JP2013503622A5 - - Google Patents
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Description
本明細書で、RARファミリーメンバーおよびLrh1ファミリーメンバーなどの、その遺伝子生成物をコードするポリ核酸を含むファミリーメンバーおよびその遺伝子生成物への言及は、適切には、最適には本出願に記載される方法によって評価される通りに、それらが単独で、または他の因子と一緒に、本明細書で開示される体細胞からのiPSの形成を促進することができるという点で機能的に同等である、1つの種の中の同じ遺伝子/タンパク質ファミリーのメンバー、異なる種のファミリーメンバーおよびその変異体、例えば置換、欠失または付加を有するタンパク質を含む。そのような遺伝子産物には、アミノ酸またはヌクレオチドレベルで本発明によるNRFの配列と少なくとも70%、好ましくは少なくとも80%、90%または95%の相同性または同一性を有し、最適には本出願に記載される方法によって評価される通りに、単独で、または他の因子と一緒に、本明細書で開示される体細胞からのiPSの形成を促進することができる配列が含まれる。好ましくは、RARファミリーメンバーは、ヒト完全長野生型RarγまたはRarα配列である。好ましくは、LRH1ファミリーメンバーは、ヒト完全長野生型LRH1配列である。
Claims (15)
- 体細胞の核再プログラミングによって誘導多能性幹(iPS)細胞を調製する方法であって、体細胞を核再プログラミング因子(NRF)と接触させ、iPS細胞の形成を促進するステップを含み、前記因子は、
(i)RARγまたはRARαであるレチノイン酸受容体(RAR/RXR)ファミリーメンバーからの遺伝子産物、もしくはその遺伝子産物をコードするポリ核酸、またはそのアゴニスト、
(ii)Lrh1ファミリーメンバーからの遺伝子産物、またはその遺伝子産物をコードするポリ核酸、ならびに
(iii)Oct4タンパク質、またはそれをコードする核酸
を、
・C-MYCタンパク質、またはそれをコードする核酸；
・KLF4タンパク質、またはそれをコードする核酸、および
・SOX2タンパク質、またはそれをコードする核酸
の1つまたは複数と組み合わせて含み、iPS細胞が調製される、方法。 - RARγアゴニストがCD437である、またはRARαアゴニストがAM580である、請求項1に記載の方法。
- NRFが、RARγからの遺伝子産物またはその遺伝子産物をコードするポリヌクレオチド、およびLrh1ファミリーメンバーからの遺伝子産物またはその遺伝子産物をコードするポリヌクレオチドを含む、請求項1または2に記載の方法。
- NRFが、Rarg、Lrh1、Oct4、cMyc、Sox2およびKlf4を含む、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
- NRFが、NRFの成分をコードするポリ核酸を有するベクターを含む、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
- ベクターが、プラスミド、生ウイルスベクターもしくはトランスポゾンである、請求項5に記載の方法。
- (i)RARγまたはRARαであるレチノイン酸受容体(RAR/RXR)ファミリーメンバーからの遺伝子産物、もしくはその遺伝子産物をコードするポリ核酸、またはそのアゴニスト
(ii)Lrh1ファミリーメンバーからの遺伝子産物、またはその遺伝子産物をコードするポリ核酸、ならびに
(iii)Oct4タンパク質、またはそれをコードする核酸
を、
・C-MYCタンパク質、またはそれをコードする核酸；
・KLF4タンパク質、またはそれをコードする核酸、および
・SOX2タンパク質、またはそれをコードする核酸
の1つまたは複数と組み合わせて含む、核再プログラミング因子(NRF)。 - RARγアゴニストがCD437である、またはRARαアゴニストがAM580である、請求項7に記載のNRF。
- RARγからの遺伝子産物またはその遺伝子産物をコードするポリヌクレオチド、およびLrh1ファミリーメンバーからの遺伝子産物またはその遺伝子産物をコードするポリヌクレオチドを含む、請求項7または8に記載のNRF。
- Rarg、Lrh1、Oct4、cMyc、Sox2およびKlf4を含む、請求項7から9のいずれか一項に記載のNRF。
- NRFの成分をコードするポリ核酸を有するベクターを含む、請求項7から10のいずれか一項に記載のNRF。
- ベクターが、プラスミド、生ウイルスベクターもしくはトランスポゾンである、請求項11に記載のNRF。
- ・1つまたは複数の多能性マーカーの発現、
・FGFに依存しない増殖、
・継代後にスペクトル核型分析を用いて測定される、正常な核型を保持すること、
・マウスに注射されると、テラトーマを形成することが可能であること、
・oct4、nanogもしくはrex1の1つまたは複数のプロモーター領域の脱メチル化、
・二次的コロニーを形成することができる生存可能な単一細胞に細胞を解離することができること、
・M15+hLIF培地および/または2i+LIF培地での増殖、
・外来性再プログラミング因子の発現が不在であるかまたは微々たるものであること
・LIF培地中で50継代より長く継代を維持することができること
の少なくとも1つを特徴とする、請求項1から6のいずれかに記載の方法により得られる誘導ヒト多能性幹細胞。 - 多能性マーカーが、Oct4、Nanog、およびRex1から選択される、請求項13に記載の誘導多能性幹細胞。
- 外来性再プログラミング因子を含まない、請求項13または14に記載の誘導多能性幹細胞。
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