JP2016195589A - 細胞分離フィルター、及びこれを利用した細胞濃縮液の製造方法 - Google Patents

Abstract

【課題】細胞濃縮液の製造における各工程に適したフロー方式に切り換えて使用できる細胞分離フィルターを提供する。【解決手段】第一通液口１１及び第二通液口１２が配置された容器１と、第一通液口１１、第二通液口１２間に充填されたろ材を備えた細胞分離フィルターであって、第一通液口１１及び第二通液口１２の配置を移動させることが可能に構成された切り換え機構Ａ２，Ｂ２を備えた。切り換え機構Ａ２，Ｂ２によりクロスフロー方式にした状態で細胞含有液を導入してろ材と接触させることにより、ろ材表面への粒子の堆積や目詰まりがし難くなり、ろ材の全面を使って大量の細胞含有液を濾過できる。切り換え機構Ａ２，Ｂ２によりデッドエンドフロー方式にした状態で細胞濃縮液を回収することにより、回収液の流れの方向がろ材による濾過方向と同じであるため細胞回収率を向上できる。【選択図】図４

Description

本発明は、細胞分離フィルター、及びこれを利用した細胞濃縮液の製造方法に関する。

近年、血液学や科学テクノロジーの急速な進歩に伴い、全血・骨髄・臍帯血・組織抽出物をはじめとする体液から必要な血液分画のみを分離して患者に投与することで治療効果を高め、さらに、治療に必要のない分画は投与しないことで副作用を抑制する、という治療スタイルが広く普及している。

例えば、血液輸血もその１つである。赤血球製剤は、出血及び赤血球が不足する場合、又は赤血球の機能低下により酸素が欠乏している場合に使用される血液製剤である。赤血球製剤には、異常な免疫反応や移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）等の副作用を誘導する白血球は不要であり、フィルターで白血球を除去する必要がある。場合によっては白血球に加えて血小板も除去することもある。

一方、血小板製剤は、血液凝固因子の欠乏による出血ないし出血傾向にある患者に使用される血液製剤である。血小板製剤の製造のためには、遠心分離により、血小板以外の不要な細胞や成分は除去され、必要とされる血小板成分のみが採取されている。

加えて近年、白血病や固形癌治療に向けた造血幹細胞移植が盛んに行われるようになり、治療に必要な、造血幹細胞を含む白血球群を分離し投与する方法がとられている。この造血幹細胞のソースとして、ドナーの負担が少ない、増殖能力が優れている、等の利点から、骨髄や末梢血に加えて臍帯血も注目を浴びている。また近年、月経血中にも幹細胞が豊富に存在することが示唆され、これまで廃棄されていた月経血も貴重な幹細胞ソースとして利用される可能性がある。

骨髄や末梢血に関して、不要な細胞を除き白血球を分離・純化して投与することが望まれている一方で、臍帯血についても血縁者のためのバンキングが盛んになり、使用時まで凍結保存する必要性から、凍結保存による赤血球溶血を防ぐことを目的に白血球は分離・純化されている。

これらのような細胞濃縮液の製造に使用される細胞分離フィルターは、第一通液口（例えば流入口）及び第二通液口（例えば流出口）が設けられた容器と、前記第一通液口及び前記第二通液口間に充填されたろ材（例えば不織布）を備えている（例えば、特許文献１参照）。
前記容器内の細胞含有液のフロー方式として、供給液の流れの方向が前記ろ材による濾過方向と直交するクロスフロー方式（例えば、特許文献１の第１図及び第２図参照）と、供給液の流れの方向が前記ろ材による濾過方向と同じであるデッドエンドフロー方式（例えば、特許文献１の第３図及び第４図参照）とがある。

特開昭６０−１９４９５９号公報

ここで、クロスフロー方式は、供給液の流れの方向が濾過方向と直交するので、ろ材表面への粒子の堆積や目詰まりをし難く、ろ材の全面を使って大量サンプルの濃縮に適しているが回収率が低くなる。
また、デッドエンドフロー方式は、供給液の流れの方向が前記ろ材による濾過方向と同じであるので、ろ材表面への粒子の堆積や目詰まりをし易く、大量サンプルの濃縮には不適であるが、ろ材に負荷する回収圧を高めることができる為、回収率が高くなる。

以上のとおり、クロスフロー方式及びデッドエンドフロー方式には一長一短があり、従来の細胞分離フィルターにおけるフロー方式は、クロスフロー方式及びデッドエンドフロー方式のどちらかである。
よって、使用状態における細胞分離フィルターにおいて、そのフロー方式はクロスフロー方式及びデッドエンドフロー方式のどちらかに固定されるので、細胞濃縮液の製造における各工程に適したフロー方式を選択できない。

そこで本発明が前述の状況に鑑み、解決しようとするところは、細胞濃縮液の製造における各工程に適したフロー方式に切り換えて使用することができる細胞分離フィルターを提供する点にある。

本願の発明者は、細胞濃縮液の製造における細胞分離フィルターの使用実態に基づく上記課題を解決するために鋭意研究を重ね、細胞分離フィルターの容器における通液口の配置を可変にすることにより、クロスフロー方式及びデッドエンドフロー方式を切り換えるという着想を得た。そして、このような着想に基づく検討及び構想設計を進めることにより本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明の要旨は以下の通りである。
〔１〕第一通液口及び第二通液口が配置された容器と、前記第一通液口及び前記第二通液口の間に充填されたろ材を備えた細胞分離フィルターであって、
前記容器が切り換え機構を備え、前記切り換え機構が、前記第一通液口及び／又は前記第二通液口の配置を移動させることが可能に構成されている細胞分離フィルター。
〔２〕前記切り換え機構が前記容器の第一面及び／又は前記第一面の対面方向に位置する第二面に備えられる前記〔１〕に記載の細胞分離フィルター。
〔３〕前記切り換え機構は、前記第一通液口及び／又は前記第二通液口の配置を、前記容器の第一面及び／又は前記第一面の対面方向に位置する第二面の中心部から最端部の間で移動させることが可能に構成されている前記〔１〕又は〔２〕に記載の細胞分離フィルター。
〔４〕前記切り替え機構が、回転移動式、スライド移動式及び着脱移動式からなる群より少なくとも１つ選ばれる前記〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の細胞分離フィルター。
〔５〕前記第一通液口及び第二通液口が、前記第一通液口及び第二通液口に連結される配管のキンク防止機構を有する配管の連結部を備えている前記〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載の細胞分離フィルター。
〔６〕前記連結部が、前記細胞分離フィルターの容器に固定された、中空の柱状の基部と、
前記基部の内腔面または外周面と嵌合する配管接続部とを備え、
前記配管接続部がその円周方向に１８０°以下の所定の角度で回転することで前記基部に固定される前記〔５〕に記載の細胞分離フィルター。
〔７〕前記連結部において、前記基部の内腔面と、前記配管接続部の外周面とが嵌合し、
前記配管接続部の外周面に突起部が設けられ、かつ前記基部の内腔面に前記突起部用のガイドが設けられ
ている前記〔６〕記載の細胞分離フィルター。
〔８〕前記連結部において、前記基部の外周面と、前記配管接続部の内腔面とが嵌合し、
前記基部の外周面に突起部が設けられ、かつ前記配管接続部の側面に前記突起部用のガイドが設けられている前記〔６〕記載の細胞分離フィルター。
〔９〕前記第一通液口及び第二通液口が、さらに液漏れ防止機構を備える前記〔５〕〜〔８〕のいずれかに記載の細胞分離フィルター。
〔１０〕前記ろ材が不織布である前記〔１〕〜〔９〕のいずれかに記載の細胞分離フィルター。
〔１１〕前記ろ材が多孔質セルロース粒子である前記〔１〕〜〔９〕のいずれかに記載の細胞分離フィルター。
〔１２〕前記ろ材が、前記多孔質セルロース粒子に、ｌｏｇＰ（Ｐはオクタノール―水系での分配係数）値が２．５０以上の化合物を固定化してなる前記〔１１〕に記載の細胞分離フィルター。
〔１３〕前記ろ材が、前記多孔質セルロース粒子に、トリプトファン誘導体、及びポリアニオン性化合物を固定化してなる前記〔１１〕に記載の細胞分離フィルター。
〔１４〕前記〔１〕〜〔１３〕のいずれかに記載の細胞分離フィルターの前記第一通液口又は前記第二通液口から細胞含有液を導入し、ろ材と接触させる接触工程、及び前記細胞分離フィルターの前記第一通液口又は前記第二通液口から細胞濃縮液を回収する回収工程、を有する細胞濃縮液の製造方法。
〔１５〕前記接触工程において、前記切り換え機構によりクロスフロー方式にし、前記細胞含有液を導入して前記ろ材と接触させる前記〔１４〕に記載の製造方法。
〔１６〕前記回収工程において、前記切り換え機構によりデッドエンドフロー方式にし、前記細胞分離フィルターの前記第一通液口又は前記第二通液口から細胞濃縮液を回収する前記〔１４〕又は〔１５〕に記載の製造方法。

本発明に係る細胞分離フィルターによれば、切り換え機構により通液口の配置を移動させることができるので、細胞濃縮液の製造における各工程に適したフロー方式を選択できる。
また、発明に係る細胞濃縮液の製造方法は、細胞分離フィルターの切り換え機構により、クロスフロー方式で細胞含有液を細胞分離フィルターへ導入することで、細胞分離フィルター内のろ材への粒子の堆積や目詰まりによる流動抵抗の上昇を抑制することができる。次に、細胞分離フィルターの切り換え機構により、デッドエンドフロー方式で細胞回収液を細胞分離フィルターへ導入することで、細胞分離フィルター内のろ材にかかる圧力を高めることができ、ろ材に捕捉された細胞を効率よく回収することができる。

本発明の実施の形態１に係る、切り換え機構が回転移動式である細胞分離フィルターの容器の構成例を示す概略図であり、（ａ）は斜視図、（ｂ）は部分縦断面分解斜視図、（ｃ）は切り換え機構によりデッドエンドフロー方式にした縦断面斜視図、（ｄ）は切り換え機構によりクロスフロー方式にした縦断面斜視図である。 本発明の実施の形態２に係る、切り換え機構が回転移動式である細胞分離フィルターの容器の構成例を示す概略図であり、（ａ）は斜視図、（ｂ）は分解斜視図、（ｃ）は切り換え機構によりデッドエンドフロー方式にした縦断面斜視図、（ｄ）は切り換え機構によりクロスフロー方式にした縦断面斜視図である。 本発明の実施の形態３に係る、切り換え機構がスライド移動式である細胞分離フィルターの容器の構成例を示す概略図であり、（ａ）は斜視図、（ｂ）は分解斜視図、（ｃ）は切り換え機構の部分縦断面分解斜視図である。 同概略図であり、（ａ）は切り換え機構によりデッドエンドフロー方式にした縦断面正面図、（ｂ）は切り換え機構によりクロスフロー方式にした縦断面正面図である。 本発明の実施の形態４に係る、切り換え機構がスライド移動式である細胞分離フィルターの容器の構成例を示す概略図であり、（ａ）は切り換え機構によりデッドエンドフロー方式にした縦断面正面図、（ｂ）は切り換え機構によりクロスフロー方式にした縦断面正面図である。 本発明の実施の形態５に係る、切り換え機構がスライド移動式である細胞分離フィルターの容器の構成例を示す概略図であり、（ａ）は斜視図、（ｂ）は部分縦断面分解斜視図、（ｃ）は切り換え機構によりデッドエンドフロー方式にした縦断面斜視図、（ｄ）は切り換え機構によりクロスフロー方式にした縦断面斜視図である。 同概略図であり、（ａ）は切り換え機構によりデッドエンドフロー方式にした縦断面正面図、（ｂ）は切り換え機構によりクロスフロー方式にした縦断面正面図である。 本発明の実施の形態６に係る、切り換え機構が着脱移動式である細胞分離フィルターの容器の構成例を示す概略図であり、（ａ）は斜視図、（ｂ）は部分縦断面分解斜視図、（ｃ）は切り換え機構によりデッドエンドフロー方式にした縦断面正面図、（ｄ）は切り換え機構によりクロスフロー方式にした縦断面正面図である。 本発明の実施の形態７に係る、切り換え機構が着脱移動式である細胞分離フィルターの容器の構成例を示す概略図であり、（ａ）は斜視図、（ｂ）は部分縦断面分解斜視図、（ｃ）は切り換え機構によりデッドエンドフロー方式にした縦断面正面図、（ｄ）は切り換え機構によりクロスフロー方式にした縦断面正面図である。 本発明の実施の形態８に係る、切り換え機構が着脱移動式である細胞分離フィルターの容器の構成例を示す概略図であり、（ａ）は斜視図、（ｂ）は部分縦断面分解斜視図、（ｃ）は切り換え機構によりデッドエンドフロー方式にした縦断面正面図、（ｂ）は切り換え機構によりクロスフロー方式にした縦断面正面図である。 本発明の細胞分離フィルターを用いて閉鎖的に細胞を分離する回路の例を示す概略構成図である。 本発明の実施の形態９に係る、細胞分離フィルターの容器の構成例を示す概略図であり、（ａ）は切り換え機構によりデッドエンドフロー方式にした斜視図、（ｂ）は断面図である。 図１２に示す細胞分離フィルターの連結部３５付近の断面図である。 図１２に示す細胞分離フィルターの連結部３５の構成例を示す概略図であり、（ａ）は配管接続部３７の分解図、（ｂ）は、配管接続部３７と基部３６との接続の仕方を示す斜視図、（ｃ）は閉止用着脱体であるキャップ４１の斜視図である。 図１４（ｂ）に示す連結部３５の別の構成例を示す概略図であり、（ａ）は配管接続部３７の分解図、（ｂ）は、配管接続部３７と、多段形状のガイド３９が設けられた基部３６との接続の仕方を示す斜視図である。 図１４（ｂ）に示す連結部３５の他の例を示す概略図であり、（ａ）はガイド３９にテーパー形状３９ａが設けられた状態を示し、（ｂ）は、ガイド３９の端部に固定穴３９ｂが設けられた状態を示す。 図１２に示す細胞分離フィルターの連結部３５の概略図であり、（ａ）は配管３４を備えた連結部３５の斜視図であり、（ｂ）は基部３６にキャップ４１が装着された状態を示す斜視図である。 本発明の実施の形態９に係る、連結部３５の他の構成例を示す概略図であり、（ａ）は連結部３５の断面図、（ｂ）は、配管接続部３７と基部３６との接続の仕方を示す斜視図であり、（ｃ）は、基部１６の内腔に配管接続部３７を嵌合させた状態で、基部１６の軸中心方向からの断面図である。 本発明の実施の形態１０に係る、連結部３５の構成例を示す概略図であり、（ａ）は連結部３５の断面図、（ｂ）は、配管接続部３７ａと基部３６ａとの接続の仕方を示す斜視図である。 本発明の実施の形態１０に係る、連結部３５の他の構成例を示す概略図であり、（ａ）は連結部３５の断面図、（ｂ）は、配管接続部３７ａと基部３６ａとの接続の仕方を示す斜視図である。 液漏れ防止機構４２を設けた連結部３５付近の構成例を示す概略図であり、（ａ）は液漏れ防止機構４２が配管接続部３７ａの内腔に設けられている態様を示す断面図であり、（ｂ）は液漏れ防止機構４２が基部３６ａの内部に設けられている態様を示す断面図である。

以下、本発明について詳細に説明する。
なお、添付図面において、細胞分離フィルターの容器の第一面を上、第二面を下にした状態で側面に向かって見た図を正面図とする。
また、図１〜図１０に示す細胞分離フィルターの容器１の構成例は、いずれも発明の概念を説明するための概略図であり、それらにおける切り換え機構の動作性やシール性等については、要求仕様等に応じて適宜の配慮を行った設計をすれば良い。

＜細胞分離フィルター＞
本発明に係る細胞分離フィルターは、第一通液口及び第二通液口が配置された容器と、前記第一通液口及び前記第二通液口の間に充填されたろ材を備えるとともに、前記第一通液口及び／又は前記第二通液口の配置を移動させる切り換え機構を備える。

細胞分離フィルターに用いられる容器は、任意の構造材料を使用して作成することができる。当該容器の構造材料としては特に限定されないが、非反応性ポリマー、生物親和性金属、合金、ガラス等が挙げられる。

非反応性ポリマーとしては、アクリロニトリルブタジエンスチレンターポリマー等のアクリロニトリルポリマー；ポリテトラフルオロエチレン、ポリクロロトリフルオロエチレン、テトラフルオロエチレンとヘキサフルオロプロピレンのコポリマー、ポリ塩化ビニル等のハロゲン化ポリマー；ポリアミド、ポリイミド、ポリスルホン、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリビニルクロリドアクリルコポリマー、ポリカーボネートアクリロニトリルブタジエンスチレン、ポリスチレン、ポリメチルペンテン等が挙げられる。

生物親和性金属及び合金としては、ステンレス鋼、チタン、白金、タンタル、金、及びそれらの合金、並びに金メッキ合金鉄、白金メッキ合金鉄、コバルトクロミウム合金、窒化チタン被膜ステンレス鋼等が挙げられる。

滅菌耐性を有する点から、当該容器の構造材料として、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、ポリイミド、ポリカーボネート、ポリスルホン、ポリメチルペンテン等が好ましい。

本発明において、細胞分離フィルターに用いられるろ材は、不織布や多孔質担体が挙げられる。

本発明において不織布の材質は特に制限されないが、滅菌耐性や細胞への安全性の観点からは、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリエチレン、高密度ポリエチレン、低密度ポリエチレン、ポリビニルアルコール、塩化ビニリデン、レーヨン、ビニロン、ポリプロピレン、アクリル（ポリメチルメタクリレート、ポリヒドロキシエチルメタクリレート、ポリアクリルニトリル、ポリアクリル酸、ポリアクリレート）、ナイロン、ポリイミド、アラミド（芳香族ポリアミド）、ポリアミド、キュプラ、カーボン、フェノール、ポリエステル、パルプ、麻、ポリウレタン、ポリスチレン、ポリカーボネート等の合成高分子、アガロース、セルロース、セルロースアセテート、キトサン、キチン等の天然高分子、ガラス等の無機材料や金属等が挙げられる。好ましくは、細胞捕捉能が高いポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリプロピレン、アクリル、ナイロン、ポリウレタンである。さらに好ましくは、有核細胞捕捉能が高いポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタラート、ナイロンである。２種以上の材質を組み合わせて繊維とする場合の繊維の形態としては、１本の繊維が異成分同士の材質よりなる繊維でもよく、異成分同士が剥離分割した分割繊維でもよい。また異成分同士の材質よりなる繊維をそれぞれ複合化した形態でもよい。ここでいう複合化とは、特に制限は無く、２種以上の繊維が混在した状態より構成される形態、あるいは単独の材質よりなる形態をそれぞれ張り合わせたもの等が挙げられる。さらに、蛋白質、ペプチド、アミノ酸、糖類等のように、特定の細胞に親和性のある分子を固定してもよい。

また、不織布に親水化処理を施してもよく、親水化処理により有核細胞以外の細胞の非特異的な捕捉が抑制され、体液や生体組織の処理液が偏りなく細胞分離フィルター中を通過するので、性能の向上、必要細胞の回収率の向上等を付与することができる。親水化処理としては、水溶性多価アルコール、又は水酸基やカチオン基、アニオン基を有するポリマー、あるいはその共重合体（例えば、ヒドロキシエチルメタクリレート、ジメチルアミノエチルメタクリレート、あるいはその共重合体等）を吸着させる方法；水溶性高分子（ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール等）を吸着させる方法；疎水性膜に親水性高分子を固定化する方法；細胞分離フィルターに電子照射する方法；含水状態で細胞分離フィルターに放射線を照射することで親水性高分子を架橋不溶化する方法；疎水性膜の表面をスルホン化する方法；親水性高分子と、疎水性ポリマードープとの混合物から膜をつくる方法；アルカリ水溶液処理（ＮａＯＨ、ＫＯＨ等）により膜表面に親水基を付与する方法；疎水性多孔質膜をアルコールに浸漬した後、水溶性ポリマー水溶液で処理、乾燥後、熱処理や放射線等で不溶化処理する方法；界面活性作用を有する物質を吸着させる方法等が挙げられる。親水性高分子としては、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、エチレン−ビニルアルコール共重合体、水溶性多価アルコール等が挙げられる。

不織布に固定するタンパク質としては、特定の細胞に親和性のあるタンパク質であれば特に限定されないが、具体的にはフィブロネクチン、ラミニン、ビトロネクチン、コラーゲン等が挙げられる。また、不織布に固定する糖類としては、細胞に親和性のある糖類であれば特に限定されないが、セルロース、キチン、キトサン等の多糖類やマンノース、グルコース、ガラクトース、フコース等のオリゴ糖等が挙げられる。

本発明における多孔質担体としては、セルロース、アセチルセルロース、デクストリン等の多糖類、及びポリスチレン、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体、ポリアクリルアミド、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリアクリル酸エステル、ポリメタクリル酸エステル、ポリビニルアルコール等の、合成ポリマーからなる有機担体が含まれる。これらは、ヒドロキシエチルメタクリレートのようなヒドロキシル基含有のポリマー材料や、ポリエチレンオキサイド鎖含有モノマーや、他の重合化モノマーの共重合体のような、グラフト共重合体からなるコーティング層を有していても構わない。活性基が担体表面に容易に導入されることから、これらの中ではセルロースやポリビニルアルコールのような合成ポリマーが実用的には好ましい。特に多孔質セルロース粒子が最も好ましい。

多孔質担体（特に多孔質セルロース粒子）には、ｌｏｇＰ（Ｐはオクタノール−水系での分配係数）値が２．５０以上の化合物を固定化してなるものであることが好ましい。
ｌｏｇＰ値が２．５０以上の化合物としては、トリプトファン誘導体、ポリアニオン性化合物等が挙げられ、トリプトファン誘導体及びポリアニオン性化合物が多孔質担体に固定されていることが好ましい。

ｌｏｇＰ値とは、化合物の疎水性のパラメータであり、代表的なオクタノール−水系での分配係数Ｐは以下のように求められる。まず、化合物をオクタノール（又は水）に溶解し、これに等量の水（又はオクタノール）を加え、グリッフィン・フラスク・シェイカー（Ｇｒｉｆｆｉｎ ｆｌａｓｋ ｓｈａｋｅｒ）（グリッフィン・アンド・ジョージ・リミテッド（Ｇｒｉｆｆｉｎ ＆ Ｇｅｏｒｇｅ Ｌｔｄ．）製）で３０分間振盪する。そののち２０００ｒｐｍで１〜２時間遠心分離し、オクタノール層及び水層中の化合物の各濃度を分光学的又はＧＬＣなどの種々の方法で測定する。これらの値を次式に代入することにより、Ｐが求められる。

Ｐ＝Ｃｏｃｔ／Ｃｗ（Ｃｏｃｔ：オクタノール層中の化合物濃度、Ｃｗ：水層中の化合物濃度）

これまでに多くの研究者らにより種々の化合物のｌｏｇＰ値が実測されているが、それらの実測値はシー・ハンシュ（Ｃ．Ｈａｎｓｃｈ）らによって整理されている（「パーティション・コーフィシエンツ・アンド・ゼア・ユージズ；ケミカル・レビューズ（ＰＡＲＴＩＴＩＯＮ ＣＯＥＦＦＩＣＩＥＮＴＳ ＡＮＤ ＴＨＥＩＲ ＵＳＥＳ；Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ）、７１巻、５２５頁、１９７１年」参照）。

また実測値の知られていない化合物についてはアール・エフ・レッカー（Ｒ．Ｆ．Ｒｅｋｋｅｒ）がその著書「ザ・ハイドロフォビック・フラグメンタル・コンスタント（ＴＨＥ ＨＹＤＲＯＰＨＯＢＩＣ ＦＲＡＧＭＥＮＴＡＬ ＣＯＮＳＴＡＮＴ）」，エルセビア・サイエンティフィック・パブリッシング・カンパニー・アムステルダム（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉ．Ｐｕｂ．Ｃｏｍ．，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）（１９７７）中に示している疎水性フラグメント定数ｆを用いて計算した値（Σｆ）が参考となる。疎水性フラグメント定数は数多くのｌｏｇＰ実測値をもとに、統計学的処理を行い決定された種々のフラグメントの疎水性を示す値であり、化合物を構成するおのおののフラグメントのｆ値の和はｌｏｇＰ値とほぼ一致すると報告されている。本発明においては、ｌｏｇＰ値とはΣｆをも包含するものである。

（実施の形態１）
図１（ａ）の斜視図に示すように、本発明の実施の形態１に係る細胞分離フィルターは、円形状の第一面１Ａ、第一面の対面方向に位置する（第一面と平行な）円形状の第二面１Ｂ、及び第一面１Ａ及び第二面１Ｂの最端部間を繋ぐ円筒面である側面１Ｃを有する。
また、図１（ｃ）及び（ｄ）の縦断面斜視図に示す容器１内の収容空間Ｓには、前記ろ材が収容される。なお、図面を見やすくするために前記ろ材の図示を省略している。

図１（ｂ）の部分縦断面分解斜視図、並びに図１（ｃ）及び（ｄ）の縦断面斜視図に示すように、容器１の第一面１Ａには、その中心から偏心した位置に円形のガイド穴４Ａが形成され、第一面１Ａに対向する第二面１Ｂには、その中心からガイド穴４Ａの偏心方向と逆方向へ偏心した位置に円形のガイド穴４Ｂが形成される。
そして、第一面１Ａに形成された円形のガイド穴４Ａに対し、円盤状の回転体２に形成された円形のガイド溝２Ａが係合するので、回転体２は容器１の本体に対して回転可能に支持される。
また、同様に、第二面１Ｂに形成された円形のガイド穴４Ｂに対し、円盤状の回転体３に形成された円形のガイド溝３Ａが係合するので、回転体３は容器１の本体に対して回転可能に支持される。
さらに、回転体２の外周寄り位置に第一通液口１１が取り付けられるとともに、回転体３の外周寄り位置に第二通液口１２が取り付けられているので、容器１の本体に対して回転体２，３を回転させた位置に応じて第一通液口１１及び第二通液口１２の位置が移動する。

このように回転体２，３を回転可能に支持して通液口１１，１２を移動させる機構が、回転移動式の切り換え機構Ａ１，Ｂ１を構成する。
このような切り換え機構Ａ１，Ｂ１を備えた細胞分離フィルターは、図１（ｃ）で示すように、通液口１１，１２を、それぞれ第一面１Ａ、第二面１Ｂの中心部に移動させることでデッドエンドフロー方式を実現できる。さらに、図１（ｄ）で示すように通液口１１，１２をそれぞれ第一面１Ａ、第二面１Ｂの最端部に移動させることでクロスフロー方式を実現できる。従って、切り替え機構Ａ１、Ｂ１により容易にフロー方式を切り換えることができる。

（実施の形態２）
図２（ａ）の斜視図、図２（ｂ）の分解斜視図、並びに図２（ｃ）及び（ｄ）の縦断面斜視図における本発明の実施の形態２に係る細胞分離フィルターにおいて、実施の形態１と同一の符号は同一又は相当部分を示しているので、共通する部分の説明は省略する。

図２（ｂ）の分解斜視図、並びに図２（ｃ）及び（ｄ）の縦断面斜視図に示すように、容器１の第一面１Ａには、その中心位置に管路６Ａが、中心から径方向へ離間した最端部近傍位置に管路７Ａが形成され、管路６Ａ及び７Ａ間の中点に支持孔５Ａが形成される。また、第一面１Ａに対向する第二面１Ｂには、その中心位置に管路６Ｂが、管路７Ａの中心から径方向への離間方向と逆方向である、中心から径方向へ離間した最端部近傍位置に管路７Ｂが形成され、管路６Ｂ及び７Ｂ間の中点に支持孔５Ｂが形成される。
ここで、管路６Ａは第一面１Ａから、第一面１Ａに対し垂直下方に収容空間Ｓまで導通している。管路６Ｂは第二面１Ｂから、第二面１Ｂに対し垂直上方に収容空間Ｓまで導通している。
ここで、管路７Ａは、第一面１Ａから第一面１Ａに対し垂直下方に伸びた後に、第一面１Ａに対し水平に径方向内方へ伸びるように屈曲しており、収容空間Ｓまで導通している。管路７Ｂは、第二面１Ｂから第二面１Ｂに対し垂直上方に伸びた後に第二面１Ｂに対し水平に径方向内方へ延びるように屈曲しており、収容空間Ｓまで導通している。

そして、第一面１Ａに形成された支持孔５Ａに対し、円盤状の回転体２中央の支軸２Ｂが嵌合するので、回転体２は容器１の本体に対して回転可能に支持される。
また、同様に、第二面１Ｂに形成された支持孔５Ｂに対し、円盤状の回転体３中央の支軸３Ｂが嵌合するので、回転体３は容器１の本体に対して回転可能に支持される。
よって、実施の形態２における第一通液口１１、第二通液口１２を移動させる機構は、実施の形態１と同様の回転移動式の切り換え機構Ａ１，Ｂ１である。

このような切り換え機構Ａ１，Ｂ１を備えた細胞分離フィルターは、図２（ｃ）で示すように、第一面１Ａの中心位置の管路６Ａに第一通液口１１が連通するとともに、第二面１Ｂの中心位置の管路６Ｂに第二通液口１２が連通することで、デッドエンドフロー方式を実現する。さらに、図２（ｄ）で示すように、第一面１Ａの最端部近傍位置の管路７Ａに第一通液口１１が連通するとともに、第二面１Ｂの最端部近傍位置の管路７Ｂに第二通液口１２が連通することで、クロスフロー方式を実現できる。従って、切り替え機構Ａ１、Ｂ１により容易にフロー方式を切り換えることができる。

（実施の形態３）
図３（ａ）の斜視図、図３（ｂ）の分解斜視図、及び図３（ｃ）の部分縦断面分解斜視図、並びに図４（ａ）及び（ｂ）の縦断面正面図における本発明の実施の形態３に係る細胞分離フィルターにおいて、実施の形態１と同一の符号は同一又は相当部分を示しているので、共通する部分の説明は省略する。

図３（ｂ）の分解斜視図、並びに図４（ａ）及び（ｂ）の斜視図に示すように、容器１の第一面１Ａには、その中央部から径方向へ伸びて最端部近傍までわたる矩形状の収容開口１Ｄが形成され、第一面１Ａに対向する第二面１Ｂには、その中央部から、収容開口１Ｄが伸びる径方向と逆方向の径方向へ伸びて最端部近傍までわたる矩形状の収容開口１Ｅが形成される。
そして、第一面１Ａに形成された収容開口１Ｄには、長手方向の前後位置に通孔８Ａ，８Ｂを形成したスライドガイド体８が収容される。
同様に、第二面１Ｂに形成された収容開口１Ｅには、長手方向の前後位置に通孔９Ａ，９Ｂを形成したスライドガイド体９が収容される。
さらに、閉止用スライド体１３Ａ、第一通液口１１を備えた通液用スライド体１０Ａ、閉止用スライド体１３Ｂは、スライドガイド体８により、スライド可能に支持される。また、閉止用スライド体１４Ａ、第二通液口１２を備えた通液用スライド体１０Ｂ、閉止用スライド体１４Ｂは、スライドガイド体９により、スライド可能に支持される。

よって、第一通液口１１を備えた通液用スライド体１０Ａをスライドガイド体８に沿ってスライドさせることにより第一通液口１１を移動させることができるとともに、第二通液口１２を備えた通液用スライド体１０Ｂをスライドガイド体９に沿ってスライドさせることにより第二通液口１２を移動させることができる。

このように通液用スライド体１０Ａ，１０Ｂをスライド可能に支持して第一通液口１１，第二通液口１２を移動させる機構が、スライド移動式の切り換え機構Ａ２，Ｂ２を構成する。
なお、図４（ａ）で示すように、通孔８Ｂを閉止用スライド体１３Ｂで塞ぎながら、通液用スライド体１０Ａを移動させて第一通液口１１を通孔８Ａに連通し、通孔９Ｂを閉止用スライド体１４Ｂで塞ぎながら、スライド体１０Ｂを移動させて第二通液口１２を通孔９Ａに連通することで、デッドエンドフロー方式を実現する。さらに、図４（ｂ）で示すように、通孔８Ａは閉止用スライド体１３Ａで塞ぎながら、スライド体１０Ａを移動させて第一通液口１１を通孔８Ｂに連通し、通孔９Ａは閉止用スライド体１４Ａで塞ぎながら、スライド体１０Ｂを移動させて第二通液口１２を通孔９Ｂに連通することで、クロスフロー方式を実現する。従って、スライド移動式の切り替え機構Ａ２，Ｂ２により容易にフロー方式を切り換えることができる。

（実施の形態４）
図５（ａ）及び（ｂ）の縦断面正面図における本発明の実施の形態４に係る細胞分離フィルターにおいて、実施の形態３と同一の符号は同一又は相当部分を示しているので、共通する部分の説明は省略する。

図５（ａ）及び（ｂ）の縦断面正面図に示すように、スライドガイド体８の通孔８Ａ，８Ｂは、それぞれ管路６Ａ，管路７Ａと連通し、スライドガイド体９の通孔９Ａ，９Ｂは、それぞれ管路６Ｂ，管路７Ｂと連通する。
実施の形態４における第一通液口１１、第二通液口１２を移動させる機構は、実施の形態３と同様のスライド移動式の切り換え機構Ａ２，Ｂ２であり、図５（ａ）のような供給液の流れの方向が前記ろ材による濾過方向と同じであるデッドエンドフロー方式、図５（ｂ）のような供給液の流れの方向が前記ろ材による濾過方向と直交するクロスフロー方式に容易に切り換えることができる。

（実施の形態５）
図６（ａ）の斜視図、図６（ｂ）の部分縦断面分解斜視図、並びに図６（ｃ）及び（ｄ）の縦断面斜視図、並びに図７（ａ）及び（ｂ）の縦断面正面図における本発明の実施の形態５に係る細胞分離フィルターにおいて、実施の形態３と同一の符号は同一又は相当部分を示しているので、共通する部分の説明は省略する。

本実施の形態における第一通液口１１を備えた通液用スライド体１０Ａは、実施の形態４で示されている通孔８Ａ，８Ｂを塞ぐ閉止用スライド体も兼ねるように、実施の形態３で示されている通液用スライド体１０Ａよりも長い矩形状をしており、ガイド溝１Ｆに係合した状態で径方向へスライド可能に支持され、第一面１Ａの中央部から径方向へ伸びる長穴１Ｈを通って外方へ、第一通液口１１が突出する。
また、同様に、本実施の形態における第二通液口１２を備えた通液用スライド体１０Ｂは、実施の形態４で示されている通孔９Ａ，９Ｂを塞ぐ閉止用スライド体も兼ねるように、実施の形態３で示されている通液用スライド体１０Ｂよりも長い矩形状をしており、ガイド溝１Ｇに係合した状態で径方向へスライド可能に支持され、第二面１Ｂの中央部から長穴１Ｈが伸びる径方向と逆方向の径方向へ伸びる長穴１Ｉを通って外方へ、第二通液口１２が突出する。

実施の形態５における第一通液口１１、第二通液口１２を移動させる機構は、実施の形態３及び４と同様のスライド移動式の切り換え機構Ａ２，Ｂ２であるが、実施の形態５では、第一通液口１１が長穴１Ｈ内を移動できる範囲内で第一通液口１１の配置を連続的に変えることができるとともに、第二通液口１２が長穴１Ｉ内を移動できる範囲内で第二通液口１２の配置を連続的に変えることができる。

（実施の形態６）
図８（ａ）の斜視図、図８（ｂ）の分解斜視図、並びに図８（ｃ）及び（ｄ）の縦断面斜視図における本発明の実施の形態６に係る細胞分離フィルターにおいて、実施の形態１と同一の符号は同一又は相当部分を示しているので、共通する部分の説明は省略する。

図８（ｂ）の分解斜視図、並びに図８（ｃ）及び（ｄ）の縦断面斜視図に示すように、容器１の第一面１Ａには、その中心位置に着脱穴１７Ａが、中心から径方向へ離間した最端部近傍位置に着脱穴１８Ａが形成され、容器１の第二面１Ｂには、その中心位置に着脱穴１７Ｂが、着脱穴１８Ａの中心から径方向への離間方向と逆方向である、中心から径方向へ離間した最端部近傍位置に着脱穴１８Ｂが形成される。
そして、第一面１Ａに形成された着脱穴１７Ａ及び１８Ａには、第一通液口１１を備えた通液用着脱体１５Ａ、及び閉止用着脱体１６Ａの一方がそれぞれ取り付けられ、第二面１Ｂに形成された着脱穴１７Ｂ及び１８Ｂには、第二通液口１２を備えた通液用着脱体１５Ｂ、及び閉止用着脱体１６Ｂの一方がそれぞれ取り付けられる。

このように、着脱穴１７Ａ，１８Ａ、並びに通液用着脱体１５Ａ及び閉止用着脱体１６Ａからなる、着脱穴１７Ａ，１８Ａに対して通液用着脱体１５Ａ及び閉止用着脱体１６Ａを付け替える機構が、着脱移動式の切り換え機構Ａ３を構成する。
また、着脱穴１７Ｂ，１８Ｂ、並びに通液用着脱体１５Ｂ及び閉止用着脱体１６Ｂからなる、着脱穴１７Ｂ，１８Ｂに対して通液用着脱体１５Ｂ及び閉止用着脱体１６Ｂを付け替える機構が、着脱移動式の切り換え機構Ｂ３を構成する。
このような切り換え機構Ａ３，Ｂ３によれば、図８（ｃ）で示すように、第一通液口１１、第二通液口１２を、それぞれ第一面１Ａ、第二面１Ｂの中心部に移動させることでデッドエンドフロー方式を実現することができる。さらに、図８（ｄ）で示すように第一通液口１１、第二通液口１２をそれぞれ第一面１Ａ、第二面１Ｂの最端部に移動させることでクロスフロー方式を実現できる。従って、着脱移動式の切り換え機構により容易にフロー方式を切り換えることができる。

（実施の形態７）
図９（ａ）の斜視図、図９（ｂ）の分解斜視図、並びに図９（ｃ）及び（ｄ）の縦断面斜視図における本発明の実施の形態７に係る細胞分離フィルターにおいて、実施の形態６と同一の符号は同一又は相当部分を示しているので、共通する部分の説明は省略する。なお、管路６Ａ，６Ｂ，７Ａ，７Ｂは、実施の形態２の図２、及び実施の形態４の図５と同様である。

実施の形態７における第一通液口１１、第二通液口１２を移動させる機構は、実施の形態６と同様の着脱移動式の切り換え機構Ａ３，Ｂ３である。
このような切り換え機構Ａ３，Ｂ３によれば、図９（ｃ）で示すように、第一通液口１１、第二通液口１２を、それぞれ第一面１Ａ、第二面１Ｂの中心部に移動させることでデッドエンドフロー方式を実現することができる。さらに、図９（ｄ）で示すように第一通液口１１、第二通液口１２をそれぞれ第一面１Ａ、第二面１Ｂの最端部に移動させることでクロスフロー方式を実現できる。従って、着脱移動式の切り換え機構により容易にフロー方式を切り換えることができる。
ここで、図９（ｃ）の状態では、第一面１Ａの中心位置の管路６Ａに第一通液口１１が連通するとともに、第二面１Ｂの中心位置の管路６Ｂに第二通液口１２が連通する。
また、図９（ｄ）の状態では、第一面１Ａの最端部近傍位置の管路７Ａに第一通液口１１が連通するとともに、第二面１Ｂの最端部近傍位置の管路７Ｂに第二通液口１２が連通する。

（実施の形態８）
図１０（ａ）の斜視図、図１０（ｂ）の分解斜視図、並びに図１０（ｃ）及び（ｄ）の縦断面斜視図における本発明の実施の形態８に係る細胞分離フィルターにおいて、実施の形態６と同一の符号は同一又は相当部分を示しているので、共通する部分の説明は省略する。
本実施の形態は、実施の形態６における第一面１Ａに形成された着脱穴１８Ａ、及び第二面に形成された着脱穴１８Ｂを無くし、側面１Ｃの上部に着脱穴１９Ａを形成するとともに、第一面１Ａ及び第二面１Ｂ中央の着脱穴１７Ａ，１７Ｂの中心を通って第一面１Ａ及び第二面１Ｂから等距離の点を基準にして、側面１Ｃにおける着脱穴１９Ａと点対称位置である、側面１Ｃの下部に着脱穴１９Ｂを形成したものである。第一面１Ａに形成された着脱穴１７Ａ及び側面１Ｃの上部の着脱穴１９Ａには、第一通液口１１を備えた通液用着脱体１５Ａ、及び閉止用着脱体１６Ａの一方がそれぞれ取り付けられ、第二面１Ｂに形成された着脱穴１７Ｂ及び１８Ｂには、第二通液口１２を備えた通液用着脱体１５Ｂ、及び閉止用着脱体１６Ｂの一方がそれぞれ取り付けられる。

本実施の形態において、着脱穴１７Ａ，１９Ａに対して第一通液口１１を備えた通液用着脱体１５Ａ及び閉止用着脱体１６Ａを付け替える機構が、着脱移動式の切り換え機構Ａ３を構成する。
また、着脱穴１７Ｂ，１９Ｂ、並びに通液用着脱体１５Ｂ及び閉止用着脱体１６Ｂからなる、着脱穴１７Ｂ，１９Ｂに対して通液用着脱体１５Ｂ及び閉止用着脱体１６Ｂを付け替える機構が、着脱移動式の切り換え機構Ｂ３を構成する。
このような切り換え機構Ａ３，Ｂ３によれば、図９（ｃ）で示すように、第一通液口１１、第二通液口１２を、それぞれ第一面１Ａ、第二面１Ｂの中心部に移動させることでデッドエンドフロー方式を実現することができる。さらに、図９（ｄ）で示すように第一通液口１１、第二通液口１２をそれぞれ第一面１Ａ、第二面１Ｂの最端部に移動させることでクロスフロー方式を実現できる。従って、着脱移動式の切り換え機構により容易にフロー方式を切り換えることができる。

前記実施の形態１〜８に係る細胞分離フィルターでは、前記第一通液口１１及び第二通液口１２が、前記第一通液口１１及び第二通液口１２に連結される配管３４のキンク防止機構を有する配管３４の連結部３５を備えていてもよい。

（実施の形態９）
例えば、図１２（ａ）の斜視図、図１２（ｂ）の断面図および図１３の断面図に示すように、前記連結部３５は、前記細胞分離フィルターの容器１に固定された、中空の柱状の基部３６および前記基部３６の内腔面と嵌合する配管接続部３７を備える。

図１４（ｂ）の斜視図に示すように、前記基部３６は、前記容器１の前記着脱穴１７Ａ、１７Ｂ、１８Ａ、１８Ｂ、１９Ａ，１９Ｂの周縁が肉厚のある管状に盛り上った状態で構成されていてもよいし、前記着脱穴１７Ａ、１７Ｂ、１８Ａ、１８Ｂ、１９Ａ，１９Ｂに中空の柱状部材を装着してもよい。前記基部３６の内腔面には、前記配管接続部３７に設けた突起部３８を挿入するためのガイド３９が設けられる。

例えば、前記配管接続部３７は、図１４（ａ）の分解斜視図および図１４（ｂ）の斜視図に示すように、第一通液口１１（又は第二通液口１２）を備えた管状部材である。前記第一通液口１１（又は第二通液口１２）とは反対側の端部の外周面３７ａには、配管接続部３７から外れないように固定される形で突起部３８が設けられている。
また、図１５（ａ）、図１５（ｂ）に示すように、前記基部３６に設けるガイド３９を多段にしてもよい。多段のガイド３９を用いることで、前記基部３６と前記突起部３８との固定強度を高めて、前記細胞分離フィルターに液体を導入した際に発生する圧力の変化にも十分対応でき、細胞の回収を好適に行うことができる。なお、前記多段の形状としては、段を２つ以上設けることで、ガイド３９の端部まで差し込んだ突起部３８がガイド３９の入口まで戻りにくい形状になっていればよく、特に限定はない。
また、図１４（ｂ）の斜視図に示すように、前記基部３６のガイド３９は、前記基部３６の内腔面と外周面が貫通する形状でもよい。

前記配管接続部３７を前記基部３６に固定する方法としては、例えば、前記配管接続部３７の突起部３８側の端部を、前記基部３６の内腔に入れ、前記突起部３８が前記ガイド３９に沿うように、前記配管接続部３７を回転させることで、前記配管接続部３７を前記基部３６に固定する（図１７（ａ））。
また、前記ガイド３９の幅は、前記配管接続部３７が前記基部３６に固定される位置に到達するまでに、徐々に狭まるテーパー形状３９ａに設計してもよい（図１６（ａ））。前記突起部３８は、取り外し可能な状態で締め付けられるようにして固定され、簡単に脱落することが無く、圧に耐えられるように設計することが好ましい。また、固定位置の確認が出来るよう、前記配管接続部３７が前記基部３６に固定される位置において、前記ガイド３９の端部にはガイドの幅よりも広い幅の固定穴３９ｂを有し、取り外し可能な状態で前記突起部３８が固定されるように設計してもよい（図１６（ｂ））。
前記配管接続部３７を回転させる所定の角度としては、１８０°以下であればよく、キンク防止効果と前記基部３６の強度とのバランスの観点から、９０°以下が好ましく、４５°以下がより好ましい。
前記所定の角度は、前記基部３６の円周方向に設けたガイド３９の長さで調整することができる。

また、前記配管接続部３７と前記基部３６との間の任意の位置には、液漏れを防ぐ観点から、シール４０を設けてもよい。特に、シール４０としてシリコーン製のゴムパッキンやＯリングが好適に用いることができる。

また、細胞分離フィルターにおいて、通液しない着脱穴の基部３６には、図１２（ａ）、図１２（ｂ）、図１４（ｃ）および図１７（ｂ）に示すように、閉止用着脱体としてキャップ４１を装着することができる。前記キャップ４１は、第一通液口１１（又は第二通液口１２）を塞いでいる形態以外は、前記配管接続部３７と同じ形態であればよい。

また、図１８（ａ）の断面図および図１８（ｂ）の斜視図に示すように、前記基部３６のガイド３９を溝状にしてもよい。溝状のガイド３９を用いることで、前記基部３６の強度を高めて、前記細胞分離フィルターに液体を導入した際に発生する圧力の変化にも十分対応でき、細胞の回収を好適に行うことができる。
また、前記溝状のガイド３９の幅は、前記配管接続部３７が前記基部３６に固定される位置に到達するまでに、徐々に狭まる形状にしてもよい。或いは、前記溝状のガイド３９の溝の高さを、前記配管接続部３７が前記基部３６に固定される位置に到達するまでに、徐々に低くなる形状にしてもよい。前記突起部３８は、取り外し可能な状態で締め付けられるようにして固定され、簡単に脱落することが無く、圧に耐えられるように設計することが好ましい。また、図１８（ｃ）に示すように、固定位置の確認が出来るよう、前記配管接続部３７が前記基部３６に固定される位置において、前記溝状のガイド３９の端部には、前記溝状のガイド３９の幅よりも広い幅で、前記溝状のガイド３９の溝よりも高い固定穴３９ｂを有し、取り外し可能な状態で前記突起部３８が固定されるように設計してもよい。なお、図１８（ｃ）は、基部１６の内腔に配管接続部３７を嵌合させた状態で、基部１６の軸中心方向からの断面図を示す。

（実施の形態１０）
キンク防止機構を有する配管３４の連結部３５の別の態様としては、例えば、図１９（ａ）の断面図および図１９（ｂ）の斜視図に示すように、前記基部３６ａの外周面と、前記配管接続部３７ａの内腔面とが嵌合する構成でもよい。この構成では、前記基部３６ａの外周面に突起部３８を設ける。また、前記配管接続部３７ａの側面には前記突起部３８のためのガイド３９を設ける。

また、前記配管接続部３７ａに設けるガイド３９を多段にしてもよい。多段のガイド３９を用いることで、前記配管接続部３７ａとガイド３９との固定強度を高めて、前記細胞分離フィルターに液体を導入した際に発生する圧力の変化にも十分対応でき、細胞の回収を好適に行うことができる。なお、前記多段の形状としては、段を２つ以上設けることで、ガイド３９の端部まで差し込んだ突起部３８がガイド３９の入口まで戻りにくい形状になっていればよく、特に限定はない。
また、図１９（ｂ）の斜視図に示すように、前記配管接続部３７のガイド３９は、前記配管接続部の内腔面と外周面とが貫通する形状でもよい。
また、前記ガイド３９の幅は、前記配管接続部３７が前記基部３６ａに固定される位置に到達するまでに、徐々に狭まるテーパー形状にしてもよい。前記突起部３８ａは、取り外し可能な状態で締め付けられるようにして固定され、簡単に脱落することが無く、圧に耐えられるように設計することが好ましい。また、固定位置の確認が出来るよう、前記配管接続部３７ａが前記基部３６ａに固定される位置において、前記ガイド３９にはガイドの幅よりも大きい幅の固定穴を有し、取り外し可能な状態で突起部３８ａが固定されるように設計してもよい。

前記配管接続部３７ａを回転させる所定の角度としては、１８０°以下であればよく、キンク防止効果と基部３６の強度とのバランスの観点から、９０°以下が好ましく、４５°以下がより好ましい。
前記所定の角度は、前記配管接続部３７ａに設けたガイド３９の長さで調整することができる。
また、前記配管接続部３７ａの第一通液口１１（又は第二通液口１２）を塞ぐことで、閉止用着脱体とすることができる。

前記実施の形態１０に係る細胞分離フィルターでは、図２０（ａ）の断面図および図２０（ｂ）の斜視図に示すように、配管接続部３７ａの内腔面に突起部３８ａ、基部３６ａの外周面に溝状のガイド３９を設けてもよい。
また、前記溝状のガイド３９の幅は、前記配管接続部３７が前記基部３６に固定される位置に到達するまでに、徐々に狭まるテーパー形状にしてもよい。或いは、前記溝状のガイド３９の溝の高さは、前記配管接続部３７が前記基部３６に固定される位置に到達するまでに、徐々に低くなる形状にしてもよい。前記突起部３８は、取り外し可能な状態で締め付けられるようにして固定され、簡単に脱落することが無く、圧に耐えられるように設計することが好ましい。また、固定位置の確認が出来るよう、前記配管接続部３７が前記基部３６に固定される位置において、前記溝状のガイド３９の端部には、前記溝状のガイド３９の幅よりも広い幅で、前記溝状のガイド３９の溝よりも高い固定穴を有し、取り外し可能な状態で前記突起部３８が固定されるように設計してもよい。

また、前記実施の形態１〜１０に係る細胞分離フィルターでは、前記第一通液口及び第二通液口が、さらに液漏れ防止機構を備えてもよい。前記液漏れ防止機構は、前記配管接続部３７ａを取り外す際に細胞分離フィルター内部または配管３４からの液体が流出することを防ぐための機構である。
例えば、図２１（ａ）の断面図に示すように、第一通液口１１を有する配管接続部３７ａの内腔に液漏れ防止機構４２を設ける。
また、液漏れ防止機構４２は、図２１（ｂ）の断面図に示すように、前記基部３６ａの内腔に設けられていてもよい。
さらに、図２１（ａ）、図２１（ｂ）に示す２箇所の位置に液漏れ防止機構４２を併用してもよい。
また、前記液漏れ防止機構４２が設けられる配管接続部３７ａの内腔、基部３６ａの内腔の位置としては、図２１（ａ）、図２１（ｂ）に示す以外の位置にあってもよい。
前記液漏れ防止機構としては、ボール式、ディスク式、スイング式などの逆止弁が挙げられる。

＜細胞濃縮液の製造方法＞
本発明の細胞濃縮液の製造方法は、前記細胞分離フィルターの第一通液口１１又は第二通液口１２から細胞含有液を導入し、ろ材と接触させる接触工程、及び細胞分離フィルターＳＦの第一通液口１１又は第二通液口１２から細胞濃縮液を回収する回収工程、を有する。

本発明における細胞含有液とは、末梢血、骨髄、臍帯血、月経血、組織抽出物等の有核細胞を含有する体液、あるいはこれらの体液を生理食塩液、カルシウムイオンやマグネシウムイオン等の２価カチオンを含むリンゲル液、細胞培養に使用するＲＰＭＩ、ＭＥＭ、ＩＭＥＭ、ＤＭＥＭ等の培地、ＰＢＳ等のリン酸緩衝液で希釈したもの、あるいは体液から細胞を粗分離したものであっても構わない。また動物種も、哺乳動物であれば特に限定されず、例えばヒト、ウシ、マウス、ラット、ブタ、サル、イヌ、ネコ等が挙げられる。細胞含有液が抗凝固剤を含有する場合も、抗凝固剤の種類は限定されず、例えばヘパリン、低分子ヘパリン、フサン（メチル酸ナフォモスタット）、ＥＤＴＡ、ＡＣＤ（ａｃｉｄ-ｃｉｔｒａｔｅ-ｄｅｘｔｒｏｓｅ）液、ＣＰＤ（ｃｉｔｒａｔｅ-ｐｈｏｓｐｈａｔｅ-ｄｅｘｔｒｏｓｅ）液等のクエン酸抗凝固が挙げられる。使用する目的に影響がなければ、保存条件も限定されない。

本発明における有核細胞とは、核を含有する細胞であれば特に限定されず、例えば、単核球、白血球、顆粒球、好中球、好酸球、好塩基球、赤芽球、骨髄芽球、前骨髄球、骨髄球、後骨髄球、リンパ球、単球、マクロファージ、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ＮＫ細胞、ＮＫ／Ｔ細胞、樹状細胞、多核巨細胞、上皮細胞、内皮細胞、間葉系細胞、間葉系幹細胞、造血幹細胞、ＥＳ細胞、ｉＰＳ細胞及び幹細胞等が挙げられる。
本発明における細胞濃縮液とは、有核細胞を含有する液体であって、前記細胞含有液と比較して液体中における有核細胞数が多い、又は細胞密度が高い液体をいう。なお、本発明における幹細胞とは、体液中から分離され、多分化能及び自己複製能を有する細胞をいう。

本発明における間葉系幹細胞は、分化誘導因子の添加により骨芽細胞、軟骨細胞、血管内皮細胞、心筋細胞、あるいは、脂肪、歯周組織構成細胞であるセメント芽細胞、歯周靱帯繊維芽細胞等へ分化する細胞である。また、造血幹細胞は、白血球、リンパ球、好中球、好酸球、好塩基球、顆粒球、単球、マクロファージ、赤血球、血小板、巨核球、樹状細胞等の血球系細胞を分化する細胞である。

本発明における細胞分離フィルターから細胞濃縮液を回収する工程は、フィルターを通過して得られる有核細胞を多く含有する液体を回収する工程であり、細胞分離フィルターの性質に応じて、細胞濃縮液を回収できればよい。

フィルター内に充填されたろ材が、除去目的とする細胞や夾雑物と親和性を持つ場合は、フィルターの流入口から細胞含有液を導入し、ろ材と細胞含有液を接触させる接触工程の後、流出口から細胞濃縮液を回収することができる。フィルターの流出口から細胞濃縮液を回収する際に、回収液をフィルターの流入口から導入して細胞濃縮液を流出口から回収することが好ましい。除去目的の細胞としては、例えば顆粒球、単球、血小板、Ｂリンパ球、特定のサブクラスを有するリンパ球等が挙げられる。具体的には、顆粒球をフィルターに捕捉して除去し、単核球含有分画を回収する方法が挙げられる。

フィルター内に充填されたろ材が、回収目的とする有核細胞と親和性を持つ場合は、フィルターの流入口から細胞含有液を導入して、除去目的とする細胞や夾雑物を流出口より流出させた後、流入口から細胞濃縮液を回収することができる。フィルターの流入口から細胞濃縮液を回収する際に、回収液をフィルターの流出口から導入し細胞濃縮液を流入口から回収することが好ましい。除去目的の細胞としては、例えば赤血球、Ｔリンパ球、特定のサブクラスを有するリンパ球等が挙げられる。具体的には、不要な細胞を通過させ、フィルターに捕捉された幹細胞を回収する方法が挙げられる。

また、回収液をフィルターの流出口から導入して細胞濃縮液を回収する場合には、回収の前に、洗浄液をフィルターの流入口から導入することで、より効率的に、除去目的とする細胞や夾雑物を流出口より流出させることができる。洗浄液は除去目的とする細胞や夾雑物のみを洗い流すことができれば特に限定されず、例えば生理食塩水、リンゲル液、細胞培養に用いる培地、リン酸緩衝液等の一般的な緩衝液、あるいはこれら溶液に血清やタンパク質を添加した溶液が挙げられる。

回収液は、フィルター内に捕捉された有核細胞、あるいはフィルター内に残留する単核球を回収する目的で好適に使用される。回収液は特に限定されず、例えば生理食塩水の他、マグネシクムイオンやカルシウムイオン等の２価カチオン、糖類、血清、蛋白質を含む液体、緩衝液、培地、血漿やそれらを含む液体等が挙げられる。フィルターに捕捉された有核細胞の回収率を上げるために、回収液の粘張度を上げても良い。粘張度を上げるために回収液に添加する物質は特に限定されず、例えばアルブミン、フィブリノーゲン、グロブリン、デキストラン、ヒドロキシエチルスターチ、ヒドロキシルセルロース、コラーゲン、ヒアルロン酸、ゼラチン等が挙げられる。

細胞含有液及び回収液を通液する速度及びその方法は特に制限されず、例えば重力を利用して通液する方法、ローラークレンメやシリンジポンプを用いて流速を一定にしながら通液する方法、高い圧力をかけて一気に通液する方法等が挙げられる。フィルター内に捕捉された有核細胞を回収する目的には、有核細胞回収効率の点から、回収液を高い圧力をかけて一気に通液する方法が好ましい。シリンジを用いて手動もしくは、ポンプを用いて９０ｍＬ／ｍｉｎ以上での流速で通液する方法が、より多くの有核細胞を回収することができる点で好ましい。

本発明の細胞分離フィルターを用いて閉鎖的に細胞を分離する回路の例を図１１に示す。
図１１に記載の回路は、細胞含有液を収容する容器２０は通液口を備え、通液可能な配管２８を通して三方活栓２５に接続されている。同様に、プライミング用の液体を収容する容器２１も通液口を備え、通液可能な配管２９を通して三方活栓２５と接続している。三方活栓２５と三方活栓２６は通液可能な配管３０で接続されている。細胞濃縮液を収容する容器２２は通液口を備え、通液可能な配管３１を通して三方活栓２６と接続している。本発明の細胞分離フィルターについては、流入口が三方活栓２７と、流出口が三方活栓２６と接続している。細胞回収液を収納する容器２３は通液口を備え、通液可能な配管３２を通して三方活栓２７と接続している。同様に、細胞分離フィルターＳＦを通過したプライミング用の液体および細胞含有液を収容する容器２４は通液口を備え、通液可能な配管３３を通して、三方活栓２７と接続している。

図１１に記載の回路を用いた具体的な細胞濃縮液の製造手順は次の通りである。
まず初めに、細胞分離フィルター内のエアーを除去する目的、細胞捕捉効率を向上する目的、及び血液流路を確保する目的でプライミングを行う為に、容器２１に収納されているプライミング用の液体を、細胞分離フィルターを通過させて、容器２４へと流す。この時、三方活栓２５は配管２９と配管３０を導通し、配管２８への流れを遮断している。三方活栓２６は配管３０と細胞分離フィルターを導通し、配管３１への流れを遮断している。さらに三方活栓２７は、細胞分離フィルターと配管３３を導通し、配管３２への流れを遮断している。

次に、細胞含有液を細胞分離フィルター内のろ材に接触させるために、容器２０に収容されている細胞含有液を、細胞分離フィルターに通過させて、容器２４へと流す。この時、三方活栓２５は配管２８と配管３０を導通し、配管２９への流れを遮断している。三方活栓２６は配管３０と細胞分離フィルターを導通し、配管３１への流れを遮断している。さらに三方活栓２７は、細胞分離フィルターと配管３３を導通し、配管３２への流れを遮断している。

最後に、細胞濃縮液を回収するために、容器２３に収容されている細胞回収液を細胞分離フィルターに通過させて、容器２２へと流す。この時、三方活栓２７は細胞分離フィルターと配管３２を導通し、配管３３への流れを遮断している。さらに三方活栓２６は、細胞分離フィルターと配管３１を導通し、配管３０への流れを遮断している。
回路は、液の流れを制御するために、三方活栓、ローラークレンメ、クランプ等を備えていることが好ましい。

細胞分離フィルターに細胞含有液を導入し、ろ材と接触させる接触工程を、細胞分離フィルターの切り換え機構によりクロスフロー方式にした状態で行うことにより、細胞含有液の流れが、ろ材表面への粒子の堆積や目詰まりによる流動抵抗の上昇を緩やかにし、ろ材の全面を使って大量の細胞含有液を濾過できる。
また、前記接触工程の後に行う細胞濃縮液を回収する回収工程を、細胞分離フィルターの切り換え機構によりデッドエンドフロー方式にした状態で行うことにより、回収液の流れの方向がろ材による濾過方向と同じであるため細胞回収率を向上できる。

Ａ１，Ｂ１ 回転移動式の切り換え機構
Ａ２，Ｂ２ スライド移動式の切り換え機構
Ａ３，Ｂ３ 着脱移動式の切り換え機構
Ｓ 収容空間
ＳＦ 細胞分離フィルター
１ 容器
１Ａ 第一面
１Ｂ 第二面
１Ｃ 側面
１Ｄ，１Ｅ 収容開口
１Ｆ，１Ｇ ガイド溝
１Ｈ，１Ｉ 長穴
２，３ 回転体
２Ａ，３Ａ ガイド溝
２Ｂ，３Ｂ 支軸
４Ａ，４Ｂ ガイド穴
５Ａ，５Ｂ 支持孔
６Ａ，６Ｂ，７Ａ，７Ｂ 管路
８，９ スライドガイド体
８Ａ，８Ｂ，９Ａ，９Ｂ 通孔
１０Ａ，１０Ｂ 通液用スライド体
１１ 第一通液口
１２ 第二通液口
１３Ａ，１３Ｂ，１４Ａ，１４Ｂ 閉止用スライド体
１５Ａ，１５Ｂ 通液用着脱体
１６Ａ，１６Ｂ 閉止用着脱体
１７Ａ，１７Ｂ，１８Ａ，１８Ｂ，１９Ａ，１９Ｂ 着脱穴
２０ 細胞含有液を収容する容器
２１ プライミング用の液体を収容する容器
２２ 細胞濃縮液を収容する容器
２３ 細胞回収液を収容する容器
２４ 細胞分離フィルターを通過したプライミング用の液体および細胞含有液を収容する容器
２５，２６，２７ 三方活栓
２８ ２０と２５に接続している通液可能な配管
２９ ２１と２５に接続している通液可能な配管
３０ ２５と２６に接続している通液可能な配管
３１ ２３と２７に接続している通液可能な配管
３２ ２４と２７に接続している通液可能な配管
３４ 第一通液口１１及び第二通液口１２に連結される配管
３５ キンク防止機構を有する配管３４の連結部
３６，３６ａ 基部
３７，３７ａ 配管接続部
３８，３８ａ 突起部
３９ ガイド
３９ａ テーパー形状のガイド
３９ｂ ガイドの固定穴
４０ シール
４１ キャップ
４２ 液漏れ防止機構

Claims (16)

1. 第一通液口及び第二通液口が配置された容器と、前記第一通液口及び前記第二通液口の間に充填されたろ材を備えた細胞分離フィルターであって、
   前記容器が切り換え機構を備え、前記切り換え機構が、前記第一通液口及び／又は前記第二通液口の配置を移動させることが可能に構成されている細胞分離フィルター。
2. 前記切り換え機構が前記容器の第一面及び／又は前記第一面の対面方向に位置する第二面に備えられる請求項１に記載の細胞分離フィルター。
3. 前記切り換え機構は、前記第一通液口及び／又は前記第二通液口の配置を、前記容器の第一面及び／又は前記第一面の対面方向に位置する第二面の中心部から最端部の間で移動させることが可能に構成されている請求項１又は２に記載の細胞分離フィルター。
4. 前記切り替え機構が、回転移動式、スライド移動式及び着脱移動式からなる群より少なくとも１つ選ばれる請求項１〜３のいずれかに記載の細胞分離フィルター。
5. 前記第一通液口及び第二通液口が、前記第一通液口及び第二通液口に連結される配管のキンク防止機構を有する配管の連結部を備えている請求項１〜４のいずれかに記載の細胞分離フィルター。
6. 前記連結部が、前記細胞分離フィルターの容器に固定された、中空の柱状の基部と、
   前記基部の内腔面または外周面と嵌合する配管接続部とを備え、
   前記配管接続部がその円周方向に１８０°以下の所定の角度で回転することで前記基部に固定される請求項５に記載の細胞分離フィルター。
7. 前記連結部において、前記基部の内腔面と、前記配管接続部の外周面とが嵌合し、
   前記配管接続部の外周面に突起部が設けられ、かつ前記基部の内腔面に前記突起部用のガイドが設けられ
   ている請求項６記載の細胞分離フィルター。
8. 前記連結部において、前記基部の外周面と、前記配管接続部の内腔面とが嵌合し、
   前記基部の外周面に突起部が設けられ、かつ前記配管接続部の側面に前記突起部用のガイドが設けられている請求項６記載の細胞分離フィルター。
9. 前記第一通液口及び第二通液口が、さらに液漏れ防止機構を備える請求項５〜８のいずれかに記載の細胞分離フィルター。
10. 前記ろ材が不織布である請求項１〜９のいずれかに記載の細胞分離フィルター。
11. 前記ろ材が多孔質セルロース粒子である請求項１〜９のいずれかに記載の細胞分離フィルター。
12. 前記ろ材が、前記多孔質セルロース粒子に、ｌｏｇＰ（Ｐはオクタノール―水系での分配係数）値が２．５０以上の化合物を固定化してなる請求項１１に記載の細胞分離フィルター。
13. 前記ろ材が、前記多孔質セルロース粒子に、トリプトファン誘導体、及びポリアニオン性化合物を固定化してなる請求項１１に記載の細胞分離フィルター。
14. 請求項１〜１３のいずれかに記載の細胞分離フィルターの前記第一通液口又は前記第二通液口から細胞含有液を導入し、ろ材と接触させる接触工程、及び前記細胞分離フィルターの前記第一通液口又は前記第二通液口から細胞濃縮液を回収する回収工程、を有する細胞濃縮液の製造方法。
15. 前記接触工程において、前記切り換え機構によりクロスフロー方式にし、前記細胞含有液を導入して前記ろ材と接触させる請求項１４に記載の製造方法。
16. 前記回収工程において、前記切り換え機構によりデッドエンドフロー方式にし、前記細胞分離フィルターの前記第一通液口又は前記第二通液口から細胞濃縮液を回収する請求項１４又は１５に記載の製造方法。

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