、121、124、139、150、151、157、164、170、177、187、188、195、214、215、229、230、271、274、278、283、292、296、307、324、330、396、404、406、410、421、423、434、447、448、449、451、454、465、470および500から成る群から選択される位置に相当するアミノ酸位置に存在する。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、3つまたはそれ以上の変異を含み、そのうちの少なくとも1つの変異は、配列ID番号:1の52、85、105、111、130、139、 143、144、145、147、165、167、170、180、185、192、193、199、206、212、219、220、221、226、228、229、230、237、244、256、257、270、271、272、305、311、 316、318、332、343、354、357、359、360、366、393、403、424、426、430、438、440、444、455、457、470、478、483、484、485、487、490、503、508および525から成る群から選択される位置に相当するアミノ酸位置に存在する。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、3つまたはそれ以上の変異を含み、少なくともそのうちの1つの変異は、配列ID番号:9の58、64、74、84、93、97、98、101、119、121、124、139、150、151、157、164、170、177、187、188、195、214、215、229、230、271、274、278、283、292、296、307、324、330、396、404、406、410、421、423、434、447、448、449、451、454、465、470および500から成る群から選択される位置に相当するアミノ酸位置に存在する。
含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置T124に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置N139に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置E150に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置S151に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置Q157に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置V164に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置D170に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置C177に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置H187に対応するアミノ酸位置に変異を含む。 いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置L188に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置N195に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置P214に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置I215に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置K229に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置K230に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置C271に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9のD274に対応するアミノ酸位置に変異を含む。 いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置F283に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置A292に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置S296に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置C307に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置N324に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置D330に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置S396に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置A404に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置R406に対応するアミノ酸位置に変異を含む。 いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置K410に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置L421に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置A423に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置C434に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置D447に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置S448に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置V449に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、 配列ID番号:9の位置D451に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置D454に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、 配列ID番号:9の位置Y465に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置K470に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置T500に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では, PPXタンパク質は、Arabidopsis thalian PPXタンパク質 (例えば、PPXタンパク質はバレイショのプラスチドのPPXタンパク質であり得る)のパラログであり、該PPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置52に対応する位置にNを有し、そのNがN以外のアミノ酸で置換されていること;配列ID番号:1の位置272に対応する位置にKを有し、そのKがK以外のアミノ酸で置換されていること;配列ID番号:1の位置359に対応する位置にSを有し、そのSがS以外のアミノ酸で置換されていること;および/または配列ID番号:1の位置525に対応する位置にSを有し、そのSがS以外のアミノ酸で置換されていることがあり得る。そのような実施形態においては、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置N52に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置N85に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置R144に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置F145に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置A180に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置P185に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置A220に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置L226に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置M228に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置S244に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置K272に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置S305に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置S332に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置L357に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置S359に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は配列ID番号:1の位置L393に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置L403に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置L424に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置Y426に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置F478に対応するアミノ酸位置に変異を含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1にの位置S525対応するアミノ酸位置の位置に変異を含む。
ロイシンを含む変異したPPXタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、変異したPPX遺伝子は、配列ID番号:1の位置426に対応する位置にチロシンからアルギニンを含む変異したPPXタンパク質をコードする。 いくつかの実施形態では、変異したPPX遺伝子は、配列ID番号:1の位置426に対応する位置にチロシンからトレオニンを含む変異したPPXタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、変異したPPX遺伝子は、配列ID番号:1の位置426に対応する位置にチロシンからバリンを含む変異したPPXタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、変異したPPX遺伝子は、配列ID番号:1の位置438に対応する位置にリジンからセリンを含む変異したPPXタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、変異したPPX遺伝子は、配列ID番号:1の位置440に対応する位置におけるグルタミン酸からリジンを含む変異したPPXタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、変異したPPX遺伝子は、配列ID番号:1の位置444に対応する位置におけるバリンからイソロイシンを含む変異したPPXタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、変異したPPX遺伝子は、配列ID番号:1の位置455に対応する位置にロイシンからバリンを含む変異したPPXタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、変異したPPX遺伝子は、配列ID番号:1の位置457に対応する位置にリジンからバリンを含む変異したPPXタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、変異したPPX遺伝子は、配列ID番号:1の位置470に対応する位置におけるバリンからセリンを含む変異したPPXタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、変異したPPX遺伝子は、配列ID番号:1の位置470に対応する位置にバリンからチロシンを含む変異したPPXタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、変異したPPX遺伝子は、配列ID番号:1の位置478に対応する位置にフェニルアラニンからセリンを含む変異したPPXタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、変異したPPX遺伝子は、配列ID番号:1の位置483に対応する位置にフェニルアラニンからグリシンを含む変異したPPXタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、変異したPPX遺伝子は、配列ID番号:1の位置484に対応する位置におけるアスパラギン酸からアラニンを含む変異したPPXタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、変異したPPX遺伝子は、配列ID番号:1の位置485に対応する位置にイソロイシンからグルタミン酸を含む変異したPPXタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、変異したPPX遺伝子は、配列ID番号:1の位置490に対応する位置にリジンからアスパラギンを含む変異したPPXタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、変異したPPX遺伝子は、配列ID番号:1の位置503に対応する位置にロイシンからフェニルアラニンを含む変異したPPXタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、変異したPPX遺伝子は、配列ID番号:1の位置508に対応する位置にバリンからトレオニンを含む変異したPPXタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、変異したPPX遺伝子は、配列ID番号:1の位置525に対応する位置にイソロイシンからトレオニンを含む変異したPPXタンパク質をコードする。
番号:1の位置244に対応する位置にセリンからトレオニンおよび配列ID番号:1の位置393に対応する位置にロイシンからバリンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置145に対応する位置にフェニルアラニンからチロシンおよび配列ID番号:1の位置426に対応する位置にチロシンからヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置144に対応する位置にアルギニンからシステインおよび配列ID番号:1の位置525に対応する位置にイソロイシンからトレオニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置145に対応する位置にフェニルアラニンからロイシンおよび配列ID番号:1の位置424に対応する位置にロイシンからセリンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置220に対応する位置にアラニンからトレオニンおよび配列ID番号:1の位置426に対応する位置にチロシンからヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置145に対応する位置にフェニルアラニンからチロシンおよび配列ID番号:1の位置393に対応する位置にロイシンからバリンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置244に対応する位置にセリンからトレオニンおよび配列ID番号:1の位置426に対応する位置にチロシンからフェニルアラニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置145に対応する位置にフェニルアラニンからチロシンおよび配列ID番号:1の位置424に対応する位置にロイシンからセリンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置220に対応する位置にアラニンからトレオニンおよび配列ID番号:1の位置403に対応する位置にロイシンからアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置226に対応する位置にロイシンからメチオニンおよび配列ID番号:1の位置426に対応する位置にチロシンからフェニルアラニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置85に対応する位置にアスパラギンからアスパラギン酸および配列ID番号:1の位置426に対応する位置にチロシンからヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置226に対応する位置にロイシンからメチオニンおよび配列ID番号:1の位置424に対応する位置にロイシンからセリンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置145に対応する位置にフェニルアラニンからチロシンおよび配列ID番号:1の位置403に対応する位置にロイシンからアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置244に対応する位置にセリンからグリシンおよび配列ID番号:1の位置393に対応する位置にロイシンからバリンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置180に対応する位置にアラニンからトレオニンおよび配列ID番号:1の位置426に対応する位置にチロシンからヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置144に対応する位置にアルギニンからシステインおよび配列ID番号:1の位置426に対応する位置にチロシンからヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置244に対応する位置にセリンからグリシンおよび配列ID番号:1の位置525に対応する位置にイソロイシンからトレオニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置180に対応する位置にアラニンからトレオニンおよび配列ID番号:1の位置525に対応する位置にイソロイシンからトレオニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置145に対応する位置にフェニルアラニンからロイシンおよび配列ID番号:1の位置525に対応する位置にイソロイシンからトレオニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置145に対応する位置にフェニルアラニンからチロシンおよび配列ID番号:1の位置525に対応する位置にイソロイシンからトレオニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置85に対応する位置にアスパラギンからアスパラギン酸および配列ID番号:1の位置525に対応する位置にイソロイシンからトレオニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置226に対応する位置にロイシンからメチオニンおよび配列ID番号:1の位置525に対応する位置にイソロイシンからトレオニンを含む。
号:1の位置244に対応する位置にセリンからトレオニンおよび配列ID番号:1の位置393に対応する位置にロイシンからバリンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置145に対応する位置にフェニルアラニンからチロシンおよび配列ID番号:1の位置426に対応する位置にチロシンからヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:7の位置144に対応する位置にアルギニンからシステインおよび配列ID番号:7の位置525に対応する位置にイソロイシンからトレオニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置145に対応する位置にフェニルアラニンからロイシンおよび配列ID番号:1の位置424に対応する位置にロイシンからセリンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置220に対応する位置にアラニンからトレオニンおよび配列ID番号:1の位置426に対応する位置にチロシンからヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置145に対応する位置にフェニルアラニンからチロシンおよび配列ID番号:1の位置393に対応する位置にロイシンからバリンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置244に対応する位置にセリンからトレオニンおよび配列ID番号:1の位置426に対応する位置にチロシンからフェニルアラニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置145に対応する位置にフェニルアラニンからチロシンおよび配列ID番号:1の位置424に対応する位置にロイシンからセリンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置220に対応する位置にアラニンからトレオニンおよび配列ID番号:1の位置403に対応する位置にロイシンからアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置226に対応する位置にロイシンからメチオニンおよび配列ID番号:1の位置426に対応する位置にチロシンからフェニルアラニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置85に対応する位置にアスパラギンからアスパラギン酸および配列ID番号:1の位置426に対応する位置にチロシンからヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置226に対応する位置にロイシンからメチオニンおよび配列ID番号:1の位置424に対応する位置にロイシンからセリンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置145に対応する位置にフェニルアラニンからチロシンおよび配列ID番号:1の位置403に対応する位置にロイシンからアルギニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置244に対応する位置にセリンからグリシンおよび配列ID番号:1の位置393に対応する位置にロイシンからバリンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置180に対応する位置にアラニンからトレオニンおよび配列ID番号:1の位置426に対応する位置にチロシンからヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置144に対応する位置にアルギニンからシステインおよび配列ID番号:1の位置426に対応する位置にチロシンからヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:1の位置244に対応する位置におけるセリンからグリシンおよび配列ID番号:1の位置525に対応する位置におけるイソロイシンからトレオニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:7の位置244に対応する位置にセリンからグリシンおよび配列ID番号:7の位置525に対応する位置にイソロイシンからトレオニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:7の位置180に対応する位置にアラニンからトレオニンおよび配列ID番号:7の位置525に対応する位置にイソロイシンからトレオニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:7の位置145に対応する位置にフェニルアラニンからロイシンおよび配列ID番号:7の位置525に対応する位置にイソロイシンからトレオニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:7の位置145に対応する位置にフェニルアラニンからチロシンおよび配列ID番号:7の位置525に対応する位置にイソロイシンからトレオニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:7の位置85に対応する位置にアスパラギンからアスパラギン酸および配列ID番号:7の位置525に対応する位置にイソロイシンからトレオニンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:7の位置226に対応する位置にロイシンからメチオニンおよび配列ID番号:7の位置525に対応する位置にイソロイシンからトレオニンを含む。
む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置98に対応する位置にアルギニンからシステイン、配列ID番号:9の位置124に対応する位置にトレオニンからイソロイシン、配列ID番号:9の位置229に対応する位置にリジンからグルタミンおよび配列ID番号:9の位置307に対応する位置にシステインからセリンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置98に対応する位置にアルギニンからヒスチジンおよび配列ID番号:9の位置214に対応する位置にプロリンからヒスチジンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置98に対応する位置にアルギニンからヒスチジン、配列ID番号:9の位置124に対応する位置にトレオニンからイソロイシン、配列ID番号:9の位置188に対応する位置にロイシンからフェニルアラニンおよび配列ID番号:9の位置229に対応する位置にリジンからグルタミンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置98に対応する位置にアルギニンからヒスチジン、配列ID番号:9の位置124に対応する位置にトレオニンからイソロイシン、配列ID番号:9の位置214に対応する位置にプロリンからヒスチジンおよび配列ID番号:9の位置229に対応する位置にリジンからグルタミンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置98に対応する位置にアルギニンからヒスチジン、配列ID番号:9の位置124に対応する位置にトレオニンからイソロイシンおよび配列ID番号:9の位置229に対応する位置にリジンからグルタミンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置98に対応する位置にアルギニンからヒスチジン、配列ID番号:9の位置214に対応する位置にプロリンからヒスチジンおよび配列ID番号:9の位置423に対応する位置にアラニンからバリンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置98に対応する位置にアルギニンからヒスチジン、配列ID番号:9の位置124に対応する位置にトレオニンからイソロイシン、配列ID番号:9の位置188に対応する位置にロイシンからフェニルアラニン、配列ID番号:9の位置229に対応する位置にリジンからグルタミンおよび配列ID番号:9の位置423に対応する位置にアラニンからバリンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置98に対応する位置にアルギニンからヒスチジン、配列ID番号:9の位置124に対応する位置にトレオニンからイソロイシン、配列ID番号:9の位置214に対応する位置にプロリンからヒスチジン、配列ID番号:9の位置229に対応する位置にリジンからグルタミンおよび配列ID番号:9の位置423に対応する位置にアラニンからバリンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置98に対応する位置にアルギニンからヒスチジン、配列ID番号:9の位置124に対応する位置にトレオニンからイソロイシン、配列ID番号:9の位置229に対応する位置にリジンからグルタミンおよび配列ID番号:9の位置423に対応する位置にアラニンからバリンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置98に対応する位置にアルギニンからヒスチジン、配列ID番号:9の位置214に対応する位置にプロリンからヒスチジンおよび配列ID番号:9の位置307に対応する位置にシステインからセリンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置98に対応する位置にアルギニンからヒスチジン、配列ID番号:9の位置124に対応する位置にトレオニンからイソロイシン、配列ID番号:9の位置188に対応する位置にロイシンからフェニルアラニン、配列ID番号:9の位置229に対応する位置にリジンからグルタミンおよび配列ID番号:9の位置307に対応する位置にシステインからセリンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置98に対応する位置にアルギニンからヒスチジン、配列ID番号:9の位置124に対応する位置にトレオニンからイソロイシン、配列ID番号:9の位置214に対応する位置にプロリンからヒスチジン、配列ID番号:9の位置229に対応する位置にリジンからグルタミンおよび配列ID番号:9の位置307に対応する位置にシステインからセリンを含む。いくつかの実施形態では、変異したPPXタンパク質は、配列ID番号:9の位置98に対応する位置にアルギニンからヒスチジン、配列ID番号:9の位置124に対応する位置にトレオニンからイソロイシン、配列ID番号:9の位置229に対応する位置にリジンからグルタミンおよび配列ID番号:9の位置307に対応する位置にシステインからセリンを含む。
PPX遺伝子における主題の変異は、一般に、Solanum tuberosumプラスチドのPPX遺伝子およびタンパク質(例えば、それぞれ図8および7を参照されたい)を使って、本明細書では記述され、アミノ酸の位置はArabidopsis thaliana(配列ID番号:1)での位置を参照する。該組成物および方法は、変異した他の種(パラログ)のPPX遺伝子およびタンパク質も包含する。ただし、他の種のPPX遺伝子では変化があるため、1つの種において変更の対象となるアミノ酸残基の数は、別の種では異なる可能性がある。しかし類似の位置は、配列相同性により当業者によって、容易に同定される。例えば、表6は様々な植物のPPXコーディング配列パラログにおける相同アミノ酸位置を要約し、図33 は、様々な植物に由来するPPXパラログのアミノ酸配列アラインメントを示している。したがって、これらおよびその他のパラログにおける相同位置は、同定して変異させることが可能である。
本明細書中で提供される組成物および方法は、PPX阻害型除草剤に対する抵抗性を与えるPPX遺伝子およびPPXタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、PPX阻害型除草剤は、ジフェニルエーテル系、フェニルピラゾール系、N−フェニルフタルイミド系、チアジアゾール系、オキサジアゾール系、リアゾリノン系、オキサゾリジンジオン系、ピリミジンジオン系の化学ファミリーを含む。代表的なPPX阻害型除草剤の活性成分およびそれらのそれぞれの化学ファミリーについては表5に要約されている。
本明細書中に開示される態様、実施形態、方法および/または組成物のいずれかと併せて、本明細書中で開示される植物は、双子葉植物、単子葉植物または裸子植物の任意の種に属すものとすることができ、木もしくは潅木として生長する任意の木本植物種、任意の草本類、または食用果実、種子もしくは野菜を産生する任意の種、または色彩または芳香のある花をつける任意の種を含む。例えば、植物または植物細胞は、バレイショ、ヒマワリ、テンサイ、トウモロコシ、ワタ、ダイズ、コムギ、ライムギ、エンバク、イネ、キャノーラ、果実、野菜、タバコ、オオムギ、モロコシ、トマト、マンゴ、モモ、リンゴ、ナシ、イチゴ、バナナ、メロン、ニンジン、レタス、タマネギ、ダイズspp、サトウキビ、エンドウマメ、フィールドビーン(field bean)、ポプラ、ブドウ、カンキツ、アルファルファ、ライムギ、エンバク、芝生およびイネ科牧草、アマ、アブラナ、キュウリ、アサガオ、ホウセンカ、トウガラシ、ナス、マリーゴールド、スイレン、キャベツ、ヒナギク、カーネーション、ペチュニア、チューリップ、アイリス、ユリ、およびすでに具体的に言及されていない場合は堅果を生じる植物から成る群から選択され得る。該植物または植物細胞は、表6から選択される種にも属し得る。該植物または植物細胞は、Arabidopsis thaliana、 Solanum tuberosum、 Solanum phureja、 Oryza sativa、 Amaranthus tuberculatus、 Sorghum bicolor、Ricinus communisおよびZea maysから成る群から選択される種にも属し得る。
Pはプラスチド、Mはミトコンドリア、Bは両方を指す。
植物および植物細胞は、当業で一般に知られている方法、例えば、除草剤の存在下で植物または植物細胞を栽培し、除草剤の非存在下での成長速度と比較して、成長速度を測定するなどを使って、除草剤に対する抵抗性または耐性を試験することができる。
以下は、本発明の実践手順を説明するための例である。これらの例は限定的なものとみなされるべきではない。すべてのパーセント値は、重量%であり、すべての溶媒混合物の割合は、特に他に断っていない限り、容量%である。
プラスチドおよびミトコンドリアのPPX遺伝子を、Russet Burbank栽培品種由来のcDNAおよびゲノムDNAの両方から増幅した。プラスチドのPPXクローンを2つのクラスに分類し、恐らくバレイショの単一のPPX遺伝子の対立遺伝子を表す、StcPPX1およびStcPPX1.1と命名した。アミノ酸コーディング配列内で、これらのクローンは10の異なる多型があり、そのうちの3つはアミノ酸の違いに繋がり、2つだけが成熟タンパク質で発見される。1つのアミノ酸の違いは、葉緑体の輸送ペプチドにある。StcPPX1.1クローンの1つにおいては、イントロン3はスプライスされていなかった。.
突然変異誘発実験を、最初に、バレイショのプラスチドのPPX遺伝子の2つのオーバーラップするフラグメント(5’および3’)上で実施し、除草剤耐性を与えるバレイショのプラスチドのPPXコーディング配列における変異を同定した。
液体培地選択条件を、スルフェントラゾンおよびフルミオキサジンの両方について明らかにしていった。濃度が0から10mMまでの範囲を取るスルフェントラゾンおよびフルミオキサジンを使って試験した。10mM の除草剤を含む試料中のDMSOの濃度を再現するために、0mMの試料は、25μLのDMSO(2.5%)を含有した。均一にするために、各管に、野生型PPXプラスミドで相補したHemG細胞の一夜培養10μLを接種した。試料(希釈1:4)ごとに分光光度を測定(OD600)し、 各々の試料をLB−Chlor−IPTGプレートに播種し、OD600が成長できるコロニーの数と相関しているかどうか判定した。スルフェントラゾンで処理した細胞については、一夜培養の10%希釈の一夜培養をプレートに播種し、フルミオキサジンで処理した細胞の1%希釈をプレートに播種した(表8のaからfおよび表9のaからdの結果を参照されたい)。
PPX遺伝子の5’末端に、Stratagene GeneMorph II Random Mutagenesis Kitを使って突然変異を誘発し、XL−1 Blueにクローニングし、変異率を確認した。結果は、配列を決定した16のコロニーのうち、14が変異であることを示した。90%の XL−1 Blueプレート(約4000コロニー)を擦り取り、プラスミドを準備し、HemGに形質転換し、2.5mMのスルフェントラゾン上に播種した。スルフェントラゾンのプレートでは、約200コロニーが生育し、10% のLB−Chlor−IPTGプレートでは、コロニーの芝生が生育した。表9のaからdは、耐性クローン中で見られるヌクレオチドおよびアミノ酸の置換を記述する。
無作為に突然変異を誘発したプラスミド(5’末端および3’末端)をXL1−Blue大腸菌細胞に形質転換した。得られたコロニーをプールし、プラスミドDNAを単離して、HemG (PPX変異大腸菌)細胞に形質転換した。フルミオキサジンによる選択では、細胞を1時間、液体最小培地で回収した後、除草剤を添加し、細胞の一夜回収を行った。翌日、相補プラスミドの選択のために、細胞を、抗生物質を含むLBプレート上に適切な希釈で播種した。各プレートからのコロニーの配列を決定した。10mMのフルミオキサジンでの液体選択後、突然変異を誘発したプラスミドでは約200〜1200のコロニーが出現したのに対し、野生型(WT)PPXのプレート上では、約30のコロニーが出現した。スルフェントラゾン選択の場合、培地を最小培地で一夜生育させ、0mMおよび0.75mMの濃度のスルフェントラゾンで希釈し、プレートに播種した。コロニー数を2つの間で比較し、変異耐性を0.75mMのスルフェントラゾンのプレート上のコロニーのパーセント値に基いて求め、0mMのプレートの場合と比較した。プレート上に出現するコロニーの数は、変異にランクを付けるための方法としての役割を担った。
突然変異誘発は、PPX遺伝子の3’末端上で実施された。クローンは、HemGに形質転換され、選択のために、2.5mM、5mMおよび10mMのフルミオキサジン中で一夜培養された。5mMのフルミオキサジンでの選択には、10mMの選択プレート上よりもずっと多いコロニーが存在した。10mMのフルミオキサジンを使って、突然変異を誘発したクローンの選択では、4つのクローンが生じた。5mMのフルミオキサジンを使って突然変異を誘発したクローンの選択では、200のコロニーが生じた。3’末端の突然変異誘発のために得られた200のコロニーの上の3分の1を、10mMフルミオキサジン中でスクリーニングした。すべての耐性コロニー(約130)の配列を決定し、最良のフルミオキサジン耐性変異を、フルミオキサジン上のコロニーの数で評価し、3’末端をスルフェントラゾンに対する耐性について評価した。
スルフェントラゾンまたはフルミオキサジンに対する耐性を示す各位置での可能なアミノ酸置換すべての耐性を試験した。次に単一のアミノ酸置換をすべての順列および組合せで組み合わせ、相補性および除草剤耐性を評価した。フルミオキサジンに対する単一および複数の変異の組合せの結果は表8a、表8bおよび表8cに示されており、最後の列は、10mMのフルミオキサジン上の各変異について報告されたコロニーの数を示している。スルフェントラゾンに対する単一および複数の変異の組合せの結果は、表9aおよび表9bに示されており、最後の列は、0.75mMのスルフェントラゾン上での各変異について報告されたコロニーの数を示している。サフルフェナシルに対する単一および複数の変異の組合せの結果は、表10に示されており、第4の列は、0.3mM のサフルフェナシル上での各変異について報告されたコロニーの数を示している。
フルミオキサジン殺草曲線
定義された処理期間におけるプロトプラスト誘導Microcoleusを殺草するために必要な除草剤の濃度を求めるために除草剤選択実験を実行した。1.25μMの濃度で1週間以内にすべての細胞を殺草するのに十分だった初期殺草曲線結果に照らして、細胞の99%が殺草される濃度を求める目的で、フルミオキサジンの濃度を下げて使い、新しい殺草曲線を設計した(表11を参照)。除草剤処理のDMSOの最終濃度を1%として、除草剤をDMSOに懸濁した。細胞の発達を1週間に1回、顕微鏡で評価した。対照処理を除き、1週間後、フルミオキサジンによるすべての処理において、分裂は防止され、1ヶ月後、試験されたいずれの濃度でもMicrocoleusは発育しなかった。バレイショのプロトプラストからのMicrocoleusの発育を防止するのに、フルミオキサジンの濃度は、0.032mMで十分だった。
茎頂誘導プロトプラストおよび細胞懸濁でのスルフェントラゾンの殺草曲線は、プロトプラスト誘導細胞すべてを殺草するには濃度7.8μMのスルフェントラゾンで十分であることを示している(表12を参照されたい)。したがって、新しい殺草曲線は、表13に示すように、スルフェントラゾンの濃度を下げて、0、0.5、0.6、0.7および0.8μMから始めた。結果は、GRON処理したプロトプラストは、0.6μMから0.7μMまでの除草剤の濃度で選択され得ることを示唆している。
リーフディスク外植片におけるカルス形成を阻害するスルフェントラゾンの濃度を確立する目的で、5週齢のインビトロで栽培したバレイショの苗木から、滅菌したパンチでくり抜いてリーフディスクを作成した。作成したリーフディスクを、最終濃度1%のDMSO中で様々な濃度のスルフェントラゾンを含有する固体のHaberlach培地を入れたペトリ皿で培養した。除草剤濃度ごとにそれぞれ6つのリーフディスクを培養した。プレートをマイクロポアテープで密封し、室温(約23℃)でインキュベートした。初期実験では、20日以内にカルスの形成を止め、すべてのリーフディスクを漂白するのに、その実験で試験した最低濃度である7.8μMのスルフェントラゾンで十分だった。より低い濃度のスルフェントラゾンを使った場合の殺草曲線の結果は、20日後にほぼすべてのリーフディスクでカルス形成を阻害するのに、3.0μMの濃度のスルフェントラゾンで十分であったが、2.0μMのスルフェントラゾン上で栽培したいくつかのリーフディスクの葉脈には、13日後にカルスが惹起された。同様のリーフディスク殺草曲線実験をサフルフェナシルを使って実施し、20日後にほぼすべてのリーフディスクにおいてカルス形成を阻害するのに、この除草剤では、0.5μMで十分だった。
インビトロの2〜8週齢の茎の約200の茎頂を通常の昼/夜型で培養するか、または好ましくはプロトプラストの単離の前に2日間、暗中で保管する。茎は滅菌水を入れたペトリ皿の中で外科用メスを使って小さな片にカットしてもよい。すべての茎頂をカットし終えた後、水をプロトプラスト培地、好ましくはBN培地(B5塩およびビタミン類(Phytotechnology Laboratories))、グルコース20g/L、マニトール70g/L、α−ナフタレン酢酸5mg/L、追加のCaCl2 x 2H2O 600 mg/L、カゼイン水解物250mg/L、システイン−HCL 10 mg/L、ポリビニルピロリドン(MW 10,000)5 g/Lで置き換える。約1〜2時間後、プロトプラスト培地を、酵素液、例えば、0.5%(重量/容量)のセルラーゼ(Cellulase)YCおよび0.75%(重量/容量)のマセロザイム(Macerozyme)R10(いずれもアリゾナ州CottonwoodのKarlan Research Productsより)、1g/Lのウシ血清アルブミン、および1g/Lの2−モルホリノエタンスルホン酸を溶解したBN培地から成る酵素液で交換する。酵素液の容量に対する茎頂の数の比率は10から16の間とすることができ、好ましくは13である。酵素液中に茎頂の切片を入れた皿を25℃〜30℃、好ましくは28℃で、50rpmに設定した振とう培養機で暗所でインキュベートする。一晩インキュベートした後、プロトプラスト懸濁液を、イオジキサノール密度勾配(Optiprep Application Sheet C18;Purification of Intact Plant Protoplasts;Axis−Shield USA,10 Commerce Way,Norton,MA02776を適用)を用いて精製する。密度勾配遠心分離の後、精製されたプロトプラストを含むバンドを約5mLのW5培地とともに取り出す(Frigerioら、1998年)。2mg/Lの2,6−ジクロロベンゾニトリル(セルロース合成阻害剤)を含有するBN培地中で、プロトプラストの密度を1x106/mLに調整し、プロトプラストを30℃で約16時間、暗中で培養する。
細胞懸濁液からのプロトプラストの単離は、以下の例外を除き、茎頂からのプロトプラストの単離について記述したのと同じ手順に従う:
1.成長の速い細胞懸濁液、好ましくは最後に継代培養から3日後に用いる。1.5mLの沈降した細胞容量を約15mLのBN培地に移し、2時間後に、酵素液で置き換える。 2.プロトプラスト精製の後、直ちにGRON/PEG処理を行う。
プロトプラスト懸濁液を等容量のW5培地と混合し、50mL の遠心管に移し、臨床用遠心分離器で最低の設定(約50xg)で10分間遠心分離した。上清を除去し、TM培地(Klaus,S. Markerfreie transplastome Tabakpflanzen(Marker−free transplastomic tobacco plants). PhD Dissertation,2002,Ludwig−Maximilians−Universitat Munchen,109ページ)で置き換えて、プロトプラスト密度を5x106/mLに調節した。それぞれ5x105個のプロトプラストを含む100μLのアリコートを12mLの丸底遠心管に入れる。次に、ミトコンドリアとプラスチドのPPX遺伝子の一方または両方の1つまたは複数の変異を標的とするGRON(表4に掲載したものなど)を、PEG処理を用いてプロトプラストに導入する。GRONをプロトプラストに導入するために、12.5μgのGRONを25μLの純粋に溶解し、125μLのポリエチレングリコール溶液(5gPEG MW1500、638mgのマンニトール、207mgのCaNO3x4H2Oおよび8.75mLの純水;pHを約9.0に調節)を添加する。氷上で10〜30分間インキュベーションした後、プロトプラスト−PEG懸濁液をW5培地で洗浄し、培地BNに再懸濁する。懸濁液を室温で暗中で一晩保持する。
GRON導入の1日後、プロトプラストをアルギン酸カルシウムに包埋する。ゲル基質(例えば、アガロース、アルギン酸塩など)へのプロトプラストの包埋は、プロトプラストの生存を高め、プロトプラスト誘導細胞の分裂頻度を増加することが示された。適用された方法は、Dovzhenkoら(Thin−alginate−layer technique for protoplast culture of tobacco leaf protoplasts:shoot formation in less than two weeks. Protoplasma 204 (1998年)114−118)によって記述された方法に基いている。
除草剤耐性カルスの選択は、Pelletierら(1983年)に従って、液体培地中でアルギン酸塩の連続的な継代培養を使って実施する。選択は、適切な濃度のPPX阻害型除草剤、例えば、32μMのフルミオキサジン、または0.25μM、0.5μM、1μM、2μM、3μM、4μM、5μM、6μM、7μM、7.8μM、15.6μM、 31.2μMもしくは6.2.5μMのスルフェントラゾンでのPEG/GRON処理の1週間後に開始することができる。
未分化、緑色カルス−>暗緑色の領域をもつカルス−>最初の新芽の発生−>植物の成長
標準的な分子技術およびより高感度のPCRに基く技術を使って、RTDS処理後のPPPX変異の頻度をモニタリングすることができる。これらの分子技術としては、以下に限定されないが、対立遺伝子特異的PCR、DNA配列決定および非PCR技術を利用した、その他のSNP同定技術が挙げられる。これらの技術は、手順の早期にPPXの標的化した変異の頻度をモニタリング可能にする。特定の実施形態においては、変異は単一細胞の数で測定することができる。その後、これらの技術は培養プロセスの全体を通じ、選択したカルスおよび再生した植物に存在する変異の確認およびモニタリングの目的に適用することが可能である。
Solanum tuberosumまたはRusset Burbankバレイショ栽培品種植物に、それらの丈が2〜6インチ(一般に5〜6葉期)になったときに、様々なPPX阻害型除草剤を噴霧する。除草剤は、0.25%の AU391海面活性剤の存在下で噴霧する。除草剤は、例えば、次の割合で噴霧する:
フルミオキサジン 2オンスの活性成分/エーカー(ai/A)
スルフェントラゾン 4.5オンスai/A
サフルフェナシル 1〜13オンスai/A
Claims (62)
- 変異したプロトポルフィリノーゲンIXオキシダーゼ(PPX)遺伝子を含む非トランスジェニック植物細胞であって、前記遺伝子が、配列ID番号:152、85、105、111, 130、139、143、144、 145、147、165、167、170、180、185、192、193、199、206、212、219、220、221、226、228、229、230、237、244、256、257、270、271、272、305、311、316、318、332、343、354、357、359、360、366、393、403、424、426、430、438、440、444、455、457、470、478、483、484、485、487、490、503、508および525から成る群から選択される位置に対応する1つまたは複数のアミノ酸位置に変異を含むタンパク質をコードする、または前記遺伝子が、配列ID番号:9の58、64、74、84、93、97、98、101、119、121、124、139、150、151、157、164、170、177、187、188、195、214、215、229、230、271、274、278、283、292、296、307、324、330、396、404、406、410、421、423、434、447、448、449、451、454、465、470および500から成る群から選択される位置に対応する1つまたは複数のアミノ酸位置に変異を含むタンパク質をコードすることを特徴とする、非トランスジェニック植物細胞。
- 1つまたは複数のアミノ酸位置における変異が、配列ID番号:1の位置52に対応する位置におけるグリシンからリジン;
配列ID番号:7の位置52に対応する位置におけるアスパラギンからリジン;
配列ID番号:1の位置85に対応する位置におけるアスパラギンからアスパラギン酸;
配列ID番号:1の位置111に対応する位置におけるグルタミン酸からバリン;
配列ID番号:1の位置130に対応する位置におけるグリシンからアスパラギン;
配列ID番号:1の位置139に対応する位置におけるアスパラギン酸からヒスチジン;
配列ID番号:1の位置143に対応する位置におけるプロリンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置144に対応する位置におけるアルギニンからシステイン;
配列ID番号:1の位置144に対応する位置におけるアルギニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置144に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置145に対応する位置におけるフェニルアラニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置145に対応する位置におけるフェニルアラニンからチロシン;
配列ID番号:1の位置147に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:1の位置165に対応する位置におけるフェニルアラニンからアスパラギン;
配列ID番号:1の位置180に対応する位置におけるアラニンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置185に対応する位置におけるプロリンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置185に対応する位置におけるプロリンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置185に対応する位置におけるプロリンからチロシン;
配列ID番号:1の位置192に対応する位置におけるグルタミン酸からアスパラギン酸;
配列ID番号:1の位置192に対応する位置におけるグルタミン酸からリジン;
配列ID番号:1の位置193に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置199に対応する位置におけるアルギニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置206に対応する位置におけるバリンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置219に対応する位置におけるチロシンからセリン;
配列ID番号:1の位置220に対応する位置におけるアラニンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置226に対応する位置におけるロイシンからメチオニン;
配列ID番号:1の位置228に対応する位置におけるメチオニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン;
配列ID番号:1の位置230に対応する位置におけるアラニンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置244に対応する位置におけるセリンからグリシン;
配列ID番号:1の位置244に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置256に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置256に対応する位置におけるアルギニンからセリン;
配列ID番号:1の位置270に対応する位置におけるリジンからグルタミン酸;
配列ID番号:1の位置270に対応する位置におけるリジンからグルタミン;
配列ID番号:1の位置271に対応する位置におけるプロリンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置272に対応する位置におけるグルタミンからフェニルアラニン;
配列ID番号:7の位置272に対応する位置におけるリジンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置305に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:1の位置311に対応する位置におけるグルタミン酸からアルギニン;
配列ID番号:1の位置316に対応する位置におけるトレオニンからグリシン、
配列ID番号:1の位置318に対応する位置におけるトレオニンからグリシン;
配列ID番号:1の位置332に対応する位置におけるセリンからシステイン;
配列ID番号:1の位置357に対応する位置におけるロイシンからイソロイシン;
配列ID番号:1の位置359に対応する位置におけるリジンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置359に対応する位置におけるリジンからトレオニン;
配列ID番号:7の位置359に対応する位置におけるセリンからアルギニン;
配列ID番号:7の位置359に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:7の位置360に対応する位置におけるロイシンからアスパラギン酸;
配列ID番号:1の位置360に対応する位置におけるロイシンからリジン;
配列ID番号:1の位置366に対応する位置におけるアラニンからグルタミン酸;
配列ID番号:1の位置393に対応する位置におけるロイシンからメチオニン;
配列ID番号:1の位置393に対応する位置におけるロイシンからセリン;
配列ID番号:1の位置393に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:1の位置403に対応する位置におけるロイシンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置424に対応する位置におけるロイシンからセリン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからシステイン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからイソロイシン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからロイシン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからバリン;
配列ID番号:1の位置430に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:1の位置438に対応する位置におけるリジンからセリン;
配列ID番号:1の位置440に対応する位置におけるグルタミン酸からリジン;
配列ID番号:1の位置444に対応する位置におけるバリンからイソロイシン;
配列ID番号:1の位置455に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:1の位置457に対応する位置におけるリジンからバリン;
配列ID番号:1の位置470に対応する位置におけるバリンからセリン;
配列ID番号:1の位置470に対応する位置におけるバリンからチロシン;
配列ID番号:1の位置478に対応する位置におけるフェニルアラニンからセリン;
配列ID番号:1の位置483に対応する位置におけるフェニルアラニンからグリシン;
配列ID番号:1の位置484に対応する位置におけるアスパラギン酸からアラニン;
配列ID番号:1の位置485に対応する位置におけるイソロイシンからグルタミン酸;
配列ID番号:1の位置487に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:1の位置490に対応する位置におけるリジンからアスパラギン;
配列ID番号:1の位置503に対応する位置におけるロイシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置508に対応する位置におけるバリンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置525に対応する位置におけるイソロイシンからトレオニン.
配列ID番号:7の位置525に対応する位置におけるイソロイシンからトレオニン;
配列ID番号:9の位置58に対応する位置におけるアスパラギン酸からアスパラギン;
配列ID番号:9の位置64に対応する位置におけるグルタミン酸からバリン;
配列ID番号:9の位置74に対応する位置におけるグリシンからシステイン;
配列ID番号:9の位置84に対応する位置におけるグリシンからアスパラギン;
配列ID番号:9の位置93に対応する位置におけるロイシンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置97に対応する位置におけるリジンからアルギニン;
配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからシステイン;
配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからロイシン;
配列ID番号:9の位置101に対応する位置におけるアラニンからバリン;
配列ID番号:9の位置119に対応する位置におけるセリンからアスパラギン;
配列ID番号:9の位置121に対応する位置におけるフェニルアラニンからロイシン;
配列ID番号:9の位置124に対応する位置におけるトレオニンからイソロイシン;
配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからチロシン;
配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからアルギニン;
配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置150に対応する位置におけるグルタミン酸からアスパラギン酸;
配列ID番号:9の位置150に対応する位置におけるグルタミン酸からリジン;
配列ID番号:9の位置151に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:9の位置157に対応する位置におけるグルタミンからロイシン;
配列ID番号:9の位置164に対応する位置におけるバリンからフェニルアラニン;
配列ID番号:9の位置164に対応する位置におけるバリンからアラニン;
配列ID番号:9の位置170に対応する位置におけるアスパラギン酸からグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置177に対応する位置におけるシステインからセリン;
配列ID番号:9の位置187に対応する位置におけるヒスチジンからグルタミン;
配列ID番号:9の位置188に対応する位置におけるロイシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:9の位置195に対応する位置におけるアスパラギンからリジン;
配列ID番号:9の位置214に対応する位置におけるプロリンからセリン;
配列ID番号:9の位置214に対応する位置におけるプロリンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置215に対応する位置におけるイソロイシンからセリン;
配列ID番号:9の位置215に対応する位置におけるイソロイシンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン;
配列ID番号:9の位置230に対応する位置におけるリジンからアルギニン;
配列ID番号:9の位置271に対応する位置におけるシステインからアルギニン;
配列ID番号:9の位置274に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:9の位置283に対応する位置におけるフェニルアラニンからグリシン;
配列ID番号:9の位置292に対応する位置におけるアラニンからグリシン;
配列ID番号:9の位置296に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:9の位置307に対応する位置におけるシステインからセリン;
配列ID番号:9の位置324に対応する位置におけるアスパラギンからアスパラギン酸;
配列ID番号:9の位置324に対応する位置におけるアスパラギンからリジン;
配列ID番号:9の位置330に対応する位置におけるアスパラギン酸からグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置396に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:9の位置404に対応する位置におけるアラニンからセリン;
配列ID番号:9の位置406に対応する位置におけるアルギニンからリジン;
配列ID番号:9の位置410に対応する位置におけるリジンからイソロイシン;
配列ID番号:9の位置421に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:9の位置423に対応する位置におけるアラニンからバリン;
配列ID番号:9の位置434に対応する位置におけるシステインからセリン;
配列ID番号:9の位置434に対応する位置におけるシステインからチロシン;
配列ID番号:9の位置447に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:9の位置448に対応する位置におけるセリンからアラニン;
配列ID番号:9の位置449に対応する位置におけるバリンからグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置451に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:9の位置454に対応する位置におけるアスパラギン酸からアスパラギン;
配列ID番号:9の位置465に対応する位置におけるチロシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:9の位置470に対応する位置におけるリジンからトレオニン、および
配列ID番号:9の位置500に対応する位置におけるトレオニンからセリンから成る群から選択されることを特徴とする、請求項1に記載の非トランスジェニック植物細胞。 - 前記変異PPX遺伝子が表2、表3aおよび表3bから選択される1つまたは複数の核酸配列変異を含むことを特徴とする、請求項1および2のいずれかに記載の非トランスジェニック植物細胞。
- 前記変異したPPX遺伝子が、表4aおよび表4bから選択される1つまたは複数の変異の組合せを含むタンパク質をコードすることを特徴とする、請求項1から3のいずれかに記載の非トランスジェニック植物細胞。
- 変異したプロトポルフィリノーゲンIXオキシダーゼ(PPX)遺伝子を含む非トランスジェニック植物であって、 前記遺伝子が、配列ID番号:1の52、85、105、111、130、139、 143、144、145、147、165、167、170、180、185、192、193、199、206、212、219、220、221、226、228、229、230、237、244、256、257、270、271、272、305、311、316、318、332、343、354、357、359、360、366、393、403、424、426、430、438、440、444、455、457、470、478、483、484、485、487、490、503、508および525から成る群から選択される位置に対応する1つまたは複数のアミノ酸位置に変異を含むタンパク質をコードするまたは前記遺伝子が配列ID番号:9の58、64、74、84、93、97、98、101、119、121、124、139、150、151、157、164、170、177、187、188、195、214、215、229、230、271、274、278、283、292、296、307、324、330、396、404、406、410、421、423、434、447、448、449、451、454、465、470および500から成る群から選択される位置に対応する1つまたは複数のアミノ酸位置に変異を含むタンパク質をコードすることを特徴とする、非トランスジェニック植物。
- 1つまたは複数のアミノ酸位置にある前記変異が、
配列ID番号:1の位置52に対応する位置におけるグリシンからリジン;
配列ID番号7の位置52に対応する位置におけるアスパラギンからリジン;
配列ID番号:1の位置85の位置に対応する位置におけるアスパラギンからアスパラギン酸;
配列ID番号:1の位置111に対応する位置におけるグルタミン酸からバリン;
配列ID番号:1の位置130に対応する位置におけるグリシンからアスパラギン;
配列ID番号:1の位置139に対応する位置におけるアスパラギン酸からヒスチジン;
配列ID番号:1の位置143に対応する位置におけるプロリンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置144に対応する位置におけるアルギニンからシステイン;
配列ID番号:1の位置144に対応する位置におけるアルギニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置144に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置145に対応する位置におけるフェニルアラニンからロイシン, ;
配列ID番号:1の位置145に対応する位置におけるフェニルアラニンからチロシン;
配列ID番号:1の位置147に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:1の位置165に対応する位置におけるフェニルアラニンからアスパラギン;
配列ID番号:1の位置180に対応する位置におけるアラニンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置185に対応する位置におけるプロリンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置185に対応する位置におけるプロリンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置185に対応する位置におけるプロリンからチロシン;
配列ID番号:1の位置192に対応する位置におけるグルタミン酸からアスパラギン酸;
配列ID番号:1の位置192に対応する位置におけるグルタミン酸からリジン;
配列ID番号:1の位置193に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置199に対応する位置におけるアルギニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置206に対応する位置におけるバリンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置219に対応する位置におけるチロシンからセリン;
配列ID番号:1の位置220に対応する位置におけるアラニンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置226に対応する位置におけるロイシンからメチオニン;
配列ID番号:1の位置228に対応する位置におけるメチオニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン;
配列ID番号:1の位置230に対応する位置におけるアラニンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置244に対応する位置におけるセリンからグリシン;
配列ID番号:1の位置244に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置256に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置256に対応する位置におけるアルギニンからセリン;
配列ID番号:1の位置270に対応する位置におけるリジンからグルタミン酸;
配列ID番号:1の位置270に対応する位置におけるリジンからグルタミン;
配列ID番号:1の位置271に対応する位置におけるプロリンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置272に対応する位置におけるグルタミンからフェニルアラニン;
配列ID番号:7の位置272に対応する位置におけるリジンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置305に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:1の位置311に対応する位置におけるグルタミン酸からアルギニン;
配列ID番号:1の位置316に対応する位置におけるトレオニンからグリシン;
配列ID番号:1の位置318に対応する位置におけるトレオニンからグリシン;
配列ID番号:1の位置332に対応する位置におけるセリンからシステイン;
配列ID番号:1の位置357に対応する位置におけるロイシンからイソロイシン;
配列ID番号:1の位置359に対応する位置におけるリジンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置359に対応する位置におけるリジンからトレオニン;
配列ID番号:7の位置359に対応する位置におけるセリンからアルギニン;
配列ID番号:7の位置359に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:7の位置360に対応する位置におけるロイシンからアスパラギン酸;
配列ID番号:1の位置360に対応する位置におけるロイシンからリジン;
配列ID番号:1の位置366に対応する位置におけるアラニンからグルタミン酸;
配列ID番号:1の位置393に対応する位置におけるロイシンからメチオニン;
配列ID番号:1の位置393に対応する位置におけるロイシンからセリン;
配列ID番号:1の位置393に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:1の位置403に対応する位置におけるロイシンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置424に対応する位置におけるロイシンからセリン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからシステイン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからイソロイシン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからロイシン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからバリン;
配列ID番号:1の位置430に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:1の位置438に対応する位置におけるリジンからセリン;
配列ID番号:1の位置440に対応する位置におけるグルタミン酸からリジン;
配列ID番号:1の位置444に対応する位置におけるバリンからイソロイシン;
配列ID番号:1の位置455に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:1の位置457に対応する位置におけるリジンからバリン;
配列ID番号:1の位置470に対応する位置におけるバリンからセリン;
配列ID番号:1の位置470に対応する位置におけるバリンからチロシン;
配列ID番号:1の位置478に対応する位置におけるフェニルアラニンからセリン;
配列ID番号:1の位置483に対応する位置におけるフェニルアラニンからグリシン;
配列ID番号:1の位置484に対応する位置におけるアスパラギン酸からアラニン;
配列ID番号:1の位置485に対応する位置におけるイソロイシンからグルタミン酸;
配列ID番号:1の位置487に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:1の位置490に対応する位置におけるリジンからアスパラギン;
配列ID番号:1の位置503に対応する位置におけるロイシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置508に対応する位置におけるバリンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置525に対応する位置におけるイソロイシンからトレオニン.
および配列ID番号:7の位置525に対応する位置におけるイソロイシンからトレオニン;
配列ID番号:9の位置58に対応する位置におけるアスパラギン酸からアスパラギン;
配列ID番号:9の位置64に対応する位置におけるグルタミン酸からバリン;
配列ID番号:9の位置74に対応する位置におけるグリシンからシステイン;
配列ID番号:9の位置84に対応する位置におけるグリシンからアスパラギン;
配列ID番号:9の位置93に対応する位置におけるロイシンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置97に対応する位置におけるリジンからアルギニン;
配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからシステイン;
配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからロイシン;
配列ID番号:9の位置101に対応する位置におけるアラニンからバリン;
配列ID番号:9の位置119に対応する位置におけるセリンからアスパラギン;
配列ID番号:9の位置121に対応する位置におけるフェニルアラニンからロイシン;
配列ID番号:9の位置124に対応する位置におけるトレオニンからイソロイシン;
配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからチロシン;
配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからアルギニン;
配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置150に対応する位置におけるグルタミン酸からアスパラギン酸;
配列ID番号:9の位置150に対応する位置におけるグルタミン酸からリジン;
配列ID番号:9の位置151に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:9の位置157に対応する位置におけるグルタミンからロイシン;
配列ID番号:9の位置164に対応する位置におけるバリンからフェニルアラニン;
配列ID番号:9の位置164に対応する位置におけるバリンからアラニン;
配列ID番号:9の位置170に対応する位置におけるアスパラギン酸からグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置177に対応する位置におけるシステインからセリン;
配列ID番号:9の位置187に対応する位置におけるヒスチジンからグルタミン;
配列ID番号:9の位置188に対応する位置におけるロイシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:9の位置195に対応する位置におけるアスパラギンからリジン;
配列ID番号:9の位置214に対応する位置におけるプロリンからセリン;
配列ID番号:9の位置214に対応する位置におけるプロリンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置215に対応する位置におけるイソロイシンからセリン;
配列ID番号:9の位置215に対応する位置におけるイソロイシンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン;
配列ID番号:9の位置230に対応する位置におけるリジンからアルギニン;
配列ID番号:9の位置271に対応する位置におけるシステインからアルギニン;
配列ID番号:9の位置274に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:9の位置283に対応する位置におけるフェニルアラニンからグリシン;
配列ID番号:9の位置292に対応する位置におけるアラニンからグリシン;
配列ID番号:9の位置296に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:9の位置307に対応する位置におけるシステインからセリン;
配列ID番号:9の位置324に対応する位置におけるアスパラギンからアスパラギン酸;
配列ID番号:9の位置324に対応する位置におけるアスパラギンからリジン;
配列ID番号:9の位置330に対応する位置におけるアスパラギン酸からグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置396に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:9の位置404に対応する位置におけるアラニンからセリン;
配列ID番号:9の位置406に対応する位置におけるアルギニンからリジン;
配列ID番号:9の位置410に対応する位置におけるリジンからイソロイシン;
配列ID番号:9の位置421に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:9の位置423に対応する位置におけるアラニンからバリン;
配列ID番号:9の位置434に対応する位置におけるシステインからセリン;
配列ID番号:9の位置434に対応する位置におけるシステインからチロシン;
配列ID番号:9の位置447に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:9の位置448に対応する位置におけるセリンからアラニン;
配列ID番号:9の位置449に対応する位置におけるバリンからグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置451に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:9の位置454に対応する位置におけるアスパラギン酸からアスパラギン;
配列ID番号:9の位置465に対応する位置におけるチロシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:9の位置470に対応する位置におけるリジンからトレオニン、および
配列ID番号:9の位置500に対応する位置におけるトレオニンからセリンから成る群から選択されることを特徴とする、請求項5に記載の非トランスジェニック植物。 - 前記変異したPPX遺伝子が表2および表3から選択される1つまたは複数の核酸配列変異を含むことを特徴とする、請求項5または6のいずれかに記載の非トランスジェニック植物。
- 前記変異したPPX遺伝子が、表4aおよび4bから選択される2つまたは複数の変異の組合せを含むタンパク質をコードすることを特徴とする、請求項5から7のいずれか一項に記載の非トランスジェニック植物。
- 前記植物が、バレイショ、ヒマワリ、テンサイ、トウモロコシ、ワタ、ダイズ、コムギ、ライムギ、エンバク、イネ、キャノーラ、果実、野菜、タバコ、オオムギ、モロコシ、トマト、マンゴ、モモ、リンゴ、ナシ、イチゴ、バナナ、メロン、ニンジン、レタス、タマネギ、ダイズspp、サトウキビ、エンドウマメ、フィールドビーン(field bean)、ポプラ、ブドウ、カンキツ、アルファルファ、ライムギ、エンバク、芝生およびイネ科牧草、アマ、アブラナ、キュウリ、アサガオ、ホウセンカ、トウガラシ、ナス、マリーゴールド、スイレン、キャベツ、ヒナギク、カーネーション、ペチュニア、チューリップ、アイリス、ユリ、および堅果を生じる植物から成る群から選択されることを特徴とする、請求項5から8のいずれか一項に記載の非トランスジェニック植物。
- 前記植物がSolanum tuberosum、Oryza sativaおよびZea maysから成る群から選択される種であることを特徴とする、請求項5から9のいずれか一項に記載の非トランスジェニック植物。
- 前記植物がRusset Burbankバレイショ栽培品種であることを特徴とする、請求項5から10のいずれか一項に記載の非トランスジェニック植物。
- 前記植物が有性生殖により産生されることを特徴とする、請求項5から11のいずれか一項に記載の非トランスジェニック植物。
- 前記植物が塊茎から産生されることを特徴とする、請求項5から12のいずれか一項に記載の非トランスジェニック植物。
- 前記植物が1つまたは複数の除草剤に対して抵抗性を有すことを特徴とする、請求項5から13のいずれか一項に記載の非トランスジェニック植物。
- 前記植物が1つまたは複数のPPX阻害型除草剤に対して抵抗性を有すことを特徴とする、請求項5から14のいずれか一項に記載の非トランスジェニック植物。
- 前記植物が表5から選択される1つまたは複数の除草剤に抵抗性を有すことを特徴とする、請求項5から15のいずれか一項に記載の非トランスジェニック植物。
- 前記植物がフルミオキサジン、スルフェントラゾンおよびサフルフェナシルから成る群から選択される1つまたは複数の除草剤に対して抵抗性を有すことを特徴とする、請求項5から16のいずれか一項に記載の非トランスジェニック植物。
- 植物細胞に、プロトポルフィリノーゲンIXオキシダーゼ(PPX)遺伝子に標的化された変異を有する遺伝子修復オリゴ核酸塩基(GRON)を導入し、配列ID番号:1の52、85、105、111、130、139、143、144、145、147、165、167、170、180、185、192、193、199、206、212、219、220、221、226、228、229、230、237、244、256、257、270、271、272、305、311、316、318、332、343、354、357、359、360、366、393、403、424、426、430、438、440、444、455、457、470、478、483、484、485、487、490、503、508および525から成る群から選択される位置に対応する1つまたは複数のアミノ酸位置に変異を含むPPXタンパク質を発現するPPX遺伝子を有する植物細胞を産生することを含む、または前記遺伝子が配列ID番号:958、 64、74、84、93、97、98、101、119、121、124、139、150、151、157、164、170、177、187、188、195、214、215、229、230、271、274、278、283、292、296、307、324、330、396、404、406、410、421、423、434、447、448、449、451、454、465、470および500から成る群から選択される位置に対応する1つまたは複数のアミノ酸位置に変異を含むタンパク質をコードすることを特徴とする、変異したPPX遺伝子を有する非トランスジェニック植物細胞を産生するための方法。
- 前記変異が、
配列ID番号:1の位置52に対応する位置におけるグリシンからリジン;
図7、配列ID番号7の位置52に対応する位置におけるアスパラギンからリジン;
配列ID番号:1の位置85の位置に対応する位置におけるアスパラギンからアスパラギン酸;
配列ID番号:1の位置111に対応する位置におけるグルタミン酸からバリン;
配列ID番号:1の位置130に対応する位置におけるグリシンからアスパラギン;
配列ID番号:1の位置139に対応する位置におけるアスパラギン酸からヒスチジン;
配列ID番号:1の位置143に対応する位置におけるプロリンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置144に対応する位置におけるアルギニンからシステイン;
配列ID番号:1の位置144に対応する位置におけるアルギニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置144に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置145に対応する位置におけるフェニルアラニンからロイシン, ;
配列ID番号:1の位置145に対応する位置におけるフェニルアラニンからチロシン;
配列ID番号:1の位置147に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:1の位置165に対応する位置におけるフェニルアラニンからアスパラギン;
配列ID番号:1の位置180に対応する位置におけるアラニンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置185に対応する位置におけるプロリンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置185に対応する位置におけるプロリンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置185に対応する位置におけるプロリンからチロシン;
配列ID番号:1の位置192に対応する位置におけるグルタミン酸からアスパラギン酸;
配列ID番号:1の位置192に対応する位置におけるグルタミン酸からリジン;
配列ID番号:1の位置193に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置199に対応する位置におけるアルギニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置206に対応する位置におけるバリンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置219に対応する位置におけるチロシンからセリン;
配列ID番号:1の位置220に対応する位置におけるアラニンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置226に対応する位置におけるロイシンからメチオニン;
配列ID番号:1の位置228に対応する位置におけるメチオニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン;
配列ID番号:1の位置230に対応する位置におけるアラニンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置244に対応する位置におけるセリンからグリシン;
配列ID番号:1の位置244に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置256に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置256に対応する位置におけるアルギニンからセリン;
配列ID番号:1の位置270に対応する位置におけるリジンからグルタミン酸;
配列ID番号:1の位置270に対応する位置におけるリジンからグルタミン;
配列ID番号:1の位置271に対応する位置におけるプロリンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置272に対応する位置におけるグルタミンからフェニルアラニン;
配列ID番号:7の位置272に対応する位置におけるリジンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置305に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:1の位置311に対応する位置におけるグルタミン酸からアルギニン;
配列ID番号:1の位置316に対応する位置におけるトレオニンからグリシン;
配列ID番号:1の位置318に対応する位置におけるトレオニンからグリシン;
配列ID番号:1の位置332に対応する位置におけるセリンからシステイン;
配列ID番号:1の位置357に対応する位置におけるロイシンからイソロイシン;
配列ID番号:1の位置359に対応する位置におけるリジンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置359に対応する位置におけるリジンからトレオニン;
配列ID番号:7の位置359に対応する位置におけるセリンからアルギニン;
配列ID番号:7の位置359に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:7の位置360に対応する位置におけるロイシンからアスパラギン酸;
配列ID番号:1の位置360に対応する位置におけるロイシンからリジン;
配列ID番号:1の位置366に対応する位置におけるアラニンからグルタミン酸;
配列ID番号:1の位置393に対応する位置におけるロイシンからメチオニン;
配列ID番号:1の位置393に対応する位置におけるロイシンからセリン;
配列ID番号:1の位置393に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:1の位置403に対応する位置におけるロイシンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置424に対応する位置におけるロイシンからセリン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからシステイン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからイソロイシン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからロイシン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからバリン;
配列ID番号:1の位置430に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:1の位置438に対応する位置におけるリジンからセリン;
配列ID番号:1の位置440に対応する位置におけるグルタミン酸からリジン;
配列ID番号:1の位置444に対応する位置におけるバリンからイソロイシン;
配列ID番号:1の位置455に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:1の位置457に対応する位置におけるリジンからバリン;
配列ID番号:1の位置470に対応する位置におけるバリンからセリン;
配列ID番号:1の位置470に対応する位置におけるバリンからチロシン;
配列ID番号:1の位置478に対応する位置におけるフェニルアラニンからセリン;
配列ID番号:1の位置483に対応する位置におけるフェニルアラニンからグリシン;
配列ID番号:1の位置484に対応する位置におけるアスパラギン酸からアラニン;
配列ID番号:1の位置485に対応する位置におけるイソロイシンからグルタミン酸;
配列ID番号:1の位置487に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:1の位置490に対応する位置におけるリジンからアスパラギン;
配列ID番号:1の位置503に対応する位置におけるロイシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置508に対応する位置におけるバリンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置525に対応する位置におけるイソロイシンからトレオニンおよび配列ID番号:7の位置525に対応する位置におけるイソロイシンからトレオニン;
配列ID番号:9の位置58に対応する位置におけるアスパラギン酸からアスパラギン;
配列ID番号:9の位置64に対応する位置におけるグルタミン酸からバリン;
配列ID番号:9の位置74に対応する位置におけるグリシンからシステイン;
配列ID番号:9の位置84に対応する位置におけるグリシンからアスパラギン;
配列ID番号:9の位置93に対応する位置におけるロイシンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置97に対応する位置におけるリジンからアルギニン;
配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからシステイン;
配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからロイシン;
配列ID番号:9の位置101に対応する位置におけるアラニンからバリン;
配列ID番号:9の位置119に対応する位置におけるセリンからアスパラギン;
配列ID番号:9の位置121に対応する位置におけるフェニルアラニンからロイシン;
配列ID番号:9の位置124に対応する位置におけるトレオニンからイソロイシン;
配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからチロシン;
配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからアルギニン;
配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置150に対応する位置におけるグルタミン酸からアスパラギン酸;
配列ID番号:9の位置150に対応する位置におけるグルタミン酸からリジン;
配列ID番号:9の位置151に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:9の位置157に対応する位置におけるグルタミンからロイシン;
配列ID番号:9の位置164に対応する位置におけるバリンからフェニルアラニン;
配列ID番号:9の位置164に対応する位置におけるバリンからアラニン;
配列ID番号:9の位置170に対応する位置におけるアスパラギン酸からグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置177に対応する位置におけるシステインからセリン;
配列ID番号:9の位置187に対応する位置におけるヒスチジンからグルタミン;
配列ID番号:9の位置188に対応する位置におけるロイシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:9の位置195に対応する位置におけるアスパラギンからリジン;
配列ID番号:9の位置214に対応する位置におけるプロリンからセリン;
配列ID番号:9の位置214に対応する位置におけるプロリンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置215に対応する位置におけるイソロイシンからセリン;
配列ID番号:9の位置215に対応する位置におけるイソロイシンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン;
配列ID番号:9の位置230に対応する位置におけるリジンからアルギニン;
配列ID番号:9の位置271に対応する位置におけるシステインからアルギニン;
配列ID番号:9の位置274に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:9の位置283に対応する位置におけるフェニルアラニンからグリシン;
配列ID番号:9の位置292に対応する位置におけるアラニンからグリシン;
配列ID番号:9の位置296に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:9の位置307に対応する位置におけるシステインからセリン;
配列ID番号:9の位置324に対応する位置におけるアスパラギンからアスパラギン酸;
配列ID番号:9の位置324に対応する位置におけるアスパラギンからリジン;
配列ID番号:9の位置330に対応する位置におけるアスパラギン酸からグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置396に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:9の位置404に対応する位置におけるアラニンからセリン;
配列ID番号:9の位置406に対応する位置におけるアルギニンからリジン;
配列ID番号:9の位置410に対応する位置におけるリジンからイソロイシン;
配列ID番号:9の位置421に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:9の位置423に対応する位置におけるアラニンからバリン;
配列ID番号:9の位置434に対応する位置におけるシステインからセリン;
配列ID番号:9の位置434に対応する位置におけるシステインからチロシン;
配列ID番号:9の位置447に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:9の位置448に対応する位置におけるセリンからアラニン;
配列ID番号:9の位置449に対応する位置におけるバリンからグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置451に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:9の位置454に対応する位置におけるアスパラギン酸からアスパラギン;
配列ID番号:9の位置465に対応する位置におけるチロシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:9の位置470に対応する位置におけるリジンからトレオニン、および
配列ID番号:9の位置500に対応する位置におけるトレオニンからセリン
から成る群から選択される1つまたは複数のアミノ酸位置を含むことを特徴とする、請求項18に記載の方法。 - 前記変異したPPX遺伝子が、表2から選択される1つまたは複数の核酸配列変異を含むことを特徴とする、請求項18から19のいずれか一項に記載の方法。
- 前記変異したPPX遺伝子が表3aおよび表3bから選択される2つまたはそれ以上の変異の組合せを含むタンパク質をコードすることを特徴とする、請求項18から20のいずれか一項に記載の方法。
- 前記植物細胞が、バレイショ、ヒマワリ、テンサイ、トウモロコシ、ワタ、ダイズ、コムギ、ライムギ、エンバク、イネ、キャノーラ、果実、野菜、タバコ、オオムギ、モロコシ、トマト、マンゴ、モモ、リンゴ、ナシ、イチゴ、バナナ、メロン、ニンジン、レタス、タマネギ、ダイズspp、サトウキビ、エンドウマメ、フィールドビーン(field bean)、ポプラ、ブドウ、カンキツ、アルファルファ、ライムギ、エンバク、芝生およびイネ科牧草、アマ、アブラナ、キュウリ、アサガオ、ホウセンカ、トウガラシ、ナス、マリーゴールド、スイレン、キャベツ、ヒナギク、カーネーション、ペチュニア、チューリップ、アイリス、ユリ、および堅果を生じる植物から成る群から選択される植物から成る群から選択される植物に由来することを特徴とする、請求項18から21のいずれか一項に記載の方法。
- 前記植物細胞が、Solanum tuberosum、Oryza sativa、Sorghum bicolor、Ricinus communis、Brassica napus、 Glycine maxおよびZea maysから成る群から選択される種であることを特徴とする、請求項18から22のいずれか一項に記載の方法。
- 前記植物細胞が、Russet Burbankバレイショ栽培品種であることを特徴とする、請求項18から23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記植物が、1つまたは複数の除草剤に対して抵抗性を有する、請求項18から24のいずれか一項に記載の方法。
- 前記植物が、1つまたは複数のPPX阻害型除草剤に対して抵抗性を有する、請求項18から25のいずれか一項に記載の方法。
- 前記植物が、表5から選択される1つまたは複数の除草剤に対して抵抗性を有する、請求項18から26のいずれか一項に記載の方法。
- 前記植物が、フルミオキサジン、スルフェントラゾンおよびサフルフェナシルから成る群から選択される1つまたは複数の除草剤に対して抵抗性を有する、請求項18から27のいずれか一項に記載の方法。
- 除草剤耐性植物を産生するための方法であって、
(a)配列ID番号:1の52、85、105、111、130、139、143、144、145、147、165、167、170、180、185、192、193、199、206、212、219、220、221、226、228、229、230、237、244、256、257、270、271、272、305、311、316、318、332、343、354、357、359、360、366、393、403、424、426、430、438、440、444、455、457、470、478、483、484、485、487、490、503、508および525から成る群から選択される位置に対応する1つまたは複数のアミノ酸位置に変異を含むPPXタンパク質を発現するPPX遺伝子を有する植物細胞を産生することを含む、プロトポルフィリノーゲンIXオキシダーゼ(PPX)遺伝子に標的化された変異を有する遺伝子修復オリゴ核酸塩基(GRON)を、植物細胞に導入すること(または前記遺伝子は、 配列ID番号:9の58、64、74、84、93、97、98、101、119、121、124、139、 150、151、157、164、170、177、187、188、195、214、215、229、230、271、274、278、283、292、296、307、324、330、396、404、406、410、421、423、434、447、448、449、451、454、465、470および500から成る群から選択される位置に対応する1つまたは複数のアミノ酸位置に変異を含むタンパク質をコードする);
(b)除草剤の存在下で、対応する野生型植物細胞と比較して実質的に正常な成長および触媒活性を有する植物細胞同定する;および
(c)変異したPPX遺伝子を有する非トランスジェニック除草剤耐性植物を前記植物細胞から再生すること
を含む方法。 - 該除草剤が、PPXを阻害する除草剤であることを特徴とする、請求項29に記載の方法。
- 前記変異が
配列ID番号:1の位置52に対応する位置におけるグリシンからリジン;
図7、配列ID番号:7の位置52に対応する位置におけるアスパラギンからリジン;
配列ID番号:1の位置85の位置に対応する位置におけるアスパラギンからアスパラギン酸;
配列ID番号:1の位置111に対応する位置におけるグルタミン酸からバリン;
配列ID番号:1の位置130に対応する位置におけるグリシンからアスパラギン;
配列ID番号:1の位置139に対応する位置におけるアスパラギン酸からヒスチジン;
配列ID番号:1の位置143に対応する位置におけるプロリンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置144に対応する位置におけるアルギニンからシステイン;
配列ID番号:1の位置144に対応する位置におけるアルギニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置144に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置145に対応する位置におけるフェニルアラニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置145に対応する位置におけるフェニルアラニンからチロシン;
配列ID番号:1の位置147に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:1の位置165に対応する位置におけるフェニルアラニンからアスパラギン;
配列ID番号:1の位置180に対応する位置におけるアラニンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置185に対応する位置におけるプロリンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置185に対応する位置におけるプロリンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置185に対応する位置におけるプロリンからチロシン;
配列ID番号:1の位置192に対応する位置におけるグルタミン酸からアスパラギン酸;
配列ID番号:1の位置192に対応する位置におけるグルタミン酸からリジン;
配列ID番号:1の位置193に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置199に対応する位置におけるアルギニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置206に対応する位置におけるバリンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置219に対応する位置におけるチロシンからセリン;
配列ID番号:1の位置220に対応する位置におけるアラニンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置226に対応する位置におけるロイシンからメチオニン;
配列ID番号:1の位置228に対応する位置におけるメチオニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン;
配列ID番号:1の位置230に対応する位置におけるアラニンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置244に対応する位置におけるセリンからグリシン;
配列ID番号:1の位置244に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置256に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置256に対応する位置におけるアルギニンからセリン;
配列ID番号:1の位置270に対応する位置におけるリジンからグルタミン酸;
配列ID番号:1の位置270に対応する位置におけるリジンからグルタミン;
配列ID番号:1の位置271に対応する位置におけるプロリンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置272に対応する位置におけるグルタミンからフェニルアラニン;
配列ID番号:7の位置272に対応する位置におけるリジンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置305に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:1の位置311に対応する位置におけるグルタミン酸からアルギニン;
配列ID番号:1の位置316に対応する位置におけるトレオニンからグリシン;
配列ID番号:1の位置318に対応する位置におけるトレオニンからグリシン;
配列ID番号:1の位置332に対応する位置におけるセリンからシステイン;
配列ID番号:1の位置357に対応する位置におけるロイシンからイソロイシン;
配列ID番号:1の位置359に対応する位置におけるリジンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置359に対応する位置におけるリジンからトレオニン;
配列ID番号:7の位置359に対応する位置におけるセリンからアルギニン;
配列ID番号:7の位置359に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:7の位置360に対応する位置におけるロイシンからアスパラギン酸;
配列ID番号:1の位置360に対応する位置におけるロイシンからリジン;
配列ID番号:1の位置366に対応する位置におけるアラニンからグルタミン酸;
配列ID番号:1の位置393に対応する位置におけるロイシンからメチオニン;
配列ID番号:1の位置393に対応する位置におけるロイシンからセリン;
配列ID番号:1の位置393に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:1の位置403に対応する位置におけるロイシンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置424に対応する位置におけるロイシンからセリン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからシステイン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからイソロイシン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからロイシン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからバリン;
配列ID番号:1の位置430に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:1の位置438に対応する位置におけるリジンからセリン;
配列ID番号:1の位置440に対応する位置におけるグルタミン酸からリジン;
配列ID番号:1の位置444に対応する位置におけるバリンからイソロイシン;
配列ID番号:1の位置455に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:1の位置457に対応する位置におけるリジンからバリン;
配列ID番号:1の位置470に対応する位置におけるバリンからセリン;
配列ID番号:1の位置470に対応する位置におけるバリンからチロシン;
配列ID番号:1の位置478に対応する位置におけるフェニルアラニンからセリン;
配列ID番号:1の位置483に対応する位置におけるフェニルアラニンからグリシン;
配列ID番号:1の位置484に対応する位置におけるアスパラギン酸からアラニン;
配列ID番号:1の位置485に対応する位置におけるイソロイシンからグルタミン酸;
配列ID番号:1の位置487に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:1の位置490に対応する位置におけるリジンからアスパラギン;
配列ID番号:1の位置503に対応する位置におけるロイシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置508に対応する位置におけるバリンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置525に対応する位置におけるイソロイシンからトレオニン
および配列ID番号:7の位置525に対応する位置におけるイソロイシンからトレオニン;
配列ID番号:9の位置58に対応する位置におけるアスパラギン酸からアスパラギン;
配列ID番号:9の位置64に対応する位置におけるグルタミン酸からバリン;
配列ID番号:9の位置74に対応する位置におけるグリシンからシステイン;
配列ID番号:9の位置84に対応する位置におけるグリシンからアスパラギン;
配列ID番号:9の位置93に対応する位置におけるロイシンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置97に対応する位置におけるリジンからアルギニン;
配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからシステイン;
配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからロイシン;
配列ID番号:9の位置101に対応する位置におけるアラニンからバリン;
配列ID番号:9の位置119に対応する位置におけるセリンからアスパラギン;
配列ID番号:9の位置121に対応する位置におけるフェニルアラニンからロイシン;
配列ID番号:9の位置124に対応する位置におけるトレオニンからイソロイシン;
配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからチロシン;
配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからアルギニン;
配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置150に対応する位置におけるグルタミン酸からアスパラギン酸;
配列ID番号:9の位置150に対応する位置におけるグルタミン酸からリジン;
配列ID番号:9の位置151に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:9の位置157に対応する位置におけるグルタミンからロイシン;
配列ID番号:9の位置164に対応する位置におけるバリンからフェニルアラニン;
配列ID番号:9の位置164に対応する位置におけるバリンからアラニン;
配列ID番号:9の位置170に対応する位置におけるアスパラギン酸からグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置177に対応する位置におけるシステインからセリン;
配列ID番号:9の位置187に対応する位置におけるヒスチジンからグルタミン;
配列ID番号:9の位置188に対応する位置におけるロイシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:9の位置195に対応する位置におけるアスパラギンからリジン;
配列ID番号:9の位置214に対応する位置におけるプロリンからセリン;
配列ID番号:9の位置214に対応する位置におけるプロリンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置215に対応する位置におけるイソロイシンからセリン;
配列ID番号:9の位置215に対応する位置におけるイソロイシンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン;
配列ID番号:9の位置230に対応する位置におけるリジンからアルギニン;
配列ID番号:9の位置271に対応する位置におけるシステインからアルギニン;
配列ID番号:9の位置274に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:9の位置283に対応する位置におけるフェニルアラニンからグリシン;
配列ID番号:9の位置292に対応する位置におけるアラニンからグリシン;
配列ID番号:9の位置296に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:9の位置307に対応する位置におけるシステインからセリン;
配列ID番号:9の位置324に対応する位置におけるアスパラギンからアスパラギン酸;
配列ID番号:9の位置324に対応する位置におけるアスパラギンからリジン;
配列ID番号:9の位置330に対応する位置におけるアスパラギン酸からグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置396に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:9の位置404に対応する位置におけるアラニンからセリン;
配列ID番号:9の位置406に対応する位置におけるアルギニンからリジン;
配列ID番号:9の位置410に対応する位置におけるリジンからイソロイシン;
配列ID番号:9の位置421に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:9の位置423に対応する位置におけるアラニンからバリン;
配列ID番号:9の位置434に対応する位置におけるシステインからセリン;
配列ID番号:9の位置434に対応する位置におけるシステインからチロシン;
配列ID番号:9の位置447に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:9の位置448に対応する位置におけるセリンからアラニン;
配列ID番号:9の位置449に対応する位置におけるバリンからグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置451に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:9の位置454に対応する位置におけるアスパラギン酸からアスパラギン;
配列ID番号:9の位置465に対応する位置におけるチロシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:9の位置470に対応する位置におけるリジンからトレオニン、および
配列ID番号:9の位置500に対応する位置におけるトレオニンからセリン
から成る群から選択される1つまたは複数の変異を含むことを特徴とする、請求項29から30のいずれか一項に記載の方法。 - 前記変異したPPX遺伝子が、表2から選択される1つまたは複数の核酸配列の変異を含むことを特徴とする、請求項29から31のいずれか一項に記載の方法。
- 前記変異したPPX遺伝子が、表3aおよび表3bから選択される2つまたはそれ以上の変異の組合せを含むタンパク質をコードすることを特徴とする、請求項29から32のいずれか一項に記載の方法。
- 前記植物が、バレイショ、ヒマワリ、テンサイ、トウモロコシ、ワタ、ダイズ、コムギ、ライムギ、エンバク、イネ、キャノーラ、果実、野菜、タバコ、オオムギ、モロコシ、トマト、マンゴ、モモ、リンゴ、ナシ、イチゴ、バナナ、メロン、ニンジン、レタス、タマネギ、ダイズspp、サトウキビ、エンドウマメ、フィールドビーン(field bean)、ポプラ、ブドウ、カンキツ、アルファルファ、ライムギ、エンバク、芝生およびイネ科牧草、アマ、アブラナ、キュウリ、アサガオ、ホウセンカ、トウガラシ、ナス、マリーゴールド、スイレン、キャベツ、ヒナギク、カーネーション、ペチュニア、チューリップ、アイリス、ユリ、および場合は堅果を生じる植物から成る群から選択されることを特徴とする、請求項29から33のいずれか一項に記載の方法。
- 前記植物が、Solanum tuberosum、Oryza sativaおよびZea maysから成る群から選択される種であることを特徴とする、請求項29から34のいずれか一項に記載の方法。
- 前記植物が、Russet Burbankバレイショ栽培品種であることを特徴とする、請求項29から35のいずれか一項に記載の方法。
- 前記植物が、有性生殖により産生されることを特徴とする、請求項29から36のいずれか一項に記載の方法。
- 前記植物が塊茎から産生されることを特徴とする、請求項29から37のいずれか一項に記載の方法。
- 前記植物が1つまたは複数の除草剤に抵抗性を有することを特徴とする、請求項29から38のいずれか一項に記載の方法。
- 前記植物が1つまたは複数のPPX阻害型除草剤に抵抗性を有することを特徴とする、請求項29から39のいずれか一項に記載の方法。
- 前記植物が、表5から選択される1つまたは複数の除草剤に対して抵抗性を有することを特徴とする、請求項29から40のいずれか一項に記載の方法。
- 前記植物がフルミオキサジン、スルフェントラゾンおよびサフルフェナシルから成る群から選択される1つまたは複数の除草剤に対して抵抗性を有すことを特徴とする、請求項29から41のいずれか一項に記載の方法。
非トランスジェニック植物。 - 変異したプロトポルフィリノーゲンIXオキシダーゼ(PPX)遺伝子を含む植物細胞であって、前記遺伝子が、配列ID番号:1の52、85、105、111、130、139、143、144, 145、147、165、167、170、180、185、192、193、199、206、212、219、220、221、226、228、229、230、237、244、256、257、270、271、272、305、311、316、318、332、343、354、357、359、360、366、393、403、424、426、430、438、440、444、455、457、470、478、483、484、485、487、490、503、508および525から成る群から選択される位置に対応する1つまたは複数のアミノ酸位置に変異を含むタンパク質をコードする、または前記遺伝子が、配列ID番号:9の58、64、74、84、93、97、98、101、119、121、124、139、 150、151、157、164、170、177、187、188、195、214、215、229、230、271、274、278、283、292、296、307、324、330、396、404、406、410、421、423、434、447、448、449、451、454、465、470および500から成る群から選択される位置に対応する1つまたは複数のアミノ酸位置に変異を含むタンパク質をコードすることを特徴とする、変異したプロトポルフィリノーゲンIXオキシダーゼ(PPX)遺伝子を含む植物細胞。
- 1つまたは複数のアミノ酸の変異が、
配列ID番号:1の位置52に対応する位置におけるグリシンからリジン;
図7、配列ID番号:7の位置52の位置に対応する位置におけるアスパラギンからリジン;
配列ID番号:1の位置85の位置に対応する位置におけるアスパラギンからアスパラギン酸;
配列ID番号:1の位置111に対応する位置におけるグルタミン酸からバリン;
配列ID番号:1の位置130に対応する位置におけるグリシンからアスパラギン;
配列ID番号:1の位置139に対応する位置におけるアスパラギン酸からヒスチジン;
配列ID番号:1の位置143に対応する位置におけるプロリンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置144に対応する位置におけるアルギニンからシステイン;
配列ID番号:1の位置144に対応する位置におけるアルギニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置144に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置145に対応する位置におけるフェニルアラニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置145に対応する位置におけるフェニルアラニンからチロシン;
配列ID番号:1の位置147に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:1の位置165に対応する位置におけるフェニルアラニンからアスパラギン;
配列ID番号:1の位置180に対応する位置におけるアラニンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置185に対応する位置におけるプロリンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置185に対応する位置におけるプロリンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置185に対応する位置におけるプロリンからチロシン;
配列ID番号:1の位置192に対応する位置におけるグルタミン酸からアスパラギン酸;
配列ID番号:1の位置192に対応する位置におけるグルタミン酸からリジン;
配列ID番号:1の位置193に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置199に対応する位置におけるアルギニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置206に対応する位置におけるバリンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置219に対応する位置におけるチロシンからセリン;
配列ID番号:1の位置220に対応する位置におけるアラニンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置226に対応する位置におけるロイシンからメチオニン;
配列ID番号:1の位置228に対応する位置におけるメチオニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン;
配列ID番号:1の位置230に対応する位置におけるアラニンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置244に対応する位置におけるセリンからグリシン;
配列ID番号:1の位置244に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置256に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置256に対応する位置におけるアルギニンからセリン;
配列ID番号:1の位置270に対応する位置におけるリジンからグルタミン酸;
配列ID番号:1の位置270に対応する位置におけるリジンからグルタミン;
配列ID番号:1の位置271に対応する位置におけるプロリンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置272に対応する位置におけるグルタミンからフェニルアラニン;
配列ID番号:7の位置272に対応する位置におけるリジンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置305に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:1の位置311に対応する位置におけるグルタミン酸からアルギニン;
配列ID番号:1の位置316に対応する位置におけるトレオニンからグリシン;
配列ID番号:1の位置318に対応する位置におけるトレオニンからグリシン;
配列ID番号:1の位置332に対応する位置におけるセリンからシステイン;
配列ID番号:1の位置357に対応する位置におけるロイシンからイソロイシン;
配列ID番号:1の位置359に対応する位置におけるリジンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置359に対応する位置におけるリジンからトレオニン;
配列ID番号:7の位置359に対応する位置におけるセリンからアルギニン;
配列ID番号:7の位置359に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:7の位置360に対応する位置におけるロイシンからアスパラギン酸;
配列ID番号:1の位置360に対応する位置におけるロイシンからリジン;
配列ID番号:1の位置366に対応する位置におけるアラニンからグルタミン酸;
配列ID番号:1の位置393に対応する位置におけるロイシンからメチオニン;
配列ID番号:1の位置393に対応する位置におけるロイシンからセリン;
配列ID番号:1の位置393に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:1の位置403に対応する位置におけるロイシンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置424に対応する位置におけるロイシンからセリン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからシステイン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからイソロイシン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからロイシン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからバリン;
配列ID番号:1の位置430に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:1の位置438に対応する位置におけるリジンからセリン;
配列ID番号:1の位置440に対応する位置におけるグルタミン酸からリジン;
配列ID番号:1の位置444に対応する位置におけるバリンからイソロイシン;
配列ID番号:1の位置455に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:1の位置457に対応する位置におけるリジンからバリン;
配列ID番号:1の位置470に対応する位置におけるバリンからセリン;
配列ID番号:1の位置470に対応する位置におけるバリンからチロシン;
配列ID番号:1の位置478に対応する位置におけるフェニルアラニンからセリン;
配列ID番号:1の位置483に対応する位置におけるフェニルアラニンからグリシン;
配列ID番号:1の位置484に対応する位置におけるアスパラギン酸からアラニン;
配列ID番号:1の位置485に対応する位置におけるイソロイシンからグルタミン酸;
配列ID番号:1の位置487に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:1の位置490に対応する位置におけるリジンからアスパラギン;
配列ID番号:1の位置503に対応する位置におけるロイシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置508に対応する位置におけるバリンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置525に対応する位置におけるイソロイシンからトレオニン.
および配列ID番号:7の位置525に対応する位置におけるイソロイシンからトレオニン;
配列ID番号:9の位置58に対応する位置におけるアスパラギン酸からアスパラギン;
配列ID番号:9の位置64に対応する位置におけるグルタミン酸からバリン;
配列ID番号:9の位置74に対応する位置におけるグリシンからシステイン;
配列ID番号:9の位置84に対応する位置におけるグリシンからアスパラギン;
配列ID番号:9の位置93に対応する位置におけるロイシンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置97に対応する位置におけるリジンからアルギニン;
配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからシステイン;
配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからロイシン;
配列ID番号:9の位置101に対応する位置におけるアラニンからバリン;
配列ID番号:9の位置119に対応する位置におけるセリンからアスパラギン;
配列ID番号:9の位置121に対応する位置におけるフェニルアラニンからロイシン;
配列ID番号:9の位置124に対応する位置におけるトレオニンからイソロイシン;
配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからチロシン;
配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからアルギニン;
配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置150に対応する位置におけるグルタミン酸からアスパラギン酸;
配列ID番号:9の位置150に対応する位置におけるグルタミン酸からリジン;
配列ID番号:9の位置151に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:9の位置157に対応する位置におけるグルタミンからロイシン;
配列ID番号:9の位置164に対応する位置におけるバリンからフェニルアラニン;
配列ID番号:9の位置164に対応する位置におけるバリンからアラニン;
配列ID番号:9の位置170に対応する位置におけるアスパラギン酸からグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置177に対応する位置におけるシステインからセリン;
配列ID番号:9の位置187に対応する位置におけるヒスチジンからグルタミン;
配列ID番号:9の位置188に対応する位置におけるロイシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:9の位置195に対応する位置におけるアスパラギンからリジン;
配列ID番号:9の位置214に対応する位置におけるプロリンからセリン;
配列ID番号:9の位置214に対応する位置におけるプロリンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置215に対応する位置におけるイソロイシンからセリン;
配列ID番号:9の位置215に対応する位置におけるイソロイシンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン;
配列ID番号:9の位置230に対応する位置におけるリジンからアルギニン;
配列ID番号:9の位置271に対応する位置におけるシステインからアルギニン;
配列ID番号:9の位置274に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:9の位置283に対応する位置におけるフェニルアラニンからグリシン;
配列ID番号:9の位置292に対応する位置におけるアラニンからグリシン;
配列ID番号:9の位置296に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:9の位置307に対応する位置におけるシステインからセリン;
配列ID番号:9の位置324に対応する位置におけるアスパラギンからアスパラギン酸;
配列ID番号:9の位置324に対応する位置におけるアスパラギンからリジン;
配列ID番号:9の位置330に対応する位置におけるアスパラギン酸からグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置396に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:9の位置404に対応する位置におけるアラニンからセリン;
配列ID番号:9の位置406に対応する位置におけるアルギニンからリジン;
配列ID番号:9の位置410に対応する位置におけるリジンからイソロイシン;
配列ID番号:9の位置421に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:9の位置423に対応する位置におけるアラニンからバリン;
配列ID番号:9の位置434に対応する位置におけるシステインからセリン;
配列ID番号:9の位置434に対応する位置におけるシステインからチロシン;
配列ID番号:9の位置447に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:9の位置448に対応する位置におけるセリンからアラニン;
配列ID番号:9の位置449に対応する位置におけるバリンからグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置451に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:9の位置454に対応する位置におけるアスパラギン酸からアスパラギン;
配列ID番号:9の位置465に対応する位置におけるチロシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:9の位置470に対応する位置におけるリジンからトレオニン、および
配列ID番号:9の位置500に対応する位置におけるトレオニンからセリン
から成る群から選択されることを特徴とする、請求項43の植物細胞。 - 前記変異したPPX遺伝子が、表2から選択される1つまたは複数の核酸変異から選択されることを特徴とする、請求項43から44のいずれか一項に記載の植物細胞。
- 前記の変異したPPX遺伝子が、表3aおよび3bから選択される2つまたはそれ以上の組合せを含むタンパク質をコードすることを特徴とする、請求項43から45のいずれか一項に記載の植物細胞。
- 前記遺伝子が、配列ID番号:1の52、85、105、111、130、139、143、144, 145、147、165、167、170、180、185、192、193、199、206、212、219、220、221、226、228、229、230、237、244、256、257、270、271、272、305、311、316、318、332、343、354、357、359、360、366、393、403、424、426、430、438、440、444、455、457、470、478、483、484、485、487、490、503、508および525から成る群から選択される位置に対応する1つまたは複数のアミノ酸位置に変異を含むタンパク質をコードする、または前記遺伝子が、配列ID番号:9の58、64、74、84、93、97、98、101、119、121、124、139、150、151、157、164、170、177、187、188、195、 214、215、229、230、271、274、278、283、292、296、307、324、330、396、404、406、410、421、423、434、447、448、449、451、454、465、470および500から成る群から選択される位置に対応する1つまたは複数のアミノ酸位置に変異を含むタンパク質をコードすることを特徴とする、変異したプロトポルフィリノーゲンIXオキシダーゼ(PPX)遺伝子を含む植物。
- 1つまたは複数のアミノ酸位置での前記変異が、
配列ID番号:1の位置52に対応する位置におけるグリシンからリジン;
図7、配列ID番号:7の位置52の位置に対応する位置におけるアスパラギンからリジン;
配列ID番号:1の位置85の位置に対応する位置におけるアスパラギンからアスパラギン酸;
配列ID番号:1の位置111に対応する位置におけるグルタミン酸からバリン;
配列ID番号:1の位置130に対応する位置におけるグリシンからアスパラギン;
配列ID番号:1の位置139に対応する位置におけるアスパラギン酸からヒスチジン;
配列ID番号:1の位置143に対応する位置におけるプロリンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置144に対応する位置におけるアルギニンからシステイン;
配列ID番号:1の位置144に対応する位置におけるアルギニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置144に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置145に対応する位置におけるフェニルアラニンからロイシン, ;
配列ID番号:1の位置145に対応する位置におけるフェニルアラニンからチロシン;
配列ID番号:1の位置147に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:1の位置165に対応する位置におけるフェニルアラニンからアスパラギン;
配列ID番号:1の位置180に対応する位置におけるアラニンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置185に対応する位置におけるプロリンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置185に対応する位置におけるプロリンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置185に対応する位置におけるプロリンからチロシン;
配列ID番号:1の位置192に対応する位置におけるグルタミン酸からアスパラギン酸;
配列ID番号:1の位置192に対応する位置におけるグルタミン酸からリジン;
配列ID番号:1の位置193に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置199に対応する位置におけるアルギニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置206に対応する位置におけるバリンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置219に対応する位置におけるチロシンからセリン;
配列ID番号:1の位置220に対応する位置におけるアラニンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置226に対応する位置におけるロイシンからメチオニン;
配列ID番号:1の位置228に対応する位置におけるメチオニンからロイシン;
配列ID番号:1の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン;
配列ID番号:1の位置230に対応する位置におけるアラニンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置244に対応する位置におけるセリンからグリシン;
配列ID番号:1の位置244に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置256に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置256に対応する位置におけるアルギニンからセリン;
配列ID番号:1の位置270に対応する位置におけるリジンからグルタミン酸;
配列ID番号:1の位置270に対応する位置におけるリジンからグルタミン;
配列ID番号:1の位置271に対応する位置におけるプロリンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置272に対応する位置におけるグルタミンからフェニルアラニン;
配列ID番号:7の位置272に対応する位置におけるリジンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置305に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:1の位置311に対応する位置におけるグルタミン酸からアルギニン;
配列ID番号:1の位置316に対応する位置におけるトレオニンからグリシン;
配列ID番号:1の位置318に対応する位置におけるトレオニンからグリシン;
配列ID番号:1の位置332に対応する位置におけるセリンからシステイン;
配列ID番号:1の位置357に対応する位置におけるロイシンからイソロイシン;
配列ID番号:1の位置359に対応する位置におけるリジンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置359に対応する位置におけるリジンからトレオニン;
配列ID番号:7の位置359に対応する位置におけるセリンからアルギニン;
配列ID番号:7の位置359に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:7の位置360に対応する位置におけるロイシンからアスパラギン酸;
配列ID番号:1の位置360に対応する位置におけるロイシンからリジン;
配列ID番号:1の位置366に対応する位置におけるアラニンからグルタミン酸;
配列ID番号:1の位置393に対応する位置におけるロイシンからメチオニン;
配列ID番号:1の位置393に対応する位置におけるロイシンからセリン;
配列ID番号:1の位置393に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:1の位置403に対応する位置におけるロイシンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置424に対応する位置におけるロイシンからセリン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからシステイン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからヒスチジン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからイソロイシン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからロイシン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからアルギニン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置426に対応する位置におけるチロシンからバリン;
配列ID番号:1の位置430に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:1の位置438に対応する位置におけるリジンからセリン;
配列ID番号:1の位置440に対応する位置におけるグルタミン酸からリジン;
配列ID番号:1の位置444に対応する位置におけるバリンからイソロイシン;
配列ID番号:1の位置455に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:1の位置457に対応する位置におけるリジンからバリン;
配列ID番号:1の位置470に対応する位置におけるバリンからセリン;
配列ID番号:1の位置470に対応する位置におけるバリンからチロシン;
配列ID番号:1の位置478に対応する位置におけるフェニルアラニンからセリン;
配列ID番号:1の位置483に対応する位置におけるフェニルアラニンからグリシン;
配列ID番号:1の位置484に対応する位置におけるアスパラギン酸からアラニン;
配列ID番号:1の位置485に対応する位置におけるイソロイシンからグルタミン酸;
配列ID番号:1の位置487に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:1の位置490に対応する位置におけるリジンからアスパラギン;
配列ID番号:1の位置503に対応する位置におけるロイシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:1の位置508に対応する位置におけるバリンからトレオニン;
配列ID番号:1の位置525に対応する位置におけるイソロイシンからトレオニン、
および配列ID番号:7の位置525に対応する位置におけるイソロイシンからトレオニン;
配列ID番号:9の位置58に対応する位置におけるアスパラギン酸からアスパラギン;
配列ID番号:9の位置64に対応する位置におけるグルタミン酸からバリン;
配列ID番号:9の位置74に対応する位置におけるグリシンからシステイン;
配列ID番号:9の位置84に対応する位置におけるグリシンからアスパラギン;
配列ID番号:9の位置93に対応する位置におけるロイシンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置97に対応する位置におけるリジンからアルギニン;
配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからシステイン;
配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからロイシン;
配列ID番号:9の位置101に対応する位置におけるアラニンからバリン;
配列ID番号:9の位置119に対応する位置におけるセリンからアスパラギン;
配列ID番号:9の位置121に対応する位置におけるフェニルアラニンからロイシン;
配列ID番号:9の位置124に対応する位置におけるトレオニンからイソロイシン;
配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからチロシン;
配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからアルギニン;
配列ID番号:9の位置139に対応する位置におけるアスパラギンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置150に対応する位置におけるグルタミン酸からアスパラギン酸;
配列ID番号:9の位置150に対応する位置におけるグルタミン酸からリジン;
配列ID番号:9の位置151に対応する位置におけるセリンからトレオニン;
配列ID番号:9の位置157に対応する位置におけるグルタミンからロイシン;
配列ID番号:9の位置164に対応する位置におけるバリンからフェニルアラニン;
配列ID番号:9の位置164に対応する位置におけるバリンからアラニン;
配列ID番号:9の位置170に対応する位置におけるアスパラギン酸からグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置177に対応する位置におけるシステインからセリン;
配列ID番号:9の位置187に対応する位置におけるヒスチジンからグルタミン;
配列ID番号:9の位置188に対応する位置におけるロイシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:9の位置195に対応する位置におけるアスパラギンからリジン;
配列ID番号:9の位置214に対応する位置におけるプロリンからセリン;
配列ID番号:9の位置214に対応する位置におけるプロリンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置215に対応する位置におけるイソロイシンからセリン;
配列ID番号:9の位置215に対応する位置におけるイソロイシンからヒスチジン;
配列ID番号:9の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン;
配列ID番号:9の位置230に対応する位置におけるリジンからアルギニン;
配列ID番号:9の位置271に対応する位置におけるシステインからアルギニン;
配列ID番号:9の位置274に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:9の位置283に対応する位置におけるフェニルアラニンからグリシン;
配列ID番号:9の位置292に対応する位置におけるアラニンからグリシン;
配列ID番号:9の位置296に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:9の位置307に対応する位置におけるシステインからセリン;
配列ID番号:9の位置324に対応する位置におけるアスパラギンからアスパラギン酸;
配列ID番号:9の位置324に対応する位置におけるアスパラギンからリジン;
配列ID番号:9の位置330に対応する位置におけるアスパラギン酸からグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置396に対応する位置におけるセリンからロイシン;
配列ID番号:9の位置404に対応する位置におけるアラニンからセリン;
配列ID番号:9の位置406に対応する位置におけるアルギニンからリジン;
配列ID番号:9の位置410に対応する位置におけるリジンからイソロイシン;
配列ID番号:9の位置421に対応する位置におけるロイシンからバリン;
配列ID番号:9の位置423に対応する位置におけるアラニンからバリン;
配列ID番号:9の位置434に対応する位置におけるシステインからセリン;
配列ID番号:9の位置434に対応する位置におけるシステインからチロシン;
配列ID番号:9の位置447に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:9の位置448に対応する位置におけるセリンからアラニン;
配列ID番号:9の位置449に対応する位置におけるバリンからグルタミン酸;
配列ID番号:9の位置451に対応する位置におけるアスパラギン酸からグリシン;
配列ID番号:9の位置454に対応する位置におけるアスパラギン酸からアスパラギン;
配列ID番号:9の位置465に対応する位置におけるチロシンからフェニルアラニン;
配列ID番号:9の位置470に対応する位置におけるリジンからトレオニン、および
配列ID番号:9の位置500に対応する位置におけるトレオニンからセリン
から成る群から選択されることを特徴とする、請求項47に記載の植物。 - 前記変異したPPX遺伝子が、表4aおよび4bから選択される2つまたはそれ以上の変異の組合せを含むタンパク質をコードすることを特徴とする、請求項47から48のいずれか一項に記載の植物細胞。
- 前記変異したPPX遺伝子が、表2、表3aおよび表3bから選択される1つまたは複数の核酸配列の変異を含むことを特徴とする、請求項47から49のいずれか一項に記載の植物。
- 前記変異したPPX遺伝子が、表4aおよび表4bから選択される2つまたはそれ以上の組合せを含むタンパク質をコードすることを特徴とする、請求項47から50のいずれか一項に記載の植物。
- 前記植物が、バレイショ、ヒマワリ、テンサイ、トウモロコシ、ワタ、ダイズ、コムギ、ライムギ、エンバク、イネ、キャノーラ、果実、野菜、タバコ、オオムギ、モロコシ、トマト、マンゴ、モモ、リンゴ、ナシ、イチゴ、バナナ、メロン、ニンジン、レタス、タマネギ、ダイズspp、サトウキビ、エンドウマメ、フィールドビーン(field bean)、ポプラ、ブドウ、カンキツ、アルファルファ、ライムギ、エンバク、芝生およびイネ科牧草、アマ、アブラナ、キュウリ、アサガオ、ホウセンカ、トウガラシ、ナス、マリーゴールド、スイレン、キャベツ、ヒナギク、カーネーション、ペチュニア、チューリップ、アイリス、ユリ、および場合は堅果を生じる植物から成る群から選択されることを特徴とする、請求項47から51のいずれか一項に記載の植物。
- 前記植物細胞が、Solanum tuberosum、Oryza sativa、およびZea maysから成る群から選択される種であることを特徴とする、請求項47から52のいずれか一項に記載の植物。
- 前記植物がRusset Burbankバレイショ栽培品種であることを特徴とする、請求項47から53のいずれか一項に記載の非トランスジェニック植物。
- 前記植物が有性生殖により産生されることを特徴とする、請求項47から54のいずれか一項に記載の植物。
- 前記植物が塊茎から産生されることを特徴とする、請求項47から55のいずれか一項に記載の植物。
- 前記植物が1つまたは複数の除草剤に対して抵抗性を有すことを特徴とする、請求項47から56のいずれか一項に記載の植物。
- 前記植物が1つまたは複数のPPX阻害型除草剤に対して抵抗性を有すことを特徴とする、請求項47から57のいずれか一項に記載の植物。
- 前記植物が表5から選択される1つまたは複数の除草剤に対して抵抗性を有すことを特徴とする、請求項47から58のいずれか一項に記載の植物。
- 前記植物がフルミオキサジン、スルフェントラゾンおよびサフルフェナシルから成る群から選択される1つまたは複数の除草剤に対して抵抗性を有すことを特徴とする、請求項47から59のいずれか一項に記載の植物。
- 前記変異が、配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからシステイン (R98C)、配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン (R98H)、 配列ID番号:9の位置98(R98L)に対応する位置におけるアルギニンからリジン、配列ID番号:9の位置124に対応する位置におけるトレオニンからイソロイシン(T124I)、配列ID番号:9の位置144に対応する位置におけるアルギニンからシステイン(R144C)、配列ID番号:9の位置144に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン(R144H)、配列ID番号:9の位置144に対応する位置におけるアルギニンからロイシン(R144L)、配列ID番号:9の位置185に対応する位置におけるプロリンからチロシン(P185Y)、配列ID番号:9(P185R)の位置185に対応する位置におけるプロリンからアルギニン、配列ID番号:9の位置185に対応する位置におけるプロリンからヒスチジン(P185H)、配列ID番号:9の位置214に対応する位置におけるプロリンからセリン(P214S)、配列ID番号:9の位置220に対応する位置におけるアラニンからトレオニン(A220T)、 配列ID番号:9の位置214に対応する位置におけるプロリンからヒスチジン(P214H)、配列ID番号:9の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン(K229Q)、配列ID番号:9の位置307に対応する位置におけるシステインからセリン(C307S)、配列ID番号:9の位置332に対応する位置におけるセリンからシステイン(S332C)、配列ID番号:9の位置332に対応する位置におけるセリンからロイシン(S332L)、および配列ID番号:9の位置423に対応する位置におけるアラニンからバリン(A423V)から成る群から選択される1つまたは複数の変異であることを特徴とする、請求項1から17および請求項43から60のどちらかのいずれか一項に記載の植物細胞または植物。
- 前記変異が、
配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからシステイン(R98C)、配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからヒスチジン(R98H)、配列ID番号:9の位置98に対応する位置におけるアルギニンからリジン(R98L)、配列ID番号:9の位置124に対応する位置におけるトレオニンからイソロイシン(T124I)、 配列ID番号:9の位置214に対応する位置におけるプロリンからセリン(P214S)、配列ID番号:9の位置214に対応する位置におけるプロリンからヒスチジン(P214H)、配列ID番号:9の位置229に対応する位置におけるリジンからグルタミン(K229Q)、 配列ID番号:9の位置307に対応する位置におけるシステインからセリン (C307S)、および配列ID番号:9の位置423に対応する位置におけるアラニンからバリン (A423V)から成る群から選択されることを特徴とする、請求項18から42のいずれか一項に記載の方法。
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