JP2015101541A - 皮膚関連酵素活性化剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】酵母抽出物からなる皮膚外用剤で、該酵母抽出物がヒートショックプロテイン及び/又はヒートショック因子を含有する皮膚外用剤。
【選択図】図1
Description
その他、角層形成、NMF産生に関与する酵素として、カスパーゼ−14(例えば、非特許文献1、2参照)、過酸化水素の分解に関わり老化に伴い減少する酵素としてカタラーゼ(例えば、非特許文献2、3参照)、エネルギー産生に関わる酵素としてNADHデヒドロゲナーゼ(例えば、非特許文献4参照)、角層細胞の皮膚における接着に関わり、角層剥離に関与する酵素としてカリクレイン−5(例えば、非特許文献5参照)が知られている。
<1>酵母抽出物からなる皮膚関連酵素活性化剤
<2>前記酵母抽出物がヒートショックプロテイン及び/又はヒートショック因子を含有することを特徴とする<1>記載の皮膚関連酵素活性化剤
<3><1>又は<2>記載の皮膚関連酵素活性化剤を含有することを特徴とする皮膚外用剤
<4>化粧料であることを特徴とする<3>記載の皮膚外用剤
本発明の皮膚関連酵素活性化剤は、その必須成分として酵母抽出物を含有する。このような酵母抽出物としては、角層中の酵素の活性を向上するもので皮膚外用剤に使用できるものであれば特段限定されないが、具体的にはヒートショックプロテイン及び/又はヒ−トショック因子を含有する酵母抽出物を用いることができる。ヒートショックプロテイン及び/又はヒ−トショック因子を含有する酵母抽出物は、42〜44℃にて10〜40分間熱ストレスを与え培養し、その後、培養液を遠心分離し、沈殿物を粉砕後、極性溶媒にて抽出した抽出物を用いることが出来る。前記極性溶媒としては、水、1,3ブチレングリコール、グリセリン、ポリプロピレングリコ−ルなどが例示できる。
抽出物を乾燥し粉末にしたもの、及び抽出物、乾燥物等をカラムや溶液間の分配により精製し、有効成分を高めたもの等を酵母抽出物として用いることもできる。
酵素活性の測定は、例えば、市販の粘着テープ等にて採取された角層細胞から酵素をバッファーにて抽出し、得られた酵素液の酵素活性の変化量を常法に従い測定する方法が挙げられる。角層採取部位は特に限定されない。
前記酵素からなる群から選択される少なくとも1種の酵素活性が向上した場合、肌状態が改善したと判断できる。
本発明の皮膚外用剤は、皮膚関連酵素活性化剤を含有する。本発明の皮膚関連酵素活性化剤は、皮膚外用剤全量に対し、0.0001質量%〜10質量%、より好ましくは、0.001質量%〜5質量%、さらに好ましくは、0.015質量%〜3質量%含有することが好ましい。これは、下限未満では本発明の皮膚関連酵素活性化剤が有する肌状態の改善効果が発揮されず、上限を超えると効果が頭打ちになり、安定性等の問題が生じ、皮膚関連酵素活性化剤を含有した皮膚外用剤として使用する場合、自由度を損なう場合が存するためである。
本発明の皮膚外用剤の使用前後で、酵素活性がどのように変化するかを測定することで、酵素活性が向上するか否かの判断は行うことができる。
(本発明の皮膚関連酵素活性化剤)
熱ストレス条件下(44℃)にて40分間熱ストレスを与え、ヒートショックプロテイン及びヒートショック因子を増加させ、その後、培養液を遠心分離し、沈殿物を粉砕後、水にて抽出した酵母抽出物1を調製した。同様に熱ストレス処理を行わず同様の過程で調製した酵母抽出物2を調製した。
表1に示す処方にしたがって本発明の皮膚外用剤を調製した。
表1の成分(イ)を攪拌しながら60℃に加熱した。これに成分(ロ)を常温にて攪拌混合したものを添加し、次に(ハ)を加え攪拌し続け均一溶液とした。次に、成分(ホ)を加え攪拌混合し、均一となるまで攪拌を続け本発明の皮膚外用剤を得た。なお表中成分(イ)〜(ホ)における数字は質量%を表す。
(角層中酵素の抽出)
健常人1名について、顔部をダブル洗顔した後(メーク落とし・洗顔)、テープストリッピング法により、顔部の角層細胞を採取した。
採取した角層は酵素抽出液(0.1M Tris−HCl(pH7.5)+0.14M NaCl+0.1%Tween20)にてホモジナイズし、15000rpmで遠心した上清を酵素液とした。
酵素活性の算出に必要な蛋白濃度は、前記酵素液を、ProteinAssayKit(同仁化学)を用い測定した。
本試験においては、角層中の酵素として、カリクレイン−5、カスパーゼ−14、カタラーゼ、及びNADHデヒドロゲナーゼを選択し、各酵素の酵素活性を以下のように測定した。
カリクレイン−5は、以下の方法にて測定した。すなわち、MCA基質(Boc−Val−Pro−Arg−MCA、同仁化学)(0.2mM)20μL、アッセイバッファー(50mM HEPES(pH7.5)+60mM
NaCl+0.01%Chaps+5mM EDTA+2mM DTT+1.5mMクエン酸ナトリウム)130μL、酵素抽出液(酵素を含まない)30μLを小試験管中で10分間37℃においてインキュベートしブランクとし、同様に、MCA基質(0.2mM)20μL、アッセイバッファー(50mM HEPES(pH7.5)+60mM NaCl+0.01%Chaps+5mM EDTA+2mM DTT+1.5mMクエン酸ナトリウム)130μL中に酵素液30μLを加え小試験管中で10分間37℃においてインキュベートし、サンプルとした。
ブランク、サンプルともに0.1Mモノクロロ酢酸ナトリウム溶液(pH4.3)で反応を停止し、蛍光強度(EX370nm、EM460nm)を測定し、酵素活性を算出した。
ブランク、サンプルともに0.1Mモノクロロ酢酸ナトリウム溶液(pH4.3)で反応を停止し、蛍光強度(EX370nm、EM460nm)で測定し、酵素活性を算出した。
(μmol/min/g)を求めた。
盲検として上記において、NADHデヒドロゲナーゼ溶液0.1mLの代わりに酵素希釈液0.1mLを加え、上記同様に操作を行って反応を開始し、25℃で20秒毎に600nmの吸光度の減少を4分間測定する吸光度を測定した。
(酵素と肌状態の関連性)
皮膚関連酵素であるカリクレイン−5の酵素と肌状態の関連性を把握するため、前記のように、60名の健常者の顔部の角層細胞を採取し、酵素活性を測定し、酵素活性の高さから低中高群を設定し、低い群、高い群で肌の明るさ、毛穴の目立ち、しわ、及び肌の凹凸(ムラ)に差が認められるか観察した。
肌の明るさは、洗顔後(メーク落とし・洗顔)、室温22±2 ℃、湿度50±5%の条件下にて安静にし、右の頬下部を分光測色計CM−2600d(コニカミノルタオプティクス株式会社)にてL*値を測定し、5回測定を行い、平均値を求めた。
毛穴の目立ち、しわ、及び肌の凹凸は、前記と同様に洗顔を行い、前記条件下で安静にした後、顔 正面および左右斜めの3部位について、VISIA
Evolution(Canfield Scientific Ltd.)を用いて、毛穴スコア、凹凸及びシワの個数を測定した。
Claims (4)
- 酵母抽出物からなる皮膚関連酵素活性化剤
- 前記酵母抽出物がヒートショックプロテイン及び/又はヒートショック因子を含有することを特徴とする請求項1記載の皮膚関連酵素活性化剤
- 請求項1又は2記載の皮膚関連酵素活性化剤を含有することを特徴とする皮膚外用剤
- 化粧料であることを特徴とする請求項3記載の皮膚外用剤
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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JP2017001985A (ja) * | 2015-06-10 | 2017-01-05 | ポーラ化成工業株式会社 | 酵素活性化剤 |
JP2018522071A (ja) * | 2015-07-31 | 2018-08-09 | エクソシューティカルズ インコーポレイテッドExoceuticals, Inc. | エキソソーム組成物ならびに調製方法ならびに皮膚および毛髪の調節および調整のためのその使用 |
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JP2006206491A (ja) * | 2005-01-27 | 2006-08-10 | Noevir Co Ltd | 皮膚外用剤 |
JP2013506623A (ja) * | 2009-08-31 | 2013-02-28 | エイボン プロダクツ インコーポレーテッド | ストレスに曝されて改変された酵母エキスおよびこれに関連する組成物の化粧品としての使用 |
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2013
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