JP2014006208A - 感知方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】水晶片31の表面に励振電極32A,32Bを形成すると共に、裏面側に励振電極33A、33Bを形成し、励振電極32A上に吸着層51を固定化する。試料液を吸着層51に供給すると、感知対象物Xが含まれているときには、前記対象物Xが前記吸着層51に捕捉される。次いで、第1の液体を供給すると、第1の液体に含まれる第1の増感物質71が前記対象物Xに結合する。続いて、第2の液体を供給すると、第2の液体に含まれる第2の増感物質81が第1の増感物質71と反応して不溶性物質82を生成し、当該不溶性物質82は電極32A上に沈降する。第1の増感物質71と不溶性物質82の質量に相当する分の質量増加が得られるため、これに対応して周波数変化が増幅される。
【選択図】図5
Description
しかしながら近年では、ピコオーダーやナノオーダー等の微量物質の計測が要請されており、一般的な抗原抗体反応を利用した感知装置では、振動数の変化量が微小であって高精度な分析に対応できないケースも出てきている。
前記試料液を吸着層に供給する工程と、
次に、前記対象物に結合する第1の増感物質を含む第1の液体を前記吸着層に供給する工程と、
次いで、前記第1の液体を前記吸着層から排出する工程と、
続いて、前記第1の増感物質と反応して不溶性物質を生成する第2の増感物質を含む第2の液体を前記吸着層に供給する工程と、
前記吸着層に液体を供給した後第2の液体を供給する前に、圧電振動子を発振させて発振回路の発振周波数に対応する第1の周波数信号を取得する工程と、
前記吸着層に第2の液体を供給してから、圧電振動子を発振させて発振回路の発振周波数に対応する第2の周波数信号を取得する工程と、を含むことを特徴とする。
このような試料液、第1の液体、第2の液体及び緩衝液は、例えばシリンジポンプ等に貯留されており、夫々所定の流量で供給路61a〜64a及び液体供給管15を介してセンサユニット1の液体供給領域17に供給される。また、液体排出管16の下流側には排液部65が設けられている。
次に、上述の感知装置を用いて行われる本発明の感知方法において、図5〜図8を参照して、感知対象物Xの有無を検出する場合を例にして説明する。先ず、水晶振動子3において、図5及び図6(a)に示すように、第1の励振電極32Aの表面に抗体Aを固定化して第1の吸着層51を形成すると共に、第2の励振電極32Bの表面に抗体Bを固定化して第2の吸着層52を形成する。次いで、この水晶振動子3をセンサユニット1内に収納して図2に示すように気密に一体化すると共に、配線基板2に形成された接続端子25〜27を介して振動領域3A、3Bと発振回路4A、4Bとを夫々電気的に接続する。
ここで、第1の液体の通流と第2の液体の通流との間に緩衝液を通流させるのは、第1の液体中のALPと第2の液体中のBCIP/NBTとの反応は速やかに進行するため、第1の液体と第2の液体とが通流する供給路や液体供給管15内でのこれらの反応を抑えるためである。
また、第1の吸着層51に第1の増感物質71を含む第1の液体を供給し、当該第1の液体を排出してから第2の増感物質81を含む第2の液体を供給すればよいので、簡易な手法で周波数変化を増幅することができる。さらに、薬剤は第1の増感物質71を構成する吸着成分72と反応成分73、及び第2の増感物質82のみであるので使用する薬剤が少なくて済み、予め調製する薬剤は第1の増感物質71のみであるため、調製作業も容易である。
この例においては、反応電極対91とリファレンス電極対92とが夫々別個のセンサユニット1A,1Bに設けられているので、反応電極対91側で生成した不溶性物質82がリファレンス電極側92に移動していくおそれがない。このため、より精度の高い計測を行うことができる。
センサユニット1内に試料液を供給してから、夫々のタイミングで取得した発振周波数を表2に示す。この発振周波数は、夫々のタイミングで取得した発振周波数と緩衝液を供給しているときに取得した発振周波数との差分を示したものである。
3 水晶振動子
3A,3B 振動領域
4 水晶センサ
4A,4B 発振回路
51 第1の吸着層
71 第1の増感物質
72 吸着成分
73 反応成分
81 第2の増感物質
82 不溶性物質
42 周波数測定部
Claims (6)
- 対象物を捕捉するための吸着層を備えた電極を圧電片に設けた圧電振動子を用い、当該圧電振動子を液体に接触させた状態で発振回路により発振させ、前記電極に付着した対象物の質量に応じた周波数の変化に基づいて、試料液中の対象物を感知する方法において、
前記試料液を吸着層に供給する工程と、
次に、前記対象物に結合する第1の増感物質を含む第1の液体を前記吸着層に供給する工程と、
次いで、前記第1の液体を前記吸着層から排出する工程と、
続いて、前記第1の増感物質と反応して不溶性物質を生成する第2の増感物質を含む第2の液体を前記吸着層に供給する工程と、
前記吸着層に液体を供給した後第2の液体を供給する前に、圧電振動子を発振させて発振回路の発振周波数に対応する第1の周波数信号を取得する工程と、
前記吸着層に第2の液体を供給してから、圧電振動子を発振させて発振回路の発振周波数に対応する第2の周波数信号を取得する工程と、を含むことを特徴とする感知方法。 - 前記試料液、第1の液体及び第2の液体は、前記吸着層の表面を通流するように供給することを特徴とする請求項1記載の感知方法。
- 前記第1の増感物質は、前記対象物と結合する吸着成分と、この吸着成分と結合し、前記第2の増感物質と反応して不溶性物質を生成する反応成分とを含むことを特徴とする請求項1又は2記載の感知方法。
- 前記第1の増感物質の吸着成分は前記対象物の抗体であり、前記第1の増感物質の反応成分はアルカリフォスファターゼ及び西洋ワサビペルオキシダーゼの少なくとも一方を含むことを特徴とする請求項3記載の感知方法。
- 前記第2の増感物質は、前記第1の増感物質の反応成分がアルカリフォスファターゼであるときには、5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリルリン酸とニトロブルーテトラゾリウムクロライドとの混合物、及びナフトールAS−BIリン酸の少なくとも一つを含むことを特徴とする請求項4記載の感知方法。
- 前記第2の増感物質は、西洋ワサビペルオキシダーゼであるときには、ジアミノベンジジン、3,3’,5,5’テトラメチルベンジジン及び3-アミノ-9-エチルカルバゾールの少なくとも一つを含むことを特徴とする請求項4記載の感知方法。
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