JP2013199501A

JP2013199501A - 保湿剤

Info

Publication number: JP2013199501A
Application number: JP2013144672A
Authority: JP
Inventors: Hiroyuki Taguchi; 浩之田口; Hiroko Takatoku; 博子高徳; Akiyo Kameyama; 明代亀山; Mitsuyuki Hotta; 光行堀田
Original assignee: Kao Corp
Current assignee: Kao Corp
Priority date: 2013-07-10
Filing date: 2013-07-10
Publication date: 2013-10-03

Abstract

【課題】皮膚表皮細胞及び毛母細胞のコレステロール合成を促進させ、皮膚・毛髪の保湿機能を改善させる保湿剤の提供。
【解決手段】ブッチャーブルーム又はその抽出物を有効成分とし、頭皮に適用される保湿剤。
【選択図】なし

Description

本発明は、皮膚表皮細胞及び毛母細胞のコレステロール合成を促進させ、皮膚・毛髪の保湿機能を改善させる保湿剤に関する。

コレステロールは広く動物細胞に存在する脂質であり、皮膚においては細胞膜の構成成分をなすとともに、表皮細胞から合成分泌され角質細胞間脂質として角質細胞間に独特のラメラ構造を形成している。また毛髪においてもコレステロールは細胞膜の構成成分をなすとともに、毛母細胞で合成され同様にラメラ構造を持つ毛髪の細胞膜複合体（ＣＭＣ）を形成している。角質細胞間脂質や毛髪細胞膜複合体はそれぞれ皮膚、毛髪の保湿、バリア、細胞間接着等の重要な機能を持っているが、コレステロールはセラミド、脂肪酸とともに角質細胞間脂質や毛髪細胞膜複合体の主成分としてこれらの機能を担っている。

一方、肌荒れや乾燥肌、アトピー性皮膚炎、老人性乾皮症、乾癬等の各種皮膚疾患においては健全な角質細胞間脂質の形成が妨げられ、皮膚の保湿機能やバリア機能の低下等を引き起こしていることが数多く報告されている。

このような皮膚疾患に対しては１）各種保湿成分の投与により皮膚の乾燥状態を防ぎ潤いを持たせる、２）角質細胞間脂質の主成分であるコレステロール、セラミド、脂肪酸等を外部から補給してバリア機能を回復させる、３）抗炎症剤による湿疹を抑制させる等の対処がなされていたが、これらの対処法では効果の持続性や経皮吸収性等の問題で不十分な点が多かった。

また、毛髪は洗髪、ブラッシング、ドライヤーによる熱、ブリーチ剤等による美容処理や、長時間の紫外線曝露、あるいは加齢等により損傷劣化し、その結果乾燥してぱさつき、枝毛、切れ毛等の増加および強度低下の原因につながることが知られている。

このような毛髪のぱさつき等においては、シリコーン油、パラフィン系オイル等の油分、低分子の多価アルコール、グリセリン等の保湿剤、天然物から抽出した各種原料を含有する毛髪化粧料を毛髪に塗布する対処がなされていた。しかし、これらの対処法は、単に毛髪表面を覆う、あるいは毛髪に塗布して毛髪内部に物質を補給するものであるため、効果の持続性が十分ではなかった。

しかるに、毛髪を内部から、すなわち、毛髪自身が持つ水分保持機能を向上させる髪質の改善技術については全く知られていなかった。

本発明の目的は、皮膚表皮細胞及び毛母細胞のコレステロール合成を促進させ、皮膚・毛髪のバリア機能及び保湿機能を改善させるコレステロール合成促進剤、及びこれを含有し毛髪のダメージを防ぎ、毛髪に柔軟性、しっとり感、なめらかさ、ツヤ、ハリ、コシを付与し、髪質を改善することができる毛髪化粧料を提供することにある。

本発明者らは、当該植物又はその抽出物が皮膚表皮細胞及び毛母細胞のコレステロール合成を促進させ、新たに発育してくる毛髪の内在コレステロール量を向上させ、結果として毛髪のダメージを防ぎ、毛髪に柔軟性、しっとり感、なめらかさ、ツヤ、ハリ、コシを付与し、髪質を改善できることを見出し、本発明を完成した。

本発明は、ブッチャーブルーム又はその抽出物を有効成分とし、頭皮に適用される保湿剤を提供するものである。

本発明の毛髪化粧料、コレステロール合成促進剤及び髪質改善剤は、皮膚表皮細胞自身や毛髪の毛母細胞自身のコレステロール合成を促進させ、皮膚・毛髪のバリア機能及び保湿機能を改善させることができ、又毛髪のダメージを防ぎ、毛髪に柔軟性、しっとり感、なめらかさ、ツヤ、ハリ、コシを付与し、髪質を改善することができる。

ヒトケラノサイトのコレステロール合成促進効果を示す図である。ラット毛器官培養のコレステロール合成促進効果を示す図である。角層のコレステロール量増加効果を示す図である。体毛のコレステロール量増加効果を示す図である。体毛の水分保持性能の増加効果を示す図である。

本発明のブッチャーブルームはユリ科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）のナギイカダＲｕｓｃｕｓａｃｕｌｅａｔｕｓＬ．、Ｒｕｓｃｕｓａｃｌｅａｔｕｓｖｅｒ．ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｓＢｏｓｓ．、ＲｕｓｃｕｓｈｙｐｏｇｌｏｓｓｕｍＬ．、ＲｕｓｃｕｓｈｙｐｏｐｈｙｌｌｕｍＬ．等のナギイカダ属（Ｒｕｓｃｕｓ）のすべての種を用いることができ、主としてその根茎、新芽、葉が用いられる。

キキョウはキキョウ科（Ｃａｍｐａｎｕｌａｃｅａｅ）のキキョウ（Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎｇｌａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ（Ｊａｃｑ．）Ａ．ＤＣ．）等のキキョウ属（Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎ）のすべての種を用いることができ、主としてその根が用いられる。

オランダガラシはアブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ）のオランダガラシＮａｓｔｕｒｔｉｕｍｏｆｆｉｃｉｎａｌｅＲ．Ｂｒ．であり、主としてその全草が用いられる。

レンゲソウはマメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）のゲンゲＡｓｔｒｅｇａｌｕｓｓｉｎｉｃｕｓＬ．であり、主としてその全草、種子が用いられる。

アロエはユリ科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）のケープアロエＡｌｏｅｆｅｒｏｘＭｉｌｌ．、ＡｌｏｅａｆｒｉｃａｎａＭｉｌｌ．、ＡｌｏｅｓｐｉｃａｔａＢａｋｅｒ、ソコトリンアロエＡｌｏｅｐｅｒｒｙｉＢａｋｅｒ、キュラソウアロエＡｌｏｅｖｅｒａＬ．、ナタールアロエＡｌｏｅｂａｉｎｅｓｉｉＴｈ．Ｄｙｅｒ．、ＡｌｏｅｓｕｃｃｏｔｒｉｎａＬａｍ．、ＡｌｏｅｍａｒｌｏｔｈｉｉＢｅｒｇｅｒ、キダチアロエＡｌｏｅａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓＭｉｌｌ．等が用いられ、主としてその葉が用いられる。

サイシンはウマノスズクサ科（Ａｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉａｃｅａｅ）のウスバサイシンＡｓｉａｓａｒｕｍｓｉｅｂｏｌｄｉｉＭｉｑ．、クロフネサイシンＡｓｉａｓａｒｕｍｄｉｍｉｄｉａｔｕｍＦ．Ｍａｅｋａｗａ、ケイリンサイシンＡｓｉａｓａｒｕｍｈｅｔｅｒｏｔｒｏｐｏｉｄｅｓｖａｒ．ｍａｎｄｓｈｕｒｉｃｕｍＦ．Ｍａｅｋａｗａ、ウスゲサイシンＡｓｉａｓａｒｕｍｈｅｔｅｒｏｔｒｏｐｏｉｄｅｓｖａｒ．ｓｅｏｕｌｅｎｓｅＦ．Ｍａｅｋａｗａであり、主としてその根、根茎、全草が用いられる。

コメはイネ科（Ｐｏａｃｅａｅ）のイネＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．であり、主としてその種子が用いられる。

ゲンチアナはリンドウ科（Ｇｅｎｔｉａｎａｃｅａｅ）のゲンチアナＧｅｎｔｉａｎａｌｕｔｅａＬ．であり、主としてその根、根茎が用いられる。

ジオウはゴマノハグサ科（Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｃｅａｅ）のアカヤジオウＲｅｈｍａｎｎｉａｇｌｕｔｉｎｏｓａＬｉｂｏｓｃｈ．であり、主としてその根が用いられる。

カッコンはマメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）のクズＰｕｅｒａｒｉａｌｏｂａｔａＯｈｗｉであり、主としてその根が用いられる。

スイカズラはスイカズラ科（Ｃａｐｒｉｆｏｌｉａｃｅａｅ）のスイカズラＬｏｎｉｃｅｒａｊａｐｏｎｉｃａＴｈｕｎｂ．であり、主としてその葉、茎が用いられる。

グレープフルーツはミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）のグレープフルーツＣｉｔｒｕｓｐａｒａｄｉｓｉＭａｃｆ．であり、主としてその果実、種子、葉が用いられる。

トウニンはバラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）のモモＰｒｕｎｕｓｐｅｒｓｉｃａ（Ｌ．）Ｂａｔｓｃｈ．、ノモモＰｒｕｎｕｓｐｅｒｓｉｃａｖａｒ．ｄａｖｉｄｉａｎａＭａｘｉｍ．であり、主としてその種子が用いられる。

クマザサはイネ科（Ｐｏａｃｅａｅ）のクマザサＳａｓａｖｅｉｔｃｈｉｉ（Ｃａｒｒ．）Ｒｅｈｄ．であり、主としてその葉が用いられる。

キョウニンはバラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）のホンアンズＰｒｕｎｕｓａｒｍｅｎｉａｃａＬ．、アンズＰｒｕｎｕｓａｒｍｅｎｉａｃａｖａｒ．ａｎｓｕＭａｘｉｍ．、マンシュウアンズＰｒｕｎｕｓｍａｎｄｓｈｕｒｉｃａＫｏｅｈｎｅ．、モウコアンズＰｒｕｎｕｓｓｉｂｉｒｉｃａＬ．であり、主としてその種子が用いられる。

エイジツはバラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）のノイバラＲｏｓａｍｕｌｔｉｆｌｏｒａＴｈｕｎｂ．、カラフトイバラＲｏｓａｄａｖｕｒｉｃａＰａｌｌａｓ．、テリハノイバラＲｏｓａｗｉｃｈｕｒａｉａｎａＣｒｅｐ．であり、主としてその偽果が用いられる。

本発明で用いる植物は各種の薬効を有することが知られているものであるが、これらがコレステロール合成促進効果を有すること、又髪質改善効果を有することはについては全く知られていなかった。尚、ここでいう髪質改善とは毛髪の柔軟性、しっとり感、なめらかさ、ツヤ、ハリ、コシ等の性質のうちいずれか一以上を向上させることをいう。

本発明の毛髪化粧料、コレステロール合成促進剤及び髪質改善剤の有効成分である上記植物は、その植物の全草又は葉、根、根茎、果実、種子、花のうちの１以上をそのまま又は粉砕して用いる。また、本発明において抽出物とは、更にこれを常温又は加温下にて抽出するか又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出することにより得られる各種溶剤抽出液、その希釈液、その濃縮液又はその乾燥末を意味するものである。ここで抽出物は、２種以上の植物から得られた混合物であってもよい。

抽出に用いる溶剤としては水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及ぴ環状エーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ピリジン類などが挙げられ、これらを単独又は混合物として用いることができる。

また、液々分配等の技術により、上記抽出物から不活性な爽雑物を除去して用いることもでき、本発明においてはこのようなものを用いることが好ましい。これらは、必要により公知の方法で脱臭、脱色等の処理を施してから用いてもよい。

当該植物又はその抽出物は、本発明のコレステロール合成促進剤及び髪質改善剤としてそのまま用いることもできるが、当該抽出物を希釈調製して又は濃縮若しくは凍結乾燥した後、粉末又はペースト状に調製して、用いることもできる。

本発明のコレステロール合成促進剤及び髪質改善剤を毛髪化粧料に用いる場合には、当該毛髪化粧料中の上記植物の含有量は、一般的に０．１〜２０重量％とすることが好ましく、特に０．５〜１０重量％とすることが好ましい。一方、植物抽出物の含有量は、原料植物により異なるが、一般的に固形分換算で０．００００１〜１０重量％とすることが好ましく、特に０．０００１〜５重量％とすることが好ましい。

本発明のコレステロール合成促進剤を皮膚（頭皮を除く）に用いる場合には、当該皮膚化粧料中の上記植物の含有量は、一般的に０．１〜２０重量％とすることが好ましく、特に０．５〜１０重量％とすることが好ましい。一方、植物抽出物の含有量は、原料植物により異なるが、一般的に固形分換算で０．００００１〜１０重量％とすることが好ましく、特に０．０００１〜５重量％とすることが好ましい。

本発明の毛髪化粧料、コレステロール合成促進剤及び髪質改善剤は、種々の形態の製剤とすることができるが、通常は、医薬品、医薬部外品、化粧品等の外用剤として用いることが好ましい。

本発明の毛髪化粧料、コレステロール合成促進剤及び髪質改善剤の剤型は、水溶液、エタノール溶液、エマルジョン、サスペンジョン、ゲル、固型、エアゾール、粉末剤等が挙げられる。頭皮及び毛髪に適用する場合の形態としてはシャンプー、リンス、トリートメント、コンディショナー、ヘアリキッド、ヘアトニック、養毛剤、育毛剤、ヘアスプレー等が挙げられ、中でも養毛剤、育毛剤、コンディショナー、ヘアリキッド、ヘアトニックとして用いることが効果の点から好ましい。また、コレステロール合成促進剤を皮膚（頭皮を除く）に適用する場合は、その形態として軟膏、ローション、クリーム、美溶液、化粧水、マッサージ剤、パック、ファンデーション、口紅、入浴剤、カプセル剤、錠剤、座剤、注射剤、貼付剤等が挙げられ、軟膏、ローション、クリーム、美溶液、化粧水、マッサージ剤、パック、ファンデーション、口紅として用いることが効果の点から好ましい。

本発明の毛髪化粧料、コレステロール合成促進剤及び髪質改善剤には溶剤、分散媒、軟化剤、粉体、油、油状物質、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、紫外線吸収剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等の種々の公知の添加剤を加えることもできる。

さらに本発明の毛髪化粧料、コレステロール合成促進剤及び髪質改善剤には、それぞれの目的に応じて薬効成分（鎮痛消炎剤、鎮痒剤、殺菌消毒剤、収敏剤、皮膚軟化剤、ホルモン剤等）、界面活性剤、Ｗ／Ｏ又はＯ／Ｗ型乳化剤、シリコーン系油剤用の乳化剤（ポリエーテル変性シリコーン、ポリエーテル・アルキル変性シリコーン、グリセリルエーテル変性シリコーン等）、乳化安定剤、キレート剤、増粘剤（メチルセルロール、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリアクリル酸、トラガント、寒天、ゼラチン等）、美白剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、保湿剤、色素類、香料等を適宜配合することができる。

本発明の毛髪化粧料、コレステロール合成促進剤及び髪質改善剤は、頭皮及び毛髪に適用することにより毛母細胞に直接働いて毛母細胞自身のコレステロール合成を促進させる。これにより、新たに発育してくる毛髪の細胞膜複合体中のコレステロール量が向上し、毛髪ダメージを防ぎ、毛髪の柔軟性、しっとり感、なめらかさ、ツヤ、ハリ、コシの向上等の髪質の改善を図ることができる。また、コレステロール合成促進剤は皮膚に適用することにより皮膚表皮細胞のコレステロール合成を促進させ、皮膚のバリア機能及び保湿機能を改善することができ、荒れ肌改善、及び皮膚老化防止作用が期待される。

製造例１ブッチャーブルーム抽出物の製造
ナギイカダ（ＲｕｓｃｕｓａｃｕｌｅａｔｕｓＬ．）の乾燥根茎を細切し、その１０ｇに３０ｖｏｌ％エタノール水溶液１００ｍＬを加え、室温下時々攪拌しながら２４時間抽出した後、濾過した。これに水１００ｍＬを加え、４０℃で減圧下、約７０ｍＬまで濃縮した。この操作を３回行った後、水及びエタノールを加えて、エタノール濃度を３０ｖｏｌ％濃度に調整し、全体を１００ｍＬとした抽出物を得た（固形分１．２２％）。

製造例２キキョウ抽出物の製造
キキョウ（Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎｇｌａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ（Ｊａｃｑ．）Ａ．ＤＣ．）の乾燥根を細切し、その１０ｇに５０ｖｏｌ％エタノール水溶液１００ｍＬを加え、室温下時々攪拌しながら２４時間抽出した後、濾過した。これに水１００ｍＬを加え、４０℃で減圧下、約７０ｍＬまで濃縮した。この操作を３回行った後、水及びエタノールを加えて、エタノール濃度を５０ｖｏｌ％濃度に調整し、全体を１００ｍＬとした抽出物を得た（固形分５．７９％）。

製造例３オランダカラシ抽出物の製造
オランダガラシ（ＮａｓｔｕｒｔｉｕｍｏｆｆｉｃｉｎａｌｅＲ．Ｂｒ．）の乾燥全草を細切し、その１０ｇに５０ｖｏｌ％エタノール水溶液１００ｍＬを加え、室温下時々攪拌しながら２４時間抽出した後、濾過した。これに水１００ｍＬを加え、４０℃で減圧下、約７０ｍＬまで濃縮した。この操作を３回行った後、水及びエタノールを加えて、エタノール濃度を５０ｖｏｌ％濃度に調整し、全体を１００ｍＬとした抽出物を得た（固形分０．１８％）。

製造例４その他の植物抽出物の製造
その他の植物についても同様に、全草、葉、根、根茎、果実、種子又は花を細切し、その１０ｇに適宜濃度調整した水とエタノールの混液、若しくは水と１，３−ブタンジオールの混液１００ｍＬを加え、室温下時々攪拌しながら２４時間抽出した後、濾過した。これに水１００ｍＬを加え、４０℃で減圧下、約７０ｍＬまで濃縮した。この操作を３回行った後、水及びエタノール、若しくは１，３−ブタンジオールを加えて、エタノール濃度、１，３−ブタンジオール濃度を適宜調整し、全体を１００ｍＬとした抽出物を得た。

実施例１コレステロール合成促進試験（細胞培養系）
＜ケラチノサイトの培養＞
正常ヒト新生児包皮由来表皮角化細胞（ＫＫ−４００９、ＳｔｒａｉｎＮｏ：８Ｃ０５０９、クラボウ）を試験に用いた。６穴プレートに細胞を播き込み、６０〜８０％コンフルエントになるまで２ｍＬのケラチノサイト−ＳＦＭ培地で培養した。培養は５％ＣＯ₂、３７℃条件下でおこなった。
＜ｄｅｎｏｖｏコレステロール合成アッセイ＞
６０〜８０％コンフルエントに達した細胞はアッセイに用いるため、実験開始２４時間前に２ｍＬの添加剤不含のケラチノサイト−ＳＦＭ培地（ケラチノサイト−ＳＦＭ（−）培地）に交換し、馴化させた。アッセイは、培地を新しい１ｍＬのケラチノサイト−ＳＦＭ（−）培地に交換し、２０μＬの［１−¹⁴Ｃ］−酢酸ナトリウム溶液、及び１０μＬ（１ｖｏｌ％濃度）の上記植物抽出物を直接培地に添加することで開始した。［１−¹⁴Ｃ］−酢酸ナトリウム溶液は［１−¹⁴Ｃ］−無水酢酸ナトリウム粉末（ＮＥＣ−０８４、２５０μＣｉ、２ｍＣｉ／ｍｍｏｌ、第一化学）を２ｍＬのケラチノサイト−ＳＦＭ（−）培地で溶解したものとした。
上記植物抽出物を添加して１８時間培養した後、培地を吸引除去し、ＰＢＳ（−）で細胞を２回洗浄した。その後、１ウェルあたり０．５ｍＬの０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を添加して反応を停止した。このまま室温で数分間放置することで細胞を溶解し、分析に用いるまで−２０℃に保存した。
３００μＬの細胞溶解液を１０ｍＬ容蓋付きガラスチューブにとり、ここに１ｍＬの２０ｗ/ｖ％ＫＯＨ−エタノール溶液を添加し、水浴中で８５℃、３時間処理した。放冷後、０．５ｍＬの蒸留水を添加し、１ｍＬの石油エーテルで２回抽出した。抽出液は別の１０ｍＬ容蓋付きガラスチューブにとり、窒素気流下で乾固した。抽出物に２ｍＬのアセトン／エタノール（１：１）、１０μＬの１０ｖｏｌ％酢酸水溶液、及びキャリアステロールとして１００μＬの２ｍｇコレステロール／ｍＬアセトン／エタノール（１：１）溶液を添加して溶解し、ここに１ｍＬの１ｗ/ｖ％ジギトニン（Ｄ−５６２８、Ｓｉｇｍａ）／５０ｖｏｌ％エタノール溶液を添加してそのまま密栓して室温下、一夜放置した。翌日ガラスチューブを遠心した後、上清を吸引除去し、２ｍＬのアセトン／エーテル（１：２）、及び２ｍＬのエーテルで沈殿を洗浄した。このジギトニン／ステロール沈殿物を窒素気流下で乾固させた後、再び１．５ｍＬの酢酸／メタノール（１：１）溶液で溶解し、標準液シンバイアルに回収した。これに１０ｍＬの液シンカクテル（Ａｑｕａｓｏｌ−２、Ｐａｃｋａｒｄ）を加えて混合し、液体シンチレーションカウンタ（２５５０ＴＲ／ＬＬ、Ｐａｃｋａｒｄ）で放射活性を測定した。
ｄｅｎｏｖｏコレステロール合成量は［１−¹⁴Ｃ］−酢酸のステロール画分への取込み量で表し、細胞全タンパク量で標準化した（ｄｐｍ／ｍｇｐｒｏｔｅｉｎ）。細胞タンパク量の測定には５０μＬの細胞溶解液を用い、ＢＣＡＰｒｏｔｅｉｎＡｓｓａｙＲｅａｇｅｎｔ（Ｐｉｅｒｃｅ）によって求めた。

＜結果＞
コントロールを１００としてコレステロール合成促進率を算出した結果を図１に示す。図１から明らかなように、いずれのエキスにおいてもヒトケラチノサイトに対するコレステロール合成促進効果が認められた。

実施例２コレステロール合成促進試験（毛器官培養系）
＜方法＞
生後３日齢のＳＤラット新生仔を氷中屠殺し、ヒビテン液で体表面を洗浄した後、無菌的に髭器官を摘出し培養に用いた。髭器官の摘出部位は眼側近位の縦２列とし、左右それぞれ各８本の髭器官を摘出した。得られた髭器官はＲＰＭＩ１６４０培地にて洗浄し、組織培養用プラスチックシャーレで培養した。シャーレ中央部の穴の上にステンレス製メッシュをのせ、その上に１シャーレあたり８本（１匹の片頬分）の髭器官をのせ、組織が浸る程度（約０．７ｍＬ）に培地を加えた。培地は、１．２５ｍＭ酢酸ナトリウム（２．５μＣｉ／ｍＬ［１−¹⁴Ｃ］−酢酸ナトリウム）を含むＲＰＭＩ１６４０培地とした。１匹のラットから２シャーレ分（左右の髭器官）を調製し、一方をコントロール、もう片方をサンプル添加とした。サンプルはブッチャーブルーム抽出物とし、培地に１ｖｏｌ％濃度になるように添加した。培養は通常の５％ＣＯ₂、３７℃条件下でおこない、５日間培養した。
毛伸長量測定のため、培養開始直後、及び５日間の培養終了時にシャーレを実体顕微鏡下に移し、毛包をステンレス製メッシュの升目とともに写真撮影した。培養終了後、実体顕微鏡下で髭器官を毛包部と毛シャフト部に分離し、毛シャフト部のみをコレステロール合成アッセイに用い、実施例１と同様の方法でコレステロール生合成量を測定した。コレステロール生合成量は単位伸長量あたりに換算して表した。

＜結果＞
毛シャフト単位伸長量あたりのコレステロール合成量を図２に示す。ブッチャーブルーム抽出物は毛シャフト単位伸長量あたりのコレステロール量を有意に増加させた。このことから、ブッチャーブルーム抽出物は毛母細胞にもケラチノサイトと同様に作用してコレステロールの合成を促進し、合成されたコレステロールが毛シャフト部に蓄積されることが判明した。

実施例３コレステロール合成促進試験（動物試験）
＜動物試験＞
１０匹の７週齢（♂）白色モルモットの背部体毛をバリカンで毛刈りし、サンプル塗布部位として左右それぞれ３×７ｃｍの部分をマーキングした。塗布サンプルは３ｖｏｌ％濃度のブッチャーブルーム抽出物、及び基剤のみのコントロールとした。
本発明品（ｖ／ｖ）コントロール品（ｖ／ｖ）
ブッチャーブルーム抽出物３％エタノール６０％
エタノール６０％水４０％
水３７％
右側背部は本発明品、左側背部はコントロール品を毛刈りの日から毎日１回、それぞれ０．３ｍＬずつを塗布した。４日目に再度毛刈りをおこない、さらに１０日間連続して塗布した。塗布終了後、モルモットを屠殺し、背部皮膚を回収し、サンプル塗布部位の範囲内で３×６ｃｍの皮膚を正確に切り取り、再生毛を毛刈りし回収した。
＜角層コレステロール量の測定＞
切り取った皮膚は直ちに６０℃の温浴中に６０秒間浸漬し、表皮を分離した。表皮は更に０．５ｗ/ｖ％濃度のトリプシン（Ｔ７４０９、Ｓｉｇｍａ）溶液に移し、３７℃で１時間処理し、角層を分離した。得られた角層は凍結乾燥し、その重量を測定した後、Ｂｌｉｇｈ−Ｄｙｅｒ法（クロロホルム：メタノール：水＝４：４：３．６）による脂質抽出を行った。角層脂質抽出液は２０ｃｍ×２０ｃｍのシリカゲル薄層クロマログラフィープレート（Ｍｅｒｃｋ，１．１１７９８）にアプライし、クロロホルム／メタノール／水（１００：１０：０．５）で３ｃｍ（２回繰り返す）、ヘキサン／酢酸（８０：１０）で１２ｃｍ、ついで石油エーテルで１５ｃｍ展開した。その後プレートを乾燥し、１０ｗ/ｖ％硫酸銅・８ｗ/ｖ％リン酸水溶液に浸漬・乾燥したのち、１８０℃のホットプレート上で発色させ、デンシトメーター（ＡＴＴＯ，Ｌａｎｅ＆ＳｐｏｔＡｎａｌｙｚｅｒＶｅｒ５．０１ｈ）でコレステロール量を求めた。

＜結果＞
角層重量当たりのコレステロール量を図３に示す。図３から明らかなように本発明品を塗布した角層中のコレステロール量が増加していることが認められた。

実施例４コレステロール合成促進試験（動物試験）
＜毛内在コレステロール量の測定＞
実施例３で得られた再生毛は２０ｍＬの蒸留水で２０分間洗浄したのち、さらに１０ｍＬのヘキサンで２分間洗浄して表面の汚れを除去した。これをさらに蒸留水で軽く濯ぎ、そのまま風乾させた。再生毛はハサミで３ｍｍ程度の長さに細切し、正確に３０ｍｇを秤量し、１０ｍＬ容ガラス試験管に移した。これから以下に示す溶媒を用いて内在遊離脂質の抽出をおこなった。
５ｍＬクロロホルム／メタノール（２：１）
室温、２４時間
５ｍＬクロロホルム／メタノール（１：１）
室温、２４時間
５ｍＬクロロホルム／メタノール（１：２）
室温、２４時間
５ｍＬクロロホルム／メタノール／蒸留水（１８：９：１）
室温、２４時間
それぞれの抽出液は別の１０ｍＬ容ガラス試験管にまとめて回収し、窒素気流下で乾固させた。これをクロロホルム／メタノール混液（１：１）に溶解し、体毛内在遊離脂質抽出液とした。これを実施例３と同様の方法で分析し、コレステロール量を求めた。

＜結果＞
体毛重量当たりのコレステロール量を図４に示す。図４から明らかなように本発明品を塗布して新たに発育した体毛中のコレステロール量が増加していることが認められた。

実施例５コレステロール合成促進試験（動物試験）
＜体毛水分量の測定＞
実施例３で得られた再生毛を実施例４に示した方法で洗浄、風乾させた。これを温度２３℃、相対湿度０％の状態で１０日間放置したのち、精秤した。さらに、体毛を温度２３℃、相対湿度４３％の状態で１４日間放置したのち、精秤した。相対湿度４３％時の体毛重量から相対湿度０％時の体毛重量を減じた値を温度２３℃、相対湿度４３％時における体毛水分量とした。

＜結果＞
測定結果を図５に示す。本発明品を塗布して新たに発育した体毛の水分保持機能は明らかに向上していた。

実施例６
実施例３で得られたモルモット体毛を温度２３℃、相対湿度５０％に一昼夜放置し、１０名の専門パネラーにより、下記の評価基準に従い、ハリ・コシ、なめらかさ、しっとり感を判定した。
評価基準評点
＜体毛のハリ・コシの評価＞
感触に弾力がありハリ・コシがある：＋１点
どちらとも言えない：０点
感触に弾力がなくハリ・コシがない：−１点
＜体毛のなめらかさの評価＞
感触になめらかさがある：＋１点
どちらとも言えない：０点
感触になめらかさがない：−１点
＜体毛のしっとり感の評価＞
感触にしっとり感がある：＋１点
どちらとも言えない：０点
感触にしっとり感がない：−１点

パネラー全員の評点の総和を表１に示す。本発明品で処理した体毛のハリ・コシ、なめらかさ、しっとり感がいずれも優れたものであった。

実施例７
以下に示す組成のヘアローションを常法により製造した。

これらのヘアローションを使用した場合、いずれも発育した毛髪は水分保持機能に優れ、毛髪のハリ・コシ、なめらかさ、しっとり感を向上させた。

実施例８
以下に示す組成のヘアトリートメントを常法により製造した。

これらのヘアトリートメントを使用した場合、いずれも発育した毛髪は水分保持機能に優れ、毛髪のハリ・コシ、なめらかさ、しっとり感を向上させた。

Claims

ブッチャーブルーム又はその抽出物を有効成分とし、頭皮に適用される保湿剤。
ブッチャーブルームの根茎又はその抽出物を有効成分とするものである請求項１記載の保湿剤。