JP2015520385A - アプタマーに基づく多重化アッセイ - Google Patents
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Abstract
Description
〔0064〕 アプタマーを溶液中の試験試料(例えば、血漿)と平衡化した。分析物とアプタマーとの長命(約30分の半減期中央値)複合体、具体的には解離速度の緩徐なアプタマーを、この期間に形成した。次いで、試料マトリックス、アプタマー、タンパク質分析物、およびアプタマー/分析物複合体を含む平衡混合物を、アガロースビーズ(SA−アガロース)に固定したストレプトアビジンに曝露した(アプタマーがビオチン部分でタグ付けされている場合)。混合物中のアプタマーは、付加されたビオチン部分を介してSA−アガロース上に捕捉される。このアッセイは、この段階ではアプタマーの定量的捕捉に依存することに留意されたい。次いで、固定したアプタマーを温和な条件下で洗浄し、遊離タンパク質および緩やかに結合したタンパク質を除去したが、アプタマーおよびアプタマー/分析物複合体はそのまま残した。「キャッチ−1」と称されるこのステップは、タンパク質精製ステップであると考えることができる。(例えば、米国特許第7,947,447号および同第7,855,054号を参照)。
〔0068〕 上述のように、血清および血漿は、アプタマーの捕捉効率を低下させ、図2および3に示されように、測定され得る濃度を限定することが分かった。
〔0069〕 図4に示すように、アプタマーの前固定およびそれに続く平衡化は、本明細書に記載されるように、捕捉阻害の問題を軽減し、はるかに高い血漿濃度の使用を可能にする。具体的には、以前に記載されたプロセスの10%最高濃度Gold et al.(PLoS One(2010)5(12):e15005)、またはより最新版の5%最高濃度ではなく、少なくとも40%v/vまでの血漿または血清を含む濃度を使用することができ、それによって約4〜8倍感度を増加させると同時に、アッセイの全体的なロバスト性を高める。
〔0072〕 図5に示すように、溶出のためのカオトロピック塩の使用は、アッセイバックグラウンドを軽減するとともにアッセイ感度を増加させる。図5を参照すると、緩衝液中のアッセイバックグラウンドは、過塩素酸塩による溶出により有意に減少されることが見てとれる(図5Aの下側の曲線を図5Bの下側の曲線と比較)。アッセイバックグラウンドは、20〜40RFUまで低下した。見かけの内在性レベルも、過塩素酸塩による溶出によりIL−11で若干減少されたことから、タンパク質依存性のバックグラウンドの低下(約0.2pM対1pM)が示唆される。
〔0077〕 Gold et al.(PLoS One(Dec.2010)5(12):e15005)に開示される方法の最新版(表2の中で「以前のアッセイ」と称される)と、本開示(表2の中のバージョン3)との形式比較を行った。プロトコル間の類似性の程度が高かったことから、単一ロボット実験において、実際には、同じフィルタープレート上で最小限の人的介入を伴って、両方のアッセイプロトコルを実行できる試験が可能であった。試験は、可変性を測定するための8つの複製血漿試料、8つの緩衝液の用量反応用ウェル、および8つの血漿スパイク用ウェルを含んでいた。バージョン3は、初期のアッセイ型が以前のアッセイで用いたよりもはるかに高い血漿濃度を用いたことに留意されたい(5、0.167、および0.0056%に対して40、1.3、および0.044%)。RFU空間および血漿濃度に対して正規化されたRFUの結果の概要を下に示す(表2)。
〔0081〕 一実施形態において、標的分子および第1の放出可能なタグに対して高い親和性および特異性を有するアプタマーが提供される。いくつかの実施形態において、アプタマーは、光アプタマーである。別の実施形態において、第1の放出可能なタグは、キャッチ−1(後に段落[0074]で定義される)分配の前に、アッセイの任意の時点で付加される。一実施形態において、この第1の放出可能なタグは、光切断可能なビオチンである。他のタグおよび切断可能な部分、ならびにそのようなタグおよび切断可能な部分を含有するアプタマーについて記載する。
〔0094〕 本開示の別の態様は、試験試料を分析するための本明細書に開示される方法のいずれかを都合よく行うのに有用なキットに関する。開示される方法の多用途性を高めるために、試薬の比率が方法およびアッセイの実質的な最適化を提供するように、同じかまたは別個の容器中に、パッケージ化された組み合わせで試薬が提供されてもよい。試薬の交差反応性および安定性に応じて、試薬は、各々、別個の容器内に存在してもよいか、または種々の試薬が1つ以上の容器内で組み合わされてもよい。
〔0154〕 キャッチ−0
〔0155〕 1xSB17,Tw(40mM HEPES、102mM NaCl、1mM EDTA、5mM MgCl2、5mM KCl、0.05% Tween−20)中の133μLの7.5%ストレプトアビジン−アガローススラリーを、フィルタープレート(0.45μm Millipore HVプレート(Duraporeカタログ番号MAHVN4550))のウェルに添加した。適切な1.1xアプタマー混合物(全てのアプタマーは、5’末端にCy3フルオロフォアおよび光切断可能なビオチン部分を含有する)を解凍し、その後ボルテックスした。次いで、1.1×アプタマー混合物を10分間沸騰させ、30分ボルテックスし、水浴で20分間中20℃に冷却させた。次いで、ストレプトアビジンアガローススラリーを含有するフィルタープレート中の液体を、遠心分離(1000×gで1分間)により除去した。100μLのアプタマー混合物を、フィルタ―プレートのウェルに(ロボット制御により)添加した。光から保護された、850rpmに設定された振盪機上で、混合物を25℃で20分間インキュベートした。
〔0157〕 20分のインキュベーション後、真空濾過により溶液を除去した。190μLの1xCAPSアプタマー前洗浄緩衝液(50mM CAPS、1mM EDTA、0.05% Tw−20、pH11.0)を添加し、振盪させながら1分間混合物をインキュベートした。次いで、真空濾過によりCAPS洗浄溶液を除去した。次いで、CAPS洗浄を1回繰り返した。190μLの1xSX17,Twを添加し、振盪させながら1分間混合物をインキュベートした。次いで、真空濾過により1xSB17,Twを除去した。さらに190μLの1xSX17,Twを添加し、振盪させながら1分間混合物をインキュベートした。次いで、遠心分離(1000×gで1分)により1xSB17,Twを除去した。1xSB17,Twの除去後、150μLのキャッチ−0保存緩衝液(150mM NaCl、40mM HEPES、1mM EDTA、0.02%アジ化ナトリウム、0.05% Tween−20)を添加し、フィルタープレートを外周部のみで慎重に密封し、使用するまで暗所にて4℃で保存した。
〔0159〕 75μLの40%試料希釈液を40%試料プレートに入れた(最終40%試料は、20μM Zブロック、1mMベンズアミジン、1mM EGTA、40mM HEPES、5mM MgCl2、5mM KCl、1% Tween−20を含有する)。195μLの1xSB17,Twを1%試料プレートに入れた。90μLの1xSB17,Twを1:10稀釈用プレートに入れた。133μLの1xSB17,Twを0.005%試料プレートに入れた。25℃のインキュベータ内のRack Thawing Station上で10分間試料を解凍し、次いでボルテックスし、1000×gで1分間回転させた。チューブからキャップを除去した。試料を混合し(50μLで5回)、50μLの100%試料を、試料希釈液を収容する40%試料プレートに移した。次いで、ピペットで吸引および吐出すること(110μL、10回)により、試料プレート上で40%試料を混合した。次いで、5μLの40%試料を、1xSB17,Twを収容する1%試料プレートに移した。ピペットで吸引および吐出すること(120μL、10回)により、この試料を再び混合した。混合した後、10μLの1%試料を、1xSB17,Twを収容する1:10稀釈用プレートに移し、ピペットで吸引および吐出すること(75μL、10回)により混合した。1:10稀釈用プレートからの7μLの0.1%試料を、1xSB17,Twを収容する0.005%試料プレートに移し、ピペットで吸引および吐出すること(110μL、10回)により混合した。
〔0161〕 真空濾過により、フィルタープレートからキャッチ−0保存溶液を除去した。次いで、190μLの1xSB17,Twを添加し、その後、真空濾過によりフィルタープレートから除去した。次いで、さらに190μLの1xSB17,Twをフィルタープレートに添加した。
〔0163〕 遠心分離(1000×gで1分間)により、フィルタープレートから1xSB17,Tw緩衝液を除去した。100μLの適切な試料希釈液をフィルタープレート(3つのフィルタープレート、40%、1%、または0.005%の各試料希釈液に1つ)に添加した。フィルタープレートを外周部のみで慎重に密封し、ウェルを加圧することを回避した。圧力は、平衡化の間に漏出の原因となる。次いで、光から保護された、850rpmに設定された熱振盪機上で、プレートを28℃で3.5時間インキュベートした。
〔0165〕 平衡化後、フィルタープレートを真空マニホールド上に配置し、真空濾過により試料を除去した。190μLのビオチン洗浄液(1xSB17,Tw中100μMのビオチン)を添加し、真空濾過により液体を除去した。次いで、試料を190μLの1xSB17,Twで5回洗浄した(真空濾過)。1xSB17,Tw中の100μLの1mM NHS−ビオチン(新しく調製した)を添加し、フィルタープレートを吸収パッド上にブロットし、振盪させながら5分間混合物をインキュベートした。真空濾過により液体を除去した。1xSB17,Tw中の125μLの20mMグリシンを添加し、真空濾過により液体を除去した。再び、1xSB17,Tw中の125μLの20mMグリシンを添加し、真空濾過により液体を除去した。続いて、190μLの1xSB17,Twで試料を6回洗浄し、真空濾過により液体を除去した。次いで、85μLの光切断緩衝液(1xSB17,Tw中2μM Zブロック)を各フィルタープレートに添加した。
〔0167〕 フィルタープレートを吸収パッド上にブロットし、振盪させながら(800rpm、25℃)BlackRayUVランプで6分間照射した。プレートを180度回転させ、BlackRay光源下でさらに6分間照射した。40%フィルタープレートを、空の96ウェルプレート上に配置した。1%フィルタープレートを40%フィルタープレートの上に重ね、0.005%フィルタープレートを1%フィルタープレートの上に重ねた。プレートのアセンブリを1000×gで1分間回転させた。溶出した試料を含む96ウェルプレートを、ロボットデッキ上に配置した。37℃のインキュベータからの1xSB17,Tw中の60%グリセロールを、ロボットデッキ上に配置した。
〔0169〕 アッセイの設定中、キャッチ−2のために、50μLの10mg/mLMyOne SAビーズ(500μg)をABgene Omniチューブの96ウェルプレートに添加し、Cytomat内に配置した。キャッチ−2の96ウェルビーズプレートを90秒間懸濁し、磁気ブロック上に60秒間置き、上清を除去した。全てのキャッチ−1溶出液をキャッチ−2ビーズプレートに移し、Peltier熱振盪機上でインキュベートした(1350rpm、5分、25℃)。プレートを25℃の磁石に2分間移し、上清を除去した。次いで、75μLの1xSB17,Twを添加し、Peltier振盪機上、1350rpm、37℃で1分間試料をインキュベートした。次いで、1xSB17,Tw中の75μLの60%グリセロール(37℃に加熱)を添加し、再び、Peltier振盪機上、1350rpm、37℃で1分間試料をインキュベートした。37℃に加熱した磁石にプレートを移して2分間インキュベートし、その後上清を除去した。37℃、1xSB17,Tw、およびグリセロールの洗浄サイクルを、あと2回繰り返した。次いで、試料を洗浄し、Peltier振盪機上(1350rpm、1分、25℃)で、150μLの1xSB17,Twとともに残ったグリセロールを除去し、その後1分間25℃の磁気ブロックに置いた。上清を除去し、0.5M NaClと置き換えた150μLの1xSB17,Twを添加し、1350rpmで1分間インキュベートし(25℃)、その後1分間25℃の磁気ブロックにおいた。上清を除去し、75μLの過塩素酸塩溶出緩衝液(1.8M NaClO4、40mM PIPES、1mM EDTA、0.05% Triton X−100、1xハイブリダイゼーション対照、pH=6.8)を添加し、その後、Peltier振盪機上で10分インキュベートした(25℃、1350rpm)。その後、プレートを磁気選別機に移し、90秒間インキュベートし、上清を回収した。
〔0171〕 20μLの溶出した試料を、空の96ウェルプレートにロボット制御により添加した。第2のセットのハイブリダイゼーション対照を含有する5μLの10×Agilentブロック緩衝液を、溶出した試料にロボット制御により添加した。次いで、25μLの2×Agilent HiRPM ハイブリダイゼーション緩衝液を、手作業でウェルに添加した。40μLのハイブリダイゼーション混合物を、Agilentのガスケットスライド上に負荷した。Agilentの8×15kアレイをガスケットスライド上に添加し、クランプを用いてサンドイッチを締め付けた。次いで、サンドイッチを回転させながら(20rpm)55℃で19時間インキュベートした。
〔0173〕 Little Dipper Processor(SciGene、カタログ番号1080−40−1)上で、ハイブリダイゼーション後のスライド処理を行った。約750mLの洗浄緩衝液1(Oligo aCGH/ChIP−on−chip Wash Buffer 1、Agilent Technologies)を1つのガラス製染色皿に入れた。約750mLの洗浄緩衝液1(Oligo aCGH/ChIP−on−chip Wash Buffer 1、Agilent Technologies)を、Little Dipper Processorの溶液槽1に入れた。37℃に加熱した約750mLの洗浄緩衝液2(Oligo aCGH/ChIP−on−chip Wash Buffer 1、Agilent Technologies)を、Little Dipper Processorの溶液槽2に入れた。両方の溶液槽の磁気撹拌速度を5に設定した。溶液槽1の温度調節器は作動させなかったが、溶液槽2の温度調節器を37℃に設定した。次いで、最大12個のスライド/ガスケットアセンブリを、Wash Buffer1を収容する第1の染色皿内で分解し、依然としてWash Buffer1に浸漬された状態のスライドをスライドラック内に入れた。全てのスライド/ガスケットアセンブリを分解してから、スライドラックを迅速にLittle Dipper Processorの溶液槽1に移し、自動洗浄プロトコルを開始した。Little Dipper Processorにより、溶液槽1内でスライドを250の速度で300秒間インキュベートし、その後、Agilent Wash 2(Oligo aCGH/ChIP−on−chip Wash Buffer 2、Agilent Technologies)を収容する37℃の溶液槽2に移し、速度100で300秒間インキュベートした。その後、Little Dipper Processorは、内臓された遠心分離機にスライドラックを移し、速度690で300秒間スライドを回転させた。
〔0175〕 100% PMT設定、5μmの解像度で、Cy3チャネルにおいて、マイクロアレイスキャナー(Agilent G2565CA Microarray Scanner System、Agilent Technologies)を用いてマイクロアレイのスライドを画像処理し、XRDオプションを0.05で有効にした。GE1_107_Sep09プロトコルとともにAgilent特徴抽出ソフトウェアバージョン10.7.3.1を使用して、得られたtiff画像を処理した。
Claims (73)
- 標的分子に対する特異的結合親和性を有し、かつ第1の捕捉要素に対する親和性を有する第1のタグを担持するアプタマーを、第1の捕捉要素を含む第1の固体支持体に曝露し、前記第1のタグを前記第1の捕捉要素と会合させることと、
凝集したアプタマーを解離させる1つ以上の溶液で前記第1の固体支持体を洗浄することと、
前記アプタマーを試験試料と接触させることであって、前記標的分子が前記試験試料中に存在する場合、アプタマー−標的親和性複合体が形成される、接触させることと、
前記第1の固体支持体と会合していない混合物の1つ以上の成分を除去することと、
第2の捕捉要素に対する親和性を有する第2のタグを、前記アプタマー−標的親和性複合体中の前記標的分子に付着させることと、
前記第1の固体支持体から前記アプタマー−標的親和性複合体を放出させることと、
前記放出されたアプタマー−標的親和性複合体を、第2の捕捉要素を含む第2の固体支持体に曝露し、前記第2のタグを前記第2の捕捉要素と会合させることと、
前記第2の固体支持体と会合していない前記混合物のあらゆる成分を除去することと、
アプタマー/分析物の相互作用を妨害するカオトロピック塩を含む1つ以上の溶液で前記第2の固体支持体からアプタマーを溶出することと、を含む、方法。 - 前記アプタマーは、少なくとも1つのC−5修飾ヌクレオチドを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記アプタマーは、リボース位置、デオキシリボース位置、ホスフェート位置、および塩基位置から独立して選択される1つ以上の位置における化学置換を含む少なくとも1つの化学修飾を含む、請求項1または2に記載の方法。
- 前記化学修飾は、2’位糖修飾、2’−アミノ(2’−NH2)、2’−フルオロ(2’−F)、2’−O−メチル(2’−OMe)、5位ピリミジン修飾、8位プリン修飾、シトシン環外アミンにおける修飾、5−ブロモウラシルの置換、5−ブロモデオキシウリジンの置換、5−ブロモデオキシシチジンの置換、主鎖修飾、メチル化、3’キャップ、および5’キャップからなる群から独立して選択される、請求項3に記載の方法。
- 動的負荷を導入することをさらに含む、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 前記アプタマー−標的親和性複合体は、緩徐な解離速度を有する、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- 前記アプタマー−標的親和性複合体の前記解離速度(t1/2)は、30分以上である、請求項6に記載の方法。
- 前記アプタマー−標的親和性複合体の前記解離速度(t1/2)は、約30分〜約240分である、請求項7に記載の方法。
- 前記アプタマー−標的親和性複合体の前記解離速度(t1/2)は、30分以上、60分以上、90分以上、120分以上、150分以上、180分以上、210分以上、および240分以上からなる群から選択される、請求項7に記載の方法。
- 前記緩衝溶液のうちの1つ以上は、有機溶媒を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記有機溶媒は、グリセロールである、請求項10に記載の方法。
- 前記カオトロピック塩は、過塩素酸ナトリウム、塩化リチウム、塩化マグネシウム、および塩化ナトリウムからなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記アプタマーは、Q−PCR、MS、次世代シーケンシング、およびハイブリダイゼーションからなる群から選択される方法を用いて検出および任意選択的に定量化される、請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法。
- 前記Q−PCRは、TaqMan(登録商標)PCR、PCRプロセス中の挿入蛍光色素、またはPCRプロセス中の分子ビーコンを用いて行われる、請求項13に記載の方法。
- 前記アプタマーは、検出可能な部分を含む、請求項1〜14のいずれかに記載の方法。
- 前記検出可能な部分は、色素、量子ドット、放射標識、電気化学的官能基、ならびに酵素および検出可能な酵素基質からなる群から選択される、請求項15に記載の方法。
- 前記色素は、蛍光色素である、請求項16に記載の方法。
- 前記アプタマーは、一本鎖核酸または二本鎖核酸である、請求項1〜17のいずれか1項に記載の方法。
- 前記アプタマーは、DNA、RNA、またはDNAおよびRNAの両方を含む、請求項18に記載の方法。
- 前記標的分子は、タンパク質、ペプチド、炭水化物、多糖、糖タンパク質、ホルモン、受容体、抗原、抗体、ウイルス、基質、代謝物、遷移状態類似体、補因子、阻害剤、薬物、色素、栄養素、増殖因子、組織、および制御基質からなる群から選択される、請求項1〜19のいずれか1項に記載の方法。
- 前記標的分子は、タンパク質またはペプチドである、請求項20に記載の方法。
- 前記試験試料は、生物試料、環境試料、化学試料、製剤試料、食物試料、農産物試料、および動物試料からなる群から選択される、請求項1〜21のいずれか1項に記載の方法。
- 前記試験試料は、血液、全血、白血球、末梢血単核細胞、血漿、血清、痰、息、尿、精液、唾液、髄膜液、羊水、腺液、リンパ液、乳頭吸引液、気管支吸引液、滑液、関節吸引液、細胞、細胞抽出物、糞便、組織、組織抽出物、組織生検、および脳脊髄液からなる群から選択される生物試料である、請求項22に記載の方法。
- 前記試験試料は、血漿または血清を含む、請求項1〜21のいずれか1項に記載の方法。
- 前記第1のタグおよび前記第2のタグは、各々、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、ペプチド核酸、ロック核酸、オリゴ糖、多糖、抗体、アフィボディ、抗体模倣体、細胞受容体、リガンド、脂質、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、Extravidin、ニュートラビジン、Traptavidin、金属、ヒスチジン、およびこれらの構造のいずれかの任意の部分からなる群から独立して選択される少なくとも1つの成分を含む、請求項1〜24のいずれか1項に記載の方法。
- 前記第1の捕捉要素および前記第2の捕捉要素は、各々、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、ペプチド核酸、ロック核酸、オリゴ糖、多糖、抗体、アフィボディ、抗体模倣体、細胞受容体、リガンド、脂質、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、Extravidin、ニュートラビジン、Traptavidin、金属、ヒスチジン、およびこれらの構造のいずれかの任意の部分から独立して選択される少なくとも1つの成分を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記第1のタグは、放出可能な部分を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記放出可能な部分は、光切断可能な部分を含む、請求項27に記載の方法。
- 前記第1の固体支持体および第2の固体支持体は、各々、ポリマービーズ、アガロースビーズ、ポリスチレンビーズ、アクリルアミドビーズ、固体コアビーズ、多孔ビーズ、常磁性ビーズ、ガラスビーズ、制御孔ビーズ、マイクロタイターウェル、シクロ−オレフィンコポリマー基質、膜、プラスチック基質、ナイロン、Langmuir−Blodgettフィルム、ガラス、ゲルマニウム基質、シリコン基質、シリコンウエハチップ、フロースルーチップ、マイクロビーズ、ナノ粒子、ポリテトラフルオロエチレン基質、ポリスチレン基質、ガリウムヒ素基質、金基質、および銀基質からなる群から独立して選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記アプタマーを定量化することにより前記標的を定量化することをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記アプタマーの前記検出は、前記アプタマーを第3の固体支持体にハイブリダイズさせることを含み、前記第3の固体支持体は、複数のアドレス可能な特徴を含み、前記特徴のうちの少なくとも1つは、その上に配置された、前記アプタマー内に含有されるいずれかの配列に相補的な少なくとも捕捉要素を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記アプタマー−標的親和性複合体のアプタマー部分を検出することによって前記標的分子を検出するステップをさらに含む、請求項1〜31のいずれかに記載の方法。
- 試料中の標的分子の存在を検出するか、またはその量を決定する方法であって、
複数のアプタマーを標的分子に提供することであって、前記複数のアプタマーの各々が、第1の切断可能な捕捉タグを含む、提供することと、
前記アプタマーを、固体支持体の表面に接着されたプローブを有する前記支持体と接触させることであって、第1のタグと前記プローブとの結合によって前記アプタマーが前記固体支持体上に固定されるように、前記プローブが前記第1のタグに結合することができる、接触させることと、
前記固定されたアプタマーを、標的分子を含有する試料と接触させて、前記固体支持体に結合したアプタマー−標的分子複合体を含有する混合物を形成することと、
前記混合物の残りから、前記固体支持体に結合したアプタマー−標的分子複合体を分配することと、
前記アプタマー−標的分子複合体の標的分子成分に第2の捕捉タグを導入することと、
前記第1の切断可能な捕捉タグを切断することによって、前記固体支持体の前記表面から前記アプタマー−標的分子複合体を解離させることと、
第2の固体支持体の表面に接着されたプローブを有する前記支持体を提供することであって、前記プローブは、標的分子上の前記第2の捕捉タグに結合することができる、提供することと、
前記第2の捕捉タグとプローブとの結合によって前記アプタマー−標的分子複合体が前記第2の支持体に結合するように、前記解離させたアプタマー−標的分子複合体を前記第2の固体支持体と接触させることと、
アプタマー/分析物の相互作用を妨害するが、アプタマー/アプタマーの相互作用およびDNAハイブリダイゼーションを支持するカオトロピック塩を含む1つ以上の緩衝溶液で、前記固体支持体からアプタマーを溶出することと、
前記アプタマー−標的分子複合体を解離させて、遊離アプタマーおよび前記支持体に結合した標的分子を得ることと、
前記遊離アプタマーを検出することと、を含む、方法。 - 前記前記アプタマーは、少なくとも1つのC−5修飾ヌクレオチドを含む、請求項33に記載の方法。
- 前記アプタマーは、リボース位置、デオキシリボース位置、ホスフェート位置、および塩基位置から独立して選択される1つ以上の位置における化学置換を含む少なくとも1つの化学修飾さらに含む、請求項33に記載の方法。
- 前記化学修飾は、2’位糖修飾、2’−アミノ(2’−NH2)、2’−フルオロ(2’−F)、2’−O−メチル(2’−OMe)、5位ピリミジン修飾、8位プリン修飾、シトシン環外アミンにおける修飾、5−ブロモウラシルの置換、5−ブロモデオキシウリジンの置換、5−ブロモデオキシシチジンの置換、主鎖修飾、メチル化、3’キャップ、および5’キャップからなる群から独立して選択される、請求項35に記載の方法。
- 動的負荷を導入することをさらに含む、請求項33に記載の方法。
- 前記アプタマー−標的親和性複合体は、緩徐な解離速度を有する、請求項33に記載の方法。
- 前記アプタマー−標的親和性複合体の前記解離速度(t1/2)は、30分以上である、請求項38に記載の方法。
- 前記アプタマー−標的親和性複合体の前記解離速度(t1/2)は、約30分〜約240分である、請求項39に記載の方法。
- 前記アプタマー−標的親和性複合体の前記解離速度(t1/2)は、30分以上、60分以上、90分以上、120分以上、150分以上、180分以上、210分以上、および240分以上からなる群から選択される、請求項40に記載の方法。
- 前記緩衝溶液のうちの1つ以上は、有機溶媒を含む、請求項33に記載の方法。
- 前記有機溶媒は、グリセロールである、請求項42に記載の方法。
- 前記カオトロピック塩は、過塩素酸ナトリウム、塩化リチウム、塩化ナトリウム、および塩化マグネシウムからなる群から選択される、請求項33に記載の方法。
- 前記アプタマーは、Q−PCR、MS、次世代シーケンシング、およびハイブリダイゼーションからなる群から選択される方法を用いて検出および任意選択的に定量化される、請求項33に記載の方法。
- 前記Q−PCRは、TaqMan(登録商標)PCR、PCRプロセス中の挿入蛍光色素、またはPCRプロセス中の分子ビーコンを用いて行われる、請求項45に記載の方法。
- 前記アプタマーに検出可能な部分を付加することをさらに含む、請求項33に記載の方法。
- 前記検出可能な部分は、色素、量子ドット、放射標識、電気化学的官能基、酵素、および酵素基質からなる群から選択される、請求項47に記載の方法。
- 前記色素は、蛍光色素である、請求項48に記載の方法。
- 前記アプタマーは、一本鎖核酸または二本鎖核酸である、請求項33に記載の方法。
- 前記アプタマーは、DNA、RNA、またはDNAおよびRNAの両方を含む、請求項50に記載の方法。
- 前記標的分子は、タンパク質、ペプチド、炭水化物、多糖、糖タンパク質、ホルモン、受容体、抗原、抗体、ウイルス、基質、代謝物、遷移状態類似体、補因子、阻害剤、薬物、色素、栄養素、増殖因子、組織、および制御基質からなる群から選択される、請求項33に記載の方法。
- 前記標的分子は、タンパク質またはペプチドである、請求項33に記載の方法。
- 前記試験試料は、生物試料、環境試料、化学試料、製剤試料、食物試料、農産物試料、および動物試料からなる群から選択される、請求項33に記載の方法。
- 前記試験試料は、血液、全血、白血球、末梢血単核細胞、血漿、血清、痰、息、尿、精液、唾液、髄膜液、羊水、腺液、リンパ液、乳頭吸引液、気管支吸引液、滑液、関節吸引液、細胞、細胞抽出物、糞便、組織、組織抽出物、組織生検、および脳脊髄液からなる群から選択される生物試料である、請求項33に記載の方法。
- 前記試験試料は、血漿または血清である、請求項33に記載の方法。
- 前記第1のタグおよび前記第2のタグは、各々、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、ペプチド核酸、ロック核酸、オリゴ糖、多糖、抗体、アフィボディ、抗体模倣体、細胞受容体、リガンド、脂質、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、Extravidin、ニュートラビジン、Traptavidin、金属、ヒスチジン、およびこれらの構造のいずれかの任意の部分からなる群から独立して選択される少なくとも1つの成分を含む、請求項33に記載の方法。
- 前記第1の捕捉要素および前記第2の捕捉要素は、各々、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、ペプチド核酸、ロック核酸、オリゴ糖、多糖、抗体、アフィボディ、抗体模倣体、細胞受容体、リガンド、脂質、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、Extravidin、ニュートラビジン、Traptavidin、金属、ヒスチジン、およびこれらの構造のいずれかの任意の部分から独立して選択される少なくとも1つの成分を含む、請求項33に記載の方法。
- 前記第1のタグは、放出可能な部分を含む、請求項33に記載の方法。
- 前記放出可能な部分は、光切断可能な部分を含む、請求項59に記載の方法。
- 前記第1の固体支持体および第2の固体支持体は、各々、ポリマービーズ、アガロースビーズ、ポリスチレンビーズ、アクリルアミドビーズ、固体コアビーズ、多孔ビーズ、常磁性ビーズ、ガラスビーズ、制御孔ビーズ、マイクロタイターウェル、シクロ−オレフィンコポリマー基質、膜、プラスチック基質、ナイロン、Langmuir−Blodgettフィルム、ガラス、ゲルマニウム基質、シリコン基質、シリコンウエハチップ、フロースルーチップ、マイクロビーズ、ナノ粒子、ポリテトラフルオロエチレン基質、ポリスチレン基質、ガリウムヒ素基質、金基質、および銀基質からなる群から独立して選択される、請求項33に記載の方法。
- 前記アプタマーを定量化することにより前記標的を定量化することをさらに含む、請求項33に記載の方法。
- 前記アプタマーの前記検出は、前記アプタマーを第3の固体支持体にハイブリダイズさせることを含み、前記第3の固体支持体は、複数のアドレス可能な特徴を含み、前記特徴のうちの少なくとも1つは、その上に配置された、前記アプタマー内に含有されるいずれかの配列に相補的な少なくとも捕捉要素を含む、請求項33に記載の方法。
- キットであって、
a)1つ以上の対象とする標的に特異的な1つ以上のアプタマーと、
b)1つ以上の固体支持体と、
c)1つ以上の分配試薬と、
d)親和性複合体からのアプタマーの放出のための1つ以上の試薬と、
(e)有機溶媒を含む1つ以上の緩衝溶液と、
(f)カオトロピック塩を含む1つ以上の緩衝溶液と、を備える、キット。 - 前記有機溶媒は、グリセロールである、請求項64に記載のキット。
- 前記カオトロピック塩は、過塩素酸ナトリウムである、請求項64に記載のキット。
- 前記1つ以上の対象とする標的を誘導体化するための試薬をさらに備える、請求項64に記載のキット。
- 前記1つ以上のアプタマーにおいて切断可能な部分を切断するための試薬をさらに備える、請求項64に記載のキット。
- 動的負荷において使用するための試薬をさらに備える、請求項64に記載のキット。
- 試験試料中に存在し得る標的分子を検出するための方法であって、
前記標的分子に対する特異的親和性を有し、かつ第1の捕捉要素に対する特異的親和性を有する第1のタグを担持するアプタマーを、第1の捕捉要素を含む第1の固体支持体に曝露し、前記第1のタグを前記第1の捕捉要素と会合させることと、
凝集したアプタマーを解離させる1つ以上の緩衝溶液で前記固体支持体を洗浄することと、
アプタマー/分析物の相互作用を妨害するが、アプタマー/アプタマーの相互作用およびDNAハイブリダイゼーションを支持するカオトロピック塩を含む1つ以上の緩衝溶液で、前記固体支持体からアプタマーを溶出することと、を含む、方法。 - 前記カオトロピック塩は、過塩素酸ナトリウム、塩化リチウム、塩化ナトリウム、および塩化マグネシウムからなる群から選択される、請求項70に記載の方法。
- 凝集したアプタマーを解離させる前記緩衝溶液は、有機溶媒を含む、請求項70に記載の方法。
- 前記有機溶媒は、グリセロールである、請求項72に記載の方法。
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GB2528643A (en) * | 2014-07-08 | 2016-02-03 | Adc Biotechnology Ltd | Method of synthesising ADCs |
KR102003589B1 (ko) * | 2016-03-03 | 2019-07-24 | 성균관대학교산학협력단 | 생화학 분자 검출센서 및 다파장 형광을 이용한 생화학 분자 검출방법 |
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CA3039057A1 (en) * | 2016-10-13 | 2018-04-19 | Laboratory Corporation Of America Holdings | Devices and methods to reduce interfering compounds in biological samples |
US20190317082A1 (en) * | 2018-04-13 | 2019-10-17 | Fluidigm Canada Inc. | Stabilized cell acquisition for elemental analysis |
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LU101073B1 (en) * | 2018-12-21 | 2020-06-24 | Luxembourg Inst Science & Tech List | Dna aptamers specific of adenovirus types |
KR102177672B1 (ko) * | 2019-02-01 | 2020-11-12 | 주식회사 압타머사이언스 | 압타머를 이용한 다중(multiplex) PCR 방법 |
KR102113078B1 (ko) * | 2019-07-05 | 2020-05-20 | 광주과학기술원 | 압타머의 선별 방법 |
CN110791551A (zh) * | 2019-09-17 | 2020-02-14 | 北京化工大学 | 一种无载体氯霉素适配体信号放大传感器的建立方法 |
WO2021112559A1 (ko) * | 2019-12-03 | 2021-06-10 | 김성천 | 시료의 표적분자 집단에 대한 프로파일을 얻는 방법 |
CN113624724A (zh) * | 2020-05-07 | 2021-11-09 | 廖世奇 | 一种适配体分子信标对靶分子的多元检测分析方法 |
CN111812313B (zh) * | 2020-06-22 | 2021-10-08 | 北京生物制品研究所有限责任公司 | 铝佐剂吸附型新型冠状病毒灭活疫苗中抗原的解离方法 |
US11578320B2 (en) | 2021-04-27 | 2023-02-14 | Singular Genomics Systems, Inc. | High density sequencing and multiplexed priming |
KR20220167781A (ko) * | 2021-06-14 | 2022-12-21 | 김성천 | 압타머를 이용하여 시료의 표적 단백질 분자 집단에 대한 프로파일을 얻는 방법 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004009798A2 (en) * | 2002-07-24 | 2004-01-29 | Ciphergen Biosystems, Inc. | Protein interaction difference mapping |
JP2009523430A (ja) * | 2006-01-17 | 2009-06-25 | ソマロジック・インコーポレーテッド | 試験試料の多重化分析 |
WO2010008001A1 (ja) * | 2008-07-14 | 2010-01-21 | 国立大学法人 東京大学 | Il-17に対するアプタマー及びその使用 |
Family Cites Families (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2259800T3 (es) | 1990-06-11 | 2006-10-16 | Gilead Sciences, Inc. | Procedimientos de uso de ligandos de acido nucleico. |
US6242246B1 (en) | 1997-12-15 | 2001-06-05 | Somalogic, Inc. | Nucleic acid ligand diagnostic Biochip |
PL202358B1 (pl) * | 1999-11-17 | 2009-06-30 | Roche Diagnostics Gmbh | Sposób wytwarzania kompozycji magnetycznych cząstek szklanych, magnetyczne cząstki szklane, kompozycja magnetycznych cząstek szklanych, zawiesina z magnetycznymi cząstkami szklanymi, probówka z kompozycją lub zawiesiną magnetycznych cząstek szklanych, zestaw części z tą probówką, zastosowanie kompozycji, zawiesiny i zestawu zawierających magnetyczne cząstki szklane, sposób izolowania materiału biologicznego |
US7601497B2 (en) * | 2000-06-15 | 2009-10-13 | Qiagen Gaithersburg, Inc. | Detection of nucleic acids by target-specific hybrid capture method |
RU2361193C2 (ru) * | 2004-05-19 | 2009-07-10 | Вп Холдинг, Ллс | Оптический датчик с многослойной плазмонной структурой для усовершенствованного обнаружения химических групп посредством sers |
US7699979B2 (en) * | 2005-01-07 | 2010-04-20 | Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Separation system and efficient capture of contaminants using magnetic nanoparticles |
US7285835B2 (en) * | 2005-02-24 | 2007-10-23 | Freescale Semiconductor, Inc. | Low power magnetoelectronic device structures utilizing enhanced permeability materials |
EP1918372A4 (en) * | 2005-07-05 | 2009-08-12 | Ribomic Inc | NUCLEIC ACID CAPABLE OF BINDING TO IMMUNOGLOBULIN G AND USE THEREOF |
US7855054B2 (en) * | 2007-01-16 | 2010-12-21 | Somalogic, Inc. | Multiplexed analyses of test samples |
US7964356B2 (en) | 2007-01-16 | 2011-06-21 | Somalogic, Inc. | Method for generating aptamers with improved off-rates |
US7947447B2 (en) * | 2007-01-16 | 2011-05-24 | Somalogic, Inc. | Method for generating aptamers with improved off-rates |
EP2336314A1 (en) * | 2007-07-17 | 2011-06-22 | Somalogic, Inc. | Improved selex and photoselex |
US8291501B2 (en) * | 2008-02-08 | 2012-10-16 | Cheng Holdings, Llc | Validation of protected intra-system interconnects for digital rights management in electrical computers and digital data processing systems |
US20110120487A1 (en) * | 2008-05-30 | 2011-05-26 | L'oreal | Hair treatment methods and kits |
US9089152B2 (en) * | 2009-04-13 | 2015-07-28 | TEAGASC—Agriculture and Food Development Authority | Method of producing microbeads |
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Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004009798A2 (en) * | 2002-07-24 | 2004-01-29 | Ciphergen Biosystems, Inc. | Protein interaction difference mapping |
JP2009523430A (ja) * | 2006-01-17 | 2009-06-25 | ソマロジック・インコーポレーテッド | 試験試料の多重化分析 |
WO2010008001A1 (ja) * | 2008-07-14 | 2010-01-21 | 国立大学法人 東京大学 | Il-17に対するアプタマー及びその使用 |
Non-Patent Citations (1)
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LARRY GOLD ET AL.: "Aptamer-Based Multiplexed Proteomic Technology for Biomarker Discovery", PLOS ONE, vol. 5, no. 12, JPN6017008543, 7 December 2010 (2010-12-07), pages 15004, ISSN: 0003517884 * |
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