JP2011505129A - 核酸と信号プローブの同時等温増幅を用いた核酸の検出方法 - Google Patents
核酸と信号プローブの同時等温増幅を用いた核酸の検出方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2011505129A JP2011505129A JP2010535866A JP2010535866A JP2011505129A JP 2011505129 A JP2011505129 A JP 2011505129A JP 2010535866 A JP2010535866 A JP 2010535866A JP 2010535866 A JP2010535866 A JP 2010535866A JP 2011505129 A JP2011505129 A JP 2011505129A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- dna
- rna
- target
- hybrid
- isothermal amplification
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6853—Nucleic acid amplification reactions using modified primers or templates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2525/00—Reactions involving modified oligonucleotides, nucleic acids, or nucleotides
- C12Q2525/10—Modifications characterised by
- C12Q2525/161—Modifications characterised by incorporating target specific and non-target specific sites
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2527/00—Reactions demanding special reaction conditions
- C12Q2527/101—Temperature
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2531/00—Reactions of nucleic acids characterised by
- C12Q2531/10—Reactions of nucleic acids characterised by the purpose being amplify/increase the copy number of target nucleic acid
- C12Q2531/119—Strand displacement amplification [SDA]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
【選択図】図2
Description
以下、実施形態を参照して本発明をさらに詳しく説明する。これら実施形態は単に例示のために提供され、本発明の範囲を制限するものではないことは、当該分野における通常の知識を有する者であれば明確である。
DNAの等温増幅
標的DNAとしてクラミジア・トラコマチス(Chlamydia trachomatis)ゲノムDNAを使用した。グラム陰性桿菌であるクラミジア・トラコマチスゲノムDNAを抽出するために、クラミジア・トラコマチス(ATCC VR−887)でG−spinTMゲノムDNA extraction Kit(イントロン Biotechnology,Cat.No.17121)を使用して、ゲノムDNAを抽出した後、増幅反応を実施した。ゲノムDNAの抽出は、菌懸濁液500mlを13000rpmで1分間遠心分離して上層液を除去し、500mlPBS(pH 7.2)で混ぜて遠心分離して上層液を除去した後、RNase A、Proteinase Kが添加されたG−buffer溶液300mlを添加して、細胞粒を懸濁し、65℃で15分間静置させた。次に、結合バッファー250mlを入れてよく混合した後、スピンカラムにDNAを結合させた。500mlの洗浄バッファーAを添加した後、13000rpmで1分間遠心分離して除去し、洗浄バッファーBを500ml添加して遠心分離した。1.5ml微少遠心管にカラムを移して、50mlの溶出バッファーを添加した後、1分間遠心分離して、15.8ng/mlのゲノムDNAを得た。これを所定量希薄して等温増幅反応の鋳型として使用した。
配列番号1:5′−TAAACATGAAAACTCGTTCCG−3′
配列番号2:5′−TTTTATGATGAGAACACTTAAACTCA−3′
配列番号3:5′−ACCGCATCGAATCGATGTAAAATAGAAAATCGCATGCAAGATA−3′
配列番号4:5′−CGATTCCGCTCCAGACTTAAAAAGCTGCCTCAGAATATACTCAG−3′
配列番号5:5′−フルオレスセイン−GCTTTGTTAGGTAAAGCTCTGATATTTG−biotin−3′
酵素免疫反応(enzyme−immuno assay)によるDNA検出
実施形態1で得られた増幅物に170mlのPBSTバインディングバッファーを添加して反応混合物を製造し、組成は次の通りである。136mM NaCl、2.7mM KCl、8.1mM Na2HPO4、1.5mM KH2PO4、0.05% Tween 20,1/7000希薄されたanti−F−HRP(Perkin Elmer、horseradish peroxidase conjugated anti−fluorescent antibody)。前記混合物をストレプトアビジン(streptavidin)がコーティングされたマイクロプレートウェル(Roche)に移した後、37℃で、10分間、200rpmで反応させた。ウェル内の上等液を除去し、PBST洗浄バッファー(前記バインディングバッファーで抗体を除去しものを除いたバインディングバッファーと同じ組成)300mlを添加して洗浄した。洗浄が終わったウェルに200ml HRP基質、3,3′5,5′−テトラメチルベンジジン(Bio−Rad、TMB)を添加して、5分間暗い所で発色させた後、100ml 1N H2SO4を添加して反応を停止させた。実験区と対照区の有效性の判断のためにELISAリーダー(Zenyth 340rt)を利用して465nmでの吸光度値を比べ、数値の差が大きいほど有效であると判断した。
側流クロマトグラフィー(lateral−flow chromatography)によるDNAの検出
100mgのストレプトアビジン(Sigma)に40nm直径の金コロイド溶液(Chemicon)10mlを添加して、2分間ボルテックスさせて、室温で、3時間反応させた。反応物に1%BSA(dissolved in 2mM borate)溶液1mlを混合し、10000rpm、15分、4℃で遠心分離させた後、上層液をとり除去した。上層液が除去された反応物に2mM ホウ酸緩衝液1mlを入れて3回洗浄した後、1%BSA(dissolved in 2mM borate)溶液を添加して再懸濁させた。
RNAの等温増幅
標的RNAとしては、pDrive vectorにNorovirus G1 Type RNAのcDNAがクローニングされたプラスミドDNAからインビトロ転写させたRNAを使用した。インビトロ転写反応を行うために、MEGAscript High Yield Transcription Kit(Ambion,Cat.No.AM1333)を利用した。インビトロ転写反応は次のように行った。まず、鋳型として使用されるプラスミドDNAを適切な制限酵素を利用して線形化させた後、1mgのDNAに8mlのdNTP(dATP、dUTP、dGTP、dCTP)混合物、2mlの10×反応バッファー、2mlのT7 RNA ポリメラーゼ及びヌクレアーゼ・フリー水を加えて、最終容積を20mlに調整した後、よく混合して37℃で4時間反応させた。反応が終了した後、鋳型として使われたDNAを除去するために1mlのTurbo DNaseを加えて、37℃で15分間反応させた後、RNeasy MinElute Cleanup Kit(QIAGEN、Cat.No.74204)を利用して増幅されたRNAを精製した。このRNAを一定量希薄して等温増幅反応の鋳型として使用した。
配列番号6:5′−ATGCGGTTCCACGATCTTGG−3′
配列番号7:5′−GCGACTGCTGTTGAATCACC−3′
配列番号8:5′−CCAATTCACAAGTGAAGAGCAAAATCTCCTGCCCGAATTCGTAA−3′
配列番号9:5′−TCTACCGCTGATCATGTGCTAAAATGCTC
AGCTGTATTAGCCTC−3′
配列番号10:5′−フルオレスセイン−GCCCGAATTCGTAAATGATGATGGCGTC−biotin−3′
酵素免疫反応(enzyme−immuno assay)によるRNAの検出
実施形態4で得られた増幅物に170mlのPBSTバインディングバッファーを添加して反応混合物を製造し、組成は下記の通りである。136mM NaCl、2.7mM KCl、8.1mM Na2HPO4、1.5mM KH2PO4、0.05% Tween 20,1/7000希薄されたanti−F−HRP(Perkin Elmer、horseradish peroxidase conjugated anti−fluorescent antibody)。前記混合物をストレプトアビジン(streptavidin)がコーティングされたマイクロプレートウェル(Roche)に移した後、37℃で10分間200rpmで反応させた。ウェル内の上等液を除去し、PBST 洗浄バッファー(前記バインディングバッファーで抗体を除去したものを除いてバインディングバッファーと同じ組成)300mlを添加して洗浄した。洗浄を終了したウェルに200ml HRP 基質、3,3′5,5′−テトラメチルベンジジン(Bio−Rad、TMB)を添加して 5分間暗い所で発色させた後、100ml 1N H2SO4を添加して反応を停止させた。実験区と対照区の有效性の判断のために、ELISAリーダー(Zenyth 340rt)を利用して、465nmでの吸光度値を比べ、数値の差が大きいほど有效であると判断した。
以上で詳細に説明したように、本発明は標的核酸を等温で迅速且つ正確に増幅する方法及び等温で標的核酸の増幅及び信号プローブの増幅を同時に行う核酸の検出方法を提供する效果を奏する。本発明によれば、従来の方法であるPCR方法などに比べて簡便で、汚染の危険がなく、迅速・正確に標的核酸を増幅することができ、信号プローブを同時に増幅することができるので、病原菌の検出及び確認、規定された表現型をもたらす遺伝子変更の検出、遺伝疾患や疾患に対する感受性の診断、遺伝子発現の評価といった様々なゲノムプロジェクトに応用されて、分子生物学的研究及び疾病診断に有用である。
Claims (29)
- (a)(i)標的DNA、(ii)前記標的DNAと相補的な塩基配列を有する外部プライマーセット、及び(iii)前記標的DNAと3′末端部分が相補的で、5′末端部分は非相補的な塩基配列を有するDNA−RNA−DNAハイブリッドプライマーセットを含む反応混合物を変性させる段階と;
(b)前記(a)段階で変性された反応混合物に鎖置換が可能なDNA重合酵素、RNA分解酵素及び前記外部プライマーセットとハイブリッドプライマーセットによって生成される増幅産物と相補的な塩基配列を有するDNA−RNA−DNAハイブリッド信号プローブを含む酵素反応混合液を加えた後、前記標的DNAと前記信号プローブを等温で同時に増幅させる段階と;を含むことを特徴とする標的DNAの等温増幅方法。 - 前記外部プライマーセットは、オリゴDNA、オリゴRNA及びハイブリッドオリゴRNA−DNAで構成された群から選択されるいずれか1つであることを特徴とする請求項1に記載の標的DNAの等温増幅方法。
- 前記DNA−RNA−DNAハイブリッドプライマーセットは、5′末端DNA−RNA部分が標的DNA配列と非相補的な塩基配列を有し、3′末端DNA部分が標的DNAと相補的な塩基配列を有することを特徴とする請求項1に記載の標的DNAの等温増幅方法。
- 前記DNA重合酵素は、耐熱性DNA重合酵素であることを特徴とする請求項1に記載の標的DNAの等温増幅方法。
- 前記耐熱性DNA重合酵素は、Bst DNA重合酵素、exo(−)vent DNA重合酵素、exo(−)Deep vent DNA重合酵素、exo(−)Pfu DNA重合酵素、Bca DNA重合酵素、及びパイ29 DNA重合酵素で構成された群から選択されるいずれか1つであることを特徴とする請求項4に記載の標的DNAの等温増幅方法。
- 前記RNA分解酵素は、RNaseHであることを特徴とする請求項1に記載の標的DNAの等温増幅方法。
- 前記DNA−RNA−DNAハイブリッドプライマーは32〜66塩基からなることを特徴とする請求項1に記載の標的DNAの等温増幅方法。
- 前記DNA−RNA−DNAハイブリッドプライマーはDNA部分の長さがそれぞれ15〜30塩基からなり、RNA部分は長さが2〜6塩基からなることを特徴とする請求項7に記載の標的DNAの等温増幅方法。
- 前記DNA−RNA−DNAハイブリッド信号プローブは18〜38塩基からなることを特徴とする請求項1に記載の標的DNAの等温増幅方法。
- 前記DNA−RNA−DNAハイブリッド信号プローブは、DNA部分の長さがそれぞれ8〜16塩基からなり、RNA部分は長さが2〜6塩基からなることを特徴とする請求項9に記載の標的DNAの等温増幅方法。
- 前記DNA−RNA−DNAハイブリッド信号プローブは、末端が標識物質で標識されていることを特徴とする請求項1に記載の標的DNAの等温増幅方法。
- 前記標識物質は、ビオチン、フルオレセント、ジゴキシゲニン、2,4−ジニトロフェニルからなる群から選択されることを特徴とする請求項11に記載の標的DNAの等温増幅方法。
- 前記等温増幅は、30〜75℃で行うことを特徴とする請求項1に記載の標的DNAの等温増幅方法。
- (a)(i)標的DNA、(ii)前記標的DNAと相補的な塩基配列を有する外部プライマーセット、及び(iii)前記標的DNAと3′末端部分が相補的で、5′末端部分は非相補的な塩基配列を有するDNA−RNA−DNAハイブリッドプライマーセットを含む反応混合物を変性させる段階と;
(b)前記(a)段階で変性された反応混合物に鎖置換が可能なDNA重合酵素、RNA分解酵素及び前記外部プライマーセットとハイブリッドプライマーセットにより生成される増幅産物と相補的な塩基配列を有するDNA−RNA−DNAハイブリッド信号プローブを含む酵素反応混合液を加えた後、前記標的DNAと前記信号プローブを等温で同時に増幅させる段階と;
(c)前記(b)段階で増幅された標的DNAと信号プローブの増幅産物から酵素免疫反応及び側流クロマトグラフィーを利用して標的DNAを検出する段階と;を含むことを特徴とする標的DNAの検出方法。 - (i)標的RNA、(ii)前記標的RNAと相補的な塩基配列を有する外部プライマーセット、及び(iii)前記標的RNAと3′末端部分が相補的で、5′末端部分は非相補的な塩基配列を有するDNA−RNA−DNAハイブリッドプライマーセットを含む反応混合物に、(iv)鎖置換が可能なDNA重合酵素、RNA分解酵素及び逆転写酵素及び前記外部プライマーセットとハイブリッドプライマーセットにより生成される増幅産物と相補的な塩基配列を有するDNA−RNA−DNAハイブリッド信号プローブを含む酵素反応混合液を混合した後、前記標的DNAと前記信号プローブを等温で同時に増幅させる段階と;を含むことを特徴とする標的RNAの等温増幅方法。
- 前記外部プライマーセットは、オリゴDNA、オリゴRNA及びハイブリッドオリゴRNA−DNAで構成された群から選択されるいずれか1つであることを特徴とする請求項15に記載の標的RNAの等温増幅方法。
- 前記DNA−RNA−DNAハイブリッドプライマーセットは、5′末端DNA−RNA部分が標的RNA配列と非相補的な塩基配列を有し、3′末端DNA部分が標的RNAと相補的な塩基配列を有することを特徴とする請求項15に記載の標的RNAの等温増幅方法。
- 前記DNA重合酵素は、耐熱性DNA重合酵素であることを特徴とする請求項15に記載の標的RNAの等温増幅方法。
- 前記耐熱性DNA重合酵素は、Bst DNA重合酵素、exo(−)vent DNA重合酵素、exo(−)Deep vent DNA重合酵素、exo(−)Pfu DNA重合酵素、Bca DNA重合酵素、及びパイ29 DNA重合酵素で構成された群から選択されるいずれか1つであることを特徴とする請求項18に記載の標的RNAの等温増幅方法。
- 前記RNA分解酵素は、RNaseHであることを特徴とする請求項15に記載の標的RNAの等温増幅方法。
- 前記逆転写酵素は、AMV(avian myeloblastosis virus)逆転写酵素またはMMLV(maloney murine leukemia virus)逆転写酵素であることを特徴とする請求項15に記載の標的RNAの等温増幅方法。
- 前記DNA−RNA−DNAハイブリッドプライマーは、32〜66塩基からなることを特徴とする請求項15に記載の標的RNAの等温増幅方法。
- 前記DNA−RNA−DNAハイブリッドプライマーは、DNA部分の長さがそれぞれ15〜30塩基からなり、RNA部分は長さが2〜6塩基からなることを特徴とする請求項22に記載の標的RNAの等温増幅方法。
- 前記DNA−RNA−DNAハイブリッド信号プローブは、18〜38塩基からなることを特徴とする請求項15に記載の標的RNAの等温増幅方法。
- 前記DNA−RNA−DNAハイブリッド信号プローブは、DNA部分の長さがそれぞれ8〜16塩基からなり、RNA部分は長さが2〜6塩基からなることを特徴とする請求項24に記載の標的RNAの等温増幅方法。
- 前記DNA−RNA−DNAハイブリッド信号プローブは、末端が標識物質で標識されていることを特徴とする請求項15に記載の標的RNAの等温増幅方法。
- 前記標識物質は、ビオチン、フルオレセント、ジゴキシゲニン、2,4−ジニトロフェニルからなる群から選択されることを特徴とする請求項26に記載の標的RNAの等温増幅方法。
- 前記等温増幅は、30〜75℃で行うことを特徴とする請求項15に記載の標的RNAの等温増幅方法。
- (a)(i)標的RNA、(ii)前記標的RNAと相補的な塩基配列を有する外部プライマーセット、及び(iii)前記標的RNAと3′末端部分が相補的で、5′末端部分は非相補的な塩基配列を有するDNA−RNA−DNAハイブリッドプライマーセットを含む反応混合物に、(iv)鎖置換が可能なDNA重合酵素、RNA分解酵素、逆転写酵素及び前記外部プライマーセットとハイブリッドプライマーセットにより生成される増幅産物と相補的な塩基配列を有するDNA−RNA−DNAハイブリッド信号プローブを含む酵素反応混合液を混合した後、前記標的RNAと前記信号プローブを等温で同時に増幅させる段階と;
(b)前記(a)段階で増幅された標的RNAと信号プローブの増幅物から酵素免疫反応及び側流クロマトグラフィーを利用して標的RNAを検出する段階と;を含むことを特徴とする標的RNAの検出方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020070124399A KR100957057B1 (ko) | 2007-12-03 | 2007-12-03 | 핵산과 신호 프로브의 동시 등온증폭을 이용한 핵산의검출방법 |
PCT/KR2008/002341 WO2009072705A1 (en) | 2007-12-03 | 2008-04-24 | Method for detecting nucleic acids by simultaneous isothermal amplification of nucleic acids and signal probe |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011505129A true JP2011505129A (ja) | 2011-02-24 |
Family
ID=40717870
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010535866A Pending JP2011505129A (ja) | 2007-12-03 | 2008-04-24 | 核酸と信号プローブの同時等温増幅を用いた核酸の検出方法 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20100311058A1 (ja) |
JP (1) | JP2011505129A (ja) |
KR (1) | KR100957057B1 (ja) |
CN (1) | CN101883866A (ja) |
DE (1) | DE112008003229T5 (ja) |
GB (1) | GB2467081B (ja) |
WO (1) | WO2009072705A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2017501737A (ja) * | 2014-02-21 | 2017-01-19 | ディーエックスジーン、インコーポレーテッドDxgene,Inc | 核酸と信号プローブの非対称等温増幅を用いた核酸の検出方法 |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8053191B2 (en) | 2006-08-31 | 2011-11-08 | Westend Asset Clearinghouse Company, Llc | Iterative nucleic acid assembly using activation of vector-encoded traits |
EP2369325A1 (en) | 2010-03-12 | 2011-09-28 | Eppendorf Ag | Array analysis for online detection |
WO2012064975A1 (en) | 2010-11-12 | 2012-05-18 | Gen9, Inc. | Protein arrays and methods of using and making the same |
CA3132011A1 (en) | 2010-11-12 | 2012-06-14 | Gen9, Inc. | Methods and devices for nucleic acids synthesis |
CA2827497C (en) * | 2011-02-15 | 2014-12-02 | Leica Biosystems Newcastle Ltd. | Method for localized in situ detection of mrna |
LT3594340T (lt) | 2011-08-26 | 2021-10-25 | Gen9, Inc. | Kompozicijos ir būdai, skirti nukleorūgščių didelio tikslumo sąrankai |
US9150853B2 (en) | 2012-03-21 | 2015-10-06 | Gen9, Inc. | Methods for screening proteins using DNA encoded chemical libraries as templates for enzyme catalysis |
CA2871505C (en) | 2012-04-24 | 2021-10-12 | Gen9, Inc. | Methods for sorting nucleic acids and multiplexed preparative in vitro cloning |
JP6509727B2 (ja) | 2012-06-25 | 2019-05-15 | ギンゴー バイオワークス, インコーポレイテッド | 核酸アセンブリおよび高処理シークエンシングのための方法 |
US9777319B2 (en) | 2012-06-29 | 2017-10-03 | General Electric Company | Method for isothermal DNA amplification starting from an RNA template |
KR101501414B1 (ko) * | 2014-06-30 | 2015-03-17 | 중앙대학교 산학협력단 | 노로바이러스 검출을 위한 등온증폭 반응용 프라이머 및 이를 이용한 노로바이러스 검출 방법 |
US20170349925A1 (en) * | 2014-10-21 | 2017-12-07 | Gingko Bioworks, Inc. | Methods for Nucleic Acid Assembly |
CN104313187B (zh) * | 2014-11-11 | 2016-03-23 | 舟山市质量技术监督检测研究院 | Gi基因组型诺如病毒逆转录滚环扩增方法 |
KR101901749B1 (ko) | 2016-02-15 | 2018-09-28 | 주식회사 누리바이오 | 실시간 핵산 또는 단백질 검출용 단일핵산 및 이를 이용한 검출 방법 |
GB201621477D0 (en) * | 2016-12-16 | 2017-02-01 | Multiplicom Nv | Modified multiplex and multistep amplification reactions and reagents therefor |
KR102103719B1 (ko) * | 2018-05-18 | 2020-04-23 | 주식회사 바이나리 | 등온핵산 증폭을 이용한 생체조직의 3차원 핵산영상 분석 방법 |
CN109750091B (zh) * | 2019-03-13 | 2023-02-03 | 江苏宏微特斯医药科技有限公司 | 单管检测一种或多种待测目标核酸序列的方法及其试剂盒 |
KR102261979B1 (ko) * | 2019-10-28 | 2021-06-07 | 재단법인 대구경북첨단의료산업진흥재단 | 핵산분해효소 연쇄 반응 |
CN111662961A (zh) * | 2020-06-16 | 2020-09-15 | 河北农业大学 | 一种酸土脂环酸芽胞杆菌的分子检测方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5824517A (en) * | 1995-07-24 | 1998-10-20 | Bio Merieux | Method for amplifying nucleic acid sequences by strand displacement using DNA/RNA chimeric primers |
US20050214809A1 (en) * | 2003-11-25 | 2005-09-29 | Han Myun K | Real-time detection of nucleic acids and proteins |
WO2007043751A1 (en) * | 2005-10-14 | 2007-04-19 | Raplegene Inc. | Method for isothermal amplification of nucleic acids and method for detecting nucleic acids using simultaneous isothermal amplification of nucleic acids and signal probe |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5733733A (en) | 1992-08-04 | 1998-03-31 | Replicon, Inc. | Methods for the isothermal amplification of nucleic acid molecules |
US6951722B2 (en) | 1999-03-19 | 2005-10-04 | Takara Bio Inc. | Method for amplifying nucleic acid sequence |
AU783873B2 (en) * | 1999-09-13 | 2005-12-15 | Nugen Technologies, Inc. | Methods and compositions for linear isothermal amplification of polynucleotide sequences |
EP1359219A4 (en) * | 2001-02-06 | 2004-09-22 | Takara Bio Inc | AMPLIFIED NUCLEIC ACIDS AND IMMOBILIZED PRODUCTS THEREOF |
CN102268428A (zh) | 2002-11-21 | 2011-12-07 | 震源技术公司 | 使用编码双链启动子一条链的引物的方法 |
KR20060085818A (ko) | 2005-01-25 | 2006-07-28 | 엘지전자 주식회사 | 드럼세탁기의 컨트롤패널 어셈블리 |
-
2007
- 2007-12-03 KR KR1020070124399A patent/KR100957057B1/ko not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-04-24 JP JP2010535866A patent/JP2011505129A/ja active Pending
- 2008-04-24 GB GB1008439.0A patent/GB2467081B/en not_active Expired - Fee Related
- 2008-04-24 US US12/745,544 patent/US20100311058A1/en not_active Abandoned
- 2008-04-24 CN CN2008801189206A patent/CN101883866A/zh active Pending
- 2008-04-24 DE DE112008003229T patent/DE112008003229T5/de not_active Withdrawn
- 2008-04-24 WO PCT/KR2008/002341 patent/WO2009072705A1/en active Application Filing
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5824517A (en) * | 1995-07-24 | 1998-10-20 | Bio Merieux | Method for amplifying nucleic acid sequences by strand displacement using DNA/RNA chimeric primers |
US20050214809A1 (en) * | 2003-11-25 | 2005-09-29 | Han Myun K | Real-time detection of nucleic acids and proteins |
WO2007043751A1 (en) * | 2005-10-14 | 2007-04-19 | Raplegene Inc. | Method for isothermal amplification of nucleic acids and method for detecting nucleic acids using simultaneous isothermal amplification of nucleic acids and signal probe |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2017501737A (ja) * | 2014-02-21 | 2017-01-19 | ディーエックスジーン、インコーポレーテッドDxgene,Inc | 核酸と信号プローブの非対称等温増幅を用いた核酸の検出方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2009072705A1 (en) | 2009-06-11 |
KR100957057B1 (ko) | 2010-05-13 |
GB201008439D0 (en) | 2010-07-07 |
GB2467081A (en) | 2010-07-21 |
GB2467081B (en) | 2012-12-26 |
CN101883866A (zh) | 2010-11-10 |
KR20090057703A (ko) | 2009-06-08 |
DE112008003229T5 (de) | 2010-09-16 |
US20100311058A1 (en) | 2010-12-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2011505129A (ja) | 核酸と信号プローブの同時等温増幅を用いた核酸の検出方法 | |
KR101589483B1 (ko) | 핵산과 신호 프로브의 비대칭 등온증폭을 이용한 핵산의 검출방법 | |
KR100816419B1 (ko) | 핵산의 등온증폭 방법 및 핵산과 신호 프로브의 동시등온증폭을 이용한 핵산의 검출방법 | |
US6015666A (en) | Rapid DNA test for detecting quinolone-resistant Staphylococcus aureus pathogens in clinical material | |
JP6963505B2 (ja) | 鎖置換ポリメラーゼを用いた固相核酸標的捕捉及び複製 | |
JP4395471B2 (ja) | 試験サンプル中のMycoplasmagenitaliumの存在を決定するための組成物、方法およびキット | |
US20120021930A1 (en) | Multiplex Nucleic Acid Detection | |
AU2007336839A1 (en) | Methods and compositions for nucleic acid amplification | |
WO2008155599A1 (en) | Nested multiplex amplification method for identification of multiple biological entities | |
US6063572A (en) | Method of assay of nucleic acid sequences | |
JP4727771B2 (ja) | 増幅によるクラミジア・トラコマティスの分析およびクラミジア・トラコマティスの核酸の検出 | |
JP2011510612A (ja) | Pseudomonasaeruginosaの検出および/または監視のための組成物、キットおよび関連する方法 | |
WO2013107287A1 (zh) | 连接酶反应介导的扩增方法及用途 | |
JPH1033188A (ja) | 多重核酸増幅によるミコバクテリアの検出 | |
KR20140071968A (ko) | Pcr에 의한 미생물 dna 검출 방법, 이를 위한 시스템 및 조성물 | |
JP5239853B2 (ja) | 変異遺伝子の検出方法 | |
US20150079587A1 (en) | Method for detecting nucleic acids by simultaneous isothermal amplification of nucleic acids and signal probe | |
US20220170086A1 (en) | Looped primer and loop-de-loop method for detecting target nucleic acid | |
AU2017205399B2 (en) | Methods and compositions for detecting Candida species | |
CA3026723C (en) | Compositions and methods for detecting zika virus nucleic acid | |
WO2012009464A2 (en) | Detection of nucleic acids by agglutination | |
JPH0588A (ja) | 新規核酸断片およびこれらを用いたマイコプラズマの検出法 | |
JP2022553489A (ja) | Chlamydia trachomatis変異体の核酸の検出 | |
KR20120021267A (ko) | 클라미디아 트라코마티스 종 검출용 키트 및 이를 이용한 클라미디아 트라코마티스 종의 검출 방법 | |
JP2021506274A (ja) | 毒素産生Clostridium difficileを検出するための組成物および方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110413 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120405 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20121214 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20121218 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130130 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130604 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130902 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20130909 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20131003 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20140520 |