JP2012516677A5 - - Google Patents
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Claims (42)
- (a)イソプレンシンターゼポリペプチドをコードする異種核酸、(b)イソペンテニル−二リン酸デルタ−イソメラーゼ(IDI)ポリペプチドをコードする核酸、(c)1−デオキシキシルロース−5−リン酸シンターゼ(DXS)ポリペプチド及び/または1以上のメバロン酸(MVA)経路ポリペプチドをコードする核酸及び(d)1以上の1、3−プロパンジオール及び/またはグリセロール経路ポリペプチド、エタノール発酵に関与する1以上のポリペプチド、又は1以上のヒドロゲナーゼポリペプチドをコードする核酸、を含む組換え宿主細胞であって、当該細胞は、酸素移動速度(OTR)が酸素取り込み速度(OUR)よりも低い酸素制限培養条件下で、イソプレンと、エタノール、1、3−プロパンジオール、及び水素からなる群から選ばれる副生成物を同時に生成するものである、細胞。
- 前記イソプレンシンターゼポリペプチドをコードする異種核酸がプロモーターに機能的に連結されている、請求項1記載の細胞。
- 前記イソプレンシンターゼポリペプチドが植物イソプレンシンターゼポリペプチドである、請求項2記載の細胞。
- 前記植物イソプレンシンターゼポリペプチドが、ウラジロハコヤナギ(Populus alba)由来のものである、請求項3記載の細胞。
- MVA経路ポリペプチド、DXSポリペプチド、またはIDIポリペプチドをコードする異種核酸をさらに含む、請求項4記載の細胞。
- 前記副生成物が1,3−プロパンジオールである、請求項1記載の細胞。
- 前記(d)の核酸は、1以上の1,3−プロパンジオール経路及び/またはグリセロール経路ポリペプチドをコードする、請求項6記載の細胞。
- 1,3−プロパンジオール、及び/又はグリセロール経路ポリペプチドが、ジヒドロキシアセトンリン酸レダクターゼ(DAR1)、グリセロール−リン酸ホスファターゼ(GPP2)、グリセロールデヒドラターゼB1(dhaB1)、グリセロールデヒドラターゼB2(dhaB2)、グリセロールデヒドラターゼB3(dhaB3)、dhaX、orfX、orfY、1,3−プロパンジオールオキシドレダクターゼ(dhaT)、グリセロールデヒドロゲナーゼ(dhaD)、またはジヒドロキシアセトンキナーゼ(dhaK)である、請求項7記載の細胞。
- 前記副生成物がエタノールである、請求項1記載の細胞。
- 前記(d)の核酸は1以上のエタノール発酵に関与するポリペプチドをコードするものである、請求項9記載の細胞。
- 前記エタノール発酵に関与するポリペプチドが、アルコールデヒドロゲナーゼB(adhB)ポリペプチド、アルコールデヒドロゲナーゼE(adhE)ポリペプチド、またはピルビン酸デカルボキシラーゼ(pdc)ポリペプチドである、請求項10記載の細胞。
- 前記副生成物が水素である、請求項1記載の細胞。
- 前記(d)の核酸が1以上のヒドロゲナーゼポリペプチドをコードするものである、請求項12記載の細胞。
- 前記ヒドロゲナーゼポリペプチドが、フェレドキシン依存的ヒドロゲナーゼポリペプチド、NADPH依存的ヒドロゲナーゼポリペプチド、または酸素耐性ヒドロゲナーゼポリペプチドである、請求項13記載の細胞。
- イソプレンと副生成物を同時に生成する方法であって、
(1) 酸素移動速度(OTR)が酸素取り込み速度(OUR)よりも低い酸素制限培養条件下、イソプレンと、エタノール、1,3−プロパンジオール、および水素からなる群から選択される副生成物とを同時に生成することができる組換え宿主細胞を培養すること、ここで、前記細胞は、(a)イソプレンシンターゼポリペプチドをコードする異種核酸、(b)イソペンテニル−二リン酸デルタ−イソメラーゼ(IDI)ポリペプチドをコードする核酸、(c)1−デオキシキシルロース−5−リン酸シンターゼ(DXS)ポリペプチド及び/または1以上のメバロン酸(MVA)経路ポリペプチドをコードする核酸及び(d)1,3−プロパンジオール及び又はグリセロール経路ポリペプチド、エタノール発酵に関与する1以上のポリペプチド、又は1以上のヒドロゲナーゼポリペプチドをコードする核酸、を含むものであり、
(2)イソプレンと前記副生成物を同時に生成すること、を含む方法。
- 前記イソプレンシンターゼポリペプチドをコードする異種核酸がプロモーターに機能的に連結されている、請求項15記載の方法。
- 前記イソプレンシンターゼポリペプチドが植物イソプレンシンターゼポリペプチドである、請求項16記載の方法。
- 前記植物イソプレンシンターゼポリペプチドが、ウラジロハコヤナギ由来のものである、請求項17記載の方法。
- 前記細胞が、MVA経路ポリペプチド、DXSポリペプチド、またはIDIポリペプチドをコードする異種核酸をさらに含む、請求項18記載の方法。
- 前記副生成物が1,3−プロパンジオールである、請求項15記載の方法。
- 前記(d)の核酸が1以上の1,3−プロパンジオール及び/又はグリセロール経路ポリペプチドをコードするものである、請求項20記載の方法。
- 1,3−プロパンジオール及び/又はグリセロール経路ポリペプチドが、ジヒドロキシアセトンリン酸レダクターゼ(DAR1)、グリセロール−リン酸ホスファターゼ(GPP2)、グリセロールデヒドラターゼB1(dhaB1)、グリセロールデヒドラターゼB2(dhaB2)、グリセロールデヒドラターゼB3(dhaB3)、dhaX、orfX、orfY、1,3−プロパンジオールオキシドレダクターゼ(dhaT)、グリセロールデヒドロゲナーゼ(dhaD)、またはジヒドロキシアセトンキナーゼ(dhaK)である、請求項21記載の方法。
- 前記副生成物がエタノールである、請求項15記載の方法。
- 前記(d)の核酸が、エタノール発酵に関与する1以上のポリペプチドをコードするものである請求項23記載の方法。
- 前記エタノール発酵に関与するポリペプチドが、アルコールデヒドロゲナーゼB(adhB)ポリペプチド、アルコールデヒドロゲナーゼE(adhE)ポリペプチド、またはピルビン酸デカルボキシラーゼ(pdc)ポリペプチドである、請求項24記載の方法。
- 前記副生成物が水素である、請求項15記載の方法。
- 前記(d)の核酸が1以上のヒドロゲナーゼポリペプチドをコードするものである、請求項26記載の方法。
- 前記ヒドロゲナーゼポリペプチドが、フェレドキシン依存的ヒドロゲナーゼポリペプチド、NADPH依存的ヒドロゲナーゼポリペプチド、または酸素耐性ヒドロゲナーゼポリペプチドである、請求項27記載の方法。
- デオキシキシルロース−5−リン酸(DXP)経路ポリペプチドをコードする1以上の異種核酸をさらに含む、請求項1の細胞。
- DXP経路ポリペプチドとMVA経路ポリペプチドを含む、請求項1の細胞。
- 前記細胞が、デオキシキシルロース−5−リン酸(DXP)経路ポリペプチドをコードする1以上の異種核酸をさらに含む請求項15の方法。
- 前記細胞が、DXP経路ポリペプチドとMVA経路ポリペプチドを含む請求項15の方法。
- (i)アセトアセチル−補酵素Aシンターゼ(チオラーゼ)ポリペプチド;(ii)3−ヒドロキシ−3−メチルグルタリル−補酵素Aシンターゼポリペプチド;および(iii)3−ヒドロキシ−3−メチルグルリル−補酵素Aレダクターゼポリペプチド(iv)メバロン酸キナーゼ(MVK);(v)ホスホメバロン酸キナーゼ(PMK)または;(vi)ジホスホメバロン酸デカルボキシラーゼ(MVD)から選択される1以上のMVA経路ポリペプチドを含む、請求項1の細胞。
- 前記細胞が(i)アセトアセチル−補酵素Aシンターゼ(チオラーゼ)ポリペプチド;(ii)3−ヒドロキシ−3−メチルグルタリル−補酵素Aシンターゼポリペプチド;および(iii)3−ヒドロキシ−3−メチルグルタリル−補酵素Aレダクターゼポリペプチド(iv)メバロン酸キナーゼ(MVK);または(v)ホスホメバロン酸キナーゼ(PMK);または(vi)ジホスホメバロン酸デカルボキシラーゼ(MVD)から選択される1以上のMVA経路ポリペプチドを含む、請求項15の方法。
- 0.1mg/L液体培地/時間を上回るイソプレンの平均容積生産性と、0.1mg/L液体培地/時間を上回る1,3−プロパンジオールの平均容積生産性を有する、請求項1の細胞。
- 前記細胞が0.1mg/L液体培地/時間を上回るイソプレンの平均容積生産性と、0.1mg/L液体培地/時間を上回る1,3−プロパンジオールの平均容積生産性を有する、請求項15の方法。
- 400nmole/gwcm/時間から2.0×105nmole/gwcm/時間の速度でイソプレンを産出し、0.01mmol/L液体培地/時間から200mmol/L液体培地/時間の速度で1,3−プロパンジオールを産出する、請求項1の細胞。
- 前記細胞が400nmole/gwcm/時間から2.0×105nmole/gwcm/時間の速度でイソプレンを産出し、0.01mmol/L液体培地/時間から200mmol/L液体培地/時間の速度で1,3−プロパンジオールを産出する、請求項15の方法。
- 大腸菌細胞である、請求項1の細胞。
- 前記細胞が大腸菌細胞である、請求項15の方法。
- (i)0.1mg/L液体培地/時間を上回るイソプレンの平均容積生産性と、0.1mg/L液体培地/時間を上回る1,3−プロパンジオールの平均容積生産性を有するか、又は(ii)400nmole/gwcm/時間から2.0×105nmole/gwcm/時間の速度でイソプレンを産出し、0.01mmol/L液体培地/時間から200mmol/L液体培地/時間の速度で1,3−プロパンジオールを産出する、請求項39の細胞。
- 前記細胞が(i)0.1mg/L液体培地/時間を上回るイソプレンの平均容積生産性と、0.1mg/L液体培地/時間を上回る1,3−プロパンジオールの平均容積生産性を有するか、又は(ii)400nmole/gwcm/時間から2.0×105nmole/gwcm/時間の速度でイソプレンを産出し、0.01mmol/L液体培地/時間から200mmol/L液体培地/時間の速度で1,3−プロパンジオールを産出する、請求項40の方法。
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