JP2011528229A5 - - Google Patents
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Description
図3乃至図9は、本発明の第2の実施形態において、陽性検出可能な標的核酸の複合体を示す。図3に示すように、この実施形態において、サンプル中の標的核酸(50)は、二本鎖核酸である。サンプル中の標的核酸(50)は、好ましくは、二本鎖の少なくとも一部を切り開いて、第1鎖(52)および第2鎖(54)とするために、DNAzole Direct、ホルムアミド、または、尿素などの変性剤または溶解剤によって、インサイツで変性させる。これは、サンプルを検査ストリップに塗布する前に、変性剤または溶解剤をサンプル溶液に加えることによって、なされることでもあり、または、変性剤または溶解剤は、先に議論したように、検査ストリップの領域に事前に載せられてもよい。あるいは、核酸の変性は、本発明の精神の範囲内で、アッセイの張度、温度、または、pHを調節または制御することによってなされてもよい。本発明のアッセイは、サンプル中の核酸を部分的に変性させるか完全に変性させるかのいずれかによって、実行されてもよいが、部分的な開口が側方流動アッセイにおける検出には好ましい。
Claims (27)
- サンプル中の少なくとも1つの二本鎖標的核酸を検出するための検査ストリップであって、
前記検査ストリップは、
少なくとも1つの検査領域を含む少なくとも1つの検出領域と、
前記サンプルを前記検査ストリップに塗布するためのサンプル塗布領域と、
二本鎖標的核酸の一部を切り開いて第1鎖及び第2鎖とする少なくとも1つの溶解剤又は変性剤を含む溶解領域と、
少なくとも1つの標識と結合される少なくとも1つの第1核酸配列を含む少なくとも1つの第1複合体とを備え、
前記第1複合体は、第1複合体塗布領域に載せられ、および、
前記第1核酸配列は、前記二本鎖標的核酸の前記第1鎖の配列の一部と相補的な配列を含み、
前記検査ストリップは、
少なくとも1つの固定化剤と結合される少なくとも1つの第2核酸配列を含む少なくとも1つの第2複合体を含み、
前記固定化剤は、検査ストリップの検査領域で固定化可能であり、および、
前記第2核酸配列は、前記二本鎖標的核酸の前記第2鎖の配列の一部と相補的な配列を含み、
前記サンプル、前記第1複合体、および、前記第2複合体はすべて、前記サンプル中の前記二本鎖標的核酸を検出するためのアッセイを実行中に、前記サンプルが溶解領域及び第1複合体と第2複合体の両方と遭遇するような位置の検査ストリップ上に配される
ことを特徴とする検査ストリップ。 - 前記検出領域は、前記検査領域を超えて配され、前記二本鎖標的核酸と結合しない前記第1複合体の任意の部分を固定化するための制御領域をさらに含むことを特徴とする、請求項1に記載の検査ストリップ。
- 前記固定化剤を認識及び固定化する受容体をさらに含み、
前記第2複合体は、前記検査領域の上流位置に載せられ、固定化部位は前記検査領域に配されることを特徴とする、請求項1に記載の検査ストリップ。 - 前記固定化剤を認識及び固定化する受容体をさらに含み、
前記第2複合体は、前記検査領域に載せられ、前記受容体は前記検査領域の上流位置に載せられることを特徴とする、請求項1に記載の検査ストリップ。 - 前記標識は、
(a)少なくとも1つの蛍光ミクロビーズで混合された少なくとも1つのコロイド金粒子と、
(b)少なくとも1つの染料ラテックスミクロビーズと、
からなる群から選択されることを特徴とする、請求項1に記載の検査ストリップ。 - 前記サンプルは、前記二本鎖標的核酸のアッセイの感度を上げるための増幅工程を含まずにアッセイ上で処理されることを特徴とする、請求項1に記載の検査ストリップ。
- サンプル中の少なくとも1つの二本鎖標的核酸を検出するための検査ストリップであって、
前記検査ストリップは、
少なくとも1つの検査領域を含む少なくとも1つの検出領域と、
前記サンプルを前記検査ストリップに塗布するためのサンプル塗布領域と、
二本鎖標的核酸の一部を切り開いて第1鎖及び第2鎖とする少なくとも1つの溶解剤又は変性剤を含む溶解領域と、
少なくとも1つの標識と結合される少なくとも1つの第1核酸配列を含む少なくとも1つの第1複合体とを備え、
前記第1複合体は、第1複合体塗布領域に載せられ、
前記第1核酸配列が前記二本鎖標的核酸の第1鎖の配列の一部に対して相補的な配列を含み、
前記検査ストリップは、さらに、
少なくとも1つの固定化剤と結合される少なくとも1つの第2核酸配列を含む、少なくとも1つの第2複合体を備え、
前記第2複合体はアッセイ開始時に検査領域で固定化されず、
前記固定化剤はアッセイの検査領域において固定化可能であり、
前記第2核酸配列が前記二本鎖標的核酸の第2鎖の配列の一部に対して相補的な配列を含み、
前記サンプルと前記第1複合体及び第2複合体は、すべて、前記サンプル中の前記二本鎖標的核酸を検出するために前記アッセイを実行中に前記サンプルが溶解領域、及び前記第1複合体と前記第2複合体の両方に遭遇するような位置で検査ストリップ上に載せられる
ことを特徴とする検査ストリップ。 - 前記サンプルは、増幅工程を含まずにアッセイ上で処理されることを特徴とする請求項7記載の検査ストリップ。
- 前記固定化剤を認識し、固定化部位で固定化する受容体をさらに含み、
前記第2複合体は、前記検査領域の上流位置に載せられ、前記固定化部位は前記検査領域に配されることを特徴とする、請求項7に記載の検査ストリップ。 - 前記標識は、
(a)少なくとも1つの蛍光ミクロビーズで混合された少なくとも1つのコロイド金粒子と、
(b)少なくとも1つの染料ラテックスミクロビーズと、
からなる群から選択されることを特徴とする、請求項7に記載の検査ストリップ。 - 前記溶解領域は前記サンプル塗布領域に配されることを特徴とする、請求項7記載の検査ストリップ。
- サンプル中の少なくとも1つの二本鎖標的核酸を検出するための検査ストリップであって、
前記検査ストリップは、
少なくとも1つの検査領域を含む少なくとも1つの検出領域と、
前記サンプルを前記検査ストリップに塗布するためのサンプル塗布領域と、
前記二本鎖標的核酸の一部を切り開いて第1鎖及び第2鎖とする少なくとも1つのアッセイ条件と、
少なくとも1つの標識と結合される少なくとも1つの第1核酸配列を含む少なくとも1つの第1複合体とを備え、
前記第1複合体は、第1複合体塗布領域に載せられ、
前記第1核酸配列が前記二本鎖標的核酸の第1鎖の配列の第1部分に対して相補的な配列を含み、
前記検査ストリップは、さらに、
少なくとも1つの固定化剤と結合される少なくとも1つの第2核酸配列を含む、少なくとも1つの第2複合体を備え、
前記第2複合体はアッセイ開始時に検査領域で固定化されず、
前記固定化剤はアッセイの検査領域において固定化可能であり、
前記第2核酸配列が前記二本鎖標的核酸の第2鎖の配列の第2部分に対して相補的な配列を含み、
前記サンプルと前記第1複合体及び第2複合体は、すべて、前記サンプル中の前記二本鎖標的核酸を検出するためにアッセイを実行中に前記サンプルが前記第1複合体と前記第2複合体の両方に遭遇するような位置で検査ストリップ上に載せられる
ことを特徴とする検査ストリップ。 - 前記アッセイ条件は、
(a)前記二本鎖標的核酸の一部を切り開く張度、
(b)前記二本鎖標的核酸の一部を切り開く温度、
(c)前記二本鎖標的核酸の一部を切り開くpH、
(d)前記二本鎖標的核酸の一部を切り開く溶解剤又は変性剤であって、該溶解剤は前記検査ストリップに前記サンプルを塗布する前に前記サンプルに加えられる、及び
(e)(a)乃至(d)の任意の組み合わせ、
からなる群から選択されることを特徴とする、請求項12に記載の検査ストリップ。 - ポイント・オブ・ケア・アッセイを用いて、サンプル中の少なくとも1つの二本鎖標的核酸を検出する方法であって、
前記方法は、
(a)前記二本鎖標的核酸の一部を切り開いて第1鎖及び第2鎖とする工程と、
(b)クロマトグラフィ検査ストリップ上に配される少なくとも1つの第1複合体に、前記サンプルをさらす工程であって、前記第1複合体は少なくとも1つの標識と結合される少なくとも1つの第1核酸配列を含み、前記第1核酸配列は前記二本鎖標的核酸の第1鎖の配列の一部に対して相補的な配列を含む工程と、
(c)少なくとも1つの第2複合体に、前記サンプルをさらす工程であって、前記第2複合体は少なくとも1つの第2核酸配列を含み、前記第2核酸配列は前記二本鎖標的核酸の第2鎖の配列の一部に対して相補的な配列を含む工程とを含み、
前記二本鎖標的核酸が前記サンプルに存在する際、前記第1核酸配列と前記第2核酸配列は、前記第1複合体、前記二本鎖標的核酸、および、前記第2複合体が前記アッセイの完了時に前記検査領域で固定化されるように、前記二本鎖標的核酸と結合される
こと特徴とする方法。 - 前記第2複合体は少なくとも1つの固定化剤と結合し、
前記固定化剤は前記検査ストリップの検査領域において固定化可能であることを特徴とする、請求項14に記載の方法。 - 前記第2複合体が前記検査ストリップの検査領域に配されることを特徴とする、請求項14に記載の方法。
- 工程(a)は前記サンプルを溶解剤又は変性剤にさらすサブステップを含むことを特徴とする、請求項14に記載の方法。
- 前記第1核酸配列と前記第2核酸配列は、それぞれ、
(a)内部プライマーと、
(b)外部プライマーと、
(c)センスプライマーと、および、
(d)アンチセンスプライマーと
からなる群から選択される前記二本鎖標的核酸のポリメラーゼ連鎖反応(PCR)タイプのプライマーであることを特徴とする、請求項14に記載の方法。 - 前記標識は、
(a)少なくとも1つの蛍光ミクロビーズで混合された少なくとも1つのコロイド金粒子と、
(b)少なくとも1つの染料ラテックスミクロビーズと、
からなる群から選択されることを特徴とする、請求項14に記載の方法。 - 前記二本鎖標的核酸の一部を切り開く工程はアッセイ条件を含み、
前記アッセイ条件は、
(a)前記二本鎖標的核酸の一部を切り開く張度、
(b)前記二本鎖標的核酸の一部を切り開く温度、
(c)前記二本鎖標的核酸の一部を切り開くpH、
(d)(a)乃至(c)の任意の組み合わせ、
からなる群から選択されることを特徴とする、請求項14に記載の方法。 - 前記サンプルは、前記二本鎖標的核酸のアッセイの感度を上げるための増幅工程を含まずにアッセイ上で処理されることを特徴とする、請求項14に記載の方法。
- ポイント・オブ・ケア・アッセイを用いて、サンプル中の少なくとも1つの二本鎖標的核酸を検出する方法であって、
前記方法は、
(a)前記二本鎖標的核酸の一部を切り開いて第1鎖及び第2鎖とする少なくとも1つのアッセイ条件に前記サンプルにさらす工程と、
(b)クロマトグラフィ検査ストリップ上に配される少なくとも1つの第1複合体に、前記サンプルをさらす工程であって、
前記少なくとも1つの第1複合体は少なくとも1つの標識と結合される少なくとも1つの第1核酸配列を含み、前記第1複合体は第1複合体の塗布領域に載せられ、前記第1核酸配列は前記二本鎖標的核酸の第1鎖の配列の一部に対して相補的な配列を含む工程と、
(c)クロマトグラフィ検査ストリップ上に配される少なくとも1つの第2複合体に、前記サンプルをさらす工程であって、
前記少なくとも1つの第2複合体は少なくとも1つの固定化剤と結合する少なくとも1つの第2核酸配列を含み、前記第2複合体はアッセイ開始時に検査領域で固定化されず、前記固定化剤は前記アッセイの検査領域において固定化可能であり、前記第2核酸配列は前記二本鎖標的核酸の第2鎖の配列の一部に対して相補的な配列を含む工程とを含み、
前記二本鎖標的核酸が前記サンプルに存在する際、前記第1核酸配列と前記第2核酸配列は、前記第1複合体、前記二本鎖標的核酸、および、前記第2複合体が前記アッセイの完了時に前記クロマトグラフィ検査ストリップの検査領域で固定化されるように、前記二本鎖標的核酸と結合される
こと特徴とする方法。 - 前記工程(a)のアッセイ条件が、前記二本鎖標的核酸の一部を切り開いて前記第1鎖及び前記第2鎖とする溶解剤又は変性剤を含むことを特徴とする、請求項22に記載の方法。
- 前記溶解剤は、前記検査ストリップに前記サンプルを塗布する前に前記サンプルに加えられることを特徴とする、請求項23に記載の方法。
- 前記クロマトグラフィ検査ストリップは溶解領域を含み、
該溶解領域は、
工程(a)において前記二本鎖標的核酸の一部を切り開いて前記第1鎖及び前記第2鎖とする溶解剤又は変性剤を含むことを特徴とする、請求項23に記載の方法。 - 前記アッセイ条件は、
(a)前記二本鎖標的核酸の一部を切り開く張度、
(b)前記二本鎖標的核酸の一部を切り開く温度、
(c)前記二本鎖標的核酸の一部を切り開くpH、及び
(d)(a)乃至(c)の任意の組み合わせ、
からなる群から選択され、
前記二本鎖標的核酸の一部を切り開く前記工程は前記アッセイ条件を含むことを特徴とする、請求項22に記載の方法。 - 前記サンプルは、前記二本鎖標的核酸のアッセイの感度を上げるための増幅工程を含まずにアッセイ上で処理されることを特徴とする、請求項22に記載の方法。
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