JP2015528296A - 植物の非生物的ストレス抵抗性を高める方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、2012年8月31日出願の米国暫定特許出願第61/696,046号、2012年10月18日出願の米国暫定特許出願第61/715,780号、および2013年3月15日出願の米国暫定特許出願第61/792,355号に対する優先権を主張するものである。前記出願のそれぞれは、参照によってそれの全体が本明細書に組み込まれる。
対象植物の特徴を、基準と比較する。そのような基準は、植物がバチルス・サブチリス(Bacillus subtilis)またはバチルス・プミルス(Bacillus pumilus)を含む組成物に対する曝露を受けていない以外は、同一または同等の条件下に維持された相当する植物であることができる。一部の実施形態において、さらに別の基準を、塩ストレスの効果を説明するのに用いることができる。そのようなさらなる基準は、植物が塩ストレスを誘発する条件に曝露されていない以外、同一または同等の条件下に維持されている、対象植物に相当する植物であることができる。従って、そのようなさらなる基準として用いられる植物は代表的には、個々の植物種によって良好に耐容されることが知られている塩レベルに植物が曝露される条件に維持される。
塩で灌水した場合に、SERENADE(登録商標)で灌注したイネ実生で植物成長促進が認められるか否かを分析するために、第1の試験を実施した。
イネ種子、品種RM401 3粒を、Profile Greens Gradeを入れた2.5インチポットに蒔いた。各種子に、(本明細書で使用される醗酵産物/組成物の例として)64オンス/エーカーの市販のSERENADE(登録商標)2mL(総体積100mLから11.2%)または水を与えた。ポットを灌注処理群によって穴のない薄い木箱に入れ、温室で成長させた。その植物について、実験期間にわたり100ppmNでの20−20−20肥料による灌水を行い、灌水レベルはポット高さの約1/2に維持した。播種から14日後、各灌注処理群のポット10個(H2OまたはSERENADE(登録商標)64オンス/エーカー)に、灌水により60mM塩の塩濃縮液を与えた。木箱中の水は週に2回交換し、塩処理開始から14日後に植物の評定を行った。植物を収穫し、乾燥させた。根および苗条の重量を得た。
SERENADE SOIL(登録商標)で処理し、60mMの塩で14日間灌水したイネ植物は、塩ストレス下に水で処理した植物より高いように見えた(図1)。SERENADE SOIL(登録商標)処理し、および60mMの塩で14日間灌水したイネ植物の根は、塩ストレス下に水で処理した植物より長いように見えた(図2)。上記と同じように実施した別個の実験では、SERENADE ASO(登録商標)で処理し、60mMの塩で14日間灌水した植物の根および苗条重量は、水で処理した植物の重量より有意に高かった(図5参照)。従って、この結果は、バチルス・サブチリス(B. subtilis)QST713の組成物/醗酵産物が植物の塩ストレス抵抗性(塩ストレス耐性)を高めることを示している。
塩で灌水した場合に、SONATA(登録商標)で灌注したイネ実生で植物成長促進が認められるか否かを分析するために、第2の試験を実施した。この試験では、SONATA(登録商標)による処理の効力も、SERENADE(登録商標)による植物の処理と比較した。
イネ種子、品種RM401 3粒を、Profile Greens Gradeを入れた2.5インチポットに蒔いた。各種子に、(本明細書で使用される醗酵産物/組成物の例として)64オンス/エーカーの市販のSONATA(登録商標)またはSERENADE(登録商標)2mL(cfu/植物によって正規化した総体積100mLから11.2%)または水を与えた。ポットを灌注処理群によって穴のない薄い木箱に入れ、温室で成長させた。その植物について、実験期間にわたり100ppmNでの20−20−20肥料による灌水を行い、灌水レベルはポット高さの約1/2に維持した。播種から14日後、各灌注処理群のポット10個(H2OまたはSERENADE(登録商標)64オンス/エーカー)に、灌水により60mM塩の塩濃縮液を与えた。木箱中の水は週に2回交換し、塩処理開始から14日後に植物の評定を行った。植物を収穫し、乾燥させた。根および苗条の重量を得た。
SONATA(登録商標)で処理し、60mMの塩で14日間灌水したイネ植物は、塩ストレス下に水で処理した植物より高いように見えた(図3)。それぞれSONATA(登録商標)およびSERENADE SOIL(登録商標)で処理し、60mMの塩で14日間灌水したイネ植物の根が、塩ストレス下に水で処理した植物により長いように見えた(図4)。図5には、SERENADE ASO(登録商標)で処理した植物および水で処理した植物のmg単位での根および苗条の乾燥重を示している。苗条乾燥重および根乾燥重のいずれも、水処理植物よりSERENADE ASO(登録商標)処理植物において有意に高い。従って、この結果は、バチルス・プミリス(B. pumilis)QST2808の組成物/醗酵産物が植物の塩ストレス抵抗性(塩ストレス耐性)を高めることを示している。
塩耐性は通常、干魃耐性に似ることが認められていることから、塩耐性を示す植物も干魃耐性でもあるという結論を得ることができる。従って、上記の実験は、バチルス・サブチリス(B. subtilis)QST713およびバチルス・プミリス(B. pumilis)QST2808も植物の干魃抵抗性を高めることも示している。
細菌株(AQ30002およびAQ713)の新鮮な培養物を、NBRIY培地(グルコース10g/L、Ca3(PO4)2 5g/L(NH4)2SO4 0.1g/L、NaCl 0.2g/L、MgSO4・7H2O 0.25g/L、KCl 0.2g/L、MgCl2・6H2O 5g/L、FeSO4・7H2O 0.002g/Lの入った振盪器フラスコ中で増殖させた。フラスコを、14日間にわたり200rpmで振盪しながら30℃でインキュベートした。対照としてブランク培地を用い、660nmで分光光度計を用いる比色分析によって7日後および14日後に、培養肉汁の上清中の可溶性カリウムの濃度を測定した。図6からわかるように、両方の菌株が、ブランク培地と比較して、NBRIY培地で有意に高い可溶性リン酸レベルを与える(図6A:AQ713によるリン酸可溶化、図6B:AQ30002によるリン酸可溶化)。
細菌株(AQ30002およびAQ713)の新鮮な培養物を、ペレズ−ミランダら(Perez−Miranda et al. O−CAS, a fast and universal method for siderophore detection. J. Microbiol. Methods 70:127−131, 2007)による重層CAS寒天法を用いるクロムアズロールS(CAS)寒天プレートでインキュベートした。プレートを7日間にわたり30℃でインキュベートした。青色から橙赤色への色変化についてプレートを肉眼で調べたところ、シデロホア産生が示された。AQ30002およびAQ713コロニーによって色変化が生じ、それは、両方の菌株が鉄利用能向上を提供するのに十分なシデロホア産生を提供する土壌接種物としての用途を有することを示している。
1%カルボキシメチルセルロースナトリウム(CMC−Na)、1%キシランおよび1%AZO−カゼインをそれぞれ補充した栄養寒天を用いて、エンドグルカナーゼ、エンドキシラナーゼおよびタンパク質分解活性を測定した。AQ30002およびAQ713細菌株を最初に、30℃で終夜インキュベートしたHardy Diagnosticsからの栄養寒天プレートで増殖させた。次に、一つのコロニーを、基質(CMC−Na、キシラン、AZO−カゼイン)を補充したプレートの中央に移した。次に、プレートを30℃で2から7日間インキュベートした。インキュベーション期間終了後に透明ゾーン(clearing zone)が肉眼で認められた場合、酵素活性を陽性と記録した。
Claims (24)
- バチルス・プミルス(Bacillus pumilus)またはバチルス・サブチリス(Bacillus subtilis)を含む組成物を、植物、植物の一部および/または植物もしくは植物部分の周囲の区域に施用することを含む、植物の非生物的ストレス抵抗性を高める方法。
- 前記非生物的ストレス抵抗性が塩ストレス抵抗性または栄養欠乏に対する抵抗性である請求項1に記載の方法。
- 前記塩ストレス抵抗性が、塩耐性または干魃抵抗性のうちの一つである請求項2に記載の方法。
- 植物または植物部分周囲の区域における土壌での植物の栄養素可溶化またはシデロホア産生刺激によって、栄養欠乏に対する抵抗性を高める、請求項2に記載の方法。
- 前記栄養素可溶化によって、栄養素の生物学的利用能が少なくとも約5%向上する、請求項4に記載の方法。
- 前記栄養素可溶化が、カリウム可溶化、リン酸可溶化またはシデロホア結合によって生じる鉄可溶化およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項4に記載の方法。
- カリウム、リン酸および鉄からなる群から選択される1以上の土壌栄養素の濃度が土壌において低いことを確認してから前記施用を行う請求項6に記載の方法。
- 前記バチルス・プミルス(Bacillus pumilus)がバチルス・プミルス(Bacillus pumilus)QST2808であり、またはサブチリス(subtilis)が、バチルス・サブチリス(B. subtilis)QST713、バチルス・サブチリス(B. subtilis)QST30002、バチルス・サブチリス(B. subtilis)QST30004、バチルス・プミルス(Bacillus pumilus)QST2808の突然変異体、バチルス・サブチリス(B. subtilis)QST713、バチルス・サブチリス(B. subtilis)QST30002の突然変異体、バチルス・サブチリス(B. subtilis)QST30004の突然変異体およびそれらの組み合わせからなる群から選択される請求項1から7のうちのいずれか1項に記載の方法。
- 前記組成物がswrA遺伝子に突然変異を有するバチルス・サブチリス(Bacillus subtilis)QST713細胞を含み、前記突然変異を有する前記細胞が前記組成物中の合計細菌細胞の少なくとも3.5%を含む請求項1から7のうちのいずれか1項に記載の方法。
- 前記突然変異を有する前記細胞が、開始コドンに少なくとも一つの核酸塩基対変化および/または前記swrA遺伝子に少なくとも一つの核酸塩基対挿入もしくは欠失を含む請求項9に記載の方法。
- 前記swrA遺伝子における前記挿入または欠失が配列番号1の位置26から34における1以上の塩基対で生じる請求項10に記載の方法。
- 前記突然変異を有する前記細胞が、それぞれ寄託番号NRRLB−50421およびNRRLB−50455として寄託された株QST30002および株QST30004からなる群から選択される請求項9に記載の方法。
- 前記組成物がさらに、少なくとも一つの担体を含む前記請求項のうちのいずれか1項に記載の方法。
- 少なくとも一つの他の有効成分を前記組成物に加えることをさらに含む前記請求項のうちのいずれか1項に記載の方法。
- 前記有効成分が化学物質または細菌の別の株である請求項14に記載の方法。
- 前記有効成分が、植物成長調節剤、植物成長刺激剤、肥料およびそれらの組み合わせからなる群から選択される請求項14に記載の方法。
- 前記植物部分が、種子、果実、根、球茎、塊茎、球根および根茎からなる群から選択される前記請求項のうちのいずれか1項に記載の方法。
- 前記方法が、前記組成物を土壌に施用することを含む前記請求項のうちのいずれか1項に記載の方法。
- 前記組成物を、植物または植物部分を土壌と接触させる前、接触させる時、または接触させた後に施用する請求項18に記載の方法。
- 植え付けの少なくとも約5日前に前記組成物を施用する請求項19に記載の方法。
- 前記組成物が、液体、水和剤、粒剤、フロアブル剤およびマイクロカプセルからなる群から選択されるものである前記請求項のうちのいずれか1項に記載の方法。
- 前記植物が、樹木、草本、低木、イネ科草本、つる植物、シダ類、コケ類、緑藻類、単子葉植物および双子葉植物からなる群から選択される前記請求項のうちのいずれか1項に記載の方法。
- 前記組成物を少なくとも約1×106cfu/種子の施用量で種子に施用する請求項17に記載の方法。
- 前記組成物を約4×107から約8×1014cfu/エーカーの施用量で施用する請求項18に記載の方法。
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