JP2014504160A - ナマコの腸の自己消化による活物質の製造方法 - Google Patents

Abstract

【課題】
本発明は、ナマコの腸自身に具備する自己消化能力により活物質を製造する方法であって、本来の栄養成分をできるだけ保持するとともに、環境への汚染を減少する。加工処理のプロセスは合理的で、簡単であり、コストが低く、加工した製品は環境にやさしく汚染がないものである。
【解決手段】
ナマコの腸の自己消化による活物質の製造方法であり、ナマコの腸をホモジネートした後、紫外線で照射して誘導させ、所定の条件で内因性酵素の作用により自己消化し、自己消化の混合液について、遠心処理、凍結濃縮、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１５分離、凍結乾燥を経て活物質を製造する。ナマコの腸の自己消化による活物質は、淡黄色固体粉末で、無臭であり、ナマコの腸に特有の風味を有し、水に溶解し易く、吸湿性を有し、一定の生体外の抗酸化能を有し、機能材料として多種の機能的食品の製造に用いられる。

Description

本発明は、海洋の副産物の再加工分野に属し、同時に、自己消化、ゲルカラムクロマトグラフィー、及び真空凍結乾燥の技術分野に属する。

ナマコの腸は、ナマコの加工過程における副産物であり、その蛋白質の含有量が高く、約７０％（乾燥重量で計算する）に達することができ、活物質を製造する良好な原料である。中国では、ナマコの腸は、多くが廃棄物として捨てられ、利用率が極めて低く、資源の浪費及び環境の汚染をもたらしている。
ナマコの腸は、比較的に強い自己消化能力を有する。現在、自己消化技術を用いてナマコの腸から活物質を製造することに関する特許は報告されていない。ナマコの腸の自己消化に関する文献や報道は、主にその内因性酵素に対して分離、純化及び酵素特性の研究を行うことに集中している。日本学者は、日本の伝統的発酵食品である「塩辛」の製造方法を改善し、静水圧での食塩無添加によるナマコの腸の自己消化を促進しているが、ナマコの腸の自己消化による活物質の抽出及び分離製造に係るものではない。

本発明は、ナマコ加工における副産物であるナマコの腸の自己消化能力は比較的に強いが、同時に十分に利用されていないことに対し、本発明は、自己消化技術を用いてナマコの腸の活物質及びその自己消化の残渣の活物質を製造する製造方法を提供することを目的とする。

本発明に係る、ナマコの腸の自己消化による活物質の製造方法は、ナマコの腸を原料として、ホモジネートし、自己消化し、遠心処理により上澄液を取って、ナマコの腸の自己消化産物とし、当該産物は、さらに凍結濃縮の方法により原体積の１０〜２０％までに濃縮されるか、又は、真空凍結乾燥により水分含量が８％以下になるまで乾燥させることによって、製品の形式が異なるナマコの腸の活物質の粗製品を得ることができる。

ここで、上記自己消化の工程の好ましい方案として、ホモジネート後に得られたホモジネート液は、紫外線で照射された後、１〜４倍の体積で、ｐＨ４．０〜７．０のクエン酸とリン酸水素二ナトリウムの緩衝液を添加して、自己消化を行う。実際の状況に応じ、自己消化は、温度４〜１０℃の場合に４〜１２ｈ、又は、３５℃〜６０℃の場合に０．５〜４ｈ行われる。

好ましい方式で、処理量が少ない場合、紫外線照射は３０Ｗの紫外線ランプを選択し、０．５ｍの距離で５〜４０ｍｉｎ照射した後、自己消化を誘導することができ、処理量が大きい場合、ナマコの腸のホモジネート液をステンレス鋼槽内に置き、ホモジネート液の厚さが１〜２ｃｍであり、上方０．２〜０．５ｍの位置に紫外線ランプを置き、ホモジネート液の液面での紫外強度を６０〜１２０μＷ／ｃｍ２に制御し、５〜４０ｍｉｎ保持して、自己消化を誘導することができる。

また、上述の遠心処理により上澄液を取る工程は、２５００〜６０００ｒ／ｍｉｎで１０〜３０ｍｉｎ遠心処理し、又は、限外濾過の方式により１０ｋＤａ以下の成分を収集することが好ましい。

ナマコの腸の活物質の精製品を得るために、本発明は、ナマコの腸の活物質の粗製品を製造した後、分離、凍結乾燥により精製の活物質を製造する。

ここで、上述の分離の工程は、上記ナマコの腸の活物質の粗製品をセファデックスＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１５クロマトグラフィーカラムにサンプリングし、脱イオン水で洗い出し、流速を０．３〜０．５ｍＬ／ｍｉｎに制御し、主な成分（ピーク面積は各成分の総ピーク面積の７０〜８０％を占める）を収集することが好ましい。１,１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）系と還元能力測定系を用いて、主な成分が強いＤＰＰＨラジカル消去及び還元の能力を有することが証明されている。

また、上述の凍結乾燥の好ましい工程は、コールドトラップ温度が−３０〜−４５℃で、真空度が５０〜８０Ｐａである条件下で乾燥を行う。

本発明は、さらに、主にナマコの腸の自己消化の残渣の活物質に対して、ナマコの腸の利用率を向上を図った、ナマコの腸の自己消化による活物質の製造方法を提供する。具体的な過程としては、ナマコの腸を原料として、ホモジネートし、自己消化する。次に、上澄液を分離してナマコの腸の自己消化産物を取得し、同時に、残った残渣を用いて以下の処理を行う。即ち、２〜４倍体積の脱イオン水を添加して均一に混合し、９０〜１００℃で５〜１５ｍｉｎ加熱する。冷却後、５０℃、ｐＨ７．０で、１５００〜３０００Ｕ／ｇ蛋白の中性プロテアーゼ、例えば枯草菌１３９８を添加し、３０〜１８０ｍｉｎ酵素的加水分解する。酵素的加水分解が終了した後、酵素的加水分解液を９５〜１００℃で５〜１０ｍｉｎ加熱して酵素を失活させ、冷却後、２５００〜６０００ｒ／ｍｉｎで１０〜３０ｍｉｎ遠心処理して上澄液を取って、又は、限外濾過の方式により１０ｋＤａ以下の成分を収集して、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質となる。当該産物は、さらに凍結濃縮により原体積の１０〜２０％までに濃縮させるか、又は、真空凍結乾燥により水分含量が８％以下になるまで乾燥させることによって、製品の形式が異なるナマコの腸の自己消化の残渣の活物質の粗製品を得ることができる。

上記ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質の粗製品をセファデックスＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５クロマトグラフィーカラムにサンプリングし、脱イオン水で溶出し、流速を０．２〜０．４ｍＬ／ｍｉｎに制御し、ピーク面積が各成分の総ピーク面積の８０〜９５％を占める主な成分を収集する。最後に、コールドトラップ温度が−３０〜−４５℃で、真空度が５０〜８０Ｐａである条件下で、水分含量が８％以下になるまで凍結乾燥した後、精製活物質を製造した。

上述の残渣を用いて活物質を製造する自己消化工程の好ましい方案として、ホモジネート後に得られたホモジネート液は、紫外線で照射された後、１〜４倍の体積で、ｐＨ４．０〜７．０のクエン酸とリン酸水素二ナトリウムの緩衝液を添加して、自己消化を行う。また、好ましい方式では、処理量が少ない場合、紫外線照射は３０Ｗの紫外線ランプを選択し、０．５ｍの距離で５〜４０ｍｉｎ照射した後、自己消化を誘導することができ、処理量が大きい場合、ナマコの腸のホモジネート液をステンレス鋼槽内に置き、ホモジネート液の厚さが１〜２ｃｍであり、上方０．２〜０．５ｍの位置に紫外線ランプを置き、ホモジネート液の液面での紫外強度を６０〜１２０μＷ／ｃｍ２に制御し、５〜４０ｍｉｎ保持して、自己消化を誘導することができる。

本発明は、以下のような顕著な利点がある。
１．ナマコの加工過程における副産物の利用率を向上し、それに含有される栄養成分と機能因子を十分に開発するとともに、環境への汚染を減少している。加工処理後のナマコの腸の活物質は、一定の抗酸化能を有し、機能材料として多種の機能的製品の開発に用いられ、非常に大きい開発潜在力を有する。
２．本発明での自己消化とは、ナマコの腸自身に含まれる内因性酵素を用いて酵素的加水分解を行うことをいう。自己消化技術でナマコの腸の活物質を製造することによって、最大限にナマコの腸に含有される活性成分を保持し、より高品質の製品が得られる。同時に、ナマコの腸の自己消化後の残渣に対し、外因性酵素の酵素的加水分解で活物質を製造することにより、ナマコの腸を十分に利用することができる。
本発明の好ましいプロセスでのプロセスパラメータは、活物質製品の収率及び品質を向上することを目的とし、本発明のプロセスパラメータの条件下で、ナマコの腸の自己消化産物におけるＴＣＡ可溶性オリゴペプチドの含有量を、自己消化前の２〜３倍に向上し、自己消化の残渣の蛋白質は、変性処理、外因性酵素の酵素的加水分解を行った後、ペプチドの収率は１０〜３０％に達している。

本発明は、ナマコの腸の自己消化による活物質及びその自己消化の残渣の活物質を製造する製造方法を提供する。ナマコの腸の自己消化による活物質は、ナマコの腸を原料として、ホモジネート、自己消化、遠心処理、凍結濃縮、ゲルカラム分離、及び凍結乾燥により製造される。ナマコの腸の自己消化後の残渣の活物質は、変性前処理、外因性酵素の酵素的加水分解、遠心処理、凍結濃縮、ゲルカラム分離及び凍結乾燥の方式により製造される。この二種の栄養物質は、淡黄色固体粉末で、無臭であり、ナマコの腸に特有の風味を有し、水に溶解し易く、吸湿性を有し、一定の生体外の抗酸化能を有し、機能材料として多種の機能的食品の製造に用いられる。

１．ナマコの腸の自己消化による活物質の製造の具体的なプロセス工程は、以下の通りである。

（１）原料処理
新鮮なナマコからナマコの腸を取り出し、洗浄して泥砂及び不純物を除去し、直接にホモジネートして準備しておくか、又は−１５℃で凍結して準備しておく。

（２）自己消化
ナマコの腸に含まれる内因性酵素の作用により、異なる条件で自己消化を行う。ナマコの腸のホモジネート液は、紫外線（３０Ｗ、０．５ｍ）により５〜４０ｍｉｎ照射された後、１〜４倍体積のクエン酸とリン酸水素二ナトリウムの緩衝液（ｐＨ４．０〜７．０）を添加して、３５℃〜６０℃で０．５〜４ｈ、又は、４〜１０℃で４〜１２ｈ自己消化を行う。自己消化が終了した後、２５００〜６０００ｒ／ｍｉｎで１０〜３０ｍｉｎ遠心処理して上澄液を取り、又は、限外濾過の方式により１０ｋＤａ以下の成分を収集する。原体積の１０〜２０％までに真空凍結濃縮するか、又は直接に凍結乾燥して、ナマコの腸の自己消化による活物質の粗製品とする。
処理量が大きい場合、ナマコの腸のホモジネート液をステンレス鋼槽内に置き、ホモジネート液の厚さが１〜２ｃｍであり、上方０．２〜０．５ｍの位置に紫外線ランプを置き、ホモジネート液の液面での紫外強度を６０〜１２０μＷ／ｃｍ２に制御し、５〜４０ｍｉｎ保持して、自己消化を誘導し、次に、１〜４倍体積のクエン酸とリン酸水素二ナトリウムの緩衝液（ｐＨ４．０〜７．０）を添加し、上述の方法に従って自己消化を行うことができる。

（３）分離
ナマコの腸の活物質の粗製品をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１５ゲルカラムにサンプリングし、脱イオン水で溶出し、流速を０．３〜０．５ｍＬ／ｍｉｎに制御し、主な成分（ピーク面積は各成分の総ピーク面積の７０〜８０％を占める）を収集するとともに、脱塩という目的を達成する。

（４）乾燥
収集した活成分に対し凍結乾燥を行い、コールドトラップ温度が−３０〜−４５℃で、真空度が５０〜８０Ｐａであり、水分含量が８％以下になるまで凍結乾燥した後、ナマコの腸の自己消化による活物質を得る。

２．ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質の製造の具体的なプロセス工程は、以下の通りである。

（１）前処理
ナマコの腸の自己消化の産物を得た後、残渣を取って、２〜４倍体積の脱イオン水を添加して均一に混合し、９０〜１００℃で５〜１５ｍｉｎ加熱し、蛋白質変性処理を行い、冷却する。

（２）外因性酵素の酵素的加水分解
５０℃、ｐＨ７．０で、１５００〜３０００Ｕ／ｇ蛋白の中性プロテアーゼ（例えば枯草菌１３９８）を添加し、３０〜１８０ｍｉｎ酵素的加水分解する。酵素的加水分解が終了した後、酵素的加水分解液を９５〜１００℃で５〜１０ｍｉｎ加熱して酵素を失活させ、冷却後、２５００〜６０００ｒ／ｍｉｎで１０〜３０ｍｉｎ遠心処理して上澄液を取って、又は、限外濾過により１０ｋＤａ以下の成分を収集して、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質とする。当該産物は、さらに凍結濃縮の方法により原体積の１０〜２０％までに濃縮されるか、又は、真空凍結乾燥により水分含量が８％以下になるまで乾燥されるこれによって、製品の形式が異なるナマコの腸の自己消化の残渣の活物質の粗製品を得ることができる。

（３）分離
ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質の粗製品をセファデックスＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５クロマトグラフィーカラムにサンプリングし、脱イオン水で洗い出し、流速を０．２〜０．４ｍＬ／ｍｉｎに制御し、主な成分（ピーク面積が各成分の総ピーク面積の８０〜９５％を占める）を収集するとともに、脱塩という目的を達成する。

（４）乾燥
収集した活成分に対し凍結乾燥を行い、コールドトラップ温度が−３０〜−４５℃で、真空度が５０〜８０Ｐａであり、水分含量が８％以下になるまで凍結乾燥した後、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質を得る。

（実施例１）
１００ｇのナマコの腸を洗浄、せん断破砕、ホモジネートし、ホモジネート処理後、紫外線（３０Ｗ、０．５ｍ）を２５ｍｉｎ照射し、１．５倍体積のｐＨ５．０のリン酸水素二ナトリウムとクエン酸の緩衝液を添加し、４０℃で４ｈ自己消化する。自己消化が終了した後、３０００ｒ／ｍｉｎで２５ｍｉｎ遠心処理して上澄液を取り、残渣を準備する。上澄液は、原体積の１０％までに真空凍結濃縮させて、ナマコの腸の自己消化による活物質の粗製品とする。ナマコの腸の自己消化による活物質の粗製品をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１５ゲルカラムで分離し、流速を０．４ｍＬ／ｍｉｎに制御し、主な成分を収集して凍結乾燥を行う。コールドトラップ温度を−３０℃、真空度を８０Ｐａに調節し、水分含量が８％未満になるまで凍結乾燥した後、ナマコの腸の自己消化による活物質を得る。

ナマコの腸の自己消化の残渣に４倍体積の脱イオン水を添加して均一に混合し、１００℃で５ｍｉｎ加熱する。冷却後、５０℃、ｐＨ７．０で、１５００Ｕ／ｇ蛋白の枯草菌１３９８である中性プロテアーゼを添加し、１８０ｍｉｎ酵素的加水分解する。酵素的加水分解が終了した後、酵素的加水分解液を９５℃で１０ｍｉｎ加熱して酵素を失活させ、６０００ｒ／ｍｉｎで１０ｍｉｎ遠心処理して上澄液を取り、原体積の１０％までに凍結濃縮して、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質の粗製品とする。濃縮液をセファデックスＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５クロマトグラフィーカラムで分離し、脱イオン水で洗い出し、流速を０．２５ｍＬ／ｍｉｎに制御し、主な成分を収集して凍結乾燥を行い、コールドトラップ温度が−３０℃で、真空度が８０Ｐａであり、水分含量が８％未満になるまで凍結乾燥した後、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質を得る。二種の製品は、淡黄色固体粉末で、無臭であり、ナマコの腸に特有の風味を有し、水に溶解し易く、吸湿性を有し、一定の生体外の抗酸化能を有し、機能材料として多種の機能的食品の製造に用いられる。

（実施例２）
２００ｇのナマコの腸を洗浄、せん断破砕、ホモジネートし、ホモジネート処理後、紫外線（３０Ｗ、０．５ｍ）を４０ｍｉｎ照射し、３．５倍体積のｐＨ６．０のリン酸水素二ナトリウムとクエン酸の緩衝液を添加し、５０℃で３ｈ自己消化する。自己消化が終了した後、４０００ｒ／ｍｉｎで２０ｍｉｎ遠心処理して上澄液を取り、残渣を準備する。上澄液は、原体積の２０％までに真空凍結濃縮して、ナマコの腸の自己消化による活物質の粗製品とする。ナマコの腸の自己消化による活物質の粗製品をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１５ゲルカラムで分離し、流速を０．５ｍＬ／ｍｉｎに制御し、主な成分を収集して凍結乾燥を行う。コールドトラップ温度が−４５℃で、真空度が５０Ｐａであり、水分含量が８％未満になるまで凍結乾燥させた後、ナマコの腸の自己消化による活物質を得る。

ナマコの腸の自己消化の残渣に２倍体積の脱イオン水を添加して均一に混合し、９０℃で１５ｍｉｎ加熱する。冷却後、５０℃、ｐＨ７．０で、２０００Ｕ／ｇ蛋白の中性プロテアーゼを添加し、１２０ｍｉｎ酵素的加水分解する。酵素的加水分解が終了した後、酵素的加水分解液を１００℃で５ｍｉｎ加熱して酵素を失活させ、１０ｋＤａ限外濾過して分子量が１０ｋＤａ未満の成分を収集し、原体積の１５％までに凍結濃縮して、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質の粗製品とする。濃縮液をセファデックスＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５クロマトグラフィーカラムで分離し、脱イオン水で洗い出し、流速を０．３ｍＬ／ｍｉｎに制御し、主な成分を収集して凍結乾燥を行い、コールドトラップ温度が−４５℃で、真空度が５０Ｐａであり、水分含量が８％未満になるまで凍結乾燥した後、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質を得る。二種の製品は、淡黄色固体粉末で、無臭であり、ナマコの腸に特有の風味を有し、水に溶解し易く、吸湿性を有し、一定の生体外の抗酸化能を有し、機能材料として多種の機能的食品の製造に用いられる。

（実施例３）
１ｋｇのナマコの腸を洗浄、せん断破砕、ホモジネートし、ステンレス鋼槽内に置き、ホモジネート液の厚さが１〜２ｃｍであり、上方０．５ｍの位置に紫外線ランプを置き、ホモジネート液の液面での紫外強度を６０μＷ／ｃｍ２に制御し、１５ｍｉｎ保持して、自己消化を誘導する。次に、２倍体積のｐＨ４．０のリン酸水素二ナトリウムとクエン酸の緩衝液を添加し、４５℃で４ｈ自己消化する。自己消化が終了した後、３５００ｒ／ｍｉｎで２０ｍｉｎ遠心処理して上澄液を取り、残渣を準備する。上澄液は、原体積の１５％までに真空凍結濃縮して、ナマコの腸の自己消化による活物質の粗製品とする。ナマコの腸の自己消化による活物質の粗製品をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１５ゲルカラムで分離し、流速を０．３５ｍＬ／ｍｉｎに制御し、主な成分を収集して凍結乾燥を行う。コールドトラップ温度を−４５℃、真空度を６５Ｐａに調節し、水分含量が８％未満になるまで凍結乾燥した後、ナマコの腸の自己消化による活物質を得る。

ナマコの腸の自己消化の残渣に３倍体積の脱イオン水を添加して均一に混合し、９５℃で１０ｍｉｎ加熱する。冷却後、５０℃、ｐＨ７．０で、３０００Ｕ／ｇ蛋白の枯草菌１３９８である中性プロテアーゼを添加し、６０ｍｉｎ酵素的加水分解する。酵素的加水分解が終了した後、酵素的加水分解液を１００℃で５ｍｉｎ加熱して酵素を失活させ、１０ｋＤａ限外濾過して分子量が１０ｋＤａ未満の成分を収集し、原体積の１５％までに凍結濃縮して、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質の粗製品とする。濃縮液をセファデックスＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５クロマトグラフィーカラムで分離し、脱イオン水で洗い出し、流速を０．２５ｍＬ／ｍｉｎに制御し、主な成分を収集して凍結乾燥を行い、コールドトラップ温度が−４５℃で、真空度が６５Ｐａであり、水分含量が８％未満になるまで凍結乾燥した後、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質を得る。二種の製品は、淡黄色固体粉末で、無臭であり、ナマコの腸に特有の風味を有し、水に溶解し易く、吸湿性を有し、一定の生体外の抗酸化能を有し、機能材料として多種の機能的食品の製造に用いられる。

（実施例４）
５００ｇのナマコの腸を洗浄、せん断破砕、ホモジネートし、ホモジネート処理後、紫外線（３０Ｗ、０．５ｍ）を１０ｍｉｎ照射し、４倍体積のｐＨ４．０のリン酸水素二ナトリウムとクエン酸の緩衝液を添加し、６０℃で０．５ｈ自己消化する。自己消化が終了した後、４５００ｒ／ｍｉｎで１５ｍｉｎ遠心処理して上澄液を取り、残渣を準備する。上澄液は、原体積の２０％までに真空凍結濃縮して、ナマコの腸の自己消化による活物質の粗製品とする。ナマコの腸の自己消化による活物質の粗製品をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１５ゲルカラムで分離し、流速を０．４ｍＬ／ｍｉｎに制御し、主な成分を収集して凍結乾燥を行う。コールドトラップ温度が−３５℃で、真空度が７５Ｐａであり、水分含量が６％未満になるまで凍結乾燥した後、ナマコの腸の自己消化による活物質を得る。

ナマコの腸の自己消化の残渣に２倍体積の脱イオン水を添加して均一に混合し、１００℃で５ｍｉｎ加熱する。冷却後、５０℃、ｐＨ７．０で、２０００Ｕ／ｇ蛋白の中性プロテアーゼを添加し、１５０ｍｉｎ酵素的加水分解する。酵素的加水分解が終了した後、酵素的加水分解液を９５℃で１０ｍｉｎ加熱して酵素を失活させ、４５００ｒ／ｍｉｎで１５ｍｉｎ遠心処理して上澄液を取り、原体積の２０％までに真空凍結濃縮して、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質の粗製品とする。濃縮液をセファデックスＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５クロマトグラフィーカラムで分離し、脱イオン水で洗い出し、流速を０．３ｍＬ／ｍｉｎに制御し、主な成分を収集して凍結乾燥を行い、コールドトラップ温度が−３５℃で、真空度が７５Ｐａであり、水分含量が８％未満になるまで凍結乾燥した後、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質を得る。二種の製品は、淡黄色固体粉末で、無臭であり、ナマコの腸に特有の風味を有し、水に溶解し易く、吸湿性を有し、一定の生体外の抗酸化能を有し、機能材料として多種の機能的食品の製造に用いられる。

（実施例５）
３００ｇのナマコの腸を洗浄、せん断破砕、ホモジネートし、ホモジネート処理後、紫外線（３０Ｗ、０．５ｍ）を３０ｍｉｎ照射し、１倍体積のｐＨ５．０のリン酸水素二ナトリウムとクエン酸の緩衝液を添加し、３５℃で６ｈ自己消化する。自己消化が終了した後、５０００ｒ／ｍｉｎで１５ｍｉｎ遠心処理して上澄液を取り、残渣を準備する。上澄液は、原体積の２０％までに真空凍結濃縮して、ナマコの腸の自己消化による活物質の粗製品とする。ナマコの腸の自己消化による活物質の粗製品をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１５ゲルカラムで分離し、流速を０．５ｍＬ／ｍｉｎに制御し、主な成分を収集して凍結乾燥を行う。コールドトラップ温度を−４０℃、真空度を７０Ｐａに調節し、水分含量が６％未満になるまで凍結乾燥した後、ナマコの腸の自己消化による活物質を得る。

ナマコの腸の自己消化の残渣に４倍体積の脱イオン水を添加して均一に混合し、９０℃で１０ｍｉｎ加熱する。冷却後、５０℃、ｐＨ７．０で、１５００Ｕ／ｇ蛋白の中性プロテアーゼを添加し、１８０ｍｉｎ酵素的加水分解する。酵素的加水分解が終了した後、酵素的加水分解液を１００℃で５ｍｉｎ加熱して酵素を失活させ、５０００ｒ／ｍｉｎで１５ｍｉｎ遠心処理して上澄液を取り、上澄液を原体積の１５％までに真空凍結濃縮して、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質の粗製品とする。濃縮液をセファデックスＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５クロマトグラフィーカラムで分離し、脱イオン水で洗い出し、流速を０．４ｍＬ／ｍｉｎに制御し、主な成分を収集して凍結乾燥を行い、コールドトラップ温度が−４０℃で、真空度が７０Ｐａであり、水分含量が８％未満になるまで凍結乾燥した後、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質を得る。二種の製品は、淡黄色固体粉末で、無臭であり、ナマコの腸に特有の風味を有し、水に溶解し易く、吸湿性を有し、一定の生体外の抗酸化能を有し、機能材料として多種の機能的食品の製造に用いられる。

（実施例６）
１．５ｋｇのナマコの腸を洗浄、せん断破砕、ホモジネートし、ステンレス鋼槽内に置き、ホモジネート液の厚さが２ｃｍであり、上方０．３ｍの位置に紫外線ランプを置き、ホモジネート液の液面での紫外強度を１００μＷ／ｃｍ２に制御し、２０ｍｉｎ保持して、自己消化を誘導する。次に、３倍体積のｐＨ７．０のリン酸水素二ナトリウムとクエン酸の緩衝液を添加し、５０℃で２ｈ自己消化する。自己消化が終了した後、２５００ｒ／ｍｉｎで３０ｍｉｎ遠心処理して上澄液を取り、残渣を準備する。上澄液は、原体積の２０％までに真空凍結濃縮して、ナマコの腸の自己消化による活物質の粗製品とする。ナマコの腸の自己消化による活物質の粗製品をＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１５ゲルカラムで分離し、流速を０．３ｍＬ／ｍｉｎに制御し、主な成分を収集して凍結乾燥を行う。コールドトラップ温度を−４５℃、真空度を７０Ｐａに調節し、水分含量が６％未満になるまで凍結乾燥した後、ナマコの腸の自己消化による活物質を得る。

ナマコの腸の自己消化の残渣に２倍体積の脱イオン水を添加して均一に混合し、１００℃で５ｍｉｎ加熱する。冷却後、５０℃、ｐＨ７．０で、２５００Ｕ／ｇ蛋白の中性プロテアーゼを添加し、１２０ｍｉｎ酵素的加水分解する。酵素的加水分解が終了した後、酵素的加水分解液を９５℃で１０ｍｉｎ加熱して酵素を失活させ、２５００ｒ／ｍｉｎで３０ｍｉｎ遠心処理して上澄液を取り、上澄液を原体積の１０％までに凍結濃縮して、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質の粗製品とする。濃縮液をセファデックスＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５クロマトグラフィーカラムで分離し、脱イオン水で洗い出し、流速を０．３ｍＬ／ｍｉｎに制御し、主な成分を収集して凍結乾燥を行い、コールドトラップ温度が−４５℃で、真空度が７０Ｐａであり、水分含量が８％未満になるまで凍結乾燥した後、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質を得る。二種の製品は、淡黄色固体粉末で、無臭であり、ナマコの腸に特有の風味を有し、水に溶解し易く、吸湿性を有し、一定の生体外の抗酸化能を有し、機能材料として多種の機能的食品の製造に用いられる。

（実施例７）
８００ｇのナマコの腸を洗浄、せん断破砕、ホモジネートし、ホモジネート処理後、紫外線（３０Ｗ、０．５ｍ）を５ｍｉｎ照射し、４倍体積のｐＨ６．０のリン酸水素二ナトリウムとクエン酸の緩衝液を添加し、６０℃で０．５ｈ自己消化する。自己消化が終了した後、５５００ｒ／ｍｉｎで１０ｍｉｎ遠心処理して上澄液を取り、残渣を準備する。上澄液は、真空凍結濃縮して、ナマコの腸の自己消化による活物質の粗製品とする。ナマコの腸の自己消化による活物質の粗製品を水で溶解し、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１５ゲルカラムで分離し、流速を０．４５ｍＬ／ｍｉｎに制御し、主な成分を収集して凍結乾燥を行う。コールドトラップ温度を−３５℃、真空度を６０Ｐａに調節し、水分含量が６％未満になるまで凍結乾燥した後、ナマコの腸の自己消化による活物質を得る。

ナマコの腸の自己消化の残渣に３倍体積の脱イオン水を添加して均一に混合し、９０℃で１５ｍｉｎ加熱する。冷却後、５０℃、ｐＨ７．０で、３０００Ｕ／ｇ蛋白の中性プロテアーゼを添加し、１２０ｍｉｎ酵素的加水分解する。酵素的加水分解が終了した後、酵素的加水分解液を１００℃で５ｍｉｎ加熱して酵素を失活させ、１０ｋＤａ限外濾過して分子量が１０ｋＤａ未満の成分を収集し、原体積の１５％までに凍結濃縮して、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質の粗製品とする。濃縮液をセファデックスＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５クロマトグラフィーカラムで分離し、脱イオン水で洗い出し、流速を０．２５ｍＬ／ｍｉｎに制御し、主な成分を収集して凍結乾燥を行い、コールドトラップ温度が−３５℃で、真空度が６０Ｐａであり、水分含量が８％未満になるまで凍結乾燥した後、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質を得る。二種の製品は、淡黄色固体粉末で、無臭であり、ナマコの腸に特有の風味を有し、水に溶解し易く、吸湿性を有し、一定の生体外の抗酸化能を有し、機能材料として多種の機能的食品の製造に用いられる。

（実施例８）
２ｋｇのナマコの腸を洗浄、せん断破砕、ホモジネートし、ステンレス鋼槽内に置き、ホモジネート液の厚さが１ｃｍであり、上方０．５ｍの位置に紫外線ランプを置き、ホモジネート液の液面での紫外強度を１００μＷ／ｃｍ２にし、２０ｍｉｎ保持して、自己消化を誘導する。次に、４倍体積のｐＨ４．０のリン酸水素二ナトリウムとクエン酸の緩衝液を添加し、５５℃で１．５ｈ自己消化する。自己消化が終了した後、６０００ｒ／ｍｉｎで１０ｍｉｎ遠心処理して上澄液を取り、残渣を準備する。上澄液は、真空凍結濃縮して、ナマコの腸の自己消化による活物質の粗製品とする。次に、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１５ゲルカラムで分離し、流速を０．５ｍＬ／ｍｉｎに制御し、主な成分を収集して凍結乾燥を行う。コールドトラップ温度を−３５℃、真空度を６５Ｐａに調節し、水分含量が６％未満になるまで凍結乾燥した後、ナマコの腸の自己消化による活物質を得る。

ナマコの腸の自己消化の残渣に４倍体積の脱イオン水を添加して均一に混合し、９０℃で１５ｍｉｎ加熱する。冷却後、５０℃、ｐＨ７．０で、２０００Ｕ／ｇ蛋白の枯草菌１３９８である中性プロテアーゼを添加し、１８０ｍｉｎ酵素的加水分解する。酵素的加水分解が終了した後、酵素的加水分解液を９５℃で５ｍｉｎ加熱して酵素を失活させ、６０００ｒ／ｍｉｎで１０ｍｉｎ遠心処理して上澄液を取り、上澄液を原体積の１５％までに真空凍結濃縮して、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質の粗製品とする。濃縮液をセファデックスＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５クロマトグラフィーカラムで分離し、脱イオン水で洗い出し、流速を０．４ｍＬ／ｍｉｎに制御し、主な成分を収集して凍結乾燥を行い、コールドトラップ温度が−３５℃で、真空度が６５Ｐａであり、水分含量が８％未満になるまで凍結乾燥した後、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質を得る。二種の製品は、淡黄色固体粉末で、無臭であり、ナマコの腸に特有の不有無を有し、水に溶解し易く、吸湿性を有し、一定の生体外の抗酸化能を有し、機能材料として多種の機能的食品の製造に用いられる。

上述したものは本発明の好ましい具体的な実施の形態に過ぎないが、本発明の保護範囲はこれに限られず、当業者が本発明に開示されている技術的範囲において本発明の技術的手段及びその発明構想に基づいて同等の置換又は変更をして得られるものは、本発明の保護範囲に含まれる。

Claims (10)

1. ナマコの腸を原料として、ホモジネートし、自己消化し、上澄液を取り、原体積の１０〜２０％までに凍結濃縮させるか、又は、水分含量が８％以下になるまで真空凍結乾燥させることによって、ナマコの腸の活物質の粗製品を製造し、
   さらに、前記粗製品から分離、凍結乾燥により精製活物質を製造することを特徴とするナマコの腸の自己消化による活物質の製造方法。
2. 前記自己消化の工程では、
   ホモジネート後に得られたホモジネート液は、紫外線で照射された後、１〜４倍の体積で、ｐＨ４．０〜７．０のクエン酸とリン酸水素二ナトリウムの緩衝液を添加して、３５℃〜６０℃で０．５〜４ｈ自己消化し、又は、４〜１０℃で４〜１２ｈ自己消化することを特徴とする請求項１記載のナマコの腸の自己消化による活物質の製造方法。
3. 前記自己消化の工程では、
   ３０Ｗの紫外線ランプを選択して０．５ｍの距離で５〜４０ｍｉｎ照射して自己消化を誘導し、又は、
   ホモジネート液をステンレス鋼槽内に置き、上方０．２〜０．５ｍの位置に紫外線ランプを置き、ホモジネート液の液面での紫外強度を６０〜１２０μＷ／ｃｍ２に制御し、５〜４０ｍｉｎ保持して、自己消化を誘導することを特徴とする請求項２記載のナマコの腸の自己消化による活物質の製造方法。
4. 前記上澄液を取る工程では、
   ２５００〜６０００ｒ／ｍｉｎで１０〜３０ｍｉｎ遠心処理して上澄液を取り、又は、限外濾過の方式により１０ｋＤａ以下の成分を収集することを特徴とする請求項３記載のナマコの腸の自己消化による活物質の製造方法。
5. 前記分離の工程では、
   前記ナマコの腸の活物質の粗製品をセファデックスＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１５クロマトグラフィーカラムにサンプリングし、脱イオン水で洗い出し、流速を０．３〜０．５ｍＬ／ｍｉｎに制御し、ピーク面積が各成分の総ピーク面積の７０〜８０％を占める活成分を収集することを特徴とする請求項１〜４の何れか１項に記載のナマコの腸の自己消化による活物質の製造方法。
6. 前記凍結乾燥の工程では、コールドトラップ温度が−３０〜−４５℃で、真空度が５０〜８０Ｐａである条件下で乾燥を行うことを特徴とする請求項５記載のナマコの腸の自己消化による活物質の製造方法。
7. ナマコの腸を原料として、ホモジネートし、自己消化し、
   次に、残渣を取り、２〜４倍体積の脱イオン水を添加して均一に混合し、９０〜１００℃で５〜１５ｍｉｎ加熱し、冷却後、５０℃、ｐＨ７．０で、１５００〜３０００Ｕ／ｇ蛋白の中性プロテアーゼを添加し、３０〜１８０ｍｉｎ酵素的加水分解し、
   酵素的加水分解液を９５〜１００℃で５〜１０ｍｉｎ加熱して酵素を失活させ、冷却した後、２５００〜６０００ｒ／ｍｉｎで１０〜３０ｍｉｎ遠心処理し、
   その後、上澄液を取って、又は、限外濾過の方式により１０ｋＤａ以下の成分を収集して、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質を製造することを特徴とするナマコの腸の自己消化による活物質の製造方法。
8. 前記自己消化の工程では、
   ホモジネート後に得られたホモジネート液は、紫外線で照射された後、１〜４倍の体積で、ｐＨ４．０〜７．０のクエン酸とリン酸水素二ナトリウムの緩衝液を添加して、３５℃〜６０℃で０．５〜４ｈ自己消化し、又は、４〜１０℃で４〜１２ｈ自己消化し、
   前記紫外線による照射の工程においては、３０Ｗの紫外線ランプを選択して０．５ｍの距離で５〜４０ｍｉｎ照射して自己消化を誘導し、又は、ホモジネート液をステンレス鋼槽内に置き、ホモジネート液の厚さが１〜２ｃｍであり、上方０．２〜０．５ｍの位置に紫外線ランプを置き、ホモジネート液の液面での紫外強度を６０〜１２０μＷ／ｃｍ２に制御し、５〜４０ｍｉｎ保持して、自己消化を誘導することを特徴とする請求項７記載のナマコの腸の自己消化による活物質の製造方法。
9. 製造したナマコの腸の自己消化の残渣の活物質は、凍結濃縮により原体積の１０〜２０％までに濃縮させるか、又は、真空凍結乾燥により水分含量が８％以下になるまで乾燥させるこれによって、ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質の粗製品を得ることを特徴とする請求項７又は８記載のナマコの腸の自己消化による活物質の製造方法。
10. 前記ナマコの腸の自己消化の残渣の活物質の粗製品をセファデックスＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５クロマトグラフィーカラムにサンプリングし、脱イオン水で洗い出し、流速を０．２〜０．４ｍＬ／ｍｉｎに制御し、ピーク面積が各成分の総ピーク面積の８０〜９５％を占める主な成分を収集し、
    最後に、コールドトラップ温度が−３０〜−４５℃で、真空度が５０〜８０Ｐａである条件下で乾燥を行い、水分含量が８％以下になるまで凍結乾燥した後、精製活物質を製造することを特徴とする請求項９記載のナマコの腸の自己消化による活物質の製造方法。