JP2011529457A - ストレプトスピロール誘導体 - Google Patents
ストレプトスピロール誘導体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2011529457A JP2011529457A JP2011520353A JP2011520353A JP2011529457A JP 2011529457 A JP2011529457 A JP 2011529457A JP 2011520353 A JP2011520353 A JP 2011520353A JP 2011520353 A JP2011520353 A JP 2011520353A JP 2011529457 A JP2011529457 A JP 2011529457A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- alkyl
- formula
- compound
- alkylene
- acceptable salt
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D498/10—Spiro-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
- C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D491/10—Spiro-condensed systems
- C07D491/107—Spiro-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring
Abstract
本発明は、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｘ1、Ｘ2、Ｙ1及びＹ2が本明細書に定義される通りである一般式（Ｉ）のストレプトスピロール誘導体、微生物ストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）を発酵させる工程及び該微生物によって産生された化合物を場合により誘導体化する工程による該化合物の製造方法、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物を含む薬学的組成物、並びに細菌感染症の治療及び／又は予防用の医薬の製造のための式（Ｉ）の化合物の使用に関する。
【化１】
【化１】
Description
多剤耐性グラム陽性細菌によって引き起こされる感染症の発生率は、この十年にわたる抗菌療法の進歩にもかかわらず、増加している。これらの感染症を引き起こす病原体は大抵の現在入手可能な抗菌薬に対してしばしば耐性であるので、それらは治療するのが非常に困難である。抗生物質で治療されるほぼ全ての細菌は、これらの薬物に対して少なくともある程度の耐性を示した（非特許文献１）。高レベルのペニシリン耐性の出現、続いての半合成ペニシリン（メチシリン、ナフシリン及びオキサシリン）、マクロライド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質、アミノ配糖体系抗生物質及びグリコペプチド系抗生物質（例えば、バンコマイシン）に対して耐性の株の進化及び拡散は、ブドウ球菌疾患の治療を世界的な課題にした。多くの国において、多耐性黄色ブドウ球菌株の臨床分離株の数の増加が観察されており、院内感染症及び市中感染症の発病可能性は周知である（非特許文献２）。
F. Baquero, J. Antimicrob. Chemother. 1977, 39, 1-6
F. C. Tenover et al., Emer. Infec. Dis. 2001, 7, 327-332
微生物株ストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）が、ストレプトスピロール（streptospirole）と命名された、新規の化学骨格構造を有する新規の化合物を産生し、これらが、低濃度でグラム陽性細菌の増殖を阻害し、従って、細菌感染症の治療及び／又は予防のために使用されるに適していることが、今回わかった。
本発明は、式（Ｉ）
〔式中、
Ｒ1は、（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2は、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−ＯＨであり、
Ｒ3は、Ｈ又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキルであり、
Ｘ1は、ハロゲン、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−アリール］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−ヘテロアリール］、又はＳ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2であり、
Ｘ2は、ハロゲンであり、そして
Ｙ1及びＹ2は、互いに独立して、Ｈ；ＯＨ；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−アリール］、ここで（Ｃ6−Ｃ10）−アリール基は、場合によりハロゲンによって置換される；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−
Ｃ10）−ヘテロアリール］；場合により（Ｃ1−Ｃ6）アルキルによって置換される５〜６個の環原子を含む飽和又は不飽和ヘテロ環式環系、ここで１又は２個の環原子がＮ、Ｏ又はＳである；であるか、又はＹ1及びＹ2は一緒になって＝Ｏである〕
の化合物、又は式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩に関する。
Ｒ1は、（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2は、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−ＯＨであり、
Ｒ3は、Ｈ又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキルであり、
Ｘ1は、ハロゲン、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−アリール］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−ヘテロアリール］、又はＳ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2であり、
Ｘ2は、ハロゲンであり、そして
Ｙ1及びＹ2は、互いに独立して、Ｈ；ＯＨ；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−アリール］、ここで（Ｃ6−Ｃ10）−アリール基は、場合によりハロゲンによって置換される；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−
Ｃ10）−ヘテロアリール］；場合により（Ｃ1−Ｃ6）アルキルによって置換される５〜６個の環原子を含む飽和又は不飽和ヘテロ環式環系、ここで１又は２個の環原子がＮ、Ｏ又はＳである；であるか、又はＹ1及びＹ2は一緒になって＝Ｏである〕
の化合物、又は式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩に関する。
アルキル及びアルキレン基は、記載の数の炭素原子を含む直鎖又は分枝鎖アルキル基と定義される。
（Ｃ6−Ｃ10）−アリールは、６〜１０個の炭素原子を有する芳香族炭化水素と定義される。アリール基の例としては、フェニル及びナフチルが挙げられる。
（Ｃ6−Ｃ10）−ヘテロアリールは、芳香族炭化水素の１つ又はそれ以上の炭素原子がヘテロ原子で置き換えられているアリール基と定義され、ここで、用語「ヘテロ原子」は、酸素、窒素、硫黄及びリンを含む。ヘテロアリール基の例としては、フラン、チオフェン、ベンゾチオフェン、ピロール、チアゾール、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ベンゾフラン、インドール、クマリン、キノリン、イソキノリン、及びナフチリジンが挙げられる。
５〜６個の環原子を含む飽和又は不飽和ヘテロ環式環系は、例えば、フラン、２Ｈ−ピラン、４Ｈ−ピラン、チオフェン、パラチアジン、ピロール、ピロリジン、ピラゾール、ピラゾリジン、イミダゾール、イミダゾリン、イミダゾリジン、ピリジン、ピラジン、ピペラジン、ピペリジン、ピリミジン又はモルホリンである。
Ｒ2は、好ましくはＨ又は（Ｃ1−Ｃ4）アルキル又は（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−ＯＨ、より好ましくはＨ又はメチル又はエチレン−ＯＨ、最も好ましくはＨである。
Ｒ3は、好ましくはＨ又は（Ｃ1−Ｃ4）アルキル、より好ましくはメチルである。
Ｘ1は、好ましくはＣｌ、Ｂｒ、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキル、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−ピリジル］、又はＳ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2、より好ましくはＣｌ又はＢｒ、最も好ましくはＣｌである。
Ｘ2は、好ましくはＣｌ又はＢｒ、最も好ましくはＣｌである。
より好ましくは、Ｘ1及びＸ2は両方ともＣｌである。
Ｙ1及びＹ2は、好ましくは、互いに独立して、Ｈ；ＯＨ；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］；ＮＨ−ＣＨ2−フェニル、ここでフェニル基は、場合によりハロゲンによって、好ましくはフッ素によって置換される；場合により（Ｃ1−Ｃ6）アルキルによって置換される５〜６個の環原子を含む飽和ヘテロ環式環系、より好ましくは、ピペラジン、ピペリジン、モルホリン又はＮ−メチルモルホリンからなる群より選択される。
より好ましくは、Ｙ1及びＹ2は一緒になって＝Ｏである。
さらに好ましくは、本発明は、
Ｒ1が、（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2が、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ4）アルキル又は（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−ＯＨであり、
Ｒ3が、Ｈ又は（Ｃ1−Ｃ4）アルキルであり、
Ｘ1が、ハロゲン、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキル、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−ヘテロアリール］又はＳ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2であり、
Ｘ2が、ハロゲン、好ましくはＣｌ又はＢｒであり、そして
Ｙ1及びＹ2が、好ましくは、互いに独立して、Ｈ；ＯＨ；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］；ＮＨ−ＣＨ2−フェニル、ここでフェニル基は、場合によりハロゲンによって置換される；場合により（Ｃ1−Ｃ6）アルキルによって置換される５〜６個の環原子を含む飽和ヘテロ環式環系より選択される基であるか；又は、Ｙ1及びＹ2が一緒になって＝Ｏである、
式（Ｉ）の化合物、又は式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩に関する。
Ｒ1が、（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2が、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ4）アルキル又は（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−ＯＨであり、
Ｒ3が、Ｈ又は（Ｃ1−Ｃ4）アルキルであり、
Ｘ1が、ハロゲン、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキル、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−ヘテロアリール］又はＳ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2であり、
Ｘ2が、ハロゲン、好ましくはＣｌ又はＢｒであり、そして
Ｙ1及びＹ2が、好ましくは、互いに独立して、Ｈ；ＯＨ；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］；ＮＨ−ＣＨ2−フェニル、ここでフェニル基は、場合によりハロゲンによって置換される；場合により（Ｃ1−Ｃ6）アルキルによって置換される５〜６個の環原子を含む飽和ヘテロ環式環系より選択される基であるか；又は、Ｙ1及びＹ2が一緒になって＝Ｏである、
式（Ｉ）の化合物、又は式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩に関する。
さらに好ましくは、本発明は、
Ｒ1が、（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2が、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ2）アルキル又は（Ｃ1−Ｃ2）アルキレン−ＯＨであり、
Ｒ3が、（Ｃ1−Ｃ4）アルキル、好ましくはメチルであり、
Ｘ1が、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−ピリジル］、又はＳ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2であり、
Ｘ2が、Ｃｌ又はＢｒであり、そして
Ｙ1及びＹ2が互いに独立してＨ又はＯＨであるか、又はＹ1及びＹ2が一緒になって＝Ｏである、
式（Ｉ）の化合物、又はその生理学的に許容される塩に関する。
Ｒ1が、（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2が、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ2）アルキル又は（Ｃ1−Ｃ2）アルキレン−ＯＨであり、
Ｒ3が、（Ｃ1−Ｃ4）アルキル、好ましくはメチルであり、
Ｘ1が、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−ピリジル］、又はＳ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2であり、
Ｘ2が、Ｃｌ又はＢｒであり、そして
Ｙ1及びＹ2が互いに独立してＨ又はＯＨであるか、又はＹ1及びＹ2が一緒になって＝Ｏである、
式（Ｉ）の化合物、又はその生理学的に許容される塩に関する。
さらに好ましくは、本発明は、
Ｒ1が、（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2が、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ2）アルキル又は（Ｃ1−Ｃ2）アルキレン−ＯＨであり、
Ｒ3が、メチルであり、
Ｘ1が、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＨ［ブチル］、ＮＨ［ＣＨ2−ピリジル］、又はＳ−エチレン−Ｎ［（Ｃ1−Ｃ2）アルキル］2であり、
Ｘ2が、Ｃｌ又はＢｒであり、そして
Ｙ1及びＹ2が互いに独立してＨ又はＯＨであるか、又はＹ1及びＹ2が一緒になって＝Ｏである、
式（Ｉ）の化合物、又はその生理学的に許容される塩に関する。
Ｒ1が、（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2が、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ2）アルキル又は（Ｃ1−Ｃ2）アルキレン−ＯＨであり、
Ｒ3が、メチルであり、
Ｘ1が、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＨ［ブチル］、ＮＨ［ＣＨ2−ピリジル］、又はＳ−エチレン−Ｎ［（Ｃ1−Ｃ2）アルキル］2であり、
Ｘ2が、Ｃｌ又はＢｒであり、そして
Ｙ1及びＹ2が互いに独立してＨ又はＯＨであるか、又はＹ1及びＹ2が一緒になって＝Ｏである、
式（Ｉ）の化合物、又はその生理学的に許容される塩に関する。
さらに好ましくは、本発明は、
Ｒ1が（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2がＨであり、
Ｒ3がメチルであり、
Ｘ1及びＸ2が互いに独立してＣｌ又はＢｒであり、
Ｙ1及びＹ2が一緒になって＝Ｏである、
式（Ｉ）の化合物、又はその生理学的に許容される塩に関する。
Ｒ1が（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2がＨであり、
Ｒ3がメチルであり、
Ｘ1及びＸ2が互いに独立してＣｌ又はＢｒであり、
Ｙ1及びＹ2が一緒になって＝Ｏである、
式（Ｉ）の化合物、又はその生理学的に許容される塩に関する。
さらに好ましくは、本発明は、
Ｒ1が（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2がＨであり、
Ｒ3がメチルであり、
Ｘ1及びＸ2が両方ともＣｌであり、
Ｙ1及びＹ2が一緒になって＝Ｏである、
式（Ｉ）の化合物、又はその生理学的に許容される塩に関する。
Ｒ1が（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2がＨであり、
Ｒ3がメチルであり、
Ｘ1及びＸ2が両方ともＣｌであり、
Ｙ1及びＹ2が一緒になって＝Ｏである、
式（Ｉ）の化合物、又はその生理学的に許容される塩に関する。
上述の式（Ｉ）の化合物において、Ｒ1は、好ましくはｎ−ヘキシル、４−メチル−ペンチル、ｎ−ヘプチル及び４−メチル−ヘキシルである。
式（Ｉ）の好ましい化合物の例は、以下の通りである：
本発明はさらに、式（Ｉ）の化合物の全ての自明な化学的等価物に関する。これらの等価物は、僅かな構造差しか示さず、かつ同一の薬理学的効果を有するか、又は穏やかな条件下で本発明に従う化合物へ変換される、化合物である。前記等価物はまた、例えば、式（Ｉ）の化合物の還元生成物、酸化生成物、エステル、エーテル、アセタール又はアミドを含む。前記等価物は、標準的な方法を使用して当業者によって製造され得る。
特に記載されない限り、式（Ｉ）の化合物のキラル中心は、Ｒ立体配置又はＳ立体配置で示され得る。本発明は、純粋なエナンチオマー又はジアステレオマー、及びそれらの混合物に関する。
式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩は、Remington's Pharmaceutical Sciences（第17版、1418頁 (1985)）に記載されるように、それらの有機塩及びそれらの無機塩の両方であると理解される。それらの物理的及び化学的安定性並びにそれらの溶解性のために、酸性基については、特に、ナトリウム、カリウム、カルシウム及びアンモニウム塩が好ましく；塩基性基については、特に、塩酸、硫酸又はリン酸の塩、又は、カルボン酸又はスルホン酸、例えば、酢酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸及びｐ−トルエンスルホン酸の塩が好ましい。
本発明はさらに、式（Ｉ）
〔式中、
Ｒ1は、（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2は、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−ＯＨであり、
Ｒ3は、Ｈ又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキルであり、
Ｘ1は、ハロゲン、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−アリール］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−ヘテロアリール］、又はＳ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2であり、
Ｘ2は、ハロゲンであり、そして
Ｙ1及びＹ2は、互いに独立して、Ｈ；ＯＨ；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−アリール］、ここで（Ｃ6−Ｃ10）−アリール基は、場合によりハロゲンによって置換される；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−ヘテロアリール］；場合により（Ｃ1−Ｃ6）アルキルによって置換される５〜６個の環原子を含む飽和又は不飽和ヘテロ環式環系、ここで１又は２個の環原子がＮ、Ｏ又はＳである；であるか、又はＹ1及びＹ2は一緒になって＝Ｏである、
又は式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩〕
の化合物又は式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩の製造方法であって、
１．式（Ｉ）の化合物のうちの１つ又はそれ以上が培地中に生じるまで培地中好適な条件下で、株ストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）、又はその変異株及び／又は突然変異株のうちの１つを発酵させる工程、
２．培地から式（Ｉ）の化合物を単離する工程、及び
３．必要に応じて、単離された式（Ｉ）の化合物を式（Ｉ）の化合物に誘導体化し、及び／又は必要に応じて、単離された又は誘導体化された化合物を式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩に変換する工程
を含む製造方法に関する。
〔式中、
Ｒ1は、（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2は、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−ＯＨであり、
Ｒ3は、Ｈ又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキルであり、
Ｘ1は、ハロゲン、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−アリール］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−ヘテロアリール］、又はＳ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2であり、
Ｘ2は、ハロゲンであり、そして
Ｙ1及びＹ2は、互いに独立して、Ｈ；ＯＨ；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−アリール］、ここで（Ｃ6−Ｃ10）−アリール基は、場合によりハロゲンによって置換される；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−ヘテロアリール］；場合により（Ｃ1−Ｃ6）アルキルによって置換される５〜６個の環原子を含む飽和又は不飽和ヘテロ環式環系、ここで１又は２個の環原子がＮ、Ｏ又はＳである；であるか、又はＹ1及びＹ2は一緒になって＝Ｏである、
又は式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩〕
の化合物又は式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩の製造方法であって、
１．式（Ｉ）の化合物のうちの１つ又はそれ以上が培地中に生じるまで培地中好適な条件下で、株ストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）、又はその変異株及び／又は突然変異株のうちの１つを発酵させる工程、
２．培地から式（Ｉ）の化合物を単離する工程、及び
３．必要に応じて、単離された式（Ｉ）の化合物を式（Ｉ）の化合物に誘導体化し、及び／又は必要に応じて、単離された又は誘導体化された化合物を式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩に変換する工程
を含む製造方法に関する。
式（Ｉ）の化合物の製造方法において、式（Ｉ）の化合物は、好ましくは、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、（ＸＩＩＩ）、（ＸＩＶ）の化合物又はその混合物、より好ましくは、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）の化合物である。
培養培地は、少なくとも１つの通常の炭素源及び窒素源並びに通常の無機塩を含有する、栄養液又は固体培地である。塩化物塩が培養培地中に存在する場合、株ストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）は、組み込みの結果としてＸ1及び／又はＸ2がＣｌであり得る式（Ｉ）の化合物を産生する。同様に、臭化物塩が培養培地中に存在する場合、株ストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）は、組み込みの結果としてＸ1及び／又はＸ2がＢｒであり得る式（Ｉ）の化合物を産生する。
本発明に従う方法は、実験室規模（ミリリットル〜リットル規模）での発酵のために及び工業規模（立方メートル規模）での発酵のために使用され得る。
発酵について好適な炭素源は、同化可能な炭水化物及び糖アルコール、例えば、グルコース、ラクトース、スクロース又はＤ−マンニトール、並びに炭水化物含有天然物、例えば、麦芽エキス又は酵母エキスである。窒素含有栄養素の例は、アミノ酸；ペプチド及びタンパク質並びにまたそれらの分解産物、例えば、カゼイン、ペプトン又はトリプトン；肉エキス；酵母エキス；グルテン；例えば、トウモロコシ、コムギ、マメ、ダイズ又はワタ由来の、すりつぶされた種子、；アルコール産生由来の蒸留残留物；肉粉；酵母エキス；アンモニウム塩；硝酸塩である。窒素源が、合成的又は生合成的に得られた１つ又はそれ以上のペプチドであることが好ましい。無機塩の例は、アルカリ金属又はアルカリ土類金属、鉄、亜鉛、コバルト及びマンガンの塩化物、炭酸塩、硫酸塩又はリン酸塩である。微量元素の例は、コバルト及びマンガンである。
本発明に従うストレプトスピロールを形成するために好適である条件は、以下の通りである：本発明に従うストレプトスピロールは、０．５〜１０．０％、好ましくは１．０〜５．０％の酵母エキス；５．０〜１５．０％、好ましくは７．０〜１２．０％の麦芽エキス；０．５〜１０．０％、好ましくは１．０〜５．０％のグルコースを含有する培養培地中において好ましくは形成される。与えられるパーセンテージ値は、各々の場合において、栄養液全体の質量に基づく。
微生物は、好気的に、即ち、例えば、振盪フラスコ若しくは発酵槽中で振盪若しくは撹拌されながら浸漬された状態で、又は、必要に応じて空気若しくは酸素が導入されながら、固形培地上で、培養される。微生物は、約１８〜３５℃、好ましくは約２５〜３２℃、特に２７〜３０℃の温度範囲において培養され得る。ｐＨ範囲は、４〜１０、好ましくは６．５〜７．５であるべきである。微生物は、一般的に、２〜１０日、好ましくは７２〜１６８時間の期間の間、これらの条件下で培養される。微生物は、有利には、いくつかの段階で培養され、即ち、１つ又はそれ以上の予備培養物が、液体栄養培地において最初に調製され、次いでこれらの予備培養物が、実際の産生培地へ、例えば、１：１０〜１：１００の体積比で接種される；即ち、本培養。予備培養物は、例えば、株を、栄養細胞又は胞子の形態で、栄養液に接種し、約２０〜１２０時間、好ましくは４８〜９６時間増殖させることによって得られる。栄養細胞及び／又は胞子は、例えば、株を約１〜１５日間、好ましくは４〜１０日間、固体又は液体の栄養基質、例えば、酵母麦芽寒天又はオートミール寒天上で増殖させることによって得られ得る。
微生物ＳＴ１０８１４０の分離株は、２００５年５月２１日に、ブタペスト条約の規則に従って、Deutschen Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSMZ), Mascheroder Weg 1B, 38124 Braunschweig, Deutschlandへ寄託した。寄託した微生物は、アクセッション番号ＤＳＭ １９３６９が与えられた。微生物株ＳＴ１０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）は、ストレプトミセス種として分類された。
株ストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）の代わりに、本発明に従う化合物の１つ又はそれ以上を合成するその突然変異体及び／又は変異体を使用することも可能である。
突然変異体は、ゲノム中の１つ又はそれ以上の遺伝子が改変されている微生物であり、本発明に従う化合物を産生する生物の能力を担う遺伝子（１つ又は複数）は機能的かつ遺伝性のままである。
このような突然変異体は、それ自体公知の様式で、物理学的手段、例えば、紫外線若しくはＸ線を用いるような照射を使用して、又は化学的突然変異原、例えば、エチルメタンスルホネート（ＥＭＳ）；２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン（ＭＯＢ）若しくはＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＭＮＮＧ）を使用して、又はBrock et al., “Biology of Microorganisms”, Prentice Hall, pages 238-247 (1984)
に記載されるように製造され得る。
に記載されるように製造され得る。
変異体は、微生物の表現型である。微生物は、環境に適応する能力を有し、従って高度に発達した生理学的柔軟性を示す。微生物の細胞の全てが表現型適応に関与し、変化の本質は遺伝的に調節されるものではなく、変更された環境下において可逆的である（H. Stolp, Microbial ecology: organism, habitats, activities. Cambridge University Press, Cambridge, GB, page 180, 1988）。
本発明に従う化合物の１つ又はそれ以上を合成する突然変異体及び／又は変異体についてのスクリーニングは、以下のスキームに従って行なわれる：
１．発酵培地の凍結乾燥；
２．凍結乾燥物の有機溶媒での抽出；
３．固相を用いた培養濾液からの化合物の抽出；
４．ＨＰＬＣ若しくはＴＬＣによる分析、又は生物学的活性の試験による分析。
１．発酵培地の凍結乾燥；
２．凍結乾燥物の有機溶媒での抽出；
３．固相を用いた培養濾液からの化合物の抽出；
４．ＨＰＬＣ若しくはＴＬＣによる分析、又は生物学的活性の試験による分析。
上述した発酵条件は、ストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）並びにその突然変異体及び／又は変異体に適用される。
ＡＴＰの細胞内濃度の測定に基づく試験が、細菌生存能力を測定するために使用される。それは、インタクトな生きている細菌は、抗菌剤の作用によって損傷を受けている細菌細胞よりも高い細胞内ＡＴＰレベルを有するという事実に依拠する。試薬の処方は、細菌細胞溶解を助け、ＡＴＰは、ルシフェリン／ルシフェラーゼ反応によって発光測定的に定量される。
式（Ｉ）のストレプトスピロール誘導体は、天然物質の化学的、物理的及び生物学的特性を考慮し、公知の方法を使用して、培養培地から単離及び精製され得る。培養培地中における又は個々の単離工程におけるそれぞれのストレプトスピロール誘導体の濃度を試験するために、ＨＰＬＣが使用され、形成された物質の量は、好都合には較正溶液と比較される。
単離について、培養ブロス又は固体培地を含む培養物が、場合により凍結乾燥され、その後、ストレプトスピロール誘導体が、有機溶媒、例えばメタノール又は２−プロパノールを使用して凍結乾燥物から抽出される。有機溶媒相は、本発明に従う式（Ｉ）の天然物質を含有し；それは、必要に応じて、真空下で濃縮され、さらなる精製へ供される。
本発明に従う式（Ｉ）の１つ又はそれ以上の化合物のさらなる精製は、好適な材料上での、好ましくは、例えば、モレキュラーシーブ、シリカゲル、酸化アルミニウム、イオン交換体又は吸着樹脂又は逆相（ＲＰ）上での、クロマトグラフィーによって行なわれる。このクロマトグラフィーは、ストレプトスピロール誘導体を分離するために使用される。ストレプトスピロール誘導体は、緩衝水溶液又は水溶液及び有機溶液の混合物を使用してクロマトグラフィー処理される。
水溶液又は有機溶液の混合物は、全て、水混和性有機溶媒、好ましくは、メタノール、２−プロパノール又はアセトニトリルであるか、５〜９５％溶媒、好ましくは５〜４０％溶媒の濃度であるか、又は全て、有機溶媒と混和性である緩衝水溶液であると理解される。使用される緩衝液は、上記で指定したものと同一である。
ストレプトスピロール誘導体は、例えばポリスチレン−ジビニルベンゼンコポリマー樹脂、ＭＣＩ（登録商標）（日本の三菱製の吸着樹脂）又はＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＸＡＤ（登録商標）（ＴＯＳＯＨＡＡＳ）、又は他の疎水性材料、例えばＲＰ−８若しくはＲＰ−
１８相上での、逆相クロマトグラフィーによって、それらの異なる極性に基づいて、分離される。さらに、分離は、例えばシリカゲル、酸化アルミニウムなど上での、順相クロマトグラフィーによって行なわれ得る。
１８相上での、逆相クロマトグラフィーによって、それらの異なる極性に基づいて、分離される。さらに、分離は、例えばシリカゲル、酸化アルミニウムなど上での、順相クロマトグラフィーによって行なわれ得る。
ストレプトスピロール誘導体は、緩衝化された塩基性又は酸性化水溶液、又は水溶液とアルコール若しくは他の水混和性有機溶媒との混合物を使用して、クロマトグラフィー処理される。好ましいのは、有機溶媒としてアセトニトリル及びメタノールを使用することである。
緩衝化された塩基性又は酸性化水溶液は、例えば、水、０．５Ｍまでの濃度の、リン酸緩衝液、酢酸アンモニウム及びクエン酸緩衝液、並びに、好ましくは１％までの濃度の、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、アンモニア及びトリエチルアミン、又は当業者に公知の全ての市販の酸及び塩基であると理解される。緩衝水溶液の場合、特に好ましいのは、０．１％酢酸アンモニウムである。
クロマトグラフィーは、１００％水で始まり１００％溶媒で終わる勾配を使用して行なわれ；クロマトグラフィーは、好ましくは、５％から９５％へのアセトニトリルの線形勾配を用いて実行される。
あるいは、ゲルクロマトグラフィー又は疎水性相上でのクロマトグラフィーを行なうことも可能である。ゲルクロマトグラフィーは、ポリアクリルアミドゲル又はコポリマーゲル、例えば、Ｂｉｏｇｅｌ−Ｐ２（登録商標）（Ｂｉｏｒａｄ）又はＦｒａｃｔｏｇｅｌ ＴＳＫ ＨＷ４０（登録商標）（Ｍｅｒｃｋ、ドイツ）上において行なわれる。上述のクロマトグラフィー工程の順序は、逆にすることができる。
Ｒ2が（Ｃ1−Ｃ6）アルキル又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−ＯＨである式（Ｉ）の化合物への、Ｒ2がＨである式（Ｉ）の化合物のフェノールＯＨ基のアルキル化は、それ自体が公知である方法を使用して行なわれ得る（J. March, Advanced Organic Chemistry, John Wiley & Sons, 4th edition, 1992）。例えば、メチル化は、塩基の存在下でのヨウ化メチルとの反応によって達成され得る。エチレン−ＯＨ基による誘導体化は、Ｒ2がＨである式（Ｉ）の化合物と２−（ヒドロキシ）エチルブロミドとを塩基の存在下で反応させることによって達成され得る。あるいは、置換基（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−ＯＨ中のヒドロキシル基は、通常の保護基によって保護され得、アルキル化後に脱保護され得る。
Ｘ1がＯ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］又はＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−アリール］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−ヘテロアリール］又はＳ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2である式（Ｉ）の化合物を得るための、置換基Ｘ1としてのハロゲン原子、例えば、塩素原子の求核置換は、それ自体が公知の方法を使用して同様に行なわれ、例えば、イソブチルアミン、４−ピコリルアミン、塩基の存在下での２−（ジエチルアミノ）エタンチオール塩酸塩、又はナトリウム（Ｃ1−Ｃ6）アルカノラート、例えばナトリウムメタノラートとの反応は、基Ｘ1としての置換基である、それぞれのＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−ヘテロアリール］、Ｓ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2又はＯ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］を与える（Russian Journal of Organic Chemistry 2004, 40, 1521-1525；J. Heterocyclic Chem. 2002, 39, 203-211；Organic Letters 2004, 6 (9), 1481-1484を参照のこと）。
２，３−ジヒドロ−ベンゾフラン−３−オール［Ｙ1及びＹ2は互いに独立してＨ又はＯＨである］への、式（Ｉ）の化合物中のベンゾフラン−３−オン ケト部分［Ｙ1及びＹ2は一緒になって＝Ｏである］の還元は、それ自体が公知の方法、例えば、ボラン誘導体、例えば、ボラン−ｔｅｒｔ−ブチルアミン錯体との反応を使用することによって達成され得る（JACS 1989, 111(1), 278-84；Eur. JOC 2006, 10, 2352-2361）。
２，３−ジヒドロ−ベンゾフラン−３−イルアミンへの２，３−ジヒドロ−ベンゾフラン−３−オールの変換は、それ自体が公知の方法、例えば、塩化チオニルとの反応（Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2007, 17 (19), 5465-5471）、続いてＮ−メチル−ピペラジン又は４−フルオロ−ベンジルアミンとの反応による塩素の求核置換（Journal of Medicinal Chemistry 2003, 46(4), 623-633）を使用することによって達成され得る。
本発明はさらに、特に細菌感染症の治療及び／又は予防用の、好ましくは例えばストレプトコッカス（Streptococci）、スタフィロコッカス（Staphylococci）及びエンテロコッカス（Enterococci）などのグラム陽性病原体に関連する細菌感染症の治療及び／又は予防用の、人間又は動物医学における医薬品としての使用のための、式（Ｉ）の化合物又はその生理学的に許容される塩の使用に関する。
本発明のさらなる実施態様は、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物又はその生理学的に許容される塩の内容物を有する薬学的組成物に関する。好ましくは、薬学的組成物は、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物又はその生理学的に許容される塩、及び１つ又はそれ以上の通常の薬理学的に好適な担体物質又は補助物質を含有する。
本発明に従う化合物は、２〜９、特に５〜７のｐＨ範囲において溶液中で及び固体状態で安定であり、結果として、薬学的組成物中へ混合され得る。
本発明に従う薬学的組成物は経口又は非経口投与され得る一方、直腸使用もまた原則的に可能である。好適な固体又は液体薬学的組成物の例は、顆粒剤、散剤、錠剤、糖衣錠、（マイクロ）カプセル剤、坐剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤、エアゾール剤、アンプル形態の滴剤又は注射用液剤、並びに活性化合物を持続放出する調製物であり、この調製物に関連して、薬理学的に好適な担体物質又は補助物質、例えば崩壊剤、結合剤、コーティング剤、膨張剤、流動促進剤、滑沢剤、矯味矯臭物質、甘味剤若しくは可溶化剤、例えば炭酸マグネシウム、二酸化チタン、ラクトース、マンニトール及び他の糖、タルク、乳タンパク質、ゼラチン、澱粉、ビタミン、セルロース及びその誘導体、動物油若しくは植物油、ポリエチレングリコール、並びに溶媒、例えば、滅菌水、アルコール、グリセロール及び多価アルコールが、通常使用される。
必要に応じて、経口投与用の投薬単位は、放出を遅延するか又は放出を比較的長期間にわたって延長するために、例えば粒子形態の活性物質を好適なポリマー、ワックスなどでコーティングするか又は埋め込むことによって、マイクロカプセル化され得る。
薬学的調製物を投薬単位で製造及び投与することが好ましく、各単位は、有効成分として、規定用量の、式（Ｉ）の化合物又はその生理学的に許容される塩のうちの１つ又はそれ以上の化合物を含有する。錠剤、カプセル剤及び坐剤などの固体投薬単位の場合、この用量は、１日当たり、約５００ｍｇまで、しかし好ましくは約０．１〜２００ｍｇ、アンプル形態の注射液剤の場合において、約２００ｍｇまで、しかし好ましくは約０．５〜１００ｍｇであり得る。
投与される日用量は、哺乳動物被験体の体重、年齢、性別及び状態に依存する。しかし、より多い又はより少ない日用量もまた、恐らく好適であり得る。日用量は、単一の投薬単位の形態での、又はいくつかのより小さな投薬単位での、１回のみの投与、及び細分された用量の規定間隔での複数回投与の両方によって、投与され得る。
本発明に従う医薬品は、通常の担体物質又は補助物質の１つ又はそれ以上と場合により一緒に、１つ又はそれ以上の式（Ｉ）の化合物を投与に好適な形態にすることによって製造される。
式（Ｉ）の化合物は、０．１２５〜６４μｇ／ｍｌの単回用量で、実施例セクションでさらに概説されるテストにおいて使用され、用量依存性が、表６においてＩＣ50値として与えられる。
以下の実施例は、本発明の範囲を決して限定することなしに、本発明をより詳細に説明することを目的としている。別段の指示がない限り、百分率の値は質量を指し、液体の場合の混合比は体積を指す。
実施例１：ストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）の保存
寒天平板（麦芽エキス１０．０ｇ／ｌ、酵母エキス４．０ｇ／ｌ、グルコース４．０ｇ／ｌ、寒天１５．０ｇ／ｌ、ｐＨ７．０）に株ストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）を接種し、約７〜１０日間、２８℃でインキュベートした。細胞を平板から採取し、５０％グリセリン０．５ｍｌ中に再懸濁し、−１３５℃で保存した。
寒天平板（麦芽エキス１０．０ｇ／ｌ、酵母エキス４．０ｇ／ｌ、グルコース４．０ｇ／ｌ、寒天１５．０ｇ／ｌ、ｐＨ７．０）に株ストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）を接種し、約７〜１０日間、２８℃でインキュベートした。細胞を平板から採取し、５０％グリセリン０．５ｍｌ中に再懸濁し、−１３５℃で保存した。
実施例２：エルレンマイヤーフラスコ中ストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）の予備培養物の調製
滅菌３００ｍｌエルレンマイヤーフラスコ中の栄養液（グルコース４．０ｇ／ｌ、酵母エキス４．０ｇ／ｌ、麦芽エキス１０．０ｇ／、ＣａＣＯ3 ２．０ｇ／ｌ）１００ｍｌに、株ストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）を接種し、培養物をロータリーシェイカー上２８℃及び１８０ｒｐｍで７日間インキュベートした。次いで、この予備培養物１０ｍｌを、本培養物の調製のために使用した。
滅菌３００ｍｌエルレンマイヤーフラスコ中の栄養液（グルコース４．０ｇ／ｌ、酵母エキス４．０ｇ／ｌ、麦芽エキス１０．０ｇ／、ＣａＣＯ3 ２．０ｇ／ｌ）１００ｍｌに、株ストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）を接種し、培養物をロータリーシェイカー上２８℃及び１８０ｒｐｍで７日間インキュベートした。次いで、この予備培養物１０ｍｌを、本培養物の調製のために使用した。
実施例３：ストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）の液体本培養物の調製
以下の栄養液（酵母エキス４．０ｇ／ｌ、麦芽エキス１０．０ｇ／ｌ、グルコース４．０ｇ／ｌ、ｐＨ７．０）１００ｍｌを含有する滅菌３００ｍｌエルレンマイヤーフラスコに、予備培養物（実施例２を参照）１０ｍｌを接種し、シェーカー上２８℃及び１８０ｒｐｍでインキュベートした。本発明に従うストレプトスピロールの最大産生が、１２０〜１６８時間後に達した。実施例２に記載したものと同一の栄養液からの９６〜１２０時間齢（hour-old）深部培養物（接種量約５〜１０％）は、１０〜２００Ｌ発酵槽に接種するのに十分であった。
以下の栄養液（酵母エキス４．０ｇ／ｌ、麦芽エキス１０．０ｇ／ｌ、グルコース４．０ｇ／ｌ、ｐＨ７．０）１００ｍｌを含有する滅菌３００ｍｌエルレンマイヤーフラスコに、予備培養物（実施例２を参照）１０ｍｌを接種し、シェーカー上２８℃及び１８０ｒｐｍでインキュベートした。本発明に従うストレプトスピロールの最大産生が、１２０〜１６８時間後に達した。実施例２に記載したものと同一の栄養液からの９６〜１２０時間齢（hour-old）深部培養物（接種量約５〜１０％）は、１０〜２００Ｌ発酵槽に接種するのに十分であった。
実施例４：発酵槽中のストレプトスピロール誘導体の製造
１０Ｌ及び３０Ｌ発酵槽を、以下の条件下で操作した：
接種： 約１０％ 約１０％
発酵槽： ３０Ｌ １０Ｌ
栄養培地： 実施例２参照 実施例２参照
インキュベーション温度：２８℃ ２８℃
スターラー速度： １１２ｒｐｍ １５０ｒｐｍ
通気： ８Ｌ／分 ４Ｌ／分
ｐＨ調節： ｐＨ７．８〜ｐＨ７．５ ｐＨ８．１〜ｐＨ７．５
ｐＯ2調節： 無し 無し
１０Ｌ及び３０Ｌ発酵槽を、以下の条件下で操作した：
接種： 約１０％ 約１０％
発酵槽： ３０Ｌ １０Ｌ
栄養培地： 実施例２参照 実施例２参照
インキュベーション温度：２８℃ ２８℃
スターラー速度： １１２ｒｐｍ １５０ｒｐｍ
通気： ８Ｌ／分 ４Ｌ／分
ｐＨ調節： ｐＨ７．８〜ｐＨ７．５ ｐＨ８．１〜ｐＨ７．５
ｐＯ2調節： 無し 無し
それぞれ１０％ＫＯＨ又は１０％Ｈ2ＳＯ4を使用して、ｐＨを調節した。例えばＣｌｅｒｏｌ ＦＢＡ２６５（Ｃｏｇｎｉｓ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨ）を繰り返し添加することによって、発泡を抑えた。最大産生が、約７２〜９６時間後に達した。
実施例５：ストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）の振盪培養物からの式（Ｉ）のストレプトスピロール誘導体の単離
ストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）発酵が終了した後、実施例３からの培養ブロス（３０Ｌ培養ブロス）を遠心分離によってバイオマスから分離した。バイオマスを９０％メタノール及び１０％水の混合物で抽出した（４×５Ｌ）。メタノール抽出物を、真空下で５Ｌに減らし、次いで培養ブロス（３０Ｌ）と一緒に調製した分取用カラム（prepared column）上にロードした。ＨＰＬＣ条件は以下の通りであった：
− カラム：三菱化学株式会社−ＭＣＩ（登録商標）ゲル（１３０ｍｍ×２００ｍｍ、７５〜１５０μ ＣＨＰ−２０Ｐ材料約４Ｌを包装）
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ（５０ｇ／ｌ）→ｐＨ＝７．０
溶液Ｂ＝イソプロパノール
− 溶離勾配：３０分かけて４０→１００％Ｂ、１５分かけて１００％Ｂ
− 流量：２４０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２２ｎｍ
− フラクション体積：１Ｌ
ストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）発酵が終了した後、実施例３からの培養ブロス（３０Ｌ培養ブロス）を遠心分離によってバイオマスから分離した。バイオマスを９０％メタノール及び１０％水の混合物で抽出した（４×５Ｌ）。メタノール抽出物を、真空下で５Ｌに減らし、次いで培養ブロス（３０Ｌ）と一緒に調製した分取用カラム（prepared column）上にロードした。ＨＰＬＣ条件は以下の通りであった：
− カラム：三菱化学株式会社−ＭＣＩ（登録商標）ゲル（１３０ｍｍ×２００ｍｍ、７５〜１５０μ ＣＨＰ−２０Ｐ材料約４Ｌを包装）
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ（５０ｇ／ｌ）→ｐＨ＝７．０
溶液Ｂ＝イソプロパノール
− 溶離勾配：３０分かけて４０→１００％Ｂ、１５分かけて１００％Ｂ
− 流量：２４０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２２ｎｍ
− フラクション体積：１Ｌ
ＨＰＬＣによる分析後、ストレプトスピロール誘導体を含有するフラクション（フラクション６〜８）を合わせ、真空下で１．５Ｌの体積に減らし、凍結乾燥した。
分析ＨＰＬＣ条件は以下の通りであった：
− プレカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（４ｍｍ×２ｍｍ，Ｃ１８ ＯＤＳ Ｏｃｔａｄｅｃｙｌ）
− カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ（登録商標）（２ｍｍ×３０ｍｍ，３μ Ｃ１８（２）１００Ａ）
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ（５０ｇ／ｌ）→ｐＨ＝７．０
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：６分かけて５→９５％Ｂ
− 流量：０．８５ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２０ｎｍ
− プレカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（４ｍｍ×２ｍｍ，Ｃ１８ ＯＤＳ Ｏｃｔａｄｅｃｙｌ）
− カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ（登録商標）（２ｍｍ×３０ｍｍ，３μ Ｃ１８（２）１００Ａ）
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ（５０ｇ／ｌ）→ｐＨ＝７．０
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：６分かけて５→９５％Ｂ
− 流量：０．８５ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２０ｎｍ
実施例６：ＲＰ−１８クロマトグラフィーを用いるストレプトスピロール誘導体（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）の精製
実施例５において得られた凍結乾燥物の半分（８００ｍｇ）を、ＤＡＤ−ＵＶ検出と連結されたＨＰＬＣによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：
− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｖａｒｉａｎ−Ｄｙｎａｍａｘ Ｐｕｒｓｕｉｔ（登録商標）（４０ｍｍ×１００ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ（５０ｇ／ｌ）→ｐＨ＝７．０
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：３０分かけて１０→９５％Ｂ、５分かけて９５％Ｂ
− 流量：１７０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２２ｎｍ
− フラクション体積：３４ｍｌ
実施例５において得られた凍結乾燥物の半分（８００ｍｇ）を、ＤＡＤ−ＵＶ検出と連結されたＨＰＬＣによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：
− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｖａｒｉａｎ−Ｄｙｎａｍａｘ Ｐｕｒｓｕｉｔ（登録商標）（４０ｍｍ×１００ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ（５０ｇ／ｌ）→ｐＨ＝７．０
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：３０分かけて１０→９５％Ｂ、５分かけて９５％Ｂ
− 流量：１７０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２２ｎｍ
− フラクション体積：３４ｍｌ
ＨＰＬＣによる分析（実施例５におけるものと同一の条件）によって、フラクション３２〜３３が式（ＩＩ）の化合物を含有し、フラクション２８〜３０が式（ＩＩＩ）の化合物を含有し、フラクション３６が式（ＩＶ）の化合物を含有することが示された。
実施例５で得られた凍結乾燥物の第２の半分（８００ｍｇ）を、ＤＡＤ−ＵＶ検出と連結されたＨＰＬＣによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：
− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｖａｒｉａｎ−Ｄｙｎａｍａｘ Ｐｕｒｓｕｉｔ（登録商標）（４０ｍｍ×１００ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ（５０ｇ／ｌ）→ｐＨ＝７．０
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：３０分かけて２０→９５％Ｂ、５分かけて９５％Ｂ
− 流量：１２０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２２ｎｍ
− フラクション体積：２４ｍｌ
− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｖａｒｉａｎ−Ｄｙｎａｍａｘ Ｐｕｒｓｕｉｔ（登録商標）（４０ｍｍ×１００ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ（５０ｇ／ｌ）→ｐＨ＝７．０
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：３０分かけて２０→９５％Ｂ、５分かけて９５％Ｂ
− 流量：１２０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２２ｎｍ
− フラクション体積：２４ｍｌ
ＨＰＬＣによる分析（実施例５におけるものと同一の条件）によって、フラクション２９が式（ＩＩ）の化合物を含有し、フラクション１９〜２６が式（ＩＩＩ）の化合物を含有し、フラクション３３〜３５が式（ＩＶ）の化合物を含有することが示された。
凍結乾燥後、フラクション３２＋３３（カラム１）をフラクション２９（カラム２）に添加し、化合物（ＩＩ）が５４．３ｍｇ（純度＞９５％）得られ、フラクション２８〜３０（カラム１）をフラクション１９〜２６（カラム２）に添加し、化合物（ＩＩＩ）が４４．９ｍｇ（純度＞９５％）得られ、フラクション３６（カラム１）をフラクション３３〜３５（カラム２）へ添加し、化合物（ＩＶ）が６７．３ｍｇ（純度＞９５％）得られた。
実施例７：ＣａＢｒ2を供給したストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）の振盪培養物からの式（Ｉ）のストレプトスピロール誘導体の混合物の単離
ＣａＢｒ2を含むストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）発酵が終了した後、実施例３からの培養ブロス（３０Ｌ培養ブロス）を、遠心分離機によってバイオマスから分離した。バイオマスを、９０％メタノール及び１０％水の混合物で抽出した（４×５Ｌ）。メタノールエキスを真空下で５Ｌに減らし、次いで実施例５におけるものと同一のカラム上に、さらに同一の条件を用いて、培養ブロス（３０Ｌ）と一緒にロードした。
ＣａＢｒ2を含むストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）発酵が終了した後、実施例３からの培養ブロス（３０Ｌ培養ブロス）を、遠心分離機によってバイオマスから分離した。バイオマスを、９０％メタノール及び１０％水の混合物で抽出した（４×５Ｌ）。メタノールエキスを真空下で５Ｌに減らし、次いで実施例５におけるものと同一のカラム上に、さらに同一の条件を用いて、培養ブロス（３０Ｌ）と一緒にロードした。
ＨＰＬＣによる分析（実施例５におけるものと同一の条件）後、フラクション（９〜１２）及びストレプトスピロール誘導体を含有する実行後（post-run）フラクション（１及び２）を合わせ、真空下で２．０Ｌの体積に減らし、凍結乾燥した。
実施例８：順相及びＲＰ−１８クロマトグラフィーによる式（Ｉ）のストレプトスピロール誘導体の混合物の精製
実施例７で得られた凍結乾燥物２．０ｇを、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：
− カラム：Ｓｅｐａｒｔｉｓ−Ｉｓｏｌｕｔｅ（登録商標）（Ｆｌａｓｈ Ｓｉ ＩＩ，シリカゲル６０，０．０１５−０．０４ｍｍ，吸着剤質量：７０ｇ；リザーバー体積：１５０ｍＬ）
− 溶離剤：ジクロロメタン中１％メタノール
− フラクション体積：３０ｍｌ
実施例７で得られた凍結乾燥物２．０ｇを、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：
− カラム：Ｓｅｐａｒｔｉｓ−Ｉｓｏｌｕｔｅ（登録商標）（Ｆｌａｓｈ Ｓｉ ＩＩ，シリカゲル６０，０．０１５−０．０４ｍｍ，吸着剤質量：７０ｇ；リザーバー体積：１５０ｍＬ）
− 溶離剤：ジクロロメタン中１％メタノール
− フラクション体積：３０ｍｌ
ＴＬＣ（カラムに使用したものと同一の溶離剤）による分析及び真空下での蒸発後、フラクション９〜１７から、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、（ＸＩＩＩ）及び（ＸＩＶ）の化合物の混合物１８６ｍｇが得られた。
前記パラグラフにおいて得られた質量の３分の１（６２ｍｇ）を、ＤＡＤ−ＵＶ検出と連結されたＨＰＬＣによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：
− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ（登録商標）（３０ｍｍ×７５ｍｍ，５μ Ｃ１８（２））
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ（５０ｇ／ｌ）、アンモニアで調整→ｐＨ＝９．０
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：４４分かけて５０→７０％Ｂ、１分かけて７０→９５％Ｂ、及び５分かけて９５％Ｂ
− 流量：６０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２０ｎｍ
− フラクション体積：１５ｍｌ
− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ（登録商標）（３０ｍｍ×７５ｍｍ，５μ Ｃ１８（２））
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ（５０ｇ／ｌ）、アンモニアで調整→ｐＨ＝９．０
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：４４分かけて５０→７０％Ｂ、１分かけて７０→９５％Ｂ、及び５分かけて９５％Ｂ
− 流量：６０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２０ｎｍ
− フラクション体積：１５ｍｌ
ＨＰＬＣによる分析（実施例５におけるものと同一の条件）によって、フラクション１＋２が式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）及び（ＸＩ）の化合物の混合物を含有し、フラクション３＋４が式（ＩＶ）、（ＸＩＩ）、（ＸＩＩＩ）及び（ＸＩＶ）の化合物の混合物を含有することが示された。
実施例８で得られた質量の第２の３分の１（６２ｍｇ）を、ＤＡＤ−ＵＶ検出と連結されたＨＰＬＣによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：
− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ（登録商標）（３０ｍｍ×７５ｍｍ，５μ Ｃ１８（２））
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ（５０ｇ／ｌ）、アンモニアで調整→ｐＨ＝９．０
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：４４分かけて４０→６０％Ｂ、１分かけて６０→９５％Ｂ、及び５分かけて９５％Ｂ
− 流量：６０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２０ｎｍ
− フラクション体積：１５ｍｌ
− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ（登録商標）（３０ｍｍ×７５ｍｍ，５μ Ｃ１８（２））
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ（５０ｇ／ｌ）、アンモニアで調整→ｐＨ＝９．０
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：４４分かけて４０→６０％Ｂ、１分かけて６０→９５％Ｂ、及び５分かけて９５％Ｂ
− 流量：６０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２０ｎｍ
− フラクション体積：１５ｍｌ
ＨＰＬＣによる分析（実施例５におけるものと同一の条件）によって、フラクション１〜３が式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）及び（ＸＩ）の化合物の混合物を含有し、フラクション４＋５が式（ＩＶ）、（ＸＩＩ
）、（ＸＩＩＩ）及び（ＸＩＶ）の化合物の混合物を含有することが示された。
）、（ＸＩＩＩ）及び（ＸＩＶ）の化合物の混合物を含有することが示された。
実施例８で得られた質量の最後の３分の１（６２ｍｇ）を、ＤＡＤ−ＵＶ検出と連結されたＨＰＬＣによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：
− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ（登録商標）（３０ｍｍ×７５ｍｍ，５μ Ｃ１８（２））
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ（５０ｇ／ｌ）、アンモニアで調整→ｐＨ＝９．０
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：４４分かけて１０→５０％Ｂ、１分かけて５０→９５％Ｂ、及び５分かけて９５％Ｂ
− 流量：６０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２０ｎｍ
− フラクション体積：１５ｍｌ
− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ（登録商標）（３０ｍｍ×７５ｍｍ，５μ Ｃ１８（２））
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ（５０ｇ／ｌ）、アンモニアで調整→ｐＨ＝９．０
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：４４分かけて１０→５０％Ｂ、１分かけて５０→９５％Ｂ、及び５分かけて９５％Ｂ
− 流量：６０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２０ｎｍ
− フラクション体積：１５ｍｌ
ＨＰＬＣによる分析（実施例５におけるものと同一の条件）によって、フラクション１〜６が式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）及び（ＸＩ）の化合物の混合物を含有し、フラクション７〜９が式（ＩＶ）、（ＸＩＩ）、（ＸＩＩＩ）及び（ＸＩＶ）の化合物の混合物を含有することが示された。
凍結乾燥後、フラクション１＋２（カラム１）、フラクション１〜３（カラム２）及びフラクション１〜６（カラム３）から、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）及び（ＸＩ）の化合物の混合物３．１ｍｇが得られ；フラクション３＋４（カラム１）、フラクション４＋５（カラム２）及びフラクション７〜９（カラム３）から、式（ＩＶ）、（ＸＩＩ）、（ＸＩＩＩ）及び（ＸＩＶ）の化合物の混合物４．４ｍｇが得られた。
実施例９：式（ＸＶＩ）のストレプトスピロール誘導体の製造
アルゴン下、ヨウ化メチル（７．８μＬ；０．１３ｍｍｏｌ；５．０当量）を、無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中の式（ＩＶ）の化合物（９．９５ｍｇ；０．０２５ｍｍｏｌ；１．０当量）及びＫ2ＣＯ3（１７．５ｍｇ；０．１３ｍｍｏｌ；５．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を４０℃で３時間加熱した。
アルゴン下、ヨウ化メチル（７．８μＬ；０．１３ｍｍｏｌ；５．０当量）を、無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中の式（ＩＶ）の化合物（９．９５ｍｇ；０．０２５ｍｍｏｌ；１．０当量）及びＫ2ＣＯ3（１７．５ｍｇ；０．１３ｍｍｏｌ；５．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を４０℃で３時間加熱した。
実施例１０：式（ＸＶＩ）のストレプトスピロール誘導体の精製
実施例９において得られた反応混合物の濾過後、溶媒を凍結乾燥によって除去し、所望の生成物を定量的に単離した（９．８ｍｇ）。
実施例９において得られた反応混合物の濾過後、溶媒を凍結乾燥によって除去し、所望の生成物を定量的に単離した（９．８ｍｇ）。
実施例１１：式（ＸＶＩＩ）のストレプトスピロール誘導体の製造
アルゴン下、イソブチルアミン（３０．０μＬ；０．３ｍｍｏｌ；１０．０当量）を、無水ＣＨ2Ｃｌ2（１ｍＬ）中の式（ＩＩ）の化合物（１１．５２ｍｇ；０．０３ｍｍｏｌ；１．０当量）及びトリエチルアミン（２７．０μＬ；０．３ｍｍｏｌ；１０．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を５０℃で１２時間加熱した。
アルゴン下、イソブチルアミン（３０．０μＬ；０．３ｍｍｏｌ；１０．０当量）を、無水ＣＨ2Ｃｌ2（１ｍＬ）中の式（ＩＩ）の化合物（１１．５２ｍｇ；０．０３ｍｍｏｌ；１．０当量）及びトリエチルアミン（２７．０μＬ；０．３ｍｍｏｌ；１０．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を５０℃で１２時間加熱した。
実施例１２：式（ＸＶＩＩ）のストレプトスピロール誘導体の精製
実施例１１から溶媒を真空下で除去した後に得られた粗抽出物（４４ｍｇ）を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：
− カラム：Ｓｅｐａｒｔｉｓ−Ｉｓｏｌｕｔｅ（登録商標）（Ｆｌａｓｈ Ｓｉ ＩＩ，シリカゲル６０，０．０１５−０．０４ｍｍ，吸着剤質量：５ｇ；リザーバー体積：２５ｍＬ）
− 溶離剤：ヘプタン中４０％酢酸エチル
− フラクション体積：５ｍｌ
実施例１１から溶媒を真空下で除去した後に得られた粗抽出物（４４ｍｇ）を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：
− カラム：Ｓｅｐａｒｔｉｓ−Ｉｓｏｌｕｔｅ（登録商標）（Ｆｌａｓｈ Ｓｉ ＩＩ，シリカゲル６０，０．０１５−０．０４ｍｍ，吸着剤質量：５ｇ；リザーバー体積：２５ｍＬ）
− 溶離剤：ヘプタン中４０％酢酸エチル
− フラクション体積：５ｍｌ
ＴＬＣ（カラムで使用したものと同一の溶離剤）による分析及び真空下での蒸発後、フラクション９〜１４から、所望の化合物（ＸＶＩＩ）７．７ｍｇ（６１％）が得られた。
実施例１３：式（ＸＶＩＩＩ）のストレプトスピロール誘導体の製造
アルゴン下、４−ピコリル−アミン（２８．０μＬ；０．３ｍｍｏｌ；１０．０当量）を、無水ＣＨ2Ｃｌ2（１ｍＬ）中の式（ＩＩ）の化合物（１１．５２ｍｇ；０．０３ｍｍｏｌ；１．０当量）及びトリエチルアミン（２７．０μＬ；０．３ｍｍｏｌ；１０．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を５０℃で１２時間加熱した。
アルゴン下、４−ピコリル−アミン（２８．０μＬ；０．３ｍｍｏｌ；１０．０当量）を、無水ＣＨ2Ｃｌ2（１ｍＬ）中の式（ＩＩ）の化合物（１１．５２ｍｇ；０．０３ｍｍｏｌ；１．０当量）及びトリエチルアミン（２７．０μＬ；０．３ｍｍｏｌ；１０．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を５０℃で１２時間加熱した。
実施例１４：式（ＸＶＩＩＩ）のストレプトスピロール誘導体の精製
実施例１３から溶媒を真空下で除去した後に得られた粗抽出物（５６ｍｇ）を、ＤＡＤ−ＵＶ検出と連結されたＨＰＬＣによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ（登録商標）（３０ｍｍ×７５ｍｍ，５μ
Ｃ１８（２））
− 移動相：
溶液Ａ＝水及び１０％トリフルオロ酢酸→ｐＨ＝１．０
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：４５分かけて５→９５％Ｂ、５分かけて９５％Ｂ
− 流量：６０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２１２ｎｍ
− フラクション体積：１５ｍｌ
実施例１３から溶媒を真空下で除去した後に得られた粗抽出物（５６ｍｇ）を、ＤＡＤ−ＵＶ検出と連結されたＨＰＬＣによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ（登録商標）（３０ｍｍ×７５ｍｍ，５μ
Ｃ１８（２））
− 移動相：
溶液Ａ＝水及び１０％トリフルオロ酢酸→ｐＨ＝１．０
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：４５分かけて５→９５％Ｂ、５分かけて９５％Ｂ
− 流量：６０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２１２ｎｍ
− フラクション体積：１５ｍｌ
ＨＰＬＣによる分析（実施例５におけるものと同一の条件）及び凍結乾燥後、フラクション１８〜２２から、所望の化合物９．９ｍｇ（７３％）が得られた。
実施例１５：式（ＸＩＸ）のストレプトスピロール誘導体の製造
アルゴン下、２−（ジエチルアミノ）エタンチオール塩酸塩（８５．０ｍｇ；０．５ｍｍｏｌ；１０．０当量）を、無水ＣＨ2Ｃｌ2（２ｍＬ）中の式（ＩＩ）の化合物（１９．２ｍｇ；０．０５ｍｍｏｌ；１．０当量）及び水素化ナトリウム（１２．０ｍｇ；０．５ｍｍｏｌ；１０．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を５０℃で３時間加熱した。
アルゴン下、２−（ジエチルアミノ）エタンチオール塩酸塩（８５．０ｍｇ；０．５ｍｍｏｌ；１０．０当量）を、無水ＣＨ2Ｃｌ2（２ｍＬ）中の式（ＩＩ）の化合物（１９．２ｍｇ；０．０５ｍｍｏｌ；１．０当量）及び水素化ナトリウム（１２．０ｍｇ；０．５ｍｍｏｌ；１０．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を５０℃で３時間加熱した。
実施例１６：式（ＸＩＸ）のストレプトスピロール誘導体の精製
実施例１５から溶媒を真空下で除去した後に得られた粗抽出物（７４ｍｇ）を、ＤＡＤ−ＵＶ検出と連結されたＨＰＬＣによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ（登録商標）（３０ｍｍ×７５ｍｍ，５μ Ｃ１８（２））
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ（５０ｇ／ｌ）→ｐＨ＝７．０
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：４５分かけて５→９５％Ｂ、５分かけて９５％Ｂ
− 流量：６０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２０ｎｍ
− フラクション体積：１５ｍｌ
実施例１５から溶媒を真空下で除去した後に得られた粗抽出物（７４ｍｇ）を、ＤＡＤ−ＵＶ検出と連結されたＨＰＬＣによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ（登録商標）（３０ｍｍ×７５ｍｍ，５μ Ｃ１８（２））
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ（５０ｇ／ｌ）→ｐＨ＝７．０
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：４５分かけて５→９５％Ｂ、５分かけて９５％Ｂ
− 流量：６０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２０ｎｍ
− フラクション体積：１５ｍｌ
ＨＰＬＣによる分析（実施例５におけるものと同一の条件）及び凍結乾燥後、フラクション７〜１２から、所望の化合物（ＸＩＸ）１０．４ｍｇ（４３％）が得られた。
実施例１７：式（ＸＸ）のストレプトスピロール誘導体の製造
アルゴン下、２−（ヒドロキシ）エチルブロミド（９．４０μＬ；０．１３ｍｍｏｌ；５．０当量）を、無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中の式（ＩＩＩ）の化合物（９．９８ｍｇ；０．０２６ｍｍｏｌ；１．０当量）及びＫ2ＣＯ3（１８．２ｍｇ；０．１３ｍｍｏｌ；５．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を７０℃で３時間加熱した。
アルゴン下、２−（ヒドロキシ）エチルブロミド（９．４０μＬ；０．１３ｍｍｏｌ；５．０当量）を、無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中の式（ＩＩＩ）の化合物（９．９８ｍｇ；０．０２６ｍｍｏｌ；１．０当量）及びＫ2ＣＯ3（１８．２ｍｇ；０．１３ｍｍｏｌ；５．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を７０℃で３時間加熱した。
実施例１８：式（ＸＸ）のストレプトスピロール誘導体の精製
実施例１７から溶媒を濾過及び真空下で除去した後に得られた粗抽出物（５２ｍｇ）を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：− カラム：Ｓｅｐａｒｔｉｓ−Ｉｓｏｌｕｔｅ（登録商標）（Ｆｌａｓｈ Ｓｉ ＩＩ，シリカゲル６０，０．０１５−０．０４ｍｍ，吸着剤質量：５ｇ；リザーバー体積：２５ｍＬ）
− 溶離剤：ジクロロメタン中２％メタノール
− フラクション体積：５ｍｌ
実施例１７から溶媒を濾過及び真空下で除去した後に得られた粗抽出物（５２ｍｇ）を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：− カラム：Ｓｅｐａｒｔｉｓ−Ｉｓｏｌｕｔｅ（登録商標）（Ｆｌａｓｈ Ｓｉ ＩＩ，シリカゲル６０，０．０１５−０．０４ｍｍ，吸着剤質量：５ｇ；リザーバー体積：２５ｍＬ）
− 溶離剤：ジクロロメタン中２％メタノール
− フラクション体積：５ｍｌ
ＴＬＣ（カラムについて使用したものと同一の溶離剤）による分析及び真空下での蒸発後、フラクション２〜３から、所望の化合物６．７ｍｇ（６０％）が得られた。
実施例１９：式（ＸＸＩ）のストレプトスピロール誘導体の製造
ボラン−ｔ−ブチルアミン錯体（４３．５ｍｇ；０．５ｍｍｏｌ；５．０当量）を、ＴＨＦ／ＡｃＯＨ ９／１の混合物中の式（ＩＶ）の化合物（３９．８０ｍｇ；０．１ｍｍｏｌ；１．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を５５℃で３時間加熱した。
ボラン−ｔ−ブチルアミン錯体（４３．５ｍｇ；０．５ｍｍｏｌ；５．０当量）を、ＴＨＦ／ＡｃＯＨ ９／１の混合物中の式（ＩＶ）の化合物（３９．８０ｍｇ；０．１ｍｍｏｌ；１．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を５５℃で３時間加熱した。
実施例２０：式（ＸＸＩ）のストレプトスピロール誘導体の精製
実施例１９から溶媒を真空下で除去した後に得られた粗抽出物（８９ｍｇ）を、ＤＡＤ−ＵＶ検出と連結されたＨＰＬＣによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ（登録商標）（３０ｍｍ×７５ｍｍ，５μ Ｃ１８（２））
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ（５０ｇ／ｌ）→ｐＨ＝７．０
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：４５分かけて５→９５％Ｂ、５分かけて９５％Ｂ
− 流量：６０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２０ｎｍ
− フラクション体積：１５ｍｌ
実施例１９から溶媒を真空下で除去した後に得られた粗抽出物（８９ｍｇ）を、ＤＡＤ−ＵＶ検出と連結されたＨＰＬＣによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ（登録商標）（３０ｍｍ×７５ｍｍ，５μ Ｃ１８（２））
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ（５０ｇ／ｌ）→ｐＨ＝７．０
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：４５分かけて５→９５％Ｂ、５分かけて９５％Ｂ
− 流量：６０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２０ｎｍ
− フラクション体積：１５ｍｌ
ＨＰＬＣによる分析（実施例５におけるものと同一の条件）及び凍結乾燥後、フラクション１〜３において、一方の立体異性体４．６ｍｇ（１２％）が得られ、フラクション４〜７から、化合物（ＸＸＩ）の別の立体異性体１０．０ｍｇ（２５％）が得られた［（１Ｓ，８Ｒ，１６Ｓ）−（ＸＸＩ）及び（１Ｒ，８Ｒ，１６Ｓ）−（ＸＸＩ）］。
実施例２１：式（ＸＸＩＩａ及びＸＸＩＩｂ）のストレプトスピロール誘導体の製造
ボラン−ｔ−ブチルアミン錯体（３３．７ｍｇ；０．３９ｍｍｏｌ；３．０当量）を、ＴＨＦ／ＡｃＯＨ ９／１の混合物（３．０ｍＬ）中の式（ＩＩ）の化合物（４９．６ｍｇ；０．１３ｍｍｏｌ；１．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を６０℃で３時間加熱した。
ボラン−ｔ−ブチルアミン錯体（３３．７ｍｇ；０．３９ｍｍｏｌ；３．０当量）を、ＴＨＦ／ＡｃＯＨ ９／１の混合物（３．０ｍＬ）中の式（ＩＩ）の化合物（４９．６ｍｇ；０．１３ｍｍｏｌ；１．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を６０℃で３時間加熱した。
真空下で溶媒を除去した後に得られた粗抽出物（５９ｍｇ）を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：
− カラム：Ｓｅｐａｒｔｉｓ−Ｉｓｏｌｕｔｅ（登録商標）（Ｆｌａｓｈ Ｓｉ ＩＩ，シリカゲル６０，０．０１５−０．０４ｍｍ，吸着剤質量：５ｇ；リザーバー体積：２５ｍＬ）
− 溶離剤：ジクロロメタン中３％メタノール
− フラクション体積：５ｍｌ
− カラム：Ｓｅｐａｒｔｉｓ−Ｉｓｏｌｕｔｅ（登録商標）（Ｆｌａｓｈ Ｓｉ ＩＩ，シリカゲル６０，０．０１５−０．０４ｍｍ，吸着剤質量：５ｇ；リザーバー体積：２５ｍＬ）
− 溶離剤：ジクロロメタン中３％メタノール
− フラクション体積：５ｍｌ
ＴＬＣ（カラムについて使用したものと同一の溶離剤）による分析及び真空下での蒸発後、フラクション２〜５から、２，３−ジヒドロ−ベンゾフラン−３−オールジアステレオマーの混合物３２．３ｍｇ（６５％）が得られた。
塩化チオニル（３３．０μＬ；０．８１ｍｍｏｌ；１０．０当量）を、無水ＣＨ2Ｃｌ2（１．５ｍＬ）中の２，３−ジヒドロ−ベンゾフラン−３−オール中間体の混合物（３２．３ｍｇ；０．０８ｍｍｏｌ；１．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を６０℃で３時間加熱した。
真空下でジクロロメタンを除去した後に得られた粗抽出物を、アセトニトリル（３．０ｍＬ）に溶解し、イソブチルアミン（１１．７μＬ；０．４０ｍｍｏｌ；５．０当量）を徐々に添加した。反応混合物を室温で１時間放置した。
実施例２２：式（ＸＸＩＩａ及びＸＸＩＩｂ）のストレプトスピロール誘導体の精製
実施例ｂから溶媒を真空下で除去した後に得られた粗抽出物（６１ｍｇ）を、ＤＡＤ−ＵＶ検出と連結されたＨＰＬＣによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：
− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ（登録商標）（３０ｍｍ×７５ｍｍ，５μ
Ｃ１８（２））
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ、酢酸で調整→ｐＨ＝４．６
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：４５分かけて４０→９５％Ｂ、５分かけて９５％Ｂ
− 流量：６０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２０ｎｍ
− フラクション体積：１５ｍｌ
実施例ｂから溶媒を真空下で除去した後に得られた粗抽出物（６１ｍｇ）を、ＤＡＤ−ＵＶ検出と連結されたＨＰＬＣによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：
− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ（登録商標）（３０ｍｍ×７５ｍｍ，５μ
Ｃ１８（２））
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ、酢酸で調整→ｐＨ＝４．６
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：４５分かけて４０→９５％Ｂ、５分かけて９５％Ｂ
− 流量：６０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２０ｎｍ
− フラクション体積：１５ｍｌ
ＨＰＬＣによる分析（実施例５におけるものと同一の条件）及び凍結乾燥後、フラクション７〜１０から化合物（ＸＸＩＩａ）７．７ｍｇ（１３％全収率）が得られ、フラクション１２〜１４から化合物（ＸＸＩＩｂ）２．３ｍｇ（４％全収率）が得られた。
実施例２３：式（ＸＸＩＩＩ及びＸＸＩＶ）のストレプトスピロール誘導体の製造
ボラン−ｔ−ブチルアミン錯体（６８．０ｍｇ；０．７８ｍｍｏｌ；３．０当量）を、ＴＨＦ／ＡｃＯＨ ９／１の混合物（５．０ｍＬ）中の式（ＩＩＩ）の化合物（９９．６ｍｇ；０．２６ｍｍｏｌ；１．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を６０℃で４時間加熱した。
ボラン−ｔ−ブチルアミン錯体（６８．０ｍｇ；０．７８ｍｍｏｌ；３．０当量）を、ＴＨＦ／ＡｃＯＨ ９／１の混合物（５．０ｍＬ）中の式（ＩＩＩ）の化合物（９９．６ｍｇ；０．２６ｍｍｏｌ；１．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を６０℃で４時間加熱した。
溶媒を真空下で除去した後、得られた粗抽出物（１３５ｍｇ）を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：
− カラム：Ｓｅｐａｒｔｉｓ−Ｉｓｏｌｕｔｅ（登録商標）（Ｆｌａｓｈ Ｓｉ ＩＩ，シリカゲル６０，０．０１５−０．０４ｍｍ，吸着剤質量：１０ｇ；リザーバー体積：７０ｍＬ）
− 溶離剤：ジクロロメタン中３％メタノール
− フラクション体積：５ｍｌ
− カラム：Ｓｅｐａｒｔｉｓ−Ｉｓｏｌｕｔｅ（登録商標）（Ｆｌａｓｈ Ｓｉ ＩＩ，シリカゲル６０，０．０１５−０．０４ｍｍ，吸着剤質量：１０ｇ；リザーバー体積：７０ｍＬ）
− 溶離剤：ジクロロメタン中３％メタノール
− フラクション体積：５ｍｌ
ＴＬＣ（カラムについて使用したものと同一の溶離剤）による分析及び真空下での蒸発後、フラクション３〜９から、２，３−ジヒドロ−ベンゾフラン−３−オールジアステレオマーの混合物６６．９ｍｇ（６７％）が得られた。
塩化チオニル（６６．０μＬ；１．６２ｍｍｏｌ；１０．０当量）を、無水ＣＨ2Ｃｌ2（３．０ｍＬ）中の２，３−ジヒドロ−ベンゾフラン−３−オール中間体の混合物（６６．９ｍｇ；０．１７ｍｍｏｌ；１．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を６０℃で３時間加熱した。
ジクロロメタンを真空下で除去した後に得られた粗抽出物の半分を、アセトニトリル（２．０ｍＬ）に溶解し、Ｎ−メチル−ピペラジン（５３．０μＬ；０．４３ｍｍｏｌ；５．０当量）を徐々に添加した。反応混合物を室温で１時間放置した。
ジクロロメタンを真空下で除去した後に得られた粗抽出物の他方の半分を、アセトニトリル（２．０ｍＬ）に溶解し、４−フルオロ−ベンジルアミン（６６．０μＬ；０．４３ｍｍｏｌ；５．０当量）を徐々に添加した。反応混合物を室温で１時間放置した。
実施例２４：式（ＸＸＩＩＩ）のストレプトスピロール誘導体の精製
実施例ｄから溶媒を真空下で除去した後に得られた粗抽出物（７０ｍｇ）を、ＤＡＤ−ＵＶ検出と連結されたＨＰＬＣによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：
− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ（登録商標）（３０ｍｍ×７５ｍｍ，５μ
Ｃ１８（２））
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ、酢酸で調整→ｐＨ＝４．６
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：４５分かけて４０→９５％Ｂ、５分かけて９５％Ｂ
− 流量：６０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２０ｎｍ
− フラクション体積：１５ｍｌ
実施例ｄから溶媒を真空下で除去した後に得られた粗抽出物（７０ｍｇ）を、ＤＡＤ−ＵＶ検出と連結されたＨＰＬＣによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：
− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ（登録商標）（３０ｍｍ×７５ｍｍ，５μ
Ｃ１８（２））
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ、酢酸で調整→ｐＨ＝４．６
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：４５分かけて４０→９５％Ｂ、５分かけて９５％Ｂ
− 流量：６０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２０ｎｍ
− フラクション体積：１５ｍｌ
ＨＰＬＣによる分析（実施例５におけるものと同一の条件）及び凍結乾燥後、フラクション２０〜２４から、化合物（ＸＸＩＩＩ）１１．９ｍｇ（１９％全収率）が得られた。
実施例２５：式（ＸＸＩＶ）のストレプトスピロール誘導体の精製
実施例ｄから溶媒を真空下で除去した後に得られた粗抽出物（６１ｍｇ）を、ＤＡＤ−ＵＶ検出と連結されたＨＰＬＣによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：
− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ（登録商標）（３０ｍｍ×７５ｍｍ，５μ Ｃ１８（２））
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ、酢酸で調整→ｐＨ＝４．６
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：４５分かけて３０→９５％Ｂ、５分かけて９５％Ｂ
− 流量：６０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２０ｎｍ
− フラクション体積：１５ｍｌ
実施例ｄから溶媒を真空下で除去した後に得られた粗抽出物（６１ｍｇ）を、ＤＡＤ−ＵＶ検出と連結されたＨＰＬＣによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：
− プレカラム：Ｗａｔｅｒｓ−ＸＴｅｒｒａ（登録商標）（１９ｍｍ×１０ｍｍ，１０μ Ｃ１８）
− カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ（登録商標）（３０ｍｍ×７５ｍｍ，５μ Ｃ１８（２））
− 移動相：
溶液Ａ＝水及びＮＨ4ＯＡｃ、酢酸で調整→ｐＨ＝４．６
溶液Ｂ＝アセトニトリル
− 溶離勾配：４５分かけて３０→９５％Ｂ、５分かけて９５％Ｂ
− 流量：６０ｍｌ／分
− ＵＶ検出λ：２２０ｎｍ
− フラクション体積：１５ｍｌ
ＨＰＬＣによる分析（実施例５におけるものと同一の条件）及び凍結乾燥後、フラクション１０〜１２から、化合物（ＸＸＩＶ）９．６ｍｇ（１６％全収率）が得られた。
実施例２６：式（ＸＸＶ）のストレプトスピロール誘導体の製造
アルゴン下、ナトリウムメタノラート（５４．０ｍｇ；１．０ｍｍｏｌ；１０．０当量）を、無水メタノール（２．０ｍＬ）中の式（ＩＶ）の化合物（３９．８ｍｇ；０．１ｍｍｏｌ；１．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を８０℃で１２時間加熱した。
アルゴン下、ナトリウムメタノラート（５４．０ｍｇ；１．０ｍｍｏｌ；１０．０当量）を、無水メタノール（２．０ｍＬ）中の式（ＩＶ）の化合物（３９．８ｍｇ；０．１ｍｍｏｌ；１．０当量）の溶液に添加した。反応混合物を８０℃で１２時間加熱した。
実施例２７：式（ＸＸＶ）のストレプトスピロール誘導体の精製
実施例ｇから溶媒を真空下で除去した後に得られた粗抽出物（１０１ｍｇ）を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：
− カラム：Ｓｅｐａｒｔｉｓ−Ｉｓｏｌｕｔｅ（登録商標）（Ｆｌａｓｈ Ｓｉ ＩＩ，シリカゲル６０，０．０１５−０．０４ｍｍ，吸着剤質量：１０ｇ；リザーバー体積：７０ｍＬ）
− 溶離剤：ジクロロメタン中２％メタノール
− フラクション体積：５ｍｌ
実施例ｇから溶媒を真空下で除去した後に得られた粗抽出物（１０１ｍｇ）を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。カラム条件は以下の通りであった：
− カラム：Ｓｅｐａｒｔｉｓ−Ｉｓｏｌｕｔｅ（登録商標）（Ｆｌａｓｈ Ｓｉ ＩＩ，シリカゲル６０，０．０１５−０．０４ｍｍ，吸着剤質量：１０ｇ；リザーバー体積：７０ｍＬ）
− 溶離剤：ジクロロメタン中２％メタノール
− フラクション体積：５ｍｌ
ＴＬＣ（カラムについて使用したものと同一の溶離剤）による分析及び真空下での蒸発後、フラクション８〜１５から、化合物（ＸＸＶ）１０．２ｍｇ（２６％）が得られた。
実施例２８：式（Ｒ）−（ＩＩ）の化合物、ストレプトスピロールＡのキャラクタリゼーション
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝３８２．０６３３
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝３８３．０７０５８
Ｃ18Ｈ19Ｃｌ2ＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：３８３．０６９１１
分子式：Ｃ18Ｈ19Ｃｌ2ＮＯ4
化学分子量＝３８４．２６
［α］D 20＝＋５２．７（ｃ＝０．７５ｇ／１００ｍＬ，ＣＨ3ＯＨ）
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝３８２．０６３３
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝３８３．０７０５８
Ｃ18Ｈ19Ｃｌ2ＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：３８３．０６９１１
分子式：Ｃ18Ｈ19Ｃｌ2ＮＯ4
化学分子量＝３８４．２６
［α］D 20＝＋５２．７（ｃ＝０．７５ｇ／１００ｍＬ，ＣＨ3ＯＨ）
ストレプトスピロールＡ（ＩＩ）のＮＭＲデータを表１に掲記する。６００ＭＨｚ（1Ｈ）及び１５０ＭＨｚ（13Ｃ）で操作するＢｒｕｋｅｒ製のＡＶＡＮＣＥ６００計器で、データを取得した。全てのスペクトルをＤＭＤＳ−ｄ６中３０３Ｋで記録した。構造解明は、ＤＱＦ−ＣＯＳＹ、ＨＳＱＣ、及びＨＭＢＣを含む種々の２Ｄ−ＮＭＲ実験の分析に基づいた。
実施例２９：式（Ｒ）−（ＩＩＩ）の化合物、ストレプトスピロールＢのキャラクタリゼーション
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝３８２．０６２３
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝３８３．０６９５８
Ｃ18Ｈ19Ｃｌ2ＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：３８３．０６９１１
分子式：Ｃ18Ｈ19Ｃｌ2ＮＯ4
化学分子量＝３８４．２６
［α］D 20＝＋６９．２（ｃ＝０．７０ｇ／１００ｍＬ，ＣＨ3ＯＨ）
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝３８２．０６２３
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝３８３．０６９５８
Ｃ18Ｈ19Ｃｌ2ＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：３８３．０６９１１
分子式：Ｃ18Ｈ19Ｃｌ2ＮＯ4
化学分子量＝３８４．２６
［α］D 20＝＋６９．２（ｃ＝０．７０ｇ／１００ｍＬ，ＣＨ3ＯＨ）
ストレプトスピロールＢ（ＩＩＩ）のＮＭＲデータを表２に掲記する。実験条件は、実施例２８に示したものと同一であった。
実施例３０：式（８Ｒ，１６Ｓ）−（ＩＶ）の化合物、ストレプトスピロールＣのキャラクタリゼーション
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝３９６．０７６７
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝３９７．０８３９８
Ｃ19Ｈ21Ｃｌ2ＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：３９７．０８４７６
分子式：Ｃ19Ｈ21Ｃｌ2ＮＯ4
化学分子量＝３９８．２９
［α］D 20＝＋６６．３（ｃ＝０．８６ｇ／１００ｍＬ，ＣＨ3ＯＨ）
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝３９６．０７６７
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝３９７．０８３９８
Ｃ19Ｈ21Ｃｌ2ＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：３９７．０８４７６
分子式：Ｃ19Ｈ21Ｃｌ2ＮＯ4
化学分子量＝３９８．２９
［α］D 20＝＋６６．３（ｃ＝０．８６ｇ／１００ｍＬ，ＣＨ3ＯＨ）
ストレプトスピロールＣ（ＩＶ）のＮＭＲデータを表３に掲記する。実験条件は、実施例２８に示したものと同一であった。
実施例３１：式（８Ｒ，１６Ｓ）−（ＸＶＩ）の化合物のキャラクタリゼーション
ＥＳＩ−ＭＳ（ｐｏｓ，低分解能）：［Ｍ＋Ｈ］+＝４１２．２
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４１１．２
Ｃ20Ｈ23Ｃｌ2ＮＯ4についての中性モノアイソトピック低分解能質量 計算値：４１１．１
分子式：Ｃ20Ｈ23Ｃｌ2ＮＯ4
化学分子量＝４１２．３１
ＥＳＩ−ＭＳ（ｐｏｓ，低分解能）：［Ｍ＋Ｈ］+＝４１２．２
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４１１．２
Ｃ20Ｈ23Ｃｌ2ＮＯ4についての中性モノアイソトピック低分解能質量 計算値：４１１．１
分子式：Ｃ20Ｈ23Ｃｌ2ＮＯ4
化学分子量＝４１２．３１
実施例３２：式（Ｒ）−（ＸＶＩＩ）の化合物のキャラクタリゼーション
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４１９．１６６６
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４２０．１７３８８
Ｃ22Ｈ29ＣｌＮ2Ｏ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４２０．１８１５９
分子式：Ｃ22Ｈ29ＣｌＮ2Ｏ4
化学分子量＝４２０．９４
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４１９．１６６６
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４２０．１７３８８
Ｃ22Ｈ29ＣｌＮ2Ｏ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４２０．１８１５９
分子式：Ｃ22Ｈ29ＣｌＮ2Ｏ4
化学分子量＝４２０．９４
実施例３３：式（Ｒ）−（ＸＶＩＩＩ）の化合物のキャラクタリゼーション
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４５４．１５８２
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４５５．１６５４８
Ｃ24Ｈ26ＣｌＮ3Ｏ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４５５．１６１１８
分子式：Ｃ24Ｈ26ＣｌＮ3Ｏ4
化学分子量＝４５５．９４
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４５４．１５８２
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４５５．１６５４８
Ｃ24Ｈ26ＣｌＮ3Ｏ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４５５．１６１１８
分子式：Ｃ24Ｈ26ＣｌＮ3Ｏ4
化学分子量＝４５５．９４
実施例３４：式（Ｒ）−（ＸＩＸ）の化合物のキャラクタリゼーション
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４７９．１６８５
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４８０．１７５７８
Ｃ24Ｈ33ＣｌＮ2Ｏ4Ｓについての中性モノアイソトピック質量 計算値：４８０．１８４９６
分子式：Ｃ24Ｈ33ＣｌＮ2Ｏ4Ｓ
化学分子量＝４８１．０６
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４７９．１６８５
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４８０．１７５７８
Ｃ24Ｈ33ＣｌＮ2Ｏ4Ｓについての中性モノアイソトピック質量 計算値：４８０．１８４９６
分子式：Ｃ24Ｈ33ＣｌＮ2Ｏ4Ｓ
化学分子量＝４８１．０６
実施例３５：式（Ｒ）−（ＸＸ）の化合物のキャラクタリゼーション
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ＋アセテート］-＝４８６．１１３８
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４２７．０９９９５
Ｃ20Ｈ23Ｃｌ2ＮＯ5についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４２７．０９５３３
分子式：Ｃ20Ｈ23Ｃｌ2ＮＯ5
化学分子量＝４２８．３１
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ＋アセテート］-＝４８６．１１３８
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４２７．０９９９５
Ｃ20Ｈ23Ｃｌ2ＮＯ5についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４２７．０９５３３
分子式：Ｃ20Ｈ23Ｃｌ2ＮＯ5
化学分子量＝４２８．３１
実施例３６：式（１Ｓ，８Ｒ，１６Ｓ）−（ＸＸＩ）の化合物のキャラクタリゼーション
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝３９８．０９５０
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝３９９．１０２２８
Ｃ19Ｈ23Ｃｌ2ＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：３９９．１００４１
分子式：Ｃ19Ｈ23Ｃｌ2ＮＯ4
化学分子量＝４００．３
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝３９８．０９５０
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝３９９．１０２２８
Ｃ19Ｈ23Ｃｌ2ＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：３９９．１００４１
分子式：Ｃ19Ｈ23Ｃｌ2ＮＯ4
化学分子量＝４００．３
実施例３７：式（１Ｒ，８Ｒ，１６Ｓ）−（ＸＸＩ）の化合物のキャラクタリゼーション
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝３９８．０９５０
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝３９９．１０２２８
Ｃ19Ｈ23Ｃｌ2ＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：３９９．１００４１
分子式：Ｃ19Ｈ23Ｃｌ2ＮＯ4
化学分子量＝４００．３
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝３９８．０９５０
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝３９９．１０２２８
Ｃ19Ｈ23Ｃｌ2ＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：３９９．１００４１
分子式：Ｃ19Ｈ23Ｃｌ2ＮＯ4
化学分子量＝４００．３
実施例３８：式（１Ｓ，８Ｒ）−（ＸＸＩＩａ）の化合物のキャラクタリゼーション
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４３９．１５９９
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４４０．１６７１８
Ｃ22Ｈ30Ｃｌ2Ｎ2Ｏ3についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４４０．１６３３５
分子式：Ｃ22Ｈ30Ｃｌ2Ｎ2Ｏ3
化学分子量＝４４１．４
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４３９．１５９９
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４４０．１６７１８
Ｃ22Ｈ30Ｃｌ2Ｎ2Ｏ3についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４４０．１６３３５
分子式：Ｃ22Ｈ30Ｃｌ2Ｎ2Ｏ3
化学分子量＝４４１．４
実施例３９：式（１Ｒ，８Ｒ）−（ＸＸＩＩｂ）の化合物のキャラクタリゼーション
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４３９．１５９９
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４４０．１６７１８
Ｃ22Ｈ30Ｃｌ2Ｎ2Ｏ3についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４４０．１６３３５
分子式：Ｃ22Ｈ30Ｃｌ2Ｎ2Ｏ3
化学分子量＝４４１．４
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４３９．１５９９
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４４０．１６７１８
Ｃ22Ｈ30Ｃｌ2Ｎ2Ｏ3についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４４０．１６３３５
分子式：Ｃ22Ｈ30Ｃｌ2Ｎ2Ｏ3
化学分子量＝４４１．４
実施例４０：式（１Ｓ，８Ｒ）−（ＸＸＩＩＩ）の化合物のキャラクタリゼーション
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４９１．１２９４
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４９２．１３６６８
Ｃ25Ｈ27Ｃｌ2ＦＮ2Ｏ3についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４９２．１３８２８
分子式：Ｃ25Ｈ27Ｃｌ2ＦＮ2Ｏ3
化学分子量＝４９３．４１
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４９１．１２９４
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４９２．１３６６８
Ｃ25Ｈ27Ｃｌ2ＦＮ2Ｏ3についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４９２．１３８２８
分子式：Ｃ25Ｈ27Ｃｌ2ＦＮ2Ｏ3
化学分子量＝４９３．４１
実施例４１：式（１Ｓ，８Ｒ）−（ＸＸＩＶ）の化合物のキャラクタリゼーション
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４６６．１６５３
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４６７．１７２５８
Ｃ23Ｈ31Ｃｌ2Ｎ3Ｏ3についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４６７．１７４２５
分子式：Ｃ23Ｈ31Ｃｌ2Ｎ3Ｏ3
化学分子量＝４６８．４３
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４６６．１６５３
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４６７．１７２５８
Ｃ23Ｈ31Ｃｌ2Ｎ3Ｏ3についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４６７．１７４２５
分子式：Ｃ23Ｈ31Ｃｌ2Ｎ3Ｏ3
化学分子量＝４６８．４３
実施例４２：式（８Ｒ，１６Ｓ）−（ＸＸＶ）の化合物のキャラクタリゼーション
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝３９２．１３０６
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝３９３．１３７８８
Ｃ20Ｈ24ＣｌＮＯ5についての中性モノアイソトピック質量 計算値：３９３．１３４３
分子式：Ｃ20Ｈ24ＣｌＮＯ5
化学分子量＝３９３．８７
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝３９２．１３０６
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝３９３．１３７８８
Ｃ20Ｈ24ＣｌＮＯ5についての中性モノアイソトピック質量 計算値：３９３．１３４３
分子式：Ｃ20Ｈ24ＣｌＮＯ5
化学分子量＝３９３．８７
実施例４３：実施例７において単離された式（Ｒ）−（ＩＩ）、（Ｒ）−（ＩＩＩ）、（Ｒ）−（ＶＩ）、（Ｒ）−（ＶＩＩ）、（Ｒ）−（ＶＩＩＩ）、（Ｒ）−（ＩＸ）、（Ｒ）−（Ｘ）及び（Ｒ）−（ＸＩ）の化合物の混合物（ミックス１）のキャラクタリゼーション
化合物（Ｒ）−（ＩＩ）及び（Ｒ）−（ＩＩＩ）：
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝３８２．０６３８
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝３８３．０７１０８
Ｃ18Ｈ19Ｃｌ2ＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：３８３．０６９１１
分子式：Ｃ18Ｈ19Ｃｌ2ＮＯ4
化学分子量＝３８４．２６
実施例２８及び２９中の式を参照のこと
化合物（Ｒ）−（ＩＩ）及び（Ｒ）−（ＩＩＩ）：
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝３８２．０６３８
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝３８３．０７１０８
Ｃ18Ｈ19Ｃｌ2ＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：３８３．０６９１１
分子式：Ｃ18Ｈ19Ｃｌ2ＮＯ4
化学分子量＝３８４．２６
実施例２８及び２９中の式を参照のこと
化合物（Ｒ）−（ＶＩ）、（Ｒ）−（ＶＩＩＩ）、（Ｒ）−（ＩＸ）及び（Ｒ）−（ＸＩ）：
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４２６．０１２０
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４２７．０１９２８
Ｃ18Ｈ19ＢｒＣｌＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４２７．０１８６
分子式：Ｃ18Ｈ19ＢｒＣｌＮＯ4
化学分子量＝４２８．７１
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４２６．０１２０
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４２７．０１９２８
Ｃ18Ｈ19ＢｒＣｌＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４２７．０１８６
分子式：Ｃ18Ｈ19ＢｒＣｌＮＯ4
化学分子量＝４２８．７１
化合物（Ｒ）−（ＶＩＩ）及び（Ｒ）−（Ｘ）：
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４６９．９６１６
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４７０．９６８８８
Ｃ18Ｈ19Ｂｒ2ＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４７０．９６８０８
分子式：Ｃ18Ｈ19Ｂｒ2ＮＯ4
化学分子量＝４７３．１６
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４６９．９６１６
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４７０．９６８８８
Ｃ18Ｈ19Ｂｒ2ＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４７０．９６８０８
分子式：Ｃ18Ｈ19Ｂｒ2ＮＯ4
化学分子量＝４７３．１６
Ｂｒｕｋｅｒ ｍｉｃｒｏＴＯＦ−ＬＣ質量分析計並びにＥＬＳ及びＰＤＡ−２９９６検出器を備えるＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣシステムにおいて、生産物の測定を行なった。ｍｉｃｒｏＴＯＦコントロール１．１及びＭａｓｓＬｙｎｘ ｖ ４．１ソフトウェアを用いて、データを集めた。１５分以内の９０％Ａ→１００％Ｂの勾配を使用し（Ａ：水／アセトニトリル／緩衝液＝９０：５：５；Ｂ：水／アセトニトリル／緩衝液＝５：９５：５；緩衝液＝６．５ｍＭ酢酸アンモニウム、ｐＨ４．５）、Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨカラム（Ｃ１８、１．７μｍ；２．１×１００ｍｍ）上において、クロマトグラフ分離を行なった。全てのデータをＷａｔｅｒｓ／Ｑ−ＤＩＳ Ｍａｒｌｉｎソフトウェアに付し、勾配を補正処理アルゴリズム（correction-trait algorithm）によって３０分へ延長し、データベースに合わせた。ミックス１中のそれぞれの化合物のピーク及び相対量は、以下の通りであった：
全てのピークが、２１１、２３６及び３０２ｎｍの極大を含む同一のストレプトスピロール様ＵＶスペクトルを有した。
実施例４４：実施例７で単離された式（８Ｒ，１６Ｓ）−（ＩＶ）、（８Ｒ，１６Ｓ）−（ＸＩＩ）、（８Ｒ，１６Ｓ）−（ＸＩＩＩ）及び（８Ｒ，１６Ｓ）−（ＸＩＶ）の化合物の混合物（ミックス２）のキャラクタリゼーション
化合物（８Ｒ，１６Ｓ）−（ＩＶ）：
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝３９６．０８３４
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝３９７．０９０６８
Ｃ19Ｈ21Ｃｌ2ＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：３９７．０８４７６
分子式：Ｃ19Ｈ21Ｃｌ2ＮＯ4
化学分子量＝３９８．２９
実施例３０中の式を参照のこと
化合物（８Ｒ，１６Ｓ）−（ＩＶ）：
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝３９６．０８３４
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝３９７．０９０６８
Ｃ19Ｈ21Ｃｌ2ＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：３９７．０８４７６
分子式：Ｃ19Ｈ21Ｃｌ2ＮＯ4
化学分子量＝３９８．２９
実施例３０中の式を参照のこと
化合物（８Ｒ，１６Ｓ）−（ＸＩＩ）及び（８Ｒ，１６Ｓ）−（ＸＩＶ）：
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４４０．０３３１
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４４１．０４０３８
Ｃ19Ｈ21ＢｒＣｌＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４４１．０３４２５
分子式：Ｃ19Ｈ21ＢｒＣｌＮＯ4
化学分子量＝４４２．７４
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４４０．０３３１
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４４１．０４０３８
Ｃ19Ｈ21ＢｒＣｌＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４４１．０３４２５
分子式：Ｃ19Ｈ21ＢｒＣｌＮＯ4
化学分子量＝４４２．７４
化合物（８Ｒ，１６Ｓ）−（ＸＩＩＩ）：
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４８３．９７９８
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４８４．９８７０８
Ｃ19Ｈ21Ｂｒ2ＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４８４．９８３７３
分子式：Ｃ19Ｈ21Ｂｒ2ＮＯ4
化学分子量＝４８７．１９
ＥＳＩ−ＭＳ（ｎｅｇ）：［Ｍ−Ｈ］-＝４８３．９７９８
実験中性モノアイソトピック質量 精密、［Ｍ］＝４８４．９８７０８
Ｃ19Ｈ21Ｂｒ2ＮＯ4についての中性モノアイソトピック質量 計算値：４８４．９８３７３
分子式：Ｃ19Ｈ21Ｂｒ2ＮＯ4
化学分子量＝４８７．１９
生産物の測定を実施例４３に記載される通りに行なった。ミックス２中のそれぞれの化合物のピーク及び相対量は、以下の通りであった：
全てのピークが、２１１、２３６及び３０２ｎｍの極大を含む同一のストレプトスピロール様ＵＶスペクトルを有した。
実施例４５：ブロス希釈法−微量希釈によるＩＣ50値の測定
この実施例は、標準的なブロス希釈法−微量希釈を使用してＮＣＣＬＳ Ｍ７−Ａ７に従い好気的に増殖する細菌のインビトロ感受性を測定したことを記載する。テストしようとする化合物のＩＣ50値を、５０％の可視濁度又はＡＴＰレベルが阻害される５０％阻害濃度として計算した。
この実施例は、標準的なブロス希釈法−微量希釈を使用してＮＣＣＬＳ Ｍ７−Ａ７に従い好気的に増殖する細菌のインビトロ感受性を測定したことを記載する。テストしようとする化合物のＩＣ50値を、５０％の可視濁度又はＡＴＰレベルが阻害される５０％阻害濃度として計算した。
培養培地：
ＮＬ５０８２ ミュラーヒントンブロス
ＮＬ５０８３ サブローデキストロースブロス
ＮＬ５４２５ ブレインハートインフュージョン
ＦＣＳ ウシ胎仔血清
Ｔｗｅｅｎ８０ Ｔｗｅｅｎ８０
寒天 寒天Ｎｏ１
ＮＬ５０８２ ミュラーヒントンブロス
ＮＬ５０８３ サブローデキストロースブロス
ＮＬ５４２５ ブレインハートインフュージョン
ＦＣＳ ウシ胎仔血清
Ｔｗｅｅｎ８０ Ｔｗｅｅｎ８０
寒天 寒天Ｎｏ１
試験株を−８０℃でＣｒｙｏｂａｎｋTMに保存した。
化合物貯蔵液（stock solutions）を、メタノールを用いて、少なくとも１０００μｇ／ｍｌの濃度で調製した。テスト後、貯蔵液を等分割し、−８０℃で保存した。ナイスタチンをＤＭＳＯに溶解し、次いでそれぞれの培地にさらに溶解した。
化合物希釈物（階段希釈）の調製及び試験体積：
各試験株について、各３８４ウェルクリアー透明マイクロタイトレーションプレート上の以下のコントロールを必要とした：
− 薬物を含まない増殖コントロール、
− 無菌コントロール、及び
− 参照化合物としてのシプロフロキサシン及びナイスタチン。
各試験株について、各３８４ウェルクリアー透明マイクロタイトレーションプレート上の以下のコントロールを必要とした：
− 薬物を含まない増殖コントロール、
− 無菌コントロール、及び
− 参照化合物としてのシプロフロキサシン及びナイスタチン。
マイコバクテリウム・スメグマチスについては、特別な３８４ウェル白色マイクロタイトレーションプレートを使用した。
ＩＣ50測定について、少なくとも１０又は２０個の階段希釈物（ファクター２での幾何学的希釈物）を調製した。
ブロス培地を以下の表４に記載する：
通常のテスト濃度は、６４〜０．１２５μｇ／ｍｌ又は強力な阻害には６４〜０．０００１μｇ／ｍｌの範囲である。濃度の特定では、接種体積が考慮しなければならない。全試験体積（化合物溶液及び接種物）を、４０μｌで、従ってマイコバクテリウム・スメグマチスについては２０μｌで調製した。シプロフロキサシン及びナイスタチンを含む階段希釈物を、特別な３８４ウェルクリアー透明マイクロタイトレーションプレート中調製し、接種の前に各３８４ウェルマイクロタイトレーションプレートに移した。
接種物は、以下の表５に従って液体前培養物から調製しなければならなかった：
前培養物を、３０ｍｌ培地中ＣｒｙｏｂａｎｋTMからの１つのビーズで調製し、３７℃、１８０ｒｐｍでインキュベートした。接種物を、５９０ｎｍの波長で光度計によって調整し、これは、１０8ＣＦＵ／ｍｌに相当した。調整後、懸濁液を、マイコバクテリウム・スメグマチスの１：１００００を除いて、各株について１：１００に希釈した。接種物調製後１５分以内に、マイクロタイトレーションプレートに接種した。各株の正確なコロニー数を、表面培養法によって測定した。
インキュベーション：接種したマイクロタイトレーションプレートを、蓋を用いて閉じ、蒸発を防ぎ、３７℃で５％ＣＯ2、９５％大気水分で２０時間、マイコバクテリウム・スメグマチスについては４８時間、インキュベーター中インキュベートした。
読み取り：増殖ウェルの読み取りを、吸光モードによって５９０ｎｍでマイクロタイトレーションプレートについて光度計を用いて行なった。マイコバクテリウム・スメグマチスについては、光から保護した状態で室温にて５分間の２０μｌ ＢａｃＴｉｔｅｒ−ＧｌｏTM／ウェルのインキュベーション後に、発光モードによってマイクロタイトレーションプレートを測定した。
評価：ＩＣ50値を、ＸＬｆｉｔ４，モデルファンクション２０５で測定した。細胞増殖テストの結果を表６に報告する。
Claims (18)
- 式（Ｉ）
Ｒ1は、（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2は、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−ＯＨであり、
Ｒ3は、Ｈ又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキルであり、
Ｘ1は、ハロゲン、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−アリール］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−ヘテロアリール］、又はＳ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2であり、
Ｘ2は、ハロゲンであり、そして
Ｙ1及びＹ2は、互いに独立して、Ｈ；ＯＨ；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−アリール］、ここで（Ｃ6−Ｃ10）−アリール基は、場合によりハロゲンによって置換される；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−ヘテロアリール］；場合により（Ｃ1−Ｃ6）アルキルによって置換される５〜６個の環原子を含む飽和又は不飽和ヘテロ環式環系、ここで１又は２個の環原子がＮ、Ｏ又はＳである；であるか、又はＹ1及びＹ2は一緒になって＝Ｏである〕
の化合物、又は式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩。 - Ｒ1が、ｎ−ヘキシル、４−メチル−ペンチル、ｎ−ヘプチル及び４−メチル−ヘキシルである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
- Ｒ2が、Ｈ又は（Ｃ1−Ｃ4）アルキル又は（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−ＯＨである、請求項１又は２に記載の式（Ｉ）の化合物。
- Ｒ3が、Ｈ又は（Ｃ1−Ｃ4）アルキルである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
- Ｘ1が、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキル、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−ピリジル］又はＳ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
- Ｘ1及びＸ2が独立してＣｌ又はＢｒである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
- Ｘ1及びＸ2が両方ともＣｌである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
- Ｙ1及びＹ2が、互いに独立して、Ｈ；ＯＨ；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］；ＮＨ−ＣＨ2−フェニル、ここで、フェニル基は、場合により、ハロゲンによって、好ましくはフッ素によって置換される；場合により（Ｃ1−Ｃ6）アルキルによって置換される５〜６個の環原子を含む飽和ヘテロ環式環系；からなる群より選択されるか、又はＹ1及びＹ2が一緒になって＝Ｏである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
- Ｒ1が、（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2が、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ4）アルキル又は（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−ＯＨであり、
Ｒ3が、Ｈ又は（Ｃ1−Ｃ4）アルキルであり、
Ｘ1が、ハロゲン、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキル、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−ヘテロアリール］又はＳ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2であり、
Ｘ2が、ハロゲンであり、そして
Ｙ1及びＹ2が、好ましくは、互いに独立して、Ｈ；ＯＨ；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］；ＮＨ−ＣＨ2−フェニル、ここでフェニル基は、場合によりハロゲンによって置換される；場合により（Ｃ1−Ｃ6）アルキルによって置換される５〜６個の環原子を含む飽和ヘテロ環式環系；より選択される基であるか、又はＹ1及びＹ2が一緒になって＝Ｏである、
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、又は式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩。 - Ｒ1が、（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2が、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ4）アルキル又は（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−ＯＨであり、
Ｒ3が、（Ｃ1−Ｃ4）アルキルであり、
Ｘ1が、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−ピリジル］、又はＳ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2であり、
Ｘ2が、Ｃｌ又はＢｒであり、そして
Ｙ1及びＹ2が互いに独立してＨ又はＯＨであるか、又はＹ1及びＹ2が一緒になって＝Ｏである、
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、又はその生理学的に許容される塩。 - Ｒ1が、（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2が、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ2）アルキル又は（Ｃ1−Ｃ2）アルキレン−ＯＨであり、
Ｒ3が、メチルであり、
Ｘ1が、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＨ［ブチル］、ＮＨ［ＣＨ2−ピリジル］、又はＳ−エチレン−Ｎ［（Ｃ1−Ｃ2）アルキル］2であり、
Ｘ2が、Ｃｌ又はＢｒであり、そして
Ｙ1及びＹ2が互いに独立してＨ又はＯＨであるか、又はＹ1及びＹ2が一緒になって＝Ｏである、
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、又はその生理学的に許容される塩。 - Ｒ1が（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2がＨであり、
Ｒ3がメチルであり、
Ｘ1及びＸ2が互いに独立してＣｌ又はＢｒであり、
Ｙ1及びＹ2が一緒になって＝Ｏである、
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、又はその生理学的に許容される塩。 - Ｒ1が（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2がＨであり、
Ｒ3がメチルであり、
Ｘ1及びＸ2が両方ともＣｌであり、
Ｙ1及びＹ2が一緒になって＝Ｏである、
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、又はその生理学的に許容される塩。 - 式（Ｉ）
Ｒ1は、（Ｃ6−Ｃ7）アルキルであり、
Ｒ2は、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキレン−ＯＨであり、
Ｒ3は、Ｈ又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキルであり、
Ｘ1は、ハロゲン、Ｏ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−アリール］、ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−ヘテロアリール］、又はＳ−（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−Ｎ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキル］2であり、
Ｘ2は、ハロゲンであり、そして
Ｙ1及びＹ2は、互いに独立して、Ｈ；ＯＨ；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ6）アルキル］；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−アリール］、ここで（Ｃ6−Ｃ10）−アリール基は、場合によりハロゲンによって置換される；ＮＨ［（Ｃ1−Ｃ4）アルキレン−（Ｃ6−Ｃ10）−ヘテロアリール］；場合により（Ｃ1−Ｃ6）アルキルによって置換される５〜６個の環原子を含む飽和又は不飽和ヘテロ環式環系、ここで１又は２個の環原子がＮ、Ｏ又はＳである；であるか、又はＹ1及びＹ2は一緒になって＝Ｏである〕
の化合物又は式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩の製造方法であって、
の化合物又は式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩の製造方法であって、
１．式（Ｉ）の化合物のうちの１つ又はそれ以上が培地中に生じるまで培地中好適な条件下で、株ストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）、又はその変異株及び／又は突然変異株のうちの１つを発酵させる工程、
２．培地から式（Ｉ）の化合物を単離する工程、及び
３．必要に応じて、単離された式（Ｉ）の化合物を式（Ｉ）の化合物に誘導体化し、及び／又は必要に応じて、単離された又は誘導体化された化合物を式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩に変換する工程
を含む、上記製造方法。 - 医薬の製造のための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物又はその生理学的に許容される塩の使用。
- 細菌感染症の治療及び／又は予防用の医薬の製造のための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物又はその生理学的に許容される塩の使用。
- 請求項１〜１３のいずれか１項に記載の少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物又はその生理学的に許容される塩を含む、薬学的組成物。
- 微生物株ストレプトミセス・エスピーＳＴ １０８１４０（ＤＳＭ １９３６９）。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP08167138 | 2008-07-31 | ||
| EP08167138.0 | 2008-07-31 | ||
| PCT/EP2009/005155 WO2010012381A1 (en) | 2008-07-31 | 2009-07-16 | Streptospirole derivatives |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2011529457A true JP2011529457A (ja) | 2011-12-08 |
| JP5619001B2 JP5619001B2 (ja) | 2014-11-05 |
Family
ID=40054222
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2011520353A Expired - Fee Related JP5619001B2 (ja) | 2008-07-31 | 2009-07-16 | ストレプトスピロール誘導体 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8765799B2 (ja) |
| EP (1) | EP2321322B1 (ja) |
| JP (1) | JP5619001B2 (ja) |
| AR (1) | AR072624A1 (ja) |
| WO (1) | WO2010012381A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103667073A (zh) * | 2013-09-27 | 2014-03-26 | 浙江工业大学 | 蛇足石杉内生真菌及其在制备吡咯类护肝药中的应用 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112979665B (zh) * | 2021-02-07 | 2021-11-19 | 南通大学 | 一种灰黄霉素施密特重排衍生物及其制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005508928A (ja) * | 2001-09-24 | 2005-04-07 | バイエル・クロツプサイエンス・アクチエンゲゼルシヤフト | スピロ環状３−フェニル−３−置換４−ケトラクタム類および４−ケトラクトン類 |
| WO2005121148A2 (en) * | 2004-06-08 | 2005-12-22 | Nereus Pharmaceuticals, Inc. | Anti-bacterial and anti-cancer spiro beta-lactone/gamma-lactams |
-
2009
- 2009-07-16 WO PCT/EP2009/005155 patent/WO2010012381A1/en active Application Filing
- 2009-07-16 US US13/056,751 patent/US8765799B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2009-07-16 JP JP2011520353A patent/JP5619001B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2009-07-16 EP EP09777218A patent/EP2321322B1/en not_active Not-in-force
- 2009-07-29 AR ARP090102887A patent/AR072624A1/es unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005508928A (ja) * | 2001-09-24 | 2005-04-07 | バイエル・クロツプサイエンス・アクチエンゲゼルシヤフト | スピロ環状３−フェニル−３−置換４−ケトラクタム類および４−ケトラクトン類 |
| WO2005121148A2 (en) * | 2004-06-08 | 2005-12-22 | Nereus Pharmaceuticals, Inc. | Anti-bacterial and anti-cancer spiro beta-lactone/gamma-lactams |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| JPN6014001539; Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ６８, 2003, １５９１-１５９３ * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103667073A (zh) * | 2013-09-27 | 2014-03-26 | 浙江工业大学 | 蛇足石杉内生真菌及其在制备吡咯类护肝药中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP2321322A1 (en) | 2011-05-18 |
| AR072624A1 (es) | 2010-09-08 |
| JP5619001B2 (ja) | 2014-11-05 |
| US20110295009A1 (en) | 2011-12-01 |
| WO2010012381A1 (en) | 2010-02-04 |
| US8765799B2 (en) | 2014-07-01 |
| EP2321322B1 (en) | 2012-12-19 |
| WO2010012381A8 (en) | 2010-05-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| BG61205B2 (bg) | Хипохолестеринови ферментационни продукти и метод за получаването им | |
| JP5539193B2 (ja) | マクロラクトン誘導体 | |
| US7534591B2 (en) | Bengamide derivatives, process for preparing them, and their use | |
| JP5619001B2 (ja) | ストレプトスピロール誘導体 | |
| JP2012512224A (ja) | マクロラクトン誘導体、その製造方法、及びがんの処置のためのその使用 | |
| IL174524A (en) | Bengamide derivatives and their medicinal preparations containing them | |
| US7259276B2 (en) | Polyenecarboxylic acid derivatives, processes for preparing them, and their use | |
| JP4758905B2 (ja) | ２−フェニル−ベンゾフラン誘導体、その製造方法及びその使用 | |
| WO2017182828A1 (en) | Antimicrobial agents | |
| AU2002250997B2 (en) | Use of thiolutin dioxide and its derivatives in the manufacture of a medicament for the treatment of CNS disorders and a process for the preparation thereof | |
| US6930130B2 (en) | Citrullimycines, a process for their production and their use as pharmaceuticals | |
| ZA200306475B (en) | Caloporoside derivatives, methods for the production thereof and their use. | |
| US7148254B2 (en) | 2-Phenylbenzofuran derivatives, a process for preparing them, and their use | |
| US7160917B2 (en) | Spirobenzofuran lactams and their derivatives, processes for their preparation and use thereof | |
| JPH1017527A (ja) | 抗菌性物質ｂｅ−３９５８９類及びその製造法 | |
| MXPA04012309A (es) | Derivados de acidos polienocarboxilicos, metodo para su produccion y el uso de los mismos. | |
| CA2508229A1 (en) | Novel spirobenzofuranlactams and the derivatives thereof, methods for the production thereof, and use thereof | |
| JPH1059975A (ja) | 抗腫瘍性物質ｂｅ−５４２３８類及びその製造法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20120703 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140121 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140416 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140513 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140801 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20140826 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20140916 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5619001 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |