JP2011088845A - Involucrin expression inhibitor - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、インボルクリン発現抑制剤、皮膚老化予防剤及び皮膚外用剤に関する。 The present invention relates to an involucrin expression inhibitor, a skin aging preventive agent and a skin external preparation.
インボルクリンは、表皮角化細胞の分化にしたがって有棘細胞で産生されるタンパク質で、角質細胞の細胞膜を裏打ちする強靭な不溶性膜であるコーニファイドエンベロープ（角質肥厚膜、cornified envelope：以下ＣＥとも略記する）の主構成要素の１つである。ＣＥは、インボルクリンをはじめとする複数のＣＥ前駆体タンパク質が、酵素トランスグルタミナーゼにより架橋され不溶化して形成される。さらに、ＣＥを構成するインボルクリンは、その一部にセラミド等の脂質が共有結合し、疎水的な構造をとることで細胞間脂質ラメラ構造の形成にも寄与している。こうしたＣＥの形成・成熟化によって、細胞間脂質のラメラ構造が安定化して角質層のバリア機能が正常に働き、皮膚の水分保持機能や外部からの刺激に対する抵抗性を高めることができる。 Involucrin is a protein produced in spinous cells in accordance with the differentiation of epidermal keratinocytes, and is a tough insoluble membrane that lines the cell membrane of keratinocytes. ) Is one of the main components. CE is formed by cross-linking and insolubilizing multiple CE precursor proteins including involucrin with the enzyme transglutaminase. Furthermore, involucrin that constitutes CE contributes to the formation of an intercellular lipid lamellar structure by covalently bonding a lipid such as ceramide to a part of the CE and forming a hydrophobic structure. Such CE formation / maturation stabilizes the lamellar structure of the intercellular lipid, and the barrier function of the stratum corneum works normally, thereby enhancing the moisture retention function of the skin and the resistance to external stimuli.
このように、ＣＥは皮膚のバリア機能や皮膚の水分保持機能に重要な役割を果たしており、従来から、ＣＥの形成・成熟異常と種々の皮膚疾患との関連性が指摘されている。最近では、皮膚の老化に伴ってＣＥを構成する前駆体タンパク質の発現が増加すること、それに起因して、しわ形成、きめの減少、肌あれが起こることが指摘されている（特許文献１参照）。 Thus, CE plays an important role in the skin barrier function and the skin water retention function, and the relationship between CE formation / maturation abnormality and various skin diseases has been pointed out. Recently, it has been pointed out that the expression of a precursor protein constituting CE increases with skin aging, and that wrinkle formation, texture reduction, and skin roughness occur due to this (see Patent Document 1). ).
本発明は、優れた発現抑制効果を奏するインボルクリン発現抑制剤を提供することを課題とする。また、本発明は、インボルクリンの発現を抑制し、皮膚老化の予防・改善効果を奏しうる皮膚老化予防剤及び皮膚外用剤を提供することを課題とする。 This invention makes it a subject to provide the involucrin expression inhibitor which has the outstanding expression inhibitory effect. Another object of the present invention is to provide a skin aging preventive agent and an external preparation for skin that can suppress the expression of involucrin and have the effect of preventing and improving skin aging.
本発明者等は上記課題に鑑み、健全なＣＥの形成を促進する要因として、ＣＥを構成する前駆体タンパク質に着目した。そのなかでも、ＣＥの主構成要素であり含有比率が最も高く、かつ細胞間脂質のラメラ構造の形成に関与するインボルクリンの発現が、特に皮膚の老化に大きな影響を与えると考え、インボルクリンの発現量をコントロールすることができれば、皮膚老化の予防・改善に資すると考えた。この知見に基づいて、インボルクリンの発現を抑制する作用を持つ物質を鋭意検討した結果、ある特定の植物抽出物にインボルクリンの発現を抑制する作用があることを見出し、本発明を完成するに至ったものである。 In view of the above problems, the present inventors have focused on the precursor protein constituting CE as a factor that promotes the formation of healthy CE. Among them, the involucrin expression, which is the main component of CE and has the highest content ratio and is involved in the formation of the lamellar structure of intercellular lipids, has a significant effect on the aging of the skin. We thought that it would contribute to prevention and improvement of skin aging if it was possible to control. Based on this finding, as a result of intensive studies on substances that have the action of suppressing the expression of involucrin, it was found that a specific plant extract has an action of suppressing the expression of involucrin, leading to the completion of the present invention. Is.
本発明は、枳実（キジツ）、セイヨウメギ（Berberis vulgaris）、ムラサキマサキ（Euonymus atropurpureus）、イチハツ（Iris tectorum）、ホソバムラサキバレンギク（Echinacea angustifolia）、ヨロイグサ（Angelica dahurica Benth. et Hook）、ムラサキセンダイハギ（Baptisia tinctoria）、コウホン（Ligusticum sinense）、アメリカサンショウ（Zanthoxylum americanum）及び陳皮（チンピ）からなる群より選ばれる１種以上の植物の抽出物を有効成分として含有するインボルクリン発現抑制剤に関する。 The present invention, Fructus Aurantii Immaturus (Date), Seiyoumegi (Berberis vulgaris), purple Masaki (Euonymus Atropurpureus), Iris tectorum (Iris tectorum), e buckwheat Echinacea (Echinacea angustifolia), Yoroigusa (Angelica dahurica Benth. Et Hook) , purple Sendaihagi (Baptisia tinctoria ), An involucrin expression inhibitor containing, as an active ingredient, one or more plant extracts selected from the group consisting of Ligusticum sinense , Zanthoxylum americanum, and Chinpi.
また、本発明は、枳実（キジツ）、セイヨウメギ（Berberis vulgaris）、ムラサキマサキ（Euonymus atropurpureus）、イチハツ（Iris tectorum）、ホソバムラサキバレンギク（Echinacea angustifolia）、ヨロイグサ（Angelica dahurica Benth. et Hook）、ムラサキセンダイハギ（Baptisia tinctoria）、コウホン（Ligusticum sinense）、アメリカサンショウ（Zanthoxylum americanum）及び陳皮（チンピ）からなる群より選ばれる１種以上の植物の抽出物を有効成分として含有する皮膚老化予防剤に関する。 The present invention also Fructus Aurantii Immaturus (Date), Seiyoumegi (Berberis vulgaris), purple Masaki (Euonymus Atropurpureus), Iris tectorum (Iris tectorum), e buckwheat Echinacea (Echinacea angustifolia), Yoroigusa (Angelica dahurica Benth. Et Hook) , purple Sendaihagi ( The present invention relates to a skin aging preventive agent comprising, as an active ingredient, an extract of one or more kinds of plants selected from the group consisting of Baptisia tinctoria ), Kohon ( Ligusticum sinense ), American salamander ( Zanthoxylum americanum ), and Chimpi.
さらに、本発明は、ムラサキマサキ（Euonymus atropurpureus）、ムラサキセンダイハギ（Baptisia tinctoria）、コウホン（Ligusticum sinense）、及びアメリカサンショウ（Zanthoxylum americanum）からなる群より選ばれる１種以上の植物の抽出物を有効成分として含有する皮膚外用剤に関する。 Furthermore, the present invention effectively uses an extract of one or more plants selected from the group consisting of Euonymus atropurpureus , Baptisia tinctoria , Ligusticum sinense , and Zanthoxylum americanum. The present invention relates to an external preparation for skin contained as a component.
本発明のインボルクリン発現抑制剤は、優れたインボルクリン発現抑制効果を奏する。また、本発明の皮膚老化予防剤及び皮膚外用剤は、インボルクリンの発現を抑制し、皮膚老化の予防・改善効果を奏しうる。 The involucrin expression inhibitor of the present invention has an excellent involucrin expression suppression effect. Moreover, the skin aging preventive agent and the external preparation for skin of the present invention can suppress the expression of involucrin and have the effect of preventing and improving skin aging.
本発明のインボルクリン発現抑制剤及び皮膚老化予防剤は、枳実（キジツ）、セイヨウメギ（Berberis vulgaris）、ムラサキマサキ（Euonymus atropurpureus）、イチハツ（Iris tectorum）、ホソバムラサキバレンギク（Echinacea angustifolia）、ヨロイグサ（Angelica dahurica Benth. et Hook）、ムラサキセンダイハギ（Baptisia tinctoria）、コウホン（Ligusticum sinense）、アメリカサンショウ（Zanthoxylum americanum）及び陳皮（チンピ）からなる群より選ばれる１種以上の植物の抽出物を有効成分として含有する。 Involucrin expression inhibitor and skin aging prevention agent of the present invention, Fructus Aurantii Immaturus (Date), Seiyoumegi (Berberis vulgaris) Purple Masaki (Euonymus Atropurpureus), Iris tectorum (Iris tectorum), e buckwheat Echinacea (Echinacea angustifolia), Yoroigusa (Angelica dahurica Benth et Hook, Baptisia tinctoria , Ligusticum sinense , Zanthoxylum americanum and Chinpi, containing one or more plant extracts as active ingredients .
本発明に用いられる植物について説明する。
本発明において、枳実（キジツ）は、ミカン科ミカン属の植物であるダイダイ（Citrus aurantium L. var. daidai Makino）の未熟果実、ミカン科ミカン属の植物であるナツミカン（Citrus natsudaidai Hayata）の未熟果実、及びその他近縁植物の未熟果実である。枳実（キジツ）は、従来から生薬として用いられ、胃腸の機能改善等が知られている。
本発明において、セイヨウメギ（Berberis vulgaris）はバーベリーともいい、メギ科メギ属の植物である。
本発明において、ムラサキマサキ（Euonymus atropurpureus）はワーフー（Wahoo）ともいい、ニシキギ科ニシキギ属の植物である。
本発明において、イチハツ（一初）（Iris tectorum）は、アヤメ科アヤメ属の植物である。その根茎は鳶尾（エンビ）とも呼ばれ、生薬等として用いられている。
本発明において、ホソバムラサキバレンギク（Echinacea angustifolia）はエチナシ又はエキナセアともいい、キク科ムラサキバレンギク属の植物である。
本発明において、ヨロイグサ（Angelica dahurica Benth. et Hook）は、セリ科シシウド属の植物である。その根は白シ（ビャクシ）とも呼ばれ、生薬等として用いられている。
本発明において、ムラサキセンダイハギ（Baptisia tinctoria）はワイルドインディゴともいい、マメ科ムラサキセンダイハギ属の植物である。
本発明において、コウホン（藁本）（Ligusticum sinense）は、セリ科マルバトウキ（コウホン）属の植物である。その根茎は藁本（コウホン）と呼ばれる生薬等として用いられている。
本発明において、アメリカサンショウ（Zanthoxylum americanum）はプリックリーアッシュともいい、ミカン科サンショウ属の植物である。
本発明において、陳皮（チンピ）は、ミカン科ミカン属の植物であるウンシュウミカン（Citrus unshiu Markovich）の成熟果皮及びその他近縁植物の成熟果皮である。陳皮（チンピ）は、従来から生薬等として用いられている。
これらの植物は、自生しているものや市販のものから入手することができ、そのいずれを用いてもよい。
The plant used for this invention is demonstrated.
In the present invention, pheasant is an immature fruit of Citrus aurantium L. var. Daidai Makino, which is a plant belonging to the citrus family Citrus aurantium, or an immature fruit of Citrus natsudaidai Hayata, which is a plant belonging to the genus Citrus nectar. , And other immature fruits of related plants. [Background Art] [Kitsutsu] has been conventionally used as a crude drug and is known to improve gastrointestinal function.
In the present invention, barberry ( Berberis vulgaris ), also called barberry , is a plant belonging to the genus Barberry.
In the present invention, Euonymus atropurpureus is also referred to as Wahoo and is a plant belonging to the genus Euonymus .
In the present invention, Iris tectorum is a plant of the genus Iridaceae. The rhizome is also called “enbi” and is used as a herbal medicine.
In the present invention, Echinacea angustifolia is also referred to as Echinacea or Echinacea, and is a plant belonging to the genus Asteraceae.
In the present invention, armored rush ( Angelica dahurica Benth. Et Hook) is a plant belonging to the genus Cericaceae. The root is also called white bean and is used as a herbal medicine.
In the present invention, purple smelt ( Baptisia tinctoria ) is also referred to as wild indigo, and is a plant belonging to the genus Muraceae .
In the present invention, Ligusticum sinense is a plant belonging to the genus Maruetoki (Kohon). The rhizome is used as a herbal medicine called Kouhon.
In the present invention, American salamander ( Zanthoxylum americanum ) is also called prickly ash and is a plant belonging to the genus Citrus salamander.
In the present invention, chimpi is a mature pericarp of Citrus unshiu Markovich, a plant belonging to the genus Citrus unshiu and other related plants. Traditionally, chimney has been used as a herbal medicine.
These plants can be obtained from native or commercially available ones, and any of them may be used.
本発明における上記植物は、その植物の全ての任意の部分が使用可能である。例えば、上記植物の全木、全草、根、根茎、幹、枝、茎、葉、樹皮、樹液、樹脂、花、果実、種子、果皮、莢、芽、花穂、心材等の任意の部分、及びそれらの組み合わせのいずれか１つ又は複数を使用することができる。 Any arbitrary part of the plant can be used for the plant in the present invention. For example, the whole plant, whole grass, root, rhizome, stem, branch, stem, leaf, bark, sap, resin, flower, fruit, seed, peel, bud, bud, spike, heartwood, etc. And any one or more of their combinations can be used.
本発明においては、上記植物の各部位の中でも、特に下記の部位を用いることが好ましい。
枳実（キジツ）については、ダイダイ又はナツミカンの未熟果実を用いることが好ましい。
In the present invention, among the parts of the plant, it is particularly preferable to use the following parts.
For the citrus fruit, it is preferable to use unripe fruits of Daidai or Natsumikan.
セイヨウメギについては、セイヨウメギの根及び／又は樹皮を用いることが好ましい。
ムラサキマサキについては、ムラサキマサキの根及び／又は樹皮を用いることが好ましい。
イチハツについては、イチハツの根を用いることが好ましい。また、イチハツの根を用いる場合、生薬や漢方等として使用される鳶尾（エンビ）を用いてもよい。
ホソバムラサキバレンギクについては、ホソバムラサキバレンギクの葉を用いることが好ましい。
ヨロイグサについては、ヨロイグサの根を用いることが好ましい。また、ヨロイグサの根を用いる場合、生薬や漢方等として使用される白シ（ビャクシ）を用いてもよい。
ムラサキセンダイハギについては、ムラサキセンダイハギの葉を用いることが好ましい。
コウホンについては、コウホンの根茎を用いることが好ましい。また、コウホンの根茎を用いる場合、生薬や漢方等として使用される藁本（コウホン）を用いてもよい。
アメリカサンショウについては、アメリカサンショウの樹皮を用いることが好ましい。
陳皮（チンピ）については、ウンシュウミカンの成熟果皮を用いることが好ましい。
For the barberry, it is preferable to use the barley root and / or bark.
As for Murasaki Masaki, it is preferable to use Murasaki Masaki root and / or bark.
As for Ichihatsu, it is preferable to use Ichihatsu root. Moreover, when using the root of Ichihatsu, you may use the tail which is used as a crude drug or a Chinese medicine.
As for Hosobamurasakibarengiku, it is preferable to use leaves of Hosobamurasakibarengiku.
As for the hemlock, it is preferable to use the root of the hemlock. In addition, when using the roots of euphorbia, white beetles used as herbal medicines or traditional Chinese medicines may be used.
As for murasaki Sendai hagi, it is preferable to use murasaki Sendai leaf.
As for the kouhon, it is preferable to use the rhizome of kohhong. In addition, when using a rhizome of Kouhon, Kakihon used as a herbal medicine or Chinese medicine may be used.
For American salamander, it is preferable to use bark of American salamander.
As for the chimney, it is preferable to use a mature persimmon peel.
本発明において、上記植物は、生のまま、絞り汁、乾燥粉末または溶剤抽出物等として使用される。
本発明において用いる、枳実、セイヨウメギ、ムラサキマサキ、イチハツ、ホソバムラサキバレンギク、ヨロイグサ、ムラサキセンダイハギ、コウホン、アメリカサンショウ及び陳皮の抽出物の製造方法については特に限定はなく、上記植物を通常の方法で抽出することにより抽出物を得ることができる。具体的には、上記植物を乾燥させた乾燥物、その粉砕物等を圧搾抽出することにより得られる搾汁、各種抽出溶剤による粗抽出物、粗抽出物を分配又はカラムクロマトなどの各種クロマトグラフィーなどで精製して得られた抽出物画分などを本発明における抽出物として用いることができる。
上記の植物は生のままで抽出に供することも可能であるが、より抽出効率を高めるために、乾燥、細断、粉砕などの工程を加えることも好ましい。本発明の植物抽出物としては、上記植物を乾燥させた乾燥物又はその粉砕物から、抽出溶剤を用いて得られた抽出物を用いることがより好ましい。
In the present invention, the plant is used as a juice, a dry powder, a solvent extract or the like as it is.
There are no particular limitations on the method for producing the extract of berries, pearl barley, purple saki, ichihatsu, hornbill barrengiku, euglena, purple primrose, kohon, american salamander and cinnamon used in the present invention, and the above plant is extracted by a conventional method. By doing so, an extract can be obtained. Specifically, dried products obtained by drying the above plants, squeezed juice obtained by squeezing and extracting the pulverized product, crude extracts using various extraction solvents, various chromatographies such as distribution or column chromatography The extract fraction obtained by purifying by the above can be used as the extract in the present invention.
The above plants can be used for extraction as they are, but it is also preferable to add steps such as drying, shredding, and pulverization in order to further increase the extraction efficiency. As the plant extract of the present invention, it is more preferable to use an extract obtained by using an extraction solvent from a dried product obtained by drying the plant or a pulverized product thereof.
本発明に用いられる抽出溶剤としては、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができ、これらを混合して用いることもできる。例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ピリジン類；超臨界二酸化炭素；油脂、ワックス、その他オイル等が挙げられる。あるいは、上記溶剤の２種以上を組み合わせた混合物を、抽出溶剤として用いることができる。このうち、水、アルコール類、水−アルコール混合液を用いるのが好ましく、エタノール水溶液を用いるのがより好ましく、２０〜８０％エタノール水溶液（ｖｏｌ／ｖｏｌ）を用いるのが特に好ましい。 As the extraction solvent used in the present invention, either a polar solvent or a nonpolar solvent can be used, and these can also be used in combination. For example, water; alcohols such as methanol, ethanol, propanol and butanol; polyhydric alcohols such as propylene glycol and butylene glycol; ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; esters such as methyl acetate and ethyl acetate; tetrahydrofuran and diethyl ether Linear and cyclic ethers such as polyethylene; polyethers such as polyethylene glycol; halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, chloroform and carbon tetrachloride; hydrocarbons such as hexane, cyclohexane and petroleum ether; aroma such as benzene and toluene Group hydrocarbons; pyridines; supercritical carbon dioxide; fats and oils, waxes, and other oils. Or the mixture which combined 2 or more types of the said solvent can be used as an extraction solvent. Of these, water, alcohols, and a water-alcohol mixed solution are preferably used, an ethanol aqueous solution is more preferably used, and a 20 to 80% ethanol aqueous solution (vol / vol) is particularly preferably used.
本発明で用いられる抽出物を得るための抽出条件については、使用する溶剤によって異なり特に制限はないが、例えば水、アルコール類又は水−アルコール混合液により抽出する場合、好ましくは植物１質量部に対して１〜５０容量部の溶剤を用い、好ましくは４〜１００℃、より好ましくは２０〜６０℃の温度で、好ましくは１時間〜３０日間、より好ましくは１日〜２０日間静置抽出するのが好ましい。また、抽出効率を上げる為、併せて攪拌を行ったり、溶媒中でホモジナイズ処理を行ってもよい。 The extraction conditions for obtaining the extract used in the present invention differ depending on the solvent used and are not particularly limited. For example, when extracting with water, alcohols or a water-alcohol mixture, preferably 1 part by weight of the plant. On the other hand, 1 to 50 parts by volume of a solvent is used, and extraction is preferably performed at a temperature of preferably 4 to 100 ° C., more preferably 20 to 60 ° C., and preferably 1 hour to 30 days, more preferably 1 day to 20 days. Is preferred. Moreover, in order to raise extraction efficiency, you may stir together or may perform a homogenization process in a solvent.
上記溶媒で抽出して得られた抽出物はそのまま使用してもよいが、濃縮したものを水や各種溶媒に再度溶解したり、液-液分配や吸着樹脂カラム、活性炭処理などによる夾雑物の除去処理を行うことも可能である。本発明において、植物の抽出物とは、このようにして得られた各種抽出物、その希釈液、その濃縮液、その精製物又はそれらの乾燥末を包含するものである。
また、本発明のインボルクリン発現抑制剤、皮膚老化予防剤又は皮膚外用剤においては、上記各植物又はその抽出物を単独で用いても良く、また２種以上混合して用いても良い。
The extract obtained by extraction with the above solvent may be used as it is, but the concentrated product may be dissolved again in water or various solvents, or it may be contaminated by liquid-liquid distribution, adsorption resin column, activated carbon treatment, etc. It is also possible to perform a removal process. In the present invention, the plant extract includes the various extracts thus obtained, a diluted solution thereof, a concentrated solution thereof, a purified product thereof or a dry powder thereof.
Moreover, in the involucrin expression inhibitor, skin aging preventive agent, or skin external preparation of the present invention, each of the above plants or extracts thereof may be used alone or in combination of two or more.
枳実、セイヨウメギ、ムラサキマサキ、イチハツ、ホソバムラサキバレンギク、ヨロイグサ、ムラサキセンダイハギ、コウホン、アメリカサンショウ及び陳皮から得られた植物抽出物は、後述の実施例に示すように優れたインボルクリン発現抑制作用を有し、これら抽出物を含有させることでインボルクリン発現抑制剤を得ることができる。また、前述したように、表皮におけるインボルクリンの発現量の増加と皮膚老化との間には関連があることが指摘されており、上記植物又はその抽出物を含有させることで皮膚老化の予防・改善を目的とした医薬、化粧料として使用可能である。さらに、視力障害の原因となるはん痕性角結膜症の患者の結膜では、インボルクリン等の角化に関与するタンパク及びそれらを架橋する酵素トランスグルタミナーゼの発現量が健常者に比べて増加しているとの報告がある（Investigative Ophthalmology and Visual Science 2001、42(3)、549-556）。このことから、上記植物又はその抽出物を含有させることで、はん痕性角結膜症の予防・治療を目的とした医薬等としても使用可能である。上記植物又はその抽出物がインボルクリン発現抑制作用を有することは従来全く知られておらず、本発明者等により得られた新しい知見である。 Plant extracts obtained from berries, pearl barley, purple sardine, ichihatsu, joseph murasaki barengiku, yorogusa, murasakisendaigi, kohon, american salamander and cinnamon have excellent involucrin expression inhibitory effects as shown in the examples below. An involucrin expression inhibitor can be obtained by containing these extracts. In addition, as described above, it has been pointed out that there is a relationship between an increase in the expression level of involucrin in the epidermis and skin aging, and the prevention or improvement of skin aging by containing the above plant or an extract thereof. It can be used as a medicine or cosmetic for the purpose of Furthermore, in the conjunctiva of patients with scar keratoconjunctiva causing visual impairment, the expression level of proteins involved in keratinization, such as involucrin, and the enzyme transglutaminase that crosslinks them are increased compared to healthy subjects. (Investigative Ophthalmology and Visual Science 2001, 42 (3), 549-556). Therefore, by containing the above plant or an extract thereof, it can be used as a medicine for the purpose of prevention / treatment of scar keratoconjunctivitis. It has not been known at all that the above plant or its extract has an involucrin expression-inhibiting action, and is a new finding obtained by the present inventors.
上記の植物又はその抽出物はそのままインボルクリン発現抑制剤として用いてもよい。又は、その効果に影響を与えない範囲で、上記植物抽出物に各種添加剤等を加えてもよい。例えば酸化チタン、炭酸カルシウム、蒸留水、乳糖、デンプン等の適当な液体又は固体の賦形剤又は増量剤を加えてインボルクリン発現抑制剤として用いてもよい。
組成物とする場合、インボルクリン発現抑制剤中の上記植物抽出物の量は特に制限されないが、前記抽出物が固形分濃度として０．０００１〜１０質量％含まれるのが好ましく、０．０１〜５質量％含まれるのがより好ましく、０．１〜５質量％含まれるのがさらに好ましい。
You may use said plant or its extract as an involucrin expression inhibitor as it is. Or you may add various additives etc. to the said plant extract in the range which does not affect the effect. For example, an appropriate liquid or solid excipient or extender such as titanium oxide, calcium carbonate, distilled water, lactose, and starch may be added and used as an involucrin expression inhibitor.
In the case of a composition, the amount of the plant extract in the involucrin expression inhibitor is not particularly limited, but the extract is preferably contained in a solid content concentration of 0.0001 to 10% by mass, and 0.01 to 5 More preferably, it is contained in an amount of 0.1 to 5% by mass.
上記の植物又はその抽出物はそのまま皮膚老化予防剤として用いてもよい。又は、上記植物抽出物を有効成分として含有させ、その効果に影響を与えない範囲で、他の成分を配合して皮膚老化予防剤とすることもできる。例えば、従来から皮膚老化の予防・改善作用が知られているジメトキシベンゾキノン、ゲラニルゲラニルアセトン等を併せて添加してもよい。さらに、皮膚老化防止剤以外の薬効成分として、保湿剤、美白剤、皮膚セラミド増加剤、皮膚表皮細胞促進剤等を併せて添加してもよい。
組成物とする場合、皮膚老化予防剤中の上記植物抽出物の量は特に制限されないが、前記抽出物が固形分濃度として０．０１〜１５質量％含まれるのが好ましく、０．１〜１０質量％含まれるのがより好ましく、１〜５質量％含まれるのがさらに好ましい。
You may use said plant or its extract as a skin aging preventive agent as it is. Alternatively, the above-mentioned plant extract can be contained as an active ingredient, and other ingredients can be blended as a skin aging preventive agent within a range that does not affect the effect. For example, dimethoxybenzoquinone, geranylgeranylacetone, etc., which have been conventionally known to prevent or improve skin aging, may be added together. Furthermore, moisturizers, whitening agents, skin ceramide increasing agents, skin epidermal cell promoters and the like may be added together as medicinal components other than the skin aging inhibitor.
In the case of a composition, the amount of the plant extract in the skin aging preventive agent is not particularly limited, but the extract is preferably contained in a solid content concentration of 0.01 to 15% by mass, preferably 0.1 to 10%. More preferably, it is contained in an amount of 1 to 5% by mass.
本発明のインボルクリン発現抑制剤及び皮膚老化予防剤は、皮膚外用剤の形態で使用することができる。本発明の皮膚外用剤は、インボルクリン発現抑制作用を奏する上記植物抽出物、すなわち、枳実、セイヨウメギ、ムラサキマサキ、イチハツ、ホソバムラサキバレンギク、ヨロイグサ、ムラサキセンダイハギ、コウホン、アメリカサンショウ及び／又は陳皮の植物抽出物を有効成分として含有し、皮膚老化の予防・改善のために好適に用いられるものである。
また、本発明のインボルクリン発現抑制剤及び皮膚老化予防剤は皮膚外用剤以外の形態、例えば経口剤等として使用することも可能である。
The involucrin expression inhibitor and skin aging preventive agent of the present invention can be used in the form of a skin external preparation. The topical skin preparation of the present invention is the above-mentioned plant extract that exerts an inhibitory action on involucrin expression, that is, plant extraction of fruit seeds, pearl barley, purple oysters, ichihatsu, hornbill, barnacles, yellow croaker, purple swordfish, kohon, American salamander and / or dermis It contains a product as an active ingredient and is suitably used for the prevention and improvement of skin aging.
Moreover, the involucrin expression inhibitor and skin aging preventive agent of the present invention can be used in forms other than external preparations for skin, for example, oral agents.
本発明において、「皮膚外用剤」とは、皮膚化粧料、外用医薬品、外用医薬部外品、等として皮膚に適用されるものを意味する。その剤型も水溶液系、可溶化系、乳化系、粉末系、ゲル系、軟膏系、クリーム、水−油２層系、水−油−粉末３層系など、幅広い形態をとり得る。
本発明の皮膚外用剤には、上記植物抽出物に加えて、上述した各種添加剤やその他の薬効成分を適宜加えることができる。さらには取りうる剤型に応じて、皮膚外用剤に通常用いられる各種成分を配合することができる。皮膚外用剤の剤型として、具体的には、クリーム、乳液、ローション、ゲル、軟膏、ペースト、パック、シート状製品等、外用適用可能な種々の剤型とすることができ、これらの剤型とするにあたって、例えば、各種油剤、界面活性剤、ゲル化剤、防腐剤、酸化防止剤、溶剤、アルコール、水、キレート剤、増粘剤、紫外線吸収剤、乳化安定剤、pH調整剤、色素、香料等を配合することができる。
本発明の皮膚外用剤に含まれる上記植物抽出物の量は特に制限されないが、前記抽出物が固形分濃度として０．０１〜１５質量％含まれるのが好ましく、０．１〜１０質量％含まれるのがより好ましく、１〜５質量％含まれるのがさらに好ましい。
In the present invention, “external preparation for skin” means those applied to the skin as skin cosmetics, external pharmaceuticals, quasi-drugs and the like. The dosage form can take a wide variety of forms such as an aqueous solution system, a solubilization system, an emulsion system, a powder system, a gel system, an ointment system, a cream, a water-oil two-layer system, and a water-oil-powder three-layer system.
In addition to the above plant extract, the above-mentioned various additives and other medicinal components can be appropriately added to the skin external preparation of the present invention. Furthermore, according to the dosage form which can be taken, the various components normally used for a skin external preparation can be mix | blended. As the dosage form of the external preparation for skin, specifically, it can be various dosage forms applicable for external use, such as cream, emulsion, lotion, gel, ointment, paste, pack, sheet-like product, etc. For example, various oil agents, surfactants, gelling agents, preservatives, antioxidants, solvents, alcohol, water, chelating agents, thickeners, ultraviolet absorbers, emulsion stabilizers, pH adjusters, dyes Perfumes and the like can be blended.
The amount of the plant extract contained in the skin external preparation of the present invention is not particularly limited, but the extract is preferably contained in an amount of 0.01 to 15% by mass, and 0.1 to 10% by mass as a solid content concentration. More preferably, it is contained in an amount of 1 to 5% by mass.
本発明の皮膚外用剤の使用量は、使用者の年齢、体重、症状の程度、投与経路、投与スケジュール、製剤形態等により適宜選択、決定される。例えば、一般に１日当たり０．００１ｇ／ｋｇ体重〜１ｇ／ｋｇ体重が好ましく、１日数回に分けて投与してもよい。 The use amount of the external preparation for skin of the present invention is appropriately selected and determined according to the age, weight, symptom level, administration route, administration schedule, formulation form, etc. of the user. For example, generally 0.001 g / kg body weight to 1 g / kg body weight per day is preferable, and administration may be divided into several times a day.
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although this invention is demonstrated further in detail based on an Example, this invention is not limited to this.
各抽出物の製造例
（製造例１）枳実抽出物の調製
ダイダイ（Ciyrus aurantium L. var. daidai Makino）の未熟果実の乾燥物４０ｇに５０ｖｏｌ％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温、静置条件下で２１日間抽出を行った。その後、抽出物をろ過し、ダイダイ抽出物２９０．４ｍＬ（蒸発残分４．０８％（ｗ／ｖ））を得た。
Production example of each extract (Production example 1) Preparation of berry extract 400 ml of 50 vol% ethanol aqueous solution was added to 40 g of dried product of immature fruit of Daidai ( Cyrus aurantium L. var. Daidai Makino) at room temperature and standing conditions. Extraction was performed for 21 days. Thereafter, the extract was filtered to obtain 290.4 mL of a Daidai extract (evaporation residue: 4.08% (w / v)).
（製造例２）セイヨウメギ抽出液の調製
セイヨウメギ(Berberis vulgaris)の根の細断物４０ｇに５０ｖｏｌ％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温、静置条件下で２３日間抽出を行った。その後、抽出物をろ過し、セイヨウメギ抽出物３２３．７ｍＬ（蒸発残分０．５８％（ｗ／ｖ））を得た。
(Production Example 2) Preparation of barberry extract A 40 vol of ethanol solution of 50 vol% was added to 40 g of chopped roots of barberry ( Berberis vulgaris ), and extraction was carried out for 23 days under standing conditions at room temperature. Thereafter, the extract was filtrated to obtain 323.7 mL of a barberry extract (an evaporation residue of 0.58% (w / v)).
（製造例３）ムラサキマサキ抽出物の調製
ムラサキマサキ(Euonymus atropurpureus)の根の細断物４０ｇに５０ｖｏｌ％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温、静置条件下で２０日間抽出を行った。その後、抽出物をろ過し、ムラサキマサキ抽出物３１２．６ｍＬ（蒸発残分１．３０％（ｗ／ｖ））を得た。
(Production Example 3) Preparation of Murasaki Masaki Extract 400 mL of a 50 vol% aqueous ethanol solution was added to 40 g of shredded roots of Murasaki maki ( Euonymus atropurpureus ), followed by extraction at room temperature for 20 days. Thereafter, the extract was filtered to obtain 312.6 mL of Murasaki Masaki extract (evaporation residue 1.30% (w / v)).
（製造例４）イチハツ抽出物の調製
イチハツ（Iris tectorum）の根の細断物２００ｇに５０ｖｏｌ％エタノール水溶液３０００ｍＬを加え、８５℃加熱下、３時間抽出を行った。冷却後、抽出物をろ過、減圧濃縮して固形物３１ｇを得た。固形物を５０ｖｏｌ％エタノールに溶解し、イチハツ抽出物３１００ｍＬ（蒸発残分１．０％（ｗ／ｖ））を得た。
(Production Example 4) Preparation of Ichihatsu Extract To 200 g of Iris tectorum root shreds, 3000 mL of a 50 vol% aqueous ethanol solution was added, followed by extraction for 3 hours while heating at 85 ° C. After cooling, the extract was filtered and concentrated under reduced pressure to obtain 31 g of a solid. The solid was dissolved in 50 vol% ethanol to obtain 3100 mL of Ichihatsu extract (1.0% (w / v) evaporation residue).
（製造例５）ホソバムラサキバレンギク抽出物の調製
ホソバムラサキバレンギク（Echinecea angustifolia）の葉の乾燥物４０ｇに５０ｖｏｌ％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温、静置条件下で１３日間抽出を行った。その後、抽出物をろ過し、ホソバムラサキバレンギク抽出物２３５．９ｍＬ（蒸発残分１．５７％（ｗ／ｖ））を得た。
(Manufacture example 5) Preparation of Hosobamurasakibarengiku extract 400 mL of 50 vol% ethanol aqueous solution was added to 40 g of dried leaves of Echinecea angustifolia , and extraction was carried out at room temperature for 13 days. Thereafter, the extract was filtrated to obtain 235.9 mL of an E. japonicus extract (residual evaporation 1.57% (w / v)).
（製造例６）ヨロイグサ抽出物の調製
ヨロイグサ（Angelica dahurica Benth. et Hook）の根の細断物４０ｇに５０ｖｏｌ％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温、静置条件下で２５日間抽出を行った。抽出物をろ過し、ヨロイグサ抽出物３４２．４ｍＬ（蒸発残分１．５３％（ｗ／ｖ））を得た。
(Production Example 6) Preparation of Euglena extract To 40 g of root shredded euglena ( Angelica dahurica Benth. Et Hook) was added 400 mL of 50 vol% aqueous ethanol solution, followed by extraction at room temperature for 25 days. The extract was filtrated to obtain 342.4 mL of an Eurasian rush extract (evaporation residue 1.53% (w / v)).
（製造例７）ムラサキセンダイハギ抽出物の調製
ムラサキセンダイハギ（Baptisia tinctoria）の葉の乾燥物４０ｇに５０ｖｏｌ％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温、静置条件下で１９日間抽出を行った。その後、抽出物をろ過し、ムラサキセンダイハギ抽出物３２６．０ｍＬ（蒸発残分１．２０％（ｗ／ｖ））を得た。
(Manufacture example 7) Preparation of Murasaki Sendai Hagi extract 400 mL of 50 vol% ethanol aqueous solution was added to 40 g of dried leaves of Baptisia tinctoria , and extraction was carried out at room temperature for 19 days. Thereafter, the extract was filtered to obtain 326.0 mL of an extract of Murasakisendaihagi (evaporation residue 1.20% (w / v)).
（製造例８）コウホン抽出物の調製
コウホン（Ligusticum sinense）の根茎４０ｇに５０ｖｏｌ％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温、静置条件下で２５日間抽出を行った。その後、抽出物をろ過し、コウホン抽出物３１９．７ｍＬ（蒸発残分２．０７％（ｗ／ｖ））を得た。
(Production Example 8) Preparation of Kouhon Extract To 40 g of rhizome of Kouhon ( Ligusticum sinense ), 400 mL of 50 vol% aqueous ethanol solution was added, and extraction was performed for 25 days at room temperature and standing conditions. Thereafter, the extract was filtered to obtain 319.7 mL of Kouhon extract (evaporation residue 2.07% (w / v)).
（製造例９）アメリカサンショウ抽出物の調製
アメリカサンショウ（Zanthoxylum americanum）の樹皮の細断物４０ｇに５０ｖｏｌ％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温、静置条件下で２１日間抽出を行った。その後、抽出物をろ過し、アメリカサンショウ抽出物３１９．７ｍＬ（蒸発残分１．１９％（ｗ／ｖ））を得た。
(Production Example 9) Preparation of American Salamander Extract 400 vol of 50 vol% ethanol aqueous solution was added to 40 g of bark shreds of American salamander ( Zanthoxylum americanum ), followed by extraction for 21 days at room temperature and standing conditions. Thereafter, the extract was filtered to obtain 319.7 mL of an American salamander extract (evaporation residue 1.19% (w / v)).
（製造例１０）陳皮抽出物の調製
ウンシュウミカン（Citrus unshu Markovich）の成熟果皮の細断物４０ｇに５０ｖｏｌ％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温、静置条件下で１８日間抽出を行った。その後、抽出物をろ過し、ウンシュウミカン抽出物３０４．６ｍＬ（蒸発残分３．３５％（ｗ／ｖ））を得た。
(Manufacture example 10) Preparation of a cinnamon extract 400 mL of 50 vol% ethanol aqueous solution was added to 40 g of shredded fruit peels of Citrus unshu Markovich, and extraction was performed for 18 days under room temperature and standing conditions. Thereafter, the extract was filtered to obtain 304.6 mL of an extract of Citrus unshiu (evaporation residue 3.35% (w / v)).
試験例 インボルクリン発現抑制試験
（１）正常ヒト表皮角化細胞
以下の２種類の正常ヒト表皮角化細胞を用いた。
ｉ）正常ヒト新生児包皮由来表皮角化細胞：ＫＫ−４００９、ロット番号５Ｃ０７５９、クラボウ（倉敷紡績株式会社）製
ｉｉ）正常ヒト成人男性包皮由来表皮角化細胞：ＫＪＢ−１００、ロット番号ＦＯＲ２１Ｍ１１０５、コージンバイオ株式会社製
Test Example Involucrin expression suppression test (1) Normal human epidermal keratinocytes The following two types of normal human epidermal keratinocytes were used.
i) Normal human neonatal foreskin-derived epidermis keratinocytes: KK-4009, lot number 5C0759, manufactured by Kurabo (Kurashiki Boseki Co., Ltd.) ii) Normal human adult male foreskin-derived epidermis keratinocytes: KJB-100, lot number FOR21M1105, Kojin Made by Bio Inc.
（２）培地やその他の試薬
培地として、正常ヒト表皮角化細胞増殖用無血清液体培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２ Ｍ−ＥＰＩ−２１５０Ｓ、クラボウ製）を用いた。添加剤としては、終濃度１０μｇ／ｍＬインスリン（ＩＮＳ）、０．１ｎｇ／ｍＬヒト組換え型上皮成長因子（ｈＥＧＦ）、０．５μｇ／ｍＬハイドロコーチゾン（ＨＣ）、抗菌剤（５０μｇ／ｍＬゲンタマイシン、５０ｎｇ／ｍＬアンフォテリシンＢ）、０．４％Ｖ／Ｖウシ脳下垂体抽出液（ＢＰＥ）を用いた。
上記の添加剤を全て添加した培地：ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２（＋）を増殖用培地として以下の試験に用いた。また、上記の添加剤のうちＩＮＳ、ＨＣ、抗菌剤を添加した培地：ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２（−）を植物抽出物添加時の培地として用いた。継代培養には、０．０２５％Ｗ／Ｖのトリプシンと０．０１％Ｗ／ＶのＥＤＴＡとを含むトリプシン／ＥＤＴＡ溶液（ＨＫ−３１２０、クラボウ製）とＦＢＳを１０％含むトリプシン中和液（ＨＫ−３２２０、クラボウ製）を用いた。
(2) Medium and other reagents As a medium, a serum-free liquid medium (EpiLife-KG2 M-EPI-2150S, manufactured by Kurabo Industries) for normal human epidermal keratinocyte proliferation was used. Additives include final concentrations of 10 μg / mL insulin (INS), 0.1 ng / mL human recombinant epidermal growth factor (hEGF), 0.5 μg / mL hydrocortisone (HC), antibacterial agents (50 μg / mL gentamicin, 50 ng / mL amphotericin B), 0.4% V / V bovine pituitary extract (BPE) was used.
Medium supplemented with all of the above additives: EpiLife-KG2 (+) was used as a growth medium for the following tests. Further, among the above-mentioned additives, INS, HC, and a medium added with an antibacterial agent: EpiLife-KG2 (−) was used as a medium when the plant extract was added. For subculture, trypsin / EDTA solution (HK-3120, Kurabo Industries) containing 0.025% W / V trypsin and 0.01% W / V EDTA and trypsin neutralizing solution containing 10% FBS. (HK-3220, Kurabo Industries) was used.
（３）インボルクリン発現抑制試験
６穴プレート又は１２穴プレートに正常ヒト表皮角化細胞を１．０〜１．５×１０４ｃｍ２にて播種し、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２（＋）培地を用いて、３７℃、５％ＣＯ２濃度の条件下で培養した。１〜３日間培養を行い、５０％〜６０％コンフルエントの状態になるのを確認した。その後、ＰＢＳで２回細胞を洗浄し、培地をＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２（−）に交換し、さらに２４時間培養した。上記で調製した植物抽出物を終濃度が０．５％Ｖ／Ｖ又は１．０％Ｖ／Ｖとなるようにそれぞれ添加したＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２（−）培地に交換し、さらに２４時間培養した。なお、コントロールとしては、それぞれの植物エキスの抽出溶媒を用いた。
ＰＢＳで２回細胞を洗浄し、アイソジェン（３１１−０２５０１、ニッポンジーン社製）を添加し、細胞を回収した。ニッポンジーン社が提示する標準的な方法に従い、細胞からＲＮＡを抽出、精製した。精製したＲＮＡの濃度の測定には、吸光分光度計及びＱｕａｎｔ−ｉＴＴＭ ＲｉｂｏＧｒｅｅｎ ＲＮＡ Ｒｅａｇｅｎｔ ａｎｄ ｋｉｔ（Ｒ１１４９０、インビトロジェン社製）をそれぞれ用いた。インビトロジェン社が提示する標準的な方法に従い、ＲＮＡ濃度を測定した。ＲＮＡ濃度を測定後、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ（２０５３１１、キアゲン社製）を用いて、キアゲン社が提示する標準的な方法に従い、精製したＲＮＡからｃＤＮＡを得た。
アプライドバイオシステムズ ７５００ Ｆａｓｔ リアルタイムＰＣＲシステムを用いて、インボルクリン（以下、ＩＶＬとも略記する）遺伝子及び内部標準遺伝子としてＲｉｂｏｓｏｍａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｌａｒｇｅ ＰＯ（以下、ＰＲＬＰ０とも略記する）遺伝子のＲＮＡの発現量をそれぞれ定量した。アプライドバイオシステムズ社が提示する標準的な方法に従い、Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（４３０４４３７、 アプライドバイオシステムズ）、ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙｓ（ＩＶＬ：Ｈｓ００８４６３０７＿ｓ１、ＲＰＬＰ０：Ｈｓ９９９９９９０２＿ｍＬ、アプライドバイオシステムズ製）を用いた。各遺伝子について検量線法による相対定量を行なった。評価にあたり、ＩＶＬ遺伝子のＲＮＡ発現量を内部標準遺伝子であるＲＰＬＰ０遺伝子のＲＮＡ発現量で補正し、ＩＶＬ／ＲＰＬＰ０ ＲＮＡ量とした。更に、コントロールとして抽出溶媒のみを添加した細胞系のＩＶＬ／ＲＰＬＰ０ ＲＮＡ量を１とし、それに対する各抽出物のＩＶＬ／ＲＰＬＰ０ ＲＮＡ量を相対値で表しＩＶＬ／ＲＰＬＰ０ ＲＮＡ 相対発現量とした。結果を図１に示す。図１において、ＰＲＬＰ０ ＲＮＡ 相対発現量を四角、ＩＶＬ／ＲＰＬＰ０ ＲＮＡ 相対発現量を棒グラフでそれぞれ示す。
(3) Involucrin expression suppression test Normal human epidermal keratinocytes were seeded at 6 to 12 or 12-well plate at 1.0 to 1.5 × 10 4 cm 2 , and EpiLife-KG2 (+) medium was used. The cells were cultured under conditions of 37 ° C. and 5% CO 2 concentration. Cultivation was performed for 1 to 3 days, and it was confirmed that the cells became 50% to 60% confluent. Thereafter, the cells were washed twice with PBS, the medium was changed to EpiLife-KG2 (−), and further cultured for 24 hours. The plant extract prepared above was replaced with EpiLife-KG2 (−) medium added to a final concentration of 0.5% V / V or 1.0% V / V, and further cultured for 24 hours. In addition, the extraction solvent of each plant extract was used as control.
The cells were washed twice with PBS, isogen (311-02501, manufactured by Nippon Gene) was added, and the cells were collected. RNA was extracted and purified from cells according to standard methods presented by Nippon Gene. The concentration of the purified RNA was measured using an absorption spectrophotometer and Quant-iT ™ RiboGreen RNA Reagent and kit (R11490, manufactured by Invitrogen). RNA concentration was measured according to standard methods presented by Invitrogen. After measuring the RNA concentration, cDNA was obtained from the purified RNA according to the standard method proposed by Qiagen using QuantitTect Reverse Transscript (205311, manufactured by Qiagen).
Using the Applied Biosystems 7500 Fast real-time PCR system, the RNA expression levels of the involucrin (hereinafter abbreviated as IVL) gene and the Ribosomal Protein large PO (hereinafter abbreviated as PRLP0) gene as the internal standard gene were quantified. According to a standard method presented by Applied Biosystems, Universal Master Mix (43004437, Applied Biosystems), TaqMan (registered trademark) Gene Expression Assays (IVL: Hs00846307_s1, RPLP0: Hs99999902_mL, Applied Biosystems) was used. Relative quantification was performed for each gene by the calibration curve method. In the evaluation, the RNA expression level of the IVL gene was corrected with the RNA expression level of the RPLP0 gene, which is an internal standard gene, to obtain the IVL / RPLP0 RNA level. Furthermore, as a control, the amount of IVL / RPLP0 RNA in the cell line to which only the extraction solvent was added was taken as 1, and the amount of IVL / RPLP0 RNA in each extract relative to it was expressed as a relative value, which was taken as the relative expression level of IVL / RPLP0 RNA. The results are shown in FIG. In FIG. 1, the relative expression level of PRLP0 RNA is represented by a square, and the relative expression level of IVL / RPLP0 RNA is represented by a bar graph.
図１から明らかなように、枳実、セイヨウメギ、ムラサキマサキ、イチハツ、ホソバムラサキバレンギク、ヨロイグサ、ムラサキセンダイハギ、コウホン、アメリカサンショウ及び陳皮抽出物が、それぞれインボルクリン発現を抑制する作用を有することが認められた。したがって、上記植物またはその抽出物を含有する本発明のインボルクリン発現抑制剤は、インボルクリンの発現を抑制することができる。
前述のように、インボルクリンの発現を抑制すると皮膚の老化が改善・抑制されることが知られている。したがって、図１の結果から、本発明の上記植物及びその抽出物はインボルクリンの発現を抑制することで、皮膚老化を予防・改善できることがわかる。
As is clear from FIG. 1, it was recognized that the berries, pearl barley, purple saki, ichihatsu, hosomura murasakibarengiku, yorogusa, murasakisendaihagi, kohon, American salamander, and cinnamon extract have an action to suppress involucrin expression, respectively. . Therefore, the involucrin expression inhibitor of the present invention containing the above plant or an extract thereof can suppress involucrin expression.
As described above, it is known that suppression of involucrin expression improves / suppresses skin aging. Therefore, the results of FIG. 1 show that the above-mentioned plant of the present invention and the extract thereof can prevent and improve skin aging by suppressing the expression of involucrin.
（処方例）
前記製造例で得られた抽出物を有効成分として、下記に示す組成のローション、美容液、化粧水を常法により各々調製した。
(Prescription example)
Using the extract obtained in the above production example as an active ingredient, lotions, essences and lotions having the compositions shown below were prepared by conventional methods.
１．ローションの調製
（組成） （配合：質量％）
エタノール ８０．０
モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン ０．５
香料 ０．１
精製水 １８．４
抽出物 １．０
1. Preparation of lotion (composition) (Formulation: mass%)
Ethanol 80.0
Polyoxyethylene sorbitan monolaurate 0.5
Fragrance 0.1
Purified water 18.4
Extract 1.0
２．美容液の調製
（組成） （配合：質量％）
パルミチン酸カルシウム １．８
スクワレン ２０．０
パルミチン酸 ２．０
ステアリン酸 ３．０
グリセリン ２０．０
１，３−ブチレングリコール １０．０
精製水 ４２．２
抽出物 １．０
2. Preparation of serum (composition) (Composition: mass%)
Calcium palmitate 1.8
Squalene 20.0
Palmitic acid 2.0
Stearic acid 3.0
Glycerin 20.0
1,3-butylene glycol 10.0
Purified water 42.2
Extract 1.0
３．化粧水の調製
（組成） （配合：質量％）
Ｎ−アミジノ―トランス―４―ヒドロキシ―Ｌ−プロリン ２．０
エデト酸２ナトリウム ０．０５
モノラウリン酸ポリエチレン（２０）ソルビタン １．０
１，３−ブチレングリコール ３．０
ソルビトール（７０） ２．０
ピロリドンカルボン酸ナトリウム ３．０
エタノール １０．０
抽出物 １．０
精製水 ７７．９５
3. Preparation of lotion (composition) (formulation: mass%)
N-amidino-trans-4-hydroxy-L-proline 2.0
Edetic acid disodium 0.05
Polyethylene monolaurate (20) sorbitan 1.0
1,3-butylene glycol 3.0
Sorbitol (70) 2.0
Sodium pyrrolidonecarboxylate 3.0
Ethanol 10.0
Extract 1.0
Purified water 77.95
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