JP2015500032A5 - - Google Patents
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Claims (33)
- 対象のタンパク質をコードする核酸に操作可能に連結されるＢ．ズブチリス（B. subtilis）リボソームプロモーターを含む単離された核酸。
- 前記核酸が、リボソームＲＮＡプロモーター又はリボソームタンパク質プロモーターである、請求項１に記載の単離された核酸。
- 前記核酸が、ｒｒｎＢ、ｒｒｎＩ又はｒｒｎＥリボソームＲＮＡプロモーターである、請求項１に記載の単離された核酸。
- 前記核酸が、ｒｒｎＩリボソームＲＮＡプロモーターである、請求項３に記載の単離された核酸。
- 前記核酸が、ｒｐｓＤ又はｒｐｓＪリボソームタンパク質プロモーターである、請求項１に記載の単離された核酸。
- 前記核酸が、
配列番号１〜６のいずれか１つのヌクレオチド配列、
プロモーター活性を保持する配列番号１〜６のいずれか１つの部分配列、
配列番号１〜６のいずれか１つに少なくとも６０％相同な核酸、又は
配列番号１〜６のいずれか１つ若しくはプロモーター活性を保持するその部分配列と中程度のストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする核酸、あるいは
上記のいずれかの組み合わせを含む、
請求項１に記載の単離された核酸。 - 前記核酸が、配列番号３のヌクレオチド配列又はプロモーター活性を保持するその部分配列を含む、請求項１に記載の単離された核酸。
- 前記核酸が、
配列番号１３〜１４のいずれか１つのヌクレオチド配列、
プロモーター活性を保持する配列番号１３〜１４のいずれか１つの部分配列、
配列番号１３〜１４のいずれか１つに少なくとも６０％相同な核酸、又は
配列番号１３〜１４のいずれか１つ若しくはプロモーター活性を保持するその部分配列と中程度のストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする核酸、あるいは
上記のいずれかの組み合わせを含む、
請求項１に記載の単離された核酸。 - 前記核酸が、配列番号１３〜１４のいずれか１つと少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９３％、９５％、９７％、又は９９％相同な核酸を含む、請求項１に記載の単離された核酸。
- 前記対象のタンパク質が酵素である、請求項１に記載の単離された核酸。
- 前記対象のタンパク質が、プロテアーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、キシラナーゼ、フィターゼ、マンナナーゼ、ヘミセルラーゼ、カルボヒドラーゼ、加水分解酵素、エステラーゼ、オキシダーゼ、パーミアーゼ、プルラナーゼ、ラッカーゼ、リパーゼ、レダクターゼ、イソメラーゼ、エピメラーゼ、トートメラーゼ、トランスフェラーゼ、キナーゼ、及びホスファターゼからなる群から選択される酵素である、請求項１０に記載の単離された核酸。
- 前記対象のタンパク質がプロテアーゼである、請求項１１に記載の単離された核酸。
- 前記プロテアーゼがスブチリシンである、請求項１２に記載の単離された核酸。
- 前記プロテアーゼが配列番号９、１１、１８又は２０によりコードされる、請求項１３に記載の単離された核酸。
- Ｂ．ズブチリス（B. subtilis）のリボソームプロモーターを含む核酸を含む発現ベクター。
- 前記リボソームプロモーターがｒｒｎＩリボソームＲＮＡプロモーターである、請求項１５に記載の発現ベクター。
- 前記リボソームプロモーターがｒｐｓＤ又はｒｐｓＪリボソームタンパク質プロモーターである、請求項１５に記載の発現ベクター。
- 対象のタンパク質をコードする核酸を更に含み、前記核酸が前記リボソームＲＮＡ又はタンパク質プロモーターに操作可能に連結される、請求項１５に記載の発現ベクター。
- 前記対象のタンパク質が酵素である、請求項１８に記載の発現ベクター。
- 前記対象のタンパク質がプロテアーゼである、請求項１９に記載の発現ベクター。
- 前記プロテアーゼが配列番号９、１１、１８又は２０によりコードされる、請求項２０に記載の発現ベクター。
- 請求項１に記載の核酸を含む微生物。
- 前記微生物がバチルス（Bacillus）属に属する、請求項２２に記載の微生物。
- 前記核酸が前記宿主細胞の染色体に組み込まれている、請求項２２に記載の微生物。
- 前記タンパク質の産生のために前記微生物にとって好適な条件下で、請求項２２に記載の微生物を培養することを含む、対象のタンパク質の産生のための方法。
- 前記微生物がバチルス（Bacillus）属に属する、請求項２５に記載の方法。
- 前記微生物が、Ｂ．ズブチリス（B. subtilis）、Ｂ．リケニフォルミス（B. licheniformis）、Ｂ．レンタス（B. lentus）、Ｂ．ブレビス（B. brevis）、Ｂ．ステロサーモフィラス（B. stearothermophilus）、Ｂ．アルカロフィラス（B. alkalophilus）、Ｂ．アミロリケファシエンス（B. amyloliquefaciens）、Ｂ．コアグランス（B. coagulans）、Ｂ．シルクランス（B. circulans）、Ｂ．ラウタス（B. lautus）、及びＢ．チューリンゲンシス（B. thuringiensis）からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
- 前記核酸が前記宿主細胞の染色体に組み込まれている、請求項２５に記載の方法。
- 前記対象のタンパク質がプロテアーゼである、請求項２５に記載の方法。
- 前記プロテアーゼが配列番号９、１１、１８又は２０によりコードされる、請求項２９に記載の方法。
- 請求項１に記載の核酸で微生物を形質転換する工程であって、前記核酸が単一の組み込み体として前記宿主細胞に組み込まれる工程と、
前記微生物が前記タンパク質を産生するために好適な条件下で前記微生物を培養する工程を含む、
発現構築物の増幅をせずに対象のタンパク質を産生する方法。 - 請求項１５に記載のベクターで微生物を形質転換する工程であって、前記ベクターが単一の組み込み体として前記宿主細胞に組み込まれる工程と、
前記微生物が前記タンパク質を産生するために好適な条件下で前記微生物を培養する工程を含む、
発現構築物の増幅をせずに対象のタンパク質を産生する方法。 - 前記微生物が抗生物質マーカーを含まない、請求項３１又は３２に記載の方法。
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