JP2015527878A - 改良飼料品質のための方法および組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、その開示全体が参照によってここに具体的に引用される、2012年6月26日に出願された米国特許仮出願第61/664,359号の優先権を主張するものである。
2013年6月25日に作成され、電子的に提出された、18キロバイト(マイクロソフトウィンドウズ(登録商標)にて計測されるとおりのサイズ)であるファイル名「MONS336WO_ST25.txt」の配列表を、参照によって本明細書に引用する。
配列番号1−CCoAOMTゲノム1139987:1CR−Medicago sativa(ムラサキウマゴヤシ)CCoAOMT−1:1:1(センス方向)の配列。
配列番号2−1150536:1CR−Medicago truncatula(タルウマゴヤシ)CCoAOMT−1:1:2(アンチセンス方向)の配列。
配列番号3−センスとアンチセンスアームとの間のRNAループの配列(374−530bp)。
配列番号4−RNAループの5’末端の配列(7−73bp)。
配列番号5−1141266:1プロモーター(P)−Pv.Pal2−1:1:1の配列。
配列番号6−1141267:1リーダー(L)−Pv.Pal2−1:1:1の配列。
配列番号7−pMON100052 CAS−Pv.Pal2//SUP−CCoAOMT//nos;CAS−CaMV.35S//npt2//nosの配列。
アルファルファ形質転換植物用発現構築物
この実施例は遺伝子導入アルファルファ植物に再生可能なアルファルファ植物細胞核に組換えDNAを移植する発現構築物の構築を例示する。表1に記載のエレメントを備える形質転換ベクターpMON100052(pFG118としても知られる)が、本発明の配列番号1および配列番号2として識別される配列を備えるカフェオイル−CoA 3−O−メチルトランスフェラーゼ(CCoAOMT)を抑制するべくアルファルファ組織へのアグロバクテリウムを介した形質転換を行うための組換えDNAの調製での使用のために作製された。アルファルファ細胞、植物部位、または植物が本発明の配列番号7の発現カセットで形質転換され、なお、発現カセットはリグニン蓄積の部位におけるCCoAOMTポリペプチドの制御された発現を可能とするインゲンマメ(Phaseolus vulgaris)からのPv.PAL2プロモーターを備える。発現カセットは、形質転換、または親植物を形質転換して子孫種子を収穫した後に育種させることで、植物に導入することができる。
カフェオイル−CoA 3−O−メチルトランスフェラーゼ(CCoAOMT)を抑制するための配列特定
この実施例は、リグニン生合成経路における酵素の発現を抑制するためのDNA構築物を発現する遺伝子導入アルファルファのフェノール酸分析を示す。酵素の発現を下方制御するべく、アルファルファ細胞は、カフェオイル−CoA 3−O−メチルトランスフェラーゼ(CCoAOMT)コード配列に相補的なDNAセグメント(配列番号7)を備えるDNA構築物で形質転換された。結果として得られた遺伝子導入アルファルファ植物細胞、植物部位、または植物は、本発明の組換えDNA分子を備え、DNA分子の一部は配列番号1または配列番号2に対して相同的または相補的である。
低減酸性デタージェントリグニンを有するアルファルファ植物の選択方法
酸性デタージェント繊維(ADF)を、GoeringおよびVan Soest(Forage Fiber Analysis,USDA Agricultural Handbook No.379、1970)の標準プロトコルに変更を加えて計測した。F57ANKOMフィルターバッグ(ANKOM Technology Corporation、Fairport、NY)に粉状のサンプル(0.35g)を入れ、ANKOMファイバーアナライザーにて、対応する溶液にて攪拌しながら100℃で1時間加熱した。ほぼ沸騰している水で洗浄した後、サンプルを105℃で6時間乾燥し、その後にファイバー損失を判定するために重さを量った。残留物に対して、72%(v/v)硫酸内で3時間定温放置して、充分に洗浄し、重量測定前に105℃で6時間乾燥するADF判定によってADL判定が行われた(Guoら、Transgenic Res,10(5):457−464,2001)。
30mgの乾燥粉砕サンプルが入った15mLのガラスバイアルに、チオ酸分解試薬[ジオキサン(v/v)中、2.5%三フッ化ホウ素エーテルおよび10%エタンチオール]を3ミリリットル加えた。密封されたバイアルは次に、定期的(30分毎)に手動で攪拌しながら4時間油浴(>80℃)に入れた。反応はバイアルを氷の上に置くことで停止された。内標準(200μL)、水(3mL)、および飽和炭酸水素ナトリウム(pH〜3〜4まで)を加えた。この混合物はボルテックスされ、沈殿させられた。下層(リグニン分解生成物を含むメタンクロリド)を別のガラスバイアルに移した。水溶液層をさらに2回、メタンクロリドで抽出した。メタンクロリド層を混合して、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。アリコート(3mL)を窒素下にて乾燥した。乾燥された抽出リグニン単量体は25マイクロリットル(μL)のピリジンおよび80μLのN−メチル−N−(トリメチルシリル)トリフルオロアセトアミド(MSTFA)で誘導体化された。37℃で30分間定温放置した後、この反応生成物を0.5μL、GC/MSで分析した。GC/MSはHewlett Packard社製5890シリーズIIガスクロマトグラフと5971シリーズの質量選択検知器(カラム:HP−1、60m×0.25mm×0.25μm膜厚)上で行われ、質量スペクトルは60〜650m/zの走査範囲を有する電子衝撃方式(70eV)で記録された。
改良飼料価成分を有するアルファルファ植物
アルファルファ(Medicago sativa L.)は米国において最も重要な飼料の1つである。アルファルファ繊維の消化率が上昇することで、飼料品質、飼料配合柔軟性が向上し、飼料価値が改良される。現在、栽培者および育種者は近赤外分光法(NIRS)に中継して、アルファルファの飼料品質特性を予測している。リグニンが下方制御されたアルファルファ植物の導入によって、NIRS法の分析および等式は新しい低リグニンアルファルファサンプルについて飼料品質特性を予測する上で正確となる。リグニン含有量および組成の予測のために、例えば、Klasonリグニンを判定し、シリンギル(S−リグニン)対グアイアシル(G−リグニン)サブユニットの割当でNIR分析が用いられている(Bailleresら、2002)。この実施例は生体外中性デタージェント繊維消化率(NDFD)およびリグニン分析(コーヒー酸 3−O−メチルトランスフェラーゼ(COMT)およびカフェオイルCoA 3−O−メチルトランスフェラーゼ(CCoAOMT)が下方制御されたアルファルファのADL、Klason、合計チオ酸分解収量、S−リグニン、およびG−リグニンを報告する。
ADL、NDFD、および収量結果についてのデータ品質
線形モデルを用いる分析前にデータ品質チェックを行い、大きく削除されたスチューデント化残差を有する外れ値のプロットを識別した。この方法の2つのパスを用いて、第1パスで除外されたより大きい外れ値によって隠されているかもしれない第2パスのより微細な外れ値を検出した。この方法によって識別された外れ値は品質特性の分析から除外された。収量の分析については、CVが25%以上のプロットは分析から外された。目的変数の分析は、分散モデルの標準分析を用いて固定およびランダムの効果と混和して完了された。実際の統計的な計算はSAS/STATソフトウェア、バージョン9.1.3を用いて行った。分散計算の分析はPROC MIXEDを用いて行った。モデルは構築物および構築物内の事象を固定の効果として扱い、場所、場所の中のレップ、および構築物の相互作用による場所がランダム効果として扱われた。テストされる事象の他の属性は秋季休眠または非休眠生殖質(FD,ND)を含んだ。これらは全て固定効果として扱われた。クロス年(cross−year)分析では、年はランダム効果として扱われた。収穫刈り取りの変動する数字は異なる場所にて異なる年に行われた。収量は配置毎に各刈り取りについて分析された。クロス場所、クロス世代、およびクロス年分析において、収量は刈り取りに亘って合計され、プロット毎に合計収量を得た。実験設計はいくつかの事象について一致性ネガティブ分離個体(matched negative segregants)を、およびプールされたヌル分離個体(pooled null segregant)を含んだ。これによって2つの分析を行うことが可能になった。最初の分析では、全ての事象がプールされたヌル分離個体と比較され、2つ目の分析では、事象は一致性ネガティブ分離個体と比較された。
低減リグニンアルファルファ事象の下位茎におけるADL測定
ADL=酸性デタージェントリグニン、乾物の%、
LSD=最小有意差、
FD=秋季休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の高信頼区間、
P値=帰無仮説下でのより大きな絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
ADL=酸性デタージェントリグニン、乾物の%、
LSD=最小有意差、
FD=秋季休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の高信頼区間、
P値=帰無仮説下でのより大きな絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
ADL=酸性デタージェントリグニン、乾物の%、
LSD=最小有意差、
FD=秋季休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の高信頼区間、
P値=帰無仮説下でのより大きな絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
ADL=酸性デタージェントリグニン、乾物の%、
LSD=最小有意差、
ND=非休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の高信頼区間、
P値=帰無仮説下でのより大きな絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
ADL=酸性デタージェントリグニン、乾物の%、
LSD=最小有意差、
ND=非休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の高信頼区間、
P値=帰無仮説下でのより大きな絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
低減リグニンアルファルファ事象の下位茎におけるNDFD測定
NDFD=中性デタージェント繊維消化率、NDFの%(NDF=中性デタージェント繊維。植物細胞壁(セルロース、ヘミセルロース、リグニン(単位=乾物の%))の不消化および徐々に消化可能な成分を表す、
FD=秋季休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10のデルタ値を用いた低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10のデルタ値を用いた高信頼区間、
P値=帰無仮説下でのより大きな絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
NDFD=中性デタージェント繊維消化率、NDFの%(NDF=中性デタージェント繊維。植物細胞壁(セルロース、ヘミセルロース、リグニン(単位=乾物の%))の不消化および徐々に消化可能な成分を表す、
FD=秋季休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10のデルタ値を用いた低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10のデルタ値を用いた高信頼区間、
P値=帰無仮説下でのより大きな絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
NDFD=中性デタージェント繊維消化率、NDFの%(NDF=中性デタージェント繊維。植物細胞壁(セルロース、ヘミセルロース、リグニン(単位=乾物の%))の不消化および徐々に消化可能な成分を表す、
ND=非休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10のデルタ値を用いた低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10のデルタ値を用いた高信頼区間、
P値=帰無仮説下でのより大きな絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
NDFD=中性デタージェント繊維消化率、NDFの%(NDF=中性デタージェント繊維。植物細胞壁(セルロース、ヘミセルロース、リグニン(単位=乾物の%))の不消化および徐々に消化可能な成分を表す、
FD=秋季休眠、
ND=非休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10のデルタ値を用いた低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10のデルタ値を用いた高信頼区間、
P値=帰無仮説下でのより大きな絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
NDFD=中性デタージェント繊維消化率、NDFの%(NDF=中性デタージェント繊維。植物細胞壁(セルロース、ヘミセルロース、リグニン(単位=乾物の%))の不消化および徐々に消化可能な成分を表す、
ND=非休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10のデルタ値を用いた低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10のデルタ値を用いた高信頼区間、
P値=帰無仮説下でのより大きな絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
低減リグニンアルファルファ事象についての生長力評価
低減リグニンアルファルファ事象についての全植物におけるADL測定
ADL=酸性デタージェントリグニン、乾物の%、
LSD=最小有意差、
FD=秋季休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の高信頼区間、
P値=帰無仮説下におけるより大きい絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
ADL=酸性デタージェントリグニン、乾物の%、
LSD=最小有意差、
ND=非休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の高信頼区間、
P値=帰無仮説下におけるより大きい絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
ADL=酸性デタージェントリグニン、乾物の%、
LSD=最小有意差、
FD=秋季休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の高信頼区間、
P値=帰無仮説下におけるより大きい絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
ADL=酸性デタージェントリグニン、乾物の%、
LSD=最小有意差、
ND=非休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の高信頼区間、
P値=帰無仮説下におけるより大きい絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
ADL=酸性デタージェントリグニン、乾物の%、
FD=秋季休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の高信頼区間、
P値=帰無仮説下にてより大きな絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
ADL=酸性デタージェンとリグニン、乾物の%、
ND=非休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の高信頼区間、
P値=帰無仮説下にてより大きな絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
低減リグニンアルファルファ事象についての全植物におけるNDFD測定
NDFD=中性デタージェント繊維消化率、NDFの%(NDF=中性デタージェント繊維。植物細胞壁(セルロース、ヘミセルロース、リグニン(単位=乾物の%))における不消化および徐々に消化可能の成分を示す、
FD=秋季休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の高信頼区間、
P値=帰無仮説下にてより大きな絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
NDFD=中性デタージェント繊維消化率、NDFの%(NDF=中性デタージェント繊維。植物細胞壁(セルロース、ヘミセルロース、リグニン(単位=乾物の%))における不消化および徐々に消化可能の成分を示す、
ND=非休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の高信頼区間、
P値=帰無仮説下にてより大きな絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
NDFD=中性デタージェント繊維消化率、NDFの%(NDF=中性デタージェント繊維。植物細胞壁(セルロース、ヘミセルロース、リグニン(単位=乾物の%))における不消化および徐々に消化可能の成分を示す、
FD=秋季休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の高信頼区間、
P値=帰無仮説下にてより大きな絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
NDFD=中性デタージェント繊維消化率、NDFの%(NDF=中性デタージェント繊維。植物細胞壁(セルロース、ヘミセルロース、リグニン(単位=乾物の%))における不消化および徐々に消化可能の成分を示す、
ND=非休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の高信頼区間、
P値=帰無仮説下にてより大きな絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
NDFD=中性デタージェント繊維消化率、NDFの%(NDF=中性デタージェント繊維。植物細胞壁(セルロース、ヘミセルロース、リグニン(単位=乾物の%))における不消化および徐々に消化可能の成分を示す、
FD=秋季休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の高信頼区間、
P値=帰無仮説下にてより大きな絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
NDFD=中性デタージェント繊維消化率、NDFの%(NDF=中性デタージェント繊維。植物細胞壁(セルロース、ヘミセルロース、リグニン(単位=乾物の%))における不消化および徐々に消化可能の成分を示す、
ND=非休眠、デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10を用いたデルタ値の高信頼区間、
P値=帰無仮説下にてより大きな絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
低減リグニンアルファルファ事象についての場所に亘る収量分析
収量=植物毎に基づいて計算されたグラムでの収量、
FD=秋季休眠、
ND=非休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの間の百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10のデルタ値を用いた低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10のデルタ値を用いた高信頼区間、
P値=帰無仮説下におけるより大きな絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
収量=植物毎に基づいて計算されたグラムでの収量、
FD=秋季休眠、
ND=非休眠、
デルタ=事象平均とコントロール平均との差(事象−コントロール)、
%差=事象とコントロールとの間の百分率差(デルタ/コントロール*100)、
デルタLCI@90%=アルファレベル0.10のデルタ値を用いた低信頼区間、
デルタUCI@90%=アルファレベル0.10のデルタ値を用いた高信頼区間、
P値=帰無仮説下におけるより大きな絶対値差分の見込み(有効性のための両側検定)。
アルファルファ管理実施
植え付け(Alfalfa Management Guide、2011):アルファルファをシーディングして北部諸州で植えるのは春の季節から晩夏にかけてが好適な季節であり、苗立ちが成功する機会を増大させる。アルファルファの春のシーディングは、春霜によって損傷する可能性がなくなり次第、開始することができる。晩夏でのシーディングについては、冬の間の生き残りを促進するためにアルファルファは発芽後少なくとも6週間生長させられる。これによって、植物のクラウンが冬の生き残りと春の再成長のための根の蓄えを貯蔵することが可能となる。
秋に植えられたか以前に苗立ちされたアルファルファ植物の最初の刈り取りの時期は、ほとんどの植物に花芽が形成されたとき、または新しいクラウン新芽が1〜2インチよりも大きく成長していないときに通常合わされる。開花は日長によって制御されるため、最初の生長はしばしば花の形成前に収穫する準備ができており、通常は4月下旬または5月初めに発生する。最初の生長は早い傾向があり、高さが大きく増加倒伏が生じやすく、したがって倒伏が起きる前に収穫することが推奨される。春におけるアルファルファの生長は主にクラウン芽からのものであり、気温および利用可能な根エネルギー貯蔵物に依存する。最初の収穫の後の新芽生長はクラウンおよび腋花芽の両方に由来する。アルファルファが非常に短く刈り取られた場合(1インチ以下)、ほとんどの腋花芽は除去されて新しい新芽はクラウン芽から出なければならない(WiederholtおよびSchneider、2007)。春に植えられたシードリング立ち木は少なくとも50%の茎が花形成する、または倒伏が明らかでない限りは収穫されるべきではない。収穫の遅らせることは苗の根のさらなる成長を可能とする。
第2および後続の刈り取りは、茎の10%〜25%が花をつけたときに行われる。アルファルファが生長の芽の段階から25%開花段階まで進むのに約5〜10日を要する。一般的に、アルファルファの再生長期間は28〜35日毎に好適な刈り取り段階に到達する。暑い、乾燥した天気の間は、植物は再成長期間の30日より前、および植物が高さ10インチに達する前に豊富に花をつける可能性がある。このような場合、最後に収穫として刈り取ってから35〜40日経った後に短い成長を放牧するか刈り取るのが最もよい。一度植物が広範囲に亘って花をつけると、これらの特定の茎はそれ以上の生長をせず、継続的に存在することによって好適な条件が発生しても新しく生長するのを遅らせる傾向がある。
秋の刈り取り管理については、植物が最初の枯らし霜(24°F)前に炭水化物を作るために4〜6週間の再成長が必要であり、10〜14インチの成長が推奨される。いくつかの霜の後、しかし葉がしおれて落ち始める前に、この生長分を収穫して飼料の品質を維持して残余を減らすべきであり、このことはペストコントロールをも補助する。
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Claims (15)
- アルファルファ植物の個体群から、改良された飼料価値成分を有するアルファルファ植物を選択する方法であって、前記アルファルファ植物の個体群は組換えDNA分子を含み、前記組換えDNA分子の一部が配列番号1または配列番号2に対して相同的もしくは相補的であり、
(a)前記アルファルファ植物の個体群内の前記アルファルファ植物の各々からの下茎組織内の酸性デタージェントリグニン(ADL)の濃度を測定することであって、前記ADLの濃度が、前記DNA分子を含まないアルファルファ植物の下茎組織と比較して、12%から約31%減少される、測定することと、
(b)前記下茎組織内のグアヤシルリグニン(Gリグニン)の濃度を測定することであって、前記Gリグニンが、前記DNA分子を含まないアルファルファ植物の下茎組織と比較して、前記下茎組織内で約25%以上減少される、測定することと、
(c)前記下茎組織内の中性デタージェント繊維消化率(NDFD)成分を測定することであって、前記NDFD価が、前記DNA分子を含まないアルファルファ植物の下茎組織と比較して、前記下茎組織内で18%より多く増大される、測定することと、
(d)ステップ(a)〜(c)の前記改良された飼料価値成分を含むアルファルファ植物を選択することと、
(e)ステップ(d)で選択された前記アルファルファ植物を栽培することと、を含む、方法。 - 前記組換えDNA分子が、植物維管束組織内の操作可能に結合したDNA分子の転写が可能なプロモーター分子を含み、前記操作可能に結合したDNA分子の一部が配列番号1または配列番号2に対して相同的もしくは相補的である、請求項1に記載の方法。
- 前記アルファルファ植物の生長の生長力を測定し、さらに前記生長力が、前記組換えDNA分子を含まないアルファルファ植物と比較して、90%以上であることをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 干草または低水分サイレージが前記アルファルファ植物を栽培することで生産される、請求項1に記載の方法。
- 前記干草または低水分サイレージが、前記改良された飼料価値成分について測定されることが、
(a)前記干草または低水分サイレージのサンプルのADL濃度を測定することであって、前記ADL濃度が、前記組換えDNA分子を含まないアルファルファ干草と比較して、80%から92%である、測定することと、
(b)前記干草または低水分サイレージのサンプル内の中性デタージェント繊維消化率(NDFD)を測定することであって、前記NDFD価が、前記組換えDNA分子を含まないアルファルファ干草と比較して、107%から125%である、測定することと、を含む、請求項4に記載の方法。 - 前記アルファルファ植物を成熟まで栽培し、前記植物から後代のアルファルファ種子を採取することをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 請求項6の方法で生産されたアルファルファ種子であり、前記種子が組換えDNA分子を含み、前記組換えDNA分子の一部が配列番号1または配列番号2に対して相同的もしくは相補的である、種子。
- 請求項7の種子から栽培されたアルファルファ植物であって、前記植物が、前記組換えDNA分子を含まないアルファルファ植物の下茎組織および干草と比較して、下茎組織内に12%から31%減少されたADL濃度、および前記植物から生産された干草内に80%から92%減少されたADL濃度を含む、アルファルファ植物。
- 請求項7の種子から栽培されたアルファルファ植物であって、前記植物が、前記組換えDNA分子を含まないアルファルファ植物の下茎組織または干草と比較して、下茎組織内に25%以上減少されたGリグニン濃度を含む、アルファルファ植物。
- 請求項7の種子から栽培されたアルファルファ植物であって、前記植物が、前記組換えDNA分子を含まないアルファルファ植物の下茎組織と比較して、下茎組織内に122%以上増大されたNDFD価を含む、アルファルファ植物。
- 請求項7の種子から栽培されたアルファルファ植物であって、前記植物が、前記組換えDNA分子を含まないアルファルファ植物の干草と比較して、前記植物から生産された干草内に約107%から約125%またはそれ以上増大されたNDFD価を含む、アルファルファ植物。
- 改良された飼料価値成分を有するアルファルファ干草であって、前記干草は組換えDNA分子を含み、前記組換えDNA分子の一部が配列番号1または配列番号2に対して相同的もしくは相補的であり、
(a)前記組換えDNA分子を含まないアルファルファ干草のADL濃度の約80%から約92%のADL濃度と、
(b)前記組換えDNA分子を含まないアルファルファ干草と比較して、約25%以上減少されたGリグニン濃度と、
(c)前記組換えDNA分子を含まないアルファルファ干草と比較して、107%から125%のNDFD価と、をさらに含む、アルファルファ干草。 - 改良された飼料価値成分を含む処理済みアルファルファ生産物であって、前記生産物は組換えDNA分子を含み、さらに前記組換えDNA分子の一部が配列番号1または配列番号2に対して相同的もしくは相補的であり、
(a)前記組換えDNA分子を含まないアルファルファ生産物のADL濃度の約80%から約92%のADL濃度と、
(b)前記組換えDNA分子を含まないアルファルファ生産物と比較して、約25%以上減少されたGリグニン濃度と、
(c)前記組換えDNA分子を含まないアルファルファ生産物と比較して、107%から125%のNDFD価と、をさらに含む前記理済みアルファルファ生産物。 - 前記低水分サイレージが、前記干草のサンプルのADL濃度の測定を含む改良された前記飼料価値成分のために測定され、さらに前記ADL濃度が、商品アルファルファと比較して下茎内で15%から30%、植物内で8%から15%減少される、請求項4に記載の方法。
- 改善された飼料品質および良好な農業生産力を産出するため、1つ以上の遺伝子組換え事象が選択される、請求項1に記載の方法。
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