JP2012140405A - Production method of beomycesic acid-rich thamnolia vermicularis extract - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、ベオミセス酸を高含有するムシゴケ抽出物の製造方法、並びに当該抽出物を含有するエンドセリン作用抑制剤及び美白剤に関する。 TECHNICAL FIELD The present invention relates to a method for producing an extract of Musgossoke containing a high amount of beomices acid, and an endothelin action inhibitor and a whitening agent containing the extract.
ムシゴケ（学名：Thamnolia vermicularis又はThamnolia Subuliformis）は、中国高地などに生息する地衣類の一種である。脂肪分解効果等のダイエット効果があるといわれ、日本でも茶などとして広く飲用されている。また、ムシゴケの抽出物は、メラニン生成抑制作用を有するとの報告もある（特許文献１）。
ムシゴケ抽出物には、タムノール酸、スクァマト酸、ベオミセス酸等のデプシド類と呼ばれる化合物が含有されることが知られている（非特許文献１）。また、ベオミセス酸については、血管拡張作用やスリム化作用等を有することが報告されている（特許文献２及び３）。
Musgokes (scientific name: Thamnolia vermicularis or Thamnolia Subuliformis ) is a kind of lichen that inhabits the Chinese highlands. It is said to have a dieting effect such as a lipolytic effect and is widely used as tea in Japan. Moreover, there is a report that the extract of Musgogoke has a melanin production inhibitory action (patent document 1).
It is known that the extract of Musgomoke contains compounds called depsides such as tamnolic acid, squamatoic acid, and beomices acid (Non-patent Document 1). Further, it has been reported that beomices acid has a vasodilatory action, a slimming action, etc. (Patent Documents 2 and 3).
本発明は、ベオミセス酸を高含有するムシゴケ抽出物の製造方法を提供することを課題とする。また、本発明は、当該方法により得られるベオミセス酸高含有ムシゴケ抽出物を有効成分として含有するエンドセリン作用抑制剤及び美白剤を提供することを課題とする。 It is an object of the present invention to provide a method for producing a mussels extract containing a high amount of beomices acid. Another object of the present invention is to provide an endothelin action inhibitor and a whitening agent containing, as an active ingredient, a high beomisic acid-containing extract from the above method.
本発明者らは上記課題に鑑み、ムシゴケ抽出物からの美白成分の探求と、当該成分を高濃度に含有しうる抽出方法について鋭意検討を行った。その結果、ムシゴケ抽出物に含まれるベオミセス酸が、メラニン生成を効果的に抑制しうることを見出し、新規の美白成分として有用であるとの知見を得た。さらに、ムシゴケを特定の抽出溶媒で抽出することにより、得られた抽出物中のベオミセス酸濃度が有意に増加することを見出した。本発明はこれらの知見に基づいて完成するに至ったものである。 In view of the above problems, the present inventors have intensively investigated a search for a whitening component from the extract of Musigo moss and an extraction method that can contain the component in a high concentration. As a result, it was found that beomices acid contained in the extract of Mussigo moss can effectively suppress melanin production, and the knowledge that it is useful as a new whitening component was obtained. Furthermore, it has been found that the extraction of Musgoske with a specific extraction solvent significantly increases the concentration of beomices acid in the obtained extract. The present invention has been completed based on these findings.
すなわち、本発明は、ムシゴケを、アルコールを６０ｖ／ｖ％以上含有するアルコール溶液、環状エーテル類及び酸素原子を２個以上有するエーテル類、並びに総炭素数３〜６のエステル類からなる群より選ばれる少なくとも１種の溶媒を用いて抽出する工程を含むベオミセス酸高含有ムシゴケ抽出物の製造方法に関する。
また、本発明は、当該製造方法により得られるベオミセス酸高含有ムシゴケ抽出物を有効成分として含有するエンドセリン作用抑制剤及び美白剤に関する。
That is, in the present invention, mushroom is selected from the group consisting of an alcohol solution containing 60 v / v% or more of alcohol, cyclic ethers and ethers having two or more oxygen atoms, and esters having 3 to 6 carbon atoms in total. The present invention relates to a method for producing an extract containing a high amount of beomices acid, which comprises an extraction step using at least one kind of solvent.
The present invention also relates to an endothelin action inhibitor and a whitening agent containing, as an active ingredient, a high beomisic acid-containing mussoke extract obtained by the production method.
本発明の製造方法によれば、新規の美白成分であるベオミセス酸を高濃度に含有するムシゴケ抽出物を提供することができる。また、本発明のエンドセリン作用抑制剤及び美白剤は、有効成分として当該方法により得られる抽出物を含有し、ベオミセス酸の美白効果を発揮し得る医薬品、医薬部外品、化粧料等に用いることができる。 According to the production method of the present invention, it is possible to provide a moss mushroom extract containing a novel whitening component, beomices acid, at a high concentration. Moreover, the endothelin action inhibitor and the whitening agent of the present invention contain an extract obtained by the method as an active ingredient, and are used for pharmaceuticals, quasi drugs, cosmetics and the like that can exert the whitening effect of beomices acid. Can do.
本発明の製造方法は、抽出溶媒として、アルコール含有率６０％以上のアルコール水溶液、環状エーテル類及び酸素原子を２個以上有するエーテル類、並びに総炭素数３〜６のエステル類からなる群より選ばれる少なくとも１種を用いて、原料であるムシゴケを抽出することを特徴とする。当該方法によって得られたムシゴケ抽出物は、他の抽出溶媒を用いたムシゴケ抽出物と比べてベオミセス酸を高濃度で含有する。 The production method of the present invention is selected from the group consisting of an alcohol aqueous solution having an alcohol content of 60% or more, a cyclic ether, an ether having two or more oxygen atoms, and an ester having 3 to 6 carbon atoms as the extraction solvent. It is characterized by extracting the moss moss as a raw material using at least one kind. The moss mushroom extract obtained by this method contains beomises acid at a higher concentration than the mushroom extract using other extraction solvents.
１．ベオミセス酸
本発明において、ベオミセス酸とは下記式（１）で表される化合物である。
1. Veomices acid In the present invention, beomices acid is a compound represented by the following formula (1).
２．ベオミセス酸高含有ムシゴケ抽出物の製造方法
［原料］
本発明で用いるムシゴケとは、学名Thamnolia vermicularis（和名はセッチャ、ムシゴケ）であるムシゴケ科ムシゴケ属の地衣類、又は、学名Thamnolia Subuliformis（和名はトキワムシゴケ）であるムシゴケ科ムシゴケ属の地衣類をいう。本発明においては、上記属に属する類縁地衣類を用いることもできる。これらは市販品として入手可能である。
本発明においては、セッチャとトキワムシゴケとを混合して用いてもよく、単独で用いてもよい。好ましくは、セッチャを用いる。また、ムシゴケの任意の部位（全体、全草、地衣体、枝状体、葉状体、子実体等）を用いることができ、各部位を複数組み合わせて用いてもよい。好ましくは、地衣体、枝状体を用いる。
抽出に用いるムシゴケは生のままでもよく、抽出効率を高めるために、乾燥、細断、粉砕などの処理を施したものであってもよい。
2. Production method of raw extract with high content of beomices acid
The moss moss used in the present invention is a lichen belonging to the genus Musgomaceae which is the scientific name Thamnolia vermicularis (Japanese name is Setcha, Musgogoke), or the lichen belonging to the genus Musgogella which is the scientific name Thamnolia Subuliformis (Japanese name is Tokiwashigoke ). Say. In the present invention, similar lichens belonging to the above genus can also be used. These are commercially available.
In the present invention, the setcher and the sphagnum moss may be mixed and used alone. Preferably, a setter is used. Moreover, arbitrary parts (whole, whole grass, lichen, branch-like body, leaf-like body, fruit body, etc.) of Musgogoke can be used, and each part may be used in combination. Preferably, a lichen body and a branch body are used.
The moss used for extraction may be raw or may be subjected to treatments such as drying, shredding, and pulverization in order to increase extraction efficiency.
［抽出溶媒］
本発明で用いる抽出溶媒は、アルコールを６０％以上含有するアルコール溶液（アルコールとして具体的には、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類が挙げられ、総炭素数１〜４のアルコールが好ましい）、環状エーテル類（例えば、テトラヒドロフラン、ジオキサン）、酸素原子を２個以上有するエーテル類（具体的には、ポリエーテル類が挙げられ、例えば、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンメチルグルコシド等が挙げられる）、及び総炭素数３〜６のエステル類（例えば、酢酸メチル、酢酸エチル）から選択することができる。本発明では、これらの溶媒を単独で用いても、２種以上を組み合わせて用いてもよい。また、いずれかの溶媒で抽出後、他の溶媒に置き換えてもよい。本発明では抽出溶媒として、濃度６０％以上のアルコール水溶液、又は酢酸エチルを用いることが好ましく、濃度７０％以上のアルコール水溶液を用いることがより好ましく、濃度９０％以上のアルコール水溶液（好ましくはエタノール）を用いることがさらに好ましく、濃度９５％以上のアルコール水溶液（好ましくはエタノール）を用いることが特に好ましい。なお、本明細書において溶媒濃度は特に限定がない限り容量（ｖ／ｖ）基準である。
抽出溶媒の使用量は、抽出原料のムシゴケに対し質量比で１〜２００倍量であることが好ましく、１〜１００倍量であることがより好ましく、１〜５０倍量であることがさらに好ましく、５〜４０倍量であることが特に好ましく、５〜３０倍量であることが最も好ましい。
[Extraction solvent]
The extraction solvent used in the present invention is an alcohol solution containing 60% or more of alcohol (specifically, alcohols such as methanol, ethanol, propanol and butanol; polyhydric alcohols such as propylene glycol and butylene glycol). Alcohols having 1 to 4 carbon atoms are preferred), cyclic ethers (eg, tetrahydrofuran, dioxane), ethers having two or more oxygen atoms (specifically, polyethers such as polyethylene Glycol, polyoxyethylene methyl glucoside and the like) and esters having 3 to 6 carbon atoms in total (for example, methyl acetate and ethyl acetate). In the present invention, these solvents may be used alone or in combination of two or more. Further, after extraction with any solvent, it may be replaced with another solvent. In the present invention, an alcohol aqueous solution having a concentration of 60% or more or ethyl acetate is preferably used as the extraction solvent, more preferably an alcohol aqueous solution having a concentration of 70% or more, and an alcohol aqueous solution having a concentration of 90% or more (preferably ethanol). Is more preferable, and an aqueous alcohol solution (preferably ethanol) having a concentration of 95% or more is particularly preferable. In this specification, the solvent concentration is based on volume (v / v) unless otherwise specified.
The amount of the extraction solvent used is preferably 1 to 200 times, more preferably 1 to 100 times, and even more preferably 1 to 50 times the mass ratio of the extraction raw material. The amount is particularly preferably 5 to 40 times, and most preferably 5 to 30 times.
［抽出方法］
ムシゴケの抽出方法・条件は、地衣類や植物の抽出に用いられる通常の方法・条件を適用することができ、特に制限はない。例えば、ムシゴケを０〜１００℃で数分間〜数週間浸漬又は加熱還流するのが好ましく、室温付近の温度で１時間〜３週間程度浸漬することが特に好ましい。また、抽出効率を上げる為、併せて攪拌を行ったり、溶媒中でホモジナイズ処理を行ってもよい。
また、抽出工程の後、必要に応じて更に適当な分離手段、例えばゲル濾過、クロマトグラフィー、精密蒸留等により活性の高い画分を分画してもよい。
本発明の製造方法により得られる抽出物には、このようにして得られた各種抽出物、その希釈液、その濃縮液、その精製物又はそれらの乾燥末等が包含される。
[Extraction method]
Usual methods and conditions used for extraction of lichens and plants can be applied to the extraction method and conditions of mussels, and there is no particular limitation. For example, it is preferable to immerse the mushroom at 0 to 100 ° C. for several minutes to several weeks or to heat reflux, and it is particularly preferable to immerse it at a temperature near room temperature for about 1 hour to 3 weeks. Moreover, in order to raise extraction efficiency, you may stir together or may perform a homogenization process in a solvent.
Further, after the extraction step, a fraction having a high activity may be fractionated by an appropriate separation means, for example, gel filtration, chromatography, precision distillation or the like, if necessary.
The extract obtained by the production method of the present invention includes the various extracts thus obtained, a diluted solution thereof, a concentrated solution thereof, a purified product thereof or a dry powder thereof.
３．ベオミセス酸高含有ムシゴケ抽出物
本発明の方法により得られるムシゴケ抽出物は、ベオミセス酸を高含有する。具体的には、本発明のベオミセス酸高含有（高濃度含有）ムシゴケ抽出物は、同量のムシゴケを同量の濃度５０％アルコール水溶液を用いて同じ抽出条件（抽出時間、抽出温度等）で抽出した場合と比べて、得られたムシゴケ抽出物中のベオミセス酸濃度が２倍以上であることを特徴とする。本発明のムシゴケ抽出物中のベオミセス酸濃度は、抽出物の全質量に対して、３００ｐｐｍ以上であることが好ましく、４００ｐｐｍ以上であることがより好ましく、８００ｐｐｍ以上であることがさらに好ましい。なお、本明細書においてｐｐｍは、特に限定がない限り質量基準である。
後述の実施例で実証されているようにベオミセス酸はメラニン生成抑制作用を有し、これを含有する本発明の抽出物は優れた美白作用を奏する。ムシゴケには、ベオミセス酸、スクァマト酸等のデプシド類が成分として含有されることが知られているが、その中のベオミセス酸がメラニン生成抑制作用を奏することは従来知られておらず、本発明者らにより得られた新しい知見である。本発明のムシゴケ抽出物はベオミセス酸を高濃度で含有し、従来のムシゴケ抽出物と比べて一段と高い美白効果を奏する。なお、本発明において「美白（作用、効果）」とは、メラニン色素の生成を抑え、余分なメラニンのない本来の透明な肌色に戻すこと、または皮膚の黒化若しくはシミ・ソバカス等の色素沈着を防止、抑制することを意味する。
3. Veomiss acid-rich extract of moss moss Extracts obtained by the method of the present invention contain a high amount of beomyces acid. Specifically, the high-containment (high concentration content) Musgomé extract of the present invention is the same amount of Musgomoke using the same amount of 50% alcohol aqueous solution under the same extraction conditions (extraction time, extraction temperature, etc.). Compared with the case of extraction, the concentration of beomices acid in the obtained extract of moss is twice or more. The concentration of beomices acid in the extract of the moss mushroom of the present invention is preferably 300 ppm or more, more preferably 400 ppm or more, and further preferably 800 ppm or more with respect to the total mass of the extract. In the present specification, ppm is based on mass unless otherwise specified.
As demonstrated in the examples described later, beomesic acid has a melanin production inhibitory effect, and the extract of the present invention containing this exhibits an excellent whitening effect. It is known that Musgogoke contains depsides such as beomices acid and squalatoic acid as components, but it has not been known that beomices acid therein has a melanin production inhibitory effect, and the present invention It is a new finding obtained by the people. The mushroom extract of the present invention contains beomices acid in a high concentration, and has a whitening effect that is higher than that of the conventional mushroom extract. In the present invention, “whitening (action, effect)” refers to suppressing the production of melanin pigments, returning to the original transparent skin color without excess melanin, or pigmentation such as skin blackening or spots / sobacus It means to prevent and suppress.
４．美白剤・美白用組成物
本発明のベオミセス酸高含有ムシゴケ抽出物は、そのままエンドセリン作用抑制剤又は美白剤として用いてもよい。また、当該抽出物に、例えば酸化チタン、炭酸カルシウム、蒸留水、乳糖、デンプン等の適当な液体または固体の賦形剤または増量剤を加えて用いてもよい。組成物とする場合、剤中に含有される上記ムシゴケ抽出物の量は特に制限されないが、当該抽出物が０．０００１〜５０質量％含まれることが好ましく、０．００１〜２０質量％含まれることがより好ましく、０．０１〜１０質量％含まれることが特に好ましい。
4). Whitening Agent / Whitening Composition The beomises acid-rich Musigo extract of the present invention may be used as it is as an endothelin action inhibitor or a whitening agent. In addition, an appropriate liquid or solid excipient or extender such as titanium oxide, calcium carbonate, distilled water, lactose, starch or the like may be added to the extract. In the case of a composition, the amount of the above extract of moss moss contained in the agent is not particularly limited, but the extract is preferably contained in an amount of 0.0001 to 50% by mass, and 0.001 to 20% by mass is contained. It is more preferable that 0.01 to 10% by mass is contained.
本発明の美白剤には、上記ムシゴケ抽出物に加え、他の成分を加えてもよい。例えば、その他の美白剤、保湿剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、色材種等を加えることができる。他の薬効成分とともに組成物として用いる場合、美白剤中に含有される当該抽出物の量は特に制限されないが、当該抽出物が０．０００１〜５０質量％含まれることが好ましく、０．００１〜２０質量％含まれることがより好ましく、０．０１〜１０質量％含まれることが特に好ましい。 Other ingredients may be added to the whitening agent of the present invention in addition to the above-mentioned extract. For example, other whitening agents, moisturizers, antioxidants, ultraviolet absorbers, surfactants, thickeners, colorant types, and the like can be added. When used as a composition together with other medicinal ingredients, the amount of the extract contained in the whitening agent is not particularly limited, but the extract is preferably contained in an amount of 0.0001 to 50% by mass, 0.001 to It is more preferably 20% by mass, and particularly preferably 0.01 to 10% by mass.
本発明の美白剤は、皮膚外用剤の形態で使用することができる。「皮膚外用剤」とは、皮膚化粧料、外用医薬品、外用医薬部外品等として皮膚に適用されるものを意味し、その剤型も水溶液系、可溶化系、乳化系、粉末系、ゲル系、軟膏系、クリーム、水−油２層系、水−油−粉末３層系など、幅広い形態をとり得る。例えば、洗顔料、化粧水、乳液、クリーム、ジェル、エッセンス（美容液）、パック、マスク、ファンデーション、軟膏、シート状製品等の形態が挙げられる。
皮膚外用剤の形態で使用する場合には、本発明のムシゴケ抽出物の他、通常の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば界面活性剤、油性物質、高分子化合物、防腐剤、前記以外の薬効成分、紛体、紫外線吸収剤、色素、香料、乳化安定剤、pH調整剤等を適宜配合できる。
本発明のムシゴケ抽出物を含有する皮膚外用剤の使用量は、有効成分の含有量により異なるが、例えばクリーム状、軟膏状の場合、皮膚面１ｃｍ２当たり０．１〜５μｇ、液状製剤の場合、同じく０．１〜１０μｇ使用するのが好ましい。
The whitening agent of the present invention can be used in the form of a skin external preparation. “Skin external preparation” means those applied to the skin as skin cosmetics, external pharmaceuticals, quasi-drugs, etc., and their dosage forms are aqueous solutions, solubilization systems, emulsification systems, powder systems, gels It can take a wide variety of forms, such as systems, ointments, creams, water-oil two-layer systems, water-oil-powder three-layer systems. Examples thereof include face wash, lotion, milky lotion, cream, gel, essence (beauty serum), pack, mask, foundation, ointment, sheet-like product, and the like.
When used in the form of a skin external preparation, in addition to the extract of the present invention, ingredients used in normal skin external preparations such as surfactants, oily substances, polymer compounds, preservatives, and other medicinal effects Components, powders, ultraviolet absorbers, pigments, fragrances, emulsion stabilizers, pH adjusters, and the like can be appropriately blended.
The amount of the external preparation for skin containing the extract of the present invention varies depending on the content of the active ingredient. For example, in the case of cream or ointment, 0.1 to 5 μg per cm 2 of skin surface, in the case of liquid preparation Similarly, 0.1 to 10 μg is preferably used.
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。以下の試験例及び実施例では、ムシゴケとしてセッチャ（Thamnolia vermicularis）を用いた。 EXAMPLES Hereinafter, although this invention is demonstrated further in detail based on an Example, this invention is not limited to this. In the following test examples and examples, a setcha ( Thamnolia vermicularis ) was used as a mussels.
試験例１ ベオミセス酸とスクァマト酸の美白作用の検証
１．セッチャ抽出物からの成分の単離
（１）ベオミセス酸
セッチャ（新和物産社製）４１．６ｇに９５％エタノール水溶液１Ｌを加え、３０℃で３０日間抽出後、ろ過し、ろ紙上のセッチャを９５％エタノール水溶液２００ｍＬで洗浄し、最初のろ液に加え、セッチャ抽出物１１００ｍＬ（固形分２．９８ｇ）を得た。この抽出物５６ｍＬ（固形分１５１．７ｍｇ）をＨＰＬＣで分画し、ベオミセス酸２８．００ｍｇ（収率１８．５％）を得た。
単離成分の構造解析は、ＮＭＲにより行った。単離成分のＮＭＲスペクトルデータが文献で報告されているベオミセス酸（日本食品化学学会誌（日食化誌）Vol.14(2)，2007参照）のスペクトルデータとほぼ一致したことから、単離された成分はベオミセス酸であると同定した。ＮＭＲによる構造解析の結果を表１に示す。なお、表中のＭｅはメチル基を表す。
Test Example 1 Verification of whitening action of beomices acid and squamatoic acid Isolation of components from the setcha extract (1) Beomices acid 11.6 L of 95% ethanol aqueous solution was added to 41.6 g of setcha (manufactured by Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 30 ° C for 30 days, filtered, and setcha on the filter paper It was washed with 200 mL of 95% aqueous ethanol solution and added to the first filtrate to obtain 1100 mL of setcha extract (solid content 2.98 g). 56 mL of this extract (solid content: 151.7 mg) was fractionated by HPLC to obtain 28.00 mg of beomices acid (yield 18.5%).
The structural analysis of the isolated component was performed by NMR. The NMR spectrum data of the isolated component was in good agreement with the spectrum data of beomices acid reported in the literature (Japanese Journal of Food Chemistry (Eclipse Chemical Journal) Vol.14 (2), 2007). The identified component was identified as beomices acid. The results of structural analysis by NMR are shown in Table 1. In the table, Me represents a methyl group.
（２）スクァマト酸
上記（１）で得られたセッチャ抽出物２４ｍＬ（固形分６５．０４ｍｇ）をＨＰＬＣで分画したところ、スクァマト酸５．６ｍｇ（収率８．６１％）が得られた。単離成分の構造解析は、ＮＭＲにより行った。単離成分のＮＭＲスペクトルデータが文献で報告されているスクァマト酸（Yunnan Zhiwu Yanjiu，24(4)，525-530(2002)）のスペクトルデータとほぼ一致したことから、単離された成分はスクァマト酸であると同定した。ＮＭＲによる構造解析の結果を表２に示す。なお、表中のＭｅはメチル基を表す。
(2) Squamatoic acid 24 mL (solid content 65.04 mg) of the Setcha extract obtained in (1) above was fractionated by HPLC to obtain 5.6 mg (yield: 8.61%) of squamatoic acid. The structural analysis of the isolated component was performed by NMR. Since the NMR spectral data of the isolated component was almost consistent with the spectral data of squamatoic acid (Yunnan Zhiwu Yanjiu, 24 (4), 525-530 (2002)) reported in the literature, the isolated component was Identified as acid. The results of structural analysis by NMR are shown in Table 2. In the table, Me represents a methyl group.
２．エンドセリン作用抑制効果の検証
上記１．で製造したベオミセス酸及びスクァマト酸について、下記の評価系を用いてエンドセリン作用抑制効果を検証した。
エンドセリンはメラノサイトに作用してカルシウム濃度を上昇させ、メラニン産生を増加させることが知られており（Yada et al. (1991) J. Biol. Chem. 266, 18352-18357、Imokawa et al. (1992) J. Biol. Chem. 267, 24675-24680参照）、エンドセリンの当該作用を抑制する物質は美白成分として有用である。
2. Verification of endothelin action inhibitory effect About the beomices acid and squalato acid manufactured by (2), the endothelin action inhibitory effect was verified using the following evaluation system.
Endothelin is known to act on melanocytes to increase calcium concentration and increase melanin production (Yada et al. (1991) J. Biol. Chem. 266, 18352-18357, Imokawa et al. (1992 ) J. Biol. Chem. 267, 24675-24680), substances that inhibit the action of endothelin are useful as whitening ingredients.
（１）評価系
正常ヒト新生児表皮由来メラノサイト（ＮＨＥＭｓ；クラボウ社）を、蛍光検出用の９６穴プレートに３×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ（２００μＬ／ｗｅｌｌ）で播種し、５％ＣＯ２下にて３７℃で培養した。培地には、ＰＭＡ（−）の増殖用添加剤（ＨＭＧＳ）を含むＭｅｄｉｕｍ ２５４を用いた。
３日間培養後、培養プレートからデカントで培地を除去し、細胞内Ｃａ２＋＋測定試薬Ｆｌｕｏ４−ＡＭを含むアッセイバッファーに置換し、３７℃で１時間インキュベートした。次に、ＦＤＳＳ（Functional Drug Screening System）機器において測定開始２０秒後に評価サンプルとして所定濃度の上記化合物（ベオミセス酸又はスクァマト酸）を１分間前処理した後、リガンドであるエンドセリン（ＥＴ−１、終濃度１００ｎＭ）を添加し、Ｆｌｕｏ４−ＡＭの蛍光をＥｘ．４８０ｎｍ／Ｅｍ．５４０ｎｍの測定波長で測定開始から５分後まで経時的に検出した。
コントロールにおけるＦｌｕｏ４−ＡＭの蛍光増加比（Ｍａｘ ｒａｔｉｏ−Ｍｉｎ ｒａｔｉｏ）を１００とした場合の相対値（％）で、各化合物の細胞内カルシウム（カルシウムイオン）濃度上昇率（％）を算出し、エンドセリン作用抑制効果を評価した。なお、コントロールとして、エタノール又は１０〜９５ｖ／ｖ％の含水エタノール溶液を終濃度０．１〜０．５ｖ／ｖ％で添加したものを用いた。
(1) Evaluation system Normal human newborn epidermis-derived melanocytes (NHEMs; Kurabo Industries Co., Ltd.) are seeded at 3 × 10 4 cells / well (200 μL / well) in a 96-well plate for fluorescence detection, and under 5% CO 2 . Cultured at 37 ° C. Medium 254 containing PMA (-) growth additive (HMGS) was used as the medium.
After 3 days of culture, the medium was removed by decantation from the culture plates and replaced in the assay buffer containing intracellular Ca 2 ++ measuring reagent Fluo4-AM, and incubated for 1 hour at 37 ° C.. Next, after 20 seconds from the start of measurement in an FDSS (Functional Drug Screening System) device, the above-mentioned compound (beomyces acid or squalatoic acid) at a predetermined concentration is pretreated for 1 minute as an evaluation sample, and then endothelin as a ligand (ET-1, terminal). Concentration of 100 nM), and the fluorescence of Fluo4-AM was measured using Ex. 480 nm / Em. Detection was performed over time from the start of measurement at a measurement wavelength of 540 nm until 5 minutes later.
Relative value (%) when the fluorescence increase ratio of Fluo4-AM in the control (Max ratio-Min ratio) is 100, the rate of increase in intracellular calcium (calcium ion) concentration (%) of each compound is calculated, and endothelin The action inhibitory effect was evaluated. As a control, ethanol or a 10-95 v / v% aqueous ethanol solution added at a final concentration of 0.1-0.5 v / v% was used.
（２）ベオミセス酸及びスクァマト酸の評価
上記１．で単離したベオミセス酸、スクァマト酸を、表３に示す終濃度で前処理して上記評価系に供し、エンドセリン刺激によるＣａ濃度上昇率を算出した（Ｎ＝６）。結果を表３に示す。
(2) Evaluation of beomices acid and squamato acid The beomises acid and squalatoic acid isolated in the above were pretreated at the final concentrations shown in Table 3 and subjected to the above evaluation system, and the Ca concentration increase rate due to endothelin stimulation was calculated (N = 6). The results are shown in Table 3.
表３から明らかなように、ベオミセス酸を添加した系ではいずれも、濃度５０μＭにおいて、エンドセリン刺激による細胞内Ｃａ濃度上昇が４５％以上も抑制されることが確認された。一方、スクァマト酸を添加した系では、濃度５０μＭにおいては、細胞内Ｃａ濃度上昇は約４％程度抑制されるにとどまった。 As is apparent from Table 3, it was confirmed that the increase in intracellular Ca concentration due to endothelin stimulation was suppressed by 45% or more in the system to which beomices acid was added at a concentration of 50 μM. On the other hand, in the system to which squamatoic acid was added, the increase in intracellular Ca concentration was suppressed by about 4% at a concentration of 50 μM.
３．メラニン産生抑制作用の検証
上記１．で単離したベオミセス酸を用いて、皮膚におけるメラニン産生の抑制作用について検証した。
メラノサイトを含む３次元培養皮膚モデル（ＭＥＬ３００Ａ；クラボウ社）を、メラノサイト活性化因子であるエンドセリン−１（ＥＴ-１）とＳＣＦ（幹細胞増殖因子）とを終濃度１０ｎＭで添加したEPI-100-NMM113培地を用いて、３７℃、５％ＣＯ２条件下にて培養した。培養初日より、ベオミセス酸を終濃度５０μＭで添加した（Ｎ＝２）。培地交換は３日に一度行った。１４日後に、皮膚モデルをＰＢＳにて洗浄し、写真撮影を行った。結果を図１に示す。その後、アラマーブルー試薬を用いて細胞呼吸活性を測定し、上記終濃度が細胞毒性を示さない濃度であることを確認した（結果は図示せず）。
続いて皮膚モデルカップをＰＢＳで洗浄し、ピンセットで皮膚シートを剥離してチューブに移し、ＰＢＳで３回洗浄した。５０％エタノールで３回、１００％エタノールで２回洗浄した後、室温で一晩放置し、完全に乾燥させた。２Ｍ ＮａＯＨを２００μＬ加えた後１００℃で溶解させ、遠心分離によって得られた上清について４０５ｎｍの測定波長で吸光度を測定し、メラニン量を算出した。結果を図２に示す。メラニン量は、コントロールのメラニン量を１００とした場合の相対値（％）で示した。なお、コントロールとして、エタノール又は１０〜９５ｖ／ｖ％の含水エタノール溶液を終濃度０．１〜０．５ｖ／ｖ％で添加したものを用いた。
3. Verification of melanin production inhibitory action The inhibitory effect of melanin production in the skin was verified using beomices acid isolated in 1.
EPI-100-NMM113 in which a three-dimensional cultured skin model containing melanocytes (MEL300A; Kurabo Industries Co., Ltd.) was added with endothelin-1 (ET-1) and SCF (stem cell growth factor) which are melanocyte activators at a final concentration of 10 nM. Using the medium, the cells were cultured under the conditions of 37 ° C. and 5% CO 2 . From the first day of culture, beomices acid was added at a final concentration of 50 μM (N = 2). The medium was changed once every 3 days. After 14 days, the skin model was washed with PBS and photographed. The results are shown in FIG. Thereafter, cell respiration activity was measured using Alamar Blue reagent, and it was confirmed that the final concentration was a concentration that did not show cytotoxicity (results not shown).
Subsequently, the skin model cup was washed with PBS, the skin sheet was peeled off with tweezers, transferred to a tube, and washed with PBS three times. After washing three times with 50% ethanol and twice with 100% ethanol, the mixture was allowed to stand overnight at room temperature and dried completely. 200 μL of 2M NaOH was added and dissolved at 100 ° C., and the absorbance of the supernatant obtained by centrifugation was measured at a measurement wavelength of 405 nm to calculate the amount of melanin. The results are shown in FIG. The amount of melanin was expressed as a relative value (%) when the amount of control melanin was 100. As a control, ethanol or a 10-95 v / v% aqueous ethanol solution added at a final concentration of 0.1-0.5 v / v% was used.
図１から明らかなように、ベオミセス酸を添加した系では、コントロールの系に比べて皮膚の色が明るく、メラニン産生による皮膚の黒化が抑えられていた。また、図２に示すように、ベオミセス酸を添加した系では、細胞毒性を示さない添加濃度において、コントロールの系に比べて皮膚組織中のメラニン量が４０％以上も低下していた。 As is clear from FIG. 1, in the system to which beomices acid was added, the skin color was brighter than in the control system, and the skin blackening due to melanin production was suppressed. Further, as shown in FIG. 2, in the system to which beomices acid was added, the amount of melanin in the skin tissue was reduced by 40% or more compared to the control system at an added concentration that did not show cytotoxicity.
続いて、上記１．で単離したスクァマト酸を用いて、上記と同様にメラニン産生抑制作用について検証した。スクァマト酸を添加した系では、ベオミセス酸のような有意なメラニン量の低下は見られなかった。 Subsequently, the above 1. In the same manner as described above, the melanin production inhibitory action was verified using the squamatoic acid isolated in (1). In the system to which squamatoic acid was added, there was no significant decrease in the amount of melanin like beomices acid.
以上の結果から、ムシゴケに含まれるベオミセス酸は、エンドセリン作用による細胞内Ｃａ濃度上昇を抑制し、皮膚におけるメラニン産生を顕著に抑制することがわかった。一方、同じムシゴケに含まれる成分であっても、スクァマト酸はエンドセリン作用抑制効果及びメラニン産生抑制効果はほとんど見られなかった。 From the above results, it was found that beomices acid contained in mussels suppresses an increase in intracellular Ca concentration due to endothelin action and remarkably suppresses melanin production in the skin. On the other hand, even if it was a component contained in the same mushroom, squamatoic acid hardly showed an endothelin action inhibitory effect and a melanin production inhibitory effect.
実施例１−１
セッチャ（新和物産（株）より入手、中国産）５．０ｇに６０％エタノール溶液１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物７５．９ｇ（蒸発残分０．４５（ｗ／ｖ）％）を得た。
Example 1-1
Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd., made in China) 5.0 g of 60% ethanol solution was added to 5.0 g and extracted at 40 ° C. for one week, followed by filtration, 75.9 g of Setcha extract (evaporation residue 0.45 ( w / v)%).
実施例１−２
セッチャ（新和物産（株）より入手、中国産）５．０ｇに７０％エタノール溶液１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物７４．６ｇ（蒸発残分０．５２（ｗ／ｖ）％）を得た。
Example 1-2
Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd., China) 5.0 g of 70% ethanol solution was added to 5.0 g and extracted at 40 ° C. for one week, followed by filtration, 74.6 g of Setcha extract (evaporation residue 0.52 ( w / v)%).
実施例１−３
セッチャ（新和物産（株）より入手、中国産）５．０ｇに８０％エタノール溶液１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物７２．６ｇ（蒸発残分０．５０（ｗ／ｖ）％）を得た。
Example 1-3
Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd., China) 5.0 g of 80% ethanol solution was added to 5.0 g, extracted at 40 ° C. for one week, filtered, 72.6 g of Setcha extract (evaporation residue 0.50 ( w / v)%).
実施例１−４
セッチャ（新和物産（株）より入手、中国産）５．０ｇに９０％エタノール溶液１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物７１．７ｇ（蒸発残分０．４６（ｗ／ｖ）％）を得た。
Example 1-4
Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd., China) 5.0g of 90% ethanol solution was added to 5.0g, extracted at 40 ° C for one week, filtered, and 71.7g of Setcha extract (evaporation residue 0.46 ( w / v)%).
実施例１−５
セッチャ（新和物産（株）より入手、中国産）５．０ｇに９５％エタノール溶液１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物６９．３ｇ（蒸発残分０．５２（ｗ／ｖ）％）を得た。
Example 1-5
Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd., China) 5.0 g of 95% ethanol solution was added to 5.0 g, extracted at 40 ° C. for one week, filtered, and setcha extract 69.3 g (evaporation residue 0.52 ( w / v)%).
実施例１−６
セッチャ（新和物産（株）より入手、中国産）５．０ｇに９９．５％エタノール溶液１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物６７．５ｇ（蒸発残分０．４７（ｗ／ｖ）％）を得た。
Example 1-6
Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd., China) 5.0 g of 99.5% ethanol solution was added to 5.0 g, followed by extraction at 40 ° C. for one week, followed by filtration. 47 (w / v)%).
参考例１−１
セッチャ（新和物産（株）より入手、中国産）５．０ｇに１０％エタノール溶液１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物８０．０ｇ（蒸発残分０．６９（ｗ／ｖ）％）を得た。
Reference Example 1-1
Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd., made in China) 5.0 g of 10% ethanol solution was added to 5.0 g, extracted at 40 ° C. for one week, filtered, and setac extract 80.0 g (evaporation residue 0.69 ( w / v)%).
参考例１−２
特開２００６−１８２７３１に記載の方法と同様にして、セッチャ（新和物産（株）より入手、中国産）５．０ｇに５０％エタノール溶液１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物７７．６ｇ（蒸発残分０．５１（ｗ／ｖ）％）を得た。
Reference Example 1-2
In the same manner as described in JP-A-2006-182731, 100 mL of a 50% ethanol solution was added to 5.0 g of Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd., manufactured in China), extracted at 40 ° C. for one week, filtered, 77.6 g of Setcha extract (0.51 (w / v)% evaporation residue) was obtained.
ベオミセス酸濃度の測定（１）
上記実施例１−１〜１−６及び参考例１−１及び１−２で得られた各セッチャ抽出物のベオミセス酸含有量を、ＨＰＬＣを用いて下記の条件で分析した。測定に用いた装置及び測定条件は下記のとおりである。結果を表４に示す。
測定機器：日立HPLCマルチシステムソフトウェアZ30ZL200、日立HPLCマネージャーD-7000、日立HPLC用オートサンプラーL-7200、日立HPLC用カラムオーブンL-7300、日立HPLC用紫外可視検出器L-7420、日立HPLCポンプL-7100
＜HPLC分析条件＞
流速：0.75mL/min
使用したカラム：Inertsil ODS-3 5μm(GL Science)，3.0I.D. × 150mm
カラム温度：40℃
移動相： 0.1%トリフルオロ酢酸含有水溶液: 0.1%トリフルオロ酢酸含有メタノール=30:70（ベオミセス酸リテンションタイム 9.06min）。
検出波長：254nm
Measurement of beomices acid concentration (1)
The Veomices acid content of each setcher extract obtained in Examples 1-1 to 1-6 and Reference Examples 1-1 and 1-2 was analyzed under the following conditions using HPLC. The apparatus and measurement conditions used for the measurement are as follows. The results are shown in Table 4.
Measuring instruments: Hitachi HPLC Multisystem Software Z30ZL200, Hitachi HPLC Manager D-7000, Hitachi HPLC Autosampler L-7200, Hitachi HPLC Column Oven L-7300, Hitachi HPLC UV-Visible Detector L-7420, Hitachi HPLC Pump L -7100
<HPLC analysis conditions>
Flow rate: 0.75mL / min
Column used: Inertsil ODS-3 5μm (GL Science), 3.0ID × 150mm
Column temperature: 40 ° C
Mobile phase: 0.1% trifluoroacetic acid-containing aqueous solution: 0.1% trifluoroacetic acid-containing methanol = 30: 70 (Beomices acid retention time 9.06 min).
Detection wavelength: 254nm
表４の結果から明らかなように、抽出溶媒のアルコール濃度が５０％以下の場合、抽出物中のベオミセス酸濃度は一様に低い値を示した。一方、抽出溶媒のアルコール濃度が６０％以上になると抽出物中のベオミセス酸濃度が急に増加することがわかった。 As is clear from the results in Table 4, when the alcohol concentration of the extraction solvent was 50% or less, the concentration of beomices acid in the extract was uniformly low. On the other hand, it was found that when the alcohol concentration of the extraction solvent was 60% or more, the concentration of beomices acid in the extract increased rapidly.
実施例２−１
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇに６０％エタノール溶液１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物７９．８ｇ（蒸発残分０．２６（ｗ／ｖ）％）を得た。
Example 2-1
100 g of 60% ethanol solution was added to 2.5 g of Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for one week, filtered, and set to 79.8 g of Setcha extract (evaporation residue 0.26 (w / v )%).
実施例２−２
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇに７０％エタノール溶液１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物７８．６ｇ（蒸発残分０．２７（ｗ／ｖ）％）を得た。
Example 2-2
100 g of 70% ethanol solution was added to 2.5 g of Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for one week, filtered, and set to 78.6 g of Setcha extract (evaporation residue 0.27 (w / v )%).
実施例２−３
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇに８０％エタノール溶液１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物７５．８ｇ（蒸発残分０．２８（ｗ／ｖ）％）を得た。
Example 2-3
100 g of 80% ethanol solution was added to 2.5 g of Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for one week, filtered, and set to 75.8 g of Setcha extract (evaporation residue 0.28 (w / v )%).
実施例２−４
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇに９０％エタノール溶液１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物７４．０ｇ（蒸発残分０．３０（ｗ／ｖ）％）を得た。
Example 2-4
100 g of 90% ethanol solution was added to 2.5 g of Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for 1 week, filtered, and set to 74.0 g of Setcha extract (evaporation residue 0.30 (w / v )%).
実施例２−５
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇに９５％エタノール溶液１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物７２．６ｇ（蒸発残分０．３４（ｗ／ｖ）％）を得た。
Example 2-5
100 g of a 95% ethanol solution was added to 2.5 g of Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for one week, filtered, and set to 72.6 g of Setcha extract (residual evaporation 0.34 (w / v )%).
実施例２−６
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇに９９．５％エタノール溶液１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物７０．７ｇ（蒸発残分０．３０（ｗ／ｖ）％）を得た。
Example 2-6
100 g of 99.5% ethanol solution was added to 2.5 g of Setcha (available from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for one week, filtered, and set to 70.7 g of Setcha extract (residual evaporation 0.30 (w / V)%).
参考例２−１
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇに１０％エタノール溶液１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物８６．２ｇ（蒸発残分０．３６（ｗ／ｖ）％）を得た。
Reference Example 2-1
100 g of 10% ethanol solution was added to 2.5 g of Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for one week, filtered, and set to 86.2 g of Setcha extract (evaporation residue 0.36 (w / v )%).
参考例２−２
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇに５０％エタノール溶液１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物８１．７ｇ（蒸発残分０．２９（ｗ／ｖ）％）を得た。
Reference Example 2-2
100 g of 50% ethanol solution was added to 2.5 g of Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for 1 week, filtered, and set to 81.7 g of Setcha extract (evaporation residue 0.29 (w / v )%).
ベオミセス酸濃度の測定（２）
前記ベオミセス酸濃度の測定（１）と同様にして、実施例２−１〜２−６及び参考例２−１及び２−２で得られた各抽出物中のベオミセス酸濃度を測定した。結果を表５に示す。
Measurement of beomices acid concentration (2)
In the same manner as the measurement (1) of the beomices acid concentration, the beomices acid concentration in each extract obtained in Examples 2-1 to 2-6 and Reference Examples 2-1 and 2-2 was measured. The results are shown in Table 5.
表５の結果から明らかなように、抽出溶媒のアルコール濃度が５０％以下の場合、抽出物中のベオミセス酸濃度は一様に低い値を示した。一方、抽出溶媒のアルコール濃度が６０％以上になると抽出物中のベオミセス酸濃度が急に増加することがわかった。また、表４の結果との比較から、アルコール濃度の変化に伴うベオミセス酸濃度の上昇は、溶媒量に対するセッチャの使用量が少ないほど顕著であることがわかった。 As is apparent from the results in Table 5, when the alcohol concentration of the extraction solvent was 50% or less, the concentration of beomices acid in the extract showed a uniformly low value. On the other hand, it was found that when the alcohol concentration of the extraction solvent was 60% or more, the concentration of beomices acid in the extract increased rapidly. Further, from the comparison with the results in Table 4, it was found that the increase in the concentration of beomices acid accompanying the change in the alcohol concentration was more remarkable as the amount of the setter used with respect to the solvent amount was smaller.
実施例３−１
セッチャ（新和物産（株）より入手）５．０ｇに１００％１，３−ブタンジオール１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物８６．９５ｇ（蒸発残分０．２６（ｗ／ｖ）％）を得た。
Example 3-1
Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd.) 5.0 g 100% 1,3-butanediol 100 mL, extracted at 40 ° C. for one week, filtered and setcha extract 86.95 g (evaporation residue 0.26) (W / v)%).
参考例３−１
セッチャ（新和物産（株）より入手）５．０ｇに５０％１，３−ブタンジオール１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物８６．０７ｇ（蒸発残分０．３５（ｗ／ｖ）％）を得た。
Reference Example 3-1
50% 1,3-butanediol (100 mL) was added to 5.0 g of Setcha (available from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted for one week at 40 ° C., filtered, and 86.07 g of Setcha extract (evaporation residue 0.35). (W / v)%).
ベオミセス酸濃度の測定（３）
前記ベオミセス酸濃度の測定（１）と同様にして、実施例３−１及び参考例３−１で得られた各抽出物中のベオミセス酸濃度を測定した。結果を表６に示す。
Measurement of beomices acid concentration (3)
In the same manner as the measurement (1) of the beomices acid concentration, the beomices acid concentration in each extract obtained in Example 3-1 and Reference Example 3-1 was measured. The results are shown in Table 6.
表６から明らかなように、溶媒として５０％１，３−ブチレングリコールを用いた抽出物ではベオミセス酸濃度が低いのに対し、１００％１，３−ブチレングリコールを用いた抽出物ではベオミセス酸濃度が非常に高い値を示した。 As is clear from Table 6, the extract using 50% 1,3-butylene glycol as the solvent has a low beomices acid concentration, whereas the extract using 100% 1,3-butylene glycol has the beomises acid concentration. Showed very high values.
実施例４−１
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇにテトラヒドロフラン１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物７５．３ｇ（蒸発残分（ｗ／ｖ）０．３２％）を得た。
Example 4-1
100 g of tetrahydrofuran was added to 2.5 g of Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for one week, filtered, and 75.3 g of Setcha extract (residual evaporation (w / v) 0.32%) Got.
実施例４−２
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇに１，４−ジオキサン１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物９３．４ｇ（蒸発残分０．３２（ｗ／ｖ）％）を得た。
Example 4-2
100 g of 1,4-dioxane was added to 2.5 g of Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted for one week at 40 ° C., filtered, and 93.4 g of Setcha extract (residual evaporation 0.32 (w / v)%).
実施例４−３
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇにポリエチレングリコール（ＰＥＧ２００）を１００ｍＬ加え、４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物１００．１ｇを得た。
Example 4-3
100 ml of polyethylene glycol (PEG200) was added to 2.5 g of Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for one week, and filtered to obtain 100.1 g of Setcha extract.
実施例４−４
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇにセッチャにポリエチレングリコール（ＰＥＧ４００）を１００ｍＬ加え、４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物１００．０ｇを得た。
Example 4-4
100 g of polyethylene glycol (PEG 400) was added to 2.5 g of Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for one week, and filtered to obtain 100.0 g of Setcha extract.
実施例４−５
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇにポリエチレングリコール（ＰＥＧ６００）を１００ｍＬ加え、４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物９８．１ｇを得た。
Example 4-5
100 g of polyethylene glycol (PEG 600) was added to 2.5 g of Setcha (available from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for one week, and then filtered to obtain 98.1 g of Setcha extract.
実施例４−６
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇにポリオキシエチレンメチルグルコシド（商品名：グルカムＥ−１０，ノベオン（Ｎｏｖｅｏｎ）社製）を１００ｍＬ加え、４０℃で一週間抽出後、デカンテーションにより、抽出物とセッチャを分離し、セッチャ抽出物７４．４ｇを得た。
Example 4-6
100 mL of polyoxyethylene methyl glucoside (trade name: Glucam E-10, manufactured by Noveon) was added to 2.5 g of Setcha (available from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for one week, and then decanted. Thus, the extract and the setter were separated to obtain 74.4 g of the setcher extract.
実施例４−７
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇにポリオキシエチレンメチルグルコシド（商品名：グルカムＥ−２０，ノベオン（Ｎｏｖｅｏｎ）社製）を１００ｍＬ加え、４０℃で一週間抽出後、デカンテーションにより、抽出物とセッチャを分離し、セッチャ抽出物１１１．３ｇを得た。
Example 4-7
Add 100 mL of polyoxyethylene methyl glucoside (trade name: Glucam E-20, manufactured by Noveon) to 2.5 g of Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extract at 40 ° C. for one week, and then decantation Thus, the extract and the setter were separated to obtain 111.3 g of the setcher extract.
参考例４−１
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇにジエチルエーテル１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物６０．７ｇ（蒸発残分０．０３（ｗ／ｖ）％）を得た。
Reference Example 4-1
100 g of diethyl ether was added to 2.5 g of Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for 1 week, filtered, and set to 60.7 g of Setcha extract (evaporation residue 0.03 (w / v)%) )
参考例４−２
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇにパルミチル−１，３−ジメチルブチルエーテル１００ｍＬを加え４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物７０．５ｇを得た。
Reference Example 4-2
100 ml of palmityl-1,3-dimethylbutyl ether was added to 2.5 g of Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for one week, and filtered to obtain 70.5 g of Setcha extract.
ベオミセス酸濃度の測定（４）
前記ベオミセス酸濃度の測定（１）と同様にして、実施例４−１〜４−７及び参考例４−１及び４−２で得られた各抽出物中のベオミセス酸濃度を測定した。結果を表７に示す。
Measurement of beomices acid concentration (4)
In the same manner as the measurement (1) of the beomices acid concentration, the beomices acid concentration in each extract obtained in Examples 4-1 to 4-7 and Reference Examples 4-1 and 4-2 was measured. The results are shown in Table 7.
表７の結果から明らかなように、溶媒として酸素原子数が１の鎖状エーテルを用いた抽出物（参考例４−１、４−２）ではベオミセス酸濃度が低いのに対し、環状エーテル及び酸素原子数が２以上のエーテルを用いた抽出物（実施例４−１〜４−７）ではベオミセス酸濃度が非常に高い値を示した。 As is clear from the results in Table 7, the extract using a chain ether having one oxygen atom as a solvent (Reference Examples 4-1 and 4-2) has a low beomisic acid concentration, whereas cyclic ether and Extracts using ethers having 2 or more oxygen atoms (Examples 4-1 to 4-7) showed a very high concentration of beomices acid.
実施例５−１
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇに酢酸エチル１００ｍＬを加え、４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物８１．３ｇ（蒸発残分０．１４（ｗ／ｖ）％）を得た。
Example 5-1
100 g of ethyl acetate was added to 2.5 g of Setcha (available from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for one week, filtered, and 81.3 g of Setcha extract (evaporation residue 0.14 (w / v)) %).
実施例５−２
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇに、酢酸エチル５０ｍＬと９９．５％エタノール５０ｍＬとの混合溶媒を加え、４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物７６．２ｇ（蒸発残分０．３４（ｗ／ｖ）％）を得た。
Example 5-2
A mixed solvent of 50 mL of ethyl acetate and 50 mL of 99.5% ethanol is added to 2.5 g of Setcha (available from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for one week, filtered, and 76.2 g of Setcha extract. (Evaporation residue 0.34 (w / v)%) was obtained.
実施例５−３
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇに、酢酸エチル５０ｍＬと９５％エタノール水溶液５０ｍＬとの混合溶媒を加え、４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物７７．２ｇ（蒸発残分０．３７（ｗ／ｖ）％）を得た。
Example 5-3
A mixed solvent of 50 mL of ethyl acetate and 50 mL of 95% aqueous ethanol solution was added to 2.5 g of Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for one week, filtered, and 77.2 g of Setcha extract ( An evaporation residue of 0.37 (w / v)%) was obtained.
実施例５−４
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇに、酢酸エチル５０ｍＬと５０％エタノール水溶液５０ｍＬとの混合溶媒を加え、４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物８０．１ｇ（蒸発残分０．４４（ｗ／ｖ）％）を得た。
Example 5-4
A mixed solvent of 50 mL of ethyl acetate and 50 mL of 50% aqueous ethanol was added to 2.5 g of Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for one week, filtered, and set to 80.1 g of Setcha extract ( An evaporation residue of 0.44 (w / v)%) was obtained.
参考例５−１
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇにクロロホルム１００ｍＬを加え、４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物１３２．６ｇ（蒸発残分０．０４（ｗ／ｖ）％）を得た。
Reference Example 5-1
100 g of chloroform was added to 2.5 g of Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted for one week at 40 ° C., filtered, and 132.6 g of Setcha extract (evaporation residue 0.04 (w / v)%) )
参考例５−２
セッチャ（新和物産（株）より入手）５．０ｇにヘキサン１００ｍＬを加え、４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物５１．８ｇ（蒸発残分０．０２（ｗ／ｖ）％）を得た。
Reference Example 5-2
100 g of hexane was added to 5.0 g of Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for one week, filtered, and 51.8 g of Setcha extract (evaporation residue 0.02 (w / v)%) )
参考例５−３
セッチャ（新和物産（株）より入手）２．５ｇにトルエン１００ｍＬを加え、４０℃で一週間抽出後、ろ過し、セッチャ抽出物７０．９ｇ（蒸発残分０．０１（ｗ／ｖ）％）を得た。
Reference Example 5-3
100 g of toluene was added to 2.5 g of Setcha (obtained from Shinwa Bussan Co., Ltd.), extracted at 40 ° C. for one week, filtered, and 70.9 g of Setcha extract (residual evaporation 0.01 (w / v)% )
ベオミセス酸濃度の測定（５）
前記ベオミセス酸濃度の測定（１）と同様にして、実施例５−１〜５−４及び参考例５−１〜５−３で得られた各抽出物中のベオミセス酸濃度を測定した。結果を表８に示す。
Measurement of beomices acid concentration (5)
In the same manner as in the measurement (1) of the beomices acid concentration, the beomices acid concentration in each extract obtained in Examples 5-1 to 5-4 and Reference Examples 5-1 to 5-3 was measured. The results are shown in Table 8.
表８から明らかなように、炭化水素溶媒やハロゲン系溶媒を用いた抽出物ではベオミセス酸濃度が低いのに対し、酢酸エチル及びその混合溶媒を用いた抽出物ではベオミセス酸濃度が非常に高い値を示した。 As is apparent from Table 8, the extract using a hydrocarbon solvent or a halogen-based solvent has a low beomices acid concentration, whereas the extract using ethyl acetate or a mixed solvent thereof has a very high beomises acid concentration. showed that.
実施例６ エンドセリン作用抑制効果の検証
１．セッチャ抽出物
上記試験例１の２．で用いた評価系により、上記実施例１で得られたセッチャ抽出物のエンドセリン作用抑制効果を検証した。
評価サンプルとして、実施例１−１、１−２、１−３、１−５、１−６あるいはその希釈品、及び参考例１−１、１−２で得られた抽出物を用いた。これらの抽出物を下記表９に示す評価濃度で前処理して上記評価系に供し、エンドセリン刺激によるＣａ濃度上昇率を算出した（Ｎ＝６）。なお、各抽出物は、溶媒をＤＭＳＯに置換後、上記試験において０．６ｖ／ｖ％添加して評価を行った。コントロールとしては、ＤＭＳＯを０．６ｖ／ｖ％添加したものを用いた。結果を表９に示す。
Example 6 Verification of endothelin action inhibitory effect Setcha extract 2 of Test Example 1 above. Using the evaluation system used in the above, the endothelin action inhibitory effect of the setcher extract obtained in Example 1 was verified.
As an evaluation sample, Examples 1-1, 1-2, 1-3, 1-5, 1-6 or diluted products thereof, and extracts obtained in Reference Examples 1-1 and 1-2 were used. These extracts were pretreated at the evaluation concentrations shown in Table 9 below and subjected to the above evaluation system, and the Ca concentration increase rate due to endothelin stimulation was calculated (N = 6). Each extract was evaluated by adding 0.6 v / v% in the above test after replacing the solvent with DMSO. As a control, DMSO added with 0.6 v / v% was used. The results are shown in Table 9.
２．ジャーマンカミツレ抽出物（参考例６）
ジャーマンカミツレ（和名：カミツレ、新和物産（株）より入手）の花部４０ｇへ、５０％エタノール含有水溶液４００ｍＬを加え、室温で１４日間抽出後、濾過し、ジャーマンカミツレ抽出物（２２１ｍＬ）を得た（蒸発残分２．６３％）。得られたジャーマンカミツレエキスを、０．５ｖ／ｖ％の終濃度で前処理して上記セッチャ抽出物と同様の評価系に供し、エンドセリン刺激によるカルシウム（Ｃａ）濃度上昇率を算出した（Ｎ＝６）。結果を表９に示す。
なお、ジャーマンカミツレエキスはエンドセリンの作用によるメラノサイトのＣａ濃度上昇を抑制し、メラニン産生を抑制することが知られている。
2. German chamomile extract (Reference Example 6)
Add 40 mL of 50% ethanol-containing aqueous solution to 40 g of flower portion of German chamomile (Japanese name: Chamomile, Shinwa Bussan Co., Ltd.), extract at room temperature for 14 days, filter, and extract German chamomile extract (221 mL). Obtained (evaporation residue 2.63%). The obtained German chamomile extract was pretreated at a final concentration of 0.5 v / v% and subjected to the same evaluation system as the above Setcha extract, and the rate of increase in calcium (Ca) concentration by endothelin stimulation was calculated (N = 6). The results are shown in Table 9.
It is known that the German chamomile extract suppresses the increase in Ca concentration of melanocytes due to the action of endothelin and suppresses melanin production.
表９から明らかなように、アルコール濃度５０％以下の溶媒で抽出した抽出物を添加した系（試料１及び２）では、細胞内Ｃａ濃度上昇率はほとんど変化しなかった。これに対し、アルコール濃度６０％以上の溶媒で抽出した抽出物を添加した系（試料３〜８）では、エンドセリン刺激による細胞内Ｃａ濃度上昇率が有意に低下していた。また、試料３〜８の細胞内Ｃａ濃度上昇抑制作用は、公知の美白成分であるジャーマンカミツレエキス（参考例６）と同程度、或いはそれ以上のものであった。
以上の結果から、特定の抽出溶媒を用いて得られた本発明のムシゴケ抽出物は、優れたエンドセリン抑制作用を有していることがわかった。
As is clear from Table 9, in the system (samples 1 and 2) to which an extract extracted with a solvent having an alcohol concentration of 50% or less was added, the rate of increase in intracellular Ca concentration hardly changed. On the other hand, in the system (samples 3 to 8) to which an extract extracted with a solvent having an alcohol concentration of 60% or more was added, the intracellular Ca concentration increase rate due to endothelin stimulation was significantly reduced. Moreover, the intracellular Ca density | concentration raise inhibitory effect of the samples 3-8 was a thing comparable to or more than the German chamomile extract (reference example 6) which is a well-known whitening component.
From the above results, it was found that the extract of the present invention obtained using a specific extraction solvent has an excellent endothelin inhibitory action.
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101736716B1 (en) * | 2016-12-12 | 2017-05-17 | 박지영 | Cosmetic composition for skin elasticity and anti-wrinkle comprising plants extract |
| CN109863853A (en) * | 2017-12-05 | 2019-06-11 | 镇江市水木年华现代农业科技有限公司 | A kind of method of organic tea garden soil management |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005082531A (en) * | 2003-09-09 | 2005-03-31 | Maruzen Pharmaceut Co Ltd | Antiinflammatory agent, cosmetic, and food and beverage |
| JP2006182731A (en) * | 2004-12-28 | 2006-07-13 | Ichimaru Pharcos Co Ltd | Cosmetic composition or food and drink |
| JP2010241715A (en) * | 2009-04-03 | 2010-10-28 | Kao Corp | Neutral endopeptidase inhibitor and hair growth inhibitor |
-
2011
- 2011-11-24 JP JP2011256362A patent/JP2012140405A/en active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005082531A (en) * | 2003-09-09 | 2005-03-31 | Maruzen Pharmaceut Co Ltd | Antiinflammatory agent, cosmetic, and food and beverage |
| JP2006182731A (en) * | 2004-12-28 | 2006-07-13 | Ichimaru Pharcos Co Ltd | Cosmetic composition or food and drink |
| JP2010241715A (en) * | 2009-04-03 | 2010-10-28 | Kao Corp | Neutral endopeptidase inhibitor and hair growth inhibitor |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 川原 信夫 外２名: "各種雪茶製品の含有成分並びにHPLCプロファイル分析に関する研究", 日本食品化学学会誌, vol. 第１４巻，第２号, JPN6015030551, 31 August 2007 (2007-08-31), pages 63 - 69, ISSN: 0003125272 * |
| 日本薬学会年会要旨集, 2005, 125,3, 159頁, JPN6014030586, ISSN: 0003125271 * |
| 関根 茂他, 新化粧品ハンドブック, JPN6015017730, 30 October 2006 (2006-10-30), pages 527, ISSN: 0003125269 * |
| 青木 仁美: "最近のメラニン色素研究について", フレグランスジャーナル, vol. 第36巻,第9号, JPN6015017732, 15 September 2008 (2008-09-15), pages 14, ISSN: 0003125270 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101736716B1 (en) * | 2016-12-12 | 2017-05-17 | 박지영 | Cosmetic composition for skin elasticity and anti-wrinkle comprising plants extract |
| CN109863853A (en) * | 2017-12-05 | 2019-06-11 | 镇江市水木年华现代农业科技有限公司 | A kind of method of organic tea garden soil management |
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