JP2014531197A - ダイズイベントpDAB9582.814.19.1とpDAB4468.04.16.1の昆虫抵抗性および除草剤耐性育種スタック - Google Patents
ダイズイベントpDAB9582.814.19.1とpDAB4468.04.16.1の昆虫抵抗性および除草剤耐性育種スタック Download PDFInfo
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Abstract
Description
(a)前記試料を、配列番号1のbp1〜1400内の隣接配列またはその相補物に選択的に結合する、長さが少なくとも10bpである第1のプライマー、および配列番号1のbp1401〜1836内の挿入断片配列またはその相補物に選択的に結合する、長さが少なくとも10bpである第2のプライマーと接触させ、前記プライマー間に生成したアンプリコンについてアッセイするステップ、または
(b)前記試料を、配列番号2のbp1〜152内の挿入断片配列またはその相補物に選択的に結合する、長さが少なくとも10bpである第1のプライマー、および配列番号2のbp153〜1550内の隣接配列またはその相補物に選択的に結合する、長さが少なくとも10bpである第2のプライマーと接触させるステップ、もしくは
(c)前記試料を、配列番号15のbp2731〜9121内の挿入断片配列またはその相補物に選択的に結合する、長さが少なくとも10bpである第1のプライマー、および配列番号15のbp1〜2730内の隣接配列またはその相補物に選択的に結合する、長さが少なくとも10bpである第2のプライマーと接触させるステップ、もしくは
(d)前記試料を、配列番号15のbp2731〜9121内の挿入断片配列またはその相補物に選択的に結合する、長さが少なくとも10bpである第1のプライマー、および配列番号15のbp9122〜10,198内の隣接配列またはその相補物に選択的に結合する、長さが少なくとも10bpである第2のプライマーと接触させるステップ、および
(c)前記プライマー間に生成したアンプリコンについてアッセイするステップ
を含む方法を提供する。
(a)前記試料を、配列番号1のbp1〜1400および配列番号2のbp153〜1550からなる群から選択される隣接配列およびその相補物に選択的に結合する第1のプライマー;ならびに配列番号3、またはその相補物に選択的に結合する第2のプライマー;ならびに配列番号15のbp1〜2730および配列番号15のbp9122〜10,198の隣接配列およびその相補物に選択的に結合する第3のプライマー;ならびに配列番号15の2731〜9121の挿入断片配列およびその相補物に選択的に結合する第4のプライマーと接触させるステップと、
(b)前記試料をポリメラーゼ連鎖反応に供するステップと、
(c)前記プライマー間に生成したアンプリコンについてアッセイするステップと
を含む方法を提供する。
本開示の一部として、ダイズイベントpDAB9582.814.19.1を含むダイズ系統の少なくとも2500種子およびダイズイベントpDAB4468.04.16.1を含むダイズ系統の2500種子がAmerican Type Culture Collection(ATCC)、10801 University Boulevard、Manassas、VA、20110に寄託され、制限なく一般に公開されている(しかし、特許権に支配される)。ATCC寄託番号PTA−10442(pDAB4468.04.16.1)およびATCC寄託番号_____(pDAB9582.814.19.1)と称される寄託物は、それぞれDow AgroSciences LLC on October 22、2009および_____を代表して作製された。これらの寄託物は、特許手続のための種子寄託物に関するブタペスト条約の条項に従い、その下で作製されたものであり、また、それに従い、その下で維持される。
配列番号1はダイズイベントpDAB9582.814.19.1についての5’DNA隣接境界配列である。ヌクレオチド1〜1400はゲノム配列である。ヌクレオチド1401〜1535は、pDAB9582から再配置された配列である。ヌクレオチド1536〜1836は挿入断片配列である。
bp 塩基対
℃ 摂氏温度
DNA デオキシリボ核酸
EDTA エチレンジアミン四酢酸
kb キロベース
μg マイクログラム
μL マイクロリットル
mL ミリリットル
M モル質量
PCR ポリメラーゼ連鎖反応
PTU 植物転写単位
SDS ドデシル硫酸ナトリウム
SSC 塩化ナトリウムとクエン酸ナトリウムとの混合物を含有する緩衝溶液、pH7.0
TBE トリス塩基、ホウ酸およびEDTAの混合物を含有する緩衝溶液、pH8.3
(実施例)
ダイズイベントpDAB9582.814.19.1を含むトランスジェニックダイズ(Glycine max)を、ダイズ子葉節の外植片をアグロバクテリウム媒介形質転換によって生成した。T鎖DNA領域内に選抜マーカー、patv6および対象の遺伝子cry1Fv3およびcry1Ac synproを含むバイナリーベクターpDAB9582(図1)を保有する武装解除したアグロバクテリウム株EHA101(Hoodら、1993年)を使用して形質転換を開始した。pDAB9582のDNA配列は配列番号3に示され、下の表1において注釈を付けている。
ダイズイベントpDAB9582.814.19.1において発現させた組換え型のCry1Fタンパク質、Cry1Acタンパク質、およびPATタンパク質の生化学的性質を特徴付けた。定量的酵素結合免疫吸着検定法(ELISA)は、タンパク質の生化学的性質を特徴付け、ダイズイベントpDAB9582.814.19.1におけるこれらのタンパク質の発現を確認するために用いることができる、当技術分野の範囲内で公知の生化学的アッセイである。
ダイズ組織の試料を試験植物から単離し、発現を解析するために調製した。0.5%ウシ血清アルブミン(BSA)を含有する界面活性剤Tween−20(PBST)を含有するリン酸緩衝生理食塩水溶液を用いてダイズ植物の組織からPATタンパク質を抽出した。植物組織を遠心分離し、水性上清を収集し、必要に応じて適切な緩衝液で希釈し、PAT ELISAキットをサンドイッチ形式で使用して解析した。キットは製造者(Envirologix、Portland、ME)の推奨プロトコールに従って使用した。このアッセイにより、発現されたPATタンパク質を測定した。
ダイズイベントpDAB9582.814.19.1におけるCry1Fタンパク質、Cry1Acタンパク質およびPATタンパク質のレベルを決定した。ダイズの葉組織から、可溶性の抽出可能なタンパク質を、定量的酵素結合免疫吸着検定法(ELISA)方法を使用して測定した。T2〜T6世代のダイズイベントpDAB9582.814.19.1で発現は安定であり(分離性でない)、系列全てにわたって一貫していた。表2に、ダイズイベントpDAB9582.814.19.1におけるトランスジェニックタンパク質の平均発現レベルが列挙されている。
ゲノムの挿入部位を特徴付け、説明するために、ダイズイベントpDAB9582.814.19.1の隣接ゲノムT−DNA境界領域の配列を決定した。1400bpの5’隣接境界配列(配列番号1)および1398bpの3’隣接境界配列(配列番号2)を含むダイズイベントpDAB9582.814.19.1のゲノム配列を確認した。ダイズイベントpDAB9582.814.19.1の境界配列に基づくPCR増幅により、境界領域がダイズ起源であること、および接合領域がダイズイベントpDAB9582.814.19.1に独特の配列であることが検証された。接合領域をダイズイベントpDAB9582.814.19.1のイベント特異的な同定のために使用することができる。さらに、T鎖の挿入部位を、形質転換されていないダイズのゲノム由来の同定された隣接境界配列の領域に対応するゲノムの断片を増幅することによって特徴付けた。ダイズイベントpDAB9582.814.19.1を形質転換されていないゲノム配列と比較することにより、T鎖の組み込みの間に元の遺伝子座から約57bpが欠失したことが明らかになった。全体的に、ダイズイベントpDAB9582.814.19.1の挿入断片および境界配列を特徴付けることにより、pDAB9582由来のT鎖のインタクトなコピーがダイズゲノム内に存在することが示された。
5’隣接境界および3’隣接境界を第02染色体由来のダイズ(Glycine max)全ゲノムショットガン配列に対しアラインメントし、ダイズイベントpDAB9582.814.19.1の導入遺伝子がダイズゲノムの第02染色体に挿入されたことが示されている。ダイズゲノムからダイズイベントpDAB9582.814.19.1の挿入部位を確認するために、異なるプライマー対を用いてPCRを行った(図2、表3、表4、および表5)。ダイズイベントpDAB9582.814.19.1由来のゲノムDNAおよび他のトランスジェニックダイズ系統または非トランスジェニックダイズ系統由来のゲノムDNAを鋳型として使用した。5’境界配列が正確であることを確認するために、At Ubi10プロモーター遺伝子エレメント、例えば、AtUbi10RV1に結合するように設計したプライマー、および、ダイズゲノムの第02染色体上のクローニングされた5’末端境界に結合するように設計したプライマー、81419_FW3と称されるプライマーを、At Ubi10プロモーター遺伝子エレメントから5’末端境界配列にわたるDNAセグメントを増幅するために使用した。同様に、クローニングされた3’境界配列を確認するために、pat特異的なプライマー、例えば、3’PATEnd05、ならびに、81419_RV1、81419_RV2および81419_RV3と称される、クローニングされた3’末端境界配列に従って設計した3つのプライマーを、pat遺伝子から3’境界配列にわたるDNAセグメントを増幅するために使用した。予測されたサイズを有するDNA断片は、各プライマー対を用いたダイズイベントpDAB9582.814.19.1のゲノムDNAからのみ増幅されたが、他のトランスジェニックダイズ系統または非トランスジェニック対照由来のDNA試料からは増幅されなかった。結果は、クローニングされた5’境界配列および3’境界配列が、ダイズイベントpDAB9582.814.19.1のT鎖挿入断片の隣接境界配列であることを示している。
サザンブロット分析を使用して、ダイズイベントpDAB9582.814.19.1の組み込みパターンを確立した。これらの実験により、cry1Acおよびcry1F導入遺伝子のダイズゲノム内への組み込みおよびその完全性を実証するデータが生成した。ダイズイベントpDAB9582.814.19.1は、プラスミドpDAB9582由来のcry1Acおよびcry1F植物転写単位(PTU)の単一コピーを含有する全長の、単純な組み込みイベントであると特徴付けられた。
ダイズの葉の試料の収集およびゲノムDNA(gDNA)の単離
ダイズイベントpDAB9582.814.19.1を含有する個々のダイズ植物から回収した葉組織からゲノムDNAを抽出した。さらに、cry1Acおよびcry1F遺伝子が存在しない物質系統の代表である遺伝的背景を含有する従来のダイズ植物であるMaverickからgDNAを単離した。標準のCTAB法(Sambrookら(1989年))の後、凍結乾燥した葉組織から個々のゲノムDNAを抽出した。抽出した後、DNAを、PICO GREEN試薬(Invitrogen、Carlsbad、CA)を使用して分光蛍光分析によって定量した。次いで、DNAをアガロースゲル上で可視化してPICO GREEN分析からの値を確認し、DNAの質を決定した。
DNAの消化および分離
ダイズイベントpDAB9582.814.19.1をサザンブロットによって分子キャラクタリゼーションするために、10マイクログラム(10μg)のゲノムDNAを消化した。ダイズイベントpDAB9582.814.19.1および非トランスジェニックダイズ系統であるMaverick由来のゲノムDNAを、各DNA試料にDNA1μg当たりおよそ5ユニットの選択された制限酵素および対応する反応緩衝液を加えることによって消化した。各試料を、およそ37℃で一晩インキュベートした。単独消化のために、制限酵素AseI、HindIII、NsiI、およびNdeIを個々に使用した(New England BioLabs、Ipswich、MA)。二重消化のために制限酵素NotIおよびApaLIを一緒に使用した(New England BioLabs、Ipswich、MA)。さらに、陽性ハイブリダイゼーション対照試料を、プラスミドDNAであるpDAB9582を非トランスジェニックダイズ品種であるMaverick由来のゲノムDNAと混ぜ合わせることによって調製した。プラスミドDNA/ゲノムDNA反応混液を、試験試料の場合と同じ手順および制限酵素を用いて消化した。
サザンブロット分析を基本的にMemelinkら(1994年)に記載されている通り実施した。簡単に述べると、DNA断片を電気泳動によって分離し、可視化した後、ゲルを、0.25MのHClを用い、およそ20分にわたって脱プリン化し、次いで、変性溶液(0.4MのNaOH、1.5MのNaCl)におよそ30分間、その後、中和溶液(1.5MのNaCl、0.5Mのトリス、pH7.5)に少なくとも30分間曝露させた。ナイロンメンブレンへのサザン転写を、10×SSCを伴うウィッキング系を用いて一晩実施した。転写後、UV架橋によってDNAをメンブレンに結合させ、その後、メンブレンを2×SSC溶液で簡単に洗浄した。このプロセスにより、ハイブリダイゼーションのためのサザンブロットメンブレンの準備ができた。
DNAプローブの標識化およびハイブリダイゼーション
標識したプローブを使用してナイロンメンブレンに結合したDNA断片を検出した(表6)。ジゴキシゲニン(DIG)標識されたヌクレオチド[DIG−11]−dUTPを、遺伝子エレメントに特異的なプライマーを使用してプラスミドpDAB9582から増幅されたDNA断片にPCRに基づいて組み込むことによってプローブを生成した。PCR合成によるDNAプローブの生成を、PCR DIG Probe Synthesis Kit(Roche Diagnostics、Indianapolis、IN)を製造者の推奨手順に従って使用して行った。
サザンブロットの結果
cry1Acおよびcry1FPTUの公知の制限酵素部位に基づく、特定の消化物およびプローブに関して予測された断片サイズおよび観察された断片サイズが表7に示されている。これらの消化およびハイブリダイゼーションから2種類の断片を同定した:公知の酵素部位がプローブ領域に隣接し、cry1Acおよびcry1FPTUの挿入領域内に完全に含有されている内部の断片、および公知の酵素部位がプローブ領域の一端に位置し、第2の部位がダイズゲノム内にあると予測される境界断片。ほとんどの場合、DNA断片の組み込み部位はそれぞれのイベントに独特であるので、境界断片のサイズはイベントごとに変動する。境界断片により、組み込まれたDNAに対して制限酵素部位を位置づける手段およびDNA挿入物の数を評価する手段がもたらされる。ダイズイベントpDAB9582.814.19.1を含有するダイズの多世代に対して完了したサザンブロット分析により、プラスミドpDAB9582由来の低コピー、インタクトなcry1Acおよびcry1FPTUが、ダイズイベントpDAB9582.814.19.1のダイズゲノムに挿入されたことを示唆するデータがもたらされた。
ダイズイベントpDAB9582.814.19.1にスペクチノマイシン抵抗性遺伝子(specR)、Ori Repエレメントおよび複製開始タンパク質trfA
(TRf Aエレメント)が存在しないことを検証するために、サザンブロット分析も行った。適切な陽性対照(MaverickゲノムDNAにpDAB9582を付加したもの)および陰性対照(MaverickゲノムDNA)をサザン分析に含めた場合、スペクチノマイシン抵抗性、Ori Repエレメントまたはtrf Aエレメントに対する特異的なハイブリダイゼーションは予測されなかった。NsiI消化し、specR特異的なプローブとハイブリダイズさせた後、陽性対照試料(MaverickゲノムDNAにpDAB9582を付加したもの)において、15320bpの、1つの予測されたサイズのバンドが観察された。specRプローブは陰性対照の試料およびダイズイベントpDAB9582.814.19.1の試料とはハイブリダイズしなかった。同様に、NsiI消化し、trfAプローブとハイブリダイズさせた後、15320bpの、1つの予測されたサイズのバンドが陽性対照試料(pDAB9582プラスmaverick)において検出されたが、陰性対照の試料およびダイズイベントpDAB9582.814.19.1の試料では検出されなかった。NdeI消化し、OriRep特異的なプローブとハイブリダイズさせた後、5329bpの、別の予測されたサイズのバンドが陽性対照試料(MaverickゲノムDNAにpDAB9582を付加したもの)において検出されたが、陰性対照の試料およびダイズイベントpDAB9582.814.19.1の試料では検出されなかった。これらのデータは、ダイズイベントpDAB9582.814.19.1にスペクチノマイシン抵抗性遺伝子、Ori Repエレメントおよび複製開始タンパク質trfAが存在しないことを示している。
ダイズイベントpDAB9582.814.19.1の農業特性および有効性を試験するために、2010年10月および2011年2月のプエルトリコ、サンタイサベルにおける有効性試験において該イベントを植えた。イベントpDAB9582.814.19.1を作出するために最初に形質転換した栽培品種Maverickを各苗床に植え、実験に対照として含めた。T3苗床の種子はT2段階における単一植物選択から得、T4苗床の種子はT3段階における単一植物選択から得た。各世代において4系列のイベントを試験した。作条4つの広さ、7.5フィートの長さの小区画に各系列を植えた。作条間の間隔は30インチであった。プエルトリコの日の短さを補償するために、小区画を光の下でおよそ2.5週間にわたって生長させた。各苗床にグルホシネートを411g ae/haの比率で噴霧した。対照植物であるMaverickの1つの小区画に、グルホシネートを同じ比率で噴霧し、第2の小区画には噴霧せず、イベントに対する対照比較として使用した。
アンチカルシア・ゲムマタリス(Anticarsia gemmatalis)(ハッショウマメイモムシ)、シュードプルシア・インクルデンス(Pseudoplusia includens)(ダイズシャクトリムシ)およびスポドプテラ・フルギペルダ(Spodoptera frugiperda)(ツマジロクサヨトウ(fall armyworm))を含めた、実験室で飼育したダイズ害虫に対するダイズイベントpDAB9582.814.19.1におけるCry1AcおよびCry1Fの活性を特徴付けるために、圃場および温室における評価を行った。ダイズイベントpDAB9582.814.19.1を形質転換されていないダイズ品種Maverickと比較して、Cry1Fタンパク質およびCry1Acタンパク質によってもたらされる植物の保護のレベルを決定した。
配列番号14にダイズイベントpDAB9582.814.19.1の配列が提供されている。この配列は、5’ゲノム隣接配列、pDAB9582のT鎖挿入断片および3’ゲノム隣接配列を含有する。配列番号14に関して、残基1〜1400は5’ゲノム隣接配列であり、残基1401〜1536はpDAB9582プラスミドからの再配置の残基であり、1537〜13896は、pDAB9582T鎖挿入断片の残基であり、残基13897〜15294は3’隣接配列である。したがって挿入断片の5’末端に関して接合部配列または移行部は配列番号14の残基1400〜1401に生じる。したがって挿入断片の3’末端に関して接合部配列または移行部は配列番号14の残基13896〜13897に生じる。
国際特許出願第WO/2012/075426号に記載のダイズイベントpDAB4468.04.16.1をダイズイベントpDAB9582.814.19.1と有性交雑させた。ダイズイベントpDAB4468.04.16.1の葯を、ダイズイベントpDAB9582.814.19.1の柱頭全体にわたって手動でこすりつけ、それにより、ダイズイベントpDAB9582.814.19.1を受精させた。その結果生じた、ダイズイベントpDAB9582.814.19.1およびダイズイベントpDAB4468.04.16.1の両方由来の組み込みイベントを含有するF1後代を、2,4−Dおよびグルホシネート除草剤に対する耐性についてスクリーニングして、両方の組み込みイベントを含有する後代植物を同定した。
育種スタックダイズイベントpDAB9582.814.19.1::pDAB8264.44.06.1において発現させた組換え型のCry1Fタンパク質、Cry lAcタンパク質、AAD12タンパク質およびPATタンパク質の生化学的性質を特徴付けた。合計51のF1植物がダイズイベントpDAB9582.814.19.1およびpDAB4468.04.16.1を含有することが、それぞれ米国特許仮出願第61/511658号および国際特許出願第WO/2011/066360号に開示されているものに基づくアッセイを用いたイベント特異的なTAQMAN(登録商標)アッセイによって確認された。次に、酵素結合免疫吸着検定法(ELISA)を用いて、PATタンパク質およびAAD12タンパク質の発現を数量化し、一方、Cry1Acタンパク質およびCry1Fタンパク質を、Meso−Scale Discovery(MSD)からの電気化学発光技術を利用したマルチプレックス免疫測定法によって数量化した。集合的に、これらのアッセイを使用してタンパク質の生化学的性質を特徴付け、育種スタックダイズイベントpDAB9582.814.19.1::pDAB4468.04.16.1におけるこれらのタンパク質の発現を確認した。
育種スタックダイズイベントpDAB9582.814.19.1::pDAB4468.04.16.1におけるPATタンパク質のレベルを決定した。可溶性の抽出可能なPATタンパク質を、ダイズの葉組織を試験するための定量的酵素結合免疫吸着検定法(Envirologix、Portland、ME)を使用して測定した。
育種スタックダイズイベントpDAB9582.814.19.1::pDAB4468.04.16.1におけるCry1Fタンパク質およびCry1Acタンパク質のレベルを決定した。ダイズの葉組織用のマルチプレックスMSDアッセイ(Meso−Scale Discovery、Gaithersburg、MD)を用いて可溶性の抽出可能なCry1Fタンパク質およびCry1Acタンパク質を測定した。
育種スタックダイズイベントpDAB9582.814.19.1::pDAB4468.04.16.1におけるAAD12タンパク質のレベルを決定した。可溶性の抽出可能なAAD12タンパク質を、ダイズの葉組織を試験するための定量的酵素結合免疫吸着検定法(Acadia Bioscience、Portland、ME)を使用して測定した。
育種スタックダイズイベントpDAB9582.814.19.1::pDAB4468.04.16.1の除草剤耐性を温室試験においてアッセイした。ダイズイベントpDAB9582.814.19.1::pDAB4468.04.16.1の種子をポットに植え、成熟するまで生長させた。53の成熟F1植物を、V3〜V4生長段階(単葉および最初の3〜4つの三出葉が完全に発達していることを特徴とする)で840g ae/haの2,4−Dからなる単一の除草剤施用を噴霧した。その結果生じたこれらの除草剤に対する耐性を、生存している植物の数を計数することによって測定した。53の植物全てが除草剤施用に対して抵抗性であることが見いだされた。比較として、aad−12遺伝子を含有せず、2,4−D除草剤の施用に対して感受性であることが予測される対照植物を試験に含めた。
アンチカルシア・ゲムマタリス(Anticarsia gemmatalis)(ハッショウマメイモムシ)およびシュードプルシア・インクルデンス(Pseudoplusia includens)(ダイズシャクトリムシ)を含めた、実験室で飼育したダイズ害虫に対する育種スタックダイズイベントpDAB9582.814.19.1::pDAB4468.04.16.1におけるCry1AcおよびCry1Fの活性を特徴付けるために温室評価を行った。育種スタックダイズイベントpDAB9582.814.19.1::pDAB4468.04.16.1をダイズイベントpDAB9582.814.19.1、ダイズイベントpDAB4468.04.16.1および形質転換されていないダイズ品種Maverickと比較して、掛け合わせた場合にCry1Fタンパク質およびCry1Acタンパク質によってもたらされる植物の保護のレベルが変化するかどうかを決定した。さらに、昆虫に対する除草剤由来の負の生物学影響がないことを確認するために、バイオアッセイの前に育種スタックダイズイベントpDAB9582.814.19.1::pDAB4468.04.16.1およびダイズイベントpDAB4468.04.16.1に840g ae/haの2,4−Dを含有する単一の除草剤施用を噴霧した。
Claims (16)
- 昆虫を昆虫抵抗性ダイズ植物に曝露させて、それにより昆虫を防除するステップを含む、昆虫を防除する方法であって、前記ダイズ植物が配列番号1のbp1385〜1415;配列番号1のbp1350〜1450;配列番号1のbp1300〜1500;配列番号1のbp1200〜1600;配列番号2のbp137〜168;配列番号2のbp103〜203;および配列番号2のbp3〜303からなる群から選択される第1の配列;ならびに配列番号15のbp2680〜2780;配列番号15のbp2630〜2830;配列番号15のbp2530〜2930;配列番号15のbp9071〜9171;配列番号15のbp9021〜9221;および配列番号15のbp8921〜9321からなる群から選択される第2の配列を含むDNAを含み、前記第1の配列および第2の配列が、ダイズイベントpDAB9582.814.19.1::pDAB4468.04.16.1の存在に特徴的である、方法。
- 前記昆虫がシュードプルシア・インクルデンス(Pseudoplusia includens)(ダイズシャクトリムシ)である、請求項1に記載の方法。
- 前記昆虫がアンチカルシア・ゲムマタリス(Anticarsia gemmatalis)(ハッショウマメイモムシ)である、請求項1に記載の方法。
- 前記昆虫がスポドプテラ・フルギペルダ(Spodoptera frugiperda)(ツマジロクサヨトウ)である、請求項1に記載の方法。
- ダイズ作物において雑草を防除する方法であって、グルホシネート除草剤、フェノキシ酢酸除草剤、ピリジルオキシ酢酸除草剤、またはそれらの組合せを、ダイズ作物を含む地域に施用するステップを含み、前記ダイズ作物が配列番号1のbp1385〜1415;配列番号1のbp1350〜1450;配列番号1のbp1300〜1500;配列番号1のbp1200〜1600;配列番号2のbp137〜168;配列番号2のbp103〜203;および配列番号2のbp3〜303からなる群から選択される第1の配列を有し、かつ配列番号15のbp2680〜2780;配列番号15のbp2630〜2830;配列番号15のbp2530〜2930;配列番号15のbp9071〜9171;配列番号15のbp9021〜9221;および配列番号15のbp8921〜9321からなる群から選択される第2の配列を有するDNAを含むダイズ植物を含み、前記配列がダイズイベントpDAB9582.814.19.1::pDAB4468.04.16.1の存在に特徴的である、方法。
- 配列番号1のbp1385〜1415;配列番号1のbp1350〜1450;配列番号1のbp1300〜1500;配列番号1のbp1200〜1600;配列番号2のbp137〜168;配列番号2のbp103〜203;および配列番号2のbp3〜303からなる群から選択される1つまたは複数の配列;ならびに配列番号15のbp2680〜2780;配列番号15のbp2630〜2830;配列番号15のbp2530〜2930;配列番号15のbp9071〜9171;配列番号15のbp9021〜9221;および配列番号15のbp8921〜9321からなる群から選択される1つまたは複数の配列を含む単離されたDNA配列。
- ダイズ植物を育種する方法であって、
第1の植物と第2のダイズ植物を交雑させて第3のダイズ植物を作出するステップであり、前記第1の植物が配列番号1の1385〜1415;配列番号1のbp1350〜1450;配列番号1のbp1300〜1500;配列番号1のbp1200〜1600;配列番号2のbp137〜168;配列番号2のbp103〜203;および配列番号2のbp3〜303からなる群から選択される1つまたは複数の配列、ならびにその相補物を含み、かつ配列番号15のbp2680〜2780;配列番号15のbp2630〜2830;配列番号15のbp2530〜2930;配列番号15のbp9071〜9171;配列番号15のbp9021〜9221;および配列番号15のbp8921〜9321からなる群から選択される1つまたは複数の配列、ならびにその相補物を含むDNAを含む、ステップと、前記第3のダイズ植物を、配列番号1のbp1385〜1415;配列番号1のbp1350〜1450;配列番号1のbp1300〜1500;配列番号1のbp1200〜1600;配列番号2のbp137〜168;配列番号2のbp103〜203;および配列番号2のbp3〜303からなる群から選択される1つまたは複数の配列およびその相補物;ならびに配列番号15のbp2680〜2780;配列番号15のbp2630〜2830;配列番号15のbp2530〜2930;配列番号15のbp9071〜9171;配列番号15のbp9021〜9221;および配列番号15のbp8921〜9321からなる群から選択される1つまたは複数の配列およびその相補物を含むDNAの存在についてアッセイするステップとを含む方法。 - 配列番号1のbp1385〜1415;配列番号1のbp1350〜1450;配列番号1のbp1300〜1500;配列番号1のbp1200〜1600;配列番号2のbp137〜168;配列番号2のbp103〜203;および配列番号2のbp3〜303からなる群から選択される少なくとも1つの配列およびその相補物を含み、かつ配列番号15のbp2680〜2780;配列番号15のbp2630〜2830;配列番号15のbp2530〜2930;配列番号15のbp9071〜9171;配列番号15のbp9021〜9221;および配列番号15のbp8921〜9321からなる群から選択される少なくとも1つの配列およびその相補物を含む接合部配列を含む単離されたDNA分子。
- シュードプルシア・インクルデンス(Pseudoplusia includens)(ダイズシャクトリムシ)に対して抵抗性であり、配列番号1のbp1385〜1415;配列番号1のbp1350〜1450;配列番号1のbp1300〜1500;配列番号1のbp1200〜1600;配列番号2のbp137〜168;配列番号2のbp103〜203;および配列番号2のbp3〜303からなる群から選択される少なくとも1つのヌクレオチド配列およびその相補物を有し、かつ配列番号15のbp2680〜2780;配列番号15のbp2630〜2830;配列番号15のbp2530〜2930;配列番号15のbp9071〜9171;配列番号15のbp9021〜9221;および配列番号15のbp8921〜9321からなる群から選択される少なくとも1つのヌクレオチド配列およびその相補物を有するDNAを含む、ダイズ植物またはその部位。
- 請求項9に記載の植物の種子。
- ダイズミール、ダイズ粉(soy flour)、ダイズタンパク質濃縮物、およびダイズ油(soy oil)からなる群から選択される生産品である、請求項5に記載のダイズ植物またはその部位に由来する組成物。
- ダイズの粒、種子、ミール、または粉において害虫を防除する方法であって、前記粒、種子、ミール、または粉が配列番号1のbp1385〜1415;配列番号1のbp1350〜1450;配列番号1のbp1300〜1500;配列番号1のbp1200〜1600;配列番号2のbp137〜168;配列番号2のbp103〜203;および配列番号2のbp3〜303からなる群から選択される1つまたは複数の配列およびその相補物;ならびに配列番号15のbp2680〜2780;配列番号15のbp2630〜2830;配列番号15のbp2530〜2930;配列番号15のbp9071〜9171;配列番号15のbp9021〜9221;および配列番号15のbp8921〜9321からなる群から選択される1つまたは複数の配列およびその相補物を含むDNAを含むことによって実証される、前記粒、種子、ミール、または粉にダイズイベントpDAB9582.814.19.1::pDAB4468.04.16.1を含めるステップを含む方法。
- ゲノム内に、配列番号1のbp1385〜1415;配列番号1のbp1350〜1450;配列番号1のbp1300〜1500;配列番号1のbp1200〜1600;配列番号2のbp137〜168;配列番号2のbp103〜203;配列番号2のbp3〜303からなる群から選択される第1のDNA配列;ならびに配列番号15のbp2680〜2780;配列番号15のbp2630〜2830;配列番号15のbp2530〜2930;配列番号15のbp9071〜9171;配列番号15のbp9021〜9221;および配列番号15のbp8921〜9321からなる群から選択される第2のDNA配列、ならびにその相補物を含むダイズ種子。
- 請求項13に記載のダイズ種子から生長させたダイズ植物。
- 花粉、胚珠、花、苗条、根、および葉からなる群から選択され、前記ダイズイベントpDAB9582.814.19.1::pDAB4468.04.16.1を含む、請求項14に記載のダイズ植物の部位。
- ダイズミール、ダイズ粉(soybean flour)、およびダイズ油(soybean oil)からなる群から選択される生産品である、請求項14に記載のダイズ植物またはその部位に由来する組成物。
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