JP2016124830A

JP2016124830A - 糖アミノ酸誘導体または糖ペプチド誘導体の製造方法

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Publication number: JP2016124830A
Application number: JP2014267104A
Authority: JP
Inventors: 水野　真盛; Masamori Mizuno; 真盛水野; 賢二大隅; Kenji Osumi
Original assignee: Noguchi Institute
Current assignee: Noguchi Institute
Priority date: 2014-12-31
Filing date: 2014-12-31
Publication date: 2016-07-11
Anticipated expiration: 2034-12-31
Also published as: JP6605201B2

Abstract

【課題】糖アミノ酸誘導体または糖ペプチド誘導体の製造方法において、糖水酸基の保護基としては、（１）糖水酸基への導入が容易であり、（２）原料とする糖誘導体または糖アミノ酸誘導体の合成が容易であり、（３）酸処理によりアミノ酸部位またはペプチド部位の保護基と同時に脱保護でき、グリコシド結合に影響を与えず、（４）Ｎ−結合型、Ｏ−結合型の両方に使用できることが望ましい。そのような糖水酸基の保護基を用いる、糖アミノ酸誘導体または糖ペプチド誘導体の製造方法を提供すること。【解決手段】糖アミノ酸誘導体または糖ペプチド誘導体の製造方法であって、糖残基中の全ての官能基を、酸性条件下で除去可能なカルバメート系保護基で保護した糖誘導体または／および糖アミノ酸誘導体を原料として用いることを特徴とする製造方法。【選択図】なし

Description

本発明は、糖ペプチド誘導体または糖アミノ酸誘導体の製造方法に関する。詳細には、全ての糖水酸基を、酸性条件下で除去可能なカルバメート系保護基で保護することで、従来はペプチドやアミノ酸の最終脱保護の後に別途必要であった糖水酸基の脱保護操作を、ペプチドやアミノ酸の最終脱保護と同時に行うことができる、糖ペプチド誘導体または糖アミノ酸誘導体の製造方法に関する。

糖ペプチド合成は主に固相合成で行われるため、アシル成分を過剰に使用する場合が多い。そのため、糖水酸基へのＯ−アシル化を防ぐために糖水酸基を保護する必要がある。

糖ペプチド合成の際に用いられる糖水酸基の保護基としては、一般的はアセチル基やベンゾイル基等のアシル基や、ベンジル基やパラメトキシベンジル基、ベンジリデン基等のベンジル系保護基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基等のシリル基が挙げられる。

特にアシル系保護基やベンジル基は、糖鎖合成では汎用保護基であることから糖ペプチドの原料である糖アミノ酸合成の際にも多く用いられている。しかしアシル系保護基やベンジル基はペプチド鎖側鎖の脱保護条件やペプチド鎖の固相単体からの切り出し条件であるトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）処理では安定であるため、ペプチド鎖部分の脱保護の後に糖水酸基の脱保護操作が必要となる。アシル基の場合は水酸化ナトリウムやナトリウムメトキシド等の塩基処理により、ベンジル基は接触水素還元やトリフルオロメタンスルホン酸（ＴｆＯＨ）−ＴＦＡ処理により脱保護することで遊離の糖ペプチドが得られる。

しかしアシル基の除去条件である塩基性条件下ではペプチド部位のラセミ化やβ脱離によるデヒドロアラニンの副生、および糖残基の脱離などの副反応が起こることが知られている（非特許文献１）。ベンジル基の場合は、ペプチド鎖中にシステインやメチオニンなどの含硫黄アミノ酸が含まれていると接触還元用の触媒の触媒毒となる可能性がある（非特許文献２）。さらに接触還元によりチロシンの側鎖が還元される副反応も報告されている（非特許文献３）。

Ｎ結合型糖ペプチド合成では糖水酸基の保護基に酸性条件で脱保護できる保護基を用いて、ＴＦＡ処理によりペプチド鎖の最終脱保護と同時に糖水酸基の脱保護も行う手法が報告されている。

例えばＴＢＤＭＳ基でＧｌｃＮＡｃの水酸基を保護し、固相合成後にＴＦＡ処理を行うことでペプチド鎖の脱保護と糖水酸基の脱保護を同時におこなう手法が報告されている（非特許文献４）。しかしこの方法では糖アミノ酸合成の際にグリコシルアジドを用いるＳｔａｕｄｉｎｇｅｒ反応が使用できないため、一度アジド基をアミノ基へ還元した後アスパラギン酸の側鎖カルボキシル基と縮合することで糖アミノ酸合成を行う必要がある。しかしアジド基を還元して得られるグリコシルアミンは容易にアノマー位が異性化してしまうため、得られる糖アミノ酸は天然型であるβ体と非天然型であるα体の混合物となってしまう。

近年、糖アミノ酸合成時にＳｔａｕｄｉｎｇｅｒ反応が使用でき、かつＴＦＡ処理によりペプチド鎖の最終脱保護と同時に糖水酸基の保護基を脱保護する手法が報告された（非特許文献５）。しかしこの手法は糖ペプチドの原料となる糖アミノ酸の合成が市販のグルコサミン誘導体を出発原料としたときに９工程も必要となる。これは従来法である、糖水酸基をアセチル基で保護した場合の糖鎖アミノ酸合成がわずか２工程で済むのと比べると合成工程数が大幅に増加してしまい、糖ペプチド合成において多くの時間と労力が必要となる。

Ｏ−結合型糖ペプチド合成においては糖水酸基保護基としてアシル型保護基を用いるのが一般的である。理由としては、一般的にＯ−グリコシド結合はアセタール結合であるため酸性条件下で分解する場合がある。アシル型保護基はＴＦＡ条件下でもＯ−グリコシド結合を安定化させるため、糖ペプチド合成で汎用されている。しかし、その除去条件である塩基性条件下では、上記したように、ペプチド部位のラセミ化やβ脱離によるデヒドロアラニンの副生、および糖残基の脱離などの副反応が起こることが知られている。

水酸基の保護基としてはベンジル基も用いられる場合があるが、ＴｆＯＨ−ＴＦＡ処理による脱保護では強酸性のためグリコシド結合が分解してしまう場合がある。接触還元による脱保護は上記したようにアミノ酸部位の修飾や触媒毒等の問題点がある。またベンジル基やシリル系保護基の場合はＴＦＡ処理によりグリコシド結合の分解が生じる（非特許文献６）。

糖ペプチド合成において望ましい糖水酸基の保護基としては（１）糖水酸基への導入が容易である、（２）原料である糖アミノ酸が比較的容易に合成できる、（３）ＴＦＡ処理によりペプチド部位の脱保護と同時に脱保護でき、グリコシド結合に影響を与えない、（４）Ｎ−結合型、Ｏ−結合型の両方に使用できる、である。

Ｓｊｏｌｉｎ，Ｐ．；Ｅｌｏｆｓｓｏｎ，Ｍ．；Ｋｉｈｌｂｅｒｇ，Ｊ．Ｊ．ＯｒｇＣｈｅｍ．１９９６，６１，５６０−５６５．Ｎａｋａｈａｒａ，Ｙ．；Ｎａｋａｈａｒａ，Ｙ．；Ｉｔｏ，Ｙ．；Ｏｇａｗａ，Ｔ．ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．１９９７，３８，７２１１．Ｇｕｏ，Ｚ．Ｗ．；Ｎａｋａｈａｒａ，Ｙ．；Ｎａｋａｈａｒａ，Ｙ．；Ｏｇａｗａ，Ｔ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．１９９７，３０３，３７３．Ｈｏｌｍ，Ｂ．；Ｌｉｎｓｅ，Ｓ．ａｎｄＫｉｈｌｂｅｒｇ，Ｊ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ１９９８，５４，１１９９５．Ｙ．ＡｓａｈｉｎａらＯｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０１３，１１，７１９９．ＮｉｎｇＳｈａｏらＪ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００３，ｌ６８，９００３．

本発明の目的は、糖水酸基への導入と糖アミノ酸の合成が容易で、酸処理によりペプチド用保護基と同時に除去でき、グリコシド結合の安定性に影響を与えない、糖水酸基の保護基を用いた効率的な糖ペプチド製造法を提供することである。

上記課題を鋭意検討した結果、本発明者らは糖水酸基の保護基として、酸性条件下で除去可能なカルバメート系保護基を用いることで糖ペプチドが効率的に製造できるという新たな知見に基づいて、本発明を完成するに至った。

すなわち本発明は、以下の通りの製造方法、および糖誘導体である。
＜１＞糖アミノ酸誘導体または糖ペプチド誘導体の製造方法であって、
糖残基中の全ての官能基を、酸性条件下で除去可能なカルバメート系保護基で保護した糖誘導体または／および糖アミノ酸誘導体を原料として用いることを特徴とする製造方法。

＜２＞前記糖残基中の全ての官能基を、酸性条件下で除去可能なカルバメート系保護基で保護した糖誘導体が、下記式（１）で表される糖誘導体である＜１＞に記載の製造方法。
Ａ−Ｘ―Ｙ（１）
（式（１）中、Ａは、全ての官能基を酸性条件下で除去可能なカルバメート系保護基で保護した単糖もしくは糖鎖であり；Ｙは存在するか存在せず、Ｙが存在しない場合は、Ｘはアジド基、水酸基、または脱離能を有する基であり、Ｙが存在する場合は、Ｘは酸素、硫黄、またはセレンであり、Ｙはアシル基、炭素数１から２０である飽和もしくは不飽和炭化水素基、または芳香族基である。）

＜３＞前記糖残基中の全ての官能基を、酸性条件下で除去可能なカルバメート系保護基で保護した糖アミノ酸誘導体が、下記式（２）で表される糖アミノ酸誘導体である＜１＞または＜２＞に記載の製造方法。
Ａ−Ａｍ（２）
（式（２）中、Ａは、全ての官能基を酸性条件下で除去可能なカルバメート系保護基で保護した単糖もしくは糖鎖であり；Ａｍは、アミノ酸またはアミノ酸誘導体であり、主鎖アミノ基は遊離または保護基で保護またはアジド基に変換されており、主鎖カルボキシル基は遊離または保護基で保護されており；Ａ−Ａｍの結合は、Ａｍの側鎖とＡの還元末端のアノマー炭素との間の結合である。）

＜４＞前記酸性条件下で除去可能なカルバメート系保護基が、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基である＜１＞〜＜３＞に記載の製造方法。

＜５＞下記式（３）で表される糖誘導体。

（式（３）中、Ｙは存在するか存在せず、Ｙが存在しない場合は、Ｘはアジド基、水酸基、または脱離能を有する基であり、Ｙが存在する場合は、Ｘは酸素、硫黄、またはセレンであり、Ｙはアシル基、炭素数１から２０である飽和もしくは不飽和炭化水素基、または芳香族基であり；Ｚは水素、メチル基、またはｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルオキシメチル基であり；Ｗは窒素、酸素、またはアジド基であり；Ｗがアジド基である場合は、Ｒ１とＲ２は存在せず、Ｗが酸素である場合は、Ｒ１はＢｏｃ基で、Ｒ２は存在せず、Ｗが窒素である場合は、Ｒ１はＢｏｃ基で、Ｒ２は水素、シリル基、アシル基、アルキル基、アリール基、またはアラルキル基である。）

＜６＞下記式（４）で表される糖誘導体。

（式（４）中、Ｘ１、Ｘ２はそれぞれ、水酸基をＢｏｃ基で保護したＬ−フコース残基、またはＢｏｃ基である。）

本発明の、酸性条件下で除去可能なカルバメート系保護基を用いる糖ペプチド合成法を用いれば、従来法では抑制が非常に困難であった、ペプチド部位のラセミ化やβ脱離によるデヒドロアラニンの副生、および糖残基の脱離や糖鎖の開裂などの副反応が生じることなく、糖ペプチドを合成できる。さらに、糖水酸基の保護基としてアシル系保護基を用いるペプチド合成法と比較して、糖水酸基の脱保護とペプチド部位の脱保護が同時に行えることから、これまでの糖ペプチド合成法と比較して合成効率を向上させることに成功した。

以下、本発明を詳細に説明する。
本発明は、糖アミノ酸誘導体または糖ペプチド誘導体の製造方法であって、糖残基中の全ての官能基を、酸性条件下で除去可能なカルバメート系保護基で保護した糖誘導体または／および糖アミノ酸誘導体を原料として用いることを特徴とする製造方法である。

本発明の糖アミノ酸誘導体の製造方法には、前記保護した糖誘導体とアミノ酸とを縮合する場合、または前記保護した糖誘導体と前記保護した糖アミノ酸誘導体とを縮合する場合が含まれる。

本発明の糖ペプチド誘導体の製造方法には、前記保護した糖アミノ酸誘導体を２つ以上縮合する場合、または前記保護した糖誘導体とペプチドとを縮合する場合、または前記保護した糖アミノ酸誘導体とアミノ酸もしくはペプチドとを縮合する場合、または前記保護した糖誘導体と前記保護した糖アミノ酸誘導体２つ以上とを縮合する場合、または前記保護した糖誘導体と前記保護した糖アミノ酸誘導体とアミノ酸もしくはペプチドとを縮合する場合が含まれる。

糖ペプチドの合成原料となる糖アミノ酸は、アミノ酸と糖誘導体との縮合により合成される。本発明の製造方法に用いる糖誘導体は、下記式（１）で表される化合物が好ましい。
Ａ−Ｘ―Ｙ（１）
（式（１）中、Ａは、全ての官能基を、酸性条件下で除去可能なカルバメート系保護基で保護した単糖もしくは糖鎖であり；Ｙは存在するか存在せず、Ｙが存在しない場合は、Ｘはアジド基、水酸基、またはハロゲン基、イミデート基、アセトキシ基等、脱離能を有する基であり、Ｙが存在する場合は、Ｘは酸素、硫黄、またはセレンであり、Ｙはアシル基、炭素数１から２０である飽和もしくは不飽和炭化水素基、または芳香族基である。）

また、本発明の製造方法に用いる糖アミノ酸誘導体は、下記式（２）で表される化合物が好ましい。
Ａ−Ａｍ（２）
（式（２）中、Ａは、全ての官能基を、酸性条件下で除去可能なカルバメート系保護基で保護した単糖もしくは糖鎖であり；Ａｍは、アミノ酸またはアミノ酸誘導体であり、Ａｍの主鎖アミノ基は遊離または保護基で保護またはアジド基に変換されており、主鎖カルボキシル基は遊離または保護基で保護されており；Ａ−Ａｍの結合は、Ａｍの側鎖とＡの還元末端のアノマー炭素との間での結合であり、アミド結合、エステル結合、エーテル結合、チオエーテル結合、アセタール結合、チオアセタール結合、炭素―炭素結合等を形成する。）

カルバメート系保護基の種類は酸性条件下で除去可能であれば特に限定されないが、導入試剤の入手や調製が容易であるＢｏｃ基や２−（トリメチルシリル）エトキシカルボニル（Ｔｅｏｃ）基、パラメトキシベンジルオキシカルボニル（Ｚ（ＯＭｅ））基、パラメチルベンジルオキシカルボニル（Ｚ（Ｍｅ））基、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）基、イソボルニルオキシカルボニル（Ｉｂｏｃ）基、２−（３，５−ジメチルオキシフェニル）−２−プロピルオキシカルボニル（Ｄｄｚ）基、パラビフェニルイソプロピルオキシカルボニル（Ｂｐｏｃ）基、２−フェニルイソプロピルオキシカルボニル基が好ましく、特にＢｏｃ基、Ｚ（ＯＭｅ）基、Ｔｅｏｃ基が好ましい。

アミノ酸、及びアミノ酸誘導体の種類は特に限定されないが、側鎖に官能基を有するαアミノ酸であることが好ましく、さらに、天然の糖タンパク質中で糖残基と結合しているアミノ酸である、アスパラギン、セリン、スレオニンであることがより好ましい。アミノ酸の立体構造は特に限定されず、Ｌ体であっても、Ｄ体であっても、また、これらエナンチオマーの混合物であっても良いが、Ｌ体であることが好ましい。

アミノ酸、及びアミノ酸誘導体の主鎖アミノ基および主鎖カルボキシル基は遊離であっても、保護基で保護されていても良い。主鎖アミノ基の保護基の種類は特に限定されないが、ペプチド合成で汎用されるＢｏｃ基、Ｚ基、Ｔｅｏｃ基、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）基、２，２，２−トリクロロエチルオキシカルボニル（Ｔｒｏｃ）基、が好ましく、特に固相合成で使用されるＢｏｃ基とＦｍｏｃ基が好ましい。また主鎖アミノ基はアジド基に変換されていても良い。主鎖カルボキシル基の保護基の種類は特に限定されないが、メチルエステル、エチルエステル、フェナシルエステル、ベンジルエステル、第三ブチルエステル、トリメチルシリルエチルエステル、トリメチルシリルエステル、トリクロロエチルエステル、パラメトキシベンジルエステル、アリルエステル、９−フルオレニルメチルエステルが好ましく、さらに糖水酸基を保護しているカルバメート系保護基が酸性条件下で除去されることを考慮すると、中性条件もしくは弱塩基性もしくは弱酸性条件で除去が可能なフェナシルエステル、ベンジルエステル、トリクロロエチルエステル、アリルエステル、９−フルオレニルメチルエステルが好ましい。

Ａ−Ａｍ結合は、アミノ酸、及びアミノ酸誘導体の側鎖と糖誘導体の還元末端のアノマー炭素との間での結合であり、共有結合であれば結合の種類は特に限定されないが、アミド結合、エステル結合、エーテル結合、チオエーテル結合、アセタール結合、チオアセタール結合、炭素―炭素が好ましく、特に、天然の糖タンパク質中で糖残基とタンパク質間の結合であるアミド結合とアセタール結合を形成していることが好ましい。

糖アミノ酸の合成（Ａ−Ａｍ結合の形成）は、当業者に公知の技術を用いて合成することができる。例えばＮ結合型糖アミノ酸３は、２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシルアジド（１）から次の方法で合成することができる。

まず、化合物１に二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルとＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジンとを作用させることによって、テトラＢｏｃ体２へと変換する。得られたテトラＢｏｃ体２に側鎖カルボキシル基に、ペンタフルオロフェニル基で保護したアスパラギン酸誘導体［Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＰｆｐ）−ＯＢｎ］とトリブチルホスフィンと３−ヒドロキシ−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＨＯＯｂｔ）とを作用させることにより、糖部位とアミノ酸部位がアミド結合した糖アミノ酸である化合物３を調製できる。

また、Ｏ−結合型糖アミノ酸１５は次の方法で合成することができる。

水酸基をＢｏｃ基で保護した２―アジドガラクトースのチオグリコシド体１４にＦｍｏｃ−スレオニンベンジルエステルとＮ−ヨードコハク酸イミドとトリフルオロメタンスルホン酸とを作用させることにより、糖部位とアミノ酸部位がアセタール結合した糖アミノ酸である化合物１５を調製できる。

糖ペプチドの合成は、式（２）のＡｍの主鎖カルボキシル基が遊離もしくは活性化された糖アミノ酸を用いて、当業者に公知の技術を用いて合成することができる。

糖ペプチド合成に用いることができる溶媒の種類は特に限定されないが、化学合成の場合は有機溶媒が好ましい。有機溶媒の例は、塩化メチレン、クロロホルム、ジクロロエタン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、１−メチル−２−ピロリジノン、アセトニトリル、メタノール、エタノールまたは、上記の溶媒の組み合わせが挙げられる。好ましくは塩化メチレン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、１−メチル−２−ピロリジノンである。

糖ペプチド合成に用いる反応はアミド結合を形成する反応であれば特に限定されないが、縮合剤を用いるのが好ましい。縮合剤の例は、カルボジイミド系縮合剤（ＤＣＣ、ＥＤＣ・ＨＣｌ、ＤＩＣ）、イミダゾール系縮合剤（ＣＤＩ、ＤＭＣ）、トリアジン系縮合剤（ＤＭＴ−ＭＭ）、ホスホニウム系縮合剤（ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ、ＰｙＣｌｏＰ、ＰｙＢｒｏｐ）、ウロニウム系縮合剤（ＣＯＭＵ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＴＳＴＵ）等が挙げられる。またこれらの縮合剤に添加剤を加えてもよい。添加剤の例は、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＨＯＯｂｔ）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミド（ＨＯＮＢ）、２−ヒドロキシイミノ−２−シアノ酢酸エチルエステル等が挙げられる。

以下に、本発明を実施例を用いて更に詳細に説明するが、これらの実施例は本発明の具体例を示すもので、本発明を何ら限定するものではない。

３，４，６−Ｔｒｉ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−２−ｄｅｏｘｙ−２−｛Ｎ−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）−ａｃｅｔａｍｉｄｏ｝−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌａｚｉｄｅ（２）の合成（ｅｘ６−１９２）
テトラヒドロフラン（６０ｍＬ）に２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシルアジド（１）（１．０３ｇ，４．１７ｍｍｏｌ）と二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（５．１ｇ，２３．４ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（４１０ｍｇ，３．３０ｍｍｏｌ）を加え、加熱還流下で９０分攪拌した。溶媒を減圧留去後、得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝６：１）で精製し、無定形固体の化合物２（２．６８ｇ，ｑｕａｎｔ．）を得た。

化合物２ ^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）： δ ＝１．４１−１．５８（ｍ，３６Ｈ），２．３９（ｓ，１．８Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），２．４４（ｓ，１．２Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），３．８２−３．８５（ｍ，０．４Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），３．８７−３．８９（ｍ，０．６Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），４．１５−４．１９（ｍ，１．６Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡａｎｄｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），４．３１−４．３９（ｍ，１Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡａｎｄｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ）４．８１−４．８９（ｍ，１．４Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡａｎｄｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），５．３４（ｄ，０．４Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），５．４６（ｄｄ，０．４Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），５．５８（ｄｄ，０．６Ｈ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），５．６５（ｄ，０．６Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ）

Ｎ^２−９−Ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−Ｎ^４−［３，４，６−Ｔｒｉ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−２−ｄｅｏｘｙ−２−｛Ｎ−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）−ａｃｅｔａｍｉｄｏ｝−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ］−Ｌ−ａｓｐａｒａｇｉｎｅｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｅｓｔｅｒ
化合物２（９３ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）とＦｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＰｆｐ）−ＯｔＢｕ（１１２ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）と３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（３３ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気中、水／ＴＨＦ（２／９８ｖ／ｖ）混合溶液（１．６ｍＬ）に溶解させた後、トリブチルホスフィン（５０ μＬ，０．２０ｍｍｏｌ）を加え、室温で４時間攪拌した。反応溶液に酢酸エチルを加え、有機相を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を減圧留去後、得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）で精製し、化合物３（１４８ｍｇ，ｑｕａｎｔ．）を得た。

化合物３ ^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）： δ ＝１．４２−１．５８（ｍ，３６Ｈ），１．５１（ｓ，１．８Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），１．６０（ｓ，７．２Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），２．３３（ｓ，０．６Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），２．４８（ｓ，２．４Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），２．６４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１６．５Ｈｚ），２．８４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１６．５Ｈｚ），３．７８−３．８０（ｍ，０．８Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），３．８６−３．８９（ｍ，０．２Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），４．０９−４．１２（ｍ，１Ｈ），４．１９−４．４９（ｍ，７Ｈ），５．６０（ｄｄ，０．８Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），５．７４（ｄｄ，０．２Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），５．８９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），５．９５（ｄ，０．８Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），６．０４−６．１０（ｍ，０．４Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），６．１５−６．１７（ｍ，１Ｈ），７．２９−７．３２（ｍ，４Ｈ），７．３９（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．６０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．７５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）

Ｎ^２−９−Ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−Ｎ^４−（２−ｄｅｏｘｙ−２−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−Ｌ−ａｓｐａｒａｇｉｎｅｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｅｓｔｅｒ
化合物３（５０．９ｍｇ，５０ μｍｏｌ）を８０％ＴＦＡ／塩化メチレン溶液（１ｍＬ）に溶解させ、室温で３時間攪拌した。溶媒を減圧留去し得られた残査にエーテルを加え、生じた粉末を濾過し、化合物４（２０．０ｍｇ，７２％）を得た。

化合物４ ^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ ＝１．７４（ｓ，３Ｈ），２．４２−２．５１（ｍ，１Ｈ），２．５７−２．６１（ｍ，１Ｈ），３．０８−３．１２（ｍ，１Ｈ），３．２７−３．５９（ｍ，３Ｈ），３．０４−３．０８（ｍ，２Ｈ），３．６３−３．６５（ｍ，１Ｈ），４．１８−４．２５（ｍ，３Ｈ），４．３２−４．３３（ｍ，１Ｈ），４．５３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），４．７９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），４．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），４．９７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ）７．３０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．３８−７．４３（ｍ，３Ｈ），７．６９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．７５（ｂｒｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），７．８７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），８．１５（ｂｒｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ）

Ｎ^２−９−Ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−Ｎ^４−［３，４，６−Ｔｒｉ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−２−ｄｅｏｘｙ−２−｛Ｎ−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）−ａｃｅｔａｍｉｄｏ｝−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ］−Ｌ−ａｓｐａｒａｇｉｎｅｂｅｎｚｙｌｅｓｔｅｒ
化合物２（９４ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）とＦｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＰｆｐ）−ＯＢｎ（１２４ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）と３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（３５ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気中、水／ＴＨＦ（２／９８ｖ／ｖ）混合溶液（１．６ｍＬ）に溶解させた後、トリブチルホスフィン（５２ μＬ，０．２１ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。反応溶液に酢酸エチルを加え、有機相を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を減圧留去後、得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）で精製し、化合物５（１６０ｍｇ，ｑｕａｎｔ．）を得た。

化合物５ ^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）： δ ＝１．４２−１．４７（ｍ，２７Ｈ），１．５３（ｓ，１．８Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），１．６０（ｓ，７．２Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），２．３３（ｓ，０．６Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），２．４８（ｓ，２．４Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），２．６４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１６．５Ｈｚ），２．８４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１６．５Ｈｚ），３．７８−３．８０（ｍ，０．８Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），３．８６−３．８９（ｍ，０．２Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），４．０９−４．１２（ｍ，１Ｈ），４．１９−４．４９（ｍ，７Ｈ），５．６０（ｄｄ，０．８Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），５．７４（ｄｄ，０．２Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），５．８９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），５．９５（ｄ，０．８Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），６．０４−６．１０（ｍ，０．４Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），６．１５−６．１７（ｍ，１Ｈ），７．２９−７．３２（ｍ，４Ｈ），７．３９（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．６０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．７５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）

Ｎ^２−９−Ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−Ｎ^４−［３，４，６−Ｔｒｉ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−２−ｄｅｏｘｙ−２−｛Ｎ−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）−ａｃｅｔａｍｉｄｏ｝−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ］−Ｌ−ａｓｐａｒａｇｉｎｅ
化合物５（１１５ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（４ｍＬ）とエタノール（２ｍＬ）の混合溶媒に溶解させ、１０％パラジウム炭素（７４ｍｇ）を加え、水素ガスをバブリングしながら、室温で１時間攪拌した。不溶物をセライト濾過で除去し、溶媒を減圧留去後、得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒クロロホルム：メタノール＝３０：１）で精製し、化合物６（８４ｍｇ，７９％）を得た。

化合物６ ^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）： δ ＝１．４０−１．５８（ｍ，３６Ｈ），２．３１（ｓ，０．４５Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），２．４７（ｓ，２．５５Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），２．６８−２．８８（ｍ，２Ｈ），３．８０−３．８８（ｍ，１Ｈ），４．０８−４．１３（ｍ，１Ｈ），４．２１−４．２２（ｍ，１Ｈ），４．３２−４．３４（ｍ，３Ｈ），４．４５−４．６２（ｂｒｍ，１Ｈ），４．８２−４．８８（ｍ，２Ｈ），５．５８（ｔ，０．８５Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），５．７４（ｔ，０．１５Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），５．９２（ｔ，０．８５Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），６．１０（ｔ，０．１５Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），
６．１７−６．３１（ｂｒｍ，１Ｈ），６．６２（ｂｒｍ，１Ｈ），７．３０（ｔ，１．７Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），７．３８（ｔ，１．７Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），７．４５（ｔ，０．３Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），７．５４（ｔ，０．３Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），７．５９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），７．７４（ｄ，１．７Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），７．８１（ｄ，０．３Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ）

２，３，４−Ｔｒｉ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−α−Ｌ−ｆｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ −（１→６）−３，４−ｄｉ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−２−ｄｅｏｘｙ−２−｛Ｎ−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）−ａｃｅｔａｍｉｄｏ｝−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌａｚｉｄｅ（８）
テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）に化合物７（０．６４ｇ，１．６４ｍｍｏｌ）と二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（６．０１ｇ，２７．６ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（１６０ｍｇ，１．３１ｍｍｏｌ）を加え、加熱還流下で６０分攪拌した。溶媒を減圧留去後、得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝６：１）で精製し、無定形固体の化合物８（１．４４ｇ，８８％）を得た。

化合物１１ ^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）： δ ＝１．１９−１．２０（ｍ，３Ｈ），１．４１−１．５９（ｍ，５４Ｈ），２．３８（ｓ，０．５５Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），２．４５（ｓ，０．４５Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），３．６５−３．７５（ｍ，２Ｈ），３．８３−３．８９（ｍ，１Ｈ），４．１３−４．１９（ｍ，１．５５Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡａｎｄｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），４．６６−４．７２（ｍ，１Ｈ），４．８５（ｄｄ，０．４５Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），４．９０（ｄ，０．４５Ｈ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），４．９２（ｄ，０．５５Ｈ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），５．０６−３５．０９（ｍ，１Ｈ），５．２０−５．２８（ｍ，２．４５Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡａｎｄｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），５．４６−５．４９（ｄｄ，０．４５Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），５．５５−５．５８（ｍ，１．１０Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ）

Ｎ^２−９−Ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−Ｎ^４−［２，３，４−Ｔｒｉ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−α−Ｌ−ｆｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ −（１→６）−３，４−ｄｉ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−２−ｄｅｏｘｙ−２−｛Ｎ−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）−ａｃｅｔａｍｉｄｏ｝−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ］−Ｌ−ａｓｐａｒａｇｉｎｅｂｅｎｚｙｌｅｓｔｅｒ（９）の合成
化合物８（２９９ｍｇ，０．３０ｍｍｏｌ）とＦｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＰｆｐ）−ＯＢｎ（２５７ｍｇ，０．４２ｍｍｏｌ）と３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（７４ｍｇ，０．４５ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気中、水／ＴＨＦ（２／９８ｖ／ｖ）混合溶液（５ｍＬ）に溶解させた後、トリブチルホスフィン（１０４ μＬ，０．４２ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。反応溶液に水と酢酸エチルを加え、有機相を水と飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を減圧留去後、得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）で精製し、化合物９（４１６ｍｇ，９９％）を得た。

化合物９ ^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）： δ ＝１．１９−１．２０（ｍ，３Ｈ），１．４１−１．４７（ｍ，４５Ｈ），１．５９（ｓ，７．６５Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），１．７１（ｓ，１．３５Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），２．２７（ｓ，０．４５Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），２．４６（ｓ，２．５５Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），２．７２−２．７７（ｍ，１Ｈ），２．８８−２．９５（ｍ，１Ｈ），３．６２−３．６７（ｍ，１Ｈ），３．７４−３．７６（ｍ，１Ｈ），３．８２−３．８４（ｍ，１Ｈ），４．１６−４．２２（ｍ，２．１５Ｈ），４．２５−４．３０（ｍ，１Ｈ），４．３７−４．４１（ｍ，１Ｈ），４．６６−４．６９（ｍ，０．８５Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），４．７３−４．８０（ｍ，２Ｈ），４．９４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．４，１０．３Ｈｚ），５．０５−５．２２（ｍ，５．１５Ｈ），５．６４（ｄｄ，０．８５Ｈ，Ｊ＝８．９，１０．３Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），５．７７（ｔ，０．１５Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），５．８８（ｔ，０．８５Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），６．０１（ｔ，０．１５Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），６．２２（ｔ，１．７Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），６．３３（ｄ，０．１５Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），７．２７−７．３０（ｍ，７Ｈ），７．３８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．５９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．７４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）

Ｎ^２−９−Ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−Ｎ^４−［２，３，４−Ｔｒｉ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−α−Ｌ−ｆｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ −（１→６）−３，４−ｄｉ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−２−ｄｅｏｘｙ−２−｛Ｎ−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）−ａｃｅｔａｍｉｄｏ｝−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ］−Ｌ−ａｓｐａｒａｇｉｎｅ（１０）の合成
化合物９（１９７ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解させ、パラジウム炭素− エチレンジアミン複合体（１２０ｍｇ）を加え、水素ガスをバブリングしながら、室温で３時間攪拌した。不溶物をセライト濾過で除去し、溶媒を減圧留去後、得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒クロロホルム：メタノール＝９：１）で精製し、化合物１０（１７０ｍｇ，９３％）を得た。

化合物１０ ^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）： δ ＝１．２０（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ），１．４１−１．４８（ｍ，４５Ｈ），１．５２（ｓ，１．８Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），１．５９（ｓ，７．２Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），２．３２（ｓ，０．６Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），２．４７（ｓ，２．４Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），２．７０−２．８９（ｍ，２Ｈ），３．７０−３．７３（ｍ，２Ｈ），３．８４−３．８７（ｍ，１Ｈ），４．１８−４．２４（ｍ，２Ｈ），４．３２−４．４２（ｂｒｍ，２Ｈ），４．５９（ｂｒｍ，１Ｈ），４．７０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），４．７９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），４．９２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．４，１０．３Ｈｚ），５．０９−５．２７（ｍ，３Ｈ），５．６４（ｔ，０．８Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），５．７４（ｔ，０．２Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），５．８７（ｔ，０．８Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），６．１３（ｂｒｄ，０．８Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），６．２５（ｂｒ，０．２Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），６．５１（ｂｒ，０．８Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），７．２６−７．３３（ｍ，２Ｈ），７．３８−７．４０（ｍ，２Ｈ），７．６０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．７５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）

Ｎ^２−９−Ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−Ｎ^４−［２，３，４−Ｔｒｉ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−α−Ｌ−ｆｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ −（１→６）−３，４−ｄｉ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−２−ｄｅｏｘｙ−２−｛Ｎ−（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）−ａｃｅｔａｍｉｄｏ｝−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ］−Ｌ−ａｓｐａｒａｇｉｎｅｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｅｓｔｅｒ（１１）
化合物８（１０７ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）とＦｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＰｆｐ）−ＯｔＢｕ（８６ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）と３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（２５ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気中、水／ＴＨＦ（２／９８ｖ／ｖ）混合溶液（３ｍＬ）に溶解させた後、トリブチルホスフィン（３６ μＬ，０．１５ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。反応溶液に水と酢酸エチルを加え、有機相を水と飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を減圧留去後、得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）で精製し、化合物１１（１３５ｍｇ，９２％）を得た。

化合物１１ ^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）： δ ＝１．１８−１．１９（ｍ，３Ｈ），１．４１−１．４６（ｍ，５４Ｈ），１．６０（ｓ，７．５Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），１．７５（ｓ，１．５Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），２．３１（ｓ，０．５Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＢ），２．４８（ｓ，２．５Ｈ，ｃｏｎｆｏｒｍｅｒＡ），２．６８−２．７１（ｍ，１Ｈ），２．８１−２．８７（ｍ，１Ｈ），３．６１−３．６５（ｍ，１Ｈ），３．７６−３．７８（ｍ，１Ｈ），３．８２−３．８３（ｍ，１Ｈ），４．１８−４．３２（ｍ，３Ｈ），４．３８−４．４３（ｍ，１Ｈ），４．５０−４．５１（ｍ，１Ｈ），４．７５−４．８３（ｍ，２Ｈ），４．９３−４．９５（ｍ，１Ｈ），５．０９−５．１２（ｍ，２Ｈ），５．１９（ｍ，１Ｈ），５．６６（ｔ，０．８３Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），５．７４（ｔ，０．１７Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），５．８６（ｔ，０．８３Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），６．０２（ｔ，０．１７Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），６．０６（ｄ，０．８３Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），６．１７（ｄ，０．１７Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），６．２７−６．３１（ｍ，１Ｈ），７．２９−７．３２（ｍ，２Ｈ），７．３９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．６１−７．６３（ｍ，２Ｈ），７．７５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）

Ｎ^２−９−Ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−Ｎ^４−［α−Ｌ−ｆｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ −（１→６）−２−ｄｅｏｘｙ−２−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ］−Ｌ−ａｓｐａｒａｇｉｎｅｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｅｓｔｅｒ（１２）
化合物１１（１０７ｍｇ，７７ μｍｏｌ）を２０％トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン溶液（５ｍＬ）に０℃で溶解させた後、４時間攪拌した。反応溶液にトルエン（１０ｍＬ）を加え、溶媒を減圧留去した。得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒クロロホルム：メタノール＝３：１）で精製し、化合物１２（５１ｍｇ，９１％）を得た。

化合物１２ ^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ ＝１．０５（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），１．７６（ｓ，３Ｈ），２．４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．５６，１５．８Ｈｚ），２．５９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．５，１５．８Ｈｚ），３．０８−３．１２（ｍ，１Ｈ），３．２７−３．５９（ｍ，３Ｈ），３．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．３１Ｈｚ），３．８５（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），４．１８−４．３２（ｍ，６Ｈ），４．４４（ｂｓ，１Ｈ，），４．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．８Ｈｚ），４．８０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），４．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），５．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），７．３１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．４０ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．７０（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝２．８，６．８７Ｈｚ），７．７８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），７．８７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），８．１５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ）

テトラヒドロフラン（３ｍＬ）に化合物１３（１１８ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）と二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（４１９ｍｇ，１．９２ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（２３ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）を加え、加熱還流下で１２０分攪拌した。溶媒を減圧留去後、得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝８：１）で精製し、化合物１４（２４３ｍｇ，ｑｕａｎｔ．）を得た。

化合物１８ ^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）： δ ＝１．３２（ｓ，９Ｈ），１．４６−１．４８（ｍ，２７Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），３．７２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ），３．８２−３．８５（ｍ，１Ｈ），４．１６−４．２３（ｍ，２Ｈ），４．４４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ），４．５９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，１０．３Ｈｚ），５．２５（ｄｄ，１５Ｈ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），７．１６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．２５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１０．３Ｈｚ），７．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．１Ｈｚ）

化合物１４（７１ｍｇ，１０６ μｍｏｌ）とＦｍｏｃ−Ｔｈｒ−ＯＢｎ（３１ｍｇ，７１ μｍｏｌ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解させ、モレキュラーシブス４Ａ（２００ｍｇ）を加えて、−４０℃に冷却した。Ｎ−ヨードスクシンイミド（４８ｍｇ，２１３ μｍｏｌ）とトリフルオロメタンスルホン酸（２．８ μＬ，３２ μｍｏｌ）を加え、−４０℃で２時間攪拌した。反応液をセライトで濾過し、酢酸エチルで洗浄後、有機相を５％チオ硫酸ナトリウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を減圧留去し、得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）で精製し、化合物１５をα体（２０．２ｍｇ，３１％）とβ体（１５．６ｍｇ，２４％）の混合物で得た。

化合物１５α体 ^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）： δ ＝１．３２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），１．４５（ｓ，９Ｈ），１．５０（ｓ，９Ｈ），１．５１（ｓ，９Ｈ），３．６３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，１１．０Ｈｚ），４．０９−４．１５（ｍ，２Ｈ），４．１７−４．２２（ｍ，１Ｈ），４．２６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），４．３４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６，１０．３Ｈｚ），４．３８−４．４８（ｍ，３Ｈ），４．８６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．１２Ｈｚ），５．０２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．４，１１．０Ｈｚ），５．１７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ），５．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ），５．３４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．８Ｈｚ），５．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），７．２９−７．４１（ｍ，９Ｈ），７．６３（ｄ．２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），７．７６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）

化合物１５β体 ^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）： δ ＝１．３３（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．５０（ｓ，９Ｈ），１．５１（ｓ，９Ｈ），３．６８−３．７１（ｍ，２Ｈ），４．０８−４．１９（ｍ，２Ｈ），４．２５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），４．３３−４．３９（ｍ，３Ｈ），４．４０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，１１．０Ｈｚ），４．９０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，９．６Ｈｚ），４．６１−４．６４（ｍ，１Ｈ），５．１６−５．１９（ｍ，２Ｈ），５．２７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ），５．６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），７．２９−７．３４（ｍ，３Ｈ），７．３５−７．４０（ｍ，６Ｈ），７．６１（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．７５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）

ジペプチドの合成
化合物１０（１７０ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）と；グリシンｔｅｒｔ−ブチル塩酸塩（２２ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）と１−ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（２４ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解させ、この溶液に塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（３０ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４６ μＬ，０．２６ｍｍｏｌ）を加え室温で２時間攪拌した。反応液に酢酸エチルを加え、有機相を５％クエン酸水溶液、水飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を減圧留去し、得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）で精製し、化合物１６（１６７ｍｇ，９１％）を得た。得られた化合物１６（１６７ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ）を２０％トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン溶液に０℃で溶解させ、０℃で４時間攪拌した。溶液にジエチルエーテルと２０％アセトニトリル水溶液を加え、水相を分離し凍結乾燥させた。得られた残査（８５ｍｇ）のうち５６ｍｇをＨＰＬＣにて精製を行い、化合物１７（１９ｍｇ，３２％）を得た。

本発明の製造方法および糖誘導体は、糖アミノ酸誘導体または糖ペプチド誘導体の製造に利用することができる。

Claims

糖アミノ酸誘導体または糖ペプチド誘導体の製造方法であって、
糖残基中の全ての官能基を、酸性条件下で除去可能なカルバメート系保護基で保護した糖誘導体または／および糖アミノ酸誘導体を原料として用いることを特徴とする製造方法。
前記糖残基中の全ての官能基を、酸性条件下で除去可能なカルバメート系保護基で保護した糖誘導体が、下記式（１）で表される糖誘導体である請求項１に記載の製造方法。
Ａ−Ｘ―Ｙ（１）
（式（１）中、Ａは、全ての官能基を酸性条件下で除去可能なカルバメート系保護基で保護した単糖もしくは糖鎖であり；Ｙは存在するか存在せず、Ｙが存在しない場合は、Ｘはアジド基、水酸基、または脱離能を有する基であり、Ｙが存在する場合は、Ｘは酸素、硫黄、またはセレンであり、Ｙはアシル基、炭素数１から２０である飽和もしくは不飽和炭化水素基、または芳香族基である。）
前記糖残基中の全ての官能基を、酸性条件下で除去可能なカルバメート系保護基で保護した糖アミノ酸誘導体が、下記式（２）で表される糖アミノ酸誘導体である請求項１または２に記載の製造方法。
Ａ−Ａｍ（２）
（式（２）中、Ａは、全ての官能基を酸性条件下で除去可能なカルバメート系保護基で保護した単糖もしくは糖鎖であり；Ａｍは、アミノ酸またはアミノ酸誘導体であり、主鎖アミノ基は遊離または保護基で保護またはアジド基に変換されており、主鎖カルボキシル基は遊離または保護基で保護されており；Ａ−Ａｍの結合は、Ａｍの側鎖とＡの還元末端のアノマー炭素との間の結合である。）
前記酸性条件下で除去可能なカルバメート系保護基が、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基である請求項１〜３に記載の製造方法。
下記式（３）で表される糖誘導体。

（式（３）中、Ｙは存在するか存在せず、Ｙが存在しない場合は、Ｘはアジド基、水酸基、または脱離能を有する基であり、Ｙが存在する場合は、Ｘは酸素、硫黄、またはセレンであり、Ｙはアシル基、炭素数１から２０である飽和もしくは不飽和炭化水素基、または芳香族基であり；Ｚは水素、メチル基、またはｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルオキシメチル基であり；Ｗは窒素、酸素、またはアジド基であり；Ｗがアジド基である場合は、Ｒ１とＲ２は存在せず、Ｗが酸素である場合は、Ｒ１はＢｏｃ基で、Ｒ２は存在せず、Ｗが窒素である場合は、Ｒ１はＢｏｃ基で、Ｒ２は水素、シリル基、アシル基、アルキル基、アリール基、またはアラルキル基である。）
下記式（４）で表される糖誘導体。

（式（４）中、Ｘ１、Ｘ２はそれぞれ、水酸基をＢｏｃ基で保護したＬ−フコース残基、またはＢｏｃ基である。）