JP2011517489A - グラジエント溶出マルチカラム分離法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明の分離法は、直列に接続された少なくとも2個のクロマトグラフィーカラムを備える装置を用意する工程と、装置の単一のポイントから、分離対象混合物を断続的に注入する工程と、装置の単一のポイントから、目的物質が濃縮されたフラクションを断続的に分取する工程と、異なる溶出力を有する溶離剤を各カラムに注入する工程と、溶離剤を注入するポイントを移動させる工程とを含む。
【選択図】図1
Description
−直列に接続された少なくとも2個のクロマトグラフィーカラムを備える装置を用意する工程と、
−前記装置における単一のポイントから、分離対象混合物を断続的に注入する工程と、
−前記装置における単一のポイントから、フラクションを断続的に分取する工程と、
−異なる溶出力を有する溶離剤を各カラムに注入する工程と、
−溶離剤を注入するポイントを移動させる工程とを含む分離法を提案する。
−直列に接続された3個のクロマトグラフィーカラムを備える装置を用意する工程と、
−前記装置における単一のポイントから、分離対象混合物を断続的に注入する工程と、
−前記装置における単一のポイントから、目的物質が濃縮されたフラクションを断続的に分取する工程と、
−異なる溶出力を有する溶離剤を各カラムに注入する工程と、
−溶離剤を注入するポイントを移動させる工程とを含む分離法を提案する。
−液体、例えば、水および/または有機溶媒(塩または緩衝液を任意で混合してもよい)
−超臨界ガスおよび/または超臨界流体(有機溶媒を任意で混合してもよい)
などが挙げられる。
−粒子径が50μmから400μmの場合には0.1〜10バール(bar)、
−粒子径が5μmから90μmの場合には3〜50バール(bar)、
−液相に溶解したCO2、液体状態のCO2または超臨界状態のCO2を含む溶離剤の場合には40〜300バール(bar)、
が印加される。
本実施例は、本発明にかかる方法とバッチ法を、シミュレーションによって比較したものである。本実施例におけるシミュレーションは、当該実施例で説明するシーケンスを複数のサイクルにわたって繰り返した場合を正確に再現している。
本実施例は、図2の2個のカラムについて、実施例1の条件を繰り返し適用するものである。カラムの長さは10cmであり、カラムの直径は1cmである。
本実施例は、本発明にかかる方法を、Fmoc法(9−フルオレニルメトキシカルボニル法)による固相上でのペプチド合成で得られたロイシン−エンケファリンを含む、2種類の錯体混合物M1,M2に対して適用したものである。これらの各フィードについて、以下に記載される方法に従って、類似の方法を適用した。
HETP=A×dp+Bu
[式中、HETPは理論段相当高さ(cm)を示し、uは流体の線速度(cm/秒)を示し、dpは粒子径(cm)を示し、AおよびBは係数である。(dp=20μmとした際に、A=7.8、B=0.588(秒)となる。Bは粒子径の二乗に依存する。)]
・ ラインA:シーケンスS1において33〜33.5体積%エタノールを5mL/分の速度で供給し、シーケンスS2において33.5〜35体積%エタノールを5mL/分の速度で供給する。
・ ラインB:20体積%エタノールを0.5mL/分の速度で供給する。
・ ラインC:20体積%エタノールを0.5mL/分の速度で供給する。
・ ラインD:50体積%エタノールを6mL/分の速度で供給する。
・ ラインA:シーケンスS1において33.1〜33.6体積%エタノールを3.5mL/分の速度で供給し、シーケンスS2において33.6〜35体積%エタノールを3.5mL/分の速度で供給する。
・ ラインB:20体積%エタノールを0.28mL/分の速度で供給する。
・ ラインC:20体積%エタノールを0.3mL/分の速度で供給する。
・ ラインD:50体積%エタノールを5mL/分の速度で供給する。
Claims (15)
- 分離対象混合物から目的物質が濃縮されたフラクションを分離する方法であって、
直列に接続された少なくとも2個のクロマトグラフィーカラムを備える装置を用意する工程と、
前記装置における単一のポイントから、分離対象混合物を断続的に注入する工程と、
前記装置における単一のポイントから、フラクションを断続的に分取する工程と、
異なる溶出力を有する溶離剤を各カラムに注入する工程と、
溶離剤を注入するポイントを移動させる工程と、
を含む分離法。 - 請求項1において、分離対象混合物を注入する工程を、サイクル単位で実行する分離法。
- 請求項1または2において、濃縮されたフラクションを分取する工程を、サイクル単位で実行する分離法。
- 請求項3において、溶離剤の注入ポイントを移動させる工程を、ピリオド単位で実行する分離法。
- 請求項1から4のいずれか一項において、溶離剤を連続的または断続的に注入する分離法。
- 請求項1から5のいずれか一項において、少なくとも1種の溶離剤を断続的に注入する分離法。
- 請求項1から6のいずれか一項において、各溶離剤の組成が一定である分離法。
- 請求項1から7のいずれか一項において、少なくとも1種の溶離剤の組成が、他の溶離剤とは独立して可変である分離法。
- 請求項1から8のいずれか一項において、少なくとも1種の溶離剤を非同期的に移動させる分離法。
- 請求項1から9のいずれか一項において、少なくとも2個のカラムが、移動相の流れ方向に沿って、処理対象のフィードを注入するポイントと目的物質を分取するポイントとの間に存在する分離法。
- 請求項1から10のいずれか一項において、系の全てのカラムが、移動相の流れ方向に沿って、処理対象のフィードを注入するポイントと目的物質を分取するポイントとの間に存在する分離法。
- 請求項1から11のいずれか一項において、分離対象混合物が、注入ループ、注入ポンプおよび加圧容器で構成された群から選択される注入手段によって注入される分離法。
- 請求項1から12のいずれか一項において、分離対象混合物が、増設カラムに通されてから、前記装置に注入される分離法。
- 請求項1から13のいずれか一項において、増設カラムが、混合物の注入手段と混合物が装置に注入される単一のポイントとの間に存在するか、または前記装置における2個のカラム間に存在する分離法。
- 請求項1から14のいずれか一項に記載の分離法の、合成分子、天然抽出物、発酵由来のタンパク質、合成もしくは半合成によるタンパク質、免疫グロブリン、モノクローナル抗体、発酵由来のペプチド、または合成もしくは半合成によるペプチドを分離するための使用。
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