JP2013051892A - シフォナキサンチンおよび/またはシフォネインの製造方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】ミル科ミル属に属する緑藻類の糸状体種苗を培養して得た培養糸状体を有機溶媒で抽出し、得られた有機溶媒抽出物からシフォナキサンチンおよび/またはシフォネインを分離することを特徴とするシフォナキサンチンおよび/またはシフォネインの製造方法である。
【選択図】図1
Description
ミル属緑藻体の糸状体の単藻化:
ミル属緑藻体の糸状体の単藻化はマイクロピペット洗浄法を用いた。まず単藻化に必要な道具の作製および準備を行なった。パスツールピペットの先を熱して引き伸ばし、先端を細く加工してキャピラリーピペットを作製した。顕微鏡下で先端の内径が数百マイクロメートルであることを確認し、キャピラリーピペットにエアーチューブを取り付け、キャピラリーピペットの先端を浸し、ろ過滅菌海水(0.45μmフィルターろ過)が毛細管現象で上昇するのを確かめた。
ミル属緑藻類の培養(1):
製造例1で得られた単藻化されたナガミルまたはモツレミルの糸状体種苗を、水温25℃、光量60ppfd、光周期12L:12D(Light:Dark)に設定したグロースチャンバー内で培養した。培養海水は、藻類培養液TSP27を0.05 w/w%添加した滅菌海水とした。1L容量のガラス瓶に培養海水900ml中を入れ、ナガミルまたはモツレミルの糸状体種苗を1g w.w.(湿質量)入れた(n=4)。培養瓶底部からガラス管を通して空気を2.3L/分で導入し、常時攪拌した。培養期間は1週間とした。培養後は培養糸状体を全回収し、湿質量を計測した。また培養糸状体を凍結乾燥し、乾燥質量を測定した。
カラム:Inertsil
ODS-P(4×160mm)
移動相A:0.3M酢酸アンモニウムを含むメタノール(MeOH)/アセトニトリル(ACCN)/H2O=4.0/3.5/2.5の混合溶媒(v/v/v)に特級酢酸を0.3%(体積比)添加
移動相B:ACCN/酢酸エチル(EtAc)=3/7(v/v)の混合溶媒
流速:0.8ml/分
カラムオーブン温度:32℃
グラジェント条件(移動相B濃度):0%(0.0-5.0min)、0%→100%(5.0-25.0min)、100%(25.0-35.0min)、0%(35.0-45.0min,置換)
注入量:10μl
検出:437nm
ミル属緑藻類の培養(2):水温の検討
製造例1で得られた単藻化したモツレミルの糸状体種苗を、水温22、24、26、28、30、32、34、36℃の7試験区で、光量60ppfd、光周期12L:12D(Light:Dark)に設定したグロースチャンバー内で培養した。培養海水は、TSP27を0.05w/w%添加した滅菌海水とした。1L容量のガラス瓶に培養海水900mlを入れ、モツレミルの糸状体種苗を1g w.w.入れた(n=4)。培養瓶底部からガラス管を通して空気を2.3L/分で導入し、常時攪拌した。培養期間は1週間とした。培養後は培養糸状体を全回収し、凍結乾燥後、乾燥室量を測定した。また実施例1と同様にして、シフォナキサンチン(Sx)の抽出、分析を行い、Sx含有率およびSx生産量を求めた。なお培養前のモツレミルの糸状体種苗をControlとした。結果を図1に示す。
ミル属緑藻類の培養(3):光量の検討
製造例1で得られた単藻化したモツレミルの糸状体種苗を、光量20、60、120、300、500ppfdの5試験区で、水温30℃、光周期12L:12D(Light:Dark)に設定したグロースチャンバー内で培養した。培養海水は、TSP27を0.05w/w%添加した滅菌海水とした。1L容量のガラス瓶に培養海水900mlを入れ、モツレミルの糸状体種苗を1gw.w.入れた(n=4)。培養瓶底部からガラス管を通して空気を2.3L/分で導入し、常時攪拌した。培養期間は1週間とした。培養後は培養糸状体を全回収し、凍結乾燥後、乾燥質量を測定した。また実施例1と同様にして、シフォナキサンチン(Sx)の抽出、分析を行い、Sx含有率およびSx生産量を求めた。なお培養前のモツレミルの糸状体種苗をControlとした。結果を図2に示す。
ミル属緑藻類の培養(4):光周期の検討
製造例1で得られた単藻化したモツレミルの糸状体種苗を、光周期0L:24D、8L:16D、12L:12D、16L:8D、24L:0D(Light:Dark)の5試験区で、水温30℃、光量60ppfdに設定したグロースチャンバー内で培養した。培養海水は、TSP27を0.05w/w%添加した滅菌海水とした。1L容量のガラス瓶に培養海水900mlを入れ、モツレミルの糸状体種苗を1gw.w.入れた(n=4)。培養瓶底部からガラス管を通して空気を2.3L/分で導入し、常時攪拌した。培養期間は1週間とした。培養後は培養糸状体を全回収し、凍結乾燥後、乾燥質量を測定した。また実施例1と同様にして、シフォナキサンチン(Sx)の抽出、分析を行い、Sx含有率およびSx生産量を求めた。なお培養前のモツレミルの糸状体種苗をControlとした。結果を図3に示す。
ミル属緑藻類の培養(5):培養液の検討
製造例1で得られた単藻化したモツレミルの糸状体種苗を、水温30℃、光量60ppfd、光周期24L:0D(Light:Dark)に設定したグロースチャンバー内で培養した。TSP29を0.05 w/w%添加した滅菌海水を培養液とし、その後TSP29を追加しない試験区(1回添加)と、さらに培養2、4、6日目にTSP29を0.05w/w%追加添加する試験区(連続添加)を設定した。1L容量のガラス瓶に培養海水900ml中を入れ、ミル類の糸状体を1g w.w.入れた(n=4)。培養瓶底部からガラス管を通して空気を2.3L/分で導入し、常時攪拌した。培養期間は1週間とした。培養0、2、4、6、7日目に海水を30mlサンプリングした(栄養塩類分析用)。栄養塩類は、NH4-N、NO3-N、PO4-P濃度を計測した。結果を図4〜6に示す。培養後は糸状体を全回収し、凍結乾燥後、乾燥重量を測定した。また実施例1と同様にして、シフォナキサンチン(Sx)の抽出、分析を行い、Sx含有率およびSx生産量を求めた。結果を図7に示す。なお培養前のモツレミルの糸状体種苗をControlとした。
以 上
Claims (8)
- ミル科ミル属に属する緑藻類の糸状体種苗を培養して得た培養糸状体を有機溶媒で抽出し、得られた有機溶媒抽出物からシフォナキサンチンおよび/またはシフォネインを分離することを特徴とするシフォナキサンチンおよび/またはシフォネインの製造方法。
- 培養が、水温20〜32℃で行われるものである請求項1記載のシフォナキサンチンおよび/またはシフォネインの製造方法。
- 培養が、光量20〜500ppfdの光照射条件下で行われるものである請求項1または2に記載のシフォナキサンチンおよび/またはシフォネインの製造方法。
- 培養が、光周期8L:16D〜24L:0Dの光照射条件下で行われるものである請求項1ないし3のいずれかの項記載のシフォナキサンチンおよび/またはシフォネインの製造方法。
- 培養が、窒素を100〜700μMおよびリンを2〜40μM含有する培養液中で行われるものである請求項1ないし4のいずれかの項記載のシフォナキサンチンおよび/またはシフォネインの製造方法。
- 窒素が、アンモニア態窒素である請求項5記載のシフォナキサンチンおよび/またはシフォネインの製造方法。
- 培養が、連続撹拌培養により行われるものである請求項1ないし6のいずれかの項記載のシフォナキサンチンおよび/またはシフォネインの製造方法。
- 撹拌が、通気による攪拌または機械撹拌である請求項7記載のシフォナキサンチンおよび/またはシフォネインの製造方法。
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JP2014001158A (ja) * | 2012-06-18 | 2014-01-09 | South Product:Kk | 色素結合型タンパク質およびその製造方法 |
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WO2001023519A1 (fr) * | 1999-09-29 | 2001-04-05 | Micro Gaia Co., Ltd. | Procede de mise en culture d'algues permettant de produire des pigments phototropes, des acides gras fortement insatures ou des polysaccharides a forte concentration |
JP2009227642A (ja) * | 2008-03-25 | 2009-10-08 | Nof Corp | ガン細胞致死活性を有するカロテノイド |
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