JP2011527562A - 培養可能な細胞の計数のための方法、キット及びシステム - Google Patents
培養可能な細胞の計数のための方法、キット及びシステム Download PDFInfo
- Publication number
- JP2011527562A JP2011527562A JP2011517312A JP2011517312A JP2011527562A JP 2011527562 A JP2011527562 A JP 2011527562A JP 2011517312 A JP2011517312 A JP 2011517312A JP 2011517312 A JP2011517312 A JP 2011517312A JP 2011527562 A JP2011527562 A JP 2011527562A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- signal
- sample
- culturable
- predetermined
- microbial cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 96
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 101
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 60
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 17
- 230000015607 signal release Effects 0.000 claims abstract description 16
- 238000004590 computer program Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 82
- 238000010606 normalization Methods 0.000 claims description 27
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 23
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 20
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 14
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 6
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 239000000891 luminescent agent Substances 0.000 claims description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 abstract description 22
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 abstract description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 178
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 120
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 32
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 23
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 19
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 16
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 13
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 13
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 10
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 9
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 9
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 8
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 7
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 7
- 102000003939 Membrane transport proteins Human genes 0.000 description 6
- 108090000301 Membrane transport proteins Proteins 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000009061 membrane transport Effects 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 5
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 5
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 5
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 4
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 3
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 3
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 2
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 2
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 206010056740 Genital discharge Diseases 0.000 description 2
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000269370 Xenopus <genus> Species 0.000 description 2
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 2
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 2
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 2
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 2
- UWOVWIIOKHRNKU-UHFFFAOYSA-N 2,6-diphenyl-4-(2,4,6-triphenylpyridin-1-ium-1-yl)phenolate Chemical compound [O-]C1=C(C=2C=CC=CC=2)C=C([N+]=2C(=CC(=CC=2C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)C=C1C1=CC=CC=C1 UWOVWIIOKHRNKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012099 Alexa Fluor family Substances 0.000 description 1
- 241000224489 Amoeba Species 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000195628 Chlorophyta Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000186031 Corynebacteriaceae Species 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 1
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 1
- 241000488157 Escherichia sp. Species 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- 241000224466 Giardia Species 0.000 description 1
- 241000589248 Legionella Species 0.000 description 1
- 208000007764 Legionnaires' Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 241001074903 Methanobacteria Species 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N adenyl group Chemical group N1=CN=C2N=CNC2=C1N GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000001982 cetrimide agar Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 210000002768 hair cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 210000001190 lateral line system Anatomy 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000012705 liquid precursor Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000008239 natural water Substances 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008238 pharmaceutical water Substances 0.000 description 1
- 238000005424 photoluminescence Methods 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000005395 radioluminescence Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 239000010865 sewage Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000005504 styryl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000000904 thermoluminescence Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
- C12Q1/06—Quantitative determination
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/30—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration
- C12M41/36—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration of biomass, e.g. colony counters or by turbidity measurements
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
Description
本発明は、試料中の細胞の量を定量的に測定するための方法、キット及びシステムに関する。
下記は、本発明の分野における現況技術の記述に関連すると考えられる技術(state of the art)のリストである。
(1)国際特許出願公開第06/065350号(Kimberly Clark Worldwide Inc.)
(2)欧州特許出願第0612850号(Nihon Millipore Kogyo KK)
(3)米国特許第5,258,285号(Foss Electric Holding AS)
(4)米国特許出願公開第2008014607号
(5)国際特許出願公開第92/02632号(Sierra Cytometry)
(6)Jones, D. L., M. A. Brailsford及びJ.−L. Drocourt. 1999. Solid−phase, laser−scanning cytometry:製剤用水における微生物の計数のための新しい二時間法(a new two−hour method for the enumeration of microorganisms in pharmaceutical water.) Pharmacop. Forum 25:7626−7645
発明の背景
試料、特に液体試料における生物学的存在の定量的測定は、汚染の広がり、感染症、病状の決定等においてにおいて重要である。例えば、微生物学において細菌又は真菌の数の測定値はコロニー形成単位(CFU/ml)によって提供される。
(i)培養可能な微生物細胞を保持できる検査試料を、微生物細胞の膜と結合できる少なくとも1つの信号放出剤と接触させるステップであって、前記接触が、信号放出剤が微生物細胞内に内部移行(internalization)し、試料から放出された信号が平坦域に本質的に到達するレベルとなるのに十分である既定の第1期間(T1)行われるステップ、
(ii)前記検出試料から非内部移行信号放出剤(non−internalized signal emitting agent)を除去するステップ、
(iii)前記第1期間(T1)に続く、前記信号が前記平坦域において本質的に維持される第2期間(T2)の間、前記試料内の信号放出物から信号を放出する培養可能細胞を検出し、前記検出が前記培養可能細胞に対してあらかじめ決定された選択パラメータに基づくステップ、及び
(iv)前記選択された信号放出物に基づき、検査試料中の培養可能細胞の数を示す定量的値を決定するステップ
を含む。
(i)微生物細胞の膜と結合できる少なくとも1つの信号放出剤、
(ii)試料から放出された信号が平坦域に本質的に到達するレベルまで信号放出剤が微生物細胞内に内部移行(internalization)するのに十分である、第1期間(T1)、前記少なくとも1つの信号放出剤と試料を接触させるための命令、
(iii)前記試料から非結合信号放出剤を除去するための命令、
(iv)前記試料内の信号放出物から信号を放出する培養可能細胞を検出し選択するための命令であって、前記検出が前記培養可能細胞に対してあらかじめ決定された選択パラメータに基づき、前記T1に続く、前記信号が前記平坦域において本質的に維持される第2期間(T2)の間、前記検出及び選択を行う、命令、
(v)そこから検査試料中の培養可能細胞の数を示す定量的値を決定するために、前記選択された信号放出物を使用するための命令
を含む。
(i)前記試料を保持するための、及び1つ又は複数の信号放出剤と試料との接触を可能とするための運搬体、
(ii)試料内の信号放出物を検出し、それに対応するデータを出力するための検出器、
(iii)既定の選択パラメータ及び複数の既定の正規化因子を有するデータベースを含むメモリユニットであって、各選択パラメータ及び各正規化因子が微生物細胞、又は微生物細胞群に特異的である、メモリユニット、
(iv)検出器から出力データを、前記メモリユニットから前記パラメータ及び前記正規化因子の1つ又は複数を受信し、前記パラメータ及び前記正規化因子で前記出力データを処理して、前記試料中の前記培養可能な微生物細胞の数を示す前記定量的値を測定するための処理ユニット
を含む。
(i)培養可能な微生物細胞を保持できる前記検査試料を、微生物細胞の膜と結合できる少なくとも1つの信号放出剤と接触させるステップであって、前記接触が、信号放出剤が微生物細胞内に内部移行(internalization)し、試料から放出された信号が平坦域に本質的に到達するレベルとなるのに十分である既定の第1期間(T1)行われるステップ、
(ii)前記検査試料から非内部移行信号放出剤(non−internalized signal emitting agent)を除去するステップ、
(iii)前記第1期間(T1)に続く、前記信号が前記平坦域において本質的に維持される第2期間(T2)の間、前記試料内の信号放出物から信号を放出する培養可能細胞を検出及び選択するステップであって、前記検出が前記培養可能細胞に対してあらかじめ決定された選択パラメータに基づくステップ、及び
(iv)前記選択された信号放出物に基づき、検査試料中の培養可能細胞の数を示す定量的値を決定するステップ
を含む。
図面の簡単な説明
本発明を理解し実際の実施方法を理解するため、ここで以下に述べる非限定的な例のみを用いて、添付の図面を参照しながら、実施形態を説明する。
発明の詳細な説明
一般的に、本発明は、試料、典型的には液体試料中の培養可能な微生物細胞の量を、従来の信号放出剤で試料を染色後、数分以内に定量的に測定するための方法、キット及びシステムを提供する。
(i)培養可能な微生物細胞を保持できる前記検査試料を、微生物細胞の膜と結合できる少なくとも1つの信号放出剤と接触させるステップであって、前記接触が、信号放出剤が微生物細胞内に内部移行(internalization)し、試料から放出された信号が平坦域に本質的に到達するレベルとなるのに十分である既定の第1期間(T1)行われるステップ、
(ii)前記検査試料から非内部移行信号放出剤(non−internalized signal emitting agent)を除去するステップ、
(iii)前記第1期間(T1)に続く、前記信号が前記平坦域において本質的に維持される第2期間(T2)の間、前記試料内の信号放出物から、信号を放出する培養可能細胞を検出するステップであって、前記検出が培養可能細胞に対してあらかじめ決定された選択パラメータに基づくステップ、及び
(iv)前記選択された信号放出物に基づき、検査試料中の培養可能な微生物細胞の数を示す定量的値を決定するステップ
を含む。
細胞の膜と結合できる少なくとも1つの信号放出剤、
前記試料から放出された信号が平坦域に本質的に到達するレベルまで前記信号放出剤が前記細胞内に内部移行(internalization)するのに十分である第1期間(T1)、前記少なくとも1つの信号放出剤と前記試料を接触させるための命令、
前記試料から非結合信号放出剤(non−associated signal emitting agent)を除去するための命令、
前記試料内の信号放出物から信号を放出する培養可能細胞を検出及び選択するための命令であって、前記検出が前記培養可能な微生物細胞に対してあらかじめ決定された選択パラメータに基づき、前記第1期間(T1)に続く、試料から放出された信号が前記平坦域において本質的に維持される第2期間(T2)の間、検出及び選択を行う、命令、
そこから前記試験試料中の培養可能な微生物細胞の数を示す定量的値を決定するために、前記選択された信号放出物を使用するための命令
を含む。
試料を保持し、試料と1つ又は複数の信号放出剤との接触を可能とするための運搬体、
試料内の信号放出物を検出し、それに対応するデータを出力するための検出器、
既定の選択パラメータ及び1つ又は複数の既定の細胞特異的な正規化因子を有するデータベースを含むメモリユニットであって、各選択パラメータ及び各正規化因子が微生物細胞、又は微生物細胞群に特異的である、メモリユニット、
検出器から出力データを受信し、前記メモリユニットから、微生物細胞、又は微生物細胞群に特異的である選択パラメータ及び前記正規化因子を受信し、前記パラメータ及び前記正規化因子で前記出力データを処理して、試料中の前記培養可能な微生物細胞の数と等しい定量的値をそこから決定するための処理ユニット
を含む。
一般
以下の非限定的な例において、既定濃度の細菌と混合した市営水道水(水道水)を含む試料を使用し本発明の方法の有効性を測定した。
材料及び方法
微生物細胞
微生物細胞原料調製物(microbial cell stock preparations)を3つ用意した。
エシェリキアコリ 35℃で18時間
シュードモナスエルジノーサ 30℃で40時間
微生物細胞混合水 30℃で72時間
培養された調製物をIso標準PBSを使用して、遠心分離(6,000rpmを5分間)で3回すすいだ。この段階で、微生物のろ過CFU数として測定される微生物濃度を次のように測定した。
シュードモナスエルジノーサ 約109CFU/ml、及び
微生物混合物由来の水 約108CFU/ml
その後、滅菌PBSで微生物調製物(エシェリキアコリ及びシュードモナスエルジノーサ)を希釈し、水道水細菌混合調製物を滅菌された水道水(0.22μmの微生物フィルター(Milipore製)で水道水をろ過して調製)で希釈するか、そのままとした。従属栄養平板計数(Heterotrophic Plate Count)(HPC)は微生物ろ過(0.45μmフィルター)方法を用いて(水及び廃水の検査のための標準的な方法(Standard Methods for Examination of Water & Wastewater/ By Lenore S. Clescerl(編), Arnold E. Greenberg(編), Andrew D. Eaton(編) 18−th Edition, 2002.)、0.01mlから1リットルの範囲の懸濁検査容積で調製した。フィルターをPCA(Promega Cat.#7157A)培地上で以下のような培養条件で培養した。
シュードモナスエルジノーサ 30℃で48時間
細菌混合 30℃で72時間
検査容積1リットルまでCFU計数の結果を正規化した。
蛍光色素
以下の実験では、FM1−43スチリル色素(Nishikawa S. Sasaki F. Xenopus larvae中の測線器官の有毛細胞におけるスチリル色素FM1−43の内部移行(Internalization of styryl dye FM1−43 in the hair cells of lateral line organs in Xenopus larvae, Histochem Cytochem, 1996 44(7):733−41))をPBS中、1μg/ml濃度で使用した。
染色法
FM1−43スチリル色素を使用して、室温(約25℃)で微生物細胞調製物の蛍光染色を行った。染色時間及び作業時間枠は細胞の単層調製物を使用して測定した。信号が信号平坦域に到達するのに必要とされる時間は2分であり(T1、下記のT1とT2の測定を参照)、平坦域は、約600秒定常状態に留まる(T1、下記のT1とT2の測定を参照)ことが測定された。染色の終わりに、培養物をIso標準PBSで3回すすいだ。同様の染色法をフィルター表面に付着している培養物又は懸濁培養物に使用したことに留意されたい。(つまり、この染色法は単層調製物に特異的ではない。)
蛍光画像法
信号放出試料の蛍光画像はAxiovert200顕微鏡(Karl Zeiss)、1.3NA Plan Neofluor X10対物レンズ、BP450−490励起フィルター(励起450〜490nm、ビームスプリッターFT510nm、発光(emission)515−565nm、Karl Zeiss)を使用して取得した。
画像取得
画像は、標準Sensicam qe(Cooke Corp.)512×512CCDを使用して取得した。
画像処理
画像処理とデータ収集はImagePro+ソフトウエア(2002)を使用して実施した。
T1とT2の測定
T1を測定するために、3つの試料を原料調製物から調製した。
すなわち、水道水に天然に存在する細菌混合物を含む水道水試料(上述のように培養培地で培養しPBSで洗浄)、第2の試料である単離されたエシェリキアコリ(上述のように培養しPBSで洗浄)、第3の試料である単離されたシュードモナスエルジノーサ(上述のように培養しPBSで洗浄)。
T2の測定
3つの調製物をそれぞれ希釈した3つの試料を新たに用意し、試料を染色後約110秒でPBSで洗浄し、単層にして、信号の減衰開始まで10秒の時間系列で画像を取得した。信号の減衰開始時点をT2とした。
CFU当量の決定
CFU当量を同定する(すなわち標準CFU/ml数で本発明の測定をキャリブレートする)ために、3つの異なった地理的な場所(A、B、及びC)から水道水の試料を計3つ採取し使用した。T1の測定に関して、各場所からの調製物を上述のように調製し、単離されたエシェリキアコリ及びシュードモナスエルジノーサの試料、及び細菌の混合物試料を得た。各場所に対して、各細菌細胞の濃度又は各調製物の全細菌数をHPC形態法に基づいて事前に測定し(つまり希釈前にTBCを得る)、その後細菌混合調製物の試料(つまり各場所から計3つ)を滅菌水で希釈し、4つの近似濃度、1000CFU/ml、100CFU/ml、10CFU/ml、及び1CFU/ml、すなわち計12の試料を得た。
本発明の方法の検証
3つの異なった場所から合計48の微生物の試験サンプルを上述のように調製した(各場所から4つの試料をそれぞれ3セット)。特に、各場所からの調製物(細胞濃度不明)は、滅菌水で×10、×100に希釈するか、又は希釈しなかった。また、0.22μmメッシュフィルター(ニトロセルロース、Milipore製)でろ過して、各場所の原料調製物の試料1つを滅菌した。
蛍光測定
蛍光測定及び対応するCFU計数はすべて室温(約25℃)で行った。
画像化と信号処理
画像分析のために、微生物信号放出物(つまり計数される物体)を大きさ0.8〜1.5μmであると決定したが、これは光学顕微鏡によって可視化された時、12〜28ピクセルに対応する(非限定的な例で使用した特定の設定)。これらを選択基準とした。
結果
本発明は、増殖する(培養可能)微生物細胞が細胞外の細胞壁の脂質画分を内部移行(internalize)し、ある期間(培養不能な微生物細胞と比較して高速で)細胞内で脂質画分を凝縮できるという知見に基づく。膜輸送速度及びその細胞内濃度レベルは、細胞活動の関数の1つであり、増殖可能な微生物において非常に高レベルである。したがって発明者らは、試料中の生存可能であり増殖可能な細胞を識別しその量を定量するためにこの事象を利用することを想定してきた。
T1とT2の測定
図1は、染色後、信号が平坦域に到達するまで、FM1−43が約120秒間かけて蓄積されたことを示す。したがって、この時点を、T1としてマークする。細胞内の色素の安定した蓄積は、平坦域の開始から115〜550秒の時間枠において安定し一定に維持される。言いかえれば、細胞の混合物の細胞内区画での蛍光色素の蓄積は、115秒後に安定し、少なくとも550秒間そのままである。したがって、液体試料中のエシェリキアコリ及び/又はSp.エルジノーサ(Sp. Aeruginosa)の定量的測定において、約115秒から約550秒までの時間枠が有効な計測枠T2であると決定した。
CFU当量の測定
上述のように、CFU当量の測定に使用する12の微生物試料の画像を処理し、ここから、既定の選択基準(すなわち大きさ0.8〜1.5μm、これは光学顕微鏡によって可視化された時12〜28ピクセルに対応する、最大強度254階調)を満たす物体を選択した。
y=0.025x+0.3375、
したがって、この式を、市営水道水システムの水道水試料中に存在する微生物混合物を定量的に測定するための正規化因子と決定した。
CFU当量法の検証
未知の水道水試料に関して上記の式の精度を検証するために、さらなる分析を行った。分析は、異なった場所の市営水道水の試料に対して上述したように、しかし細菌濃度は事前に決定せずに行った。各場所から試料を3つ採取した。試料をすべて、材料及び方法で記述したように希釈し(検証ステップのための調製)、上記で確認した正規化の式を使用する本発明の方法によるCFU当量数、及び標準CFU数を測定するため、平行して検査した。試料は場所、希釈、及び3セットの試料番号、すなわち各場所に対してA、B、又はC、各希釈に対して例えばA1、A2、A3、A4、3セットに対してA1a、A1b、A1cで識別することに留意されたい。したがって、例えば、試料A1aは、場所1からの3つの試料のうちの1つで希釈していないことを意味する。
増殖可能な微生物の定量に対する標準CFU数及びCFU当量の決定の比較
本発明に記載のCFU当量は、液体試料中の微生物を高速に、及びほぼ即時に定量するための方法を提供する。CFU当量は標準CFU計数方法と比較して、単に時間がかからないというだけでなく、標準CFU計数を使用する場合、数日必要であることと比較して、ほぼ即時(5〜10分)に結果を入手できる。
Claims (40)
- 検査試料中の培養可能な微生物細胞の数を示す定量的値を決定するための方法であって、
(i)培養可能な微生物細胞を保持できる前記検査試料を、微生物細胞の膜と結合できる少なくとも1つの信号放出剤と接触させるステップであって、前記接触が、前記信号放出剤が前記微生物細胞内に内部移行(internalization)し、前記試料から放出された信号が平坦域に本質的に到達するレベルとなるのに十分である既定の第1期間(T1)行われるステップ、
(ii)前記検査試料から内部移行しなかった(non−internalized)信号放出剤を除去するステップ、
(iii)前記第1期間(T1)に続く、前記信号が前記平坦域において本質的に維持される第2期間(T2)の間、前記試料内の信号放出物から信号を放出する培養可能細胞を検出するステップであって、前記検出が前記培養可能細胞に対してあらかじめ決定された選択パラメータに基づくステップ、及び
(iv)前記選択された信号放出物に基づき、前記検査試料中の培養可能細胞の数を示す定量的値を決定するステップ
を含む方法。 - 前記信号放出剤で前記試料を染色する前に前記検査試料から液体の少なくとも一部を除去するステップを含む、請求項1に記載の方法。
- 液体の除去が、ろ過又は遠心分離の1つ又は複数による、請求項2に記載の方法。
- 前記試料が1つ又は複数の型の微生物細胞を含む、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記信号放出剤がルミネセンス剤又は光放出剤である、請求項1から45のいずれか一項に記載の方法。
- 前記試料を、前記試料に存在すると考えられる選択された微生物細胞に対して特異性を有する少なくとも1つの追加の信号放出剤と接触させるステップを含む、請求項1から8のいずれか一項に記載の方法。
- 前記試料の各信号放出剤から放出された信号を検出し、そこから試料中の培養可能な特異的な微生物細胞の数を示す定量的値を決定するステップを含む、請求項6に記載の方法。
- 各値が試料において特異的な微生物細胞の数、又は特異的な群の微生物細胞の数を示す、複数の定量的値を決定するための、請求項6又は7に記載の方法。
- 前記選択パラメータが、信号放出物から放出された信号の強度、信号放出物の大きさ、信号放出物の形態から選択された2つ以上のパラメータを含む、請求項1から8のいずれか一項に記載の方法。
- 既定の上限を下回る信号強度、及び物体の大きさのある範囲内の大きさを少なくとも有する信号放出物のみが検出される、請求項9に記載の方法。
- 既定の強度範囲内の信号強度、及び物体の大きさのある範囲内の大きさを少なくとも有する信号放出物のみが検出される、請求項9に記載の方法。
- 前記選択された物体の前記定量的値を算出するステップを含む、請求項9から11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記定量的値が、前記選択された物体の平均平方根強度を含む、請求項12に記載の方法。
- 前記定量的値が、コロニー形成単位(CFU)数に対応するように正規化され、正規化された定量的値がCFU当量である、請求項12又は13に記載の方法。
- 前記正規化が、既定の細胞特異的な正規化因子で前記定量的値を因数に分解し(factoring)、前記CFU当量を得るステップを含む、請求項14に記載の方法。
- 検査試料中の培養可能な微生物細胞の数と等しい定量的値を決定するためのキットであって、
(i)微生物細胞の膜と結合できる少なくとも1つの信号放出剤、
(ii)信号放出剤が微生物細胞内に内部移行(internalization)し、試料から放出された信号が平坦域に本質的に到達するレベルとなるのに十分である既定の第1期間(T1)、試料を前記少なくとも1つの信号放出剤と接触させるための命令、
(iii)前記試料から非結合信号放出剤(non−associated signal emitting agent)を除去するための命令、
(iv)前記試料内の信号放出物から信号を放出する培養可能細胞を検出し選択するための命令であって、前記検出が前記培養可能細胞に対してあらかじめ決定された選択パラメータに基づいており、前記第1期間(T1)に続く、前記信号が前記平坦域において本質的に維持される第2期間(T2)の間、検出及び選択を行う、命令、
(v)そこから検査試料中の培養可能細胞の数を示す定量的値を決定するために、前記選択された信号放出物を使用するための命令
を含むキット。 - 前記信号放出剤で試料を染色する前に前記試料から液体の少なくとも一部を除去するための命令を含む、請求項16に記載のキット。
- 2つ以上の信号放出剤を含む、請求項16又は16に記載のキット。
- 信号放出剤がルミネセンス剤又は光放出剤である、請求項16から18のいずれか一項に記載のキット。
- 前記信号放出剤が蛍光色素である、請求項19に記載のキット。
- 選択パラメータ、及び前記試料内の信号放出物から信号を放出する培養可能な微生物細胞を選択するために前記選択パラメータの少なくとも2つを使用するための命令を含む、請求項16から20のいずれか一項に記載のキット。
- 前記選択パラメータが、既定の信号強度の上限、信号強度範囲、既定の信号放出物の大きさの範囲内の大きさ、及び信号放出形態を含む、請求項21に記載のキット。
- 既定の上限を下回る信号強度を有する、又は物体の大きさのある範囲内であり、既定の大きさの範囲内の大きさを有する信号放出物のみを選択するための前記選択パラメータの少なくとも2つを使用するための命令を含む、請求項22に記載のキット。
- 前記選択された物体から前記定量的値を算出するための命令を含む、請求項15から23のいずれか一項に記載のキット。
- 前記命令が、前記選択された物体の平均平方根強度を計算し、それから前記定量的値を得ることを含む、請求項24に記載のキット。
- コロニー形成単位(CFU)数当量を得るために正規化因子で前記定量的値を正規化するための命令を含む、請求項16から25のいずれか一項に記載のキット。
- 1つ又は複数の既定の正規化因子、及び測定された定量的値から前記CFU当量を導き出すために前記既定の正規化因子を使用するための命令を含む、請求項26に記載のキット。
- 検査試料中の培養可能な微生物細胞の数を示す定量的値を決定するためのシステムであって、
(i)試料を保持し、試料と1つ又は複数の信号放出剤との接触を可能とするための運搬体、
(ii)試料内の信号放出物を検出し、それに対応するデータを出力するための検出器、
(iii)既定の選択パラメータ及び複数の既定の正規化因子を有するデータベースを含むメモリユニットであって、各選択パラメータ及び各正規化因子が微生物細胞、又は微生物細胞群に特異的である、メモリユニット、
(iv)検出器から出力データを受信し、前記メモリユニットから前記パラメータ及び前記正規化因子の1つ又は複数を受信し、前記パラメータ及び前記正規化因子で前記出力データを処理して、前記試料中の前記培養可能な微生物細胞の数を示す前記定量的値を決定するための処理ユニット
を含むシステム。 - 前記運搬体が、前記試料から液体の少なくとも一部をろ過除去するためのフィルターを含む、請求項28に記載のシステム。
- 前記検出器が、前記検査試料中の信号放出物の画像を取得するためのカメラを含む、請求項28又は29に記載のシステム。
- 前記処理ユニットが、前記検出器から受信したデータから、検出された各信号放出物の信号強度、信号放出物の大きさ、信号放出物の形態を測定するように構成されている、請求項30に記載のシステム。
- 前記処理ユニットが、既定の強度閾値を下回る信号強度、及び既定の大きさの範囲内の大きさを有する信号放出物を選択するように構成されている、請求項28から31のいずれか一項に記載のシステム。
- 前記処理ユニットが、既定の強度範囲内の信号強度、及び既定の範囲内の大きさを有する信号放出物を選択するように構成されている、請求項28から31のいずれか一項に記載のシステム。
- 前記処理ユニットが、選択された信号放出物から放出された強度の平均平方根に基づいて定量的値を出力するように構成されている、請求項32又は33に記載のシステム。
- 前記処理ユニットが、前記データベースから検索された正規化因子で定量的値を正規化するように構成されている、請求項28から34のいずれか一項に記載のシステム。
- 1つ又は複数の信号放出剤のカセットを含み、前記カセットが前記1つ又は複数の信号放出剤を前記運搬体に放出するのを可能にし、前記運搬体内での前記1つ又は複数の信号放出剤と検査試料との接触を可能にするようにあらかじめプログラムされている、請求項28から35のいずれか一項に記載のシステム。
- それぞれが信号放出剤を運搬するカセットのアレイを含み、前記カセットのアレイから1つ又は複数の信号放出剤を運搬体に放出するのを可能にするようにあらかじめプログラムされている、請求項28から35のいずれか一項に記載のシステム。
- 検査試料中の培養可能な微生物細胞の数を示す定量的値を決定するための方法を実施するマシンによって実行可能な命令のプログラムを確実に実装する、マシンによって読取り可能なプログラムストレージデバイスであって、前記方法が、
(i)培養可能な微生物細胞を保持できる前記検査試料を、微生物細胞の膜と結合できる少なくとも1つの信号放出剤と接触させるステップであって、信号放出剤が微生物細胞内に内部移行(internalization)し、試料から放出された信号が平坦域に本質的に到達するレベルとなるのに十分である既定の第1期間(T1)、前記接触が行われるステップ、
(ii)前記検査試料から非内部移行信号放出剤(non−internalized signal emitting agent)を除去するステップ、
(iii)前記第1期間(T1)に続く、前記信号が前記平坦域において本質的に維持される第2期間(T2)の間、前記試料内の信号放出物から信号を放出する培養可能細胞を検出及び選択するステップであって、前記検出が前記培養可能細胞に対してあらかじめ決定された選択パラメータに基づいているステップ、及び
(iv)前記選択された信号放出物に基づき、検査試料中の培養可能細胞の数を示す定量的値を決定するステップ
を含む方法。 - 請求項1から15のいずれか一項に記載の方法を実施するための前記マシンによって実行可能な、請求項38のプログラムストレージデバイス。
- コンピュータ上で実行される場合、請求項1から15のいずれか一項に記載のすべてのステップを実施するためのコンピュータプログラムコード手段を含み、プログラムストレージデバイス内に実装されているコンピュータプログラム。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US7944508P | 2008-07-10 | 2008-07-10 | |
US61/079,445 | 2008-07-10 | ||
PCT/IL2009/000690 WO2010004567A1 (en) | 2008-07-10 | 2009-07-09 | Method, kit and system for culturable cell count |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011527562A true JP2011527562A (ja) | 2011-11-04 |
JP2011527562A5 JP2011527562A5 (ja) | 2013-05-16 |
Family
ID=41213508
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011517312A Pending JP2011527562A (ja) | 2008-07-10 | 2009-07-09 | 培養可能な細胞の計数のための方法、キット及びシステム |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20110177549A1 (ja) |
EP (1) | EP2318507A1 (ja) |
JP (1) | JP2011527562A (ja) |
CN (2) | CN104250661A (ja) |
AU (1) | AU2009269581C1 (ja) |
CA (1) | CA2730197A1 (ja) |
HK (1) | HK1203563A1 (ja) |
MX (1) | MX2011000269A (ja) |
RU (1) | RU2517618C2 (ja) |
WO (1) | WO2010004567A1 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018508190A (ja) * | 2015-01-12 | 2018-03-29 | ティーエーカウント イグザクト リミテッドTacount Exact Ltd. | 生存微生物の迅速な計数のためのスペクトル強度比(sir)分析 |
JP2020505020A (ja) * | 2017-01-09 | 2020-02-20 | ポカード・ディアグノスティクス・リミテッドPocared Diagnostics, Ltd. | 単一蛍光膜色素染色およびフローサイトメトリーによる特有のスペクトル強度比分析に基づく迅速抗菌薬感受性試験 |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102321530B (zh) * | 2011-09-08 | 2013-04-17 | 上海炎景生物工程有限公司 | 自动化菌落拣选装置的一种拾取头 |
KR101710969B1 (ko) * | 2013-05-08 | 2017-02-28 | 후아웨이 테크놀러지 컴퍼니 리미티드 | 무선 네트워크 정보 관리 방법 및 네트워크 장치 |
US20150218612A1 (en) | 2014-02-06 | 2015-08-06 | Tacount Exact Ltd. | Apparatus, system and method for live bacteria microscopy |
EP3281136B1 (en) * | 2015-04-09 | 2024-06-05 | Koninklijke Philips N.V. | Method and apparatus for estimating the quantity of microorganisms within a taxonomic unit in a sample |
CN107043803A (zh) * | 2017-05-24 | 2017-08-15 | 中检科(北京)实验室能力评价有限公司 | 药品中霉菌和酵母菌总数计数能力验证样品及其制备方法 |
DE102018122422A1 (de) * | 2018-09-13 | 2020-03-19 | Bluelab Wasseranalysesysteme Gmbh | Verfahren zur Messung einer Trinkwasserkontamination in einer Trinkwasserleitung durch Mikroorganismen |
CN110484465B (zh) * | 2019-08-01 | 2021-06-04 | 金华康扬环境科技有限公司 | 一种vbnc细菌的复苏培养基及其制备方法与应用 |
CN112098384B (zh) * | 2020-09-22 | 2023-09-01 | 华东交通大学 | 一种快速预测水质是否生物稳定的简捷方法 |
CN114112534B (zh) * | 2021-12-06 | 2024-03-22 | 长春工业大学 | 一种适用于微生物悬浮液和固体培养基的智能取样及检测装置 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6673568B1 (en) * | 1999-10-25 | 2004-01-06 | Genprime, Inc. | Method and apparatus for prokaryotic and eukaryotic cell quantitation |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5545535A (en) * | 1993-04-13 | 1996-08-13 | Molecular Probes, Inc. | Fluorescent assay for bacterial gram reaction |
FR2707665A1 (fr) * | 1993-06-28 | 1995-01-20 | Chemunex | Procédé de mesure et d'évaluation de la vitalité des microorganismes et ses applications. |
BE1012049A6 (fr) * | 1998-06-25 | 2000-04-04 | Ucb Bioproducts | Procede pour la determination d'antibiotique a noyau beta-lactame dans un liquide biologique. |
-
2009
- 2009-07-09 CA CA2730197A patent/CA2730197A1/en not_active Abandoned
- 2009-07-09 AU AU2009269581A patent/AU2009269581C1/en not_active Ceased
- 2009-07-09 US US13/003,128 patent/US20110177549A1/en not_active Abandoned
- 2009-07-09 CN CN201410283751.9A patent/CN104250661A/zh active Pending
- 2009-07-09 RU RU2011102725/10A patent/RU2517618C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2009-07-09 MX MX2011000269A patent/MX2011000269A/es active IP Right Grant
- 2009-07-09 WO PCT/IL2009/000690 patent/WO2010004567A1/en active Application Filing
- 2009-07-09 EP EP09787468A patent/EP2318507A1/en not_active Withdrawn
- 2009-07-09 JP JP2011517312A patent/JP2011527562A/ja active Pending
- 2009-07-09 CN CN2009801269826A patent/CN102089419A/zh active Pending
-
2011
- 2011-09-02 HK HK15102500.2A patent/HK1203563A1/xx unknown
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6673568B1 (en) * | 1999-10-25 | 2004-01-06 | Genprime, Inc. | Method and apparatus for prokaryotic and eukaryotic cell quantitation |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN6014000016; 'Fluorescence staining of live cyanobacterial cells suggest non-stringent chromosome segregation and' BMC Cell Biology, (2007), Vol. 8, No. 39 * |
JPN6014000018; 'Methods for Detecting Internalized, FM 1-43 Stained Particles in Epithelial Cells and Monolayers' Biophysical Journal, (2006), Vol. 91, p. 3872-3883 * |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018508190A (ja) * | 2015-01-12 | 2018-03-29 | ティーエーカウント イグザクト リミテッドTacount Exact Ltd. | 生存微生物の迅速な計数のためのスペクトル強度比(sir)分析 |
JP2020156499A (ja) * | 2015-01-12 | 2020-10-01 | ティーエーカウント イグザクト リミテッドTacount Exact Ltd. | 生存微生物の迅速な計数のためのスペクトル強度比(sir)分析 |
JP6991274B2 (ja) | 2015-01-12 | 2022-01-12 | ティーエーカウント イグザクト リミテッド | 生存微生物の迅速な計数のためのスペクトル強度比(sir)分析 |
US11306344B2 (en) | 2015-01-12 | 2022-04-19 | Tacount Exact Ltd. | Spectral intensity ratio (SIR) analysis for rapid live microbial enumeration |
JP2020505020A (ja) * | 2017-01-09 | 2020-02-20 | ポカード・ディアグノスティクス・リミテッドPocared Diagnostics, Ltd. | 単一蛍光膜色素染色およびフローサイトメトリーによる特有のスペクトル強度比分析に基づく迅速抗菌薬感受性試験 |
JP7154615B2 (ja) | 2017-01-09 | 2022-10-18 | ポカード・ディアグノスティクス・リミテッド | 単一蛍光膜色素染色およびフローサイトメトリーによる特有のスペクトル強度比分析に基づく迅速抗菌薬感受性試験 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104250661A (zh) | 2014-12-31 |
WO2010004567A1 (en) | 2010-01-14 |
AU2009269581B2 (en) | 2014-07-03 |
RU2011102725A (ru) | 2012-08-20 |
CN102089419A (zh) | 2011-06-08 |
CA2730197A1 (en) | 2010-01-14 |
EP2318507A1 (en) | 2011-05-11 |
MX2011000269A (es) | 2011-05-03 |
AU2009269581A1 (en) | 2010-01-14 |
RU2517618C2 (ru) | 2014-05-27 |
HK1203563A1 (en) | 2015-10-30 |
US20110177549A1 (en) | 2011-07-21 |
AU2009269581C1 (en) | 2014-09-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2011527562A (ja) | 培養可能な細胞の計数のための方法、キット及びシステム | |
Schumacher et al. | In vitro antimicrobial susceptibility testing methods: agar dilution to 3D tissue-engineered models | |
JP6186414B2 (ja) | 固体又は半固体培地上の微生物のキャラクタリゼーション方法 | |
JP4363980B2 (ja) | 複製細胞の迅速な検出 | |
JP2010213598A (ja) | 抗菌薬の微生物に対する有効性の検査方法 | |
Scheres et al. | Staphylococcus–Candida interaction models: antibiotic resistance testing and host interactions | |
JP2014236685A (ja) | 嫌気性アンモニア酸化細菌の検出方法 | |
Buchanan et al. | Smartphone-based autofluorescence imaging to detect bacterial species on laboratory surfaces | |
JP2004267099A (ja) | 大腸菌の検出方法及び大腸菌検出用ファージ | |
AU2014240348A1 (en) | Method, kit and system for culturable cell count | |
ES2893198T3 (es) | Un método de cuantificación de la capacidad de cultivo celular bacteriano individuales usando parámetros independientes del cultivo | |
JP2008054509A (ja) | 生菌、死菌及び疑似生菌の存在割合判別方法 | |
JP2010130918A (ja) | 微生物検出方法 | |
JP2011172509A (ja) | 微生物検出方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20120330 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130313 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140114 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20140410 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140411 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20141028 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20150126 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20150728 |