JP2014052309A - 膜、基体及び細胞の採取方法 - Google Patents
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(ポリテトラヒドロフルフリルアクリレートの合成)
上記一般式(1)において、R1が水素である、ポリテトラヒドロフルフリルアクリレートを合成した。具体的には、テトラヒドロフルフリルアクリレート15gを1,4−ジオキサン60g中でアゾビスイソブチロニトリル(0.1質量%)を開始剤として、窒素バブリングしながら75℃で10時間重合を行った。重合反応終了後、n−ヘキサンに滴下し沈殿させ、生成物を単離した。生成物をテトラヒドロフランに溶解し、さらにn−ヘキサンを用いて2回精製を行い、一昼夜減圧乾燥した。無色透明で高粘度のポリマーが得られた。収率は76%であった。得られたポリマーをゲル浸透クロマトグラフィー(GPC)により解析した結果、数平均分子量が23,000で、分子量分布(Mw/Mn)が3.3であった。
ポンプ:PU Intelligent HPLC Pump (Jasco製)
カラム:GPC K804(昭和電工製、Shodex)
溶離液:クロロホルム
測定温度:室温
流量:1.0mL/分
検出器:Jasco RI−1530型RI(Jasco製)
(ニッケル基体の作製)
市販のチタン板上に、チタン板を陰極として電解ニッケルめっき用の電解浴(スルファミン酸ニッケル450g/L、塩化ニッケル5g/L、ホウ酸30g/Lの水溶液、55℃)中に浸し、陽極を同電解浴中に浸した。両極に電圧をかけて10μm厚になるようにニッケルめっきを行い、ニッケル基体を作製した。
(ニッケル基体の被覆及び確認)
実験例1で合成したポリマーをクロロホルムに溶解し、0〜1.0質量%の範囲で濃度の異なる複数のポリマー溶液を得た。各ポリマー溶液を、実験例2で作製したニッケル基体上に塗布(キャスト)し、溶媒を乾燥させて、ニッケル基体の表面を被覆(ニッケル基体の表面にポリマーの膜を形成)した。陽性対照として、ポリエチレンテレフタレート基体上に、40μLのポリマー溶液(ポリマーの濃度0.2wt/vol%)を塗布したものを使用した。これらの基体上で水の接触角を測定し、ポリマーで被覆されていることを確認した。接触角の測定には、接触角測定装置(エルマ、MODEL G−1−100)を使用した。純水2μlを各基体の表面に滴下し、30秒後の静的接触角を測定した。図2は、実験例3の結果を示すグラフである。横軸はポリマーの濃度を示し、縦軸は水の接触角を示す。図2中、Aはポリマーを被覆したニッケル基体の結果であり、Bはポリマーを被覆したポリエチレンテレフタレート基体(陽性対照)の結果である。
(基体の準備)
実験例1で合成したポリマーを、クロロホルムに溶解し4質量%溶液を得た。この溶液を、実験例2で作製したニッケル基体上に塗布し、溶媒を乾燥させて、ニッケル基体の表面をポリマーで被覆し、実施例1のニッケル基体を作製した。X線光電子分光(島津製作所、ESCA−1000)により、ニッケル基体由来のニッケルのピークが観測されず、ポリマー由来の炭素と酸素のピークが検出されたことから、ニッケル基体がポリマーを含む膜で被覆されていることを確認した。また、実験例2で作製したニッケル基体を比較例1のニッケル基体として使用した。
実施例1及び比較例1のニッケル基体上に、血清を10%添加した培地で10,000個/mLに調整した癌細胞懸濁液1.0mLをピペットで滴下し、37℃で60分間静置した。癌細胞として、ヒト線維肉腫細胞株HT−1080を使用した。続いて、生理緩衝食塩水を用いてリンスし、基体表面に接着した細胞の数をカウントした。カウントを容易にするために、ホルムアルデヒドで細胞を固定化後、4,6−diamino−2−phenylindole(DAPI)で細胞核を染色した。細胞核の数を、共焦点レーザー顕微鏡(オリンパスFV−1000)を用いてカウントし、細胞の数とした。
(基体の準備)
実験例4と同様に、実施例1及び比較例1のニッケル基体を使用して実験を行った。
実施例1及びポリマー被覆を行わない比較例1のニッケル基体上に、クエン酸ナトリウムで抗凝固したヒト新鮮多血小板血漿0.2mLをピペットで滴下し、37℃で60分間静置した。続いてリン酸緩衝溶液でリンスし、グルタルアルデヒドで固定した後、基体を走査型電子顕微鏡で観察し、1×104μm2の面積に接着した血小板数をカウントした。
Claims (9)
- 前記ポリマーの数平均分子量が10,000〜300,000であることを特徴とする請求項1に記載の膜。
- 癌細胞の採取用であることを特徴とする請求項1又は2に記載の膜。
- 少なくとも表面の一部に請求項1〜3のいずれか一項に記載の膜を備えることを特徴とする基体。
- 金属からなることを特徴とする請求項4に記載の基体。
- 前記金属は、銅、ニッケル、銅及びニッケルの合金並びにこれらの表面が金めっきされたものからなる群より選択されるものであることを特徴とする請求項5に記載の基体。
- 前記基体は、電気鋳造法によって形成されたものであることを特徴とする請求項5又は6に記載の基体。
- 請求項4〜7のいずれか一項に記載の基体を体液に接触させることにより体液中の細胞を基体に接着させるステップを含むことを特徴とする細胞の採取方法。
- 前記体液は、末梢血であることを特徴とする請求項8に記載の細胞の採取方法。
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JP2016052300A (ja) * | 2014-09-03 | 2016-04-14 | 日立化成株式会社 | 生体物質捕獲システム |
JP2017102038A (ja) * | 2015-12-02 | 2017-06-08 | 国立大学法人山形大学 | 癌細胞接着剤及び癌細胞の検出方法 |
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2012
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