JP2015532654A5 - - Google Patents

Claims (15)

1. キサンタモヌス（Ｘａｎｔｈａｍｏｎｕｓ）由来転写アクチベーター様エフェクター（ＴＡＬＥ）タンパク質を含む単離されたポリペプチドであって、
   該ＴＡＬＥタンパク質が、ＱはＹである、ＱはＳである、ＱはＲである、ＷはＲである、ＷはＧである、Ｗは欠失している、ＳはＲである、ＳはＨである、ＳはＡである、ＳはＮである、およびＳはＴであることから選択される１以上の突然変異を除けば、配列番号３（ＶＧＫＱＷＳＧＡＲＡＬ）に示すＮ _−１ ヘアピンにおけるアミノ酸配列を含むＮ末端ドメイン（ＮＴＤ）を有する、単離されたポリペプチド。
2. 前記ＮＴＤが、ＶＧＫＹＲＧＡＲＡＬ（配列番号４）、ＶＧＫＳＲＳＧＡＲＡＬ（配列番号５）、ＶＧＫＹＨＧＡＲＡＬ（配列番号６）およびＶＧＫＲＧＡＧＡＲＡＬ（配列番号７）から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１記載のポリペプチド。
3. 前記ＴＡＬＥタンパク質が、ＡｖｒＸａ７、Ｔａｌ１ｃまたはＰｔｈＸｏｌに由来する、請求項１または２記載のポリペプチド。
4. 前記ＴＡＬＥタンパク質が、合成ＲＶＤドメインを含む、請求項１または２記載のポリペプチド。
5. 前記ＴＡＬＥタンパク質がＣ末端トランケート化および／またはＮ末端トランケート化を含む、請求項４記載のポリペプチド。
6. 前記ＴＡＬＥタンパク質が、
   残基１２０、１２８、１４５または１５２の周辺でトランケート化されているＡｖｒＸａ７のＮ末端配列と、
   残基２８、６３または９７の周辺でトランケート化されているＡｖｒＸａ７のＣ末端配列と
   を含む、請求項４記載のポリペプチド。
7. ラルストニア（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ）由来合成転写アクチベーター様エフェクター（ＴＡＬＥ）タンパク質を含む単離されたポリペプチドであって、
   該ＴＡＬＥタンパク質が、Ｒ_１はＫである、ＱはＹである、ＱはＳである、ＱはＲである、Ｒ_２はＷである、Ｒ_２はＧである、Ｒ_２は欠失している、ＳはＲである、ＳはＨである、ＳはＡである、ＳはＮである、およびＳはＴであることから選択される１以上の突然変異を除けば、配列番号８（ＩＶＤＩＡＲ_１ＱＲ_２ＳＧＤＬＡ）に示すＮ _−１ ヘアピンにおけるアミノ酸配列を含むＮ末端ドメイン（ＮＴＤ）を有する、単離されたポリペプチド。
8. 前記ＮＴＤが、ＩＶＤＩＡＲＱＷＳＧＤＬＡ（配列番号９）、ＩＶＤＩＡＲＹＲＧＤＬＡ（配列番号１０）、ＩＶＤＩＡＲＳＲＳＧＤＬＡ（配列番号１１）、ＩＶＤＩＡＲＹＨＧＤＬＡ（配列番号１２）およびＩＶＤＩＡＲＲＧＡＧＤＬＡ（配列番号１３）から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７記載のポリペプチド。
9. リコンビナーゼドメインまたはヌクレアーゼドメインを更に含む、請求項１〜８のいずれか１項記載のポリペプチド。
10. 前記リコンビナーゼが、Ｇｉｎ、Ｈｉｎ、Ｔｎ３、Ｓｉｎ、Ｂｅｔａ、Ｐｉｎ．Ｍｉｎ、ＤｉｎおよびＣｉｎならびにＧｉｎの突然変異タンパク質、Ｈｉｎの突然変異タンパク質、Ｓｉｎの突然変異タンパク質、Ｂｅｔａの突然変異タンパク質、Ｐｉｎの突然変異タンパク質、Ｍｉｎの突然変異タンパク質、Ｄｉｎの突然変異タンパク質、Ｃｉｎの突然変異タンパク質、Ｔｎ３の突然変異タンパク質からなる群から選択される、請求項９記載のポリペプチド。
11. 請求項１〜１０のいずれか１項記載のポリペプチドをコードする単離された核酸分子。
12. 請求項１１記載の核酸分子を含むベクター。
13. 請求項１１記載の核酸分子または請求項１２記載のベクターで形質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞。
14. 部位特異的組換えのための方法であって、
    （ａ）請求項１記載のポリペプチドと特異的に相互作用するための少なくとも２つの結合部位を含むＤＮＡ配列を提供することと、
    （ｂ）該ＤＮＡ配列を該ポリペプチドと反応させることと
    を含み、該ポリペプチドと特異的に相互作用する２つの部位の間で該ＤＮＡ配列の鎖の両方が切断される部位特異的組換え事象を該ポリペプチドが触媒する、方法。
15. 転写アクチベーター様エフェクター（ＴＡＬＥ）タンパク質Ｎ末端ドメイン（ＮＴＤ）の製造方法であって、
    ａ）ＮＴＤのＮ _−１ ヘアピン内の１以上のアミノ酸残基を突然変異または欠失させることにより、ＮＴＤのアミノ酸配列をランダム化することと、
    ｂ）所望のヌクレオチドに特異的に結合するか又は活性の増強を示す、（ａ）のランダム化ＴＡＬＥタンパク質ＮＴＤを選択することを含み、
    前記アミノ酸配列は配列番号１４（ＶＧＫＸＸＸＧＡＲ）または配列番号１５（ＶＤＩＡＸＸＸＸＧＤＬＡ）である、製造方法。