JP2013140035A - 気泡吸着抑制方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】検体中の被測定物質に対し免疫的に反応する免疫分析試薬を用いて、乾燥プラスチックセル中で抗原抗体反応を行い、得られた反応物を光学的に測定する免疫分析方法において、界面活性剤の存在下で反応及び/又は測定を行うことを特徴とする、セル側面への気泡吸着抑制方法。
【選択図】なし
Description
1)検体中の被測定物質に対し免疫的に反応する免疫分析試薬を用いて、乾燥プラスチックセル中で抗原抗体反応を行い、得られた反応物を光学的に測定する免疫分析方法において、界面活性剤の存在下で反応及び/又は測定を行うことを特徴とする、セル側面への気泡吸着抑制方法。
2)界面活性剤が非イオン界面活性剤である上記1)の方法。
3)界面活性剤がポリオキシエチレン型非イオン界面活性剤である上記1)の方法。
4)反応及び/又は測定系内の界面活性剤の濃度が0.005〜1.000%である上記1)〜3)の方法。
5)免疫分析方法が免疫凝集法である上記1)〜4)の方法。
6)免疫凝集法がラテックス凝集法である上記5)の方法。
7)上記1)の方法に使用される免疫分析試薬であって、界面活性剤を含むことを特徴とする前記免疫分析試薬。
8)界面活性剤が非イオン界面活性剤である上記7)の試薬。
9)界面活性剤がポリオキシエチレン型非イオン界面活性剤である上記7)の試薬。
10)免疫凝集試薬を共に含有する上記7)〜9)の試薬。
11)免疫凝集試薬がラテックス凝集試薬である上記10)の試薬。
本発明のセル側面への気泡吸着抑制方法は、検体中の被測定物質に対し免疫的に反応する免疫分析試薬を用いて、乾燥プラスチックセル中で抗原抗体反応を行い、得られた反応物を光学的に測定する免疫分析方法において、界面活性剤の存在下で反応及び/又は測定を行うものである。
当該免疫分析方法の態様としては、公知のいかなる免疫分析方法であってもよいが、中でも免疫凝集法が好ましく、特に不溶性担体粒子としてラテックス粒子を用いるラテックス凝集法が好ましい。免疫凝集法は、抗原或いは抗体を感作した感作粒子の凝集を光学的に検出する方法として周知であり、検出には比濁法又は比色法が好適に用いられる。例えば、セル外部より可視光から近赤外域の光、例えば通常300〜1000nm、好ましくは500〜900nmの光を照射し、吸光度変化又は散乱光の強度変化を検出することにより、当該感作粒子の凝集の程度が測定される。
上記した不溶性担体粒子に、測定すべき抗原と免疫的に反応する抗体若しくはその抗原結合性断片を固定化する。固定化の方法も周知であり、物理吸着又は共有結合等の周知の方法により行われる。得られた感作粒子の懸濁液と被検試料とを混合すると、被検試料中に含まれる被測定物質(抗原)によって感作粒子が凝集され、感作粒子懸濁液の吸光度が変化する。この吸光度の変化量(エンドポイント法)又は変化率(レート法)を測定する。測定すべき抗原を種々の既知濃度で含む複数の標準試料を準備し、それらについて上記方法により吸光度の変化量又は変化率を測定する。標準試料中の測定すべき抗原の濃度を横軸、測定された吸光度の変化量又は変化率を縦軸にプロットして検量線を描く。未知の被検試料についても同じ方法により吸光度の変化量又は変化率を測定し、測定結果を上記検量線に当てはめることにより、被検試料中の抗原を定量することができる。
なお、このような免疫凝集法を行う自動装置が種々市販されており、市販の免疫凝集法用自動装置を用いて、容易、簡便に行うことができる。
このうち、ポリ(オキシエチレン)アルキルエーテルとしては、ポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレンミリスチルエーテル、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンステアリルエーテル、ポリオキシエチレンオレイルエーテル等の、炭素数12以上のアルキル基を有するポリ(オキシエチレン)アルキルエーテルを好ましく例示することができる。また斯かるアルキル基は、直鎖状であってもよいし、分岐状であってもよい。
ポリ(オキシエチレン)脂肪酸エステルとしては、ポリエチレングリコールモノラウレート、ポリエチレングリコールモノステアレート、ポリエチレングリコールジステアレート、ポリエチレングリコールモノオレエートを好ましく例示することができる。
ポリ(オキシエチレン)ソルビタン脂肪酸エステルとしては、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポロオキシエチレンソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタントリステアレートを好ましく例示することができる。
従って、界面活性剤は、抗原抗体反応の開始前又は開始と同時に反応系内に添加するのが好ましい。具体的には、検体を希釈する際に添加してもよいし、抗体又は抗原と検体とを混合する際に添加してもよい。
ここで、免疫分析に用いる各種試薬としては、例えば、検体希釈液、抗体/抗原希釈液、固相化抗体/抗原、感作粒子懸濁液、洗浄液、酵素液、基質液、検量線作成用の被検物質標準液等が挙げられ、界面活性剤を含有した免疫分析試薬としては、これらの試薬に界面活性剤を添加したもの、例えば、検体を希釈する緩衝液や、抗体又は抗原を含む試薬等に界面活性剤を含有させたものが挙げられる。
免疫凝集法を採用する場合は、例えば、抗体又は抗原を固定化(感作)した不溶性担体粒子(感作粒子)を含む免疫凝集試薬に界面活性剤を含有させておくことができる。
この場合、免疫分析試薬中の感作粒子の濃度は、特に限定されないが、0.01〜0.5%であることが好ましい。感作粒子浮遊液中の抗体量及び抗原量は常法どおりであってよく、特に限定されないが、例えば抗体感作ラテックスの場合、抗体量はラテックス浮遊液中に0.01〜2.0mg/mLとするのが好ましい。
実施例1〜6
(1)試薬の調製
フェリチンに対する抗体を用いて、以下の通りに免疫凝集法による測定試薬を調製した。
i)抗フェリチン抗体を平均粒径300nmのポリスチレンラテックス浮遊液1mLに対し0.045mg担持させてなる感作粒子を、緩衝液(グリシン、pH7.3)に0.056%となるように懸濁し、ラテックス浮遊液を調製した。
ii)緩衝液(トリス、pH8.5)に、各種界面活性剤を添加し、下記の試薬A〜Fを調製した。比較例として、界面活性剤成分を添加しない、またはタンパク質を添加した試薬G及びHを調製した。
自動分析装置はオーソ社ビトロス5600型自動分析装置によりエンドポイント法で自動測定を行った。
前述の試薬A〜Hの緩衝液を用いて、コントロールサンプル(100ng/mL)の測定を計10回行った。検体溶液10.0μLに試薬A〜Hの緩衝液100μLを添加し、この混合液を37℃で撹拌混合した。5分間放置後、上記で調製したラテックス浮遊液100μLを添加し、更に37℃で撹拌混合した。約5分間の凝集反応を吸光度変化量として測定し、標準偏差及び変動係数(CV(%))を算出した。
また、併せて、セル側面に吸着された気泡の有無を観察した。結果を下記表2に示す。
フェリチンに対する抗体を用いて、以下の通りに免疫凝集法による測定試薬を調製した。
(1)試薬の調製
i)抗フェリチン抗体を平均粒径300nmのポリスチレンラテックス浮遊液1mLに対し0.045mg担持させてなる感作粒子を、緩衝液(グリシン、pH7.3)に0.056%となるように懸濁し、ラテックス浮遊液を調製した。
ii)緩衝液(トリス、pH8.5)又は上記i)で調製したラテックス浮遊液の何れか又は両方に界面活性剤を添加し、試薬I〜Nを調製した。比較例として、上記界面活性剤成分を添加しない試薬Oを調製した。
自動分析装置はオーソ社ビトロス5600型自動分析装置によりエンドポイント法で自動測定を行った。
前述の試薬I〜Oを用いてコントロールサンプル(100ng/mL)の測定を計10回行った。検体溶液10.0μLに上記で調製した試薬I〜Oの緩衝液を100μLを添加し、この混合液を37℃で撹拌混合した。5分間放置後、上記で調製した試薬I〜Oのラテックス浮遊液を100μL添加し、更に37℃で撹拌混合した。約5分間の凝集反応を吸光度変化量として測定し、標準偏差及び変動係数(CV(%))を算出した。また、併せて、セル側面に吸着された気泡の有無を観察した。結果を下記表4に示す。
フェリチン及びヘモグロビンに対する抗体を用いて、以下の通りに免疫凝集法による測定試薬を調製した。
(1)使用試薬
i)抗フェリチン抗体又は抗ヘモグロビン抗体を平均粒径300nmのポリスチレンラテックス浮遊液1mLに対し0.045mg担持させてなる感作粒子を、緩衝液(グリシン、pH7.3)に0.056%となるように懸濁し、ラテックス浮遊液を調製した。
ii)緩衝液(トリス、pH8.5)及び上記i)で調製したラテックス浮遊液に界面活性剤を添加し、試薬P(フェリチン測定用)及び試薬Q(ヘモグロビン測定用)を調製した。
自動分析装置はオーソ社ビトロス5600型自動分析装置によりエンドポイント法で自動測定を行った。
前述の試薬P及びQを用いてコントロールサンプル(100ng/mL)の測定を計10回行った。検体溶液10.0μLに上記で調製した試薬P又はQの緩衝液100μLを添加し、この混合液を37℃で撹拌混合した。5分間放置後、上記で調製した試薬P又はQのラテックス浮遊液を100μL添加し、更に37℃で撹拌混合した。約5分間の凝集反応を吸光度変化量として測定し、標準偏差を算出した。また、併せて、セル側面に吸着された気泡の有無を観察した。結果を下記表6に示す。
Claims (11)
- 検体中の被測定物質に対し免疫的に反応する免疫分析試薬を用いて、乾燥プラスチックセル中で抗原抗体反応を行い、得られた反応物を光学的に測定する免疫分析方法において、界面活性剤の存在下で反応及び/又は測定を行うことを特徴とする、セル側面への気泡吸着抑制方法。
- 界面活性剤が非イオン界面活性剤である請求項1に記載の方法。
- 界面活性剤がポリオキシエチレン型非イオン界面活性剤である請求項1に記載の方法。
- 反応及び/又は測定系内の界面活性剤の濃度が0.005〜1.000%である請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 免疫分析方法が免疫凝集法である請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 免疫凝集法がラテックス凝集法である請求項6に記載の方法。
- 請求項1記載の方法に使用される免疫分析試薬であって、界面活性剤を含むことを特徴とする前記免疫分析試薬。
- 界面活性剤が非イオン界面活性剤である請求項7に記載の試薬。
- 界面活性剤がポリオキシエチレン型非イオン界面活性剤である請求項7に記載の試薬。
- 免疫凝集試薬を共に含有する請求項7〜9のいずれか1項に記載の試薬。
- 免疫凝集試薬がラテックス凝集試薬である請求項10に記載の試薬。
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