JP2014183753A - 細胞培養容器 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】細胞培養容器1は、開口部11を有する容器本体10と、開口部11に着脱可能に取り付けられるキャップ20と、キャップ20に設けられ、液密性を有し、かつ、気体の流通を許容するガス透過領域22と、容器本体10の内部に配置され、培養細胞が接着可能なフィルム体30と、を備える。フィルム体30は、所定間隔をあけて互いに平行に延びる複数の折線31によりひだ状に折り畳まれた状態で容器本体10に収容されることが好ましい。
【選択図】図2
Description
一方、微小重力環境において同様の細胞培養容器を用いて細胞を培養した場合、細胞は、細胞培養容器の内面の全面に接着して増殖する。そのため、微小重力環境においては、細胞の分化を抑制すると共に、細胞の培養効率を向上させることもできる。
幹細胞を用いた再生医療技術が発展していく現状において、より効率的に細胞を培養できる細胞培養容器が求められている。
本発明の細胞培養容器1は、微小重力環境において好適に用いられる。微小重力環境とは、地上に比して極めて重力の小さい環境をいい、例えば、宇宙ステーションにおける環境(10−3G)や、重力分散型の模擬微小重力装置(例えば、特開2003−9852号公報参照)を用いて実現できる環境をいう。或いは、重力の影響を減少するという点から、上記の細胞培養容器は3次元培養システムであるRotary Cell Culture System(RCCS;シンセコン社)にも、好適に使用できる。
微小重力環境、或いはRCCSのような単軸の回転培養容器で実現できる重力の影響を減少する環境においては、細胞は、重力の影響を小さくすることができる。そのため、細胞は、水平面の上面のみではなく、細胞培養容器1の内部におけるすべての面に接着して増殖できる。
第1実施形態の細胞培養容器1は、図2及び図3に示すように、開口部11を有する容器本体10と、この容器本体10に着脱可能に取り付けられるキャップ20と、容器本体10の内部に収容されるフィルム体30と、を備える。
本体部12は、図4〜図6に示すように、平面視六角形形状の底壁部121と、この底壁部121の周縁である六つの辺からそれぞれ起立する側壁部122と、側壁部122の起立端に、底壁部121と平行に配置される上壁部123と、を備える。六つの側壁部122のうちの一の側壁部122には、開口が形成される。
第1実施形態では、図2及び図6に示すように、首部13は、側壁部122側の端部よりも開口部11側の端部が上壁部123側に位置するように若干傾斜して延びている。また、首部13の直径は、側壁部122の高さと略等しく構成される。
また、容器本体10の内面には、細胞の接着性を向上させるために、プラズマ放電等の電荷処理が施されていることが好ましい。
キャップ本体21は、容器本体10(首部13)の外周面に被嵌される筒状の被嵌部211と、この被嵌部211の一端側を塞ぐ端面部212と、を備える。被嵌部211の内面には、容器本体10(首部13)に形成されたねじ山131に対応する形状のねじ溝213が形成される。
ガス透過膜222は、液体を通さずに、二酸化炭素や酸素等の気体の流通を許容する。ガス透過膜222としては、ポリテトラフルオロエチレン(PTFE)、ポリエチレン、シリコーン樹脂、ポリ4−メチルペンテン−1、ポリイソプレン、ポリブタジエン、エチレン酢酸ビニル共重合体及びポリスチレン等のフィルムを、厚さ100μm程度の膜状に構成したものが挙げられる。
フィルム体30における隣り合って配置される2つの折線31の間の長さL1(図5参照)は、開口部11の直径以下となっている。この2つの折線31の間の長さL1は、容器本体10に収容するフィルム体30の表面積を多くする観点から、開口部11の直径と略等しいことが好ましい。
フィルム体30の厚さは、折り畳み性を良好に保つ観点から、好ましくは30μm〜150μm、より好ましくは50μm〜100μmである。
また、電荷処理を施したフィルム体30の表面における水の接触角は、細胞の接着性を向上させる観点から、室温(25℃)において、50度〜70度であることが好ましい。
まず、滅菌された状態の細胞培養容器1のキャップ20を取り外し、フィルム体30が収容された容器本体10に液体培地を充填し、次いで、細胞を播種する。その後、液体培地が充填され、細胞が播種された容器本体10にキャップ20を取り付ける。ここで、液体培地は、容器本体10に空気が残存しないように満たして充填することが好ましい。これにより、微小重力環境において細胞を培養する場合に、細胞と空気とが接触することを防げるので、容器本体10の内面の全面及びフィルム体30の全面に細胞を接着させられる。
次いで、細胞培養容器1を、例えば、図1に示すように模擬微小重力装置100に装着する等して微小重力環境におき、細胞を培養する。
培養した細胞を回収する場合には、まず、細胞培養容器1に充填された液体培地を除去し、その後、容器本体10にトリプシン等の細胞剥離剤を添加して、容器本体10及びフィルム体30に接着した細胞を剥離させる。
次いで、剥離させた細胞をピペット等を用いて遠心分離管に移し、例えば、1000rpm、4℃、5minの条件にて遠心分離を行う。
これにより、細胞培養容器1を用いて培養された細胞は回収される。
第2実施形態の細胞培養容器1Aは、容器本体10Aの形状、及び容器本体10Aの内部におけるフィルム体30の配置において第1実施形態と異なる。尚、第2実施形態以降の説明にあたって、同一構成要件については同一符号を付し、その説明を省略もしくは簡略化する。
円筒部14は、容器本体10Aの一端側、即ち、開口部11Aが形成された側に配置される。この円筒部14の開口部11A側の端部近傍の外周面には、ねじ山141が形成される。
縮径部15は、円筒部14における開口部11Aが形成された側と反対側の端部に配置される。この縮径部15は、基端側から先端側に向かって縮径した円錐形状に形成される。
キャップ本体21は、容器本体10の外周面に被嵌される筒状の被嵌部211と、この被嵌部211の一端側を塞ぐ端面部212と、を備える。被嵌部211の内面には、容器本体10(円筒部14)に形成されたねじ山121に対応する形状のねじ溝213が形成される。
より詳細には、フィルム体30は、ひだ状に折り畳まれた状態で、折線31の延びる方向が高さ方向となるように筒状に丸められて容器本体10に収容される。
第2実施形態では、ひだの高さH、つまり隣り合って配置される2つの折線31の間の長さは、円筒部14の半径r以下であり、より好ましくは、円筒部14の半径rの70%〜90%である(図11参照)。
10,10A 容器本体
11,11A 開口部
12 本体部
13 首部
14 円筒部
15 縮径部
20 キャップ
22 ガス透過領域
30 フィルム体
31 折線
Claims (10)
- 開口部を有する容器本体と、
前記開口部に着脱可能に取り付けられるキャップと、
前記キャップに設けられ、液密性を有し、かつ、気体の流通を許容するガス透過領域と、
前記容器本体の内部に配置され、培養細胞が接着可能なフィルム体と、を備える細胞培養容器。 - 前記フィルム体は、所定間隔をあけて互いに平行に延びる複数の折線によりひだ状に折り畳まれた状態で前記容器本体に収容される請求項1に記載の細胞培養容器。
- 前記容器本体は、
底壁部、該底壁部の周縁から起立する側壁部、及び該側壁部の起立端に前記底壁部と平行に配置される上壁部を有する本体部と、
一端側が前記側壁部に接続され他端側に前記開口部が形成される筒状の首部と、を備え、
前記フィルム体における隣り合って配置される2つの前記折線の間の長さは、前記開口部の径以下である請求項2に記載の細胞培養容器。 - 前記容器本体は、
一端側に前記開口部が形成される円筒部と、
前記円筒部の他端側に配置され、基端側から先端側に向かって縮径する縮径部と、を備える請求項1に記載の細胞培養容器。 - 前記フィルム体は、所定間隔をあけて互いに平行に延びる複数の折線によりひだ状に折り畳まれると共に、該複数の折線が前記容器本体の長手方向に沿って配置される請求項4に記載の細胞培養容器。
- 前記複数の折線が、該細胞培養容器を遠心する際に重力がかかる方向と平行である請求項5に記載の細胞培養容器。
- 前記フィルム体は、筒状に丸められた状態で前記容器本体の内部に収容される請求項5又は6に記載の細胞培養容器。
- 隣り合って配置される2つの前記折線の間の長さは、前記円筒部の半径以下である請求項7に記載の細胞培養容器。
- 前記フィルム体は、ポリエチレンテレフタレートフィルムにより構成される請求項1〜8のいずれかに記載の細胞培養容器。
- 前記フィルム体の表面には、電荷処理が施されている請求項1〜9のいずれかに記載の細胞培養容器。
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