JP2015520182A - アミノ酸置換を有するヒト化抗TrkA抗体 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2012年6月8日に出願された米国仮出願第61/657,184号(この全ては本明細書に参照によりそれらの全体が組み込まれている)の利益を主張する。
a)配列番号1〜5からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメイン、および
b)配列番号6〜13からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含むヒト化抗TrkA抗体またはその断片であって、重鎖可変ドメインのCDR2が、少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、かつ/または重鎖可変ドメインの非CDR領域が、37、42、および89からなる群から選択されるアミノ酸位置にアミノ酸置換を含み、各群のメンバーのアミノ酸位置が、Kabatに記載される番号付けシステムを利用して示されるヒト化抗TrkA抗体またはその断片を提供する。
第1の態様では、本発明は、
a)配列番号1〜5からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメイン、および
b)配列番号6〜13からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含むヒト化抗TrkA抗体またはその断片であって、重鎖可変ドメインのCDR2が、少なくとも1個のアミノ酸置換を含み、かつ/または重鎖可変ドメインの非CDR領域が、37、42、および89からなる群から選択されるアミノ酸位置にアミノ酸置換を含み、各群のメンバーのアミノ酸位置が、Kabatに記載される番号付けシステムを利用して示されるヒト化抗TrkA抗体またはその断片を提供する。
a)配列番号31〜49からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメイン、および
b)配列番号6〜13からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含むヒト化抗TrkA抗体またはその断片を提供する。
a)配列番号32、36、39、43、48、および49からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメイン、ならびに
b)配列番号6〜13からなる群から選択される、または配列番号6および8からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む。
a)配列番号32、36、48、および49からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメイン、ならびに
b)配列番号6または配列番号8の配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む。
a)配列番号32および36からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメイン、ならびに
b)配列番号6の配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む。
a)配列番号36の配列を含む重鎖可変ドメイン、および
b)配列番号6の配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む。
a)配列番号50〜70からなる群から選択される配列を含む重鎖、ならびに
b)配列番号29および30からなる群から選択される配列を含む軽鎖
を含むヒト化抗TrkA抗体またはその断片を提供する。
a)配列番号51、52、56、57、60、64、69、および70からなる群から選択される配列を含む重鎖、ならびに
b)配列番号29および30、好ましくは配列番号29からなる群から選択される配列を含む軽鎖
を含む。
a)配列番号51、52、56、57、69、および70からなる群から選択される配列を含む重鎖、ならびに
b)配列番号29および30、好ましくは配列番号29からなる群から選択される配列を含む軽鎖
を含む。
a)配列番号51、52、56、57、および70からなる群から選択される配列を含む重鎖、ならびに
b)配列番号29および30、好ましくは配列番号29からなる群から選択される配列を含む軽鎖
を含む。
a)配列番号51、52、56、および57からなる群から選択される配列を含む重鎖、ならびに
b)配列番号29および30、好ましくは配列番号29からなる群から選択される配列を含む軽鎖
を含む。
a)配列番号57の配列を含む重鎖、および
b)配列番号29の配列を含む軽鎖
を含む。
いくつかの実施形態では、ヒト化抗TrkA抗体またはその断片は、TrkAの機能的活性化を阻害する能力がある。
本開示は、また、抗TrkA抗体およびその断片をコードする単離核酸、ベクター、ならびに核酸またはベクターを含む宿主細胞を提供する。核酸は、細胞全体中に、細胞溶解物中に、または部分的に精製されたもしくは実質的に純粋な形態で存在し得る。核酸は、アルカリ/SDS処理、CsClバンド形成、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動、および当技術分野において周知のその他を含む標準技法によって他の細胞成分または他の混入物、例えば他の細胞性核酸またはタンパク質から精製されたときに、「単離」または「実質的に純粋に」されている。例えばAusubel Fら著(1987)Current Protocols in Molecular Biology、Greene PublishingおよびWiley Interscience、New Yorkを参照されたい。本発明の核酸は、例えばDNAまたはRNAの場合があり、イントロン配列を含んでも、または含まなくてもよい。好ましい実施形態では、核酸はcDNA分子である。
TrkAポリペプチドに対して作製された抗体は、周知で日常的なプロトコールを用いて、動物を免疫処置することによって、すなわち動物、好ましくは非ヒト動物にポリペプチドを投与することによって、得ることができる。例えば、Handbook of Experimental Immunology、Weir DM(著)、第4巻、Blackwell Scientific Publishers、Oxford、England(1986)を参照されたい。ウサギ、マウス、ラット、ヒツジ、ウシ、ラクダ、またはブタなどの多数の温血動物を免疫処置することができる。しかし、マウス、ウサギ、ブタ、およびラット、特にマウスが、一般に最も適切である。同様に抗体は、当業者に公知の組換えDNA技法によって産生することができる。加えて抗体は、天然抗体の酵素的または化学的切断によって産生することができる。本発明のヒト化抗体は、非ヒト動物(例えばマウス)由来のVHおよび/またはVL領域からヒトVHおよび/またはVL領域由来の1つまたは複数のフレームワーク領域に1つまたは複数のCDRまたはその部分を転移することによって構築することができる。好ましくは、本発明のヒト化抗体は、WO00/73344に開示のマウスMNAC13抗体由来のVHおよび/またはVL領域からヒトVHおよび/またはVL領域由来の1つまたは複数のフレームワーク領域に1つまたは複数のCDRまたはその部分を転移することによって構築される。場合によっては、必要なとき、または抗体の免疫原性を減少および/もしくは結合親和性を維持したいと望むとき、VHおよび/またはVL領域中に存在するヒトフレームワーク残基を対応する非ヒト(例えばマウス)残基によって置換することができる。場合により、CDRに存在する非ヒトアミノ酸残基を、ヒト残基と置換することができる。本発明のキメラ抗体またはヒト化抗体は、上記のように調製された非ヒトモノクローナル抗体の配列に基づき調製することができる。重鎖および軽鎖免疫グロブリンをコードするDNAを、関心がもたれる非ヒトハイブリドーマから得て、標準的な分子生物学的技法を用いて非マウス(例えばヒト)免疫グロブリン配列を含むように加工することができる。例えば、キメラ抗体を創出するために、当技術分野で公知の方法を用いて、マウス可変領域をヒト定常領域に連結することができる(例えばCabillyらの米国特許第4,816,567号参照)。ヒト化抗体を創出するために、当技術分野において公知の方法を用いて、マウスCDR領域をヒトフレームワークに挿入することができる(例えばWinterの米国特許第5,225,539号、ならびにQueenらの米国特許第5,530,101号;同第5,585,089号;同第5,693,762号、および同第6,180,370号参照)。
抗体のスクリーニングは、ヒトTrkAへの結合性を測定するアッセイおよび/またはTrkAからそのリガンドNGFへの結合を遮断する能力を測定するアッセイを用いて行うことができる。結合アッセイの一例はELISAである。加えて、例えば実施例で用いられる表面プラズモン共鳴(SPR)分析は、抗体の結合動態についての結合速度定数および解離速度定数を測定するために適用することができる。ブロッキングアッセイの一例は、TrkAへのNGF結合の遮断を測定するフローサイトメトリーに基づくアッセイである。抗TrkA抗体の機能的活性を評価するためのアッセイとして、例えば、抗体が細胞表面TrkA/β−NGF媒介性細胞増殖を遮断する能力が因子依存性ヒト赤白血病細胞系TF−1を使用してアッセイされるTF−1細胞増殖アッセイを用いることができる(Kitamura Tら、(1989)J.Cellular Physiology 140(2):323〜34)。
別の態様では、本発明は、ヒトTrkAに結合するTrkA抗体またはその断片が細胞毒、薬物(例えば免疫抑制剤)または放射性毒素などの治療剤に連結したものを提供する。そのような複合体は、本明細書において「イムノコンジュゲート」と呼ばれる。1種または複数の細胞毒を含むイムノコンジュゲートは、「免疫毒素」と呼ばれる。細胞毒または細胞毒性剤には、細胞に有害な(例えば死滅させる)任意の薬剤が含まれる。例には、タキソール、サイトカラシンB、グラミシジンD、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンD、1−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシンならびにそれらのアナログまたはホモログが含まれる。治療剤には、例えば代謝拮抗薬(例えばメトトレキサート、6−メルカプトプリン、6−チオグアニン、シタラビン、5−フルオロウラシルデカルバジン)、アルキル化剤(例えばメクロレタミン、チオテパ、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン(BSNU)およびロムスチン(CCNU)、シクロフォスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンC、ならびにシス−ジクロロジアミン白金(II)(DDP)シスプラチン)、アントラサイクリン(例えばダウノルビシン(旧名ダウノマイシン)およびドキソルビシン)、抗生物質(例えばダクチノマイシン(旧名アクチノマイシン)、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン(AMC))および有糸分裂阻害薬(例えばビンクリスチンおよびビンブラスチン)も含まれる。本発明の抗体と連結できる治療用細胞毒の他の例には、デュオカルマイシン、カリチアマイシン、マイタンシンおよびオーリスタチン、ならびにそれらの誘導体が含まれる。カリチアマイシン抗体複合体の一例は、市販されている(Mylotarg(商標);American Home Products)。細胞毒は、本発明の抗体と、当技術分野において利用可能なリンカー技法を用いて連結することができる。抗体に細胞毒をコンジュゲートするために用いられているリンカー型の例には、非限定的に、ヒドラゾン、チオエーテル、エステル、ジスルフィド、およびペプチド含有リンカーが含まれる。例えばリソソーム区画内の低pHによる切断に感受性またはカテプシン(例えばカテプシンB、C、D)などの、腫瘍組織において優先的に発現されるプロテアーゼなどのプロテアーゼによる切断に感受性であるリンカーを選択することができる。細胞毒の型、リンカーおよび抗体に治療剤をコンジュゲートする方法のさらなる論考については、Saito Gら、(2003)Adv.Drug Deliv.Rev.55:199〜215;Trail PAら、(2003)Cancer Immunol.Immunother.52:328〜337;Payne G(2003)Cancer Cell 3:207〜212;Allen TM(2002)Nat.Rev.Cancer 2:750〜763;Pastan IおよびKreitman RJ(2002)Curr.Opin.Investig.Drugs、3:1089〜1091;Senter PDおよびSpringer CJ(2001)Adv.Drug Deliv.Rev.53:247〜264も参照されたい。本発明の抗体は、放射性同位体に連結して、ラジオイムノコンジュゲートとも呼ばれる細胞傷害性放射性医薬品を作製することもできる。診断または治療的に用いるために抗体にコンジュゲートできる放射性同位体の例には、非限定的に、ヨウ素131、インジウム111、イットリウム90、およびルテニウム177が含まれる。ラジオイムノコンジュゲートを調製する方法は、当技術分野において確立されている。ラジオイムノコンジュゲートの例は、Zevalin(商標)(EDEC Pharmaceuticals)およびBexxar(商標)(Corixa Pharmaceuticals)を含めて市販されており、同様の方法を用いて、本発明の抗体を使用してラジオイムノコンジュゲートを調製することができる。本発明の抗体イムノコンジュゲートを用いて所定の生物学的応答を改変することができ、薬物部分は、古典的な化学的治療剤に限定して解釈されるべきでない。例えば、薬物部分は、所望の生物活性を有するタンパク質またはポリペプチドであり得る。そのようなタンパク質には、例えば、アブリン、リシンA、シュードモナス外毒素、もしくはジフテリア毒素などの酵素活性毒素またはその活性断片;腫瘍壊死因子もしくはインターフェロン−γなどのタンパク質;または例えばリンホカイン、インターロイキン−1(IL−1)、インターロイキン−2(IL−2)、インターロイキン−6(IL−6)、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM−CSF)、顆粒球コロニー刺激因子(G−CSF)、もしくは他の成長因子などの生物学的応答調節物質が含まれ得る。
別の態様では、本発明は、本発明の抗体またはその断片と薬学的に許容される担体とを含む組成物、例えば医薬組成物を提供する。そのような組成物は、1種もしくは組み合わせの(例えば2種以上の異なる)抗体、および/または本発明のイムノコンジュゲート、および/または上記のような細胞毒、薬物(例えば免疫抑制剤)もしくは放射性毒素などの治療剤を含み得る。例えば、本発明の医薬組成物は、標的抗原上の異なるエピトープに結合するか、または相補的な活性を有する抗体(またはイムノコンジュゲート)の組み合わせを含み得る。本発明の医薬組成物は、併用療法で投与することもでき、すなわち下記にさらに概要するように他の薬剤と組み合わせることができる。
本発明の抗体は、医学において、下記の様々な項目で述べられるように、様々な障害/状態を処置するために使用することができる。
炎症性疼痛、手術後疼痛、術後疼痛(歯痛を含む)、神経障害性疼痛、末梢神経障害、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症、骨折痛、痛風性関節痛、帯状疱疹後神経痛、癌性疼痛、変形性関節症性または関節リウマチ疼痛、坐骨神経痛、鎌状赤血球クリーゼ関連疼痛、頭痛(例えば片頭痛、緊張性頭痛、群発頭痛)、月経困難症、子宮内膜症、子宮筋腫、筋骨格痛、慢性腰痛、線維筋痛、捻挫、内臓痛(visceral pain)、卵巣嚢腫、前立腺炎、慢性骨盤痛症候群、膀胱炎、間質性膀胱炎、有痛性膀胱症候群および/または膀胱痛症候群、慢性無菌性前立腺炎関連痛、切開痛、片頭痛、三叉神経痛、熱傷および/または創傷からの疼痛、外傷に関連する疼痛、筋骨格疾患に関連する疼痛、強直性脊椎炎、関節周囲の病状、骨転移からの疼痛、HIVからの疼痛、皮膚紅痛症または膵炎もしくは腎結石によって起こる疼痛、悪性黒色腫、シェーグレン症候群、喘息(例えば重症気道反応亢進を有するコントロール不良の喘息)、難治性咳嗽、脱髄疾患、慢性アルコール依存症、脳卒中、視床痛症候群、毒素からの疼痛、化学療法からの疼痛、炎症性腸障害、過敏性腸症候群、炎症性眼障害、炎症性または不安定膀胱障害、乾癬、炎症成分による皮膚愁訴、日焼け、心臓炎、皮膚炎、筋炎、神経炎、膠原血管病、慢性炎症状態、炎症性疼痛ならびに関連する痛覚過敏および異痛、神経障害性疼痛および関連する痛覚過敏または異痛、糖尿病性神経障害痛、灼熱痛、交感神経依存性疼痛、求心路遮断症候群、上皮組織損傷または機能障害、呼吸器、尿生殖器、消化管、または血管領域での内臓運動障害、アレルギー性皮膚反応、掻痒症、白斑、汎胃腸障害(general gastrointestinal disorder)、大腸炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、血管運動性またはアレルギー性鼻炎、気管支障害、消化不良、胃食道逆流、膵炎、内臓痛(visceralgia)および線維性骨形成異常(FD)。
膵炎、腎結石、子宮内膜症、IBD、クローン病、術後癒着、胆嚢結石、頭痛、月経困難症、筋骨格痛、捻挫、内臓痛、卵巣嚢腫、前立腺炎、膀胱炎、間質性膀胱炎、術後疼痛、片頭痛、三叉神経痛、熱傷および/または創傷からの疼痛、外傷に関連する疼痛、神経障害性疼痛、筋骨格疾患に関連する疼痛、関節リウマチ、変形性関節症、強直性脊椎炎、関節周囲の病状、腫瘍性疼痛、骨転移からの疼痛、HIV感染。
本開示の別の実施形態では、製品は、1つまたは複数の上述の疾患/状態の処置のための、本発明の抗体もしくはその断片、組成物、またはイムノコンジュゲートを含む。製品は、容器、および容器上のまたは容器に関連するラベルまたは添付文書を含み得る。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、またはシリンジが含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの多様な材料から形成され得る。容器は、状態の処置に有効であり得る組成物を収容し、無菌アクセスポートを有し得る(例えば容器は、皮下注射針で刺通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであり得る)。組成物中の少なくとも1種の活性薬剤が、本明細書記載の抗体であり得る。ラベルまたは添付文書は、選択された状態の処置に組成物を使用できることを示している場合がある。
WO09/098238で開示された40種類の抗体のうち、5種類のヒト化抗体を操作するための投入抗体として選択した:重鎖可変ドメインVH1(配列番号1)および軽鎖可変ドメインVL1(配列番号6)を有するBXhVHIVL1、重鎖可変ドメインVH3(配列番号3)および軽鎖可変ドメインVL1を有するBXhVH3VL1、重鎖可変ドメインVH3および軽鎖可変ドメインVL3(配列番号8)を有するBXhVH3VL3、重鎖可変ドメインVH5(配列番号5)および軽鎖可変ドメインVL1を有するBXhVH5VL1ならびに重鎖可変ドメインVH5および軽鎖可変ドメインVL1を有するBXhVH5VL3。本明細書で使用したMNAC13マウス抗体は、配列番号20の重鎖可変ドメインMNAC13VH、配列番号21の重鎖および配列番号22の軽鎖を有する。
操作したバリアントの設計
可変ドメインのVH5−VL1の組み合わせの3Dモデルは、構造相同性モデリングサーバーSWISS−MODEL(Arnold Kら、(2006)Bioinformatics 22(2):195〜201;http://swissmodel.expasy.org)の自動モードに設定して計算した。検索されたモデル型は、実験的に解明されたMNAC13 FAB 3D構造(PDBコード1SEQ、www.pdb.org,Berman HMら(2000)Nucleic Acids Res.28(1):235〜42、Covaceuszach Sら、(2005)Proteins 58(3):717〜27)であった。MNAC13VH、VH1、VH3、VH5および生殖系列VH3−023*01(配列番号23)ドメインの配列アラインメントは、3、5、19、37、40、42、44、49、50、52A、53、60、62、74、82A、83、84、89および94位(Kabat番号付け)の位置において異なるアミノ酸含量を示した。モデル分析によって、CDR領域および/または重鎖−軽鎖可変ドメイン充填に対して予測される影響に基づいた位置のサブセットの選択が可能となった。この位置のサブセットは、3、37、40、42、44、49、50、60、62、89および94(Kabat番号付け)から構成された。したがって、遺伝子操作した抗体は、前述の位置のサブセットから選択された前述の可変ドメイン配列(それぞれ配列番号1、3、5を有するVH1、VH3およびVH5)に1個または複数の位置の置換を包含する重鎖可変ドメインを有した。より具体的には、操作した抗体は、既に記載した2つの軽鎖可変ドメインVL1またはVL3(配列番号6および8)の1つと組み合わせた前述のような置換された重鎖可変ドメインから構成された。
操作された重鎖可変ドメインをコードするDNA配列(cDNA)は、WO09/098238で記載されたBXhVH1、BXhVH3およびBXhVH5のベクターDNAをPCR鋳型として使用して、標準的突然変異誘発技法によって作出した。同様に、軽鎖可変ドメインcDNAは、WO09/098238で記載されたBXhVL1およびBXhVL3のベクターDNAから直接増幅した。可変ドメインcDNAは、PCRアセンブリ技術を用いて、それらのそれぞれの定常ドメインcDNA配列(複数可)の上流でさらに組み立てた。最後に、完全重鎖および軽鎖cDNAを、CMVプロモーターおよびウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナルを有する改変pcDNA3.1ベクター(Invitrogen、CA、USA)をベースにした独立ベクターにライゲーションした。軽鎖特異的ベクターは、BamHIおよびBsiWI制限酵素部位を用いて、カッパ軽鎖定常ドメインcDNAの前に対象の軽鎖可変ドメインcDNAを連結することによって、カッパアイソタイプ軽鎖の発現を可能にしたが、重鎖特異的ベクターは、BamHIおよびSaiI制限酵素部位を用いて、IGHG1 CH1、IGHG1ヒンジ領域、IGHG1 CH2およびIGHG1 CH3定常ドメインをコードするcDNA配列の前に対象の重鎖可変ドメインcDNAをライゲーションすることを可能にするように操作された。重鎖及び軽鎖両方の発現ベクターにおいて、分泌は、BamHI部位を含有するマウスVJ2Cリーダーペプチドにより、駆動した。BsiWI制限酵素部位は、カッパ定常ドメイン中にあり、SaiI制限酵素部位は、IGHG1 CH1ドメイン中で見いだされる。
抗体を一過的に発現するために、懸濁に適応したHEK293−EBNA1細胞(ATCC(登録商標)カタログ番号:CRL−10852)にポリエチレンイミン(jetPEI(登録商標)、Polyplus transfection、Illkirch Cedex、France)を用いて、等量の重鎖および軽鎖ベクターを同時にトランスフェクトした。通常、1ml当たり8〜120万個の細胞密度で懸濁した細胞100mlを、重鎖をコードする発現ベクター50μgおよび軽鎖をコードする発現ベクター50μgを含有するDNA−jetPEI(登録商標)混合物でトランスフェクトする。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターを宿主細胞に導入する場合、抗体は、細胞をさらに4から5日間培養して、0.1%プルロニック酸、グルタミン4mMおよびジェネテシン0.25μg/mlを補給した培地(EX−CELL293、HEK293無血清培地:Sigma、Buchs、Switzerland)へ分泌させて産生する。
熱量測定を、VP−DSC示差走査熱量計(GE Healthcare Europe GmbH、Glattbrugg, Switzerland)で行った。セル容量は0.128mlであり、加熱速度は200℃/hであり、過圧は65p.s.i.に維持した。全ての抗体を、PBS(pH7.4)中で1mg/mlの濃度にて用いた。各タンパク質のモル熱容量は、タンパク質を除いた同一の緩衝液を含有する2連の試料との比較により見積もった。部分モル熱容量および融解曲線を、標準的方法を用いて分析した。サーモグラムをベースライン補正し、濃度で標準化した後に、Originソフトウェア(v7.0,GE Healthcare Europe GmbH、Glattbrugg、Switzerland)で非2状態モデル(Non−Two State model)を用いてさらに分析した。
SPR分析を用いて、様々な抗体(マウスおよびヒト化抗体)の結合動態の結合および解離速度定数を測定した。マウス抗体およびヒト化バリアントの結合動態は、BIACORE2000装置(GE Healthcare Europe GmbH、Glattbrugg、Switzerland)で室温で測定し、BiaEvaluationソフトウェア(v4.1、GE Healthcare Europe GmbH、Glattbrugg、Switzerland)で分析した。
懸濁に適応したTF−1細胞(ATCC(登録商標)番号:CRL−2003)は、10% FCSおよびrhuβNGF(組換えヒトベータ−NGF、R&D Systems Europe Ltd、Abingdon、UK)5ng/mlを含有する完全RPMI培地で成長させた。アッセイのために、TF−1細胞はヒトベータNGFを含まない完全RPMI中で5時間インキュベートした。この飢餓段階の後、細胞を遠心分離し、様々な濃度の各抗体および固定濃度の組換えベータNGFを含む平底96ウェルプレートに播種した。TF−1細胞を7000細胞/ウェルの密度で播種し、抗体−細胞混合物の全体積は200μlで、ヒトベータNGFは5ng/ml(最終濃度)であった。この混合物を、CO2を補給して37℃で4日間インキュベートした。3日目に、インキュベーション条件にはいかなる変更も行わずに、比色定量用色素アラマーブルー(AbD Serotec、Morphosys AbD GmbH、Dusseldorf、Germany)を各ウェルに添加した。4日目に、蛍光をBio−Tek Synergy(商標)2分光光度計/マイクロプレートリーダー(BioTek Instruments GmbH、Luzern、Switzerland)で、励起波長530から560nm、発光波長590nmで読み取った。実験は、少なくとも2回実施し、各抗体濃度の測定は3連で行った。
BXhVH5VL1をベースにした新規ヒト化抗TrkA抗体のエンジニアリング
可変ドメインのVH5−VL1の組み合わせの3Dモデルをベースにして、様々な重鎖可変ドメイン(VH1、VH3およびVH5)内の共通の3D位置のサブセットをマウスからヒトならびにヒトからマウスへの突然変異のために選択した;この群は3、37、40、42、44、49、50、60、62、89および94(Kabat番号付け)の位置から構成された。本明細書で使用した置換の組み合わせに関する操作戦略は、CDR領域および/または可変ドメイン充填および/または免疫原性に対して推定される影響に関する様々な置換の相補性に基づいている。
第2のアプローチでは、V37A置換をWO09/098238から得られた他の選択候補に導入し、操作された抗TrkA抗体の親和性をBXhVH5VL1およびMNAC13抗体に対してSPRによって評価した。表3および4はそれぞれ、V37Aを置換した抗体の生成収率および親和性を示す。操作した抗体は生成収率が異なるが、操作した抗体は全て、V37A置換を導入することによって親和性の増強を示した。親和性は、BXhVH3VL1では8%、BXhVHIVL1では20%、BXhVH3VL3では30%、およびBXhVH5VL3では55%改善した。したがって、ヒトからマウスへの置換V37Aは、BXhVH5VL1に導入した場合、親和性の増加を引き起こすだけではなく、最も驚くべきことに、全ヒト化バリアントに対する親和性の増加を引き起こした。特に、GBR VH5(V37A)VL1またはGBR VH5(K3Q、V37A)VL1はいずれも、IGHG1またはIGHG4 S228Pアイソタイプとして、MNAC13マウス抗体で測定された親和性に匹敵する親和性を示し(表2および4)、いずれも、BXhVH5VL1抗体と比較した場合、少なくとも2倍増加した(KDはそれぞれ、2.5から2.7倍に減少した)。
操作された抗TrkA抗体が、TF−1細胞増殖アッセイにおいて、TrkAの機能的活性化を阻害する能力をアッセイした(図3)。生物学的機能を阻害する化合物の有効性の基準である最大半量阻害濃度(IC50)を各曲線について計算し、結果を表5に挙げる。GBR VH1(V37A)VL1は、SRPによる親和性が低いため、アッセイしなかったことに注意されたい。
完全フロイントアジュバント(CFA)をマウスの後足に足蹠注射することによって、荷重法を用いて評価することができる急性炎症性痛覚過敏を引き起こす。ナイーブマウスは通常、体重を2本の後足に等分に分配する。しかし、CFAを注射した後足が炎症を起こして痛みがある場合、注射した足(同側)にかかる体重を少なくし、注射していない(反対側)の後足にかかる体重を増加させるように体重は再配分される。
各後肢にかかる荷重の測定は、インキャパシタンステスターを用いて測定した(Linton Instruments、UK)。マウスを両足圧力差痛覚測定機に置いて、後足を別々のセンサの上に載せ、両後肢によって生じる平均力を2秒間記録した。ナイーブAMB1マウスは、ホームケージの処置室に馴化させ、食べ物および水は自由に取らせた。AMB1マウスは、マウスTrkAのエキソン1をヒトTrkAのエキソン1と置き換えることによって作製したもので、それ自体はもっぱらヒトTrkAタンパク質のみを発現する。両足圧力差痛覚測定機への慣化は、数日間かけて行った。基準となる荷重は、傷害を誘導する前に記録した。炎症性痛覚過敏は、CFA(1.5mg/ml溶液20μl)を左後足に足蹠注射することによって誘導した。処置前の荷重は、CFAの23時間後の痛覚過敏を評価するために読み取った。次に、動物は、ラテン方格法のCFAウインドウにしたがって順位付けし、無作為化した。CFAの24時間後、動物をアイソタイプ対照0.1mg/kg i.p.または抗体GBR VH5(K3Q、V37A)VL1 IGHG4 S228P、0.0001、0.001、0.01および0.1mg/kg、i.p.(10ml/kg用量体積)の単回i.p.注射で処置した。非選択的NSAIDインドメタシンを陽性対照として10mg/kg p.o.(5ml/kg用量体積)で使用した。荷重は、抗体/薬物処理の4、8、24、48、72、96および120時間後に読み取った。
CFAの足蹠注射によって、CFAの23時間後に、同側から反対側後足へ荷重がシフトし、%同側/反対側比の下降が生じることによって検出されたように、著しい痛覚過敏が誘導された(図4)。CFAの24時間後に開始したアイソタイプ対照による処置では、痛覚過敏に対する影響は示されなかった。痛覚過敏の著しい回復は、アイソタイプ対照と比較した場合、投与の4〜48時間後に抗体GBR VH5(K3Q,V37A)VL1 IGHG4 S228Pの0.01および0.1mg/kgで観察された。抗体GBR VH5(K3Q、V37A)VL1 IGHG4 S228Pの0.001mg/kg以下の用量は、痛覚過敏を回復させるのに効果がなかった。インドメタシン(10mg/kg)は、試験した時点全てにおいて痛覚過敏の有意な回復を示した。結論として、抗体GBR VH5(K3Q、V37A)VL1 IGHG4 S228Pは、インドメタシンと類似の足の急性炎症性痛覚過敏の有意な回復をもたらした。さらに、投与したGBR VH5(K3Q、V37A)VL1 IGHG4 S228Pの有効用量(0.01および0.1mg/kg)は、インドメタシンの有効用量(10mg/kg)よりも何倍も少なく、抗TrkA抗体がこの症状に対する標準的治療よりもはるかに低い用量で投与できることを示している。
CFAをマウスの後肢膝関節の1つに関節内注射することによって、荷重法を用いて評価することができる慢性炎症性痛覚過敏が誘導する。CFAを注射した関節が炎症を起こして痛みがある場合、注射した(同側)関節の脚にかかる重量を少なくし、注射していない(反対側)関節の脚にかかる重量を増加させるように重量は再配分される。この動物モデルにおけるこれらの徴候の発症は、変形関節炎および関節リウマチなどの基礎症状に関連した慢性炎症性関節痛を呈する患者が示す症状を反映しているので、臨床的に関連があると考えられている。
ナイーブAMB1マウスは、ホームケージの処置室に馴化させ、食べ物および水は自由に取らせた。AMB1マウスは、マウスTrkAのエキソン1をヒトTrkAのエキソン1と置き換えることによって作製したもので、それ自体はもっぱらヒトTrkAタンパク質のみを発現する。両足圧力差痛覚測定機への慣化を行った。基準となる荷重は、CFA注射直前に読み取った。動物は、滅菌状態で3:1に混合したイソフルランおよび酸素を用いて麻酔した。膝領域を剪毛し、希釈したヒビスクラブ溶液で清潔にした。左膝に10mg/mlCFAを10μl注射した。動物は、ホームケージに戻す前に暖かい環境で回復させた。CFAの4、7および10日後に、荷重法を用いて動物の炎症性痛覚過敏の発症を評価した。CFAの10日後の測定に基づいて、動物を順位付けし、CFAウインドウにしたがって処置群に無作為化した。CFAの13日後に、痛覚過敏が十分に確立されたら、動物は、アイソタイプ対照抗体10mg/kg i.p.または抗体GBR VH5(K3Q、V37A)VL1 IGHG4 S228P、0.01、1および10mg/kg i.p.のいずれかの単回注射で処置した。COX−2選択的NSAIDセレコキシブを陽性対照として60mg/kg p.o.で1日2回使用した。抗体処置群では、荷重は投与して4、8、24および96時間後に測定した。セレコキシブ処置群では、荷重はCFAの13日後の投与の1および8時間後、次いでCFAの14〜17日後の投与の1時間後に測定した。行動評価はブラインドで行った。荷重(g)は、同側および反対側後肢の両方で読み取り、%荷重差(%同側/反対側)として表した。データは、各時点で処理群をアイソタイプ対照群と比較することによって分析した。統計学的分析は、反復測定ANOVA、次いでInVivoStatを使用した計画的比較試験として行った(p<0.05は有意と見なした)。
CFAの膝関節への注射によって、同側から反対側後肢へ荷重がシフトし、%同側/反対側比の下降が生じることによって検出されたように、3日目以降から著しくて長期継続する痛覚過敏が引き起こされた(図5)。アイソタイプ対照抗体処置は、痛覚過敏に対する影響を有さなかった。治療経過中、投与して1時間後ではセレコキシブ(60mg/kg)による痛覚過敏の有意な回復が見られた。痛覚過敏の有意な回復は、投与の4〜72時間後に抗体GBR VH5(K3Q,V37A)VL1 IGHG4 S228Pの0.01、1および10mg/kgの単回注射で観察され、アイソタイプ対照と比較したとき、最も高い2用量のみが96時間後に有意であった。結論として、抗体GBR VH5(K3Q、V37A)VL1 IGHG4 S228Pの0.01mg/kg以上の単回投与は、セレコキシブの複数回投与と類似の、膝関節の慢性炎症性痛覚過敏の有意で、持続した回復をもたらした。さらに、セレコキシブ60mg/kgの複数回投与に相当する効果を実現するために必要なのは、抗体GBR VH5(K3Q、V37A)VL1 IGHG4 S228Pの0.01mg/kgの単回投与のみであり、抗体GBR VH5(K3Q、V37A)VL1 IGHG4 S228Pは、現在の標準的治療法であるNSAIDセレコキシブよりもずっと低い用量、少ない頻度で与えることができることを示している。
ヨード酢酸1ナトリウム(MIA)をマウス膝関節に間接内注射することによって、軟骨分解を伴った局所関節炎に付随する慢性痛覚過敏の発症を引き起こした。このように、MIAモデルで測定された痛覚過敏は、骨関節炎関連疼痛によく似ている。さらに、軟骨分解は、神経障害に類似した特性の慢性神経障害を招く。抗痙攣薬であるプレガバリンは、神経因性疼痛の治療に推奨される第1選択の薬物であるので、本明細書ではプレガバリンを比較化合物として使用する。弱いμオピオイド受容体アゴニストであるトラマドールは、NSAIDとは対照的に、消化管出血または腎臓の問題を生じず、関節軟骨にも影響を及ぼさないので、OAの治療にますます使用されている。このため、トラマドールは、プレガバリンと並んで抗体GBR VH5(K3Q、V37A)VL1 IGHG4 S228Pの比較物として使用した。
ナイーブAMB1マウスは、ホームケージの処置室に馴化させ、食べ物および水は自由に取らせた。AMB1マウスは、マウスTrkAのエキソン1をヒトTrkAのエキソン1と置換することによって作製し、それ自体はもっぱらヒトTrkAタンパク質のみを発現する。両足圧力差痛覚測定機への慣化は、数日間かけて行った。基準となる荷重を読み取って測定した。動物は、滅菌状態で3:1に混合したイソフルランおよび酸素を用いて麻酔した。膝領域を剪毛し、希釈したヒビスクラブ溶液で清潔にした。MIA 100mg/mlの5μl(500μg)または生理食塩水(疑似処置)を左後肢の膝関節に注射した。動物は、ホームケージに戻す前に暖かい環境で回復させた。MIAの3〜23日後に、膝関節痛覚過敏の発症のために荷重を用いて、定期的な間隔で動物を評価した。MIAの14日後に、荷重測定を行い、動物はMIA応答ウインドウにしたがって順位付けし、処置群に無作為化して、次いで抗体GBR VH5(K3Q、V37A)VL1 IGHG4 S228Pの1、10、100μg/kgまたはアイソタイプ対照抗体100μg/kgの単回i.p.注射(5ml/kg用量体積)で処置した。比較対照として、動物をMIAの14日後にトラマドール10mg/kgまたはプレガバリン30mg/kg p.o.(5ml/kg用量体積)、次いで、MIAの16〜22日後に1日おきにトラマドール30mg/kgまたはプレガバリン100mg/kg(5ml/kg用量体積)で処置した。動物は全て、MIAの14日後の投与の4、8および24時間後に、次いで、抗体処置群では24時間毎、トラマドールおよびプレガバリン処置群では投与の1および24時間後に荷重を用いて評価した。行動評価はブラインドで行った。荷重(g)は、同側および反対側後肢の両方で読み取り、%荷重差(%同側/反対側)として表した。データは、各時点において(MIAの3〜14日後)、痛覚過敏に対するMIAの効果を、処置群と疑似処置群とを比較することによって分析した。投与後のデータは、各時点で処置群をアイソタイプ対照群と比較することによって分析した。統計学的分析は、反復測定ANOVA、次いでInVivoStatを使用した計画的比較試験によって行った(p<0.05は有意と見なした)。
MIA500μgを膝関節に注射することによって、同側から反対側後肢へ荷重がシフトし、%同側/反対側比の下降が生じることによって検出されたように、3日目以降から著しい痛覚過敏が引き起こされた。痛覚過敏の有意な回復は、各時点でアイソタイプ対照と比較した場合、投与して4時間〜7日後の抗体GBR VH5(K3Q、V37A)VL1 IGHG4 S228P、10および100μg/kgの単回注射によって見られた(図6A)。抗体GBR VH5(K3Q、V37A)VL1 IGHG4 S228Pは、1μg/kgでは痛覚過敏に対して効果がなかった。トラマドール(10mg/kg)およびプレガバリン(30mg/kg)は、MIAの14日後の投与の1時間後では効果がなかったが、投与の4時間後で痛覚過敏の有意な回復を示した(図6B)。MIAの14日後の投与の1時間後では効果がないので、トラマドールを30mg/kgに増加させ、プレガバリンを100mg/kgに増加させると、いずれもMIAの16、18および20日後の投与の1時間後で痛覚過敏の有意な回復を示した。結論として、抗体GBR VH5(K3Q、V37A)VL1 IGHG4 S228Pの10μg/kg以上の単回投与は、トラマドールおよびプレガバリンの複数回投与と類似の膝関節の慢性骨関節炎性痛覚過敏の有意で、持続した回復をもたらした。さらに、より高い用量(それぞれ30mg/kgおよび100mg/kg)で使用した2種類の薬物、トラマドールおよびプレガバリンの複数回投与に相当する効果を実現するために必要なのは、抗体GBR VH5(K3Q、V37A)VL1 IGHG4 S228P 10μg/kgの単回投与のみであった。したがって、抗TrkA抗体はプレガバリンおよびトラマドールよりもずっと低い用量、少ない投与頻度で投与することができる。
末梢神経因性疼痛は、末梢神経系の損傷、機能障害または疾患から生じる慢性形態の疼痛である。通常、痛覚過敏(疼痛刺激に対する強い応答)ならびにアロディニア(無痛刺激に対する疼痛応答)が含まれる。神経因性疼痛は、末梢神経の実験的損傷によって動物に誘導することができ、これは通常、坐骨神経を軽い結紮による慢性狭窄損傷(CCI)によって実現される(Bennett & Xie(1998)Pain、33:87〜107)。プレガバリンは、神経因性疼痛の治療に推奨される第1選択の薬物であるので、本明細書ではプレガバリンを比較化合物として使用する。
CCI手術は、雌雄AMB1マウスにケタミンキシラジン(100および10mg/kg/10ml、i.p.)麻酔下で行った。AMB1マウスは、マウスTrkAのエキソン1をヒトTrkAのエキソン1と置き換えることによって作製し、それ自体はもっぱらヒトTrkAタンパク質のみを発現する。毛をクリップで挟んだ後、麻酔して左坐骨神経を中大腿部まで露出させた。坐骨神経の周りを神経分岐前1〜2mmで軽く3本(4−0黒い絹糸を用いて)で結紮した。手術部位は、皮膚縫合後、ベタディン溶液で処置した。動物は翌7日間、回復させた。実験1日前に、動物を測定装置(冷たいプレート)に馴化させ、投与前の足の逃避行動閾値を記録した(0時間)。次に、動物を6つの群に再度群分けした。翌日、動物をアイソタイプ対照抗体(1000μg/kg/10ml)または様々な用量の抗体GBR VH5(K3Q、V37A)VL1 IGHG4 S228P(10、100&1000μg/kg/10ml)の単回i.p.注射で処置した。プレガバリン(30mg/kg/10ml、p.o.)、または生理食塩水は、投与期間後7日間にわたって1日1回投与した。投与後の読出しは、4時間後、24時間後に記録し、その後投与して7日後までは1日おきに記録した。投与後の読出しは、プレガバリンまたは生理食塩水を投与して1時間後に毎日記録した。投与後の読出しは、まず物理的痛覚過敏を記録し、5分後に冷却によるアロディニアを記録した。物理的痛覚過敏は、ダイナミックプランター触覚測定機(Plantar Von Frey instrument;Ugo Basile Sri、Italy)を用いて、足の逃避行動を惹起するために必要な力の閾値(g)として測定した。冷却によるアロディニアは、冷たいプレートから足を逃避させるまでの秒による時間として測定した(IITC Life Science Inc.、USA)。
CCI手術の7日後に、足の逃避行動閾値の鋭い低下および足の逃避行動反応時間それぞれによってわかるように、マウスは著しい物理的痛覚過敏(図7A)および冷却によるアロディニア(図7B)を示した。抗体GBR VH5(K3Q、V37A)VL1 IGHG4 S228Pの全用量で、足の逃避行動閾値の上昇(図7A)にみられるような物理的痛覚過敏および足の逃避行動反応の増加に見られるような冷却によるアロディニア(図7B)の回復がもたらされた。この回復の程度および持続期間は、明らかに用量依存的で、いずれの読出しも最高用量1mg/kg(1000μg/kg)のプレガバリンに相当した。抗体GBR VH5(K3Q、V37A)VL1 IGHG4 S228Pのこの用量1mg/kgは、単回投与として投与する場合、プレガバリン30mg/kgの複数回投与と比較して有効で、標準的治療のプレガバリンと比較して抗TrkA抗体に、より低用量で、より投与頻度が少なく投与することができることを再度示した。
Claims (56)
- a)配列番号1〜5からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメイン、および
b)配列番号6〜13からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含むヒト化抗TrkA抗体またはその断片であって、
重鎖可変ドメインのCDR2が、少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、かつ/または重鎖可変ドメインの非CDR領域が、37、42、および89からなる群から選択されるアミノ酸位置にアミノ酸置換を含み、各群のメンバーのアミノ酸位置が、Kabatに記載される番号付けシステムを利用して示される、ヒト化抗TrkA抗体またはその断片。 - 重鎖可変ドメインのCDR2が、配列番号15の配列を含む、請求項1に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- 重鎖可変ドメインが、配列番号1、3および5からなる群から選択される配列を含み、軽鎖可変ドメインが、配列番号6および8からなる群から選択される配列を含む、請求項1に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- 抗体が、配列番号1および配列番号6、配列番号3および配列番号6、配列番号3および配列番号8、配列番号5および配列番号6、ならびに配列番号5および配列番号8からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインの組み合わせを含む、請求項1に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- 抗体が、配列番号5および配列番号6の配列を含む、または配列番号5および配列番号8の配列を含む重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインの組み合わせを含む、請求項1に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- 抗体が、配列番号5および配列番号6の配列を含む重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインの組み合わせを含む、請求項1に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- 重鎖可変ドメインのCDR2のアミノ酸置換が、50、60および62からなる群から選択されるアミノ酸位置にアミノ酸置換を含み、各群のメンバーのアミノ酸位置が、Kabatに記載される番号付けシステムを利用して示される、請求項1に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- 重鎖可変ドメインのCDR2のアミノ酸置換が、Y50A、P60A、およびT62Sからなる群から選択されるアミノ酸置換を含まず、各群のメンバーのアミノ酸位置が、Kabatに記載される番号付けシステムを利用して示される、請求項1に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- 重鎖可変ドメインまたはその断片の非CDR領域のアミノ酸置換が、V37A、G42E、およびV89Lからなる群から選択されるアミノ酸置換を含み、各群のメンバーのアミノ酸位置が、Kabatに記載される番号付けシステムを利用して示される、請求項1に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- 重鎖可変ドメインまたはその断片の非CDR領域のアミノ酸置換が、V37Aを含み、アミノ酸位置が、Kabatに記載される番号付けシステムを利用して示される、請求項1に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- 抗体が、配列番号3および配列番号6の配列の配列を含む、または配列番号3および配列番号8の配列を含む重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインの組み合わせを含み、重鎖可変ドメインの非CDR領域のアミノ酸置換が、V37A、T40A、G42E、R44G、A49S、およびV89Lからなる群から選択されるアミノ酸置換を含み、各群のメンバーのアミノ酸位置が、Kabatに記載される番号付けシステムを利用して示される、請求項1に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- 重鎖可変ドメインの非CDR領域のアミノ酸置換が、K3Q、V37A、G42E、A49S、V89L、およびR94Kからなる群から選択されるアミノ酸置換を含み、各群のメンバーのアミノ酸位置が、Kabatに記載される番号付けシステムを利用して示される、請求項6に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- 重鎖可変ドメインの非CDR領域のアミノ酸置換が、アミノ酸置換K3QおよびV37Aを含み、アミノ酸位置が、Kabatに記載される番号付けシステムを利用して示される、請求項6に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- 重鎖可変ドメインの非CDR領域のアミノ酸置換が、アミノ酸置換V37Aを含み、アミノ酸位置が、Kabatに記載される番号付けシステムを利用して示される、請求項6に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- a)配列番号31〜49からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメイン、および
b)配列番号6〜13からなる群から選択される配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、ヒト化抗TrkA抗体またはその断片。 - 抗体が、
a)配列番号32および36からなる群から選択される配列を含む重鎖可変ドメイン、ならびに
b)配列番号6の配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項15に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。 - 重鎖および/または軽鎖定常領域をさらに含む、請求項1から16のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- 重鎖および/または軽鎖定常領域ならびにヒンジ領域をさらに含み、重鎖定常領域およびヒンジ領域がヒトIGHG1アイソタイプまたはヒトIGHG4アイソタイプである、請求項1から16のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- 重鎖および/または軽鎖定常領域ならびにヒンジ領域をさらに含み、重鎖定常領域およびヒンジ領域が、ヒトIGHG4アイソタイプであり、ヒンジ領域が、アミノ酸置換S228Pを含み、アミノ酸位置が、EU番号付けシステムを利用して示される、請求項1から16のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- a)配列番号50〜70からなる群から選択される配列を含む重鎖、ならびに
b)配列番号29および30からなる群から選択される配列を含む軽鎖
を含む、ヒト化抗TrkA抗体またはその断片。 - 抗体が、全長抗体である、請求項1から20のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- 抗体が、Fab、Fab'、Fab'−SH、Fd、Fv、dAb、F(ab')2、scFv、2重特異性単鎖Fv二量体、ダイアボディ、トリアボディおよび同じまたは異なる抗体と遺伝子的に融合したscFvからなる群から選択される抗体断片である、請求項1から16のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- 抗体が、親抗体のFc領域と比べて少なくとも1つのアミノ酸改変を含むバリアントFc領域を含み、一方でバリアントFc領域を含む抗体が、親抗体と比較して変化したエフェクター機能を示す、請求項1から21のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- TrkAの機能的活性化を阻害する能力がある、請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- TrkAの1つまたは複数の生物活性を遮断または低減する能力がある、請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- 500nM以下の親和性(KD)でヒトTrkAに結合する、請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- TF−1細胞増殖アッセイにおいて少なくとも対応する親のマウス抗体以下のIC50を有する、請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- ヒト化抗TrkA抗体が、65℃よりも高いFAB断片熱安定性温度を有する、請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- ヒト化抗TrkA抗体のFAB断片熱安定性温度が、親のマウス抗体のFAB断片熱安定性温度と同等である、請求項28に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- 請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片をコードする単離核酸。
- 配列番号73〜116からなる群から選択される核酸配列を含む、請求項30に記載の単離核酸。
- 請求項30または31に記載の単離核酸を含むベクター。
- 請求項30または31に記載の単離核酸または請求項32に記載のベクターを含む宿主細胞。
- 核酸が発現され、抗体が産生されるように、請求項33に記載の宿主細胞を培養することを含む、ヒトTrkAに結合するヒト化抗TrkA抗体またはその断片を産生する方法。
- 固定化された形態の、請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片。
- 請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片と、薬学的に許容される担体とを含む組成物。
- 治療剤と連結した請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体またはその断片を含むイムノコンジュゲート。
- 請求項37に記載のイムノコンジュゲートと、薬学的に許容される担体とを含む組成物。
- 別の医薬活性薬剤をさらに含む、請求項36または38に記載の組成物。
- 前記別の医薬活性薬剤が、
a)鎮痛剤
b)別の抗TrkA抗体
c)NGF
d)抗癌剤
e)抗NGF抗体
の1つまたは複数である、請求項39に記載の組成物。 - 医学に使用するための、請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体もしくはその断片、請求項36、38、39、もしくは40に記載の組成物、または請求項37に記載のイムノコンジュゲート。
- 疼痛の処置に使用するための、請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体もしくはその断片、請求項36、38、39、もしくは40に記載の組成物、または請求項37に記載のイムノコンジュゲート。
- 慢性疼痛の処置に使用するための、請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体もしくはその断片、請求項36、38、39、もしくは40に記載の組成物、または請求項37に記載のイムノコンジュゲート。
- 急性疼痛の処置に使用するための、請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体もしくはその断片、請求項36、38、39、もしくは40に記載の組成物、または請求項37に記載のイムノコンジュゲート。
- 炎症性疼痛、手術後疼痛、術後疼痛(歯痛を含む)、神経障害性疼痛、末梢神経障害、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症、骨折痛、痛風性関節痛、帯状疱疹後神経痛、癌性疼痛、変形性関節症または関節リウマチ疼痛、坐骨神経痛、鎌状赤血球クリーゼ関連疼痛、頭痛(例えば片頭痛、緊張性頭痛、群発頭痛)、月経困難症、子宮内膜症、子宮筋腫、筋骨格痛、慢性腰痛、線維筋痛、捻挫、内臓痛(visceral pain)、卵巣嚢腫、前立腺炎、慢性骨盤痛症候群、膀胱炎、間質性膀胱炎、有痛性膀胱症候群および/または膀胱痛症候群、慢性無菌性前立腺炎関連痛、切開痛、片頭痛、三叉神経痛、熱傷および/または創傷からの疼痛、外傷に関連する疼痛、筋骨格疾患に関連する疼痛、強直性脊椎炎、関節周囲の病状、骨転移からの疼痛、HIVからの疼痛、皮膚紅痛症または膵炎もしくは腎結石によって起こる疼痛、悪性黒色腫、シェーグレン症候群、喘息(例えば重症気道反応亢進を有するコントロール不良の喘息)、難治性咳嗽、脱髄疾患、慢性アルコール依存症、脳卒中、視床痛症候群、毒素からの疼痛、化学療法からの疼痛、炎症性腸障害、過敏性腸症候群、炎症性眼障害、炎症性または不安定膀胱障害、乾癬、炎症成分による皮膚疾患、日焼け、心臓炎、皮膚炎、筋炎、神経炎、膠原血管病、慢性炎症状態、炎症性疼痛ならびに関連する痛覚過敏および異痛、神経障害性疼痛および関連する痛覚過敏または異痛、糖尿病性神経障害痛、灼熱痛、交感神経依存性疼痛、求心路遮断症候群、上皮組織損傷または機能障害、呼吸器、尿生殖器、消化管、または血管領域での内臓運動障害、アレルギー性皮膚反応、掻痒症、白斑、汎胃腸障害、大腸炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、血管運動性またはアレルギー性鼻炎、気管支障害、消化不良、胃食道逆流、膵炎、内臓痛(visceralgia)、ならびに線維性骨形成異常(FD)の1つまたは複数に関連する疼痛の処置に使用するための、請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体もしくはその断片、請求項36、38、39、もしくは40に記載の組成物、または請求項37に記載のイムノコンジュゲート。
- 膵炎、腎結石、子宮内膜症、IBD、クローン病、術後癒着、胆嚢結石、頭痛、月経困難症、筋骨格痛、捻挫、内臓痛、卵巣嚢腫、前立腺炎、膀胱炎、間質性膀胱炎、術後疼痛、片頭痛、三叉神経痛、熱傷および/または創傷からの疼痛、外傷に関連する疼痛、神経障害性疼痛、筋骨格疾患に関連する疼痛、関節リウマチ、変形性関節症、強直性脊椎炎、関節周囲の病状、腫瘍性疼痛、骨転移からの疼痛、HIV感染の1つまたは複数に関連する疼痛の処置に使用するための、請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体もしくはその断片、請求項36、38、39、もしくは40に記載の組成物、または請求項37に記載のイムノコンジュゲート。
- 癌、ニューロン障害、アルツハイマー病、糖尿病、糖尿病性腎症、ウイルス障害、HIV媒介障害、ハンセン病、または炎症障害の処置に使用するための、請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体もしくはその断片、請求項36、38、39、もしくは40に記載の組成物、または請求項37に記載のイムノコンジュゲート。
- 痛覚過敏が、NSAIDと同じ程度まで効果的に反転する、急性炎症性疼痛の処置に使用するための、請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体もしくはその断片、請求項36、38、39、もしくは40に記載の組成物、または請求項37に記載のイムノコンジュゲート。
- 痛覚過敏が、NSAIDと同じ程度まで効果的に反転する、慢性炎症性疼痛の処置に使用するための、請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体もしくはその断片、請求項36、38、39、もしくは40に記載の組成物、または請求項37に記載のイムノコンジュゲート。
- 痛覚過敏が、プレガバリンおよびオピエートと同じ程度まで効果的に反転する、変形性関節症性疼痛の処置に使用するための、請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体もしくはその断片、請求項36、38、39、もしくは40に記載の組成物、または請求項37に記載のイムノコンジュゲート。
- 痛覚過敏および異痛が、プレガバリンと同じ程度まで効果的に反転する、神経障害性疼痛の処置に使用するための、請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体もしくはその断片、請求項36、38、39、もしくは40に記載の組成物、または請求項37に記載のイムノコンジュゲート。
- 診断または予後に使用するための、請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体もしくはその断片、請求項36、38、39、もしくは40に記載の組成物、または請求項37に記載のイムノコンジュゲート。
- TrkAの異常発現を伴う状態またはTrkAを伴う異常活性の診断または予後に使用するための、請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体もしくはその断片、請求項36、38、39、もしくは40に記載の組成物、または請求項37に記載のイムノコンジュゲート。
- 請求項41から47に記載の疾患または障害のいずれかの診断または予後に使用するための、請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体もしくはその断片、請求項36、38、39、もしくは40に記載の組成物、または請求項37に記載のイムノコンジュゲート。
- 請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体もしくはその断片、請求項36、38、39、もしくは40に記載の組成物、または請求項37に記載のイムノコンジュゲートを含む製品。
- 請求項1から23のいずれか一項に記載のヒト化抗TrkA抗体もしくはその断片、請求項36、38、39、もしくは40に記載の組成物、または請求項37に記載のイムノコンジュゲートを含むキット。
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